CN112546677A - 一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂及血清提取方法 - Google Patents
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Abstract
一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂及血清提取方法，本申请涉及家禽血清分离技术领域，具体公开了一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂及血清提取方法，包括促凝剂、脱壁剂和血清分离胶；所述血清分离胶以重量份数计，包含如下组分：丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2‑巯基乙醇和碳酸钙；所述脱壁剂以重量份数计，包含如下组分：聚山梨酯‑80、聚丙烯乙二醇和酒精；所述促凝剂以重量份数计，包含如下组分：凝血酶、二氧化硅、β‑丙氨酸和酒精；提取家禽血清时，将脱壁剂喷涂至储存管内壁，再将血清分离胶和促凝剂加入到储存管内，最后将家禽血液注入储存管内，静置后分离即可。其具有加快对家禽血清检验进度优点。
Description
技术领域
本申请涉及家禽血清分离技术领域，更具体地说，它涉及一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂及血清提取方法。
背景技术
血清指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血清不会凝固，有免疫、维持酸碱平衡和渗透压的作用，血清蛋白质亦可储备供给机体蛋白质不足时的应用。人和动物的血清常用以进行各种血清学试验，帮助诊断疾病。含抗体的血清可作为预防或治疗疾病之用。
在养殖家禽时，需对家禽的血清进行检验时，需从家禽血液中将血清分离出来，通常是将家禽血液抽至储存管内，血液在储存管内静置，血清可从血液中缓慢析出。
因家禽类血液粘度较大，血液采集后在储存管内，对储存管内壁的吸附性较强，短时间内很难分离出血清，检测时需将采集的样本存放，24小时后由其自动析出血清，严重制约了检验进度。
发明内容
为了减少对血清检验进度的制约，本申请提供一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂及血清提取方法。
第一方面，本申请提供一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，采用如下的技术方案：
一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，包括促凝剂、脱壁剂和血清分离胶；
所述血清分离胶以重量份数计，包含如下组分：100-120份的丙烯酸羟乙酯、3-4份的丙烯酸丁酯、2-3份的2-巯基乙醇和4-5份的碳酸钙；
所述脱壁剂以重量份数计，包含如下组分：1-2份的聚山梨酯-80、2-4份的聚丙烯乙二醇和40-50份的酒精；
所述促凝剂以重量份数计，包含如下组分：5-6份的凝血酶、50-60份的二氧化硅、1-2份的β-丙氨酸和500-550份的酒精。
通过采用上述技术方案，在对家禽血液中的血清进行提取分离时，先将血液抽至储存管内，脱壁剂可减少血液吸附在储存管内壁，促凝剂与家禽血液混合，可加快血液中血细胞的凝结速度，进而加快了血清的分离速度，血清分离胶可在储存管内的血清和血块之间形成隔离层，进而可将血块和血清隔开，提高了对血清的收率；通过设置脱壁剂、促凝剂和血清分离胶，三者协同配合，可加快对家禽血液中血清的分离速度和提高对血清的分离量，加快了检验进度。
优选的，所述二氧化硅为气相二氧化硅。
通过采用上述技术方案，在促凝剂中添加气相二氧化硅，相对与普通二氧化硅，气相二氧化硅具有较好的抗菌性能，可减少在提取家禽血清时，细菌大量繁殖的情况出现。
优选的，所述血清分离胶的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙，对丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙混合，即可得到第一混合物；
步骤二，对第一混合物进行搅拌，搅拌时间为10-15min，搅拌转速为50-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到血清分离胶；
步骤三，将混合得到的血清分离胶进行真空脱除气泡，即可得到脱除气泡后的血清分离胶。
通过采用上述技术方案，通过上述工艺步骤制备血清分离胶，工艺步骤简单，制备效率高，且制备得到的血清分离胶内气泡较少。
优选的，所述脱壁剂的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精，将聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精混合得到第二混合物；
