CN112516377A - 一种胶原微纤维止血材料及其制备方法和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物材料领域，具体的，涉及一种胶原微纤维止血材料，及其制备方法和使用方法。固体胶原材料经过高速剪切得到胶原微纤维，在水相中分散胶原微纤维后，通过连接分子将促凝血活性成份修饰在胶原微纤维表面，经冻干处理后再次经过高速剪切处理得到胶原微纤维止血材料。通过高速剪切可以简便高效制备胶原微纤维材料，尽可能保持胶原材料的生物活性；微纤维长度范围为10um–1000um，具有高分散性，利于喷射处理。连接分子可以高效定量将促凝血活性成份负载于胶原微纤维表面，增强其止血功效。本发明制备的胶原微纤维止血材料经由喷射方式用于渗血创面的止血，如脑外科手术或肝脏手术过程中止血，可以实现无接触定点止血的效果。

Description

一种胶原微纤维止血材料及其制备方法和使用方法
技术领域
本发明涉及一种止血材料的制备及其使用方法，具体涉及一种胶原微纤维止血材料，及其制备方法和使用方法。
背景技术
作为临床常用的局部止血材料，固体胶原材料具有良好的止血性能，通过与血小板结合，促进血小板集聚，直接激活内源性凝血途径，产生凝血作用，同时血细胞粘附形成血栓凝块，有效阻止血液冲开伤口。此外，胶原可促进肉芽组织生成，加速创面愈合。大量研究表明，胶原材料的止血活性明显优于其他多糖类止血材料，还可与细胞和伤口愈合过程中的生长因子存在很强的亲和力，促进创面修复和组织再生。但是与一些止血材料(如纤维蛋白原)相比，胶原材料的止血速度仍有差距，缩短止血时间成为提高胶原材料止血性能的主要硏发方向之一。
临床应用中，止血材料的外形也对其应用造成很大的影响，止血材料需要能够贴附在复杂器官的渗血表面，快速发挥止血功效。固体胶原材料通常以胶原片、胶原膜、胶原海绵、胶原纤维、胶原粉等形式用于出血创面，其中，胶原纤维具有比表面积大、易于粘附等优点。
对于胶原纤维止血材料，“CN109432489A”中涉及一种胶原止血纤维棉，其亲水性强，能在数秒内吸收血液或渗液，快速粘附创面，促进血小板粘附形成血栓，从而实现快速长效止血的效果。但由于其原材料胶原丝线中的胶原纤维尺寸较大，达厘米级，胶原纤维最终聚集成团，无分散性，无法通过喷射方式用于渗血创面止血。
对于胶原止血粉材料，“CN105597144A”中涉及一种胶原止血粉，将胶原溶液经过喷雾干燥处理制备粒径范围为0.1–10mm的胶原蛋白颗粒，但喷雾干燥的温度为100–130℃，此温度下处理的胶原材料已变性，对胶原的生物活性和止血功效有很大影响。
为了提高胶原止血材料(特别是胶原纤维止血材料)的止血功效，本发明开发一种胶原微纤维止血材料。通过高速剪切制备胶原微纤维，胶原纤维尺寸可控制在微米级，微纤维长度范围为10um–1000um，分散性好，更适合快速粘附渗血创面，同时也更利于喷射操作；高速剪切可以确保在较短时间内处理胶原材料，高效快捷制备胶原微纤维，尽可能保持胶原材料的生物活性。通过连接分子将促凝血活性成份负载于胶原微纤维表面，进一步提高止血速度。通过喷射方式，本发明制备的胶原微纤维止血材料可以无接触作用于渗血表面，精确与出血点结合，尤其适用于如脑外科手术或肝脏手术等狭小空间渗血创面止血。
发明内容
本发明涉及一种胶原微纤维止血材料，及其制备方法和使用方法。
一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，依次包括如下步骤：
(1)通过高速粉碎机将固体胶原材料经高速剪切处理得到胶原微纤维原材料；
(2)将步骤(1)所得胶原微纤维原材料均匀分散在水相中，胶原纤维原材料与水的质量比例范围为1:100–1:10000，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)所得胶原微纤维悬浮液通过不同目数筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为10–1000um的胶原微纤维，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)所得胶原微纤维悬浮液中添加促凝血活性成份，促凝血活性成份与胶原微纤维的质量比例范围为1:100–1:1000000；
(5)在步骤(4)所得胶原微纤维悬浮液中添加连接分子；
(6)将步骤(5)所得胶原微纤维悬浮液进行冻干处理，得到胶原微纤维固体冻干物；
