CN112574976A - 一种耐高温酸性木聚糖酶xyn10l2及其基因和应用 - Google Patents

一种耐高温酸性木聚糖酶xyn10l2及其基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属基因工程技术领域，具体涉及一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2及其基因和应用。本发明的耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明提供的耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2，编码权利要求1所述的耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2，其碱基序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。本发明还提供了包含上述耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2的重组载体以及包含上述中温酸性木聚糖酶基因xyn10L2的重组菌株。本发明的木聚糖酶最适pH为4.0，在pH 2.0～7.0都具有较高的酶活性，pH稳定性好；具有良好的抵抗蛋白酶的能力；具有较好耐高温特性，可使其在需求高温环境的工业生产上应用。

Description

一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2及其基因和应用
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2 及其基因和应用。
背景技术
半纤维素和纤维素是植物细胞壁的主要组成成份，这两种物质是自然界 中主要的可再生资源之一，被广泛应用于医药、食品、造纸、畜牧等行业。 半纤维素是由D-甘露糖、D-木糖、L-阿拉伯糖或D-乳糖以直链或支链的形式 聚合而成的多聚糖，这种大分子主链一般由一种或几种单糖基组成，它们的 链短且存在侧链，并且具有多种侧链取代基，如乙酰基、半乳糖、阿拉伯糖 或葡萄糖醛酸残基。木聚糖是半纤维素的重要组分，它是自然界中含量仅次 于纤维素的第二丰富的多聚糖，几乎占地球可更新有机碳含量的三分之一。 木聚糖广泛存在于农业副产物如玉米芯、麦麸、米糠、秸秆、甘蔗渣等中， 然而这些重要的可再生资源一直难以得到有效的利用；此外在造纸行业制浆 过程中富含木聚糖的工业废料往往直接排入水体，导致水体富营养化严重， 破坏生态环境，这些现象在我国尤为突出。另一方面，作为木聚糖水解产物 主要成分的低聚木糖是一种附加值高，市场前景看好的功能性食品添加剂， 目前已成为国内外竞相研究开发的功能性低聚糖之一。因此对木聚糖的有效利用和深层开发已成为目前国内外的研究热点。
对木聚糖酶的研究已有半个世纪，主要研究集中在适合于饲料工业、食 品工业、制浆造纸工业、能源工业等方面的木聚糖酶,已经从不同来源的微 生物中分离到大量的不同类型不同功能的木聚糖酶，并分离出多种木聚糖酶 基因，已工业化生产多种木聚糖酶产品。其中，大多数木聚糖酶的最适作用 pH值在6.0～7.0。酸性木聚糖酶已经引起研究人员的广泛关注，酸性木聚糖 酶在饲料行业中的应用，可以有效破坏木聚糖分子中的共价交联，显著降低 阿拉伯木聚糖分子大小，从而降低食糜的粘度，改善饲料性能，降低因粘度增加而引起的抗营养作用。在啤酒酿造行业具有潜在的应用前景，在啤酒酿 造过程中，不被降解的阿拉伯木聚糖造成啤酒过滤困难、堵塞过滤膜，增加 了啤酒的生产成本和品质，采用酸性木聚糖酶与葡聚糖酶协同作用，可以解 决以上问题。因此，酸性木聚糖酶的产生、纯化、性质、酸性特征的结构基 础及其在饲料加工、酿酒工业、果汁加工、以及能源等领域的应用正在不断 深入。
不同工业生产对木聚糖酶性质需求各不相同，因此，获得新型且具有优 良特性木聚糖酶具有重大现实意义，可以更好的服务饲料、酿酒、食品工 业。
发明内容
本发明的目的是提供一种能广泛应用的耐高温酸性木聚糖酶。
本发明的另一目的是提供编码上述耐高温酸性木聚糖酶的基因。
本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。
本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。
本发明的另一目的是提供一种制备上述耐高温酸性木聚糖酶的方法。
本发明的另一目的提供上述耐高温酸性木聚糖酶的应用。
本发明从黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103(购买于中国工业微生物菌 种保藏管理中心(北京市朝阳区霄云路32号，中国食品发酵工业研究院， 100027)，其保藏编号为：CICC 2103)中分离得到一种新的耐高温酸性木聚 糖酶XYN10L2。
