CN112515032B - 一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的硒蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的硒蛋白及其应用，该提取方法包括：采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解，得到堇叶碎米荠酶解液；将所述堇叶碎米荠酶解液进行浓缩后干燥。本发明通过采用包括纤维素酶在内的酶酶解提取堇叶碎米荠中硒蛋白，不仅不会破坏堇叶碎米荠中的营养成分，酶解提取硒蛋白的效率高，而且硒蛋白的得率较高，硒蛋白中蛋白质含量高，以及总硒的含量高并且全部为有机硒；另外该提取方法简单、高效，成本低，环保，且易于大规模工业化生产。

Description

一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的 硒蛋白及其应用

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，尤其涉及一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的硒蛋白及其应用。

背景技术

近年来，研究发现堇叶碎米荠属植物具有超强的聚硒能力。目前，随着大众对硒与健康之间关系的了解越来越深入，对堇叶碎米荠中硒蛋白的研究逐渐成为一大热点。堇叶碎米荠中硒的存在形态以有机硒为主，关于堇叶碎米荠中硒蛋白的提取制备，已有少量专利及文献报道。

现有堇叶碎米荠中硒蛋白的提取技术一般是采用热酸溶液浸提法或碱溶液浸提法，提取过程中耗时长，生产成本高，产生较多杂质，且提取得到的产物中含有无机硒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的硒蛋白及其应用，通过采用包括纤维素酶在内的酶酶解提取堇叶碎米荠中的硒蛋白，酶解提取硒蛋白的时间短，而且硒蛋白的得率较高，硒蛋白中蛋白质含量高，以及总硒的含量高并且全部为有机硒，经形态分析检测得到的堇叶碎米荠硒蛋白中的硒的形态以硒代胱氨酸和L-硒甲基硒代半胱氨酸为主的有机硒形态存在；另外该提取方法简单、高效，成本低，环保，且易于大规模工业化生产。

为实现以上目的，本发明提供技术方案如下：

一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，包括：

采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解，得到堇叶碎米荠酶解液；

将所述堇叶碎米荠酶解液进行后干燥。

作为上述技术方案的进一步改进，所述采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解提取过程包括：

提供堇叶碎米荠粉，将所述堇叶碎米荠粉和溶剂混合得到混合液；

将包括纤维素酶在内的酶和所述混合液混合进行酶解，然后进行固液分离，液体即为堇叶碎米荠酶解液。

作为上述技术方案的进一步改进，所述溶剂包括水；

优选地，所述水的用量为所述堇叶碎米荠粉的总质量的20-30倍；

优选地，所述固液分离包括过滤和离心分离；

优选地，所述过滤采用滤网进行过滤，所述滤网的孔径为0.2-0.75mm；

优选地，所述离心分离采用碟式离心机进行离心分离。

作为上述技术方案的进一步改进，在进行所述酶解之前还包括：使用pH调节剂将所述混合液的pH值调节为4.0-6.0；优选地，所述pH调节剂包括醋酸。

作为上述技术方案的进一步改进，所述酶解过程中温度为40-50℃；

优选地，所述酶解的时间为1-3h；

优选地，所述纤维素酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的2-3％；所述纤维素酶的酶活力≥5万u/g；

优选地，所述酶还包括半纤维素酶和木聚糖酶中的至少一种；

优选地，所述半纤维素酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的1-2％，所述半纤维素酶的酶活力≥10万u/g；

优选地，所述木聚糖酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的0.1-0.2％，所述木聚糖酶的酶活力≥40万u/g。

作为上述技术方案的进一步改进，所述干燥之前还包括将所述堇叶碎米荠酶解液进行浓缩；

优选地，所述浓缩采用膜分离浓缩方式；可选地，所述膜分离浓缩方式为超滤膜浓缩；

优选地，所述超滤膜浓缩采用的超滤膜为1000-10000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1-20nm；

优选地，所述超滤膜浓缩过程中温度为15-25℃，膜压力为0.3-0.8MPa。

作为上述技术方案的进一步改进，所述浓缩过程包括：先将所述堇叶碎米荠酶解液经第一次超滤膜浓缩后，得到第一浓缩液；然后向所述第一浓缩液中加水后进行第二次超滤膜浓缩，得到第二浓缩液；

优选地，分2-4次向所述第一浓缩液中加水；

优选地，向所述第一浓缩液中加水的总量为所述第一浓缩液的体积的2-3倍；

优选地，在进行所述浓缩之前还包括：采用微滤膜对所述堇叶碎米荠酶解液进行过滤；

优选地，所述微滤膜为200000-800000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为0.1-10μm；