(7)将步骤(6)所得胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，得到高分散性胶原微纤维止血材料。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(1)中固体胶原材料选自胶原膜、胶原片、胶原海绵、胶原冻干材料中的一种或两种以上的组合，固体胶原材料可经过或未经过交联处理。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(1)和步骤(7)中同为高速粉碎机的转速为20000–60000r/min，粉碎时间为10s–30s。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，通过高速粉碎机中刀头的瞬时剪切力将大尺寸(厘米级以上)固体胶原材料快速切割形成微纤维结构，极短的粉碎时间确保胶原材料温度不会发生明显升高，在简便高效制备胶原微纤维的基础上，尽可能不影响胶原材料的生物活性等特性。为了避免高速粉碎机在运行过程中因材料过多等可能引起的局部升温，可在高速粉碎机中加入干冰或液氮进行降温。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，步骤(2)中胶原纤维原材料与水的质量比例范围为1:100–1:10000，其中胶原纤维原材料的质量按照步骤(1)中固体胶原材料的质量计算。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，步骤(3)中筛网的目数范围为16–1000目。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(4)中促凝血活性成份选自纤维蛋白原、凝血酶原(凝血素)、组织因子(凝血酶原酶)、钙离子(Ca2+)、促凝血球蛋白原、促凝血酶原激酶、辅助促凝血酶原激酶、抗血友病球蛋白A(AHG A)、抗血友病因子A(AHFA)，血小板辅助因子I、血友病因子VIII或A、抗血友病球蛋白B(AHG B)，抗血友病因子B(AHFB)，血友病因子IX或B、STUART(-PROWER)-F、自体凝血酶原C、ROSENTHAL因子、抗血友病球蛋白C、HAGEMAN因子、纤维蛋白稳定因子中的一种或两种以上的组合。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，步骤(4)中促凝血活性成份与胶原微纤维的质量比例范围为1:100–1:1000000，其中，促凝血活性成份与胶原微纤维的质量比例特指为：促凝血活性成份中每个组分与步骤(1)中固体胶原材料的质量比例。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(5)中连接分子选自NHS酯、磺酰氯、醛、异硫氰酸酯、碳二亚胺、酸酐、原花青素、异氰酸酯、酰亚胺酯、京尼平、酰基叠氮化物、环氧化物中的一种或两种以上的混合物。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(5)中，连接分子在胶原微纤维悬浮液中的最终浓度为大于等于0.001wt.％但小于等于1wt.％，特指为：连接分子中每个组分在胶原微纤维悬浮液中的最终浓度为大于等于0.001wt.％但小于等于1wt.％。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(5)中，连接分子在胶原微纤维悬浮液中的反应时间为30min–120min；优选地，连接分子在胶原微纤维悬浮液中的反应时间为30min–60min。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(4)和步骤(5)中，通过连接分子将促凝血活性成份负载于胶原微纤维表面，反应过程温和，不影响胶原材料和促凝血活性成份的生物活性、止血功效等；由于促凝血活性成份过少装载量不能显著增强胶原微纤维材料的止血效果，或者促凝血活性成份过多装载量可能引起血管内血栓等情况，为了实现预期止血功效，需要调控促凝血活性成份和连接分子的用量。
本发明一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，在步骤(6)中，胶原微纤维冻干材料中胶原微纤维由于冻干处理会发生团聚，胶原微纤维的分散性会变差，不利于喷射处理，故，在步骤(7)中再次通过高速剪切机剪切分散团聚的胶原微纤维，制备高分散性的胶原微纤维，可以通过喷射方式作用于渗血创面。
使用本发明任意一种胶原微纤维止血材料的制备方法所制备的胶原微纤维止血材料。
使用本发明胶原微纤维止血材料的方法，其中，通过喷射方式作用于渗血创面止血，其中，喷射装置中喷头的内径为2mm–5mm，与本发明胶原微纤维长度范围匹配，确保胶原微纤维止血材料可以顺畅通过喷射装置喷出，不发生堵塞喷头情况。
使用本发明胶原微纤维止血材料的方法，其中，胶原微纤维止血材料应用于脑外科手术中或肝脏手术中渗血创面止血。
与常规胶原止血材料比较，本发明胶原微纤维止血材料具有如下优势：1.胶原微纤维具有微米级和高分散性的特点，适合通过喷射方式将胶原微纤维无接触应用于渗血表面，特别适用于狭小高危的渗血创面，如脑外科手术出血；2.微米级胶原纤维更适合快速粘附渗血创面，精确与出血点结合，可以达到定位止血的效果；3.高速剪切的方法可以高效快捷制备胶原微纤维，尽可能保持胶原材料的生物活性；4.连接分子可以在胶原微纤维表面高效负载促凝血活性成份，止血速度更快，止血效果更好。
附图说明
