CN112512592A - 喜树碱缀合物 - Google Patents

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Abstract

描述了喜树碱化合物的抗体缀合物，以及使用和制备方法。

Description

喜树碱缀合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年6月7日提交的美国临时专利申请序列号62/681,847和2018年12月10日提交的美国临时专利申请序列号62/777,491的优先权权益，两者均出于所有目的通过引用整体并入本文。
背景技术
针对向肿瘤细胞靶向递送细胞毒素剂研究了抗体(mAb)。虽然已评估了各种药物类别通过抗体的靶向递送，但只有少数几个药物类别被证明作为抗体药物缀合物是足够活性的，同时具有合适的毒性特性和其他药理性质，以保证临床开发。受到关注的一种药物类别是喜树碱。
抗体药物缀合物(ADC)的设计是通过通常经由连接子将细胞毒素剂与抗体连接，其涉及对多种因素的考虑，包括药物上用于与连接子连接的缀合柄的存在和用于以条件稳定的方式连接药物到抗体的连接子技术。该类别中母体化合物的缀合柄是C20羟基官能团，其中连接子通过碳酸酯官能团连接(例如参见Walker,M.A.等Bioorganic&MedicinalChemistry Letters(2002)12(2):217-219)。然而，碳酸酯官能团通常遭受水解不稳定性，这引起游离药物过早释放到体循环中，这可能导致ADC功效降低、缀合物的免疫特异性不足以及毒性增加。因此，本领域中存在对具有改进的稳定性以增加递送至期望作用部位的药物量的喜树碱缀合物的需要。本发明解决了那些和其他需求。
发明概述
本发明特别提供了喜树碱缀合物、喜树碱-连接子化合物和喜树碱化合物、制备和使用它们的方法及其中间体。本发明的喜树碱缀合物在循环中是稳定的，但一旦在肿瘤细胞附近或内部自缀合物释放出游离药物就能够造成细胞死亡。
在一个主要的实施方案中，提供了一种具有下式的喜树碱缀合物或其盐：
L-(Q-D)p
其中
L为配体单元；
下标p是1-16的整数；
Q为具有选自以下的式的连接子单元：
-Z-A-,-Z-A-RL-,-Z-A-RL-Y-,-Z-A-S*-RL-,-Z-A-S*-RL-Y-,
Z-A-S*-W-,-Z-A-S*-W-RL-,-Z-A-B(S*)-RL-,-Z-A-B(S*)-W-,
-Z-A-B(S*)-W-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-,
其中Z为延伸子(Stretcher)单元，
A为键或接头(Connecter)单元；
B为并行(Parallel)接头单元；
S*为分配剂(Partitioning Agent)；
RL为可释放连接子；
W为氨基酸单元；
Y为间隔子(Spacer)单元；和
D为选自以下的药物单元：
Figure BDA0002922313000000031
其中
RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；
RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；
RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和
其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；并且
其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一个时，D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7上存在的羟基或伯胺或仲胺官能团中的任一个的杂原子，或
其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的内酯环中羟基取代基的氧原子；和
条件是当连接点是CPT6伯氨基或仲氨基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，
条件是当D是具有通过其伯氨基的氮原子连接的CPT1时，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
如上所述的其他主要实施方案为可用作制备喜树碱缀合物的中间体的喜树碱-连接子化合物，其中所述喜树碱-连接子化合物由喜树碱和连接子单元(Q)构成，其中所述连接子单元由能够与提供配体单元的靶向配体形成共价键的延伸子单元前体(Z')和可释放连接子(RL)构成，该可释放连接子在Q不具有氨基酸单元的一些方面中是葡糖苷酸单元。
在另一个方面，本文提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用本文所述的喜树碱缀合物。
在另一个方面，本文提供了包含本文所述的喜树碱缀合物的试剂盒。
附图说明
图1A-1B显示在多发性骨髓瘤体外旁观者活动模型中基于葡糖醛酸的喜树碱ADC的评估。A.针对MM.1R(Ag5+)细胞系的抗Ag5喜树碱DAR8 ADC(Ag5-(67))剂量反应滴定。通过CellTitre-GloTM评估生存力。B.MM.1R和MM.1R Ag5 KO(crispr cas敲除)luc+细胞系的3：1共培养混合物的抗Ag5喜树碱DAR8 ADC(Ag5-(67))剂量反应滴定。通过Bright-GloTM评估生存力。
图2显示小鼠血浆中ADC稳定性研究的结果。A.喜树碱DAR8 ADC在小鼠血浆(BalbC)中于37摄氏度下孵育。在6h、24h、72h和7天取样血浆。用IgSelect从血浆分离ADC，用PNGase去糖基化并用二硫苏糖醇还原。通过PLRP-MS评估ADC重链和轻链以量化每个时间点的药物载量。
图3显示具有抗Ag4喜树碱DAR4 ADC((Ag4-(67))的786O肾细胞癌皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积图。动物移植有786O细胞。在第7天，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用3和10mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图4显示用抗Ag2喜树碱DAR4 ADC(Ag2-(67))处理的霍奇金淋巴瘤的L540cy皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积图。动物移植有L540cy细胞。7天后，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用3mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图5显示用喜树碱ADC处理的Karpas 299/Karpas299-BVR间变性大细胞淋巴瘤旁观者皮下异种移植肿瘤模型的结果。该图显示针对抗Ag2喜树碱DAR4 ADC(Ag2-(67))和非结合DAR4 ADC(h00-(67))的平均肿瘤体积。动物移植有Ag2(+)Karpas299和Ag2(-)Karpas299-耐本妥昔单抗(Karpas299-BVR)细胞的1:1混合物。8天后，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用3、10和30mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。非结合h00喜树碱ADC的剂量为30mg/Kg。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图6显示使用葡糖醛酸喜树碱DAR4 ADC的caki-1肾细胞癌皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积。通过套管针将动物移植有固体caki-1肿瘤。在第13天，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用10和30mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图7显示使用葡糖醛酸喜树碱DAR4 ADC的786O肾细胞癌皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积。动物移植有786O细胞。在第7天，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用10mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图8显示用抗Ag2和非结合h00葡糖醛酸喜树碱ADC处理的霍奇金淋巴瘤的L540cy皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积图。动物皮下移植有L540cy细胞。7天后，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后分别用10和30mg/kg的Ag2-(58)或Ag2-(61)DAR4喜树碱ADC处理q4dx3。相应的非结合h00 ADC的剂量为30mg/Kg q4dx3。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图9显示Sprague-Dawley大鼠中h00 mAb和h00-喜树碱ADC的药代动力学曲线。向大鼠注射1mg/kg的亲本非结合人源化抗体(h00)或h00-(67)DAR8喜树碱ADC。处理来自预定抽血的样品，并通过生物素缀合的鼠抗人轻链κmAb和链霉亲和素包被的磁珠从血浆捕获h00亲本抗体和ADC。使用AF647-抗人κ检测试剂通过ELISA定量h00抗体和ADC。
图10显示在Del-BVR(耐本妥昔单抗，MDR+)异种移植模型中葡糖醛酸喜树碱DAR8ADC的平均肿瘤体积图。将动物皮下移植有Del-BVR细胞。4天后，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，并用单剂量喜树碱DAR8 ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图11显示使用DAR4葡糖醛酸喜树碱ADC的Caki-1肾细胞癌皮下小鼠异种移植模型的平均肿瘤体积图。动物移植有Caki-1细胞。在第11天，将动物分类为平均肿瘤大小为100mm3的组，然后用10mg/Kg的单剂量喜树碱ADC处理。在研究过程中评估动物的肿瘤大小和生命体征。
图12是显示裸鼠RCC异种移植模型中所选喜树碱ADC的活性的图。
图13是阐明小鼠模型中所选喜树碱ADC的血浆稳定性的图和表。
图14显示用喜树碱ADC处理的Karpas 299/Karpas299-BVR间变性大细胞淋巴瘤旁观者皮下异种移植肿瘤模型的其他结果。
图15显示喜树碱缀合物的预料不到的稳定性，其中缀合通过取代内酯环的C20羟基进行。
发明详述
定义
除非另有说明，否则本文所用的以下术语和表述旨在具有以下含义。当在本文中使用商品名时，除非上下文另有指出，否则该商品名包括商品名产品的产品配方、通用名药物和活性药物成分。
如本文所用，术语“抗体”在最广义上使用并具体涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和表现出所需生物活性的抗体片段。抗体的天然形式为四聚体并由两个相同的免疫球蛋白链对构成，每个对具有一条轻链和一条重链。在每个对中，轻链和重链可变区(VL和VH)一起主要负责与抗原的结合。轻链和重链可变结构域由被三个高变区(也称为“互补决定区”或“CDR”)中断的框架区构成。恒定区可被免疫系统识别并与之相互作用。(参见例如Janeway等,2001,Immunol.Biology,第5版,Garland Publishing,New York)。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的。抗体可源自任何合适的物种。在一些实施方案中，抗体是人源或鼠源的。抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上均质性的抗体群体(即，除可少量存在的可能的自然发生的突变外构成该群的各个抗体均相同)获得的抗体。单克隆抗体具有高度特异性，针对的是单个抗原位点。修饰语“单克隆”说明抗体从基本上均质性的抗体群体获得这一特征，而不应理解为需要通过任何特定的方法产生抗体。
如与抗体类别相适应，“完整抗体”是包含抗原结合可变区以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域CH1、CH2、CH3和CH4的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，包含其抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双链抗体、三链抗体、四链抗体、线性抗体、单链抗体分子、scFv、scFv-Fc、由一个或多个抗体片段形成的多特异性抗体片段、由Fab表达文库产生的一个或多个片段、或上述任何一个的表位结合片段，所述表位结合片段与靶抗原(例如，癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)免疫特异性结合。
“抗原”是抗体特异性结合的实体。
术语“特异性的结合”和“特异性地结合”是指抗体或抗体衍生物将以高度选择性的方式与其靶抗原的相应表位结合而不与多种其他抗原结合。通常，抗体或抗体衍生物以至少约1x10-7 M、优选地10-8M至10-9M、10-10M、10-11M或10-12M的亲和力结合，并以比其与预定的抗原或紧密相关的抗原之外的非特异性抗原(例如，BSA、酪蛋白)结合的亲和力大至少两倍的亲和力与预定的抗原结合。
术语“抑制”或“…的抑制”指的是减少可测量的量或完全防止。
术语“治疗有效量”是指在哺乳动物中有效治疗疾病或病症的缀合物的量。就癌症而言，治疗有效量的缀合物可以减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减慢并优选停止)癌细胞向周围器官中的浸润；抑制(即在一定程度上减慢并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解伴随癌症的一种或多种症状。在药物可抑制生长和/或杀伤现有癌细胞的程度上，其可以是细胞抑制的和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，可例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定缓解率(RR)来衡量功效。
术语“基本”或“基本上”是指混合物或样品群体的大多数，即>50％，优选超过群体的50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
术语“细胞毒性活性”是指药物或喜树碱缀合物或喜树碱缀合物的细胞内代谢物的细胞杀伤作用。细胞毒性活性可以以IC50值表示，该值为一半细胞存活的单位体积浓度(摩尔或质量)。
术语“细胞抑制活性”是指药物或喜树碱缀合物或喜树碱缀合物的细胞内代谢物的抗增殖作用。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指具有细胞毒性活性并导致细胞破坏的物质。该术语旨在包括化疗剂和毒素如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其合成类似物和衍生物。
如本文所用，术语“细胞抑制剂”是指抑制细胞功能的物质，包括抑制细胞生长或增殖的物质。细胞抑制剂包括抑制剂如蛋白质抑制剂，例如酶抑制剂。细胞抑制剂具有细胞抑制活性。
术语“癌症”和“癌”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长失控为特征的生理状况或病症。“肿瘤”包含一个或多个癌细胞。
如本文所用，“自身免疫疾病”是指源自或针对个体自身组织或蛋白质的疾病或病症。
如本文所用，“患者”是指施用本发明的喜树碱缀合物的受试者。患者包括但不限于人、大鼠、小鼠、豚鼠、非人灵长类动物、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和禽类。通常，患者为大鼠、小鼠、狗、人或非人灵长类动物，更通常为人。
除非上下文另有指出，否则术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗和预防性治疗，其中目的在于抑制或减慢(减轻)不希望的生理变化或病症，如癌症的发展或扩散。就本发明的目的而言，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病状态的稳定化(即，不恶化)、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和、及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。与未接受治疗的预期生存期相比，“治疗”还可能意味着生存期延长。需要治疗的那些包括已经患上该疾病或病症的那些以及容易患上该疾病或病症的那些。
在癌症的范畴内，术语“治疗”包括以下中的任何或全部：杀伤肿瘤细胞；抑制肿瘤细胞、癌细胞或肿瘤的生长；抑制肿瘤细胞或癌细胞的复制；减轻总体肿瘤负荷或减少癌细胞的数量；和改善伴随疾病的一种或多种症状。
在自身免疫疾病的范畴内，术语“治疗”包括以下中的任何或全部：抑制与自身免疫疾病状态相关的细胞的复制，包括但不限于产生自身免疫抗体的细胞；减轻自身免疫抗体负荷和改善自身免疫疾病的一种或多种症状。
本文所用的术语“化合物”是指并涵盖用结构命名或表示的化合物本身及其盐形式，无论是否明确说明，除非上下文明确表明将此类盐形式被排除。术语“化合物”还涵盖化合物的溶剂化物形式，其中溶剂与化合物非共价结合或与化合物可逆地共价结合，如当化合物的羰基被水合以形成偕二醇时。溶剂化物形式包括化合物本身的形式及其盐形式，并且包括半溶剂化物、单溶剂化物、二溶剂化物，包括水合物；当化合物可以与两个或更多个溶剂分子结合时，两个或更多个溶剂分子可以相同或不同。
在某些情况下，本发明的化合物将包括一种或多种上述形式的明确提及，例如盐和溶剂化物，这不隐含化合物的任何固态形式。然而，该提及仅是为了强调，并且不应被解释为排除以上鉴定的任何其他形式。此外，当未明确提及化合物或配体药物缀合物组合物的盐和/或溶剂化物形式时，省略不应解释为排除化合物或缀合物的盐和/或溶剂化物形式，除非上下文明确指出排除这种盐和/或溶剂化物形式。
本文所使用的短语“其盐”是指化合物(例如，药物、药物连接子化合物或配体药物缀合物化合物)的盐形式。化合物的盐形式是一种或多种内部盐形式和/或涉及包含另一分子如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他抗衡离子。化合物的盐形式的抗衡离子通常是稳定母体化合物上电荷的有机或无机部分。化合物的盐形式在其结构中具有一个或多个带电原子。在多个带电原子是盐形式的一部分的情况下，存在多个抗衡离子和/或多个带电抗衡离子。因此，化合物的盐形式通常具有一个或多个对应于化合物的非盐形式的那些的带电原子和一个或多个抗衡离子。在一些方面，化合物的非盐形式包含至少一个氨基或其他碱性部分，并且因此在酸存在下获得具有碱性部分的酸加成盐。在其他方面，化合物的非盐形式包含至少一个羧酸基团或其他酸性部分，并且因此在碱存在下获得羧酸盐或其他阴离子部分。示例性的盐包括但不限于硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸酯、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1’-亚甲基双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。
药学上可接受的盐是化合物的盐形式，其适合于向本文所述的受试者施用，并且在一些方面，包括如P.H.Stahl和C.G.Wermuth编者,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use,Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA,2002所述的抗衡阳离子或抗衡阴离子。
连接子单元为在喜树碱缀合物中将喜树碱与配体单元相连的双官能部分。本发明的连接子单元具有若干组分(例如，在一些实施方案中将具有碱性单元的延伸子单元；可存在或不存在的接头单元；也可存在或不存在的并行接头单元；可释放连接子；以及也可存在或不存在的间隔子单元)。
如本文所用，“PEG”、“PEG单元”或“聚乙二醇”为由重复的乙烯-氧基亚单元组成的有机部分并可以是多分散的、单分散的或离散的(即，具有离散数目的乙烯-氧基亚单元)。多分散PEG为大小和分子量的非均匀混合物，而单分散PEG通常是从非均匀混合物纯化的并因此具有单一的链长和分子量。优选的PEG单元是离散的PEG，其是以逐步的方式而非经由聚合过程合成的化合物。离散的PEG提供具有限定和指定链长的单一分子。
本文提供的PEG单元包含一个或多个聚乙二醇链，每个聚乙二醇链由一个或多个彼此共价连接的乙烯氧基亚单元构成。聚乙二醇链可例如以线形、支化或星形构型连接在一起。通常，在引入到喜树碱缀合物中之前，将至少一个聚乙二醇链在一端处用经亲电基团取代的烷基部分衍生化以与亚甲基氨基甲酸酯单元(即，代表R的一个实例)的氨基甲酸酯氮共价连接。通常，每个聚乙二醇链中未参与与连接子单元的其余部分的共价连接的末端乙烯氧基亚单元由PEG封端单元修饰，所述封端单元通常为任选被取代的烷基如–CH3、CH2CH3或CH2CH2CO2H。优选的PEG单元具有有着4至24个–CH2CH2O-亚单元的单一聚乙二醇链，这些亚单元串联地共价连接并在一端处由PEG封端单元终止。
除非另有指出，否则术语“烷基”本身或作为另一术语的一部分是指具有指定碳原子数的取代或未取代的直链或支链、饱和或不饱和烃(例如，“-C1-C8烷基”或“-C1-C10”烷基分别是指具有1至8或1至10个碳原子的烷基基团)。当未指定碳原子数时，烷基基团具有1至8个碳原子。代表性的直链“-C1-C8烷基”基团包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基和-正辛基；而支链–C3-C8烷基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基和-2-甲基丁基；不饱和的-C2-C8烷基包括但不限于-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己基、2-己基、-3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基和-3-甲基-1-丁炔基。有时烷基基团是未取代的。烷基基团可被一个或多个基团所取代。在其他方面，烷基基团将是饱和的。
除非另有指出，否则“亚烷基”本身或作为另一术语的一部分是指具有述及的碳原子数、通常1-10个碳原子并具有通过从母体烷烃的同一或两个不同的碳原子去除两个氢原子而得到的两个一价原子团中心的取代或未取代的饱和、支链或直链或环状烃原子团。典型的亚烷基原子团包括但不限于：亚甲基(CH2)、1,2-亚乙基(CH2CH2)、1,3-亚丙基(CH2CH2CH2)、1,4-亚丁基(CH2CH2CH2CH2)等。在优选的方面，亚烷基为支链或直链烃(即，其不是环状烃)。
除非另有指出，否则“芳基”本身或作为另一术语的一部分是指具有述及的碳原子数、通常6-20个碳原子的通过从母体芳族环系的单个碳原子去除一个氢原子而得到的取代或未取代的一价碳环状芳族烃原子团。一些芳基基团在示例性的结构中以“Ar”表示。典型的芳基基团包括但不限于衍生自苯、被取代的苯、萘、蒽、联苯等的原子团。示例性的芳基基团为苯基基团。
除非另有指出，否则“亚芳基”本身或作为另一术语的一部分是指具有两个共价键(即，其是二价的)并如下面的结构中所示可在邻位、间位或对位取向的如上所定义的芳基基团，以苯基作为示例性基团：
Figure BDA0002922313000000141
除非另有指出，否则“C3-C8杂环”本身或作为另一术语的一部分是指具有3至8个碳原子(也称为环成员)和一至四个独立选自N、O、P或S的杂原子环成员并通过从母体环系的环原子去除一个氢原子而得到的一价的取代或未取代的芳族或非芳族单环状或双环状环系。杂环中的一个或多个N、C或S原子可被氧化。包含杂原子的环可以是芳族的或非芳族的。其中所有环原子都涉及在芳香化合物结构中的杂环被称为杂芳基，否则被称为杂碳环。
除非另有指出，否则杂环在将产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧接基团连接。因此，杂芳基可通过其芳族环系的芳族碳键合，称为C-连接的杂芳基，或通过其芳族环系中的非双键N原子(即，非＝N-)键合，其被称为N-连接的杂芳基。因此，含氮杂环可以是C-连接的或N-连接的并包括吡咯部分，如吡咯-1-基(N-连接的)和吡咯-3-基(C-连接的)，以及咪唑部分，如咪唑-1-基和咪唑-3-基(两者都是N-连接的)及咪唑-2-基、咪唑-4-基和咪唑-5-基部分(它们都是C-连接的)。
除非另有指出，否则“C3-C8杂芳基”为芳族C3-C8杂环，其中下标表示该杂环的环状环系的碳总数或该杂芳基的芳族环系的芳族碳总数并且不暗示环系的大小或环稠合的存在与否。C3-C8杂环的代表性实例包括但不限于吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、吡咯基、噻吩基(噻吩)、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噻唑基和异噁唑基。
当明确给出时，杂环或杂芳基的环系的大小由环中原子的总数说明。例如，指定为5-或6-元杂芳基说明杂芳基的杂芳族环系中芳族原子的总数(即，5或6个)，但并不暗示该环系中芳族杂原子或芳族碳的数目。稠合的杂芳基被明确述及或由上下文如此暗示，并通常由稠合在一起构成稠合的杂芳族环系的每个芳族环中芳族原子的数目说明。例如，5,6-元杂芳基为与芳族6-元环稠合的芳族5-元环，其中一个或两个环具有一个或多个芳族杂原子或者其中在两个环之间共享杂原子。
通过与稠合环系的非芳族部分连接而与芳基或杂芳基稠合使得杂环保持非芳族并且是较大结构的一部分的杂环是任选被取代的杂环的一个实例，其中所述杂环被与芳基或杂芳基的环稠合所取代。同样，与通过与稠合环系的芳族部分连接而为较大结构的一部分的杂环或碳环稠合的芳基或杂芳基是任选被取代的芳基或杂环的一个实例，其中所述芳基或杂环被与杂环或碳环的环稠合所取代。
除非另有指出，否则“C3-C8杂环基(heterocyclo)”本身或作为另一术语的一部分是指其中杂环的氢原子之一被键替代的上文所定义C3-C8杂环状(heterocyclic)(即，其是二价的)。除非另有指出，否则“C3-C8亚杂芳基”本身或作为另一术语的一部分是指其中杂芳基基团的氢原子之一被键替代的上文所定义C3-C8杂芳基基团(即，其是二价的)。
除非另有指出，否则“C3-C8碳环”本身或作为另一术语的一部分为通过从母体环系的环原子去除一个氢原子而得到的3-、4-、5-、6-、7-或8-元的、一价的、被取代或未被取代、饱和或不饱和的非芳族单环状或双环状碳环状环。代表性的-C3-C8碳环包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、环庚基、1,3-环庚二烯基、1,3,5-环庚三烯基、环辛基和环辛二烯基。
除非另有指出，否则“C3-C8碳环基”本身或作为另一术语的一部分是指其中碳环基团的氢原子中的另一个被键替代的上文所定义C3-C8碳环基团(即，其是二价的)。
除非另有指出，否则术语“杂烷基”本身或与另一术语组合，除非另有述及，否则是指完全饱和或含1至3个不饱和度、由述及的碳原子数和一至十个、优选一至三个选自O、N、Si和S的杂原子组成的稳定的直链或支链烃或其组合，并且其中氮和硫原子可任选被氧化并且氮杂原子可任选被季铵化。一个或多个杂原子O、N和S可位于杂烷基基团的任何内部位置处或位于烷基基团与分子的其余部分连接的位置处。杂原子Si可位于杂烷基基团的任何位置处，包括烷基基团与分子的其余部分连接的位置。
实例包括–CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)-CH3、-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-O-CH3和–CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，如例如-CH2-NH-OCH3和–CH2-O-Si(CH3)3。通常，C1至C4杂烷基或亚杂烷基具有1至4个碳原子和1或2个杂原子，C1至C3杂烷基或亚杂烷基具有1至3个碳原子和1或2个杂原子。在一些方面，杂烷基和亚杂烷基是饱和的。
除非另有指出，否则术语“亚杂烷基”本身或与另一术语组合指的是衍生自杂烷基(如上文所讨论)的二价基团，例如–CH2-CH2-S-CH2-CH2-和–CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于亚杂烷基基团，杂原子也可占据链末端中的任一个或两个。还此外，对于亚烷基和亚杂烷基连接基团，不暗示连接基团的取向。
除非另有指出，否则“氨基烷基”本身或与另一术语组合指的是其中如本文所定义的烷基部分被氨基、烷基氨基、二烷基氨基或环烷基氨基基团所取代的杂烷基。示例性的非限制性氨基烷基有–CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CH2NHCH3和-CH2CH2N(CH3)2并还包括支化种类如呈(R)-或(S)-构型的–CH(CH3)NH2和-C(CH3)CH2NH2。或者，氨基烷基为如本文所定义的烷基部分、基团或取代基，其中除自由基碳外的sp3碳已被氨基或烷基氨基部分所替代，其中其sp3氮替代了烷基的sp3碳，条件是保留至少一个sp3碳。当将氨基烷基部分称为较大结构或另一个部分的取代基时，氨基烷基通过氨基烷基的烷基部分的碳自由基共价连接到该结构或部分。
除非另有指出，否则“烷基氨基”和“环烷基氨基”本身或与另一术语组合指的是如本文所述的烷基或环烷基原子团，其中所述烷基或环烷基原子团的自由基碳已被氮自由基所替代，条件是保留至少一个sp3碳。在其中烷基氨基在其氮处被另一个烷基部分取代的那些情况下，所得的被取代原子团有时被称为二烷基氨基部分、基团或取代基，其中取代氮的烷基部分是独立选择的。
示例性且非限制性的氨基、烷基氨基和二烷基氨基取代基包括具有–N(R’)2结构的那些，其中这些实例中的R’独立选自氢或C1-6烷基，通常氢或甲基，而在包含在杂环烷基中的环烷基胺中，两个R’和它们所连接至的氮一起限定杂环状环。当两个R’均为氢或烷基时，有时将该部分分别描述为伯氨基基团和叔胺基团。当一个R’为氢而另一个为烷基时，则该部分有时被描述为仲氨基基团。伯和仲烷基氨基部分作为亲核试剂对含羰基的亲电中心更具反应性，而叔胺则更碱性。
“被取代的烷基”和“被取代的芳基”分别是指其中一个或多个氢原子(通常一个)各自独立地被取代基所替代的烷基和芳基。典型的取代基包括但不限于-X、-R’、-OH、-OR’、-SR’、-N(R’)2、-N(R’)3、＝NR’、-CX3、-CN、-NO2、-NR’C(＝O)R’、-C(＝O)R’、-C(＝O)N(R’)2、-S(＝O)2R’、-S(＝O)2NR’、-S(＝O)R’、-OP(＝O)(OR’)2、-P(＝O)(OR’)2、-PO3 ＝、PO3H2、-C(＝O)R’、-C(＝S)R’、-CO2R’、-CO2 -、-C(＝S)OR’、-C(＝O)SR’、-C(＝S)SR’、-C(＝O)N(R’)2、-C(＝S)N(R’)2和-C(＝NR)N(R’)2，其中每个X独立地选自卤素：-F、-Cl、-Br和-I；并且其中每个R’独立地选自-H、-C1-C20烷基、-C6-C20芳基、-C3-C14杂环、保护基团和前药部分。
更通常地，取代基选自-X、-R’、-OH、-OR’、-SR’、-N(R’)2、-N(R’)3、＝NR’、-NR’C(＝O)R’、-C(＝O)R’、-C(＝O)N(R’)2、-S(＝O)2R’、-S(＝O)2NR’、-S(＝O)R’、-C(＝O)R’、-C(＝S)R’、-C(＝O)N(R’)2、-C(＝S)N(R’)2和-C(＝NR)N(R’)2，其中每个X独立地选自–F和-Cl，或者选自-X、-R’、-OH、-OR’、-N(R’)2、-N(R’)3、-NR’C(＝O)R’、-C(＝O)N(R’)2、-S(＝O)2R’、-S(＝O)2NR’、-S(＝O)R’、-C(＝O)R’、-C(＝O)N(R’)2、-C(＝NR)N(R’)2、保护基团和前药部分，其中每个X为–F；并且其中每个R’独立地选自氢、-C1-C20烷基、-C6-C20芳基、-C3-C14杂环、保护基团和前药部分。
在一些方面，烷基取代基选自-N(R’)2、-N(R’)3和-C(＝NR)N(R’)2，其中R’选自氢和-C1-C20烷基。在其他方面，烷基被一系列乙烯氧基部分取代而限定PEG单元。如上所述的亚烷基、碳环、碳环基、亚芳基、杂烷基、亚杂烷基、杂环、杂环基、杂芳基和亚杂芳基也可被类似地取代。
如本文所用，“保护基团”指的是防止或降低与其连接的原子或官能团参与不希望的反应的能力的部分。Greene(1999),“PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,第三版”,WileyInterscience中给出了原子或官能团的典型保护基团。在一些情况下使用针对杂原子如氧、硫和氮的保护基团来最大限度地减少或避免不希望的其与亲电化合物的反应。在其他情况下，使用保护基团来减少或消除无保护杂原子的亲核性和/或碱性。被保护的氧的非限制性实例由-ORPR给出，其中RPR为羟基的保护基团，其中羟基通常以酯(例如，乙酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)的形式被保护。羟基的其他保护基团将避免干扰有机金属试剂或其他高度碱性试剂的亲核性，其中羟基通常以醚的形式被保护，包括烷基或杂环烷基醚(例如，甲基或四氢吡喃基醚)、烷氧基甲基醚(例如，甲氧基甲基或乙氧基甲基醚)、任选被取代的芳基醚和甲硅烷基醚(例如，三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS/TBDMS)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)和[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]-甲基甲硅烷基(SEM))。氮保护基团包括针对伯胺或仲胺的那些，如在-NHRPR或-N(RPR)2-中，其中RPR中的至少一个为氮原子保护基团或两个RPR一起构成保护基团。
当某保护基团能够在分子中其他地方实现期望的化学转化所需的反应条件下以及在期望时纯化新形成的分子的过程中防止或避免不希望的副反应或保护基团的过早损失，并且可在不会不利地影响该新形成的分子的结构或立体化学完整性的条件下去除时，则该保护基团将是合适的。作为实例而非限制，合适的保护基团可包括前文针对保护官能团所描述的那些。合适的保护基团有时是在肽偶联反应中使用的保护基团。
“芳族醇”本身或作为较大结构的一部分是指被羟基官能团-OH取代的芳族环系。因此，芳族醇是指具有键合到其芳族环系的芳族碳的羟基官能团的任何如本文所述的芳基、杂芳基、亚芳基和亚杂芳基部分。当芳族醇的芳族环系是该部分的取代基时，该芳族醇可以是较大部分的一部分，或者可通过环稠合嵌入到较大部分中，并且可任选被如本文所述的部分所取代，包括一个或多个其他羟基取代基。酚醇是具有酚基团作为芳族环的芳香醇。
“脂族醇”本身或作为较大结构的一部分是指具有键合到羟基官能团-OH的非芳族碳的部分。带羟基的碳可未被取代(即，甲醇)，或者可具有一个、两个或三个任选被取代的支化或未支化烷基取代基而在线形或环状结构内限定伯醇、或者脂族仲或叔醇。当是较大结构的一部分时，醇可以是通过经带羟基的碳、经如本文所述的烷基或其他部分的碳键合到该带羟基的碳或经该烷基或其他部分的取代基取代该结构的取代基。脂族醇涵盖其中羟基官能团键合到其环状环系的非芳族碳上的非芳族环状结构(即，碳环和杂碳环，任选被取代)。
如本文所用，“芳基烷基”或“杂芳基烷基”是指其中芳基部分键合到烷基部分的取代基、部分或基团，即芳基-烷基-，其中烷基和芳基基团为如上所述，例如，C6H5-CH2-或C6H5-CH(CH3)CH2-。芳基烷基或杂芳基烷基通过其烷基部分的sp3碳与较大的结构或部分缀合。
如本文所用，“吸电子基团”指的是这样的官能团或电负性原子，其以感应方式和/或通过共振从其所键合的原子吸走电子密度，感应和共振中的任何一个都可以更占主导(即，官能团或原子可以以感应方式吸电子，但总体上可以是通过共振给电子的)，并往往稳定阴离子或富电子部分。吸电子效应通常以感应方式(虽然以衰减形式)传递到与键合原子连接的其他原子，键合原子已因吸电子基团(EWG)而缺电子，从而影响更远的反应中心的亲电性。示例性的吸电子基团包括但不限于-C(＝O)、-CN、-NO2、-CX3、-X、-C(＝O)OR’、-C(＝O)N(R’)2、-C(＝O)R’、-C(＝O)X、-S(＝O)2R’、-S(＝O)2OR’、-S(＝O)2NHR’、-S(＝O)2N(R’)2、-P(＝O)(OR’)2、-P(＝O)(CH3)NHR’、-NO、-N(R’)3 +，其中X为-F、-Br、-Cl或-I，并且在一些方面，R’在每次出现时独立地选自氢和C1-6烷基，以及某些如本文所述的O-连接部分如酰氧基。
