CN112574329A - 生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法。本发明中包括以下步骤：肠粘膜提取、酶解、分离、降温、吸附、树脂收集以及固化，本发明能够增加油脂与蛋白质之间的分离效果，降低生产成本，技术成熟、实用，肝素收率高，工艺品质稳定。
Description
技术领域
本发明属于粗品肝素钠制备方法，具体为生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法。
背景技术
肝素钠能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用，其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、X、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用，其后果涉及阻止血小板凝集和破坏、妨碍凝血激活酶的形成、阻止凝血酶原变为凝血酶，抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而发挥抗凝作用。
母猪场提取肝素钠，生产上存在的技术问题，主要是其油脂和蛋白分离技术长期未得到解决，导致生产成本高，肝素收率低，缺乏竞争优势。
发明内容
本发明的目的在于：为了解决现实存在的技术问题，提供生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法。
本发明采用的技术方案如下：
（1）肠粘膜提取
将健康新鮮的母猪肠，使用去离子水用多次碾压机碾压后进入刮肠机刮制，收集碾压和刮制过程中制备的肠黏膜混合液；
（2）酶解
将肠黏膜混合液用提升泵打入酶解罐，常温下搅拌并用饱和浓盐水将混合液盐度调节到＞4.5度，再用氢氧化钠溶液将PH调到9.0，将混合液温度在35℃~10℃，随后，添加胰蛋白酶，并进行一次保温、二次保温及高温灭活获得酶失活液；
（3）分离
将酶失活液分别通过低速液液固三相分离机以及高速液液固三相分离机进行油脂蛋白的分离，得到蛋白和油脂分离后的盐解液，将盐解液倒入缓冲罐；
（4）降温
将盐解液用板式热交换器进行降温，获得吸附液；
（5）吸附
将吸附液打入吸附罐，PH值调节到＞8.0，盐度＞3.0度，添加处理好的树脂进行离子吸附，并以搅拌加速吸附；
（6）树脂收集
用树脂收集罐收集吸附后的树脂，并打入漂洗罐进行彻底清洗，去除蛋白、油脂等杂质；
（7）固化
用传统工艺对收集的树脂进行洗脱、醇沉、烘干，即获得粗品肝素钠。
其中，所述步骤（1）使用得到去离子水水量控制在每根母猪肠5±1Kg。
其中，所述步骤（2）使用的搅拌速度为60±5rpm的速度。
其中，所述步骤（2）和（5）使用的氢氧化钠溶液的浓度为0.3±0.2mol/L，步骤（2）使用的胰蛋白酶按每750Kg母猪肠添加1Kg胰蛋白酶(20万单位)的标准添加。
其中，所述方法包括以下步骤：
酶失活液的制备；
（1）一次保温
将混合液升温到48℃，PH值调节为8.5，盐度＞3.6度，保温50±10min；
（2）二次保温
将混合液温度升至58℃，PH值调节为8.5，盐度＞3.2度，保温120min；
（3）高温灭活
升高温度到80℃，PH值＞8.0，盐度＞3.0，保温10min，获得酶失活液。
其中，所述方法包括以下步骤：
盐解液的制备；
（1）粗分
用分离因素2500±150g、rpm3500±100的低速液液固三相分离机，对酶失活液进行油脂、蛋白分离，得到第一次盐解液；
（2）精分
用分离因素＞12200±200g、rpm6400±300的高速液液固三相分离机，对粗分后的盐解液再次进行油脂，蛋白的精细分离，得到第二次盐解液。
其中，所述步骤（4）的温度控制在60±2℃。
其中，所述步骤（5）中的搅拌速度为55±5rpm，搅拌时间为420±60min。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明中，由于在步骤（1）中采用了去离子水对于母猪肠粘膜提取进行提取混合，减少了水中离子与有效成分肝素钠之间的反应，提高了提取的肠黏膜混合液中肝素钠的浓度。
2、本发明中，由于在步骤（2）中将混合液温度控制在35~40℃之间，混合液调节到盐度>4.5度，以及使得PH调到9.0，并以60±5rpm的速度进行搅拌，以提高胰蛋白酶的酶解反应效果。
3、本发明中，由于在步骤（2）中采用一次保温、二次保温和高温灭活步骤分别使得不同酶对于不同的蛋白质充分进行酶解后灭活处理，以增加对于其余蛋白质等杂质的分解效果。
4、本发明中，由于在步骤（3）中分别采用了两种离心机对于酶失活液进行粗分和精分，可以使得蛋白质和油脂被分离，以提高肝素钠的提纯效果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施 例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实 施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、 “左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方 位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或 暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操 作，因此不能理解为对本发明的限制；术语“第一”、“第二”、“第 三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性；此外， 除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应 做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体 地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可 以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域 的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体 含义。