步骤二，对第二混合物进行搅拌，搅拌时间为15-18min，搅拌转速为50-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到脱壁剂。
通过采用上述技术方案，采用上述步骤对脱壁剂进行制备，制备得到的脱壁剂具有混合均匀，制备速度快，制备效率高的优点。
优选的，所述促凝剂的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精，将凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精混合，得到第三混合物；
步骤二，对第三混合物进行搅拌，搅拌时间为10-13min，搅拌转速为55-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到促凝剂；
步骤三，对混合得到的促凝剂进行真空脱除气泡，脱除气泡结束后，即可得到脱除气泡的促凝剂。
通过采用上述技术方案，通过上述步骤制备促凝剂，制备步骤较为简单，制备效率高，操作较为简便，降低了操作工人的劳动强度。
第二方面，本申请提供一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，采用如下的技术方案：
一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，包括如下步骤：
S1：使用脱壁剂对储存管进行处理，将脱壁剂均匀喷涂在储存管内壁，即可得到脱壁储存管；
S2：在脱壁储存管内依次加入血清分离胶和促凝剂，添加结束后即可得到提取储存管；
S3：将待提取的家禽血液抽至提取储存管内，常温下对注入家禽血液的提取储存管进行静置，静置时间为10-30min，静置后对储存管进行离心，使血清析出即可。
通过采用上述技术方案，将脱壁剂喷涂到储存管内壁，将血清分离胶和促凝剂注入到储存管内后，再将家禽血液抽至储存管内，位于储存管内壁的脱壁剂可起到减轻家禽血液与储存管内壁之间吸附的问题，储存管内的促凝剂可促进家禽血液内血细胞的凝结，可加快血清的析出，血清析出后血清分离胶位于血清和血细胞形成的血块之间，可提高血清的析出量，可减少血清和血块之间混合的情况发生，通过在储存管内壁喷涂脱壁剂，并在储存管内加入促凝剂和血清分离胶，便于批量对储存管进行处理，需对家禽血清进行提取时，直接将家禽血液注入批量处理后的储存管中即可，可批量对储存管进行处理，进一步缩短了检测时间，减少了对检验进度的制约。
优选的，在S1中将脱壁剂在储存管内壁喷涂结束后，对喷涂脱壁剂的储存管内壁进行烘干处理。
通过采用上述技术方案，使用脱壁剂对储存管内壁处理结束后，对储存管内壁的脱壁剂进行烘干，减少了湿润的脱壁剂容易从储存管内壁上脱落的问题。
优选的，对储存管内壁的烘干方法为热风吹干，热风温度为55-60℃，烘干时间为15-18s。
通过采用上述技术方案，采用热风对储存管内壁进行吹干，烘干效率较高，且热风温度控制在55-60℃，可减少对脱壁剂内有效成分的破坏，同时缩短了烘干时间。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请采用了促凝剂、脱壁剂和血清分离胶三者协同配合使用，由于脱壁剂可减少血液吸附在储存管内壁，促凝剂可加快血液中血细胞的凝结速度，血清分离胶可提高血清的收率，三者协同配合可加快对血清的提取速度及提取量。
2、促凝剂中添加了气相二氧化硅，气相二氧化硅可减少促凝剂内的气泡，同时提高了促凝剂内其他成分混合的均匀性，进而提高了对血清的分离速度和分离量。
3、本申请在制备血清分离胶时，对血清分离胶进行脱除气泡，脱除气泡的血清分离胶更加均匀，延长了储存时间，且提高了所分离血清的稳定性。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
制备例
以下制备例中的丙烯酸羟乙酯采购自菏泽昌盛源科技股份有限公司；丙烯酸丁酯和2-巯基乙醇采购自艾特(山东)新材料有限公司；碳酸钙采购自灵兽县运城矿产品加工厂；酒精为浓度95％的工业酒精，采购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；聚山梨酯-80和聚丙烯乙二醇采购自南通熙泰化工有限公司；凝血酶采购自上海鼓臣生物技术有限公司；β-丙氨酸采购自山东英朗化工有限公司；二氧化硅和气相二氧化硅采购自山东省寿光市昌泰微纳化工厂。
血清分离胶制备例
血清分离胶制备例1
步骤一，按比例称取100kg丙烯酸羟乙酯、3kg丙烯酸丁酯、2kg2-巯基乙醇和4kg碳酸钙，将丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙混合在一起，即可得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物加入到搅拌釜中，对第一混合物进行搅拌混合，搅拌时间为10min，搅拌转速为50rad/min，搅拌均匀后，即可得到血清分离胶；
步骤三，将混合得到的血清分离胶进行真空脱除气泡，即可得到脱除气泡后的血清分离胶。
血清分离胶制备例2
步骤一，按比例称取100kg丙烯酸羟乙酯、3kg丙烯酸丁酯、2kg2-巯基乙醇和4kg碳酸钙，将丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙混合在一起，即可得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物加入到搅拌釜中，对第一混合物进行搅拌混合，搅拌时间为15min，搅拌转速为60rad/min，搅拌均匀后，即可得到血清分离胶；
步骤三，将混合得到的血清分离胶进行真空脱除气泡，即可得到脱除气泡后的血清分离胶。
血清分离胶制备例3
步骤一，按比例称取120kg丙烯酸羟乙酯、4kg丙烯酸丁酯、3kg2-巯基乙醇和5kg碳酸钙，将丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙混合在一起，即可得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物加入到搅拌釜中，对第一混合物进行搅拌混合，搅拌时间为10min，搅拌转速为50rad/min，搅拌均匀后，即可得到血清分离胶；
步骤三，将混合得到的血清分离胶进行真空脱除气泡，即可得到脱除气泡后的血清分离胶。
脱壁剂制备例
脱壁剂制备例1
步骤一，按比例称取1kg聚山梨酯-80、2kg聚丙烯乙二醇和40kg酒精，将聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精混合在一起得到第二混合物；
步骤二，将第二混合物加入到搅拌釜中，对第二混合物进行搅拌混合，搅拌时间为15min，搅拌转速为50rad/min，搅拌均匀后，即可得到脱壁剂。
脱壁剂制备例2
步骤一，按比例称取1kg聚山梨酯-80、2kg聚丙烯乙二醇和40kg酒精，将聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精混合在一起得到第二混合物；
步骤二，将第二混合物加入到搅拌釜中，对第二混合物进行搅拌混合，搅拌时间为18min，搅拌转速为60rad/min，搅拌均匀后，即可得到脱壁剂。
脱壁剂制备例3
步骤一，按比例称取2kg聚山梨酯-80、4kg聚丙烯乙二醇和50kg酒精，将聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精混合在一起得到第二混合物；
步骤二，将第二混合物加入到搅拌釜中，对第二混合物进行搅拌混合，搅拌时间为15min，搅拌转速为50rad/min，搅拌均匀后，即可得到脱壁剂。
促凝剂制备例
促凝剂制备例1
步骤一，按比例称取5kg凝血酶、50kg二氧化硅、1kgβ-丙氨酸和和40kg酒精，将凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精混合在一起，得到第三混合物；
步骤二，将第三混合物加入到搅拌釜中，对第三混合物进行搅拌混合，搅拌时间为10min，搅拌转速为55rad/min，搅拌均匀后，即可得到促凝剂；
步骤三，对混合得到的促凝剂进行真空脱除气泡，脱除气泡结束后，即可得到脱除气泡的促凝剂。
促凝剂制备例2
步骤一，按比例称取5kg凝血酶、50kg气相二氧化硅、1kgβ-丙氨酸和和40kg酒精，将凝血酶、气相二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精混合在一起，得到第三混合物；
步骤二，将第三混合物加入到搅拌釜中，对第三混合物进行搅拌混合，搅拌时间为10min，搅拌转速为55rad/min，搅拌均匀后，即可得到促凝剂；
步骤三，对混合得到的促凝剂进行真空脱除气泡，脱除气泡结束后，即可得到脱除气泡的促凝剂。
促凝剂制备例3
步骤一，按比例称取6kg凝血酶、60kg二氧化硅、2kgβ-丙氨酸和和50kg酒精，将凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精混合在一起，得到第三混合物；
步骤二，将第三混合物加入到搅拌釜中，对第三混合物进行搅拌混合，搅拌时间为13min，搅拌转速为60rad/min，搅拌均匀后，即可得到促凝剂；
步骤三，对混合得到的促凝剂进行真空脱除气泡，脱除气泡结束后，即可得到脱除气泡的促凝剂。
实施例
实施例1
一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，该方法包括如下步骤，S1：使用脱壁剂制备例1中得到的脱壁剂对储存管进行处理，量取3ml脱壁剂并将脱壁剂均匀喷涂在储存管内壁，再对储存管内壁进行吹热风，热风温度为56℃，烘干时间为15s，然后分别称取2ml血清分离胶制备例1中得到的血清分离胶和促凝剂制备例1中得到的促凝剂，将促凝剂和血清分离胶加入到储存管中，即可得到提取储存管；