本发明提供了一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2，其氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所示：
mkvtaaafaapvp epfagl lvtvlvsrsag inyvqnyngn lgdftydesa gtfsmywedg
vssdfvvglg wttnait ysaeygsssasgs ssylavygwv nypqaeyyiv edygdynpcs
satslgtvys dgstyqvctd trtnepsitg tstftqyfsv restrt tvasgtvnhfnfwa
qhgfdfn yqvmaveawgnss gagsasvtis s
其中，该酶基因编码211个氨基酸，N端21个氨基酸为其预测的信号肽序列“mkvtaaafaapvp epfagl lv”(SEQ ID NO.3)。
因此，成熟的耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2的理论分子量为18.2 kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
tvlvsrsag inyvqnyngn lgdftydesa gtfsmywedg vssdfvvglg wttnaitysaeygsssasgs ssylavygwv nypqaeyyiv edygdynpcs satslgtvys dgstyqvctdtrtnepsitg tstftqyfsv restrt tvasgtvnhfnfwa qhgfdfn yqvmaveawgnss gagsasvtiss
本发明的木聚糖酶XYN10L2具有较好的热稳定性，且在酸性和中性的 范围内均具有高活性，对蛋白酶具有较好的抵抗能力。本发明筛选到黑曲霉 Aspergillus niger CICC2103所产生的木聚糖酶，其最适pH值为4.0，在pH 2.0～8.0的范围内维持80％以上的酶活性；适用温度30～70℃，最适温度为 60℃，在80℃处理120分钟仍具有80％左右的酶活力；用胃蛋白酶和胰蛋白 酶处理120分钟，酶活性提高了15％以上。
本发明提供了编码上述耐高温酸性木聚糖酶的基因xyn10L2。具体地， 该基因的基因组序列如SEQ ID NO.4所示：
ATGAAAGTGACCGCGGCGGCGTTTGCGGCGCCGGTGCCGGAACCG TTTGCGGGCCTGCTGGTGACCGTGCTGGTGAGCCGCAGCGCGGGCATTA ACTATGTGCAGAACTATAACGGCAACCTGGGCGATTTTACCTATGATGAAAGCGCGGGCACCTTTAGCATGTATTGGGAAGATGGCGTGAGCAGCGA TTTTGTGGTGGGCCTGGGCTGGACCACCAACGCGATTACCTATAGCGCG GAATATGGCAGCAGCAGCGCGAGCGGCAGCAGCAGCTATCTGGCGGTG TATGGCTGGGTGAACTATCCGCAGGCGGAATATTATATTGTGGAAGATT ATGGCGATTATAACCCGTGCAGCAGCGCGACCAGCCTGGGCACCGTGT ATAGCGATGGCAGCACCTATCAGGTGTGCACCGATACCCGCACCAACG AACCGAGCATTACCGGCACCAGCACCTTTACCCAGTATTTTAGCGTGCG CGAAAGCACCCGCACCACCGTGGCGAGCGGCACCGTGAACCATTTTAA CTTTTGGGCGCAGCATGGCTTTGATTTTAACTATCAGGTGATGGCGGTG GAAGCGTGGGGCAACAGCAGCGGCGCGGGCAGCGCGAGCGTGACCATT A G C A G C T A A
本发明通过PCR的方法分离克隆了木聚糖酶基因xyn10L2，DNA全序列 分析结果表明，木聚糖酶XYN10L2基因xyn10L2全长636bp。其中，信号 肽的碱基序列为：
ATGAAAGTGACCGCGGCGGCGTTTGCGGCGCCGGTGCCGGAACCG TTTGCGGGCCTGCTGGTG(SEQID NO.6)。
XYN10L2的基因序列如SEQ ID NO.5所示：