优选地，所述微滤膜过滤过程中温度为15-25℃，膜压力为0.08-0.12MPa。

作为上述技术方案的进一步改进，所述干燥采用喷雾干燥；

优选地，所述喷雾干燥过程中：进风温度为165～175℃，出风温度为70～75℃。

本发明还提供了一种由上述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白。

本发明还提供了一种由上述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白在食品中的应用。

本发明的有益效果：

(1)本发明通过采用包括纤维素酶在内的酶酶解提取堇叶碎米荠中硒蛋白，不仅不会破坏堇叶碎米荠中的营养成分，酶解提取硒蛋白的效率高，而且硒蛋白的得率较高，硒蛋白中蛋白质含量高，以及总硒的含量高并全部为有机硒，经形态分析检测得到的堇叶碎米荠硒蛋白中的硒的形态以硒代胱氨酸和L-硒甲基硒代半胱氨酸为主的有机硒形态存在；另外该提取方法简单、高效，成本低，环保，且易于大规模工业化生产。

(2)进一步地，本发明通过采用木聚糖酶和或半纤维素酶将酶解液中大分子多糖酶解成小分子糖和单糖，再进一步采用膜分离浓缩方式能够有效将酶解后的小分子糖类和其它小分子物质分离出去，得到浓度更高纯度更高的浓缩水溶性硒蛋白，进而得到纯度更高的硒蛋白粉。

为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，作详细说明如下。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对本发明范围的限定。

图1为五种硒形态标准样品发热色谱图；

图2为本发明实施例1得到的水溶性硒蛋白粉末中的硒形态色谱图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面结合实施例的方式对本发明的技术方案做详细说明，在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。

但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

如本文所用之术语：

“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。

“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。

本发明提供一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，包括：

采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解，得到堇叶碎米荠酶解液；

将上述堇叶碎米荠酶解液进行干燥。

进一步地，上述采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解提取过程包括：

提供堇叶碎米荠粉，将堇叶碎米荠粉和溶剂混合得到混合液；

将包括纤维素酶(食品级)在内的酶和上述混合液混合进行酶解，然后进行固液分离，液体即为堇叶碎米荠酶解液。

优选地，上述纤维素酶的用量为堇叶碎米荠粉的总质量的2-3％；且纤维素酶的酶活力≥5万u/g。

需要说明的是，纤维素酶能够有效促进堇叶碎米荠细胞壁溶解，细胞壁溶解后会释放出蛋白质和多糖。上述通过采用包括纤维素酶在内的酶酶解提取堇叶碎米荠中硒蛋白，无需高温条件，不仅不会破坏堇叶碎米荠中的营养成分，而且硒蛋白的得率较高，硒蛋白中蛋白质含量高，以及总硒的含量高并全部为有机硒，经形态分析检测得到的堇叶碎米荠硒蛋白中的硒的形态以硒代胱氨酸和L-硒甲基硒代半胱氨酸为主的有机硒形态存在；另外该提取方法简单、高效，成本低，不会产生高盐污水等污染物，更环保，且易于大规模工业化生产。

优选地，上述溶剂为水；且水的用量为堇叶碎米荠粉的总质量的20-30倍。

优选地，上述固液分离过程包括过滤和离心分离；

上述过滤可采用滤网过滤，且滤网的孔径为0.2-0.75mm，通过该初步过滤分离酶解提取后得到的提取液和渣。上述离心优选采用碟式离心机进行进一步对过滤得到的提取液进行固液分离，取离心液。需要说明的是，碟式离心机是一边进料一边排渣，循环式的；优选地，离心过程中:进料速度0.8-1t/h，碟式离心机转速为6700-7000r/min，排渣时间2-3s，排渣周期3-5min，冲洗时间2-3s。

进一步地，在进行所述酶解之前还包括：使用pH调节剂将所述混合液的pH值调节为4.0-6.0；优选地，该pH调节剂包括醋酸(食品级)。

进一步地，上述酶解过程中温度为40-50℃，酶解时间为1-3h，不仅条件温和，而且酶解提取效率更高。

优选地，所述酶还包括半纤维素酶(食品级)和木聚糖酶(食品级)中的至少一种，半纤维素酶和木聚糖酶用于进一步将酶解液中得到的大分子多糖酶解成小分子糖和单糖。

上述半纤维素酶的用量为堇叶碎米荠粉的总质量的1-2％；且半纤维素酶的酶活力≥40万u/g。

上述木聚糖酶的用量为堇叶碎米荠粉的总质量的0.1-0.2％；且木聚糖酶的酶活力≥10万u/g。

进一步地，在进行上述干燥之前还包括将上述堇叶碎米荠酶解液进行浓缩。

优选地，上述浓缩采用膜分离浓缩方式，能够有效将酶解后的小分子糖类和其它小分子物质分离出去，得到浓度更高纯度更高的浓缩水溶性硒蛋白，且保证所要得到的硒蛋白的结构不被破坏。而采用其它浓缩方式如凝胶分离浓缩法成本高昂，高温蒸发浓缩法会导致蛋白质变性，等电点沉降法会带来高盐污水等问题。

