CN111454360B - 抗cd61蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗CD61蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了抗CD61蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。发明人还提供了一株分泌抗CD61蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系AbM58016‑19H11‑PU，保藏号为：CGMCC NO.17490。抗CD61蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD61蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

Description

抗CD61蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗CD61蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

CD61是一个105kDa膜糖蛋白，表达于血小板、巨核细胞、破骨细胞和血管内皮细胞上。CD61可以与整合素β3反应，整合素β3链接在糖蛋白Ⅱb(CD41)上，形成CD41/CD61复合物(GP Ⅱb/Ⅲa)来调节血小板的黏附和聚集。CD61定位于胞质/胞膜，主要用于识别血小板及其前驱细胞，可用于巨核细胞白血病的诊断。CD61在病理学中的应用包括：1、骨髓活检中小巨核细胞的识别；2、急性巨核细胞白血病的诊断；3、血小板无力症中CD61表达很少或几乎不表达。

发明内容

发明人提供了一种抗CD61蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CD61蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.17490的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系AbM58016-19H11-PU，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2019年04月3日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗CD61蛋白为小鼠IgG2a亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗CD61蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

发明人还提供了一株分泌抗CD61蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系AbM58016-19H11-PU，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.17490。

发明人还提供上述任一所述的抗CD61蛋白单克隆抗体，在CD61蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

区别于现有技术，上述技术方案依据CD61蛋白的结构、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，选择CD61蛋白中第135至380位氨基酸区域，长度为246个氨基酸的片段与TRX蛋白融合构成重组CD61抗原，将其DNA编码序列为SEQ ID No.1克隆进载体质粒pUC57，进行重组蛋白的生成和纯化。用纯化后的重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CD61蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系AbM58016-19H11-PU,以及由该细胞系所分泌的抗CD61蛋白单克隆抗体，保藏号为：CGMCC NO.17490。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD61蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

附图说明

图1为重组CD61蛋白的电泳结果图；M：分子量标记，1:BSA，2：CD61蛋白；

图2为AbM58016-19H11-PU杂交瘤分泌抗体的免疫印迹检测结果；

图3为骨髓组织免疫组化染色结果图(左为AbM58016-19H11-PU分泌的CD61，右为市售CD61)。

图4为脾脏组织免疫组化染色结果图(左为AbM58016-19H11-PU分泌的CD61，右为市售CD61)。

具体实施方式

实施例1重组CD61蛋白片段的制备

一、抗原片段选择

依据Uniprot中登录号为P05106的蛋白质序列进行序列和二级结构分析，全长为788个氨基酸长度的CD61蛋白N端含有vWFA超家族区域，其分子量约为87kDa左右。依据通过在线服务器http://www.cbs.dtu.dk/services/NetSurfP/预测的蛋白的二级结构(secondary structure)和表面可及性(Surface Accessibility)参数，并通过对其抗原性指数(Jameson BA,Wolf H.The antigenic index:a novel algorithm for predictingantigenic determinants.Comput Appl Biosci.1988,4(1):181-6.)的分析结果，选择CD61蛋白中第135至380位氨基酸区域，长度为246个氨基酸的片段与TRX蛋白融合表达构成重组CD61抗原，重组抗原的DNA编码序列为SEQ ID No.1。

二、重组CD61蛋白片段的表达和纯化

将SEQ ID No.1的DNA序列直接合成并克隆进克隆载体质粒pUC57(南京金斯瑞生物科技有限公司)。该DNA片段5’端和3’端分别带有EcoRI和XhoI酶切位点。

取5μL(约1微克)带有CD61片段的质粒pUC57-CD61和用作载体的pET32a(Merck)5μL(约1微克)分别进行双酶切，酶切体系为：EcoRI(TakaRa)1μL，XhoI(TaKaRa)1μL，5μL 10×buffer H，38μL ddH2O，37℃酶切三小时。酶切产物经1％琼脂糖电泳，柱离心式DNA回收试剂盒(北京华大蛋白质研发中心有限公司)切胶回收基因和载体片段。取2μL回收的线性化载体，3μL酶切回收的CD61基因片段，5μL 2×EZ-lig T4DNA快连试剂(北京华大蛋白质研发中心有限公司)，混匀，室温连接三十分钟。取出-80℃保存的感受态细胞(BL21)，解冻后加入连接产物，冰上放置30min。42℃热激90秒后冰浴2min后，加入800μL无抗性的LB培养基。37℃复苏培养20min，涂板。从转化的平板挑单克隆到1.5ml LB液体培养基中，37℃，200rpm培养，DNA测序(北京华大基因)。

