CN107286270A - 一种利用酶解法制备肝素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生化行业领域,特别涉及一种利用酶解法制备肝素钠的方法。该利用酶解法制备肝素钠的方法包括以下步骤:采用酶解方法将肝素钠‑蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。采用酶解可以适当降低盐浓度,减轻污染,降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用,每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
Description
技术领域
本发明属于生化行业领域,特别涉及一种利用酶解法制备肝素钠的方法。
背景技术
肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖,主要存在与肥大细胞中,具有抗凝血作用,被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000—37500,对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体,肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视.也是我国主要的出口药物之一,随着研究的深入,人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用,还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素钠粗品是我国的传统出口产品,在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后,肝素钠产率低,肝素钠产品质量不稳定。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足,提供了一种疗效快、治愈率高的利用酶解法制备肝素钠的方法。
本发明是通过如下技术方案实现的:
一种利用酶解法制备肝素钠的方法,包括以下步骤:
(1)酶解:取小肠粘膜,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5-8,每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45-55℃,保温1小时后,过80目滤膜,收集过滤液,在滤液中加入2709碱性蛋白酶,保温1小时;
(2)升温:步骤(1)结束后,将步骤(1)中酶解中的滤液加热至温度60-65℃,保温5分钟,过80目滤膜,收集过滤液;
(3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中,每40L滤液中加4-6g树脂,进行搅拌,然后降温至55℃,保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤,放出废液;
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤后的树脂,每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml,保持55℃洗脱,收集洗脱液;
(5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤,然后移入沉淀罐中,加入乙醇沉淀肝素钠;
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
其中,步骤(1)中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4;小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。
其中,步骤(1)中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。
其中,步骤(1)中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。
其中,步骤(2)中所述步骤(1)中酶解中的滤液的温度为50-55℃。
传统生产工艺在肝素钠生产过程中,往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉,致使产品收率低。本发明通过酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。采用酶解可以适当降低盐浓度,减轻污染,降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用,每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
本发明的有益效果是:本发明能解决单酶解工艺中酶解液活性低的问题,采用酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。
具体实施方式
实施例1:
一种利用酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(1)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜500kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.5%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.8,加胰酶100g,加热至温度升至51℃,保温1小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶125g,保温1小时。
(2)升温:步骤(1)结束后,加热至温度升至63℃,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至55℃,加500g树脂,保温55℃,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水694.4ml,保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
实施例2:
一种利用酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(1)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜600kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5,加胰酶120g,加热至温度升至45℃,保温1小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶300g,保温1小时。
(2)升温:步骤(1)结束后,加热至温度升至60℃,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至55℃,加650g树脂,保温55℃,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水903ml,保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
实施例3:
一种利用酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(1)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜800kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH8,加胰酶160g,加热至温度升至55℃,保温1小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶300g,保温1小时。
(2)升温:步骤(1)结束后,加热至温度升至65℃,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至55℃,加1200g树脂,保温55℃,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水1667ml,保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
Claims (5)
1.一种利用酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)酶解:
取小肠粘膜,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5-8,每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45-55℃,保温1小时后,过80目滤膜,收集过滤液,在滤液中加入2709碱性蛋白酶,保温1小时;
(2)升温:步骤(1)结束后,将步骤(1)中酶解中的滤液加热至温度60-65℃,保温5分钟,过80目滤膜,收集过滤液;
(3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中,每40L滤液中加4-6g树脂,进行搅拌,然后降温至55℃,保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤,放出废液;
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤后的树脂,每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml,保持55℃洗脱,收集洗脱液;
(5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤,然后移入沉淀罐中,加入乙醇沉淀肝素钠;
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
2.根据权利要求1所述的利用酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(1)中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4;小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。
3.根据权利要求1所述的利用酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(1)中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。
4.根据权利要求1所述的利用酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(1)中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。
5.根据权利要求1或2所述的利用酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(2)中所述步骤(1)中酶解中的滤液的温度为50-55℃。
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CN110437345A (zh) * | 2018-05-02 | 2019-11-12 | 山阳县恒瑞肉制品有限公司 | 一种粗品肝素钠制备工艺 |
CN111363065A (zh) * | 2020-04-10 | 2020-07-03 | 揭阳市润达肠衣有限公司 | 一种从腌渍肠衣盐水中提取肝素钠的方法 |
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CN113583150A (zh) * | 2021-04-16 | 2021-11-02 | 山东万邦赛诺康生化制药股份有限公司 | 一种肝素钠的酶解工艺及精制工艺 |
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |