CN112538443A - 一种提高根际促生菌获得量的发酵方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域，且公开了一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水10‑20份、蔬菜种子5‑6份、乙醇6‑9份、次氯酸钠2‑3份、土壤样品20‑30份、有机肥6‑9份、琼脂10‑14份。该提高根际促生菌获得量的发酵方法，通过选用蔬菜种子后将其进行通过乙醇与无菌水进行消毒杀菌处理后，将其在适宜的环境下培育，从而可以保证蔬菜种子的成活率与成长后根须的数量和营养含量，保证细菌的成活率，得到根部分泌物后从而可以通过无菌水和琼脂的得到的培养基，将根茎处浮液稀释后涂布于培养基上，从而可以保证根际促生菌的获得量，大幅度提高对根际促生菌的获得量。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体为一种提高根际促生菌获得量的发酵方法。
背景技术
根际促生菌泛指能够直接或间接促进植物生长、增加作物产量、防治病虫害的根际微生物，根际促生菌与其他土壤微生物相比更能在根部有效的定殖、对有害微生物具有拮抗作用、在根围的营养竞争特别是对铁的竞争中处于优势、可分泌植物激素促进植物生长、能诱导植物产生系统抗性和分泌降解病原微生物的酶等。
现有技术的际促生菌发酵的产量较低，不能满足正常对根际促生菌使用的需求，所以我们提出了一种提高根际促生菌获得量的发酵方法。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，具备提高根际促生菌获得量的优点，解决了根际促生菌产量低的问题。
（二）技术方案
为实现上述提高根际促生菌获得量的目的，本发明提供如下技术方案：一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水10-20份、蔬菜种子5-6份、乙醇6-9份、次氯酸钠2-3份、土壤样品20-30份、有机肥6-9份、琼脂10-14份；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
优选的，所述乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为2%-5%。
优选的，所述S5中水浴预热的温度为60-70℃。
优选的，所述蔬菜种子为黄瓜或番茄。
优选的，所述S4中根系分泌物的终浓度为20-24mg/L。
优选的，所述S7中振荡所需温度为20-30℃，振荡时间为20-30min。
与现有技术相比，本发明提供了一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，具备以下有益效果：
1、该提高根际促生菌获得量的发酵方法，通过选用蔬菜种子后将其进行通过乙醇与无菌水进行消毒杀菌处理后，将其在适宜的环境下培育，从而可以保证蔬菜种子的成活率与成长后根须的数量和营养含量，保证细菌的成活率，得到根部分泌物后从而可以通过无菌水和琼脂的得到的培养基，将根茎处浮液稀释后涂布于培养基上，从而可以保证根际促生菌的获得量，大幅度提高对根际促生菌的获得量。
具体实施方式
实施例一：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水10份、蔬菜种子5份、乙醇6份、次氯酸钠2份、土壤样品20份、有机肥6份、琼脂10份，蔬菜种子为黄瓜；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为2%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为20mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为60℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为20℃，振荡时间为20min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例二：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水12份、蔬菜种子5份、乙醇6份、次氯酸钠2份、土壤样品22份、有机肥7份、琼脂11份，蔬菜种子为黄瓜；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为3%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为20mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为61℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为21℃，振荡时间为21min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例三：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水14份、蔬菜种子5份、乙醇6份、次氯酸钠2份、土壤样品23份、有机肥6份、琼脂11份，蔬菜种子为番茄；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为3%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为21mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为62℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为22℃，振荡时间为23min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例四：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水14份、蔬菜种子5份、乙醇9份、次氯酸钠3份、土壤样品24份、有机肥7份、琼脂13份，蔬菜种子为番茄；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为4%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为23mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为64℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为26℃，振荡时间为26min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例五：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水16份、蔬菜种子6份、乙醇9份、次氯酸钠3份、土壤样品26份、有机肥6份、琼脂13份，蔬菜种子为黄瓜；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为3%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为23mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为66℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为26℃，振荡时间为28min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例六：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水18份、蔬菜种子5份、乙醇9份、次氯酸钠2份、土壤样品28份、有机肥9份、琼脂13份，蔬菜种子为黄瓜；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为4%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为23mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为68℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为28℃，振荡时间为28min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
实施例七：
一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水20份、蔬菜种子6份、乙醇9份、次氯酸钠3份、土壤样品30份、有机肥9份、琼脂14份，蔬菜种子为黄瓜；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上，乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为5%；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重，根系分泌物的终浓度为24mg/L；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热，水浴预热的温度为70℃；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡，振荡所需温度为30℃，振荡时间为30min；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、根际促生菌由以下原料组成：无菌水10-20份、蔬菜种子5-6份、乙醇6-9份、次氯酸钠2-3份、土壤样品20-30份、有机肥6-9份、琼脂10-14份；
S2、使用乙醇对蔬菜种子表面进行消毒，使用无菌水冲洗后将其均撒在土壤样品上；
S3、将次氯酸钠和有机肥均匀撒在土壤样品上，并在室温为30℃的环境下对蔬菜种子培育20天；
S4、收集S3中蔬菜种子培育成型后产生的根系分泌物，将收集得到的根系分泌物冻干、称重；
S5、将得到的的根系分泌物经过滤膜除菌后置于进行水浴预热；
S6、将无菌水和琼脂通过高压蒸汽灭菌后水浴冷却至60℃，然后将S5中根系分泌物以体积比为1:1混合，得到初筛培养基；
S7、将S3中培育成型后蔬菜从根茎处剪断，然后将其置于盛有无菌水的锥形瓶中进行振荡；
S8、将S7中得到根际土壤悬浮液稀释后涂布于培养基上，在28℃下培养18h，得到菌株。
2.根据权利要求1所述的一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于：所述乙醇的浓度为75%，所述次氯酸钠的纯度为2%-5%。
3.根据权利要求1所述的一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于：所述S5中水浴预热的温度为60-70℃。
4.根据权利要求1所述的一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于：所述蔬菜种子为黄瓜或番茄。
5.根据权利要求1所述的一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于：所述S4中根系分泌物的终浓度为20-24mg/L。
6.根据权利要求1所述的一种提高根际促生菌获得量的发酵方法，其特征在于：所述S7中振荡所需温度为20-30℃，振荡时间为20-30min。
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| CN202011387985.XA Pending CN112538443A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 一种提高根际促生菌获得量的发酵方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112538443A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110184225A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-08-30 | 南京农业大学 | 一株具有PAHs降解能力的根际促生细菌PHE-2及其应用 |
| CN110218736A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-09-10 | 河南农业大学 | 一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法 |
| CN111849815A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 广西民族大学 | 一种植物根际促生菌株Gxun-20及其在植物促生中的应用 |
-
2020
- 2020-12-02 CN CN202011387985.XA patent/CN112538443A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110184225A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-08-30 | 南京农业大学 | 一株具有PAHs降解能力的根际促生细菌PHE-2及其应用 |
| CN110218736A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-09-10 | 河南农业大学 | 一种改善PGPR产AcdS能力的改造方法 |
| CN111849815A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 广西民族大学 | 一种植物根际促生菌株Gxun-20及其在植物促生中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 崔晓双 等: ""基于根际营养竞争的植物根际促生菌的筛选及促生效应研究"", 《南京农业大学学报》 * |
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