ACCGTGCTGGTGAGCCGCAGCGCGGGCATTAACTATGTGCAGAACT ATAACGGCAACCTGGGCGATTTTACCTATGATGAAAGCGCGGGCACCTT TAGCATGTATTGGGAAGATGGCGTGAGCAGCGATTTTGTGGTGGGCCTG GGCTGGACCACCAACGCGATTACCTATAGCGCGGAATATGGCAGCAGC AGCGCGAGCGGCAGCAGCAGCTATCTGGCGGTGTATGGCTGGGTGAAC TATCCGCAGGCGGAATATTATATTGTGGAAGATTATGGCGATTATAACC CGTGCAGCAGCGCGACCAGCCTGGGCACCGTGTATAGCGATGGCAGCA CCTATCAGGTGTGCACCGATACCCGCACCAACGAACCGAGCATTACCG GCACCAGCACCTTTACCCAGTATTTTAGCGTGCGCGAAAGCACCCGCAC CACCGTGGCGAGCGGCACCGTGAACCATTTTAACTTTTGGGCGCAGCAT GGCTTTGATTTTAACTATCAGGTGATGGCGGTGGAAGCGTGGGGCAACA GCAGCGGCGCGGGCAGCGCGAGCGTGACCATTAGCAGCTAA 成熟蛋白理论分子量为18.2kDa，将木聚糖酶基因xyn10L2序列及推导出 的氨基酸序列在GenBank中进行BLAST比对，该基因与来源于Aspergillus piperis CBS 112811的木聚糖酶氨基酸序列一致性为85％，说明XYN10L2是 一种新的木聚糖酶。
本发明还提供了包含上述中温酸性木聚糖酶基因xyn10L2的重组载体， 优选为pPIC-xyn10L2。将本发明的木聚糖酶基因插入到表达载体合适的限制 性酶切位点之间，使其核苷酸序列与表达调控序列相连接。作为本发明的一 个最优选的实施方案，优选为将本发明的木聚糖酶基因插入到质粒pPIC9上 的EcoR I和Not I限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于AOX1启动子 的下游并受其调控，得到重组酵母表达质粒pPIC9-xyn10L2。
本发明还提供了包含上述中温酸性木聚糖酶基因xyn10L2的重组菌株， 优选所述菌株为大肠杆菌、酵母菌、芽孢杆菌或乳酸杆菌，优选为重组菌株 GS115/xyn10L2。
本发明还提供了一种制备中温酸性木聚糖酶XYN10L2的方法，包括以 下步骤：
1)用上述的重组载体转化宿主细胞，获得重组菌株；
2)培养重组菌株，诱导重组木聚糖酶表达；
3)回收并纯化所表达的木聚糖酶XYN10L2。
其中，优选所述宿主细胞为毕赤酵母细胞、啤酒酵母细胞或多形汉逊酵 母细胞，优选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞(Pichia pastoris) GS115，得到重组菌株GS115/xyn10L2。
本发明还提供了上述中温酸性木聚糖酶XYN10L1的应用，尤其适合在 饲料、酿酒、造纸、能源工业中用于降解木聚糖、大麦葡聚糖、可溶性小麦 阿拉伯木聚糖等。
本发明的有益效果在于：
提供一种性质优良的，适合在饲料、酿酒、造纸、能源工业中应用的， 新颖的木聚糖酶。本发明的木聚糖酶最适pH为4.0，在pH 2.0～8.0都具有 较高的酶活性，pH稳定性好；具有良好的抵抗蛋白酶的能力；具有较好耐高 温特性，可使其在需求高温环境的工业生产上应用。本发明的木聚糖酶可应 用于饲料工业，有效降低饲料粘度，消除或降低因粘度增加而引起的抗营养 问题。在酿酒工业中，可有效降解可溶性和不可溶性的阿拉伯木聚糖，有效 降低麦芽汁的粘度，提高发酵液过滤效率，从而澄清啤酒；此外，在白酒、 清酒的酿造中有助于提高发酵效率，提高淀粉利用率，增加酒精的产率。在 造纸和能源工业中，可以将造纸工业废料及农业废弃物中的木聚糖转化为D- 木糖单体，而D-木糖又可被细菌、酵母及真菌转化成有价值的燃料，因此， 本木聚糖酶在能源工业中的应用也显示出其巨大的潜力。
附图说明
图1为本发明的重组木聚糖酶的最适pH；
图2为本发明的重组木聚糖酶的pH稳定性；
图3为本发明的重组木聚糖酶的最适温度。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、菌株及载体
本发明从黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103(购买于中国工业微生物菌 种保藏管理中心(北京市朝阳区霄云路32号，中国食品发酵工业研究院， 100027)，其保藏编号为：CICC 2103)中分离得到一种新的耐高温酸性木聚 糖酶XYN10L2。毕赤酵母表达载体pPIC9及菌株GS115购自于Invitrogen公 司。
2、酶类及其它生化试剂
限制性内切酶和连接酶均购自Fermentas公司；桦木木聚糖购自Sigma 公司；其它均为国产生化试剂。
3、培养基
(1)Aspergillus niger CICC 2103培养基为马铃薯汁培养基：1000mL马 铃薯汁，10g葡萄糖，25g琼脂，pH 2.5；
(2)大肠杆菌培养基LB：1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl， pH7.0；