图1胶原纤维尺寸及分散性情况比较(图1A是实施例1样品，图1B是对比例1样品)
图2胶原微纤维负载促凝血活性成份情况比较(图2A是实施例2样品，图2B是实施例3样品，图2C是对比例2样品，图2D是对比例3样品)
具体实施方式
实施例1
一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，依次包括如下步骤：
(1)在高速粉碎机上高速剪切已交联的5g胶原片，其中高速粉碎机的转速为30000r/min，粉碎时间为30s；
(2)将步骤(1)胶原微纤维原材料均匀分散在500g去离子水中，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)中胶原微纤维悬浮液通过30–150目的筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为100–500um的胶原微纤维原材料，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)胶原微纤维悬浮液中添加50mg纤维蛋白原和2mg氯化钙；
(5)在步骤(4)胶原微纤维悬浮液中添加5mg戊二醛和10mg NHS酯，反应时间为30min；
(6)冻干步骤(5)中的胶原微纤维悬浮液；
(7)将步骤(6)胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，其中高速粉碎机的转速为40000r/min，粉碎时间为10s，得到胶原微纤维止血材料。
通过喷头内径为3mm的喷射装置将上述胶原微纤维止血材料喷射在开颅手术中的渗血创面进行止血处理。
实施例2
一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，依次包括如下步骤：
(1)在高速粉碎机上高速剪切10g胶原膜，其中高速粉碎机的转速为20000r/min，粉碎时间为20s；
(2)将步骤(1)胶原微纤维原材料均匀分散在100000g去离子水中，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)中胶原微纤维悬浮液通过16–40目的筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为400–1000um的胶原微纤维原材料，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)胶原微纤维悬浮液中添加0.5mg促凝血球蛋白原和0.01mg血小板辅助因子I；
(5)在步骤(4)胶原微纤维悬浮液中添加2g环氧乙烷和1g原花青素，反应时间为60min；
(6)冻干步骤(5)中的胶原微纤维悬浮液；
(7)将步骤(6)胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，其中高速粉碎机的转速为30000r/min，粉碎时间为20s，得到胶原微纤维止血材料。
通过喷头内径为5mm的喷射装置将上述胶原微纤维止血材料喷射在肝脏手术中的渗血创面进行止血处理。
实施例3
一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其中，依次包括如下步骤：
(1)在高速粉碎机上高速剪切2g胶原海绵，其中高速粉碎机的转速为60000r/min，粉碎时间为10s；
(2)将步骤(1)胶原微纤维原材料均匀分散在500g去离子水中，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)中胶原微纤维悬浮液通过80–1000目的筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为10–200um的胶原微纤维原材料，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)胶原微纤维悬浮液中添加1mg凝血酶原酶；
(5)在步骤(4)胶原微纤维悬浮液中添加0.02g碳二亚胺和5g京尼平，反应时间为120min；
(6)冻干步骤(5)中的胶原微纤维悬浮液；
(7)将步骤(6)胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，其中高速粉碎机的转速为50000r/min，粉碎时间为10s，得到胶原微纤维止血材料。
通过喷头内径为2mm的喷射装置将上述胶原微纤维止血材料喷射在皮肤出血创面进行止血处理。
实施例5
胶原微纤维止血材料效果比较试验
一、对比胶原止血材料的制备
对比例1：一种胶原纤维止血材料的制备，其中，依次包括如下步骤：
将2g胶原海绵均匀分散在500g去离子水中，经冻干处理得到胶原纤维止血材料。
将上述胶原纤维止血材料覆盖在皮肤出血创面进行止血处理。
对比例2：一种胶原微纤维止血材料的制备，其中，依次包括如下步骤：
(1)在高速粉碎机上高速剪切10g胶原膜，其中高速粉碎机的转速为20000r/min，粉碎时间为20s；