S2：将待提取的鸡的血液4ml抽至提取储存管内，常温下对注入鸡血液的提取储存管进行静置，静置时间为30min，静置结束后对储存管进行离心，离心时间为15min，血清即可析出。
实施例2
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例3中得到的促凝剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例3
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例4
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，脱壁剂为脱壁剂制备例2中得到的脱壁剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例5
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，脱壁剂为脱壁剂制备例3中得到的脱壁剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例6
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，血清分离胶为血清分离胶制备例2中得到的血清分离胶，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例7
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，血清分离胶为血清分离胶制备例3中得到的血清分离胶，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例8
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，将鸡的血液注入带储存管内静置时间为20min，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例9
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，将脱壁剂喷涂在提取储存管内壁后，再对提取储存管内壁进行吹热风，热风温度为60℃，烘干时间为17s，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
实施例10
本实施例与实施例1不同之处在于，促凝剂采用促凝剂制备例2中得到的促凝剂，将脱壁剂喷涂在提取储存管内壁后，不对脱壁剂进行烘干处理，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
对比例
对比例1
本对比例与实施例1不同之处在于，储存管内不加入促凝剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
对比例2
本对比例与实施例1不同之处在于，储存管内不喷涂脱壁剂，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
对比例3
本对比例与实施例1不同之处在于，储存管内不加入血清分离胶，其它原料配比和工艺参数与实施例1相同。
对比例4
本对比例与实施例1的不同之处在于不对储存管进行任何处理，直接将鸡的血液抽至储存管内，静置30min后，对储存管进行离心，离心时间为15min。
对比例5
本对比例与实施例1的不同之处在于不对储存管进行任何处理，直接将鸡的血液抽至储存管内，静置24h，使血清自动析出。
试验结果
取实施例1-10和对比例1-4中得到的血清样品，各取10组，对血清量进行测量，并计算平均值，计算结果如表1所示：
表1提取血清量(ml)
| 样品 | 血清量(ml) |
| 实施例1 | 1.6 |
| 实施例2 | 2.0 |
| 实施例3 | 1.9 |
| 实施例4 | 1.8 |
| 实施例5 | 2.0 |
| 实施例6 | 2.1 |
| 实施例7 | 1.8 |
| 实施例8 | 1.9 |
| 实施例9 | 1.9 |
| 实施例10 | 1.3 |
| 对比例1 | 1.4 |
| 对比例2 | 0.5 |
| 对比例3 | 1.5 |
| 对比例4 | 0.4 |
| 对比例5 | 0.5 |
试验结果分析：
1.由实施例1和实施例2对比可以看出，在促凝剂中加入普通二氧化硅和气相二氧化硅，气相二氧化硅可对血清的提取量起到一定的促进作用；
2.由实施例2-9可以看出，促凝剂、脱壁剂和血清分离胶中各成分含量的略微变化或制备工艺的略微变化对血清的分离量没有明显的影响；