(3)BMGY培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，1.34％YNB， 0.00004％Biotin，1％甘油(V/V)；
(4)BMMY培养基：除以0.5％甲醇代替甘油，其余成份均与BMGY 相同，pH4.0。
说明：以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分 子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或 者按照试剂盒和产品说明书进行。
实施例1黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103木聚糖酶编码基因 xyn10L2的克隆
提取黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103基因组DNA：
将液体培养3天的菌丝体用无菌滤纸过滤放入研钵中，加入2mL提取 液，研磨5min，然后将研磨液置于50mL离心管中，65℃水浴锅裂解 20min，每隔10min混匀一次，在4℃下10000rpm离心5min。取上清于酚/氯 仿中抽提除去杂蛋白，再取上清加入等体积异丙醇，于室温静置5min后， 4℃下10000rpm离心10min。弃上清，沉淀用70％的乙醇洗涤两次，真空干 燥，加入适量TE溶解，置于-20℃备用。
根据第十家族木聚糖酶基因的保守(WDVVNE和NDY(F)NL(I)EY) 序列设计合成了简并引物P1，P2
P1:5'-TGGGAYGTNGTNAAYGARGC-3'；
P2:5'-TAYTCTATRTTRWARTCRTT-3'。
以黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103总DNA为模板进行PCR扩增。 PCR反应参数为：94℃变性5min；然后94℃变性30sec，45℃退火30sec， 72℃延伸1min，30个循环后72℃保温10min。获得一条约165bp片段，将 该片段回收后与pEASY-T3载体连接转化后送北京睿博兴科生物技术有限公 司测序。
根据测序得到的核苷酸序列，设计上游和下游各三条TAIL-PCR特异性 引物：设计方向为需要扩增的未知区域方向，sp2的位置设计在sp1的内侧， sp3位于sp2的内侧。每两个引物之间的距离没有严格规定，引物长度一般 22～30nt，退火温度在60～65℃。并将它们分别命名为usp1，usp2，usp3 (上游特异性引物)，dsp1，dsp2，dsp3(下游特异性引物)见表1。
表1.木聚糖酶XYN10L2TAIL-PCR特异性引物
Figure BDA0002347428470000071
通过反向TAIL-PCR得到已知基因序列的侧翼序列，扩增得到产物回收 后送三博生物技术有限公司测序。拼接后XYN10L2木聚糖酶基因全长636 bp，编码212个氨基酸和一个终止密码子。用SignalP (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP)进行分析表明N端21个氨基酸为 预测的信号肽。预测该基因所编码的成熟蛋白的理论分子量为18.2kDa。
实施例2重组木聚糖酶的制备
将表达载体pPIC9进行双酶切(EcoR I+Not I)，同时将编码木聚糖酶的基 因xyn10L2双酶切(EcoR I+Not I)，切出编码成熟木聚糖酶的基因片段与表达 载体pPIC9连接，获得含有黑曲霉Aspergillus niger CICC 2103木聚糖酶基因 xyn10L2的重组质粒pPIC-xyn10L2并转化毕赤酵母GS115，获得重组毕赤酵 母菌株GS115/xyn10L2。
取含有重组质粒的GS115菌株，接种于300mL BMGY培养液中，30℃ 250rpm振荡培养48h后，离心收集菌体。然后于150mL BMMY培养基重 悬，30℃250rpm振荡培养。诱导72h后，离心收集上清。测定木聚糖酶的 活力。重组木聚糖酶的表达量为78000U/mL。SDS-PAGE结果表明，重组木 聚糖酶在毕赤酵母中得到了表达。重组木聚糖酶的比活为25689U/mg。
实施例3重组木聚糖酶的活性分析
DNS法：具体方法如下：在pH4.0，75℃条件下，1mL的反应体系包 括100μL适当的稀释酶液，900μL底物，反应10min，加入1.5mL DNS终 止反应，沸水煮5min。冷却后540nm测定OD值。1个酶活单位(U)定义为 在给定的条件下每分钟释放出1μmol还原糖的酶量。
实施例4重组木聚糖酶XYN10L1的性质测定
1、重组木聚糖酶XYN10L2的最适pH和pH稳定性的测定方法如下：