(2)将步骤(1)胶原微纤维原材料均匀分散在10000g去离子水中，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)中胶原微纤维悬浮液通过16–40目的筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为400–1000um的胶原微纤维原材料，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)冻干步骤(3)中的胶原微纤维悬浮液；
(5)将步骤(4)胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，其中高速粉碎机的转速为30000r/min，粉碎时间为10s，得到胶原微纤维止血材料。
通过喷头内径为5mm的喷射装置将上述胶原微纤维止血材料喷射在肝脏手术中的渗血创面进行止血处理。
对比例3：一种胶原微纤维止血材料的制备，其中，依次包括如下步骤：
(1)在高速粉碎机上高速剪切已交联的5g胶原片，其中高速粉碎机的转速为30000r/min，粉碎时间为30s；
(2)将步骤(1)胶原微纤维原材料均匀分散在500g去离子水中，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)中胶原微纤维悬浮液通过30–150目的筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为100–500um的胶原微纤维原材料，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)胶原微纤维悬浮液中添加50mg纤维蛋白原和2mg氯化钙；
(5)冻干步骤(4)中的胶原微纤维悬浮液；
(6)将步骤(5)胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，其中高速粉碎机的转速为40000r/min，粉碎时间为10s，得到胶原微纤维止血材料。
通过喷头内径为3mm的射装置将上述胶原微纤维止血材料喷射在开颅手术中的渗血创面进行止血处理。
对比例4：一种胶原止血粉的制备，其中，依次包括如下步骤：
(1)将1g I型胶原材料置入1000g去离子水中，搅拌过程中添加0.1M乙酸溶液溶解胶原形成均质溶液；
(2)将步骤(1)胶原溶液通过喷雾干燥机制备粒径范围为0.2–1mm的胶原蛋白颗粒，喷雾干燥的温度为110℃。
通过喷头内径为5mm的喷射装置将上述胶原止血粉喷射在肝脏手术中的渗血创面进行止血处理。
二、效果试验对比
(1)胶原纤维尺寸及分散性对比试验：将实施例1和对比例1中胶原纤维样品在高浓度乙醇溶液(25,50,70,80,90,95,100％(v/v％)中梯度脱水，每次浸入1h。样品表面经喷Pt后在扫描电子显微镜(SEM)上观察(S-4800,Hitachi)，加速电压为15kV。结果见图1。由图1可知，实施例1中的胶原微纤维经高速剪切处理尺寸可达微米级，且分散性很好，适用于喷射处理；而对比例1中的胶原纤维通过常规冻干处理得到，纤维尺寸在厘米级，且纤维彼此交缠，分散性差，不利于喷射处理。以上证实，通过高速剪切的方式可以快捷高效制备高分散性胶原微纤维材料，更适合喷射处理，可以无接触作用于渗血创面。
(2)胶原微纤维负载促凝血活性成份对比试验：实施例2-3以及对比例3中的促凝血活性成份经FITC荧光染料标记后，分别制备对应的胶原微纤维材料，在A1激光共聚焦显微镜上观察(Nikon)，绿色激发光波长为488nm，比较促凝血活性成份在胶原微纤维上的负载情况，结果见图2。由图2可知，实施例中的胶原微纤维止血材料由于连接分子的作用，可以促进促凝血活性成份在胶原微纤维上负载，促凝血活性成份标记了绿色荧光染料FITC，故可以观察到较强的绿色荧光信号，说明负载了大量促凝血活性成份；而对比例2中没有加入促凝血活性成份和连接分子，不能观察到绿色荧光信号，说明没有负载促凝血活性成份；对比例3中加入促凝血活性成份但没有加入连接分子，促凝血活性成份不易在胶原微纤维表面装载，故只能观察到微弱的绿色荧光信号，说明负载了极少量的促凝血活性成份。以上证实，通过连接分子可以在胶原微纤维表面高效负载促凝血活性成份。
(3)胶原止血材料在大鼠出血创面模型的止血效果对比试验：采用SD大鼠70只，体重275～300g，饲养温度控制在20～25℃，光照充裕，自由饮食饮水。所有实验动物操作程序符合《实验动物管理和使用指南》规定。用随机数字表法分为实施例1-3组和对比例1-4组，每组10只。数据通过SPSS进行统计分析，p<0.05视为数据有显著性差异。将实施例1-3以及对比例1-4中的胶原止血材料分别使用对应的方式作用于对应的出血创面进行止血，止血时间为从在出血创面使用材料到出血创面无血液渗出所用的时间，不同样品的止血时间情况见表1。
表1胶原止血材料在大鼠出血创面模型的止血时间比较
实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
