CN112578114A - 一种提高免疫层析方法灵敏度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间1分钟到24小时；标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为30‑50°C。干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。可显著提高免疫层析检测试剂的灵敏度和准确率，与胶体金免疫层析相比，检测灵敏度提高5‑500倍。

Description

一种提高免疫层析方法灵敏度的方法
技术领域
本发明涉及免疫层析技术领域，具体为一种提高免疫层析方法灵敏度的方法。
背景技术
免疫层析技术是一种利用抗体、抗原特异性结合特定分析物和通过层析分离未结合标记指示剂的原理，一步检测待测样本中的特定检测物资。
胶体金和乳胶颗粒法是目前最主要的免疫层析技术，用于传染病、微生物、妊娠、排卵、心肌梗死、毒品、药物等多种蛋白、抗体、小分子化合物的特异性定性、定量检测。
现在的胶体金免疫层析方法虽然操作简单，反应时间短，试剂也方便保存，但是其检测灵敏度较低，从而也降低了准确度。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，可显著提高免疫层析检测试剂的灵敏度和准确率，可以有效解决背景技术中的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析。
进一步的，所述金核铂壳纳米颗粒制备方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸溶液制备胶体金颗粒作为核，在加入大分子分散剂的反应条件下，铂化合物溶液通过还原剂在胶体金颗粒核上形成铂金壳。
进一步的，所述金核铂壳纳米颗粒直径范围为80纳米-200纳米。
进一步的，所述大分子分散剂是PVP，其分子量的范围为10000-65000 Da。
进一步的，所述还原剂为L-抗坏血酸、硼氢化钠中的一种。
进一步的，所述铂化合物为氯铂酸、氯亚铂酸、氯铂酸盐、氯亚铂酸盐中的一种或两种以上的混合物。
进一步的，所述免疫层析包括以硝酸纤维素膜为基质的抗原抗体反应载体，其适用于均相层析反应原理。
进一步的，用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：
1）在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间1分钟到24小时；
2）标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；
3）加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为30-50°C。
进一步的，干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本提高免疫层析方法灵敏度的方法，具有以下好处：
采用大颗粒金核铂壳胶体金属纳米颗粒用于抗体、抗原标记，作为抗原-抗体特异反应的指示剂，可显著提高免疫层析检测试剂的灵敏度和准确率。
与胶体金免疫层析相比，检测灵敏度提高5-500倍。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：本实施例提供一种技术方案：一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析。
金核铂壳纳米颗粒制备方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸溶液制备胶体金颗粒作为核，在加入大分子分散剂的反应条件下，铂化合物溶液通过还原剂在胶体金颗粒核上形成铂金壳。
金核铂壳纳米颗粒直径范围为80纳米-200纳米。
大分子分散剂是PVP，其分子量的范围为10000-65000 Da。
还原剂为L-抗坏血酸、硼氢化钠中的一种。
铂化合物为氯铂酸、氯亚铂酸、氯铂酸盐、氯亚铂酸盐中的一种或两种以上的混合物。
免疫层析包括以硝酸纤维素膜为基质的抗原抗体反应载体，其适用于均相层析反应原理。
用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：
1）在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间1分钟；
2）标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；
3）加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为30°C。
干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。
实施例二：一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析。
金核铂壳纳米颗粒制备方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸溶液制备胶体金颗粒作为核，在加入大分子分散剂的反应条件下，铂化合物溶液通过还原剂在胶体金颗粒核上形成铂金壳。
金核铂壳纳米颗粒直径范围为80纳米-200纳米。
大分子分散剂是PVP，其分子量的范围为10000-65000 Da。
还原剂为L-抗坏血酸、硼氢化钠中的一种。
铂化合物为氯铂酸、氯亚铂酸、氯铂酸盐、氯亚铂酸盐中的一种或两种以上的混合物。
免疫层析包括以硝酸纤维素膜为基质的抗原抗体反应载体，其适用于均相层析反应原理。
用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：
1）在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间2小时；
2）标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；
3）加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为40°C。
干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。
实施例三：一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析。
金核铂壳纳米颗粒制备方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸溶液制备胶体金颗粒作为核，在加入大分子分散剂的反应条件下，铂化合物溶液通过还原剂在胶体金颗粒核上形成铂金壳。
金核铂壳纳米颗粒直径范围为80纳米-200纳米。
大分子分散剂是PVP，其分子量的范围为10000-65000 Da。
还原剂为L-抗坏血酸、硼氢化钠中的一种。
铂化合物为氯铂酸、氯亚铂酸、氯铂酸盐、氯亚铂酸盐中的一种或两种以上的混合物。
免疫层析包括以硝酸纤维素膜为基质的抗原抗体反应载体，其适用于均相层析反应原理。
用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：
1）在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间24小时；
2）标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；
3）加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为50°C。
干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。
其中，以上实施例中，金核铂壳纳米颗粒直径在150纳米为优选方案，PVP的分子量为30000Da为优选方案，Da为分子量单位：道尔顿。
免疫层析技术，其操作简单（只需要加入样本），反应时间短（通常1-20分钟），结果准确，试剂保存方便（室温保存），结果判断简单（通常肉眼观察结果），无需设备。广泛应用于人，动物，植物，环境等场景的病毒，细菌，真菌，蛋白，核酸等分析物的即时检测。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：采用大直径金核铂壳纳米颗粒标记抗原、抗体用于免疫层析分析。
2.根据权利要求1所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述金核铂壳纳米颗粒制备方法为：用柠檬酸钠还原氯金酸溶液制备胶体金颗粒作为核，在加入大分子分散剂的反应条件下，铂化合物溶液通过还原剂在胶体金颗粒核上形成铂金壳。
3.根据权利要求1或2所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述金核铂壳纳米颗粒直径范围为80纳米-200纳米。
4. 根据权利要求3所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述大分子分散剂是PVP，其分子量的范围为10000-65000 Da。
5.根据权利要求4所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述还原剂为L-抗坏血酸、硼氢化钠中的一种。
6.根据权利要求5所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述铂化合物为氯铂酸、氯亚铂酸、氯铂酸盐、氯亚铂酸盐中的一种或两种以上的混合物。
7.根据权利要求6所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：所述免疫层析包括以硝酸纤维素膜为基质的抗原抗体反应载体，其适用于均相层析反应原理。
8.根据权利要求7所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：用金核铂壳纳米颗粒标记抗体、抗原的方法为：
1）在最适pH、标记量的条件下，被动吸附时间1分钟到24小时；
2）标记物同过离心分离、洗涤，得到标记物金核铂壳纳米颗粒复合物；
3）加入一定量的缓冲液，均匀铺在玻璃纤维素膜上，通过冷冻干燥或高温度烘干，高温度烘干的温度范围为30-50°C。
9.根据权利要求8所述的一种提高免疫层析方法灵敏度的方法，其特征在于：干燥的标记物金核铂壳纳米颗粒复合物与包被抗体或抗原的硝酸纤维素膜、吸收滤纸、PVC背衬、样本垫共同组成免疫层析检测试剂，用于特定分析物的定性、定量检测。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003262638A (ja) * 2002-03-08 2003-09-19 Bl:Kk 金属コロイド粒子
CN104698165A (zh) * 2015-03-20 2015-06-10 济南大学 一种铂基合金标记的三通道夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN107850595A (zh) * 2015-07-11 2018-03-27 新日铁住金化学株式会社 树脂‑铂复合体及其利用
US20200363406A1 (en) * 2017-10-26 2020-11-19 The University Of Houston System Highly-specific assays