示例性的EWG也可包括芳基基团(例如，苯基)，具体取决于取代和某些杂芳基基团(例如，吡啶)。因此，术语“吸电子基团”还包括被吸电子基团进一步取代的芳基或杂芳基。通常，芳基或杂芳基上的吸电子基团为-C(＝O)、-CN、-NO2、-CX3和–X，其中X独立地选自卤素，通常-F或-Cl。取决于其取代基，烷基部分也可以是吸电子基团。
“离去基团能力”涉及与喜树碱缀合物中的喜树碱相对应的含醇、含硫醇、含胺或含酰胺的化合物在缀合物内自消解(self-immolative)事件的激活后作为游离药物从缀合物释放的能力。该释放可能是可变的，而没有其喜树碱连接到的亚甲基氨基甲酸酯单元的益处(即，当喜树碱直接连接到自消解部分并且不具有插入的亚甲基氨基甲酸酯单元时)。良好的离去基团通常是弱碱，并且从这样的缀合物排出的官能团酸性越强，则缀合物碱越弱。因此，在未使用亚甲基氨基甲酸酯单元(即，其中喜树碱直接连接到自消解部分)的情况下，含醇、含硫醇、含胺或含酰胺的游离药物从喜树碱的离去基团能力将与从缀合物排出的药物官能团的pKa有关。因此，该官能团的较低pKa将增加其离去基团能力。尽管其他因素可能有助于游离药物从缀合物的释放而不具有亚甲基氨基甲酸酯的益处，但通常，具有有着较低pKa值的官能团的药物通常将比经由具有较高pKa值的官能团连接的药物是更好的离去基团。另一个考虑是，由于喜树碱经由自发水解的过早损失，故pKa值太低的官能团可能导致不可接受的活性特性。对于采用亚甲基氨基甲酸酯单元的缀合物，在自消解后会产生具有允许游离药物的高效释放的pKa值的通用官能团(即，氨基甲酸)，而不会遭受不可接受的喜树碱损失。
如本文所用，“琥珀酰亚胺部分”是指由琥珀酰亚胺环系组成的有机部分，其存在于一种类型的延伸子单元(Z)中，所述延伸子单元通常还包含键合到该环系的酰亚胺氮的含亚烷基的部分。琥珀酰亚胺部分通常由配体单元的巯基基团向延伸子单元前体(Z')的马来酰亚胺环系的Michael加成产生。因此，琥珀酰亚胺部分由硫取代的琥珀酰亚胺环系构成，并且当存在于喜树碱缀合物中时，其酰亚胺氮被喜树碱缀合物的连接子单元的其余部分所取代并任选被存在于Z'的马来酰亚胺环系上的一个或多个取代基所取代。
如本文所用，“酸-酰胺部分”是指具有酰胺取代基的琥珀酸，其由琥珀酰亚胺部分的硫取代琥珀酰亚胺环系通过水解使其羰基-氮键中之一断裂产生。产生琥珀酸-酰胺部分的水解提供的连接子单元不太可能遭受通过抗体-硫取代基的消除而与之键合的配体单元的过早损失。硫-取代的琥珀酰亚胺部分的琥珀酰亚胺环系的水解预期将提供酸-酰胺部分的区域化学异构体，这是由于琥珀酰亚胺环系的两个羰基碳的反应性差异可至少部分归因于延伸子单元前体的马来酰亚胺环系中存在的任何取代基和由靶向配体引入的硫取代基。
如本文所用，术语“前药”是指生物活性较低或无活性的化合物，其经由化学或生物过程(即，化学反应或酶促生物转化)在体内转化为生物活性更高的化合物。通常，通过用前药部分对化合物进行化学修饰使得生物活性化合物的生物活性降低(即，转化为前药)。在一些方面，前药为II型前药，其在细胞外(例如，在消化液中)或在人体的循环系统中(例如，在血液中)被生物活化。示例性的前药是酯和β-D-吡喃葡萄糖苷。
在许多情况下，本文描述的缀合物、连接子和组分的组装体将是指反应性基团。“反应性基团”或RG是含反应性位点(RS)的基团，该位点能够与连接子单元的组分(即，A、W、Y)或喜树碱D形成键。RS为反应性基团(RG)内的反应性位点。反应性基团包括形成二硫键或硫醚键的巯基基团，形成腙键的醛、酮或肼基团，形成肽键的羧基或氨基基团，形成酯键的羧基或羟基基团，形成磺酰胺键的磺酸，形成氨基甲酸酯键的醇，和形成磺酰胺键或氨基甲酸酯键的胺。
下表是反应性基团、反应性位点和在反应性位点的反应后可形成的示例性官能团的示意。该表不是限制性的。本领域技术人员应理解，表中提及的R'和R”部分实际上是任何有机部分(例如，烷基基团、芳基基团、杂芳基基团或被取代的烷基、芳基或杂芳基基团)，其与在将RG转化为示例性官能团之一中提供的键形成相容。还应理解，如适用于本发明的实施方案，视情况而定，R'可代表自稳定连接子或任选的辅助连接子的一种或多种组分，并视情况而定，R”可代表任选的辅助连接子、喜树碱、稳定单元或检测单元的一种或多种组分。
Figure BDA0002922313000000221
具体实施方案
下面描述了本发明的许多实施方案，其并不意在以任何方式限制本发明，并且后面跟着构成缀合物的组分的更详细的讨论。本领域技术人员应理解，所确定的每种缀合物及其任何选定实施方案意在包括每种组分和连接子的全部范围。
喜树碱缀合物
在一个主要的实施方案中，提供了一种具有下式的喜树碱缀合物或其盐：
L-(Q-D)p
其中
L为配体单元；
下标p是1-16的整数；
Q为具有选自以下的式的连接子单元：
-Z-A-,-Z-A-RL-,-Z-A-RL-Y-,Z-A-S*-W-,
Z-A-S*-RL-,-Z-A-B(S*)-RL-,-Z-A-S*-W-RL-,-Z-A-S*-RL-Y-,
和-Z-A-B(S*)-RL-Y-,
其中Z为延伸子(Stretcher)单元，
A为键或接头(Connecter)单元；
B为并行(Parallel)接头单元；
S*为分配剂(Partitioning Agent)；
W为氨基酸单元；
RL为可释放单元；
Y为间隔子(Spacer)单元；和
D为选自以下的药物单元：
Figure BDA0002922313000000231
Figure BDA0002922313000000241
其中
RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的部分；
RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的部分；
RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的部分；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；并且
其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一个时，D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7上存在的羟基或伯胺或仲胺官能团中的任一个的杂原子进行，或
其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的内酯环中羟基取代基的氧原子进行；和
条件是当连接点是CPT6氨基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，
条件是当D是具有通过其氨基连接的CPT1时，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的-Z-A-不同于任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
在一组实施方案中，D具有式CPT5。
在一组实施方案中，D具有式CPT2。
在一组实施方案中，D具有式CPT3。
在一组实施方案中，D具有式CPT4。
在一组实施方案中，D具有式CPT1。
在一组实施方案中，D具有式CPT6。
在一组实施方案中，D具有式CPT7。
在一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-RL-和-Z-A-RL-Y-，
其中RL是作为葡糖苷酸单元的可释放连接子，并且基团Z、A和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-S*-RL-和-Z-A-S*-RL-Y-，
其中RL是作为葡糖苷酸单元的可释放连接子，并且基团Z、A、S*和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-B(S*)-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-，
其中RL是作为葡糖苷酸单元的可释放连接子，并且基团Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-或-Z-A-RL-，
其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团Z和A具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-S*-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-
其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团Z、A、S*和B具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-S*-W-和-Z-A-B(S*)-W-,
其中基团Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，Q具有选自以下的式：
-Z-A-S*-W-RL-和-Z-A-B(S*)-W-RL-,
其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT1的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000271
Figure BDA0002922313000000281
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义，条件是式CPT1iN、CPT1iiN、CPT1iiiN、CPT1ivN、CPT1vN和CPT1viN的-Z-A-不同于任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT1的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000282
Figure BDA0002922313000000291
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT2的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000301
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT2的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000311
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，式CPT2iOa、CPT2iiOa、CPT2iiiOa、CPT2ivOa、CPT2vOa、CPT2viOa、CPT2iOb、CPT2iiOb、CPT2iiiOb、CPT2ivOb、CPT2vOb、CPT2viOb、CPT2viiOb或CPT2viiiOb中的RB是选自-H、C1-C8烷基和C1-C8卤代烷基的部分。
在另一组实施方案中，式CPT2iOa、CPT2iiOa、CPT2iiiOa、CPT2ivOa、CPT2vOa、CPT2viOa、CPT2iOb、CPT2iiOb、CPT2iiiOb、CPT2ivOb、CPT2vOb、CPT2viOb、CPT2viiOb或CPT2viiiOb中的RB是选自C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基-、苯基和苯基-C1-C4烷基-的部分，并且其中RB的环烷基和苯基部分被0-3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基，-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT3的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000321
Figure BDA0002922313000000331
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT3的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000341
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，式CPT3iOa、CPT3iiOa、CPT3iiiOa、CPT3ivOa、CPT3vOa、CPT3viOa、CPT3iO’a、CPT3iiO’a、CPT3iiiO’a、CPT3ivO’a、CPT3vO’a、CPT3viO’a、CPT3iOb、CPT3iiOb、CPT3iiiOb、CPT3ivOb、CPT3vOb、CPT3viOb、CPT3viiOb或CPT3viiiOb中的RC是C1-C6烷基。
在一组实施方案中，式CPT3iOa、CPT3iiOa、CPT3iiiOa、CPT3ivOa、CPT3vOa、CPT3viOa、CPT3iO’a、CPT3iiO’a、CPT3iiiO’a、CPT3ivO’a、CPT3vO’a、CPT3viO’a、CPT3iOb、CPT3iiOb、CPT3iiiOb、CPT3ivOb、CPT3vOb、CPT3viOb、CPT3viiOb或CPT3viiiOb中的RC是C3-C6环烷基。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT4的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000351
Figure BDA0002922313000000361
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT4的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000362
Figure BDA0002922313000000371
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT5的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000381
Figure BDA0002922313000000391
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT5的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000392
Figure BDA0002922313000000401
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT6的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000411
Figure BDA0002922313000000421
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT6的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000431
Figure BDA0002922313000000441
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在一组实施方案中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中的RF是-H。
在一组实施方案中，式CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中的RF和RF’均是-H。
在一组实施方案中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中的RF是选自下组的部分：C1-C8烷基、C1-C8羟基烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基-C(O)-、C1-C8羟基烷基-C(O)-、和C1-C8氨基烷基C(O)-。
在一组实施方案中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中的RF是选自下组的部分：C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基C1-C4烷基-、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，并且其中RF的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0-3个独立选自下组的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4alkyl、-NH2、-NHC1-C4alkyl和-N(C1-C4烷基)2。
在一组实施方案中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中的RF是选自下组的部分：-H、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，并且其中RF的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0-3个独立选自下组的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2。
在一组实施方案中，式CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中的RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2。
在一组实施方案中，式CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中的RF和RF’的至少一个是独立选自下组的部分：C1-C8烷基、C1-C8羟基烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟基烷基-C(O)-和C1-C8氨基烷基-C(O)-，并且其他是选自下组的部分：–H、C1-C8烷基、C1-C8羟基烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基-C(O)-、C1-C8羟基烷基-C(O)-、和C1-C8氨基烷基C(O)-。
在一组实施方案中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中的每一个RF和RF’是独立选自下组的部分：C1-C8烷基、C1-C8羟基烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基-C(O)-、C1-C8羟基烷基-C(O)-、和C1-C8氨基烷基-C(O)-。
在一组实施方案中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中的RF和RF’的至少一个是独立选自下组的部分：C3-C10环烷基、C3-C10环烷基-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，并且其中RF或RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0-3个独立选自下组的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2，并且其他是选自下组的部分：–H、C1-C8烷基、C1-C8羟基烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基-C(O)-、C1-C8羟基烷基-C(O)-、和C1-C8氨基烷基C(O)-)2。
在一组实施方案中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中的RF和RF’的至少一个是独立选自下组的部分：C3-C10环烷基、C3-C10环烷基-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，并且其他是选自下组的部分：–H、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基C1-C4烷基-、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，其中RF或RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0-3个独立选自下组的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2。
一组实施方案中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中每一个RF和RF’是独立选自下组的部分：-H、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基C1-C4烷基-、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基-，并且其中RF或RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0-3个独立选自下组的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C烷基和-N(C1-C4烷基)2。
在另一组实施方案中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或–Z-A-B(S*)-RL-Y-且由具有式CPT7的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000471
Figure BDA0002922313000000481
Figure BDA0002922313000000491
分别地，其中RL是本文公开的可释放连接子的任一种，优选RL是葡糖苷酸单元，并且基团L、Z、A、S*、B和Y具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
在其他实施方案中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、–Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL-且由具有式CPT5的药物单元组成的喜树碱缀合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000501
Figure BDA0002922313000000511
分别地，其中RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子，并且基团L、Z、A、S*、B和W具有以上以及在本文具体记载的任何一个实施方案中提供的含义。
喜树碱-连接子化合物
在一些实施方案中，当制备喜树碱缀合物时，在与靶向剂缀合之前，需要合成完整的药物-连接子组合。在这样的实施方案中，如本文所述的喜树碱-连接子化合物为中间体化合物。在那些实施方案中，喜树碱-连接子化合物中的延伸子单元尚未与配体单元共价连接(即，为延伸子单元前体Z')并因此具有用于与靶向配体缀合的官能团。在一个实施方案中，喜树碱-连接子化合物由喜树碱(在本文中以式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7示出)和包含葡糖苷酸单元作为可释放连接子(RL)的连接子单元(Q)构成，配体单元通过该连接子与喜树碱相连。
在另一个实施方案中，喜树碱-连接子化合物包含式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱化合物，和包含不同于葡糖苷酸单元的可释放连接子(RL)的连接子单元(Q)，配体单元通过该连接子与喜树碱化合物缀合。因此，在另一个实施方案中，除RL外，连接子单元还包含延伸子单元前体(Z')，该前体包含用于与靶向剂(其是配体单元的前体)缀合的官能团并且因此能够将RL与配体单元(直接或间接地)相连。在一些那些实施方案中，当期望添加分配剂(S*)作为侧链附接物时，在一些实施方案中可存在并行接头单元(B)。在那些实施方案的任一个中，当期望在延伸子单元和RL之间增加更多距离时，存在接头单元(A)。
在一组实施方案中，喜树碱-连接子化合物由具有式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱化合物和连接子单元(Q)构成，其中Q包含直接连接到延伸子单元前体(Z')或通过与喜树碱-连接子化合物的连接子单元的一个或多个中间组分(即，A、S*和/或B(S*))连接而间接连接到Z'的作为葡糖苷酸单元的可释放连接子(RL)，其中Z'由能够与靶向剂形成共价键的官能团构成。
在另一组实施方案中，喜树碱-连接子化合物由具有式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱和连接子单元(Q)构成，其中Q包含直接连接到延伸子单元前体(Z')或通过与喜树碱-连接子化合物的连接子单元的一个或多个中间组分(即，A、S*和/或B(S*))连接而间接连接到Z'的作为除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子(RL)，其中Z'由能够与靶向剂形成共价键的官能团构成。
在喜树碱缀合物和/或喜树碱-连接子化合物的上下文中，组装体最好按照其组分基团进行描述。尽管本文还描述了一些程序，但本领域技术人员将很好地理解组装的顺序及制备缀合物和化合物的通用条件。
组分基团
配体单元：
在本发明的一些实施方案中，存在配体单元。配体单元(L-)是与靶部分特异性结合的靶向剂。在一组实施方案中，配体单元特异性地并选择性地与细胞组分(细胞结合剂)或感兴趣的另一靶分子结合。配体单元的作用是将喜树碱(CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7)靶向并呈递给因其靶组分或分子的存在而与该配体单元相互作用并允许游离药物随后在靶细胞内(即，细胞内)或附近(即，细胞外)释放的特定靶细胞群体。配体单元L包括但不限于蛋白质、多肽和肽。合适的配体单元包括例如抗体，例如全长抗体及其抗原结合片段、干扰素、淋巴因子、激素、生长因子和集落刺激因子、维生素、营养转运分子(如但不限于转铁蛋白)或任何其他细胞结合分子或物质。在一些实施方案中，配体单元(L)来自抗体或非抗体蛋白靶向剂。
在一组实施方案中，配体单元与包含可释放葡糖苷酸连接子的Q(连接子单元)键合。如上所述，本文描述的缀合物中还可存在其他连接组分以用于在喜树碱药物化合物与配体单元之间提供额外的间隔(例如，延伸子单元和任选地接头单元A)或提供组合物属性以增加溶解度(例如，分配剂S*)。在这些实施方案中的一些中，配体单元经由配体单元的杂原子与连接子单元的Z键合。可能存在于配体单元上用于该键合的杂原子包括硫(在一个实施方案中，来自靶向配体的巯基基团)、氧(在一个实施方案中，来自靶向配体的羧基或羟基基团)和氮，其任选被取代(在一个实施方案中，来自靶向配体的伯或仲胺官能团，或在另一个实施方案中，来自任选被取代的酰胺氮)。这些杂原子可以配体的天然状态(例如，在天然存在的抗体中)存在于靶向配体上，或者可经由化学修饰或生物工程引入到靶向配体中。
在一个实施方案中，作为配体单元的前体的靶向剂具有巯基官能团，使得配体单元经由巯基官能团的硫原子与连接子单元键合。
在另一个实施方案中，作为配体单元的前体的靶向剂具有一个或多个赖氨酸残基，其能够与喜树碱-连接子化合物中间体的延伸子单元前体的活化酯(这样的酯包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺、五氟苯基和对硝基苯基酯)反应并因此提供由配体单元的氮原子和连接子单元的延伸子单元的C＝O基团组成的酰胺键。
在又一个方面，作为配体单元的前体的靶向剂具有一个或多个能够经化学修饰以引入一个或多个巯基基团的赖氨酸残基。在那些实施方案中，配体单元经由巯基官能团的硫原子共价连接到连接子单元。可用来以这种方式修饰赖氨酸的试剂包括但不限于N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸盐(SATA)和2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐(Traut试剂)。
在另一个实施方案中，作为配体单元的前体的靶向剂具有一个或多个能够经修饰以提供一个或多个巯基官能团的碳水化合物基团。喜树碱缀合物中经化学修饰的配体单元经由巯基官能团的硫原子与连接子单元组分(例如，延伸子单元)键合。
在又一个实施方案中，作为配体单元的前体的靶向剂具有一个或多个可被氧化以提供醛(-CHO)官能团的碳水化合物基团(参见例如Laguzza等,1989,J.Med.Chem.32(3):548-55)。在这些实施方案中，相应的醛与延伸子单元前体上的反应性位点相互作用而在延伸子单元与配体单元之间形成键。延伸子单元前体上能够与靶向配体单元上的反应性含羰基官能团相互作用的反应性位点包括但不限于肼和羟胺。用于修饰蛋白质以连接连接子单元(Q)或相关物质的其他方案描述于Coligan等,Current Protocols in ProteinScience,vol.2,John Wiley&Sons(2002)中(以引用方式并入本文)。
在一些方面，作为配体单元的前体的靶向剂能够通过与延伸子单元前体(Z')上的反应性官能团相互作用而在延伸子单元(Z)与结构对应于靶向剂的配体单元之间形成共价键。具有与靶向剂相互作用的能力的Z'的官能团将取决于结构对应于配体单元的靶向剂的性质。在一些实施方案中，反应性基团为马来酰亚胺，其在连接以形成配体单元之前存在于延伸子单元上(即，延伸子单元前体的马来酰亚胺部分)。配体单元与延伸子单元的共价连接通过作为配体单元的前体的靶向剂的巯基官能团与Z'的马来酰亚胺官能团相互作用形成硫取代的琥珀酰亚胺而实现。巯基官能团可以靶向剂的天然状态(例如，在天然存在的残基中)存在于靶向剂上，或者可经由化学修饰或通过生物工程引入到靶向剂中。
在又一个实施方案中，配体单元来自抗体，并且巯基基团通过抗体的链间二硫化物的还原生成。相应地，在一些实施方案中，连接子单元与来自经还原的一个或多个链间二硫化物的半胱氨酸残基缀合。
在又一个实施方案中，配体单元来自抗体，并且巯基官能团以化学方式引入到抗体中，例如，通过半胱氨酸残基的引入。相应地，在一些实施方案中，连接子单元(具有或不具有连接的喜树碱)通过配体单元的引入的半胱氨酸残基与配体单元缀合。
对于生物缀合物，已观察到药物缀合的位点可影响许多参数，包括缀合的容易性、药物-连接子稳定性、对所得生物缀合物的生物物理性质的影响以及体外细胞毒性。关于药物-连接子稳定性，在一些情况下，药物-连接子部分与配体单元的缀合位点可影响缀合的药物-连接子部分进行消除反应的能力而引起游离药物的过早释放。在靶向配体上缀合的位点包括例如经还原的链间二硫化物以及工程化位点处的选定半胱氨酸残基。在一些实施方案中，形成如本文所述的喜树碱缀合物的缀合方法使用与使用来自经还原的二硫键的硫醇残基的缀合方法相比较不易于发生消除反应的在基因工程化位点处的硫醇残基(例如，根据Kabat中所述的EU索引的位置239)。在其他实施方案中，形成如本文所述的喜树碱缀合物的缀合方法使用由链间二硫键还原产生的硫醇残基。
在一些实施方案中，喜树碱缀合物包含非免疫反应性蛋白质、多肽或肽作为其配体单元。相应地，在一些实施方案中，配体单元来自非免疫反应性蛋白质、多肽或肽。实例包括但不限于转铁蛋白、表皮生长因子(“EGF”)、蛙皮素、胃泌素、胃泌素释放肽、血小板衍生生长因子、IL-2、IL-6、转化生长因子(“TGF”)如TGF-α和TGF-β、牛痘病毒生长因子(“VGF”)、胰岛素和胰岛素样生长因子I和II、生长激素抑制素、凝集素和来自低密度脂蛋白的脱辅基蛋白。
特别优选的配体单元来自抗体。因此，在本文描述的任何实施方案中，配体单元来自抗体。可用的多克隆抗体为衍生自免疫动物的血清的抗体分子的异质群体。可用的单克隆抗体为针对特定抗原决定簇(例如，癌细胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白质、肽、碳水化合物、化学物质、核酸或其片段)的抗体的同质群体。在一些实施方案中，通过使用本领域已知的任何技术来制备针对感兴趣抗原的单克隆抗体(mAb)，这些技术通过培养中的连续细胞系提供抗体分子的产生。
可用的单克隆抗体包括但不限于人单克隆抗体、人源化单克隆抗体或嵌合人-小鼠(或其他物种)单克隆抗体。抗体包括全长抗体及其抗原结合片段。人单克隆抗体可通过本领域已知的多种技术中的任何一种来制备(例如，Teng等,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.80:7308-7312；Kozbor等,1983,Immunology Today 4:72-79；和Olsson等,1982,Meth.Enzymol.92:3-16)。
可用于实施本发明的抗体是完整抗体或抗体的功能性活性片段、衍生物或类似物，其中所述抗体或其片段能够与靶细胞(例如，癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)免疫特异性结合，或与肿瘤细胞或基质结合的其他抗体。在这点上，“功能活性的”指的是所述片段、衍生物或类似物能够与靶细胞免疫特异性结合。为了确定哪些CDR序列将与抗原结合，在一些实施方案中，通过本领域已知的任何结合测定方法(例如，BIA核心测定法)将含有CDR序列的合成肽用在与抗原的结合测定中(参见例如Kabat等,1991,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版,National Institute of Health,Bethesda,Md；Kabat E等,1980,J.Immunology 125(3):961-969)。
其他可用的抗体包括抗体的片段，如但不限于F(ab’)2片段、Fab片段、Fvs、单链抗体、双抗体、三链抗体、四链抗体、scFv、scFv-FV或与抗体具有相同的特异性的任何其他分子。
另外，在一些实施方案中，使用标准重组DNA技术制备的包含人和非人部分的重组抗体如嵌合和人源化单克隆抗体都是可用的抗体。嵌合抗体是其中不同的部分衍生自不同动物物种的分子，如例如具有衍生自鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的那些。(参见例如美国专利号4,816,567和美国专利号4,816,397，其以引用方式全文并入本文)。人源化抗体是来自非人物种的抗体分子，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。(参见例如美国专利号5,585,089，其以引用方式全文并入本文)。在一些实施方案中，这样的嵌合和人源化单克隆抗体通过本领域已知的重组DNA技术产生，例如使用国际公开号WO 87/02671；欧洲专利公开号0 184 187；欧洲专利公开号0 171 496；欧洲专利公开号0 173 494；国际公开号WO 86/01533；美国专利号4,816,567；Berter等,Science(1988)240:1041-1043；Liu等,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA(1987)84:3439-3443；Liu等,J.Immunol.(1987)139:3521-3526；Sun等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1987)84:214-218；Nishimura等,Cancer.Res.(1987)47:999-1005；Wood等,Nature(1985)314:446-449；Shaw等,J.Natl.Cancer Inst.(1988)80:1553-1559；Morrison,Science(1985)229:1202-1207；Oi等,BioTechniques(1986)4:214-221；美国专利号5,225,539；Jones等,Nature(1986)321:552-525；Verhoeyan等,Science(1988)239:1534-1536；和Beidler等,J.Immunol.(1988)141:4053-4060中所述的方法；它们中的每一个均以引用方式全文并入本文。
在一些情况下(例如，当可能发生对非人抗体或嵌合抗体的免疫原性时)，完全人抗体将更理想并且在一些实施方案中使用不能够表达内源免疫球蛋白重链和轻链基因但能够表达人重链和轻链基因的转基因小鼠产生。
抗体包括经修饰的类似物和衍生物，即通过任何类型分子的共价连接修饰的类似物和衍生物，只要这样的共价连接允许抗体保持其抗原结合免疫特异性即可。例如但不限于，抗体的衍生物和类似物包括已经进一步修饰的那些，例如，通过糖基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、由已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解、与细胞抗体单元或其他蛋白质的连接等修饰。在一些实施方案中，那些众多化学修饰中的一种或多种通过已知的技术进行，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、在衣霉素存在下的代谢合成等。在其他实施方案中，抗体的类似物或衍生物包含一种或多种非天然氨基酸，其有时与一种或多种上述化学修饰结合使用。