3.由实施例2、对比例1和对比例3可以看出，储存管内不加入促凝剂或血清分离胶对血清分离量的有一定程度的影响；
4.由实施例2和实施例10可以看出，将脱壁剂喷涂在储存管内壁后，不对脱壁剂进行烘干处理，对血清的分离量也存在一定的不利影响，会减少血清的分离量；
5.由实施例2和对比例1可以看出，储存管不使用脱壁剂处理，对血清的分离量，有着较大的影响；
6.由对比例4和对比例5可以看出，不对储存管内的血液进行离心，对检验进度有着较大的制约。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (8)
1.一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，其特征在于：包括促凝剂、脱壁剂和血清分离胶；
所述血清分离胶以重量份数计，包含如下组分：100-120份的丙烯酸羟乙酯、3-4份的丙烯酸丁酯、2-3份的2-巯基乙醇和4-5份的碳酸钙；
所述脱壁剂以重量份数计，包含如下组分：1-2份的聚山梨酯-80、2-4份的聚丙烯乙二醇和40-50份的酒精；
所述促凝剂以重量份数计，包含如下组分：5-6份的凝血酶、50-60份的二氧化硅、1-2份的β-丙氨酸和500-550份的酒精。
2.根据权利要求1所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，其特征在于：所述二氧化硅为气相二氧化硅。
3.根据权利要求1所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，其特征在于：所述血清分离胶的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙，对丙烯酸羟乙酯、丙烯酸丁酯、2-巯基乙醇和碳酸钙混合，即可得到第一混合物；
步骤二，对第一混合物进行搅拌，搅拌时间为10-15min，搅拌转速为50-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到血清分离胶；
步骤三，将混合得到的血清分离胶进行真空脱除气泡，即可得到脱除气泡后的血清分离胶。
4.根据权利要求1所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，其特征在于：所述脱壁剂的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精，将聚山梨酯-80、聚丙烯乙二醇和酒精混合得到第二混合物；
步骤二，对第二混合物进行搅拌，搅拌时间为15-18min，搅拌转速为50-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到脱壁剂。
5.根据权利要求1所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取剂，其特征在于：所述促凝剂的制备方法包括如下步骤：
步骤一，按比例称取凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精，将凝血酶、二氧化硅、β-丙氨酸和和酒精混合，得到第三混合物；
步骤二，对第三混合物进行搅拌，搅拌时间为10-13min，搅拌转速为55-60rad/min，搅拌均匀后，即可得到促凝剂；
步骤三，对混合得到的促凝剂进行真空脱除气泡，脱除气泡结束后，即可得到脱除气泡的促凝剂。
6.权利要求1-5任一项所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1：使用脱壁剂对储存管进行处理，将脱壁剂均匀喷涂在储存管内壁，即可得到脱壁储存管；
S2：在脱壁储存管内依次加入血清分离胶和促凝剂，添加结束后即可得到提取储存管；
S3：将待提取的家禽血液抽至提取储存管内，常温下对注入家禽血液的提取储存管进行静置，静置时间为10-30min，静置后对储存管进行离心，使血清析出即可。
7.根据权利要求6所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，其特征在于：在S1中将脱壁剂在储存管内壁喷涂结束后，对喷涂脱壁剂的储存管内壁进行烘干处理。
8.根据权利要求7所述的一种可快速提取家禽血液中血清的提取方法，其特征在于：对储存管内壁的烘干方法为热风吹干，热风温度为55-60℃，烘干时间为15-18s。
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2020
- 2020-12-30 CN CN202011603146.7A patent/CN112546677A/zh active Pending
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