可选地，所述膜分离浓缩方式为超滤膜浓缩，且采用的超滤膜优选为1000-10000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1-20nm。

优选地，上述超滤膜浓缩过程中温度为15-25℃，膜压力为0.3-0.8MPa。

优选地，上述浓缩过程包括：先将上述堇叶碎米荠酶解液经第一次超滤膜浓缩后，得到第一浓缩液；然后分2-4次向第一浓缩液中加水后进行第二次超滤膜浓缩，得到第二浓缩液。

优选地，上述加水的总量为第一浓缩液的体积的2-3倍。

进一步地，在进行所述浓缩之前还包括：采用微滤膜对上述堇叶碎米荠酶解液进行过滤，主要用于过滤除掉堇叶碎米荠酶解液中一些肉眼看不见的粉尘，起澄清作用，另外还能除掉细菌、色素和大分子的胶体，起除菌及其它杂质的作用。

优选地，上述微滤膜为200000-800000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为0.1-10μm。

优选地，上述微滤膜过滤过程中温度为15-25℃，膜压力为0.08-0.12MPa。

优选地，所述干燥采用喷雾干燥；且喷雾干燥过程中：进风温度为165～175℃，出风温度为70～75℃，不仅干燥效果好，且进一步确保得到的硒蛋白的结构不会被破坏。

本发明还提供了一种由上述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白。

本发明还提供了一种由上述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白在食品中的应用。

下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

(1)取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)，加75L的纯净水，得到混合液用食品级醋酸调节pH为5.0，加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，搅拌酶解2h，并通过恒温水浴保持酶解过程中温度为50℃，其中，纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶用量分别为90g、30g和3g；然后对酶解后的混合物用滤板进行过滤，得到的滤液继续使用碟式离心机进行离心分离，收集离心液；该离心过程中，进料速度0.8t/h，碟式离心机转速为6800r/min，排渣时间3s，排渣周期5min，冲洗时间3s。

(2)将步骤(1)得到的离心液过微滤膜，微滤膜为400000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1μm，膜压力为0.1MPa，温度为20℃，收集透过液；然后使用超滤膜浓缩罐对透过液进行浓缩，超滤膜为1000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1nm，膜压力为0.5MPa，温度为25℃，得到第一浓缩液，再用第一浓缩液体积的3倍的纯净水分两次加入超滤膜浓缩罐中继续浓缩，得到第二浓缩液。

(3)将步骤(2)得到的第二浓缩液送入喷雾塔进行喷雾干燥，得到水溶性硒蛋白粉末；其中，喷雾干燥过程中：进风温度为170℃，出风温度为70℃。

实施例2

(1)取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)，加60L的纯净水，得到混合液用食品级醋酸调节pH为4.0，加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，搅拌酶解1h，并通过恒温水浴保持酶解过程中温度为45℃，其中，纤维素酶和木聚糖酶用量分别为75g、45g和4.5g；然后对酶解后的混合物用滤板进行过滤，得到的滤液继续使用碟式离心机进行离心分离，收集离心液；该离心过程中，进料速度1t/h，碟式离心机转速为7000r/min，排渣时间2s，排渣周期4min，冲洗时间2s。

(2)将步骤(1)得到的离心液过微滤膜，微滤膜为400000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1μm，膜压力为0.1MPa，温度为25℃，收集透过液；然后使用超滤膜浓缩罐对透过液进行浓缩，超滤膜为1000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1nm，膜压力为0.5MPa，温度为25℃，得到第一浓缩液，再用第一浓缩液体积的3倍的纯净水分两次加入超滤膜浓缩罐中继续浓缩，得到第二浓缩液。

(3)将步骤(2)得到的第二浓缩液送入喷雾塔进行喷雾干燥，得到水溶性硒蛋白粉末；其中，喷雾干燥过程中：进风温度为170℃，出风温度为70℃。

实施例3

(1)取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)，加90L的纯净水，得到混合液用食品级醋酸调节pH为6.0，加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，搅拌酶解3h，并通过恒温水浴保持酶解过程中温度为40℃，其中，纤维素酶和木聚糖酶用量分别为60g、60g和6g；然后对酶解后的混合物用滤板进行过滤，得到的滤液继续使用碟式离心机进行离心分离，收集离心液；该离心过程中，进料速度0.8t/h，碟式离心机转速为6700r/min，排渣时间2s，排渣周期3min，冲洗时间2s。