在一些实施方案中，抗体可在与Fc受体相互作用的氨基酸残基中具有一种或多种修饰(例如，取代、删除或添加)。那些在确定为涉及在抗Fc结构域与FcRn受体之间的相互作用中的氨基酸残基中包括修饰(参见例如国际公开号WO 97/34631，其以引用方式全文并入本文)。
在一些实施方案中，对癌细胞抗原具有免疫特异性的抗体可商购获得或通过本领域技术人员已知的方法如重组表达技术生产。编码对癌细胞抗原具有免疫特异性的抗体的核苷酸序列有时例如自GenBank数据库或类似数据库、文献出版物或通过常规克隆和测序获得。
在一个具体的实施方案中，可使用用于治疗癌症的已知抗体。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明的组合物和方法使用用于治疗自身免疫疾病的抗体。
在某些实施方案中，可用的抗体结合活化淋巴细胞上表达的受体或受体复合物。在一些实施方案中，受体或受体复合物可包含免疫球蛋白基因超家族成员、TNF受体超家族成员、整联蛋白、细胞因子受体、趋化因子受体、主要组织相容性蛋白、凝集素或补体调节蛋白。
在一些实施方案中，引入到喜树碱缀合物中的抗体将特异性结合CD19、CD30、CD33、CD70或LIV-1。
喜树碱化合物：
本文描述的各个实施方案中采用的喜树碱化合物由下式表示：
Figure BDA0002922313000000581
Figure BDA0002922313000000591
RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的部分；
RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的部分；
RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的部分；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；
其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代。
用于本文所述的喜树碱缀合物和喜树碱连接子化合物的上下文的其他喜树碱化合物是表I的喜树碱化合物14a-14z和表J的化合物18a-18r，以及具有类似于式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6、CPT7、14a-14z和18a-18r所提供的那些结构的五环或六环稠合骨架的喜树碱化合物，在某些实施方案中，其具有其他基团，包括但不限于羟基、硫醇、胺或酰胺官能团，其氧、硫或任选取代的氮原子能够结合到连接子中，并能够作为游离药物从喜树碱缀合物释放。在一些实施方案中，该官能团提供了喜树碱化合物上可用于连接至连接子单元(Q)的唯一位点。喜树碱缀合物的所得药物-连接子部分是一种能够在其配体单元所靶向的位点处释放活性游离药物以发挥细胞毒性、细胞抑制或免疫抑制作用的化合物。
“游离药物”是指药物，因为它一旦从药物-连接子部分释放出来就存在。在一些实施方案中，游离药物包含可释放连接子或间隔子单元(Y)基团的片段。包含可释放连接子或间隔子单元(Y)片段的游离药物经由可释放连接子的裂解从其余的药物-连接子部分释放，或经由间隔子单元(Y)基团中的键的裂解而释放，并且释放后是生物活性的。在一些实施方案中，游离药物与缀合药物的不同在于，游离药物的用于连接到自消解组装体单元的官能团不再与喜树碱缀合物的组分(除先前共享的杂原子之外)缀合。例如，含醇药物的游离羟基官能团可以D-O*H表示，而在缀合形式中，由O*表示的氧杂原子被引入到自消解单元的亚甲基氨基甲酸酯单元中。在自消解部分的激活和游离药物的释放后，与O*的共价键将被氢原子所替代，使得由O*表示的氧杂原子以-O-H的形式存在于游离药物上。
连接子单元(Q)
如上所述，在一些实施方案中，连接子单元(Q)具有选自以下的式：
-Z-A-RL-；-Z-A-RL-Y-；-Z-A-S*-RL-；-Z-A-B(S*)-RL-；
-Z-A-S*-RL-Y-；和-Z-A-B(S*)-RL-Y-；
其中Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为分枝单元；S*为分配剂；RL为作为葡糖苷酸的可释放连接子；以及Y为间隔子单元；和
其中D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表I的化合物14a-14z和表J的化合物18a-18r的任何一种上存在的羟基和伯胺和仲胺的任一个杂原子进行。
在其他实施方案中，连接子单元(Q)具有选自以下的式：
-Z-A-；-Z-A-RL-；-Z-A-S*-W-；-Z-A-B(S*)-W-；-Z-A-S*-RL-；-Z-A-B(S*)-RL-；
-Z-A-S*-W-RL-；和-Z-A-B(S*)-W-RL-；
其中Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL是除葡萄糖醛酸单元以外的可释放连接子；和W是氨基酸单元；和
其中Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表I的化合物14a-14z和表J的化合物18a-18r的任何一种的内酯环的羟基取代基进行。
在一组实施方案中，Q具有选自以下的式：-Z-A-S*-RL-和-Z-A-S*-RL-Y-。
在另一组实施方案中，Q具有选自以下的式：-Z-A-B(S*)-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-。
在又一组实施方案中，Q具有选自以下的式：-Z-A-RL-和-Z-A-RL-Y-。
延伸子单元(Z)或(Z’)：
延伸子单元(Z)为喜树碱缀合物或喜树碱-连接子化合物或其他中间体的组分，其作用是将配体单元与缀合物的其余部分相连。在这点上，延伸子单元在连接到配体单元之前(即，延伸子单元前体Z')具有可与靶向配体的官能团形成键的官能团。
在一些实施方案，延伸子单元前体(Z')具有能够与配体单元(例如，抗体)上存在的反应性亲核基团相互作用的亲电基团以在配体单元与连接子单元的延伸子单元之间提供共价键。抗体上具有该能力的亲核基团包括但不限于巯基、羟基和氨基官能团。抗体的亲核基团的杂原子与延伸子单元前体上的亲电基团是反应性的并在配体单元与连接子单元或药物-连接子部分的延伸子单元之间提供共价键。对于该目的可用的亲电基团包括但不限于马来酰亚胺、卤代乙酰胺基团和NHS酯。亲电基团为抗体连接以形成喜树碱缀合物或配体单元-连接子中间体提供了方便的位点。
在其他实施方案中，延伸子单元前体具有反应性位点，该位点具有与配体单元(例如，抗体)上存在的亲电基团反应性的亲核基团。抗体上对于该目的可用的亲电基团包括但不限于醛和酮羰基基团。延伸子单元前体的亲核基团的杂原子可与抗体上的亲电基团反应并与抗体形成共价键。延伸子单元前体上对于该目的可用的亲核基团包括但不限于酰肼、羟胺、氨基、肼、缩氨基硫脲、羧酸肼和芳基酰肼。抗体上的亲电基团为抗体连接以形成喜树碱缀合物或配体单元-连接子中间体提供了方便的位点。
在一些实施方案中，配体单元的硫原子与延伸子单元由靶向配体的硫醇官能团与相应的延伸子单元前体的马来酰亚胺部分的反应形成的琥珀酰亚胺环系键合。在其他实施方案中，配体单元的硫醇官能团与α卤代乙酰胺部分反应以通过其卤素取代基的亲核取代而提供硫键合的延伸子单元。
这种实施方案的代表性延伸子单元包括具有以下结构的那些：
Figure BDA0002922313000000631
其中与R17相邻的波浪线表示与并行接头单元(B)或接头单元(A)(如果B不存在的话)或分配剂(S*)(如果B不存在的话)的连接，另一条波浪线表示与配体单元的硫原子共价连接，并且R17为-C1-C10亚烷基-、C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8碳环基-、-O-(C1-C8亚烷基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基C(＝O)-、C1-C10亚杂烷基-C(＝O)-、-C3-C8碳环基-C(＝O)-、-O-(C1-C8亚烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-C(＝O)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C3-C8杂环基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-C(＝O)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-NH-、C1-C10亚杂烷基-NH-、-C3-C8碳环基-NH-、-O-(C1-C8亚烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-NH-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C3-C8杂环基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-NH-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-S-、C1-C10亚杂烷基-S-、-C3-C8碳化基-S-、-O-(C1-C8亚烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-S-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-S-、-C3-C8杂环基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-S-或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-S-。
在一些实施方案，R17基团任选地被碱性单元(BU)如氨基烷基部分例如–(CH2)xNH2、–(CH2)xNHRa和–(CH2)xNRa 2所取代，其中下标x为1-4的整数并且每个Ra独立地选自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或者两个Ra基团与它们所连接的氮组合形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基基团。
一种示意性的延伸子单元是式Za或Za-BU的延伸子单元，其中R17为-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚杂烷基-C(＝O)-、-C3-C8碳环基-C(＝O)-、-O-(C1-C8亚烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-C(＝O)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C3-C8杂环基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-C(＝O)-或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-。
因此，一些优选的实施方案由式Za和Za-BU表示：
Figure BDA0002922313000000641
其中与羰基碳原子相邻的波浪线表示与上式中的B、A或S*的连接(取决于是否存在A和/或B)，另一条波浪线表示琥珀酰亚胺环碳原子与配体单元的硫原子的共价键合。合成期间，碱性单元(BU)的碱性氨基官能团可以通过保护基保护。
式Za和Za-BU的延伸子单元的更优选实施方案如下：
Figure BDA0002922313000000651
其中与羰基碳原子相邻的波浪线表示与上式中的B、A或S*的连接(取决于是否存在A和/或B)，另一条波浪线表示琥珀酰亚胺环碳原子与配体单元的硫原子的共价键合。
将理解，配体单元取代的琥珀酰亚胺可以以一种或多种水解形式存在。下文针对Za或Za-BU的水解例证那些形式，其中代表来自该水解的区域异构体的结构具有式Zb和Zc或Zb-BU和Zc-BU。
因此，在其他优选的实施方案中，延伸子单元(Z)由以下所示的琥珀酸-酰胺部分组成：
Figure BDA0002922313000000652
Figure BDA0002922313000000661
其中取决于是否存在A和/或B，与键合至R17的羰基碳原子相邻的波浪线和与酸-酰胺部分的碳原子相邻的波浪线如对于Za或Za-BU所定义；并且R17为–C1-C5亚烷基-，其中在Zb-BU和Zc-BU中所述亚烷基被碱性单元(BU)取代，其中BU为–(CH2)xNH2、–(CH2)xNHRa或–(CH2)xN(Ra)2，其中下标x为1-4的整数并且每个Ra独立地选自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或者两个Ra与它们所连接的氮一起限定氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基基团。
在更优选的实施方案中，-Z-A-包含衍生自马来酰亚胺基-链烷酸部分或mDPR部分的部分。例如参见WO 2013/173337。在一组实施方案中，Z-A-衍生自马来酰亚胺基-丙酰基部分。
因此，在一些更优选的实施方案中，延伸子单元(Z)由以下所示式Zb’、Zc’、(R/S)-Zb’-BU、(S)-Zb’-BU、(R/S)-Zc'-BU或(S)-Zc’-BU的结构表示的琥珀酸-酰胺部分组成：
Figure BDA0002922313000000671
其中波浪线如对于Za或Za-BU所定义。
在特别优选的实施方案中，延伸子单元(Z)由以下结构表示的琥珀酰亚胺部分组成：
Figure BDA0002922313000000672
或由以下结构表示的琥珀酸-酰胺部分组成：
Figure BDA0002922313000000673
与接头单元(A)键合的示例性延伸子单元由Za’、Zb’或Zc’构成，其中Za、Zb或Zc的–R17是–CH2-或-CH2CH2-，或由Za’-BU、Zb’-BU或Zc’-BU构成，其中Za-BU、Zb-BU或Zc-BU的–R17(BU)-是–CH(CH2NH2)-，并且具有以下结构：
Figure BDA0002922313000000681
其中波浪线如对于Za或Za-BU所定义。
与配体单元(L)和接头单元(A)键合的其他延伸子单元具有上述结构，其中上述-Za-A-、-Za(BU)-A-、-Za’-A-、-Za’(BU)-A-、-Zb-A-、-Zb(BU)-A-、-Zb’-A-、-Zb’(BU)-、-Zc’-A-和Zc’(BU)-A-结构的任一个中的A被具有以下结构的并行接头单元所替代：
Figure BDA0002922313000000691
其中下标n为8-24；RPEG为PEG单元封端基团，优选-CH3或–CH2CH2CO2H，星号(*)表示在结构上与式Za、Za'、Zb'或Zc'对应的延伸子单元的共价连接，和波浪线表示与可释放连接子(RL)的共价连接。
与配体单元缀合之前的示例性延伸子单元(即，延伸子单元前体)由马来酰亚胺部分组成并由包括式Z’a的结构表示：
Figure BDA0002922313000000692
其中与羰基碳原子相邻的波浪线表示与上式中的B、A或S*的连接(取决于是否存在A和/或B)；R17为–(CH2)1-5-，任选被碱性单元如任选被取代的氨基烷基例如–(CH2)xNH2、–(CH2)xNHRa和–(CH2)xN(Ra)2所取代，其中下标x为1-4的整数并且每个Ra独立地选自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或者两个Ra基团与它们所连接的氮组合形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基基团。
与配体单元缀合之前的其他说明性延伸子单元(即，延伸子单元前体)由马来酰亚胺部分构成，并由包括式Z’a-BU的结构表示。
Figure BDA0002922313000000701
其中与羰基碳原子相邻的波浪线表示与上式中的B、A或S*的连接(取决于是否存在A和/或B)，R17为–(CH2)1-5-，任选被碱性单元如任选被取代的氨基烷基例如–(CH2)xNH2、–(CH2)xNHRa和–(CH2)xN(Ra)2所取代，其中下标x为1-4的整数，优选R17为-CH2-或-CH2CH2-并且下标x为1或2，并且每个Ra独立地选自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或者两个Ra基团与它们所连接的氮组合形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基基团。
在式Z’a的一些优选实施方案中，延伸子单元前体由以下结构之一表示：
Figure BDA0002922313000000702
其中与羰基相邻的波浪线如对于Z’a或Z’a-BU所定义。
在更优选的实施方案中，延伸子单元前体(Z')由马来酰亚胺部分组成并由以下结构表示：
Figure BDA0002922313000000703
其中与羰基相邻的波浪线为如针对Za'所定义并且氨基是任选的质子化的或由氨基保护基保护。
在具有BU部分的延伸子单元中，应理解，在合成过程中该部分的氨基官能团通常由氨基保护基团例如酸不稳定保护基团(例如，BOC)进行保护。
与由来自Za’或Z’a-BU的结构组成的接头单元(其中–R17-或–R17(BU)-为–CH2-、-CH2CH2-或–CH(CH2NH2)-)共价连接的示意性延伸子单元前体具有以下结构：
Figure BDA0002922313000000711
其中与羰基相邻的波浪线为如针对Z’a或Z’a-BU所定义。
与接头单元(A)键合的其他延伸子单元前体具有上述结构，其中上述Z’-A-和Z’(BU)-A-结构中任一个的A被具有以下结构的并行接头单元和分配剂(-B(S*)-)所替代：
Figure BDA0002922313000000721
其中下标n在8至24的范围内；RPEG为PEG单元封端基团，优选–CH3或–CH2CH2CO2H，星号(*)表示在结构上与式Za或Za’对应的延伸子单元单体的共价连接，和波浪线表示与RL的共价连接。在如这里示出的那些的情况下，所示的PEG基团是各种分配剂的示例，包括不同长度的PEG基团和可直接连接或经修饰以连接到并行接头单元的其他分配剂。
在另一个实施方案中，延伸子单元经由配体单元的硫原子与延伸子单元的硫原子之间的二硫键与配体单元连接。该实施方案的代表性延伸子单元在式Zb的方括号内描绘：
Figure BDA0002922313000000722
其中波浪线表示与并行接头单元(B)或接头单元(A)(如果B不存在的话)或分配剂(S*)(如果A和B不存在的话)的连接，和R17为-C1-C10亚烷基-、C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8碳环基-、-O-(C1-C8亚烷基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基C(＝O)-、C1-C10亚杂烷基-C(＝O)-、-C3-C8碳环基-C(＝O)-、-O-(C1-C8亚烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-C(＝O)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C3-C8杂环基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-C(＝O)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-NH-、C1-C10亚杂烷基-NH-、-C3-C8碳环基-NH-、-O-(C1-C8亚烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-NH-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C3-C8杂环基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-NH-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-S-、C1-C10亚杂烷基-S-、-C3-C8碳环基-S-、-O-(C1-C8亚烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-S-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-S-、-C3-C8杂环基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-S-或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-S-。
在又一个实施方案中，延伸子单元前体的反应性基团含可与配体单元的伯或仲氨基基团形成键的反应性位点。这些反应性位点的实例包括但不限于活化酯如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。该实施方案的代表性延伸子单元在式Zci、Zcii和Zciii的方括号内描绘：
Figure BDA0002922313000000731
其中波浪线表示与并行接头单元(B)或接头单元(A)(如果B不存在的话)或分配剂(S*)(如果A和B不存在的话)的连接，并且R17为-C1-C10亚烷基-、C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8碳环基-、-O-(C1-C8亚烷基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、C1-C10亚杂烷基-C(＝O)-、-C3-C8碳环基-C(＝O)-、-O-(C1-C8亚烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-C(＝O)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C3-C8杂环基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-C(＝O)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-NH-、C1-C10亚杂烷基-NH-、-C3-C8碳环基-NH-、-O-(C1-C8亚烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-NH-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C3-C8杂环基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-NH-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-S-、C1-C10亚杂烷基-S-、-C3-C8碳环基-S-、-O-(C1-C8亚烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-S-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-S-、-C3-C8杂环基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-S-或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-S-。
仍然在其他实施方案中，延伸子单元前体的反应性基团含反应性亲核试剂，其能够与存在于或引入到配体单元上的亲电试剂反应。例如，靶向配体上的碳水化合物部分可使用试剂如高碘酸钠温和地氧化并且被氧化的碳水化合物产生的亲电官能团(-CHO)可与含反应性亲核试剂的延伸子单元前体缩合，反应性亲核试剂有如酰肼、肟、伯胺或仲胺、肼、缩氨基硫脲、羧酸肼或芳基酰肼，如Kaneko,T.等(1991)Bioconjugate Chem.2:133-41中描述的那些。该实施方案的代表性延伸子单元在式Zdi、Zdii和Zdiii的方括号内描绘：
Figure BDA0002922313000000741
Figure BDA0002922313000000751
其中波浪线表示与并行接头单元(B)或接头单元(A)或者分配剂(S*)(如果A和B不存在的话)的连接，并且R17为-C1-C10亚烷基-、C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8碳环基-、-O-(C1-C8亚烷基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、C1-C10亚杂烷基-C(＝O)-、-C3-C8碳环基-C(＝O)-、-O-(C1-C8亚烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-C(＝O)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C3-C8杂环基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-C(＝O)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-C(＝O)-、-C1-C10亚烷基-NH-、C1-C10亚杂烷基-NH-、-C3-C8碳环基-NH-、-O-(C1-C8亚烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-NH-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C3-C8杂环基-NH-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-NH-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-NH-、-C1-C10亚烷基-S-、C1-C10亚杂烷基-S-、-C3-C8碳环基-S-、-O-(C1-C8亚烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-S-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-S-、-C3-C8杂环基-S-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-S-或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-S-。
在本发明的一些方面，延伸子单元的质量不超过约1000道尔顿，不超过约500道尔顿，不超过约200道尔顿，为约30、50或100道尔顿至约1000道尔顿，为约30、50或100道尔顿至约500道尔顿，或为约30、50或100道尔顿至约200道尔顿。
接头单元(A)
在一些实施方案中，喜树碱缀合物或喜树碱-连接子化合物中包含接头单元(A)以在需要其的情况下在延伸子单元(Z)或其前体(Z')与可释放连接子之间增加额外的距离。在一些实施方案中，额外的距离将有助于RL内的激活。相应地，当存在时，接头单元(A)将扩展连接子单元的框架。在这点上，接头单元(A)在一个末端处与延伸子单元(或其前体)共价键合并在其另一个末端处与任选的并行接头单元或分配剂(S*)共价键合。
本领域技术人员应理解，接头单元可以是用来提供可释放连接子与连接子单元(Q)的其余部分的连接的任何基团。接头单元可例如由一种或多种(例如，1-10种，优选地1、2、3或4种)天然或非天然氨基酸、氨基醇、氨基醛、二氨基残基构成。在一些实施方案中，接头单元为单个天然或非天然氨基酸、氨基醇、氨基醛或二氨基残基。一种能够充当接头单元的示例性氨基酸为β-丙氨酸。
在一些那些实施方案中，接头单元具有以下所示的式：
Figure BDA0002922313000000761
Figure BDA0002922313000000771
其中波浪线表示喜树碱缀合物或喜树碱连接子化合物内与接头单元的连接；并且其中R111独立地选自氢、对-羟基苄基、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、
Figure BDA0002922313000000772
并且每个R100独立地选自氢或-C1-C3烷基，优选氢或CH3；并且下标c为从1至10、优选1至3独立地选择的整数。
具有羰基基团以便与分配剂(S*)或与–B(S*)-连接的一种代表性接头单元为如下：
Figure BDA0002922313000000773
其中在每一种情况下R13独立地选自-C1-C6亚烷基-、-C3-C8碳环基-、-亚芳基-、-C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-和-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-，和下标c为1至4范围内的整数。在一些实施方案中，R13为-C1-C6亚烷基，并且c为1。
具有羰基基团以便与分配剂(S*)或与–B(S*)-连接的另一种代表性接头单元为如下：
Figure BDA0002922313000000781
其中R13为-C1-C6亚烷基-、-C3-C8碳环基-、-亚芳基-、-C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-，或-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-。在一些实施方案中，R13为-C1-C6亚烷基。
具有与分配剂(S*)或与–B(S*)-连接的NH部分的一种代表性接头单元为如下：
Figure BDA0002922313000000782
其中在每一种情况下R13独立地选自-C1-C6亚烷基-、-C3-C8碳环基-、-亚芳基-、-C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-和-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-，并且下标c为1至14。在一些实施方案中，R13为-C1-C6亚烷基，并且下标c为1。
具有与分配剂(S*)或与–B(S*)-连接的NH部分的另一种代表性接头单元为如下：
Figure BDA0002922313000000783
其中R13为-C1-C6亚烷基-、-C3-C8碳环基-、-亚芳基-、-C1-C10亚杂烷基-、-C3-C8杂环基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8碳环基)-、-(C3-C8碳环基)-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环基)-、-(C3-C8杂环基)-C1-C10亚烷基-、–C(＝O)C1-C6亚烷基-，或-C1-C6亚烷基-C(＝O)-C1-C6亚烷基。
接头单元的选定实施方案包括具有以下结构的那些：
Figure BDA0002922313000000791
其中与氮相邻的波浪线表示与延伸子单元(Z)(或其前体Z')的共价连接，并且与羰基相邻的波浪线表示与分配剂(S*)或与–B(S*)-的共价连接；并且m为1至6、优选2至6、更优选2至4范围内的整数。
可释放连接子(RL)：
葡糖苷酸单元是一种可释放连接子，其通过激活连接子单元内的自消除级联反应提供喜树碱与配体单元和连接子单元的其他组分分离的机制。在这种实施方案中，通过操作葡糖苷酸单元的碳水化合物部分上的糖苷酶来激活自消除级联反应。许多糖可用于本文所述的实施方案中。特定的碳水化合物部分包括半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖-6-磷酸酯、岩藻糖、鼠李糖、果糖、阿洛糖、6-脱氧葡萄糖、乳糖、麦芽糖、纤维二糖、龙胆二糖、麦芽三糖、GlcNAc，GalNAc和麦芽六糖的那些。
糖苷单元通常包含通过氧糖苷键连接至自消除间隔子的糖部分(Su)。氧糖苷键的裂解引发自消除反应顺序，导致释放游离药物。在一些实施方案中，自消除顺序通过作为示例性的糖苷单元的葡糖苷酸单元的β-葡糖苷酸酶的裂解而被激活。葡糖苷酸单元包含激活单元和自消除间隔子单元。葡糖苷酸单元包含通过氧糖苷键连接至自消除间隔子单元的糖部分(Su)。
在一些实施方案中，葡糖苷酸单元包含经由氧糖苷键(-O'-)连接至下式的自消除单元(SP)的糖部分(Su)：
Figure BDA0002922313000000801
其中波浪线表示根据具体情况共价连接至式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的任一项的药物单元，或共价连接至与药物单元(喜树碱化合物)连接的间隔子单元，以及通过接头单元(A)或并行接头单元(B)、分配剂(S*)或接头单元和并行接头单元的组合直接或间接共价连接至延伸子单元(Z)或其前体(Z')。
氧糖苷键(-O'-)通常是β-葡糖苷酸酶的裂解位点(即，Su来自葡糖苷酸)，例如可被人溶酶体β-葡糖苷酸酶裂解的糖苷键。
在一些实施方案中，葡糖苷酸单元可由式Ga或Gb表示：
Figure BDA0002922313000000802
其中Su是糖部分，-O'-代表氧糖苷键；R1S、R2S和R3S独立地是氢、卤素、-CN，-NO2或其他吸电子基团或供电子基团；并且其中波浪线表示连接至延伸子单元(Z)(或其前体(Z')，直接或间接通过接头单元或并行接头单元或接头单元和并行接头单元)；和#表示连接至喜树碱或间隔子(直接或间接通过中间官能团或其他部分)。
在优选的实施方案中，R1S、R2S和R3S独立地选自氢、卤素、-CN或-NO2。在其他优选的实施方案中，R1S、R2S和R3S各自为氢。在其他优选的实施方案中，R2S为吸电子基团，优选为NO2，并且R1S和R3S各自为氢。
在一些此类方面，能够糖苷酶裂解以启动自消除反应顺序的可活化自消除基团由式Gc表示：
Figure BDA0002922313000000811
其中R4S为CH2OH或–CO2H，波浪线表示直接或间接通过接头单元或并行接头单元或接头单元和并行接头单元共价连接至延伸子单元(Z)(或其前体Z')，并且井号(#)表示共价连接至氨基甲酸亚甲酯单元。
在其中可活化自消除部分由葡糖苷酸单元构成的一些实施方案中，其由下式Gd表示：
Figure BDA0002922313000000812
其中波浪线表示直接或间接通过接头单元或并行接头单元或接头单元和并行接头单元共价连接至延伸子单元(Z)(或其前体Z')，并且井号(#)表示共价连接至与喜树碱连接的间隔子或官能团的苄基碳。
通过激活连接子单元内的自消除级联反应提供喜树碱与配体单元和连接子单元的其他组分分离的机制的另一类型的可释放连接子由对氨基苄氧基羰基(PAB)部分构成，其亚苯基组分被Jm取代，其中表示取代基数目的下标m是0-4的整数，并且每个J独立地是-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-卤素、-硝基或-氰基。
在一些实施方案中，RL是能够释放-D而无需单独的水解步骤或随后的自消除事件的自消除基团。在一些实施方案中，-RL-是经由PAB基团的氨基氮原子连接至-W-的羰基，并且经由碳酸酯基团直接连接至-D的PAB部分。在相关的实施方案中，-RL-由PAB部分构成，该PAB部分通过PAB基团的氨基氮原子与-A-、-S*-或-B-的羰基连接，并通过碳酸酯基团直接与-D连接。不受任何特定理论或机制的束缚，Toki等(2002)J Org.Chem.67:1866-1872显示从由PAB部分组成的RL释放药物的可能机制，其中RL通过碳酸酯基团直接连接至-D。
在一些实施方案中，包含PAB部分的RL单元由下式表示：
Figure BDA0002922313000000821
其中下标m是0-4的整数，并且每个J独立地是-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-卤素、-硝基或-氰基。
自消除基团的其他实例包括但不限于电子上类似于PAB部分如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)和邻或对氨基苄基缩醛的芳族化合物。其他RL在酰胺键水解后发生环化反应，例如取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等,Chemistry Biology,1995,2,223)，适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环系(Storm,等,J.Amer.Chem.Soc.,1972,94,5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry,等,J.Org.Chem.,1990,55,5867)。
在一个实施方案中，RL是支链双(羟甲基)苯乙烯(BHMS)单元。
在一些实施方案中，RL具有下式：
Figure BDA0002922313000000822
其中标记有**的波浪线表示与D的连接位点；并且标记有*的波浪线表示与Q的其他连接子组分的连接点。
在一些实施方案中，RL包含与药物结合的式I、II或III的杂环“自消除部分”，并掺入由细胞内蛋白酶水解时引发反应的酰胺基，该反应最终从药物裂解自消除部分，从而将药物以活性形式从缀合物中释放。连接子部分还包含与自消除部分相邻的肽序列，该自消除部分是细胞内酶例如细胞内蛋白酶如组织蛋白酶(例如，组织蛋白酶B)的底物，其在与自消除部分共享的酰胺键处裂解该肽。对于本文公开的实施方案，含PAB的RL直接连接至存在于CPT1-CPT7中每一个、表I的化合物14-14z中每一个或表J的化合物18a-18r中每一个的内酯环的叔羟基上。