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003262638A (ja) * 2002-03-08 2003-09-19 Bl:Kk 金属コロイド粒子
CN104698165A (zh) * 2015-03-20 2015-06-10 济南大学 一种铂基合金标记的三通道夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN107850595A (zh) * 2015-07-11 2018-03-27 新日铁住金化学株式会社 树脂‑铂复合体及其利用
US20200363406A1 (en) * 2017-10-26 2020-11-19 The University Of Houston System Highly-specific assays

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COLLEEN N. LOYNACHAN等: "Platinum Nanocatalyst Amplification: Redefining the Gold Standard for Lateral Flow Immunoassays with Ultrabroad Dynamic Range", ACS NANO, vol. 12, pages 279 - 288, XP055982139, DOI: 10.1021/acsnano.7b06229 *
YUKOU DU等: "The preparation and characterization of Au-core/Pt-shell nanoparticles", COLLOID AND POLYMER SCIENCE, vol. 285, pages 553 - 556, XP019473680 *
ZHAO DAN等: "Synthesis and characterization of Au@Pt nanoparticles", CHINESE SCIENCE BULLETIN, vol. 50, no. 17, pages 1846 - 1848 *
赵丹 等: "核壳结构Au@Pt纳米颗粒的合成与表征", 科学通报, vol. 50, no. 9, pages 872 - 874 *

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