(2)将步骤(1)得到的离心液过微滤膜，微滤膜为400000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1μm，膜压力为0.1MPa，温度为25℃，收集透过液；然后使用超滤膜浓缩罐对透过液进行浓缩，超滤膜为1000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1nm，膜压力为0.5MPa，温度为15℃，得到第一浓缩液，再用第一浓缩液体积的3倍的纯净水分两次加入超滤膜浓缩罐中继续浓缩，得到第二浓缩液。

(3)将步骤(2)得到的第二浓缩液送入喷雾塔进行喷雾干燥，得到水溶性硒蛋白粉末；其中，喷雾干燥过程中：进风温度为170℃，出风温度为70℃。

实施例4

(1)取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)，加75L的纯净水，得到混合液用食品级醋酸调节pH为5.0，加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，搅拌酶解1h，并通过恒温水浴保持酶解过程中温度为50℃，其中，纤维素酶和木聚糖酶用量分别为60g、60g和3g；然后对酶解后的混合物用滤板进行过滤，得到的滤液继续使用碟式离心机进行离心分离，收集离心液；该离心过程中，进料速度1t/h，碟式离心机转速为7000r/min，排渣时间3s，排渣周期5min，冲洗时间3s。

(2)将步骤(1)得到的离心液过微滤膜，微滤膜为400000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1μm，膜压力为0.1MPa，温度为20℃，收集透过液；然后使用超滤膜浓缩罐对透过液进行浓缩，超滤膜为1000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1nm，膜压力为0.5MPa，温度为25℃，得到第一浓缩液，再用第一浓缩液体积的3倍的纯净水分两次加入超滤膜浓缩罐中继续浓缩，得到第二浓缩液。

(3)将步骤(2)得到的第二浓缩液送入喷雾塔进行喷雾干燥，得到水溶性硒蛋白粉末；其中，喷雾干燥过程中：进风温度为170℃，出风温度为70℃。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于：将“加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，及纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶用量分别为90g、30g和3g”替换为“加入纤维素酶，及纤维素酶的用量为90g”，其它同实施例1。

实施例6

本实施例与实施例1的区别在于：将“加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，及纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶用量分别为90g、30g和3g”替换为“加入纤维素酶和半纤维素酶，及纤维素酶和半纤维素酶的用量分别为90g和30g”，其它同实施例1。

实施例7

本实施例与实施例1的区别在于：将“加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，及纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶用量分别为90g、30g和3g”替换为“加入纤维素酶和木聚糖酶，及纤维素酶和木聚糖酶的用量为90g和3g”，其它同实施例1。

实施例8

本实施例与实施例1的区别在于：将“取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)”替换为“取50kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：1000mg/kg)”，其它同实施例1。

实施例9

本实施例与实施例1的区别在于：将“取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)”替换为“取500kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：1000mg/kg)”，其它同实施例1。

对比例1

本对比例1与实施例1的区别在于：不加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，其它同实施例1。

对比例2

本对比例2与实施例2的区别在于：不加入纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，其它同实施例2。

对比例3

本对比例3与实施例1的区别在于：将步骤(2)替换为：采用15％氢氧化钠溶液调离心液pH＝9.0，静置沉降2h，然后用蝶式离心机离心，收集离心后的沉淀物；该离心过程中，进料速度1t/h，碟式离心机转速为7000r/min，排渣时间3s，排渣周期5min，冲洗时间3s；将步骤(3)中的“第二浓缩液替换”为“沉淀物”；其它同实施例1。

对比例4

本对比例4与实施例1的区别在于：将步骤(2)替换为：采用减压真空浓缩离心液，其中浓缩温度为60℃，压力为0.08MPa；然后向得到的浓缩液中加入无水乙醇，使醇沉浓度达70wt％，搅拌均匀，静置4h，使用自吸泵吸出上清液，剩下的浑浊液使用三角离心机以800rpm的转速离心5min，收集沉淀物；将步骤(3)中的“第二浓缩液替换”为“沉淀物”；其它同实施例1。