在一些实施方案中，杂环自消除基团(RL)选自式I、II和III：
Figure BDA0002922313000000831
其中波浪线表示与细胞特异性配体和药物部分的共价连接位点，并且其中U为O、S或NR6；Q为CR4或N；V1、V2和V3独立地为CR4或N，条件是对于式II和III，Q、V1和V2中的至少一个为N；T为从CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7悬垂的O；
R1、R2、R3和R4独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、-N(R5)2、-N(R5)3 +、C1-C8烷基卤、羧酸酯、硫酸酯、氨基磺酸酯、磺酸酯、-SO2R5、-S(＝O)R5、-SR5、-SO2N(R5)2、-C(＝O)R5、-CO2R5、-C(＝O)N(R5)2、-CN、-N3、-NO2、C1-C8烷氧基、C1-C8卤代烷基、聚乙烯氧基、膦酸酯、磷酸酯、C1-C8烷基、C1-C8取代烷基、C2-C8烯基、C2-C8取代烯基、C2-C8炔基、C2-C8取代炔基、C6-C20芳基、C6-C20取代芳基、C1-C20杂环和C1-C20取代杂环；或者R2和R3一起形成羰基(＝O)或具有3-7个碳原子的螺碳环；和
R5和R6独立选自H、C1-C8烷基、C1-C8取代烷基、C2-C8烯基、C2-C8取代烯基、C2-C8炔基、C2-C8取代炔基、C6-C20芳基、C6-C20取代芳基、C1-C20杂环和C1-C20取代杂环；
其中C1-C8取代烷基、C2-C8取代烯基、C2-C8取代炔基、C6-C20取代芳基和C2-C20取代杂环独立地被一个或多个选自以下的取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、-N(R5)2、-N(R5)3 +、C1-C8烷基卤、羧酸酯、硫酸酯、氨基磺酸酯、磺酸酯、C1-C8烷基磺酸酯、C1-C8烷基氨基、4-二烷基氨基吡啶、C1-C8烷基羟基、C1-C8烷基硫醇、-SO2R5、-S(＝O)R5、-SR5、-SO2N(R5)2,-C(＝O)R5,-CO2R5、-C(＝O)N(R5)2、-CN、-N3、-NO2、C1-C8烷氧基、C1-C8三氟烷基、C1-C8烷基、C3-C12碳环、C6-C20芳基、C2-C20杂环、聚环氧乙烷、膦酸酯和磷酸酯。
缀合物在细胞外或在不存在能够裂解自消除部分的酰胺键的酶的情况下是稳定的。然而，进入细胞或暴露于合适的酶后，酰胺键被裂解，引发自发的自消除反应，导致将自消除部分与药物连接的共价键的裂解，从而实现药物以其未衍生或药理活性形式的释放。
本发明的缀合物中的自消除部分还掺入一个或多个杂原子，从而提供改进的溶解度、提高裂解速率和/或降低缀合物聚集的倾向。在某些情况下，本发明的杂环自消除连接子构建体相对于非杂环PAB型连接子的这些改进导致令人惊讶和预料不到的生物学特性，例如功效增加、毒性降低和/或一种或多种期望的药代动力学和/或药效学性质的改进。
应当理解，式I-III中的T是O，因为它衍生自CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6、CPT7、表I的化合物14a-14z和表J的化合物18a-18r的任何一种的内酯环部分上的叔羟基(-OH)。
不受理论或任何特定机制的限制，式I、II或III的杂环上的吸电子基团的存在有时降低裂解速率。
在一个实施方案中，自消除部分是式I基团，其中Q是N，并且U是O或S。这种基团具有非线性结构特征，其改进缀合物的溶解性。在这种情况下，R有时是H、甲基、硝基或CF3。在一个实施方案中，Q是N且U是O，从而形成噁唑环，并且R是H。在另一个实施方案中，Q是N且U是S，从而形成任选在R处被Me或CF3基取代的噻唑环。
在另一个示例性的实施方案中，自消除部分是式II基团，其中Q是N，并且V1和V2独立地是N或CH。在另一个实施方案中，Q、V1和V2各自为N。在另一个实施方案中，Q和V1为N，而V2为CH。在另一个实施方案中，Q和V2为N，而V1为CH。在另一个实施方案中，Q和V1均为CH，并且V2为N。在另一个实施方案中，Q为N，而V1和V2均为CH。
在另一个实施方案中，自消除部分是式III的基团，其中Q、V1、V2和V3各自独立地为N或CH。在另一个实施方案中，Q是N，而V1、V2和V3各自为N。在另一个实施方案中，Q、V1和V2是CH，而V3为N。在另一个实施方案中，Q，V2和V3分别是CH，而V1为N。在另一个实施方案中，Q，V1和V3均为CH，而V2为N。在另一个实施方案中，Q和V2均为N，而V1和V3均为CH。在另一个实施方案中，Q和V2均为CH，而V1和V3均为N。在另一个实施方案中，Q和V3均为N，而V1和V2均为CH。
不受理论的束缚，方案1a描述了游离药物从喜树碱药物单元释放的机理，所述喜树碱药物单元通过来自游离药物的胺取代基的氮原子连接至作为葡糖苷酸单元的可释放连接子。
方案1a：
Figure BDA0002922313000000861
分配剂(S*)：
本文所述的喜树碱缀合物还可包含分配剂(S*)。分配剂部分可用于例如掩盖特定喜树碱药物单元或其他连接单元组分的疏水性。
代表性的分配剂包括聚乙二醇(PEG)单元、环糊精单元、聚酰胺、亲水性肽、多糖和树状聚合物。
当Q中包含聚乙二醇(PEG)单元、环糊精单元、聚酰胺、亲水性肽、多糖或树状聚合物时，这些基团可能以“串联(in line)”组分或者以侧链或支化组分存在。对于其中存在支化形式的那些实施方案，连接子单元通常将包含赖氨酸残基(或并行接头单元B)，其提供例如PEG单元与连接单元的其余部分的简单官能缀合。
聚乙二醇单元(PEG)
多分散PEG、单分散PEG和离散的PEG可用于制备本发明的化合物。多分散PEG为大小和分子量的非均匀混合物，而单分散PEG通常是从非均匀混合物纯化的并因此具有单一的链长和分子量。优选的PEG单元为离散的PEG，其是以逐步的方式而非经由聚合过程合成的化合物。离散的PEG提供具有限定和指定链长的单一分子。
本文提供的PEG单元包含一条或多条聚乙二醇链。在一些实施方案中，聚乙二醇链可以例如线形、支化或星形构型连接于一起。通常，PEG链中的至少之一在一端处经衍生化以共价连接到连接子单元的组分(例如，B)上的适宜位点或者可用作其内的串联(例如，双官能)连接基团以共价接合两个连接子单元组分(例如，Z-A-S*-RL-、Z-A-S*-RL-Y-)。示例性的连接子单元内的连接借助的是非条件可裂解键或经由的是条件可裂解键。示例性的连接经由酰胺键、醚键、酯键、腙键、肟键、二硫键、肽键或三唑键。在一些实施方案中，连接子单元内的连接借助的是非条件可裂解键。在一些实施方案中，连接子单元内的连接不经由酯键、腙键、肟键或二硫键。在一些实施方案中，连接子单元内的连接不经由腙键。
条件可裂解键是指当在血浆中循环时对裂解基本上不敏感但在细胞内或肿瘤内环境中对裂解敏感的键。非条件可裂解键是在任何生物环境中都对裂解基本上不敏感的键。腙的化学水解、二硫化物的还原和肽键或糖苷键的酶促裂解是条件可裂解键的实例。
在一些实施方案中，PEG单元将直接与并行接头单元B连接。PEG单元的另一个末端(或端子)可以是自由而不受束缚的并且可呈甲氧基、羧酸、醇或其他合适的官能团的形式。甲氧基、羧酸、醇或其他合适的官能团充当PEG单元的末端PEG亚单元的端帽(cap)。不受束缚的意思是PEG单元不会在该不受束缚的位点处与喜树碱、与抗体或与另一连接组分连接。技术人员应理解，PEG单元除了包含重复的聚乙二醇亚单元外还可含有非PEG材料(例如，以促进多条PEG链彼此的偶联)。非PEG材料是指PEG单元中不是重复的–CH2CH2O-亚单元的一部分的原子。在本文提供的一些实施方案中，PEG单元包含经由非PEG成分彼此连接的两条单体PEG链。在本文提供的其他实施方案中，PEG单元包含连接到中心核或并行接头单元的两条线形PEG链(即，PEG单元本身是支化的)。
本领域技术人员可利用许多PEG连接方法[参见例如Goodson,等(1990)Bio/Technology 8:343(PEGylation of interleukin-2 at its glycosylation siteaftersite-directed mutagenesis)；EP 0 401 384(coupling PEG to G-CSF)；Malik等,(1992)Exp.Hematol.20:1028-1035(PEGylation of GM-CSF using tresyl chloride)；PCT公开号WO 90/12874(PEGylation of erythropoietin containing a recombinantlyintroduced cysteine residue using a cysteine-specific mPEG derivative)；美国专利号5,757,078(PEGylation of EPO peptides)；美国专利号5,672,662(Poly(ethyleneglycol)and related polymers monosubstituted with propionic orbutanoic acidsand functional derivatives thereof for biotechnicalapplications)；美国专利号6,077,939(PEGylation of an N-terminal.alpha.-carbonof a peptide)；Veronese等,(1985)Appl.Biochem.Bioechnol 11:141-142(PEGylationof an N-terminalα-carbon of a peptide with PEG-nitrophenylcarbonate("PEG-NPC")or PEG-trichlorophenylcarbonate)；和Veronese(2001)Biomaterials 22:405-417(肽和蛋白PEG化的综述文章)]。
例如，PEG可经由反应性基团与氨基酸残基共价结合。反应性基团是活化的PEG分子可结合的那些(例如，游离氨基或羧基基团)。例如，N-末端氨基酸残基和赖氨酸(K)残基具有游离的氨基基团；而C-末端氨基酸残基具有游离的羧基基团。硫醇基团(例如，如半胱氨酸残基上存在的)也可用作连接PEG的反应性基团。另外，用于特异性地在多肽的C-末端处引入活化基团(例如，酰肼、醛和芳族氨基基团)的酶辅助方法已经描述过(参见Schwarz等(1990)Methods Enzymol.184:160；Rose等(1991)Bioconjugate Chem.2:154；和Gaertner等(1994)J.Biol.Chem.269:7224]。
在一些实施方案中，可使用具有不同反应性部分的甲氧基化PEG("mPEG")来连接PEG分子与氨基基团。这样的反应性部分的非限制性实例包括琥珀酰亚胺琥珀酸酯(SS)、琥珀酰亚胺碳酸酯(SC)、mPEG-亚氨酸酯、对硝基苯基碳酸酯(NPC)、琥珀酰亚胺丙酸酯(SPA)和氰脲酰氯。这样的mPEG的非限制性实例包括mPEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)、mPEG2-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG2-SS)；mPEG-琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)、mPEG2-琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG2-SC)；mPEG-亚氨酸酯、mPEG-对硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-亚氨酸酯；mPEG2-对硝基苯基碳酸酯(mPEG2-NPC)；mPEG-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG2-SPA)；mPEG2-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG,--SPA)；mPEG-N-羟基-琥珀酰亚胺(mPEG-NHS)；mPEG2-N-羟基-琥珀酰亚胺(mPEG2--NHS)；mPEG-氰脲酰氯；mPEG2-氰脲酰氯；mPEG2-赖氨醇-NPC和mPEG2-Lys-NHS。
通常，构成PEG单元的PEG链中的至少之一被官能化，使得其能够与其他连接子单元组分共价连接。
官能化包括例如经由胺、硫醇、NHS酯、马来酰亚胺、炔、叠氮化物、羰基或一些其他官能团。在一些实施方案中，PEG单元还包含非PEG材料(即，不是由–CH2CH2O-组成的材料)，其提供与其他连接子单元组分的偶联或者促进两条或更多条PEG链的偶联。
连接子单元中PEG单元(或其他分配剂)的存在可能对所得喜树碱缀合物的药代动力学产生两个潜在影响。期望的影响是清除率的下降(和随之而来暴露的增加)，这产生于喜树碱缀合物暴露的疏水性成分或暴露于喜树碱本身的疏水性成分所引起的非特异性相互作用的减少。第二个影响是不期望的并且是体积的减小和分配速率的降低，这有时产生于喜树碱缀合物的分子量的增加。
增加PEG亚单元的数量会增大缀合物的流体动力学半径，这通常导致扩散性的降低。继而，扩散性的降低通常减弱喜树碱缀合物穿透到肿瘤中的能力(Schmidt和Wittrup,Mol Cancer Ther 2009；8:2861-2871)。由于这两种相互竞争的药代动力学作用，故希望使用足够大的PEG以降低喜树碱缀合物的清除率，从而增加血浆暴露，但又不大到会大大减弱其扩散性到其干扰喜树碱缀合物到达预期的靶细胞群体的能力的程度。关于针对特定的药物-连接子选择最佳PEG大小的方法，参见实例(例如，US2016/0310612的实施例1、18和21，其以引用方式并入本文)。
在一组实施方案中，PEG单元包含一条或多条线形PEG链，每条链具有至少2个亚单元、至少3个亚单元、至少4个亚单元、至少5个亚单元、至少6个亚单元、至少7个亚单元、至少8个亚单元、至少9个亚单元、至少10个亚单元、至少11个亚单元、至少12个亚单元、至少13个亚单元、至少14个亚单元、至少15个亚单元、至少16个亚单元、至少17个亚单元、至少18个亚单元、至少19个亚单元、至少20个亚单元、至少21个亚单元、至少22个亚单元、至少23个亚单元或至少24个亚单元。在优选的实施方案中，PEG单元包含总计至少4个亚单元、至少6个亚单元、至少8个亚单元、至少10个亚单元或至少12个亚单元。在一些这样的实施方案中，PEG单元包含不超过总计约72个亚单元、优选不超过总计约36个亚单元。
在另一组实施方案中，PEG单元包含总计4至72、4至60、4至48、4至36或4至24个亚单元，5至72、5至60、5至48、5至36或5至24个亚单元，6至72、6至60、6至48、6至36或6至24个亚单元，7至72、7至60、7至48、7至36或7至24个亚单元，8至72、8至60、8至48、8至36或8至24个亚单元，9至72、9至60、9至48、9至36或9至24个亚单元，10至72、10至60、10至48、10至36或10至24个亚单元，11至72、11至60、11至48、11至36或11至24个亚单元，12至72、12至60、12至48、12至36或12至24个亚单元，13至72、13至60、13至48、13至36或13至24个亚单元，14至72、14至60、14至48、14至36或14至24个亚单元，15至72、15至60、15至48、15至36或15至24个亚单元，16至72、16至60、16至48、16至36或16至24个亚单元，17至72、17至60、17至48、17至36或17至24个亚单元，18至72、18至60、18至48、18至36或18至24个亚单元，19至72、19至60、19至48、19至36或19至24个亚单元，20至72、20至60、20至48、20至36或20至24个亚单元，21至72、21至60、21至48、21至36或21至24个亚单元，22至72、22至60、22至48、22至36或22至24个亚单元，23至72、23至60、23至48、23至36或23至24个亚单元，或者24至72、24至60、24至48、24至36或24个亚单元。
可用于本文提供的任何实施方案的说明性线性PEG单元如下：
Figure BDA0002922313000000911
其中波浪线表示与并行接头单元(B)的连接位点，并且每个n独立地选自4至72、6至72、8至72、10至72、12至72、6至24、或8至24。在一些实施方案中，下标b为约4、约8、约12或约24。
如本文所述，选择PEG单元使得其改进所得喜树碱缀合物的清除率但不显著影响缀合物穿透到肿瘤中的能力。在实施方案中，要选择使用的PEG单元优选具有4个亚单元至约24个亚单元、更优选约4个亚单元至约12个亚单元。
在本公开的优选实施方案中，PEG单元为约300道尔顿至约5千道尔顿；约300道尔顿至约4千道尔顿；约300道尔顿至约3千道尔顿；约300道尔顿至约2千道尔顿；或约300道尔顿至约1千道尔顿。在一些这样的方面，PEG单元具有至少6个亚单元或者至少8、10或12个亚单元。在一些这样的方面，PEG单元具有至少6个亚单元或者至少8、10或12个亚单元，但不超过72个亚单元、优选不超过36个亚单元。
应理解，当提及PEG亚单元时，并取决于上下文，亚单元的数目可以代表平均数目，例如当提及喜树碱缀合物或喜树碱-连接子化合物的群体和使用多分散PEG时。
并行接头单元(B)：
在一些实施方案中，喜树碱缀合物和喜树碱连接子化合物将包含并行接头单元以提供与分配剂的连接点(在连接子单元中以-B(S*)-示出)。作为一般性的实施方案，PEG单元可连接到并行接头单元如赖氨酸，如下所示，其中波浪线和星号表示喜树碱缀合物或喜树碱连接子化合物的连接子单元内的共价键合：
Figure BDA0002922313000000921
间隔子单元(Y)：
在一些实施方案中，本文提供的喜树碱缀合物将在可释放连接子(RL)与喜树碱之间具有间隔子(Y)。间隔子单元可以是促进RL与喜树碱的连接的官能团，或者其可提供附加的结构组分以进一步促进喜树碱从缀合物的其余部分的释放(例如，氨基甲酸亚甲酯单元)。
在那些进一步促进喜树碱单元作为游离药物释放的实施方案中，示例性间隔子单元由下式表示：
Figure BDA0002922313000000922
其中EWG是吸电子基团，R1为–H或C1-C4烷基，并且下标n为1或2。在一些实施方案中，EWG选自-CN,-NO2、-CX3、-X、C(＝O)OR’、-C(＝O)N(R’)2、-C(＝O)R’、-C(＝O)X、-S(＝O)2R’、-S(＝O)2OR’、-S(＝O)2NHR’、-S(＝O)2N(R’)2、-P(＝O)(OR’)2、-P(＝O)(CH3)NHR’、-NO、-N(R’)3 +，其中X是-F、-Br、-Cl或-I，并且R’独立选自氢和C1-C6烷基，和其中与式(a)、(a’)、(a”)、(b)和(b’)的每一个中的氮原子相邻的波浪线是与RL共价连接的点，并且与(b)和(b’)的羰基碳原子相邻的波浪线是与式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱化合物或表I的化合物14a-14z的任何一种和表J的化合物18a-18r的任何一种的羟基或伯胺或仲胺的杂原子共价连接的点，和其中：
式(a)、式(a’)和式(a”)代表示例性氨基甲酸亚甲酯单元，其中T*是来自式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱化合物或表I的化合物14a-14z的任何一种和表J的化合物18a-18r的任何一种的羟基或伯胺或仲胺官能团的杂原子，并且其中与T*相邻的波浪线是与对应于喜树碱化合物的结构的喜树碱药物单元的其余部分共价连接的点。
在其他实施方案中，作为氨基甲酸亚甲酯单元的间隔子单元由下式表示：
Figure BDA0002922313000000931
其中每个R独立地为H或C1-C4烷基的式(a1)和式(a1’)表示氨基甲酸亚甲基酯单元，其中O*是来自式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的喜树碱化合物或表I的化合物14a-14z的任何一种和表J的化合物18a-18r的任何一种的内酯环的羟基取代基，或来自式CPT5或CPT7喜树碱化合物的另一个羟基取代基，或来自CPT6的RF或RF’的羟基取代基的氧原子，其中RF和RF’的至少一个是C1-C8羟烷基N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)-氨基-C1-C8烷基-或N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基C(O)-，
并且式(a1)、式(a1’)和式(b1)的波浪线保留分别来自式(a)、(a’)和(b)的之前含义。在式(a1’)中，–CH2CH2N+(R)2部分表示质子化形式的示例性碱性单元。
不受理论的束缚，方案1b描述了从连接至具有自消除部分的喜树碱缀合物中的氨基甲酸亚甲酯单元的喜树碱释放游离药物的机制。在该方案中，T*是来自并入氨基甲酸亚甲酯单元的喜树碱化合物的羟基或伯胺或仲胺的杂原子。
方案1b：
Figure BDA0002922313000000941
下标“p”
在本发明的一组实施方案中，下标p表示一个单独的喜树碱缀合物的配体单元上的药物连接子部分的数目并且是优选在1至16、1至12、1至10或1至8的范围内的整数。单独的喜树碱缀合物也可称为喜树碱缀合物化合物。在那组实施方案中，有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个缀合到一个单独的喜树碱缀合物的配体单元的药物连接子部分。在本发明的另一组实施方案中，喜树碱缀合物描述了除与每个配体单元键合的喜树碱药物连接子部分的数目外基本上相同的单独喜树碱缀合物化合物的群体(即，喜树碱缀合物组合物)，使得下标p表示与喜树碱缀合物组合物的配体单元键合的喜树碱药物连接子部分的平均数目。在该组实施方案中，下标p为在1至约16、1至约12、1至约10、或1至约8、2至约16、2至约12、2至约10、或2至约8的范围内的数。在一些实施方案中，下标p的值是指平均药物载量以及组合物中占主导地位的ADC的药物载量。
在一些实施方案中，缀合将经由链间二硫化物进行并且将有1至约8个喜树碱连接子化合物分子与变成配体单元的靶向剂缀合。在一些实施方案中，缀合将经由引入的半胱氨酸残基以及链间二硫化物进行并且将有1至10或1至12或1至14或1至16个喜树碱连接子化合物部分与配体单元缀合。在一些实施方案中，缀合将经由引入的半胱氨酸残基进行并且将有2或4个喜树碱连接子化合物分子与配体单元缀合。
喜树碱药物-连接子化合物
Figure BDA0002922313000000951
Figure BDA0002922313000000961
Figure BDA0002922313000000962
葡糖醛酸残基被甘露糖代替
mDPR＝马来酰亚胺基-氨基丙酰基:
Figure BDA0002922313000000963
mPR＝马来酰亚胺基-丙酰基:
Figure BDA0002922313000000964
PropargOPr＝-(C＝O)CH2CH2OCH2C≡CH
其他喜树碱药物连接子化合物
Figure BDA0002922313000000965
Figure BDA0002922313000000971
Figure BDA0002922313000000981
喜树碱缀合物混合物和组合物
本发明提供了包含任何本文所述的喜树碱缀合物的喜树碱缀合物混合物和药物组合物。混合物和药物组合物包含多个缀合物。在一些实施方案中，混合物或组合物中的每个缀合物是相同或基本上相同的，然而，混合物或组合物中配体上药物-连接子的分布可变化，并且药物载量也可变化。例如，在一些实施方案中，用来缀合药物-连接子与作为靶向剂的抗体的缀合技术可产生就混合物和/或组合物内抗体(配体单元)上喜树碱连接子化合物的分布而言不均匀的组合物或混合物。在一些那些实施方案中，在这样的分子的混合物或组合物中，每个抗体分子上喜树碱连接子化合物的载量为1至16的范围内的整数。
在这些实施方案中，当以整体提及组合物时，药物-连接子的载量为1至约16的范围内的数。在组合物或混合物内，有时存在小百分数的未缀合抗体。混合物或组合物中每个配体单元的平均药物-连接子数目(即，平均药物载量)是一种重要的属性，因为它涉及可递送至靶细胞的最大药物量。通常，平均药物载量为1、2或约2、3或约3、4或约4、5或约5、6或约6、7或约7、8或约8、9或约9、10或约10、11或约11、12或约12、13或约13、14或约14、15或约15、16或约16。
在一些实施方案中，混合物和药物组合物包含多个(即，一群)缀合物，然而，就混合物和/或组合物内配体分子上药物-连接子的分布而言和就混合物和/或组合物内配体分子上药物-连接子的载量而言，这些缀合物是相同或基本上相同的并且是基本上均匀的。在一些这种实施方案中，抗体配体单元上药物-连接子的载量为2或4。在组合物或混合物内，也可能存在小百分数的未缀合抗体。在这样的实施方案中，平均药物载量为约2或约4。通常，这样的组合物和混合物因位点特异性缀合技术的使用而产生，并且缀合归因于引入的半胱氨酸残基。
来自缀合反应的制剂中每个配体单元的平均喜树碱或喜树碱-连接子化合物数目通常通过常规措施如质谱法、ELISA测定法、HPLC(例如，HIC)来表征。在那些情况下，通常确定喜树碱缀合物就下标p而言的定量分布。在其他情况下，均匀的喜树碱缀合物的分离、纯化和表征通常通过传统措施如反相HPLC或电泳实现。
在一些实施方案中，组合物为包含本文所述的喜树碱缀合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些那些实施方案中，药物组合物呈液体形式。在其他那些实施方案中，药物组合物为冻干粉。
组合物，包括药物组合物，可以以纯化的形式提供。如本文所用，“纯化的”指的是当分离时，分离物含分离物的重量的至少95％、在其他实施方案中至少98％的缀合物。
使用方法
治疗癌症
喜树碱缀合物可用于抑制肿瘤细胞或癌细胞的增殖，引起肿瘤或癌细胞的凋亡，或用于在患者中治疗癌症。喜树碱缀合物相应地用于多种环境中以治疗癌症。喜树碱缀合物意欲用来向肿瘤细胞或癌细胞递送药物。不受理论的束缚，在一个实施方案中，喜树碱缀合物的配体单元将与癌细胞或肿瘤细胞相关抗原结合或缀合，并且喜树碱缀合物在肿瘤细胞或癌细胞内通过受体介导的内吞作用或其他内在化机制被吸收(内在化)。在一些实施方案中，抗原连接到肿瘤细胞或癌细胞，或者可以是与肿瘤细胞或癌细胞相关的细胞外基质蛋白。一旦进入细胞中，经由活化单元的活化，药物在细胞内释放。在一个替代的实施方案中，游离药物在肿瘤细胞或癌细胞外从喜树碱缀合物释放，并且游离药物随后穿透细胞。
在一个实施方案中，配体单元与肿瘤细胞或癌细胞结合。
在另一个实施方案中，配体单元与肿瘤细胞或癌细胞的表面上的肿瘤细胞或癌细胞抗原结合。
在另一个实施方案中，配体单元与肿瘤细胞或癌细胞抗原结合，所述肿瘤细胞或癌细胞抗原是与肿瘤细胞或癌细胞相关的细胞外基质蛋白。
配体单元对特定肿瘤细胞或癌细胞的特异性对于确定被最有效地治疗的肿瘤或癌症是重要考虑。例如，靶向存在于造血系统癌症中的癌细胞抗原的喜树碱缀合物用于治疗血液系统恶性肿瘤(例如，抗CD30、抗CD70、抗CD19、抗CD33结合配体单元(例如，抗体)用于治疗血液系统恶性肿瘤)。在一些实施方案中，靶向存在于实体瘤上的癌细胞抗原的喜树碱缀合物可用于治疗这样的实体瘤。
意欲用喜树碱缀合物治疗的癌症包括但不限于造血系统癌症，如例如淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)以及白血病和实体瘤。造血系统癌症的实例包括滤泡性淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤。实体瘤的实例包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结直肠癌、肾癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆斯氏瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、小细胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。
在优选的实施方案中，所治疗的癌症为上述淋巴瘤和白血病中的任一种。
癌症的多模式疗法
意欲通过施用治疗有效量的喜树碱缀合物来治疗或抑制癌症，其包括但不限于以细胞生长不受控制为特征的肿瘤、转移瘤或其他疾病或病症。
在一组实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的喜树碱缀合物和化疗剂。在一个实施方案中，所述化疗剂为用该试剂治疗癌症尚未发现难治的化疗剂。在另一个实施方案中，所述化疗剂为用该试剂治疗癌症已发现难治的化疗剂。
在另一组实施方案中，将喜树碱缀合物施用于也已进行手术治疗癌症的患者。在这样的实施方案中，通常在一系列疗程中施用化疗剂，或施用化疗剂的一种或组合，例如一种或多种标准护理化疗剂。
在另一组实施方案中，患者还接受另外的治疗，如放射疗法。在一个具体的实施方案中，喜树碱缀合物与化学治疗剂或与放射疗法同时施用。在另一个具体的实施方案中，在施用喜树碱缀合物之前或之后施用化疗剂或放射疗法。
另外，提供了用喜树碱缀合物治疗癌症的方法作为化学疗法或放射疗法的替代品，其中化学疗法或放射疗法已证明或可能证明对于被治疗的受试者毒性太大，例如，导致不可接受或无法忍受的副作用。被治疗的患者可任选地用另一种癌症治疗方法如手术、放射疗法或化疗治疗，具体取决于发现哪种治疗可接受或可忍受。
治疗自身免疫疾病
喜树碱缀合物意欲用于杀伤或抑制产生自身免疫疾病的细胞的不希望的复制或用于治疗自身免疫疾病。
喜树碱缀合物相应地用于多种环境中以在患者中治疗自身免疫疾病。喜树碱缀合物通常用于向靶细胞递送喜树碱药物。不受理论的束缚，在一个实施方案中，喜树碱缀合物与促炎性或被不适当地刺激的免疫细胞的表面上的抗原缀合，然后喜树碱缀合物通过受体介导的内吞作用被吸收在靶细胞中。一旦进入细胞中，连接子单元将被裂解，从而导致作为游离药物的喜树碱药物单元的释放。喜树碱游离药物然后可在细胞溶质内迁移并诱导细胞毒性或细胞抑制活性。在一个替代的实施方案中，喜树碱药物单元在靶细胞外从喜树碱缀合物裂解，随后释放得到的喜树碱游离药物渗透细胞。
在一个实施方案中，配体单元与自身免疫抗原结合。在这种实施方案中，抗原在自身免疫病中涉及的细胞的表面上。
在一个实施方案中，配体单元与自身免疫疾病状态相关的活化淋巴细胞结合。
在又一个实施方案中，喜树碱缀合物杀伤或抑制产生与特定自身免疫疾病相关的自身免疫抗体的细胞的增殖。
意欲用喜树碱缀合物治疗的自身免疫疾病的特定类型包括但不限于Th2淋巴细胞相关病症(例如，特应性皮炎、特应性哮喘、鼻结膜炎、过敏性鼻炎、Omenn综合征、全身性硬化症和移植物抗宿主病)；Th1淋巴细胞相关病症(例如，类风湿性关节炎、多发性硬化症、牛皮癣、干燥综合征、桥本甲状腺炎、Grave病、原发性胆汁性肝硬化、韦格纳氏肉芽肿和结核病)；和活化的B淋巴细胞相关病症(例如，系统性红斑狼疮、肺出血-肾炎综合征、类风湿性关节炎和I型糖尿病)。
自身免疫疾病的多药物疗法
还公开了用于治疗自身免疫疾病的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的喜树碱缀合物和已知用于治疗自身免疫疾病的另一种治疗剂。
组合物和施用方法
本发明提供了包含本文所述的喜树碱缀合物和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。药物组合物呈允许将化合物施用给患者以治疗与配体单元结合的抗原的表达相关的病症的任何形式。例如，缀合物呈液体或固体的形式。优选的施用途径是肠胃外。肠胃外施用包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术。在一个实施方案中，组合物肠胃外施用。在一个实施方案中，缀合物静脉内施用。通过任何方便的途径进行施用，例如通过输注或推注。
配制药物组合物以使得在向患者施用组合物后喜树碱缀合物是可生物利用的。组合物有时呈一个或多个剂量单位的形式。
在药物组合物的制备中使用的材料在使用的量上优选是无毒的。对于本领域普通技术人员显而易见的是，药物组合物中一种或多种活性成分的最佳剂量将取决于多种因素。相关因素包括但不限于动物的类型(例如，人)、化合物的特定形式、施用的方式和所采用的组合物。
在一些实施方案中，组合物呈液体形式。在一些那些实施方案中，液体用于通过注射递送。在一些实施方案中，除了喜树碱缀合物，用于通过注射施用的组合物包含选自以下的一种或多种赋形剂：表面活性剂、防腐剂、湿润剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂。
在一些实施方案中，液体组合物，无论它们是溶液、悬浮液还是其他类似形式，包含以下中的一种或多种：无菌稀释剂(如注射用水)、盐水溶液(优选生理盐水)、林格氏溶液、等渗氯化钠、可充当溶剂或悬浮介质的不挥发性油如合成的甘油单酯或甘油二酯、聚乙二醇、甘油、环糊精、丙二醇或其他溶剂；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如氨基酸、乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；洗涤剂，如非离子表面活性剂、多元醇；以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。肠胃外组合物有时封装在由玻璃、塑料或其他材料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水是示例性的佐剂。可注射组合物优选是无菌的。
在一些实施方案中，在特定病症或病的治疗中有效的缀合物的量将取决于疾病或病症的性质，并通过标准临床技术来确定。另外，任选采用体外或体内测定法来帮助鉴定最佳剂量范围。组合物中待采用的精确剂量还取决于施用途径以及疾病或病症的严重性，并应根据从业者的判断和每个患者的情况来决定。
组合物包含有效量的喜树碱缀合物，以便获得合适的剂量。通常，该量为组合物的至少约0.01重量％的化合物。
对于静脉内施用，药物组合物通常包含约0.01至约100mg喜树碱缀合物每kg动物体重。在一个实施方案中，组合物可包含约1至约100mg喜树碱缀合物每kg动物体重。在另一个方面，所施用的量将在约0.1至约25mg化合物/kg体重的范围内。取决于所使用的药物，剂量可甚至更低，例如1.0μg/kg至5.0mg/kg、4.0mg/kg、3.0mg/kg、2.0mg/kg或1.0mg/kg、或1.0μg/kg至500.0μg/kg受试者体重。
通常，施用给患者的缀合物的剂量通常为约0.01mg/kg至约100mg/kg受试者体重或者1.0μg/kg至5.0mg/kg受试者体重。在一些实施方案中，施用给患者的剂量在约0.01mg/kg至约15mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用给患者的剂量在约0.1mg/kg至约15mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用给患者的剂量在约0.1mg/kg至约20mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用的剂量在约0.1mg/kg至约5mg/kg或约0.1mg/kg至约10mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用的剂量在约1mg/kg至约15mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用的剂量在约1mg/kg至约10mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，在一个治疗周期内，施用的剂量在约0.1至4mg/kg、甚至更优选0.1至3.2mg/kg、或甚至更优选0.1至2.7mg/kg受试者体重之间。
术语“载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂或赋形剂。在一些实施方案中，这样的药物载体是液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油。其他载体包括盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体氧化硅、尿素。另外，有时使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施方案中，当向患者施用时，喜树碱缀合物及其组合物和药学上可接受的载体是无菌的。
当化合物静脉内施用时，水是示例性的载体。盐水溶液以及右旋糖和甘油水溶液经常用作液体载体，特别是对于可注射溶液。合适的药物载体还包括赋形剂如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇。如果需要，本发明的组合物还可含少量的湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。
在一个实施方案中，根据常规程序将缀合物配制成适于静脉内施用给动物、特别是人类的药物组合物。通常，用于静脉内施用的载体或媒介物为无菌的等渗水性缓冲溶液。必要时，组合物包含增溶剂。用于静脉内施用的组合物任选包含局部麻醉剂如利多卡因以减轻注射部位的疼痛。通常，将成分分开或以单位剂型混合在一起提供，例如，作为干燥的冻干粉或无水浓缩物在指示活性剂的量的密闭容器如安瓿瓶或小药囊中提供。当通过输注施用缀合物时，其通常例如用装有无菌药物级水或盐水的输注瓶分配。当通过注射施用缀合物时，有时提供一安瓿瓶的无菌注射用水或盐水以便可在施用之前将成分混合。