将测序正确的克隆菌液2ul活化的菌液到5ml LB液体培养基中，37℃，200rpm，培养。将培养的菌液转接到500ml LB液体培养基混合，37℃，200rpm，培养至OD＝0.6-0.8，IPTG(0.5mM)低温过夜诱导。400ml大离心筒，6000rpm，离心5min收集菌体，弃上清。沉淀用20-30ml 10mM Tris-HCl(pH 8.0)和终浓度为0.5M的NaCl溶液吹散，超声破碎菌体。12000rpm离心20分钟，取离心上清上样到Ni-NTA镍柱(QIAGEN)进行纯化，之后分别用含15mM咪唑、60mM咪唑、300mM咪唑的10mM Tris-HCl(pH 8.0)(含0.5M氯化钠)溶液洗脱，分别收集蛋白峰，电泳检测，备用。

图1为重组CD61蛋白的SDS-PAGE图。

实施例2 AbM58016-19H11-PU杂交瘤细胞系的建立

一、免疫

将实施例1中的得到的纯化重组CD61蛋白用弗氏完全佐剂(Sigma公司，F5881)乳化，免疫4-6周龄雌性Balb/c小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6点，剂量为60μg/只。每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂(Sigma公司，F5506)乳化，剂量为30μg/只。第3次加强免疫后7天以间接ELISA(波长450nm)检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价最高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用生理盐水混匀，剂量为50μg/只。

二、细胞融合：

无菌制备免疫达标的小鼠脾细胞悬液，与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0(ATCCNumberCRL-8287)以5:1比例混合，离心1500rpm，5min。弃上清后离心管放入37℃水浴中，在1分钟内缓慢加入1ml的PEG1500(Roche公司)，并搅动细胞。在温水中静置1min后，加入10ml无血清的IMDM(Sigma公司)，混匀，离心1000rpm，5min。弃上清后，加入10ml血清(PAA公司)小心的将细胞吹打起来，并加入5ml混合10xHAT(Sigma公司)的胸腺细胞，混匀。再加入25ml含有2.1％硝基纤维素(Sigma公司)的半固体培养基充分混匀，然后均匀的倒入20个细胞培养皿中。将细胞培养皿放入到湿盒中，放入37℃5％CO₂培养箱中培养。

三、克隆化及ELISA筛选阳性杂交瘤细胞：

融合后11天，克隆细胞团大小密度适中，在解剖镜下，吸取圆、实、大的克隆团(10板×93个)打入事先准备好培养基的96孔培养板中，放入37℃5％CO₂培养箱中培养。

3天后，细胞量大约占底面积2/3，取100μL上清用免疫原和合成多肽分别进行ELISA筛选。阳性克隆完全换液，加入200μL含饲养细胞和1％HT(Sigma公司)的完全培养基。两天后进行第二次ELISA筛选，阳性克隆转入事先准备好培养基(含饲养细胞和HT)的24孔板培养。五天后取100μl上清进行第三次ELISA筛选，阳性克隆逐次转入6孔板和细胞培养瓶扩大培养并冻存。筛选出分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞株AbM58016-19H11-PU。将此细胞株转入T-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。

实施例3腹水诱生法制备单克隆抗体

一、腹水制备

对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起，计数～5×10⁵，1ml。悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃离心4000rpm，10min。小心吸出中间的腹水收集于离心管中，4℃或-20℃保存。

二、单克隆抗体的纯化

用HiTrap rProtein A FF(GE公司)亲和层析法按说明书从腹水中纯化抗体。SDS-PAGE胶鉴定纯度，Bradford法测定浓度。纯化的抗体保存于-20℃。

实施例4单克隆抗体特性鉴定

一、亚型鉴定

用100mM PBS(pH7.4)稀释包被羊抗鼠IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)至0.5μg/ml,每孔加100μl，4℃，过夜。倾空液体，用含0.05％Tween的PBS(PBS-T)洗3次，每孔加入200μl封闭液(含2％BSA和3％蔗糖的PBS)，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加入0.1ml杂交瘤上清，37℃孵育1h。倾空液体用PBS-T清洗3次。用封闭液1：1000稀释HRP标记的羊抗鼠(κ,λ)抗体或1：2000稀释HRP标记的羊抗鼠(IgM，IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3，IgA)抗体(Southern Biotech公司)0.1ml每孔分别加入适当的孔中，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加50μL含0.15％ABTS(Southern Biotech公司)和0.03％H₂O₂的柠檬酸缓冲液(PH4.0)进行显色反应，10-20min内测定405nm波长下的OD值。结果显示，本发明单克隆抗体为IgG2a型鼠源单克隆抗体。