对比例5

取3kg堇叶碎米荠粉(总硒含量：500mg/kg)，采用现有的热酸溶液浸提法然后喷雾干燥提取得到含硒蛋白的粉末。

通过称量实施例1-9及对比例1-5得到的产物硒蛋白的质量，计算产物硒蛋白得率(即产物硒蛋白的质量与原料堇叶碎米荠粉的质量的百分比)的；以及检测实施例1-9及对比例1-5得到的产物硒蛋白中蛋白质含量、总硒含量及无机硒含量(蛋白质含量、总硒含量、无机硒含量和硒形态分析检测分别按GB 2009.5-2016中第一法、GB 2009.93-2017中第一法、DBS42-010-2018中第一法检测、链霉蛋白酶酶解配合HPLC-ICP-MS检测)，结果如下表1、图1和图2所示。

表1

需要说明的是，上述堇叶碎米荠粉中总硒含量为每千克堇叶碎米荠粉中的总硒含量；而产物硒蛋白中总硒含量为每千克产物硒蛋白中的总硒含量。上述对比例5采用现有的热浸提法得到的含硒蛋白的产物中含有其它总含量占比较大的成分如多糖等，而且含有无机硒。

图1所示为五种硒形态标准样品色谱图，其中1代表硒代胱氨酸，2代表L-硒甲基-硒代半胱氨酸，3代表硒代蛋氨酸，4代表四价硒，5代表六价硒；图2所示为本发明实施例1得到的水溶性硒蛋白粉末中的硒形态色谱图；需要说明的是，本发明实施例2-9得到的水溶性硒蛋白粉末中的硒形态色谱图基本同该实施例1的硒形态色谱图；由图1及图2表明本发明得到的水溶性硒蛋白粉末中含硒代胱氨酸和L-硒甲基-硒代半胱氨酸为主的有机硒形态。

由上表1结果可得出，通过采用本发明实施例的提取方法得到的硒蛋白的得率达到7.27％以上，且得到的硒蛋白中蛋白质含量高，以及总硒的含量高且全部为有机硒，达到了行业的领先水平。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本发明的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (8)

1.一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，包括：

采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解，得到堇叶碎米荠酶解液；

将所述堇叶碎米荠酶解液进行干燥；

所述干燥之前还包括将所述堇叶碎米荠酶解液进行浓缩；

所述浓缩采用膜分离浓缩方式；所述膜分离浓缩方式为超滤膜浓缩；

所述超滤膜浓缩采用的超滤膜为1000-10000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为1-20nm；

所述超滤膜浓缩过程中温度为15-25℃，膜压力为0.3-0.8MPa；

所述浓缩过程包括：先将所述堇叶碎米荠酶解液经第一次超滤膜浓缩后，得到第一浓缩液；然后向所述第一浓缩液中加水后进行第二次超滤膜浓缩，得到第二浓缩液；

分2-4次向所述第一浓缩液中加水；

向所述第一浓缩液中加水的总量为所述第一浓缩液的体积的2-3倍；

在进行所述浓缩之前还包括：采用微滤膜对所述堇叶碎米荠酶解液进行过滤；

所述微滤膜为200000-800000Da分子量的中空纤维膜，膜孔径为0.1-10μm；

所述微滤膜过滤过程中温度为15-25℃，膜压力为0.08-0.12MPa。

2.如权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，所述采用包括纤维素酶在内的酶对堇叶碎米荠进行酶解过程包括：

提供堇叶碎米荠粉，将所述堇叶碎米荠粉和溶剂混合得到混合液；

将包括纤维素酶在内的酶和所述混合液混合进行酶解，然后进行固液分离，液体即为堇叶碎米荠酶解液。

3.如权利要求2所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，所述溶剂包括水；

所述水的用量为所述堇叶碎米荠粉的总质量的20-30倍；

所述固液分离包括过滤和离心分离；

所述过滤采用滤网进行过滤，所述滤网的孔径为0.2-0.75mm；

所述离心分离采用碟式离心机进行离心分离。

4.如权利要求2所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，在进行所述酶解之前还包括：使用pH调节剂将所述混合液的pH值调节为4.0-6.0；所述pH调节剂为醋酸。

5.如权利要求1所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，所述酶解过程中温度为40-60℃；

所述酶解的时间为1-3h；

所述纤维素酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的2-3％；所述纤维素酶的酶活力≥5万u/g；

所述酶还包括半纤维素酶和木聚糖酶中的至少一种；

所述半纤维素酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的1-2％，所述半纤维素酶的酶活力≥10万u/g；

所述木聚糖酶的用量为所述堇叶碎米荠的总质量的0.1-0.2％，所述木聚糖酶的酶活力≥40万u/g_。

6.如权利要求1-5任一项所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法，其特征在于，所述干燥采用喷雾干燥；

所述喷雾干燥过程中：进风温度为165～175℃，出风温度为70～75℃。

7.一种由权利要求1-6任一项所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白。

8.一种由权利要求1-6任一项所述的堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法得到的硒蛋白在食品中的应用。

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