药物组合物通常被配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品和药物管理局的所有良好生产规范(GMP)规定。
制备喜树碱缀合物的方法
本文所述的喜树碱缀合物以抗体、连接子和药物单元的串联构造制备，或通过组装各部分、然后完成组装步骤以收敛的方式制备。库尔修斯重排或氯胺合成可用于提供氨基甲酸亚甲酯连接子(间隔子)，其用于本文所述缀合物的许多实施方案中。
方案2：使用库尔修斯重排反应制备式Z’-A-RL-Y-D、Z’-A-S*-RL-Y-D或Z’-A-B(S*)-RL-Y-D的示例性喜树碱药物-连接子化合物，其中Y具有式(a’)：
Figure BDA0002922313000001061
方案2示出了涉及游离药物的酰基叠氮化物衍生物的库尔修斯重排的合成策略，其中CPT是喜树碱药物单元，其结构对应于具有羟基官能团的喜树碱化合物，由O*表示的羟基官能团的氧原子被掺入作为重排而形成的氨基甲酸亚甲酯单元中，Z'是延伸子单元前体，RL是可释放连接子并且X是-A-、-A-S*-或–A-B(S*)-，其中A是接头单元，S*是分配剂并且B是并行接头单元。该策略可适用于含有多种醇或其他杂原子的喜树碱药物，作为获得区域选择性的手段，因为存在许多互补的烷基化方法以形成酰基叠氮化物如：卤代酯烷基化、卤代酸烷基化或用重氮乙酸乙酯或重氮乙酸甲酯插入金属碳烯，参见Doyle,M.等ModernCatalytic Methods for Organic Synthesis with Diazo Compounds；Wiley:New York,1998。然后将酰基叠氮化物与至少化学计量的式Z’-X-RL-OH的含醇连接子单元中间体一起加热。
方案3：经由N-氯甲胺合成式Z’-A-RL-Y-D、Z’-A-S*-RL-Y-D或Z’-A-B(S*)-RL-Y-D的示例性喜树碱药物-连接子化合物的替代制备，其中间隔子单元Y为式(a)或式(a’)的氨基甲酸亚甲酯单元：
Figure BDA0002922313000001071
其中R1为氢或C1-C4烷基，R为-H或–CH2CH2SO2Me，其他可变基团的含义来自方案2。
N-氯甲胺合成是库尔修斯重排的替代方法，因为它允许引入未修饰的醇或其他包含杂原子的喜树碱化合物，其使用可能与形成方案2的酰基叠氮化物所需的条件不相容，并且通过与反应性N-氯甲胺缩合而进行。该方法也更适合引入某些类型的氨基甲酸亚甲酯单元，如例如方案4所示。
方案4阐明其中间隔子单元(Y)是式(a”)的氨基甲酸亚甲酯单元的式Z’-A-RL-Y-D、Z’-A-S*-RL-Y-D或Z’-A-B(S*)-RL-Y-D的示例性喜树碱-连接子化合物的合成。对硝基苯基碳酸酯与环状氨基的反应提供氨基甲酸酯，然后将其转化为氯环烷基胺，以与来自游离喜树碱药物的巯基、羟基、胺或酰胺官能团的亲核试剂进行烷基化。或者，可以在药物部分存在下用酸处理氨基甲酸酯以组装所示的药物-连接子中间体。将烷基化产物脱保护，然后使所得的游离胺与3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯缩合，从而引入共价连接至接头单元的延伸子单元前体，从而提供喜树碱-连接子化合物。然后将所得的喜树碱-连接子化合物与含硫醇的靶向剂缩合，以提供具有包含自消除部分和式a”的氨基甲酸亚甲基酯单元的间隔子单元的喜树碱缀合物。
方案4：制备式Z’-A-RL-Y-D的示例性喜树碱药物连接子化合物，其中间隔子单元Y是式(a”)氨基甲酸亚甲基酯单元。
Figure BDA0002922313000001081
对于其中T*是喜树碱化合物的伯胺或仲胺取代基的氮原子的具有氨基甲酸亚甲酯单元的喜树碱-连接子化合物和喜树碱缀合物，在按照方案3或方案4提供的通用步骤后用氯甲胺直接烷基化可能不适合，因为来自游离药物的胺官能团的氮杂原子被过度或不期望地过烷基化。那些情况下，可以使用方案5所体现的方法。
方案5
Figure BDA0002922313000001082
在方案5中，制备中间体氨基甲酸酯，其已具有碱性单元(即，二甲基氨基乙基部分)作为式(a1’)氨基甲酸亚甲酯单元的R取代基。该氨基甲酸酯的氮与甲醛缩合，并且所得中间体用含脂族胺的喜树碱药物的胺官能团淬灭。N*代表来自该官能团的氮原子。该缩合形成共价连接到喜树碱药物单元的式(a1’)的氨基甲酸亚甲酯，其中R1是氢和R是二甲基氨基乙基。然后将苯基硝基还原为胺，从而为依次引入接头单元(A)和延伸子单元前体(Z’)提供处理。
编号的实施方案
以下编号的实施方案描述了本发明的各种非限制性方面。
1.一种具有式L-(Q-D)p的喜树碱缀合物或其盐，其中L为配体单元；下标p是1-16的整数；Q为具有选自以下的式的连接子单元：-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、Z-A-S*-W-、-Z-A-S*-W-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-B(S*)-W-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子；W为氨基酸单元；Y为间隔子单元；和D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的药物单元：
Figure BDA0002922313000001091
Figure BDA0002922313000001101
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；或
D是选自表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r的药物单元；
并且其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7中任一个或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的羟基或脂族伯氨基或仲氨基取代基中任一个的杂原子，或
其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7中任一个或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6的脂族伯氨基或仲氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，以及条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的化合物CPT1时，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的-Z-A-不是琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分，其任选作为琥珀酸酰胺部分以水解的形式具有琥珀酰亚胺环。
2.根据实施方案1的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自–Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和–Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元，其中A为接头单元和RL为葡糖苷酸单元。
3.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7中任何一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
4.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过表H的13a-13c、表I的14a-14z或表J的18a-18r中任一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
5.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT6的RF或RF’的羟基取代基的氧原子，其中RF和RF’的至少一个是C1-C8羟基烷基N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)-氨基-C1-C8烷基-、N-C1-C4羟基烷基-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基C(O)-。
6.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT6的RF或RF’的胺取代基的氮原子，其中RF和RF’的至少一个是C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-、N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-或C1-C8氨基烷基C(O)-。
7.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT1的氨基取代基的氮原子，条件是-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
8.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是CPT4的氨基取代基的氮原子。
9.根据实施方案1或2的喜树碱缀合物，其中共价连接点是通过CPT6上取代基的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H。
10.根据实施方案1-9任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-RL-和-Z-A-RL-Y-的式的连接子单元。
11.根据实施方案1-9任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和-Z-A-S*-RL-Y-的式的连接子单元。
12.根据实施方案1-9任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-B(S*)-RL-和–Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元。
13.根据实施方案1-3和7任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT1。
14.根据实施方案1-3任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT2。
15.根据实施方案1-3任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT3。
16.根据实施方案1-3和8任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT4。
17.根据实施方案1-3任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT5。
18.根据实施方案1-3、5、6和9任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT6。
18.根据实施方案1-3任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT7。
19.根据实施方案2-18任一项的喜树碱缀合物，其中RL是具有下式的葡糖苷酸单元：
Figure BDA0002922313000001131
其中Su是单糖的己糖形式，特别是葡糖醛酸或甘露糖残基；O’表示能够被糖苷酶裂解的糖苷键的氧原子；标记有单星号(*)的波浪线表示与其中RF和RF’的至少一个是-H的CPT1、CPT4、CPT6或表H的13b和13c、表I的14a-14f和14i-14o、14s和14u-14z和表J的18q和18r中的任一个的脂族伯或仲氨基取代基的氮原子共价连接的位点，或与间隔子单元(Y)的共价连接位点，或表示与CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表H的13a-13c和表I的14a-14z或表J的18a-18r中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子共价连接的位点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与Q的其余部分共价连接的位点。
20.根据实施方案19的喜树碱缀合物，其中Q是具有-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元；并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001132
其中EWG是吸电子基团；O*代表来自D的羟基官能团的氧原子；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点。
21.根据实施方案19的喜树碱缀合物，其中Q是具有-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元；D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6，并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001141
其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
22.根据实施方案19的喜树碱缀合物，其中Q是具有-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元；D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6，并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001142
其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
23.根据实施方案1-22任一项的喜树碱缀合物，其中A是接头单元，其中接头单元由三唑基部分构成，其中三唑部分任选由来自化学修饰的靶向剂的叠氮基取代基的1,3-二极环加成而形成，所述靶向剂是药物连接子化合物的炔基部分的缀合物配体单元的前体。
24.根据实施方案1-22任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分的琥珀酸酰胺部分，条件是-ZA-由琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或当CPT1通过其氨基取代基的氮原子共价连接时可衍生自mDPR部分的琥珀酸酰胺部分。
25.根据实施方案1-22任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，条件是当D是CPT1时，D具有与其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接。
26.根据实施方案1-22任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成。
27.根据实施方案26的喜树碱缀合物或其盐，其中Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001151
其中琥珀酰亚胺环为作为琥珀酸酰胺部分的水解形式；标记有单星号(*)的波浪线表示与其中RF和RF’是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氮原子共价连接的位点，或与间隔子单元的共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
28.根据实施方案2-26任一项的喜树碱缀合物，其中RL是具有下式的葡糖苷酸单元：
Figure BDA0002922313000001152
其中标记有单星号(*)的波浪线表示与CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的内酯环上的羟基取代基的氧原子，或与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子，或与间隔子单元(Y)的共价连接的点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与A、B、S*或Z共价连接的点。
29.根据实施方案28的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-；-Z-A-B(S*)-RL-；-Z-A-S*-RL-Y-；和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-丙酰基部分构成。
30.根据实施方案29的喜树碱缀合物，其中Q是具有下式的-Z-A-S*-RL-：
Figure BDA0002922313000001161
其中下标n为1-50的整数；标记有单星号(*)的波浪线表示与D或间隔子单元(Y)的共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子的共价连接的点。
31.根据实施方案30的喜树碱缀合物，其中下标n为4。
32.根据实施方案2的喜树碱缀合物或其盐，其中-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001162
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示与配体单元的硫原子的共价连接。
33.根据实施方案2的喜树碱缀合物或其盐，其中-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001171
其中波浪线表示与配体单元的硫原子的共价连接并且琥珀酰亚胺环是作为琥珀酸酰胺部分的水解形式。
34.根据实施方案2的喜树碱缀合物或其盐，其中-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001172
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示与配体单元的硫原子的共价连接。
35.根据实施方案1-34任一项的喜树碱缀合物，其中L来自抗体。
36.根据实施方案35的喜树碱缀合物，其中所述抗体特异性结合选自CD19、CD30、CD33、CD70和LIV-1的抗原。
37.根据实施方案1的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-、-Z-A-S*-W-和-Z-A-B(S*)-W-的式的连接子单元，其中A是连接子单元，或Q是具有选自-Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和–Z-A-B(S*)-W-RL的式的连接子单元，其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放连接子。
38.根据实施方案37的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-S*-W-或-Z-A-S*-W-RL-的连接子单元。
39.根据实施方案37的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-RL-或-Z-A-S*-RL-的连接子单元。
40.根据实施方案37的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-的连接子单元。
41.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT2。
42.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT3。
43.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT1。
44.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT4。
45.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT5。
46.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT6。
47.根据实施方案37-40任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT7。
48.根据实施方案37-47任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自–Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，并且RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001181
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；并且标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
49.根据实施方案48的喜树碱缀合物，其中-Q-D具有式-Z-A-S*-W-RL-D，其中D是其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6，其与胺官能团的氮原子共价连接；并且W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸、N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元，或D是与内酯环上羟基取代基的氧原子共价连接的CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7；并且W是选自谷氨酸或赖氨酸的氨基酸单元。
50.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑部分构成，各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR的琥珀酸酰胺部分。
51.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分构成。
52.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成。
53.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中-Z-A-具有选自以下的式：
Figure BDA0002922313000001191
任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
54.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001201
其中下标n是2-36的整数。
55.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中-Z-A-具有下式：
Figure BDA0002922313000001202
任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
56.根据实施方案37-49任一项的喜树碱缀合物，其中Q是具有式–Z-A-S*-W-或–Z-A-S-W-RL-的连接子单元，其中RL不是葡糖苷酸单元，其中任一式中的–Z-A-S*-W-具有下式：
Figure BDA0002922313000001203
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中下标n是2-10的整数；标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
57.根据实施方案56的喜树碱缀合物，其中下标n是2-4的整数。
58.根据实施方案49的喜树碱缀合物或其盐，其中–Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001211
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示与配体单元的硫原子共价连接的点。
59.根据实施方案49的喜树碱缀合物或其盐，其中–Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001212
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示与配体单元的硫原子共价连接的点。
60.根据实施方案37-59任一项的喜树碱缀合物，其中L是抗体。
61.根据实施方案60的喜树碱缀合物，其中所述抗体特异性结合选自CD19、CD30、CD33、CD70和LIV-1的抗原。
62.一种具有选自式Z’-A-RL-D(i)、Z’-A-RL-Y-D(ii)、Z’-A-S*-RL-D(iii)、-Z’-A-S*-RL-Y-D(iv)、Z’-A-B(S*)-RL-D(v)、Z’-A-B(S*)-RL-Y-D(vi)、Z’-A-D(vii)、Z’-A-S*-W-D(viii)、Z’-A-B(S*)-W-D(ix)、Z’-A-S*-W-RL-D(x)和Z’-A-B(S*)-W-RL-D(xi)的喜树碱-连接子化合物，其中在各式中Z’为延伸子单元前体；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子；Y为间隔子单元；和D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的喜树碱化合物：
Figure BDA0002922313000001221
Figure BDA0002922313000001231
其中RB为选自-H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的部分；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的部分；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；或
D是选自表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r的药物单元；
并且其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7中任一个或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的羟基或脂族伯氨基或仲氨基取代基中任一个的杂原子，或
其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7中任一个或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6的氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，以及条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的喜树碱-连接子化合物的Z’-A-不是琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
63.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物，具有选自式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的式，其中A是接头单元并且RL是葡糖苷酸单元。
64.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
65.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
66.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT6的RF或RF’的羟基取代基的氧原子，其中RF和RF’的至少一个是C1-C8羟基烷基N,N-(C1-C4羟基烷基)(C1-C4烷基)-氨基-C1-C8烷基-、N-C1-C4羟基烷基-C1-C8氨基烷基-、C1-C8烷基C(O)-。
67.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT6的RF或RF’的胺取代基的氮原子，其中RF和RF’的至少一个是C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基-,N-(C1-C4羟基烷基)-C1-C8氨基烷基-或C1-C8氨基烷基C(O)-。
68.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT1的氨基取代基的氮原子，条件是-Z-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
69.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的连接点是CPT4的氨基取代基的氮原子。
70.根据实施方案62或63的喜树碱-连接子化合物，其中D的连接点是通过CPT6上取代基的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H。
71.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)或式(ii)。
72.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(iv)。
73.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(v)或式(vi)。
74.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)。
75.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式式(ii)。
76.根据实施方案62-64、66、67和70-75任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D是CPT6。
77.根据实施方案62-64、69和71-75任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D是CPT4。
78.根据实施方案62-64和71-75任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D选自CPT1、CPT2、CPT3和CPT5。
79.根据实施方案62-78任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’是马来酰亚胺基部分。
80.根据实施方案62-78任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-是马来酰亚胺基丙酰基、马来酰亚胺基丙酰基-β-丙氨酰基或mDPR，其碱性氮任选被酸不稳定的保护基质子化或保护，条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，Z’-A–不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
81.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)，其中S*是PEG基团。
82.根据实施方案63-81任一项的喜树碱-连接子化合物，其中RL是具有以下结构的葡糖苷酸单元：
Figure BDA0002922313000001261
其中标记有单星号(*)的波浪线表示与D或与间隔子单元(Y)共价连接的位点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与A、B或S*共价连接的点。
83.根据实施方案82的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001262
其中EWG是吸电子基团；O*代表来自D的羟基官能团的氧原子；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点。
84.根据实施方案82的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6，并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001263
其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
85.根据实施方案82的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6，并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001271
其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
86.根据实施方案62-85任一项的喜树碱-连接子化合物，其中A由炔基部分构成，该炔基部分能够与来自化学修饰的靶向剂的叠氮基取代基进行1,3-二极环加成，所述靶向剂是喜树碱缀合物的配体单元的前体，从而提供具有由三唑基部分组成的接头单元的缀合物。
87.根据实施方案62-85任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分或马来酰亚胺基和三唑基部分构成，条件是当CPT1具有通过其氨基取代基的氮原子的共价连接时，Z’-A-由马来酰亚胺基和三唑基部分构成。
88.根据实施方案62-85任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，条件是当D是CPT1时，D具有与其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接。
89.根据实施方案58-79任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由mDPR构成，其碱性氮任选被酸不稳定的保护基质子化或保护。
90.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物，具有式(vii)、式(viii)或式(ix)，其中A是接头单元，或具有式(i)、式(iii)、式(x)或式(xi)，其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元之外的可释放连接子。
91.根据实施方案62或90的喜树碱-连接子化合物，具有式(viii)或式(x)。
92.根据实施方案62或90的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)或式(iii)。
93.根据实施方案62或90的喜树碱-连接子化合物，具有式(vii)。
94.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT2。
95.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT3。
96.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT1。
97.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT4。
98.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT5。
99.根据实施方案62和90-93任一项的喜树碱-连接子化合物，其中D具有式CPT6。
100.根据实施方案62和90-99任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)、式(iii)或式(x)，其中RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001281
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；并且标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
101.根据实施方案100的喜树碱-连接子化合物，具有式(x)，其中W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸和N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元。