将纯化的重组木聚糖酶在不同的pH下进行酶促反应以测定其最适pH。 底物木聚糖用不同pH的0.1mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中55℃下进行木 聚糖酶活力测定。结果(图1)表明，重组酶XYN10L2的最适pH为4.0， 在pH 2.0～7.0有60％以上的相对酶活性。木聚糖酶于上述各种不同pH的缓 冲液中37℃处理60min，再在pH 5.0缓冲液体系中75℃下测定酶活性，以研 究酶的pH耐性。结果(图2)表明木聚糖酶在pH 2.0～9.0之间均很稳定， 在此pH范围内处理60min后剩余酶活性在50％以上，这说明此酶在酸性和 中性范围内具有较好的pH稳定性。
2、木聚糖酶的最适温度及热稳定性测定方法如下：
木聚糖酶的最适温度的测定为在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH5.0)缓 冲液体系及不同温度下进行酶促反应。耐温性测定为木聚糖酶在不同温度下 处理不同时间，再在45℃下进行酶活性测定。酶反应最适温度测定结果(图 3)表明其最适温度为60℃，在30～70℃下均保持较高酶活。酶的热稳定性 性试验表明，XYN10L2有良好的热稳定性，在80℃下温育1h，能保持90％ 以上的酶活。
3、木聚糖酶的Km值测定方法如下：
用不同浓度的木聚糖为底物，在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 4.0)缓 冲液体系中，55℃下测定酶活性，计算出其在55℃下的Km值。经测定，以 可溶性小麦阿拉伯木聚糖和桦木木聚糖为底物时的Km值分别为14.871和 7.633mg/mL，最大反应速度Vmax分别为378.4和378.5μmol/min·mg。
4、不同金属离子化学试剂对XYN10L2酶活的影响测定如下：
在酶促反应体系中加入不同浓度的不同的金属离子及化学试剂，研究其 对酶活性的影响，各种物质终浓度为1和5mmol/L。在60℃、pH 4.0条件 下测定酶活性。结果表明，大多数离子和化学试剂在浓度为1mmol时重组木 聚糖酶的活力没有明显变化，只有SDS微弱抑制其活力。当Cu2+，Ag+，和 β-巯基乙醇浓度为5mmol时可以部分抑制XYN10L2酶活力，5mmol SDS 使其活力全部丧失。
5、木聚糖酶抗胃蛋白酶及胰蛋白酶能力测定如下：
用pH 2.0KCl-HCl缓冲液配制0.1mg/mL胃蛋白酶，pH 7.0Tris-HCl缓 冲液配制0.1mg/mL胰蛋白酶。取pH 2.0KCl-HCl缓冲液稀释后的0.5mL纯 化的酶液加入0.5mL胃蛋白酶，pH 7.0Tris-HCl缓冲液稀释后的0.5mL纯化 的酶液加入0.5mL胰蛋白酶混合，蛋白酶/木聚糖酶(w/w)≈0.1，37℃保温60和120min取样，在pH5.0及75℃条件下测定酶活性。实验结果表明木聚 糖酶XYN10L2用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理120min后，胰蛋白酶处理后的XYN10L2的酶活比处理前提高了20％，胃蛋白酶处理后的XYN10L2的木聚 糖酶活性比处理前提高了18％。
6、重组木聚糖酶的底物特异性
该酶除可作用于木聚糖外，对于大麦葡聚糖、可溶性小麦阿拉伯木聚糖 也有一定的降解作用(表2)。其对可溶性的小麦阿拉伯木聚糖的降解能力 相对于桦木木聚糖可以达到118.50％以上。
表2.木聚糖酶XYN10L2底物特异性分析
Figure BDA0002347428470000091
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对 其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通 技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修 改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替 换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (9)

1.一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQID NO.2所示：
SEQ ID NO.1：
mkvtaaafaapvp epfagl lvtvlvsrsag inyvqnyngn lgdftydesa gtfsmywedg
vssdfvvglg wttnait ysaeygsssasgs ssylavygwv nypqaeyyiv edygdynpcs
satslgtvys dgstyqvctd trtnepsitg tstftqyfsv restrt tvasgtvnhfnfwa
qhgfdfn yqvmaveawgnss gagsasvtis s
SEQ ID NO.2：