二、亲和常数测定

包被CD61多肽(AA109-356)，包被浓度为2μg/ml,100μL/孔，4℃包被过夜，PBS-T洗3次。每孔加200μl封闭液37℃封闭2h，PBS-T洗3次。实施例4中纯化的单克隆抗体，从1：200开始2倍梯度稀释，最后1孔留空白对照，37℃孵育1h，PBS-T洗3次。HRP标记的羊抗鼠二抗1：20000稀释，每孔100μL，37℃孵育1h，PBS-T洗3次。每孔加入100μl含0.1％TMB(Sigma公司)和0.03％H₂O₂的柠檬酸-磷酸缓冲液显色10min，加50μL 0.5M硫酸溶液终止反应。用酶标仪测定波长450nm的吸光值。画出OD值对应抗体稀释倍数的曲线，找出≥1/2“平台OD值”对应的稀释倍数A。利用下列公式计算出亲和常数为1.92×10⁹。

三、单抗反应特异性和应用效果

选择CD61多肽(AA109-356)，用免疫印迹的方法检测本发明单克隆抗体的识别特异性，免疫印迹实验过程如下：每种蛋白上样约5-10ng，进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳。按常规方法在Bio-Rad电转移系统中将凝胶蛋白带转移到PVDF膜上(Millipore公司)。将膜置于含5％脱脂奶粉的TBS-T封闭液中4℃过夜。加入单克隆抗体CD61(1：1000稀释)4℃孵育过夜。用TBS-T洗膜后，加入1：5000稀释的羊抗鼠二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)，室温孵育1小时。再次TBST洗膜，加入ECL超敏显色液(北京普利莱基因技术有限公司)，以ChemiDoc MP多色荧光成像系统(Bio-Rad)进行化学发光图像数据的采集，图2为AbM58016-19H11-PU杂交瘤分泌抗体的免疫印迹检测结果。

实施例5组织芯片染色和鉴定

一、芯片制备过程

对各样本先进行HE切片染色，以确定肿瘤部位。对肿瘤靶位点画圈，预备打孔。制作空白受体蜡块时，将塑料架置于模具上，将融化的石蜡(熔点在55～58℃)倒入模具，冷却至室温后将模具放入-20℃冰箱6min，将蜡块从模具中取出。在组织样品机上选择1mm直径的样品针在受体蜡块上打孔，孔深3～4mm，用另一直径1mm的打孔针在蜡块的标记部位打孔采集组织芯，其长度比受体蜡块的孔深浅0.1mm左右。将采集到的组织芯直接插入或用镊子小心夹取插入受体蜡块的空孔内。如此反复直至完成全部样品点的制备。最后用载玻片将所有组织芯按平，使组织芯片蜡块平坦光滑。将制成的组织芯片蜡块再放入蜡块制作模具，放入60℃烤箱内15min，使组织芯与受体腊块的蜡融为一体，然后轻轻从烤箱中取出模具，让半融状态的石蜡在室温条件下冷却约30min，再放入-20℃冰箱冷冻6min后将组织芯片蜡块从模具中取出，切片或放入4℃冰箱内保存备用。修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。

二、IHC染色及分析

常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗。进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟。滴加3％H₂O₂孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。甩去PBS，滴加过氧化物酶阻断剂室温孵育10分钟。甩干切片，滴加适当比例稀释的一抗(首次稀释根据抗体浓度来设计抗体的稀释比例)室温(25℃)孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟。苏木素复染20秒，PBS返蓝。按照85％(3分钟)、95％(3分钟)、95％(3分钟)、100％(3分钟)、100％(3分钟)的酒精梯度依次脱水，最后两次二甲苯透明10分钟，中性树胶封片。

免疫组化染色结果分为：阳性和阴性。阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性。在组织染色分布清晰及细胞定位准确的情况下，染色结果根据染色强度的差异进行进一步划分，具体如下：

1、样本为弱阳性；标记为“+”；

2、样本为中度阳性；标记为“++”；

3、样本为高度阳性；标记为“+++”。

4、样本为阴性，标记为“-”。

三、样本检测结果：

用本发明所制备的抗CD61蛋白单克隆抗体和市售抗CD61蛋白单克隆抗体(鼠单抗2f2)对20例的骨髓和20例的脾脏细胞进行检测，结果显示:AbM58016-19H11-PU细胞株所分泌的抗CD61蛋白单克隆抗体的染色定位准确，染色清晰且无非特异性染色，背景干净。在阳性检测中，阳性率和阳性强度都高于市售抗体。特别是在一些非特异性的染色中，市售抗体出现了假阳性的情况，而本发明的抗体并未发生。

图3为骨髓组织免疫组化染色结果图(左为AbM58016-19H11-PU分泌的CD61，右为市售CD61)。有5例的骨髓组织，AbM58016-19H11-PU的CD61的染色强度明显高于市售CD61的染色强度，说明其敏感度更高，有效避免假阴性结果。在2例骨髓组织中，市售CD61出现了非特异性染色，而本发明抗体没有出现，说明本发明抗体的特异性更高，有效避免假阳性结果。