102.根据实施方案62-101任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分、马来酰亚胺基和三唑部分或mDPR构成，其碱性氮原子任选被酸不稳定的保护基质子化或保护。
102.根据实施方案62-101任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分构成。
103.根据实施方案62-101任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由mDPR构成。
104.根据实施方案62-70任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(x)，其中Z’-A-具有选自以下的式：
Figure BDA0002922313000001291
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点。
105.根据实施方案62-70和94-104任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(x)，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001292
其中下标n是2-36的整数。
106.根据实施方案62-70和94-104任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-具有下式：
Figure BDA0002922313000001293
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点。
107.根据实施方案62-70和94-105任一项的喜树碱-连接子化合物，具有式(viii)或式(x)，其中Z’-A-S*-W-具有下式：
Figure BDA0002922313000001301
其中下标n是2-10的整数；其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
108.根据实施方案107的喜树碱-连接子化合物，其中下标n是2-4的整数。
109.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001302
110.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001303
111.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001311
112.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001312
113.根据实施方案62的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001313
114.喜树碱缀合物在制备用于治疗受试者癌症的药物中的用途，其中所述喜树碱缀合物具有实施方案1-113中任一项的式。
115.根据实施方案114所述的用途，其中所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤。
116.根据实施方案114所述的用途，其中所述癌症是淋巴瘤或白血病。
117.喜树碱缀合物在制备用于治疗受试者的自身免疫疾病的药物中的用途，其中所述喜树碱缀合物具有实施方案1-113中任一项的式，并且所述自身免疫疾病选自Th2淋巴细胞相关疾病、Th1淋巴细胞相关疾病和活化的B淋巴细胞相关疾病。
118.一种制备实施方案1-61中任一项的喜树碱缀合物的方法，所述方法包括接触具有对实施方案62-113中任一项的喜树碱-连接子化合物的Z’具有反应性的官能团的抗体的步骤。
1A.一种具有式L-(Q-D)p的喜树碱缀合物或其盐，其中L为配体单元；Q为具有选自以下的式的连接子单元：-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和–Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为葡糖苷酸单元；和Y为间隔子单元；D为选自以下的药物单元：
Figure BDA0002922313000001331
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；下标p是1-16的整数；和
其中Q通过存在于CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上的任何羟基和胺基连接；和其中当D是CPT1时，通过CPT1的氨基连接，则-Z-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
2A.根据实施方案1A的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-RL-和-Z-A-RL-Y-的式的连接子单元。
3A.根据实施方案1A的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和-Z-A-S*-RL-Y-的式的连接子单元。
4A.根据实施方案1A的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-B(S*)-RL-和–Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元。
5A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT1。
6A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT2。
7A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT3。
8A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT4。
9A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT5。
10A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT6。
11A.根据实施方案1A-4A任一项的喜树碱缀合物，其中L是抗体。
12A.根据实施方案1A的喜树碱缀合物，其中Q包含具有下式的葡糖苷酸单元(RL)：
Figure BDA0002922313000001351
其中Sugar是天然或非天然单糖的己糖形式，并且其中RL与CPT1、CPT4或CPT6任一个的伯胺连接；其中标记有单*的波浪线表示与CPT1、CPT4或CPT6的伯胺或与间隔子单元(Y)连接的位点，并且标记有**的波浪线表示与Q的其他连接子组分连接的位点。
13A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中存在间隔子单元(Y)并且包含：
Figure BDA0002922313000001352
其中EWG是吸电子基团。
14A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中A在使用敲击化学的情况下包含由炔烃和叠氮化物形成的三唑。
15A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酸组分、马来酰亚胺基和三唑组分，或mDPR组分。
16A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基成分。
17A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中Z-A-包含mDPR组分。
18A.根据实施方案12A的喜树碱缀合物，其中Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001353
其中标记有单*的波浪线表示与CPT1、CPT4或CPT6的伯胺或与间隔子单元连接的位点，并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的点。
19A.根据实施方案1A的喜树碱缀合物，其中所述葡糖苷酸单元具有下式：
Figure BDA0002922313000001361
其中标记有单*的波浪线表示与CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6的羟基或与间隔子单元(Y)连接的点；并且标记有**的波浪线表示与A、B、S*或Z连接的点。
20A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中存在间隔子单元并且包含：
Figure BDA0002922313000001362
其中EWG是吸电子基团。
21A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中存在间隔子单元并且包含：
Figure BDA0002922313000001363
22A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中A在使用敲击化学的情况下包含由炔烃和叠氮化物形成的三唑。
23A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酸组分、马来酰亚胺基和三唑组分，或mDPR组分。
24A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基成分。
25A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含mDPR组分。
26A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基丙酰基组分并且分配剂(S*)存在于所述连接子单元中。
27A.根据实施方案19A的喜树碱缀合物，其中Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001371
其中n是1-50的整数，标记有单*的波浪线表示与D或与间隔子单元(Y)连接的位点；并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的点。
28A.根据实施方案27A的喜树碱缀合物，其中n是4。
29A.根据实施方案1A-28A任一项的喜树碱缀合物，其中L是特异性结合选自CD19、CD30、CD33、CD70和LIV-1的抗原的抗体。
30A.一种具有选自Z’-A-RL-D(i)、Z’-A-RL-Y-D(ii)、Z’-A-S*-RL-D(iii)、-Z’-A-S*-RL-Y-D(iv)、Z’-A-B(S*)-RL-D(v)和Z’-A-B(S*)-RL-Y-D(vi)的式的喜树碱-连接子化合物，其中Z’为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为葡糖苷酸单元；Y为间隔子单元；和D为选自以下的喜树碱化合物：
Figure BDA0002922313000001372
Figure BDA0002922313000001381
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；
下标p是1-16的整数；和其中Q通过存在于CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上的任何羟基和胺基连接；和其中当D是CPT1时，通过CPT1的氨基连接，则-Z-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基。
31A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)或式(ii)。
32A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(iv)。
33A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，具有式(v)或式(vi)。
34A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)。
35A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)。
36A.根据实施方案30A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中D是CPT6。
37A.根据实施方案30A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中D是CPT4。
38A.根据实施方案30A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中D选自CPT1、CPT2、CPT3和CPT5。
39A.根据实施方案30A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’是马来酰亚胺基。
40A.根据实施方案30A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A–是马来酰亚胺基丙酰基、mDPR或马来酰亚胺基丙酰基-β-丙氨酰基。
41A.根据实施方案30A和32A-34A任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中S*是PEG基团。
42A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，其中所述葡糖苷酸单元具有下式：
Figure BDA0002922313000001391
其中标记有单*的波浪线表示与D或与间隔子单元(Y)连接的位点；并且标记有**的波浪线表示与喜树碱-连接子化合物的其他连接子组分、A、B、S*或Z连接的点。
42A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，其中存在间隔子单元并且包含：
Figure BDA0002922313000001401
其中EWG是吸电子基团。
43A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中存在间隔子单元并且包含：
Figure BDA0002922313000001402
44A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中A在使用敲击化学的情况下包含由炔烃和叠氮化物形成的三唑。
45A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基-链烷酸组分、马来酰亚胺基和三唑组分，或mDPR组分。
46A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基成分。
47A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-包含mDPR组分。
48A.根据实施方案42A的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基丙酰基组分并且分配剂(S*)存在于所述连接子单元中。
49A.根据实施方案30A的喜树碱-连接子化合物，其中式(i)和式(ii)包含下式：
Figure BDA0002922313000001403
其中标记有单*的波浪线表示与CPT1、CPT4或CPT6的伯胺或与间隔子单元连接的位点。
50A.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1A-29A中任一项的喜树碱缀合物。
51A.根据实施方案50A的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤。
52A.根据实施方案50A的方法，其中所述癌症是淋巴瘤或白血病。
53A.根据实施方案50A-53A任一项的方法，还包含额外的治疗剂。
54A.根据实施方案53A所述的方法，其中所述额外的治疗剂是一种或多种化疗剂或放射疗法。
55A.一种在有需要的受试者中治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1A-29A中任一项的喜树碱缀合物。
56A.根据实施方案55A的方法，其中所述自身免疫疾病选自Th2淋巴细胞相关疾病、Th1淋巴细胞相关疾病和活化的B淋巴细胞相关疾病。
57A.制备实施方案1A-29A中任一项的喜树碱缀合物的方法，所述方法包括使抗体与实施方案39A-49A中任一项的喜树碱-连接子化合物反应。
58A.一种试剂盒，其包含实施方案1A-29A中任一项的喜树碱缀合物。
59A.根据实施方案58A的试剂盒，进一步包含额外的治疗剂。
1B.一种具有式L-(Q-D)p的喜树碱缀合物或其盐，其中L为配体单元；Q为具有选自以下的式的连接子单元：-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子；和W为氨基酸单元；D为选自以下的药物单元：
Figure BDA0002922313000001421
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和
其中D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6的内酯环的羟基取代基的氧原子。
2B.根据实施方案1B的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-S*-W-的连接子单元。
3B.根据实施方案1B的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-S*-W-RL-的连接子单元。
4B.根据实施方案1B的喜树碱缀合物，其中Q是具有式-Z-A-的连接子单元。
5B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT2。
6B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT3。
7B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT1。
8B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT4。
9B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT5。
10B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中D具有式CPT6。
11B.根据实施方案1B-4B任一项的喜树碱缀合物，其中L是抗体。
12B.根据实施方案3B的喜树碱缀合物，其中RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001431
其中标记有**的波浪线表示与D连接的点，并且标记有*的波浪线表示与Q的另一连接子组分连接的点。
13B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中W是选自N-甲基-甘氨酸、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸、N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元。
14B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基部分、或马来酰亚胺基和三唑部分，或mDPR部分。
15B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基部分。
16B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-具有选自以下的式：
Figure BDA0002922313000001441
其中标记有**的波浪线表示与S*连接的位点；并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的位点。
17B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001442
并且下标n为2-36的整数。
18B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中W是选自N-甲基-甘氨酸、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸、N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元。
19B.根据实施方案12B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基部分、或马来酰亚胺基和三唑部分，或mDPR部分。
20B.根据实施方案2B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基部分。
21B.根据实施方案2B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-具有选自以下的式：
Figure BDA0002922313000001451
其中标记有**的波浪线表示与S*连接的位点；并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的位点。
22B.根据实施方案2B的喜树碱缀合物，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001452
23B.根据实施方案18B的喜树碱缀合物，其中-Z-A-是
Figure BDA0002922313000001453
其中标记有**的波浪线表示与S*连接的位点；并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的位点。
24B.根据实施方案18B的喜树碱缀合物，其中Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001454
其中n为2-10的整数；标记有**的波浪线表示与D连接的位点；并且标记有***的波浪线表示与L的硫原子连接的位点。
25B.根据实施方案27B的喜树碱缀合物，其中n为2-4。
26B.根据实施方案1B-25B的喜树碱缀合物，其中L是特异性结合选自CD19、CD30、CD33、CD70和LIV-1的抗原的抗体。
27B.一种具有选自Z’-A-RL-D(i)、Z’-A-RL-Y-D(ii)、Z’-A-S*-RL-D(iii)、-Z’-A-S*-RL-Y-D(iv)、Z’-A-B(S*)-RL-D(v)和Z’-A-B(S*)-W-RL-D的式的喜树碱-连接子化合物，其中Z’为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子单元；和D为选自以下的药物单元：
Figure BDA0002922313000001461
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和
其中D与Q的连接点通过CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6的内酯环的羟基取代基的氧原子。
28B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)或式(ii)。
29B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(iv)。
30B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子化合物，具有式(v)或式(vi)。
31B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)。
32B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)。
33B.根据实施方案27B-31B任一项的喜树碱缀合物，其中D是CPT2。
34B.根据实施方案27B-31B任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中D是CPT3。
35B.根据实施方案27B-31B任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中D选自CPT1、CPT4、CPT5和CPT6。
36B.根据实施方案27B-31B任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’是马来酰亚胺基。
37B.根据实施方案27B-31B任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A–是马来酰亚胺基丙酰基、mDPR或马来酰亚胺基丙酰基-β-丙氨酰基。
38B.根据实施方案27B和29B-31B任一项的喜树碱-连接子缀合物，其中S*是PEG基团。
39B.根据实施方案27B的喜树碱-连接子缀合物，其中RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001481
其中标记有**的波浪线表示与D连接的点，并且标记有*的波浪线表示与Q的另一连接子组分连接的点。
40B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基-链烷酸部分、或马来酰亚胺基和三唑部分，或mDPR部分。
41B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基组分。
42B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A-包含mDPR部分。
43B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，其中Z’-A-包含马来酰亚胺基丙酰基部分并且其中存在分配剂(S*)。
44B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，具有下式：
Figure BDA0002922313000001482
45B.根据实施方案39B的喜树碱-连接子缀合物，具有下式：
Figure BDA0002922313000001491
46B.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1B-29B中任一项的喜树碱缀合物。
47B.根据实施方案46B的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤。
48B.根据实施方案46B的方法，其中所述癌症是淋巴瘤或白血病。
49B.根据实施方案46B-48B任一项的方法，还包括施用额外的治疗剂。
50B.根据实施方案39B的方法，其中所述额外的治疗剂是一种或多种化疗剂或放射疗法。
51B.一种在有需要的受试者中治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1B-26B中任一项的喜树碱缀合物。
52B.根据实施方案51B的方法，其中所述自身免疫疾病选自Th2淋巴细胞相关疾病、Th1淋巴细胞相关疾病和活化的B淋巴细胞相关疾病。
53B.制备实施方案1B-26B中任一项的喜树碱缀合物的方法，所述方法包括使具有游离硫醇的抗体与实施方案27B-43B中任一项的喜树碱-连接子化合物反应。
54B.一种试剂盒，包含实施方案1B-26B中任一项的喜树碱缀合物。
55B.根据实施方案54B的试剂盒，进一步包含额外的治疗剂。
1C.一种具有式L-(Q-D)p的喜树碱缀合物或其盐，其中L为来自靶向剂、尤其来自选择性结合癌细胞抗原的抗体的配体单元；下标p为1-16的整数；Q为具有选自以下的式的连接子单元：-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-S*-W-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-B(S*)-W-、和-Z-A-B(S*)-W-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中
Z为延伸子单元；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子；W为氨基酸单元；Y为间隔子单元；和D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的药物单元：
Figure BDA0002922313000001501
Figure BDA0002922313000001511
其中RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；或其中D是表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r的任一个的喜树碱化合物；
其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的羟基或氨基取代基中任一个的杂原子，或其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表H的13a-13c、表I的14a-14z和表J的18a-18r中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6的氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，以及条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
2C.根据实施方案1C的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自–Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和–Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元，其中A为接头单元和RL为葡糖苷酸单元。
3C.根据实施方案2C的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT1-CPT7中任一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
4C.根据实施方案2C的喜树碱缀合物，其中D是CPT1、CPT4、CPT6或CPT7，其中与CPT1的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基，
其中CPT4的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，其中CRF6的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H，并且其中与CPT7的共价连接点是通过其伯羟基官能团之一的氧原子。
5C.根据实施方案2C、3C或4C的喜树碱缀合物，其中葡糖苷酸单元具有下式：
Figure BDA0002922313000001521
其中Su是单糖的己糖形式；O’表示能够被糖苷酶裂解的糖苷键的氧原子；标记有单星号(*)的波浪线表示与其中RF和RF’的至少一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6上的氨基取代基的氮原子共价连接的位点，或与间隔子单元(Y)共价连接的位点，或表示与CPT1-CPT7中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子共价连接的位点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与Q的其余部分共价连接的位点，
尤其是葡糖苷酸单元具有下式：
Figure BDA0002922313000001531
6C.根据实施方案5C的喜树碱缀合物，其中Q是具有-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元；并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001532
其中EWG是吸电子基团；O*代表来自D的羟基取代基的氧原子；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点，或
间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001533
当D是其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6，并且其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
7C.根据实施方案5C的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中三唑部分任选由来自化学修饰的靶向剂的叠氮基取代基与药物连接子化合物的炔基部分的1,3-二极环加成而形成，其中所述靶向剂是缀合物配体单元的前体，或
-Z-A-由可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成，或由任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-丙酰基部分构成，
条件是D具有通过其氨基取代基的氮原子的共价连接并且-Z-A-由琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或当D是CPT1时由可衍生自mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成，或条件是D具有其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接并且当D是CPT1时，-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分。
8C.根据实施方案7C的喜树碱缀合物或其盐，其中Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001541
其中-Z-A-是优选具有水解形式的其琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分，其中琥珀酰亚胺环可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分；标记有单星号(*)的波浪线表示与取代CPT1-CPT7中任一个的内酯环的羟基官能团的氧原子、或与其中RF和RF’是-H的CPT1、CPT4或CPT6的胺官能团的氮原子、或与间隔子单元共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点，或
Q具有下式：
Figure BDA0002922313000001551
当Q是-Z-A-S*-RL时任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中下标n为1-50的整数，优选4；标记有单星号(*)的波浪线表示与CPT1-CPT7任一个的羟基或胺官能团的杂原子或与间隔子单元(Y)共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
9C.根据实施方案6C的喜树碱缀合物或其盐，其中-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001552
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的位点，或
-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001561
或其盐，或-Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001562
或其盐，并且其中波浪线表示琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的位点，其中琥珀酰亚胺环为水解形式的琥珀酸酰胺部分。
10C.根据实施方案1C的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自–Z-A-、-Z-A-S*-W-和–Z-A-B(S*)-W-的式的连接子单元，其中A是接头单元，或Q是具有选自-Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和-Z-A-B(S*)-W-RL-的式的连接子单元，其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放连接子。