tvlvsrsag inyvqnyngn lgdftydesa gtfsmywedg vssdfvvglg wttnaitysaeygsssasgs ssylavygwv nypqaeyyiv edygdynpcs satslgtvys dgstyqvctdtrtnepsitg tstftqyfsv restrt tvasgtvnhfnfwa qhgfdfn yqvmaveawgnss gagsasvtiss。
2.一种耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2，其特征在于，编码权利要求1所述的耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2。
3.根据权利要求2所述的耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示：
SEQ ID NO.4：
ATGAAAGTGACCGCGGCGGCGTTTGCGGCGCCGGTGCCGGAACCGTTTGCGGGCCTGCTGGTGACCGTGCTGGTGAGCCGCAGCGCGGGCATTAACTATGTGCAGAACTATAACGGCAACCTGGGCGATTTTACCTATGATGAAAGCGCGGGCACCTTTAGCATGTATTGGGAAGATGGCGTGAGCAGCGATTTTGTGGTGGGCCTGGGCTGGACCACCAACGCGATTACCTATAGCGCGGAATATGGCAGCAGCAGCGCGAGCGGCAGCAGCAGCTATCTGGCGGTGTATGGCTGGGTGAACTATCCGCAGGCGGAATATTATATTGTGGAAGATTATGGCGATTATAACCCGTGCAGCAGCGCGACCAGCCTGGGCACCGTGTATAGCGATGGCAGCACCTATCAGGTGTGCACCGATACCCGCACCAACGAACCGAGCATTACCGGCACCAGCACCTTTACCCAGTATTTTAGCGTGCGCGAAAGCACCCGCACCACCGTGGCGAGCGGCACCGTGAACCATTTTAACTTTTGGGCGCAGCATGGCTTTGATTTTAACTATCAGGTGATGGCGGTGGAAGCGTGGGGCAACAGCAGCGGCGCGGGCAGCGCGAGCGTGACCATTAGCAGCTAA
SEQ ID NO.5：
ACCGTGCTGGTGAGCCGCAGCGCGGGCATTAACTATGTGCAGAACTATAACGGCAACCTGGGCGATTTTACCTATGATGAAAGCGCGGGCACCTTTAGCATGTATTGGGAAGATGGCGTGAGCAGCGATTTTGTGGTGGGCCTGGGCTGGACCACCAACGCGATTACCTATAGCGCGGAATATGGCAGCAGCAGCGCGAGCGGCAGCAGCAGCTATCTGGCGGTGTATGGCTGGGTGAACTATCCGCAGGCGGAATATTATATTGTGGAAGATTATGGCGATTATAACCCGTGCAGCAGCGCGACCAGCCTGGGCACCGTGTATAGCGATGGCAGCACCTATCAGGTGTGCACCGATACCCGCACCAACGAACCGAGCATTACCGGCACCAGCACCTTTACCCAGTATTTTAGCGTGCGCGAAAGCACCCGCACCACCGTGGCGAGCGGCACCGTGAACCATTTTAACTTTTGGGCGCAGCATGGCTTTGATTTTAACTATCAGGTGATGGCGGTGGAAGCGTGGGGCAACAGCAGCGGCGCGGGCAGCGCGAGCGTGACCATTAGCAGCTAA。
4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求2、3任意一项所述的耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体采用pPIC-xyn10L2。
6.一种重组菌株，其特征在于，包含权利要求2、3任意一项所述的耐高温酸性木聚糖酶基因xyn10L2。
7.根据权利要求6所述的重组载体，其特征在于，所述的重组菌株为毕赤酵母菌、啤酒酵母细胞、多形汉逊酵母细胞中至少一种。
8.一种制备耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用权利要求4所述的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；
2)培养重组菌株，诱导重组木聚糖酶表达；
3)回收并纯化所表达的耐高温木聚糖酶XYN10L2。
9.一种耐高温酸性木聚糖酶XYN10L2的应用，其特征在于，用于降解木聚糖、大麦葡聚糖、可溶性小麦阿拉伯木聚糖。
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