止血时间(s) 11.3±0.5 16.8±0.2 18.2±0.3 75.7±0.6 67.3±0.8 53.6±0.7 65.3±0.8
由表1可知，由于实施例中的胶原微纤维止血材料可以快速粘附在出血创面，而且由于材料表面高效负载了促凝血活性成份，基本在20s内即可实现止血功效；而对比例1-3中的胶原纤维材料的止血时间都在50s以上，尤其对于没有添加促凝血活性成份的对比例1和2，其止血时间在60s以上，明显大于实施例样品的止血时间，对比例3中虽然添加了促凝血活性成分，但由于缺少连接分子，促凝血成份在胶原微纤维表面的负载效率不高，无法明显提高其止血速度；对比例4中的胶原止血粉虽然为微米级颗粒，但由于其制备过程中高温处理对胶原材料的生物活性有影响，减弱其止血功效，其止血时间也大于实施例样品的止血时间。
结合效果试验可知，与对比例中胶原止血材料比较，实施例中的胶原微纤维止血材料具有微米级和高分散性的特点，适合通过喷射方式将胶原微纤维无接触应用于渗血表面，特别适用于狭小高危的渗血创面；实施例中的胶原微纤维止血材料更适合快速粘附渗血创面，精确与出血点结合，可以达到定位止血的效果；实施例中的胶原微纤维止血材料经过高速剪切的方法高效快捷制备，其生物活性尽可能保持；对于实施例中的胶原微纤维止血材料，连接分子可以在胶原微纤维表面高效负载促凝血活性成份，止血速度更快，止血效果更好。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，依次包括如下步骤：
(1)通过高速粉碎机将固体胶原材料经高速剪切处理得到胶原微纤维原材料；
(2)将步骤(1)所得胶原微纤维原材料均匀分散在水相中，胶原纤维原材料与水的质量比例范围为1:100–1:10000，配制胶原微纤维悬浮液；
(3)将步骤(2)所得胶原微纤维悬浮液通过不同目数筛网进行逐级过滤，筛选得到长度范围为10–1000um的胶原微纤维，分散在水中配置胶原微纤维悬浮液；
(4)在步骤(3)所得胶原微纤维悬浮液中添加促凝血活性成份，促凝血活性成份与胶原微纤维的质量比例范围为1:100–1:1000000；
(5)在步骤(4)所得胶原微纤维悬浮液中添加连接分子；
(6)将步骤(5)所得胶原微纤维悬浮液进行冻干处理，得到胶原微纤维固体冻干物；
(7)将步骤(6)所得胶原微纤维固体冻干物通过高速粉碎机进行高速剪切处理，得到高分散性胶原微纤维止血材料。
2.如权利要求1所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中固体胶原材料选自胶原膜、胶原片、胶原海绵、胶原冻干材料中的一种或两种以上的组合，固体胶原材料可经过或未经过交联处理。
3.如权利要求2所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(1)和步骤(7)中同为所述高速粉碎机的转速为20000–60000r/min，粉碎时间为10s–30s。
4.如权利要求1所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中所述促凝血活性成份为纤维蛋白原、凝血酶原(凝血素)、组织因子(凝血酶原酶)、钙离子(Ca2+)、促凝血球蛋白原、促凝血酶原激酶、辅助促凝血酶原激酶、抗血友病球蛋白A(AHGA)、抗血友病因子A(AHF A)，血小板辅助因子I、血友病因子VIII或A、抗血友病球蛋白B(AHGB)，抗血友病因子B(AHF B)，血友病因子IX或B、STUART(-PROWER)-F、自体凝血酶原C、ROSENTHAL因子、抗血友病球蛋白C、HAGEMAN因子、纤维蛋白稳定因子中的一种或两种以上的组合。
5.如权利要求1所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中所述连接分子为NHS酯、磺酰氯、醛、异硫氰酸酯、碳二亚胺、酸酐、原花青素、异氰酸酯、酰亚胺酯、京尼平、酰基叠氮化物、环氧化物中的一种或两种以上的混合物。
6.如权利要求5所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中所述连接分子在胶原微纤维悬浮液中的最终浓度为大于等于0.001wt.％但小于等于1wt.％。
7.如权利要求6所述一种胶原微纤维止血材料的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述连接分子在胶原微纤维悬浮液中的反应时间为30min–120min。
8.使用如权利要求1至7所述任意一种胶原微纤维止血材料的制备方法所制备的胶原微纤维止血材料。
9.使用如权利要求8所述胶原微纤维止血材料的方法，其特征在于，通过喷射方式作用于渗血创面止血，其中，喷射装置中喷头的内径为2mm–5mm。
10.使用如权利要求9所述胶原微纤维止血材料的方法，其特征在于，胶原微纤维止血材料应用于脑外科手术中或肝脏手术中渗血创面止血。
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