11C.根据实施方案10C的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自–Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001563
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；并且标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
12C.根据实施方案10C或11C的喜树碱缀合物，其中-Q-D具有式-Z-A-S*-W-RL-D，其中D是其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6，其每一个具有与胺官能团的氮原子的共价连接；并且W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸、N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元，或D是具有与内酯环上羟基取代基的氧原子共价连接的CPT1-CPT7；并且W是选自谷氨酸或赖氨酸的氨基酸单元。
13C.根据实施方案12C的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑部分构成，其各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR的琥珀酸酰胺部分，或其中-Z-A-具有下式：
Figure BDA0002922313000001571
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
14C.根据实施方案11C的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001572
其中下标n是2-36的整数，与氮原子相邻的波浪线表示与A的羰基碳原子共价连接的位点，并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与-Z-A-S*-RL-的RL或与–Z-A-S*-W-RL-的W的胺官能团的氮原子共价连接的位点，尤其是任一式的Q的–Z A-具有下式：
Figure BDA0002922313000001581
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*的胺官能团的氮原子共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
15C.根据实施方案11C的喜树碱缀合物，其中Q是具有式–Z-A-S*-W-或–Z-A-S-W-RL-的连接子单元，其中任一式中的–Z-A-S*-W-具有下式：
Figure BDA0002922313000001582
其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中下标n是2-10的整数，优选2-4的整数；其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
16C.根据实施方案10C的喜树碱缀合物或其盐，其中–Q-D具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001583
Figure BDA0002922313000001591
其中波浪线表示任选以水解形式作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的点。
17C.喜树碱-连接子化合物，具有选自以下的式：
(i)Z’-A-RL-D；
(ii)Z’-A-RL-Y-D；
(iii)Z’-A-S*-RL-D；
(iv)Z’-A-S*-RL-Y-D；
(v)Z’-A-B(S*)-RL-D；
(vi)Z’-A-B(S*)-RL-Y-D；
(vii)Z’-A-D
(viii)Z’-A-S*-W-D
(ix)Z’-A-B(S*)-W-D
(x)Z’-A-S*-W-RL-D；和
(xi)Z’-A-B(S*)-W-RL-D
其中Z’为延伸子单元前体；A为键或接头单元；B为并行接头单元；S*为分配剂；RL为可释放连接子；Y为间隔子单元；和D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的喜树碱化合物：
Figure BDA0002922313000001601
RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的部分；RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的部分；RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和
其中当喜树碱-连接子化合物为式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)或式(vi)时，D的共价连接点为CPT1-CPT7任一个的羟基或氨基取代基任一个的杂原子，或当喜树碱-连接子化合物为式(vii)、式(viii)或(ix)或当喜树碱-连接子化合物为其中RL为除葡糖苷酸单元之外的可释放单元的式(iii)、式(iv)、式(x)或式(xi)时，D的共价连接点是CPT1-CPT7任一个的内酯环上羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6的氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，以及条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的喜树碱-连接子化合物的Z’-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
18C.根据实施方案17C的喜树碱-连接子化合物，具有选自式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的式，其中A是接头单元并且RL是葡糖苷酸单元，尤其具有下式：
Figure BDA0002922313000001611
其中标记有单星号(*)的波浪线表示与D或与间隔子单元(Y)共价连接的位点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与A、B或S*共价连接的点。
19C.根据实施方案18C的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT1-CPT7任一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
20C.根据实施方案18C的喜树碱-连接子化合物，其中D是CPT1、CPT4或CPT6，其中CPT1的连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是Z'-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基，CPT4的连接点是其胺官能团的氮原子，并且CPT6的连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H。
21C.根据实施方案17C的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)，其中S*是PEG基团。
22C.根据实施方案18C的喜树碱-连接子化合物，具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D是CPT1-CPT7任一个；并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001621
其中EWG是吸电子基团；O*代表来自D的羟基官能团的氧原子；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点，或D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6；并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure BDA0002922313000001622
其中EWG是吸电子基团；与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的胺官能团的氮原子共价连接的位点。
23C.根据实施方案17C-22C任一项的喜树碱-连接子化合物，其中A由炔基部分构成，该炔基部分能够与来自化学修饰的靶向剂的叠氮基取代基进行1,3-二极环加成，所述靶向剂是喜树碱缀合物的配体单元的前体，从而提供具有由三唑基部分组成的接头单元的缀合物。
23C.根据实施方案17C-22C任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分或mDPR构成，其碱性氮原子任选被酸不稳定的保护基质子化或保护，条件是当D为具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，Z’-A-由mDPR构成，特别是Z’-A-由mDPR或马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，条件是当D为CPT1时，D具有与其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接。
24C.根据实施方案17C的喜树碱-连接子化合物，具有式(vii)、式(viii)或式(ix)，其中A是接头单元，或具有式(i)、式(iii)、式(x)或式(xi)，其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放连接子。
25C.根据实施方案24C的喜树碱-连接子化合物，具有式(i)、式(iii)或式(x)，其中RL具有下式：
Figure BDA0002922313000001631
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；并且标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
26C.根据实施方案25C的喜树碱-连接子化合物，具有式(x)，其中W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸和N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元。
27C.根据实施方案24C、25C或26C的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分或mDPR构成，其碱性氮原子任选被酸不稳定的保护基质子化或保护。
28C.根据实施方案24C、25C或26C的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(x)，其中Z’-A-具有选自以下的式：
Figure BDA0002922313000001641
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点。
29C.根据实施方案24C、25C或26C的喜树碱-连接子化合物，具有式(iii)或式(x)，其中S*具有下式：
Figure BDA0002922313000001642
其中下标n是2-36的整数。
30C.根据实施方案24C或25C的式(viii)或式(x)的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-S*-W-具有下式：
Figure BDA0002922313000001643
其中下标n是2-10的整数，优选2-4的整数；其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点。
31C.根据实施方案17C的喜树碱-连接子化合物或其盐，具有以下结构：
Figure BDA0002922313000001644
Figure BDA0002922313000001651
Figure BDA0002922313000001661
32C.喜树碱缀合物在制备用于治疗受试者癌症的药物中的用途，其中所述喜树碱缀合物具有实施方案1C的式，尤其是所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤，优选淋巴瘤或白血病。
33C.一种药学可接受的组合物，包含实施方案1C的喜树碱缀合物和至少一种药学可接受的赋形剂。
34C.用于治疗需要其的受试者中的癌症的组合物，其中所述组合物由有效量的实施方案1C的喜树碱缀合物构成，尤其是所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤，优选淋巴瘤或白血病。
35C.一种制备实施方案1的喜树碱缀合物的方法，所述方法包括接触具有对权利要求17的喜树碱-连接子化合物的Z’具有反应性的官能团的靶向剂的步骤，从而在结构分别对应于靶向剂和Z’的喜树碱缀合物的配体单元和延伸子单元(Z)之间形成共价键，尤其是
靶向剂是具有至少一个半胱氨酸残基的抗体，其中反应性官能团是硫醇并且Z’由马来酰亚胺部分构成，或靶向剂是经修饰以具有含叠氮的残基作为反应性官能团的抗体并且Z’由炔烃官能团构成，其中所述叠氮化物和炔烃官能团能够进行1,3-二极环加成反应以形成三唑环体系。
具体实施方案
材料和方法
除非另有说明，否则以下材料和方法适用于本节中描述的合成程序。所有市售无水溶剂均无需进一步纯化即可使用。起始材料、试剂和溶剂购自商业供应商(SigmaAldrich和Fischer)。采用Biotage Isolera OneTM快速纯化系统(Charlotte,NC)通过快速柱色谱法纯化产物。使用表A-F中所示的UPLC方法，在与Waters AcquityTM UPLC系统接口的Waters单四级杆质谱仪上进行UPLC-MS。制备型HPLC在配置有Wasters 2998PDA检测器的Waters2454二元梯度模块溶剂递送系统上进行。用适宜直径的Phenomenex Max-RP 4μm SynergiTM
Figure BDA0002922313000001671
250mm反相柱纯化产物，用0.05％的三氟乙酸/水和0.05％的三氟乙酸/乙腈洗脱，除非另有规定。
表A：柱-Waters Acuity UPLC BEH C18 2.1x 50mm,1.7μm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法A)。
时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 梯度
起始 0.5 97 3
1.70 0.5 40 60 线性
2.00 0.5 5 95 线性
2.50 0.5 5 95 线性
2.80 0.5 97 3 线性
3.00 0.5 97 3 线性
表B：柱-Waters Acuity UPLC BEH C18 2.1x 50mm,1.7μm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法B)。
时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 梯度
起始 0.6 97 3
1.50 0.6 5 95 线性
2.40 0.6 5 95 线性
2.50 0.6 97 3 线性
2.80 0.6 97 3 线性
表C：柱-Kinetex F5 1.7μm
Figure BDA0002922313000001681
2.1x 50mm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法C)。
时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 梯度
起始 0.5 97 3
2.50 0.5 40 95 线性
3.50 0.5 5 95 线性
3.75 0.5 97 3 线性
4.00 0.5 97 3 线性
表D：柱-Waters CORTECS C18 1.6μm,2.1x 50mm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法D)。
时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 梯度
起始 0.6 97 3
1.70 0.6 40 60 线性
2.00 0.6 5 95 线性
2.50 0.6 5 95 线性
2.80 0.6 97 3 线性
3.00 0.6 97 3 线性
表E：柱-Waters CORTECS C18 1.6μm,2.1x 50mm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法E)。
时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 梯度
起始 0.6 97 3
1.50 0.6 5 95 线性
2.40 0.6 5 95 线性
2.50 0.6 97 3 线性
2.80 0.6 97 3 线性
表F：柱-Waters CORTECS C8 1.6μm,2.1x 50mm，反相柱，溶剂A-0.1％甲酸水溶液，溶剂B-含0.1％甲酸的乙腈(方法F)。
Figure BDA0002922313000001682
Figure BDA0002922313000001691
表G：缩写列表
Figure BDA0002922313000001692
喜树碱化合物制备
以下实施例中提供的喜树碱化合物可用于制备如本文所述的喜树碱-连接子化合物以及喜树碱缀合物。
实施例1
Figure BDA0002922313000001701
将购自MedChemExpress的SN-38(化合物1，160.0mg,0.4077mmol)悬浮在无水DCM(2mL)中。加入DIPEA(0.22mL,1.3mmol)，然后加入TBSCl(154mg,1.02mmol)。将反应搅拌30分钟直至化合物1变得可溶并通过UPLC-MS观察到完全转化。用MeOH淬灭反应，通过硅胶塞过滤，并真空浓缩。将所得无色油与Hex一起研磨。产物从溶液中沉淀出来。通过过滤收集沉淀物并用Hex冲洗，得到灰白色固体状化合物2(TBS-SN-38)(200mg,0.395mmol,97％)。LC-MS(方法B):tR＝1.86min；MS(m/z)[M+H]+C28H35N2O5Si计算值507.23，实测值506.96。
实施例2
Figure BDA0002922313000001702
按Bioconjugate Chem.2009,20,1242–1250中描述的程序合成化合物3。将化合物3(50mg,0.108mmol)溶解在DCM(1mL)中。向反应中加入DMAP(13mg,0.11mmol)，然后加入Boc2O(24mg,0.11mmol)。将反应搅拌5分钟，此时观察到向所需产物的完全转化。将受保护的产物通过柱色谱法用10G Biotage Ultra、0-5％的MeOH/DCM纯化。真空浓缩含所需产物的级分，得到呈黄色固体的化合物4(49mg,0.087mmol,80％)。LC-MS(方法A):tR＝2.24min；MS(m/z)[M+H]+C30H34N3O8计算值564.23，实测值564.10。
将化合物4(49mg,0.087mmol)溶解在无水DCM(2mL)中。加入DMAP(37mg,0.304mmol)并将反应冷却至0℃。向反应中逐滴加入以10mg/mL溶解在DCM中的三光气(12mg,0.039mmol)，15分钟加完。将2μL等分试样在98μL MeOH稀释剂中淬灭并注入到UPLC-MS上。通过UPLC-MS观察到向MeOH加合物的完全转化。该反应混合物(化合物5)可直接用在与合适的连接子的偶联步骤中。LC-MS(方法A):tR＝2.09min；MS(m/z)[M+H]+C32H36N3O10计算值622.24，实测值622.02。
实施例3
Figure BDA0002922313000001711
将根据Bioconjugate Chem.(2009)20:1242–1250所述的方法合成化合物6(150mg,0.334mmol)溶解在无水DCM(2mL)中。加入DMAP(143mg,1.17mmol)。逐滴加入溶解在无水DCM中的三光气(45mg,0.15mmol)(50mg/mL)，5分钟加完。反应于室温下搅拌30分钟。将反应混合物的2μL等分试样在98μL MeOH稀释剂中淬灭。观察到向MeOH碳酸酯的几乎完全转化，表明形成了氯甲酸酯。如此获得的化合物7可未经进一步纯化即用在与合适的连接子的偶联步骤中。LC-MS(方法A):tR＝1.55min；MS(m/z)[M+H]+C27H27N2O8计算值507.18，实测值507.06。
实施例4
Figure BDA0002922313000001721
将获自TCI Research Chemicals(Cat.No.A1356)的6-氨基-3,4-(亚甲二氧基)苯乙酮(8，5.00g,27.9mmol)溶解在DCM(100mL)中。将反应冷却至0℃并加入DIPEA(7.29mL,41.9mmol)，然后缓慢加入乙酰氯(2.49mL,34.9mL)。使反应加温至室温并搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。用MeOH(5mL)淬灭反应，并真空浓缩反应，得到白色固体状的化合物9，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC-MS(方法A):tR＝1.37；MS(m/z)[M+H]+C11H12NO4计算值222.08，实测值222.11。
将化合物9(27.9mmol)溶解在AcOH(100mL)中。缓慢加入33％w/w的HBr/AcOH(9.78mL,55.8mmol)。逐滴加入溴(1.44mL,27.9mmol)，15分钟加完。将反应搅拌30分钟，此时观察到向所需产物的转化。将反应倒到冰水上，通过过滤收集沉淀物，并用水洗涤。将滤液干燥，得到黄色粉末，其为所需产物化合物10与起始材料和二溴化产物杂质的混合物，其未经进一步纯化即用于下一步骤中(7.2g,24mmol,86％)。LC-MS(方法A):tR＝1.58min；MS(m/z)[M+H]+C11H11BrNO4计算值299.99，实测值299.90。
将化合物10(7.2g,24mmol)溶解在EtOH(100mL)中。加入浓HBr(5mL)并将反应加热至回流保持60分钟。观察到向脱保护产物的几乎完全转化。将反应真空浓缩，用DCM(200mL)和H2O(200mL)稀释。用DCM(3x 200mL)萃取水相，将收集的有机相用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱色谱法用0-10％的MeOH/DCM纯化。浓缩含所需产物及少量杂质的级分，得到黄色粉末状的化合物11(4.05g,15.7mmol,65％)。LC-MS(方法A):tR＝1.57min；MS(m/z)[M+H]+C9H9BrNO3计算值257.98，实测值257.71。
实施例5
Figure BDA0002922313000001731
在烧瓶中加入化合物11(1.00g,3.87mmol)、p-TSA(667mg,3.87mmol)和4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(1.02g,3.87mmol,获自AvraLaboratories Pvt.Ltd.)。加入DCM(5mL)以使固体均匀，然后在氮气下蒸发。然后将纯净的固体在高真空(1毫巴)下加热至120℃保持60分钟。将反应冷却至室温，将粗产物用H2O沉淀，过滤并用H2O洗涤。沉淀物通过柱色谱法用0-10％的MeOH/DCM纯化。真空浓缩含所需产物的级分，得到棕色固体状的化合物12(989mg,2.04mmol,53％)。LC-MS(方法A):tR＝1.62min(通用方法UPLC)；MS(m/z)[M+H]+C22H17BrN2O6计算值485.03，实测值484.95。
实施例6
Figure BDA0002922313000001732
将化合物12(188mg,0.387mmol)溶解在EtOH(5mL)中。加入六亚甲基四胺(163mg,1.16mmol)并将反应于回流下搅拌90分钟。冷却反应并加入浓HCl水溶液(0.1mL)。浓缩反应并通过制备-HPLC纯化。将含所需产物的级分冻干，得到白色固体状的化合物13(109mg,0.259mmol,67％)。LC-MS(方法A):tR＝0.89；MS(m/z)[M+H]+C22H20N3O6计算值422.14，实测值422.16。
表H：由化合物13制备的喜树碱化合物(7-MAD-MDCPT)
Figure BDA0002922313000001741
表H的喜树碱化合物是式W-CPT的示例性化合物，其被掺入其中Q-D为式-Z-A-S*-W-D或-Z-A-B(S*)-W-D的喜树碱的喜树碱缀合物中，或分别通过与伯羟基或胺官能团的氧原子或氮原子共价连接被掺入式Z’-A-S*-W-D或Z’-A-B(S*)-W-D的药物连接子化合物中。
实施例7
Figure BDA0002922313000001751
将来自实施例4的化合物12(10.0mg,20.6μmol)溶解在无水DMF(0.25mL)中。加入甲胺(2M在THF中,0.031mL,62μmol)。将反应搅拌30分钟，然后用AcOH(20μL)淬灭。反应通过制备型HPLC纯化。将含所需产物(14)的级分冻干，得到黄色固体(3.27mg,7.51μmol,36％)。LC-MS(方法D):tR＝1.57min；MS(m/z)[M+H]+C9H9BrNO3计算值257.98，实测值257.71。tR＝0.93min(方法A)。MS(m/z)[M+H]+C23H22N3O6计算值436.15，实测值435.78。
表I：根据实施例7制备的其他喜树碱化合物
Figure BDA0002922313000001752
Figure BDA0002922313000001761
Figure BDA0002922313000001771
Figure BDA0002922313000001781
Figure BDA0002922313000001791
Figure BDA0002922313000001801
*LC-MS方法A
实施例8
Figure BDA0002922313000001811
如Heterocycles,(2007)71:39-48)所描述制备6-硝基-1,3-苯并二噁茂-5-甲腈(化合物15，2.00g,10.4mmol)，和然后将其溶解在EtOH(50mL)中。将反应置于氮气气氛下。向反应中加入Pd/C(2.22g,10％w/w,2.08mmol)，将反应置于氢气气氛下。将反应搅拌2小时。通过硅藻土(Celite)床过滤反应，然后用MeOH冲洗。真空浓缩洗脱物并通过快速色谱法用0-10％的DCM/MeOH纯化。浓缩含所需产物的级分，得到红色固体状化合物16(1.46g,9.00mmol,87％)。LC-MS(方法D):tR＝1.14min；MS(m/z)[M+H]+C8H7N2O2计算值163.05，实测值162.37。
实施例9
Figure BDA0002922313000001812
将6-氨基-1,3-苯并二噁茂-5-甲腈(化合物16，50mg,0.31mmol)置于氮气气氛下并溶解在无水THF(1mL)中。加入CuBr(1.5mg,0.010mmol)，然后加入1M在THF中的4-氟苯基溴化镁(1.23mL)。将反应加热至60℃保持30分钟，然后冷却至室温。向溶液中缓慢加入15％的H2SO4溶液，然后搅拌30分钟。将反应倒入饱和NaHCO3(50mL)中，然后用EtOAc(3x 50mL)萃取。将有机物用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱色谱法用10G Biotage Ultra、0-10％的EtOAc/Hex纯化。真空浓缩含所需产物的级分，得到红色固体状化合物17(46.2mg,0.178mmol,58％)。LC-MS(方法D):tR＝1.81min；MS(m/z)[M+H]+C14H11FNO3计算值260.07，实测值259.46。
实施例10
Figure BDA0002922313000001821
在闪烁小瓶中加入化合物17(46.2mg,0.178mmol)、p-TSA(30.7mg,0.178mmol)和4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(46.9mg,0.178mmol，由Avra Laboratories Pvt.Ltd.获得)。加入DCM(1mL)以使固体均匀。在氮气下浓缩溶剂。将纯净的固体在高真空(1毫巴)下加热至120℃保持60分钟。在DCM(50mL)中重构反应，用H2O洗涤，有机相用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过柱色谱法用10G BiotageUltra、0-10％的MeOH/DCM纯化。真空浓缩含所需产物(18)的级分，得到红色固体(32.9mg,0.0676mmol,38％)。LC-MS(方法D):tR＝1.81min；MS(m/z)[M+H]+C27H20FN2O6计算值487.13，实测值487.19。
表J：根据实施例9和10的方法制备的其他喜树碱化合物
Figure BDA0002922313000001822
Figure BDA0002922313000001831
Figure BDA0002922313000001841
Figure BDA0002922313000001851
*LC-MS方法A，除了18q(方法E)和18r(方法D)
实施例11
Figure BDA0002922313000001861
将获得自MedChemExpress的SN-38(化合物1,76.0mg,0.19mmol)溶解在二氯甲烷中，然后加入三乙胺(128μL,0.92mmol)和DMAP(2.60mg,0.02mmol)。在冰浴中将混合物冷却至0℃，然后逐滴加入乙酰氯(15.9μL,0.22mmol)。将反应混合物于室温下搅拌16小时。用二氯甲烷稀释反应，用饱和NH4Cl、水和盐水洗涤。然后将有机相经MgSO4干燥，过滤，浓缩并经由Biotage快速柱色谱法在硅胶上纯化(CH2Cl2/MeOH 0-15％)，产生乙酰化的SN-38(19)。MS(m/z)计算值435.15(M+H)+，实测值435.07。
表K：如本文所述制备的喜树碱化合物
Figure BDA0002922313000001862
Figure BDA0002922313000001871
实施例12
Figure BDA0002922313000001872
将甲磺酸依喜替康(化合物21a，20.0mg,0.0376mmol,得自MedChemExpressCat.No.:HY-13631A)悬浮于无水DCM(1mL)中。添加DIPEA(20.0μL,0.0146mmol)，然后添加乙酰氧基乙酰氯(5.0μL,0.046mmol)。将反应搅拌30分钟，然后用MeOH淬灭，并真空浓缩。将反应混合物重新溶于MeOH(1mL)中。添加LiOH(20mg)。观察到乙酸完全脱保护。淬灭AcOH。通过制备型HPLC 10mm10-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的部分真空浓缩以得到黄色固体状化合物21b(15.3mg,0.0310mmol,82％)。LC-MS(方法A):tR＝1.46min；MS(m/z)[M+H]+C26H25N3O6计算值494.17，实测值494.05。
实施例13
Figure BDA0002922313000001873
将甲磺酸依喜替康(化合物21a,20.0mg,0.0376mol)溶于MeCN(1mL)和NaHCO30.75M的H2O中。添加Fmoc-OSu(19.0mg,0.0564mmol)，将反应搅拌2小时30分钟。将反应用H2O(50mL)稀释，将pH调节至中性，并用DCM(3x 50mL)萃取。有机相用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩。通过制备型TLC 0-5％MeOH的DCM溶液纯化粗产物。刮下含有所需产物的带，过滤，用10％MeOH的DCM溶液洗涤，并将洗脱液真空浓缩以得到橙色固体状化合物22(19.1mg,0.0290mmol,77％)。LC-MS(方法A):tR＝2.23min；MS(m/z)[M+H]+C39H33FN3O6计算值658.24，实测值658.09。
实施例14
Figure BDA0002922313000001881
将根据实施例1制备的化合物2(132mg,0.260mmol)溶于2mL无水DCM中。添加DMAP(111mg,0.911mmol)。将三光气(34.8mg,0.117mmol)以50mg/mL溶解于无水DCM中，并在5分钟内将溶液滴加到搅拌的反应溶液中。将2μL等分试样的反应溶液淬灭至98μL MeOH稀释剂中。15分钟后，通过UPLC-MS观察到几乎完全转化为Me-碳酸酯。包含化合物24的反应混合物立即用于本文所述的偶联反应中。
喜树碱药物连接子化合物制备
实施例15
Figure BDA0002922313000001891
将甲磺酸依喜替康(化合物21a,5.00mg,9.41μmol)溶于无水DCM中。添加DIPEA(5.0μL,28μmol)，然后添加之前由Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840描述的化合物25(17.2mg,18.8μmol)。将反应在40℃下搅拌3小时。用MeOH淬灭反应并真空浓缩。粗反应混合物用于下一步。LC-MS(方法A):tR＝2.32min；MS(m/z)[M+H]+C63H61FN5O19计算值1210.39，实测值1210.08。
将来自上一步骤的粗制化合物26(9.41μmol)溶于THF(1mL)和1M LiOH的MeOH(1mL)溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加H2O并再搅拌5分钟。将反应用AcOH(100μL)淬灭，真空浓缩并通过制备型HPLC 21mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物27(1.1mg,1.3μmol)。LC-MS(方法A):tR＝1.29min；MS(m/z)[M+H]+C41H43FN5O14计算值848.28，实测值848.03。
实施例16
Figure BDA0002922313000001901
将化合物27(1.1mg,1.3μmol)溶于无水DMF(0.5mL)中。添加DIPEA(1μL)，然后添加购自TCI(CAS:55750-62-4)的N-琥珀酰亚胺基3-马来酰亚胺基丙酸酯(28,0.63mg,2.4μmol)。将反应搅拌5分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(10μL)淬灭并通过制备型HPLC 10mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物29(1.21mg,1.21μmol,93％)。LC-MS(方法A):tR＝1.52min；MS(m/z)[M+H]+C48H48FN6O17计算值999.31，实测值999.07。
实施例17
Figure BDA0002922313000001902
将如实施例21和22所描述制备的化合物30(210mg,0.234mmol)溶于基准DCM(3mL)中。添加多聚甲醛(300-600mg,xs)。剧烈搅拌，添加TMSBr(0.1mL)。将反应搅拌10分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。通过注射器过滤器过滤反应混合物，用DCM(2x3 mL)冲洗，并添加甲苯(3mL)以将最终混合物共沸。真空浓缩以得到白色固体。无需进一步纯化即可用于下一步。使用MeOH稀释剂通过UPLC-MS观察MeOH淬灭的加合物。LC-MS(方法A):tR＝2.19min；MS(m/z)[M+Na]+C44H51N3NaO18S计算值964.28，实测值965.17。
实施例18
Figure BDA0002922313000001911
在使用前，将称为7-BAD-MDCPT的化合物20c(20mg,0.047mmol)与甲苯共沸3次并在高真空下干燥。将来自实施例16的粗制化合物31(231mg,0.234mmol)溶于无水DCM中，并添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP,51.4μL,0.284mmol)。添加碱后，通过UPLC-MS观察到溶液中化合物31的最小水解。将化合物31的溶液直接添加到药物反应容器中，然后加热至回流。化合物20c仅微溶于DCM。通过UPLC-MS监测反应完全程度，这需要加热回流3天。然后，将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过FCC Biotage 10G Ultra 0-10％MeOH的DCM溶液纯化。浓缩含有所需产物(化合物32)的级分以得到黄色固体(50mg,～50％w/w,0.019mmol,40％)，为与二聚水解连接子的约50％w/w混合物。tR＝1.46min(通用方法UPLC)；MS(m/z)[M+H]+C65H66N5O24S计算值1332.38，实测值1332.54。
实施例19