图4为脾脏组织免疫组化染色结果图(左为AbM58016-19H11-PU分泌的CD61，右为市售CD61)。在6例的脾脏组织中，AbM58016-19H11-PU的CD61的染色强度和染色细胞数明显高于市售CD61的染色强度和染色细胞数，说明其敏感度更高，在对弱阳性样本的检测上，有效避免假阴性结果。

阴性组织：51例淋巴瘤、28例皮肤基底细胞癌进行同步检测，结果如下表所示。

在阴性样本检测中，本抗体检测结果和市售抗体一致，特异性一致。

在30种正常组织芯片上进行同步检测，样本阳性和阴性结果一致，说明本抗体在市售组织的特异性同市售抗体相当。

30种正常组织包括：大脑、心脏、小脑、食管、肾上腺、胃、卵巢、小肠、胰腺、结直肠、甲状旁腺、肝脏、垂体、唾液腺、睾丸、肾、甲状腺、前列腺、乳腺、子宫、脾、膀胱、扁桃体、骨骼肌、胸腺(幼儿)、皮肤、骨髓、外周神经、肺、间皮细胞。

序列表

<110> 福州迈新生物技术开发有限公司

<120> 抗CD61蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

<130> 2010

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 738

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 1

gactacccgg tcgatatcta ctacctgatg gacctgtcct acagcatgaa agacgatctg 60

tggagcatcc agaatctggg taccaaactg gccacccaaa tgcgtaaact gacctctaac 120

ctgcgcattg gttttggcgc gtttgttgat aaaccggtct ccccgtacat gtacatcagt 180

ccgccggaag ctctggaaaa tccgtgctac gacatgaaaa ccacctgcct gccgatgttt 240

ggctataaac acgtcctgac cctgaccgat caggttaccc gcttcaacga agaggtcaaa 300

aaacagagcg ttagtcgtaa tcgcgacgca ccggaaggcg gttttgacgc aattatgcaa 360

gcgaccgtct gcgacgaaaa aattggttgg cgcaacgacg caagtcatct gctggttttt 420

accaccgacg caaaaaccca tattgcactg gacggtcgtc tggcaggtat tgtacaaccg 480

aacgatggtc agtgccacgt tggtagcgat aatcactact ctgcctccac caccatggat 540

tatccgtctc tgggtctgat gaccgagaaa ctgagccaga aaaacatcaa cctgatcttc 600

gcggtcaccg aaaacgttgt taacctgtac cagaactact ctgaactgat tccgggtacc 660

accgttggcg ttctgagtat ggatagtagc aacgttctgc agctgattgt tgacgcctac 720

ggcaaaattc gcagcaaa 738

<210> 2

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 2

Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Asn Leu Pro Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Arg Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ile Pro Gly Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ala

<210> 3

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 3

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Asn Ile Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Asn

20 25 30

Asp Gly Phe Arg Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Gln Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Cys Cys Phe Leu Ser

85 90 95

Asn Tyr Leu Pro Tyr Arg Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg

100 105 110

<210> 4

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 4

gaggtcaaac tgcaggagtc aggacctggc ctactacagc cctcacagaa cctgcccatc 60

acctgcacag tctccggttt ctctttaact aactatggta tacactgggt tcgccagtct 120

ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagtg agatggagtg gtggaaacac agactataat 180

gcagctttca tatccagact gagcatcagc agggacactt ccaagagcca agttttcttt 240

aaaatgaaca gtctgcagac tgatgacaca gccatatatt actgtgtcat tccggggttt 300

ggttactggg gccaagggac tctggtcact gtctctgca 339

<210> 5

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 5

gatatcttga tgacccaatc tccactctct ctgcctgtca atattggaga tcaagcctct 60

atctcttgca agtctactaa gagccttctg aataatgatg gattcagata tttgggctgg 120

tacctgcaga agccaggcca gtctccacag ctcctaatat atttggtttc taatcgattt 180

tctggagttc cagacaggtt cagtggtagt gggtcaggga cagatttcac cctccagatc 240

agcagagtgg agcctgagga tttgggagta tattgttgct tcctaagtaa ctatcttccg 300

tataggttcg gatcggggac caagctggaa ttaaga 336

Claims (8)

1.一种抗CD61蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别CD61蛋白。

4.一种抗CD61蛋白单克隆抗体，由保藏号为CGMCC NO.17490的杂交瘤细胞系产生。

5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述抗CD61蛋白单克隆抗体为小鼠IgG2a亚型单克隆抗体。

6.一株分泌抗CD61蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系AbM58016-19H11-PU，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.17490。

7.权利要求1-5任一所述的抗CD61蛋白单克隆抗体在制备CD61蛋白免疫检测试剂中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

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