实施例：
a、将健康新鮮的母猪肠，使用去离子水用多次碾压机碾压后进入刮肠机刮制，收集碾压和刮制过程中制备的肠黏膜混合液，水量控制在每根母猪肠5±1Kg；
b、将肠黏膜混合液用提升泵打入酶解罐，常温下以60±5rpm的速度搅拌并用饱和浓盐水将混合液盐度调节到＞4.5度，用0.3±0.2mol/L的氢氧化钠溶液将PH调到9.0，控制混合液温度在35~40℃，按每750Kg母猪肠添加1Kg胰蛋白酶(20万单位)的标准添加胰蛋白酶；
c、将混合液升温到48℃， PH值调节为8.5，盐度>3.6度，保温50±10min，再将混合液温度升至58度，PH值调节为8.5，盐度>3.2度，保温120min，之后将升高温度到80℃，PH值>8.0，盐度>3.0度，保温10min，获得酶失活液；
d、用分离因素2500±150g、 rpm3500±100的低速液液固三相分离机，对酶失活液进行油脂、蛋白分离，获得第一次盐解液，再用分离因素12200±200g、rpm6400±300的高速液液固三相分离机，对粗分后的第一次盐解液盐解液再次进行油脂，蛋白的精细分离，获得第二次盐解液；
e、将第二次盐解液用板式热交换器进行降温，温度控制在60±2℃，获得吸附液；
f、将吸附液打入吸附罐，用0.3±0.2mol/L的氢氧化钠溶液调到PH>8.0，用饱和浓盐水调节到混合液盐度>3.0度，按每60Kg母猪肠添加1Kg拜尔树脂的用量，添加处理好的树脂进行离子吸附，并以55±5rpm的速度搅拌吸附420±60min；
g、用树脂收集罐收集吸附后的树脂，并打入漂洗罐进行彻底清洗，去除蛋白、油脂等杂质，吸附废液排入污水处理中；
h、用传统工艺对收集的树脂进行洗脱、醇沉、烘干，获得粗品肝素钠。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，所述方法包括以下步骤：
（1）肠粘膜提取
将健康新鮮的母猪肠，使用去离子水用多次碾压机碾压后进入刮肠机刮制，收集碾压和刮制过程中制备的肠黏膜混合液；
（2）酶解
将肠黏膜混合液用提升泵打入酶解罐，常温下搅拌并用饱和浓盐水将混合液盐度调节到＞4.5，再用氢氧化钠溶液将PH调到9.0，将混合液温度在35℃~10℃，随后，添加胰蛋白酶，并进行一次保温、二次保温及高温灭活获得酶失活液；
（3）分离
将酶失活液分别通过低速液液固三相分离机以及高速液液固三相分离机进行油脂蛋白的分离，得到蛋白和油脂分离后的盐解液，将盐解液倒入缓冲罐；
（4）降温
将盐解液用板式热交换器进行降温，获得吸附液；
（5）吸附
将吸附液打入吸附罐，PH值调节到＞8.0，盐度＞3.0，添加处理好的树脂进行离子吸附，并以搅拌加速吸附；
（6）树脂收集
用树脂收集罐收集吸附后的树脂，并打入漂洗罐进行彻底清洗，去除蛋白、油脂等杂质；
（7）固化
用传统工艺对收集的树脂进行洗脱、醇沉、烘干，即获得粗品肝素钠。
2.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：步骤（1）使用得到去离子水水量控制在每根母猪肠5±1Kg。
3.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：步骤（2）使用的搅拌速度为60±5rpm的速度。
4.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：步骤（2）和（5）使用的氢氧化钠溶液的浓度为0.3±0.2mol/L，步骤（2）使用的胰蛋白酶按每750Kg母猪肠添加1Kg胰蛋白酶(20万单位)的标准添加。
5.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
酶失活液的制备；
一次保温
将混合液升温到48℃，PH值调节为8.5，盐度＞3.6，保温50±10min；
二次保温
将混合液温度升至58℃，PH值调节为8.5，盐度＞3.2，保温120min；
高温灭活
升高温度到80℃，PH值＞8.0，盐度＞3.0，保温10min，获得酶失活液。
6.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
盐解液的制备；
（1）粗分
用分离因素2500±150g、rpm3500±100的低速液液固三相分离机，对酶失活液进行油脂、蛋白分离，得到第一次盐解液；
（2）精分
用分离因素12200±200g、rpm6400±300的高速液液固三相分离机，对粗分后的盐解液再次进行油脂，蛋白的精细分离，得到第二次盐解液。
7.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤（4）的温度控制在60±2℃。
8.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤（5）中的树脂为拜尔树脂，用量为每60Kg母猪肠添加1Kg拜尔树脂。
9.如权利要求1所述的生物酶法利用母猪肠制备粗品肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤（5）中的搅拌速度为55±5rpm，搅拌时间为420±60min。
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