Figure BDA0002922313000001912
将化合物32(50mg,50％w/w,0.019mmol)溶于MeOH:THF 1:1(1mL)中。添加LiOH(20mg,0.84mmol)并搅拌60分钟。添加水(0.5mL)。通过UPLC-MS观察到完全转化。用AcOH淬灭反应，真空浓缩，并通过制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色固体状所需产物，化合物33(5mg,0.005mmol,27％)。LC-MS(方法A):tR＝0.84min；MS(m/z)[M+H]+C43H48N5O19S计算值970.27，实测值969.92。
实施例20
Figure BDA0002922313000001921
将化合物33(5mg,0.005mmol)溶于DMF(0.5mL)中。添加DIPEA(10μL)，然后是3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,4.1mg,0.016mmol)，并搅拌45分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。用AcOH(20μL)淬灭并通过制备型HPLC 10mm Max-RP C12 5-60-95％MeCN的H2O溶液纯化。将含有所需产物化合物34的级分冻干以得到黄色粉末(2.33mg,2.08μmol,40.3％)。LC-MS(方法):tR＝1.35min；MS(m/z)[M+H]+C50H53N6O22S计算值1121.29，实测值1121.25。
实施例21
Figure BDA0002922313000001922
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840中的方法制备的化合物35(2.00g,4.12mmol)溶于无水DCM(20mL)中。添加DIPEA(3.59mL,20.60mmol)，然后是1,1′-羰基-二-(1,2,4-三唑)(744mg,4.53mmol)。将反应搅拌5分钟，并将含有化合物36的反应混合物用于下一步。
向含有化合物36(4.12mmol)的反应混合物添加2-(甲基磺酰基)-乙胺(0.61mL，6.2mmol)。搅拌5分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应真空浓缩并通过柱层析法KP-Sil 100G 10-100％EtOAc的Hex溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物37(2.40g,3.78mmol,92％)。LC-MS(方法A):tR＝1.71min；MS(m/z)[M+Na]+C24H30N2NaO16S计算值657.12，实测值656.93。
实施例22
Figure BDA0002922313000001931
将化合物37(2.40g,3.78mmol)溶于MeOH(20mL)中。向反应添加AcOH(10mL)，然后是锌粉(7.42g,113mmol)。将反应搅拌20分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。通过二氧化硅过滤反应物，用20％MeOH的DCM溶液洗脱。浓缩洗脱液并用于下一步。
将粗制化合物38(3.78mmol)溶于无水DCM(10ml)中。添加DIPEA(3.30mL,18.9mmol)，然后是Fmoc-Sar-Cl(2.50g,7.58mmol)。将反应搅拌5分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过柱层析法KP-Sil 100G10-100％EtOAc的Hex溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物30。LC-MS(方法A):tR＝2.17min；MS(m/z)[M+H]+C42H48N3O17S计算值898.27，实测值898.09。
实施例23
Figure BDA0002922313000001941
将化合物30(200mg,0.223mmol)溶于DCM(2mL)中。添加多聚甲醛(200mg,6.68mmol)，然后是TMSCl(1mL)。将反应搅拌15分钟，然后过滤，用DCM(2x 2mL)冲洗，并添加甲苯(2mL)以共沸最终混合物。浓缩洗脱液以得到白色固体。将粗制化合物39立即用于下一步。
将粗制化合物39(0.223mmol)溶于无水DCM(1mL)中。向反应添加DIPEA(0.047mL,0.27mmol)。将反应溶液直接添加至固体化合物21-b(22mg,0.045mmol)。将反应搅拌120分钟。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过柱层析0-10％MeOH的DCM溶液纯化。将含有所需产物和少量杂质的级分真空浓缩以得到白色固体状化合物40(30mg,80％w/w,0.021mmol,48％)。LC-MS(方法A):tR＝2.25min；MS(m/z)[M+H]+C69H72FN6O23S计算值1403.44，实测值1404.03。
实施例24
Figure BDA0002922313000001951
将化合物40(30mg,0.021mmol)溶于MeOH(1mL)中。向反应添加LiOH(25mg,1.1mmol)，并将超声处理反应物以帮助溶解。将反应搅拌10分钟，然后添加H2O(1mL)。将反应另外搅拌20分钟，然后用AcOH淬灭。将反应真空浓缩并通过制备型HPLC 21mm5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。纯化含有所需产物的级分以得到白色固体状化合物41(14.5mg,0.0139mmol,65％)。LC-MS(方法A):tR＝1.29min；MS(m/z)[M+H]+C47H54FN6O18S计算值1041.32，实测值1041.24。
实施例25
Figure BDA0002922313000001952
将化合物41(14.5mg,0.0139mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。添加DIPEA(15μL,0.084mmol)，然后是3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,11mg,0.042mmol)。将反应在室温下搅拌80分钟。用AcOH淬灭并通过制备型HPLC 10mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色固体状化合物42(2.24mg,1.88μmol,13％)。LC-MS(方法A):tR＝1.49min；MS(m/z)[M+H]+C54H59FN7O21S计算值1192.35，实测值1192.31。
实施例26
Figure BDA0002922313000001961
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840)的程序制备的化合物43(200mg,0.267mmol)溶于DCM(1mL)。添加羰基二三唑(44,131.52mg,0.801mmol)，并将反应搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应物用EtOAc(50mL)稀释，并用H2O(3x 50mL)洗涤。有机相用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩以得到白色固体状化合物45(209mg,0.248mmol,93％)。LC-MS(方法D):tR＝2.07min；MS(m/z)[M+H]+C41H42N5O15计算值844.27，实测值844.02。产物无需进一步纯化用于下一步。
将化合物45(100mg,0.119mmol)和称为H-Gly-7-MAD-MDCPT的化合物13b(18mg,0.039mmol)溶于DMF(0.5mL)。添加DIPEA(0.1mL)并将反应在室温下搅拌。15分钟后，观察到化合物45水解为所需产物化合物46的约50％转化。注意：通过UPLC-MS，化合物46和水解产物的保留时间相同。将反应用AcOH淬灭并真空浓缩，然后通过柱层析0-5％MeOH的DCM溶液纯化。浓缩包含化合物46和50％化合物13b杂质的级分以得到白色固体(46mg,50％w/w,0.018mmol,46％)。LC-MS(方法E):tR＝1.32min；MS(m/z)[M+H]+C63H61N6O22计算值1253.38，实测值1253.47。
实施例27
Figure BDA0002922313000001971
将化合物46(0.018mmol)溶于MeOH(0.5mL)和THF(0.5mL)。添加LiOH(25mg,1.0mmol)。将反应超声处理以溶解LiOH并搅拌。10分钟后添加水(0.5mL)。100分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化。用AcOH(0.2mL)淬灭反应。将反应浓缩，然后通过制备型HPLC使用10mm Max-RP和5-60-95MeCN的H2O溶液(0.05％TFA梯度)纯化。将含有所需产物化合物47的级分真空浓缩以得到黄色固体(8.4mg,9.4μmol,51％)。LC-MS(方法D):tR＝0.92min；MS(m/z)[M+H]+C41H43N6O17计算值891.27，实测值891.06。
实施例28
Figure BDA0002922313000001972
将化合物47(8.4mg,9.4μmol)溶于DMF(0.2mL)。添加3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,7.5mg,0.028mmol)。添加DIPEA(9μL,0.05mmol)。将反应搅拌5分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.05mL)淬灭，通过制备型HPLC 10mm MaxRP C12纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到具有10％杂质的黄色粉末。将冻干的粗产物通过制备型HPLC 10mm Max-RP C12再次纯化，将含有所需产物的级分冻干以得到黄色固体状化合物48(1.33mg,1.28μmol,13.5％)。LC-MS(方法D):tR＝1.08min；MS(m/z)[M+H]+C48H48N7O20计算值1042.30，实测值1042.19。
实施例29
Figure BDA0002922313000001981
在火焰干燥的烧瓶中装入化合物3(30mg,65μmol)，并用N2冲洗。无水DCM(3.25mL)，然后是光气(甲苯中20％，1.2mL)。将反应混合物加盖并搅拌24小时。通过将反应混合物加标入MeOH并观察氨基甲酸甲酯加合物来确认形成异氰酸酯。LC-MS(方法A):tR＝1.58min,MS m/z(ES+)实测值522.32。将反应在N2流下搅拌至干，在高真空下放置1小时以提供化合物64，其无需进一步纯化进行下一步操作。
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840的程序制备的化合物43(103mg,138μmol)溶于无水DMF(1.5mL)并加入装有化合物64(32mg,65μmol)的烧瓶中。将反应在N2下搅拌24h，然后真空浓缩至干。将粗制混合物加载到1mM色谱仪板上，并用DCM/MeOH洗脱(1％,2％,3％MeOH梯度)以得到化合物49(25mg,31％)。LC-MS(方法A):tR＝2.23min；MS(m/z)计算值1238.22(M+H)+，实测值1238.40。
实施例30
Figure BDA0002922313000001991
将化合物49(3,41mg,33μmol)溶于MeOH(1.1mL)和THF(1.1mL)并冷却至0℃。将LiOH一水合物(14mg,333μmol)溶于H2O(1.1mL)，然后在搅拌下将其滴加到反应中。反应温热至室温，并在4.5小时后停止。真空除去MeOH和THF，添加DMSO使其溶解，然后通过制备型HPLC纯化反应以提供化合物50(9mg,31％)。LC-MS(方法A):tR＝1.16min；MS m/z(ES+)实测值876.23。
实施例31
Figure BDA0002922313000001992
将3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28)溶于无水DMF并添加至化合物50至终浓度为30mM，然后添加DIPEA。通过LC-MS监测反应。完成后，将溶液用乙酸中和，浓缩，然后通过制备型HPLC纯化以得到化合物51。LC-MS(方法A):tR＝1.36min,MS(m/z)计算值1026.96(M+H)+，实测值1027.21。
实施例32
Figure BDA0002922313000002001
在烘箱干燥的烧瓶中，将按照实施例21所描述制备的化合物30(162mg,180μmol)溶于无水二氯甲烷(1mL)中，然后加入多聚甲醛(10.8mg,0.36mmol)和TMSBr(250μL,1.40mmol)。将该溶液在室温下搅拌10分钟，同时通过用甲醇淬灭监测并通过LC-MS观察到甲醇加合物的形成。将反应过滤，用无水甲苯和二氯甲烷洗涤，真空干燥3个循环以得到粗产物，其无需进一步纯化用于随后反应。将粗制化合物重新溶解于无水二氯甲烷中，并添加至根据Bioconjugate Chem.(2009)20:1242–1250的程序制备的化合物18r(32.3mg,72μmol)中，然后添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP,200μL,0.96mmol)。将反应混合物加盖，在80℃下微波处理2小时，并通过LC-MS监测。完成后，除去溶剂，并通过制备型HPLC纯化以得到所需产物化合物53。MS(m/z)计算值1358.39(M+H)+，实测值1358.03。
将粗制化合物53溶于MeOH和THF中并冷却至0℃。将H2O中的LiOH缓慢添加至反应烧瓶中至终浓度为10mM。将反应温热至室温，并通过LC-MS监测。完成后，将溶液用乙酸中和，浓缩，然后通过制备型HPLC纯化以得到化合物54。MS(m/z)计算值996.01(M+H)+，实测值996.36。
实施例33
Figure BDA0002922313000002011
将3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28)溶于无水DMF并添加至化合物54至终浓度为30mM，然后添加DIPEA。通过LC-MS监测反应。完成后，将溶液用乙酸中和，浓缩，然后通过制备型HPLC纯化以得到化合物55。LC-MS(方法A):tR＝1.75min,MS(m/z)计算值1147.13(M+H)+，实测值1147.02。
实施例34
Figure BDA0002922313000002012
在烘箱干燥的烧瓶中，将根据实施例21所述制备的化合物30(1235mg,1.38mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，然后加入多聚甲醛(13.8mg,0.46mmol)和TMSCl(1.0mL,7.88mmol)。将该溶液在室温下搅拌30分钟，同时通过用甲醇淬灭监测，并通过LC-MS观察到甲醇加合物的形成。MS(m/z)甲醇加合物计算值942.29(M+H)+，实测值942.28。将反应过滤，用无水甲苯和二氯甲烷洗涤，并真空干燥3个循环。将粗产物溶于无水二氯甲烷(6mL)和DIPEA(359μL,2.06mmol)，并添加到含有SN-38(化合物1，90mg，0.23mmol)的烧瓶中。将反应混合物加盖并在40℃下搅拌18h。通过Biotage快速柱层析法(CH2Cl2/MeOH,0-10％)在二氧化硅上纯化反应混合物以得到化合物56。MS(m/z)计算值1302.40(M+H)+，实测值1302.36。
实施例35
Figure BDA0002922313000002021
将化合物56(282.6mg,0.22mmol)溶于THF和MeOH并在冰浴中冷却至0℃。将LiOH(91.1mg,2.17mmol)溶于H2O并滴加。将反应在室温搅拌并在45分钟内完成。将反应用乙酸中和，浓缩，并通过制备型HPLC直接纯化，得到化合物57。
实施例36
Figure BDA0002922313000002022
将3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28)溶于DMF和DIPEA中，并添加至化合物57。将反应搅拌3h直至通过LC-MS监测的反应完成。将反应混合物用乙酸中和，并通过制备型HPLC直接纯化，得到化合物58。LC-MS(方法A):tR＝1.40min；MS(m/z)计算值1091.31(M+H)+，实测值1091.47。
实施例37
Figure BDA0002922313000002031
将SN-38(1,76.0mg,0.19mmol,购自MedChemExpress)溶于二氯甲烷，然后添加三乙胺(128μL,0.92mmol)和DMAP(2.60mg,0.02mmol)。在冰浴中冷却至0℃，然后逐滴添加乙酰氯(15.9μL,0.22mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时。将反应物用二氯甲烷稀释，用饱和NH4Cl、水和盐水洗涤。然后将有机相用MgSO4干燥，过滤，浓缩，并通过Biotage快速柱层析法(CH2Cl2/MeOH 0-15％)在二氧化硅上纯化以提供化合物19(Ac-SN-38)。MS(m/z)计算值435.15(M+H)+，实测值435.07。
实施例38
Figure BDA0002922313000002032
在烘箱干燥的烧瓶中，将化合物30(1.12g,1.24mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)，然后添加多聚甲醛(12.4mg,0.41mmol)和TMSBr(300μL,1.68mmol)。将该溶液在室温下搅拌10分钟，同时通过用甲醇淬灭监测并通过LC-MS观察到甲醇加合物的形成。将反应过滤，用无水甲苯和二氯甲烷洗涤，并真空干燥3个循环。将粗产物溶于无水二氯甲烷中，并添加至化合物19(90.0mg,0.21mmol)，然后添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(3.90mL,1.86mmol)。将反应混合物加盖并在40℃下搅拌18h。将反应混合物通过Biotage快速柱层析法(CH2Cl2/MeOH,0-10％)在二氧化硅上纯化以得到化合物59。MS(m/z)计算值1344.41(M+H)+，实测值1344.46。
实施例39
Figure BDA0002922313000002041
将化合物59(290.0mg,0.22mmol)溶于THF和MeOH并在冰浴中冷却至0℃。将LiOH(90.5mg,2.16mmol)溶于H2O并滴加。将反应在室温搅拌并在45分钟内完成。将反应用乙酸中和，浓缩，并通过制备型HPLC直接纯化，得到脱保护的中间体化合物60。
Figure BDA0002922313000002042
将称为MP-OSu的3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28)溶于DMF和DIPEA中，并添加至化合物60。将反应搅拌3h直至通过LC-MS监测的反应完成。将反应混合物用乙酸中和，并通过制备型HPLC直接纯化以得到化合物61。LC-MS(方法A):tR＝1.42min,MS(m/z)计算值1091.31(M+H)+，实测值1091.31。
实施例40
Figure BDA0002922313000002051
将购自Click Chemistry Tools(CAS:1174157-65-3)的化合物75(3eq)溶于DMF和DIPEA中，并添加至化合物57。将反应搅拌3h直至通过LC-MS监测的反应完成。将反应混合物用乙酸中和，并通过制备型HPLC直接纯化以得到化合物62。LC-MS(方法A):tR＝1.43min,MS(m/z)计算值1050.06(M+H)+，实测值1050.07。
实施例41
Figure BDA0002922313000002052
根据实施例37的方法制备化合物63。LC-MS(方法A)；tR＝1.44min；MS(m/z)计算值1050.06(M+H)+，实测值1050。
实施例42
Figure BDA0002922313000002061
将根据Nature Biotechnology(2014)32:1059-1065)的方法制备的称为mDPR(Boc)-OSu的化合物65(6mg,16μmol)溶于无水DMF(0.25mL)中，并添加至包含根据实施例30的方法制备的化合物50(9mg,10μmol)的烧瓶中。在添加DIPEA(9μL)的同时搅拌反应，并且在1.5小时内反应完成。然后将反应用AcOH(9μL)淬灭，在DMSO中稀释，然后通过制备型HPLC纯化以提供化合物66(7mg,61％)。LC-MS(方法A):tR＝1.57min；MS m/z(ES+)实测值1143.51。
实施例43
Figure BDA0002922313000002062
在0℃下将化合物66(7mg,6μmol)在无水DCM(0.54mL)中搅拌，然后滴加TFA(0.06mL)。反应在2.5小时内完成。将反应物在DMSO中稀释，真空除去DCM，然后通过制备型HPLC纯化以提供化合物67(4mg,64％)。LC-MS(方法A):tR＝1.18min；MS m/z(ES+)实测值1041.22。
实施例44
Figure BDA0002922313000002071
将根据WO 2017165851的方法制备且称为Fmoc-Lys(PEG24)-OSu的化合物68(86mg,56μmol)溶于无水DMF(0.93mL)并添加至装有根据实施例30的方法制备的化合物50(32mg,37μmol)的烧瓶中。添加DIPEA(32μL)，将反应搅拌1h，在DMSO中稀释并通过制备型HPLC纯化以提供化合物69(25mg,29％)。LC-MS(方法A):tR＝1.68min；MS m/z(ES+)实测值1163.50(1/2质量)。
实施例45
Figure BDA0002922313000002072
将化合物69(10,25mg,11μmol)溶于DMF中的20％哌啶(0.55mL)并搅拌1h。然后将反应物在DMSO中稀释并通过制备型HPLC纯化以提供化合物70(22mg,95％)。LC-MS(方法A):tR＝1.31min,MS m/z(ES+)实测值1052.41(1/2质量)。
实施例46
Figure BDA0002922313000002081
将称为mDPR(Boc)-OSu的化合物65(8mg,21μmol)溶于DMF(0.2mL)，然后转移至含有化合物70(11,22mg,10μmol)以及DIPEA(9μL)的烧瓶中。将反应搅拌3h，用AcOH(9μL)淬灭，在DMSO中稀释，并通过制备型HPLC纯化以提供化合物71(12mg,51％)。LC-MS(方法A):tR＝1.58min；MS m/z(ES+)实测值1185.52(1/2质量)。
实施例47
Figure BDA0002922313000002082
将化合物71溶于无水DCM(0.45mL)并冷却至0℃。添加TFA(0.05mL)并将反应搅拌3h。然后将反应物用DMSO稀释，真空除去DCM，然后通过制备型HPLC纯化以提供化合物72(10mg,88％)。LC-MS(方法A):tR＝1.32min；MS m/z(ES+)实测值1135.85(1/2质量)。
实施例48
Figure BDA0002922313000002091
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840的方法制备的化合物35(660mg,1.36mmol)溶于DCM(5mL)。添加DIPEA(0.71mL,4.1mmol)，然后添加TBSOTf(0.34mL,1.5mmol)。将反应搅拌5分钟，用MeOH淬灭并真空浓缩。粗产物通过柱层析法25G KP-Sil10-80％EtOAc的Hex溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物73(731mg,1.22mmol,90％)。LC-MS(方法A):tR＝2.44min；MS(m/z)[M+Na]+计算值C26H37NNaO13Si622.19，实测值622.10。
实施例49
Figure BDA0002922313000002092
将化合物73(731mg,1.22mmol)溶于5:1MeOH:AcOH(10mL)。向反应添加锌粉(2.39g,36.6mmol)。将反应搅拌10分钟，然后通过硅藻土床过滤，并用MeOH冲洗。浓缩洗脱液，并通过柱层析法25G KP-Sil 10-100％EtOAc的Hex溶液纯化。浓缩含有所需产物的级分，得到无色固体状化合物74(693mg,1.22mmol,99％)。LC-MS(方法A):tR＝2.40min；MS(m/z)[M+H]+C26H40NO11Si计算值570.24，实测值571.08。
实施例50
Figure BDA0002922313000002093
将获自Click Chemistry Tools(CAS:1174157-65-3)且称为PropargOPr的化合物75(1.05g,4.66mmol)溶于DMF(10mL)。添加作为N-甲基甘氨酸的H-Sar-OH(831mg,9.33mmol)和DIPEA(2.4mL,14mmol)。将反应搅拌45分钟，用AcOH淬灭，并通过制备型HPLC纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到无色固体状化合物76(821.3mg,4.12mmol,88％)。LC-MS(方法A):tR＝0.81min；MS(m/z)[M+H]+C9H14NO4计算值200.09，实测值199.72。
Figure BDA0002922313000002101
实施例51
将来自实施例49的化合物74(636mg,1.22mmol)溶于DMF(5mL)。向反应添加DIPEA(1.06mL,6.08mmol)、来自实施例50的化合物76(727mg,3.65mmol)和HATU(1.38g,3.65mmol)。将反应搅拌60分钟，然后在EtOAc(200mL)中稀释，用饱和NaHCO3(200mL)和H2O(2x 200mL)洗涤。将有机部分用MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。粗产物通过柱层析法10-80％EtOAc的Hex溶液纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到无色固体状化合物77(823mg,1.10mmol,90％)。LC-MS(方法A):tR＝2.34min；MS(m/z)[M+H]+C35H51N2O14Si计算值751.31，实测值751.22。
实施例52
Figure BDA0002922313000002111
将化合物77(823mg,1.10mmol)溶于1:1:1THF:H2O:AcOH并在室温下搅拌24小时。将反应真空浓缩，用EtOAc(200mL)稀释，用饱和NaHCO3(3x 200mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到无色固体状化合物78(601mg,0.944mmol,86％)。LC-MS(方法A):tR＝1.55min；MS(m/z)[M+H]+C29H37N2O14计算值637.22，实测值637.04。
实施例53
Figure BDA0002922313000002112
将化合物78(300mg,0.47mmol)溶于DCM(2mL)。添加1,1′-羰基-二-(1,2,4-三唑)(232mg,1.41mmol)。将反应搅拌30分钟然后稀释入EtOAc(50mL)，用H2O(3x 50mL)洗涤，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到无色固体状化合物79(340mg,0.465mmol,99％)，其无需从用于随后步骤。LC-MS(方法A):tR＝1.68min；MS(m/z)[M+H]+C32H38N5O15计算值732.24，实测值732.11。
实施例54
Figure BDA0002922313000002121
将化合物(200mg,0.273mmol)溶于DCM(2mL)。向反应添加购自Enamine的2-(甲基磺酰基)乙胺(54μL,0.547mmol)和DIPEA(0.14mL,0.82mmol)。将反应搅拌10分钟然后稀释入EtOAc(50mL)，用1M HCl(3x 50mL)、H2O(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到无色固体状化合物80(210mg,0.267mmol,98％)。LC-MS(方法A)；tR＝1.64min；MS(m/z)[M+H]+C33H44N3O17S计算值786.24，实测值786.14。
实施例55
Figure BDA0002922313000002122
将甲磺酸依喜替康(21a,10.0mg,0.0188mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。向反应添加DIPEA(16μL,0.094mmol)和化合物79(41.3mg,0.0.564mmol)。将反应在60℃加热5小时。用AcOH淬灭反应并通过制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物81(1.4mg,1.3μmol,6.8％)。LC-MS(方法A):tR＝2.10min；MS(m/z)[M+H]+C54H57N5FO19计算值1098.36，实测值1098.51。
实施例56
Figure BDA0002922313000002131
将化合物81(1.4mg,1.3μmol)溶于MeOH(0.5mL)。添加LiOH(5mg,0.209mmol)，并将反应超声处理以帮助溶解并搅拌5分钟。将H2O(0.5mL)添加到反应中并搅拌5分钟，然后用AcOH淬灭并真空浓缩。反应物通过制备型HPLC 10mm 5-95％MeCN的H2O水溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物82(0.7mg,0.7μmol,57％)。LC-MS(方法A):tR＝1.62min.MS(m/z)[M+H]+C47H49FN5O16计算值958.32，实测值958.62。
实施例57
Figure BDA0002922313000002132
将化合物80(50.0mg,0.0636mmol)溶于DCM(1mL)。向反应添加多聚甲醛(100mg,3.3mmol)，然后是TMSBr(21μL,0.16mmol)。将反应搅拌15分钟。将等分试样在MeOH中淬灭，并通过UPLC-MS观察到完全转化为MeOH加合物。将反应通过0.45μm PTFE过滤器过滤，用DCM(2x 2mL)冲洗，然后加入甲苯(2mL)以共沸最终混合物。浓缩洗脱液以得到无色固体状化合物83，其立即用于下一步。
将化合物83(0.0636mmol)溶于无水DCM(0.5mL)。向反应添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(21μL,0.11mmol)，然后将反应溶液直接添加至化合物22固体(12.0mg,0.0183mmol)。将反应在室温搅拌3.5h，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH淬灭，浓缩，并通过制备型HPLC 21mm 10-95％MeCN的H2O溶液纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到黄色固体状化合物84(5.4mg,3.7μmol,20％)。LC-MS(方法A):tR＝2.30min；MS(m/z)[M+H]+C73H76FN6O23S计算值1455.47，实测值1455.43。将包含假定是依喜替康FMOC保护的胺的差向异构体的观察到的产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物85(2.1mg,1.4μmol,8％)。LC-MS(方法A):tR＝2.33min；MS(m/z)[M+H]+C73H76FN6O23S计算值1455.47，实测值1455.63。
Figure BDA0002922313000002141
将化合物84(5.4mg,3.7μmol)溶于MeOH(1ml)。添加LiOH(25mg)，并将反应超声处理以帮助溶解。将反应搅拌10分钟，并添加H2O(1mL)并再搅拌20分钟。将反应用AcOH淬灭，浓缩，并通过制备型HPLC 10mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物86(1.96mg,1.79μmol,48％)。LC-MS(方法A):tR＝1.22min；MS(m/z)[M+H]+C51H58FN6O18S计算值1093.35，实测值1093.56。
实施例58
Figure BDA0002922313000002151
将来自实施例57的化合物85(2.1mg,1.4μmol)溶于MeOH(1mL)。添加LiOH(25mg)，并将反应超声处理以帮助溶解。将反应搅拌10分钟，并添加H2O(1mL)并再搅拌20分钟。将反应用AcOH淬灭，浓缩，并通过制备型HPLC 10mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物87(0.98mg,0.90μmol,62％)。LC-MS(方法A):tR＝1.40min；MS(m/z)[M+H]+C51H58FN6O18S计算值1093.35，实测值1093.18。
实施例59
Figure BDA0002922313000002152
将肌氨酸甲酯HCl(88,5.00g,35.8mmol)悬浮于无水DCM(100mL)。添加DIPEA(18.7mL,107.5mmol)，并将反应超声处理并剧烈搅拌以溶解H-Sar-Ome。溶液略微不透明。将CO2鼓泡通过反应30分钟。将购自Gelest,Inc的二叔丁基异丁基甲硅烷基三氟甲磺酸盐(BIBSOTf,20mL,72mmol)加入反应中并搅拌1小时。将干冰颗粒加入反应混合物中。停止鼓泡后，浓缩反应物，用Hex(200mL)稀释，用1M HCl(3x 200mL)水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱层析法0-10％EtOAc的Hex溶液纯化。9:1Hex:EtOAc和用KMnO4着色得到Rf＝0.25。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色油状化合物89(10.38mg,30.03mmol,84％)。LC-MS(方法C):tR＝1.67min；MS(m/z)[M+H]+C17H36NO4Si计算值346.24，实测值346.99。
实施例60
Figure BDA0002922313000002161
将化合物89溶于1:1:1THF:MeOH:H2O(60mL)。添加LiOH(1.80g,75.1mmol)，并反应搅拌10分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH淬灭，真空浓缩，并通过柱层析法0-10％MeOH的DCM溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物90(8.79mg,26.5mmol,88％)。LC-MS(方法C):tR＝1.50min；MS(m/z)[M+H]+C16H34NO4Si计算值332.23，实测值331.86。
实施例61
Figure BDA0002922313000002162
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840的方法制备的化合物91(4.00g,8.78mmol)溶于DCM(10mL)。添加来自实施例60的BIBS-Sar-OH(90,5.82g,17.6mmol)，然后是EEDQ(6.52g,26.4mmol)。将反应搅拌90分钟。将反应用EtOAc(200mL)稀释，用1M HCL(3x200mL)水溶液、饱和NaHCO3(3x 200mL)、水(200mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱层析法0-60％EtOAc的Hex溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物92(5.16,6.71mmol,76％)。LC-MS:tR＝1.58min；MS(m/z)[M+H]+C36H57N2O14Si计算值769.36，实测值769.29。
实施例62
Figure BDA0002922313000002171
将化合物92(2.70g,3.51mmol)溶于无水吡啶(10mL)。添加LiI(2.82g,21.1mmol)，将反应密封，并在115℃加热过夜(～16h)。将反应用EtOAc(200mL)稀释，用1M HCl水溶液(3x 200mL)、H2O洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱层析法0-60％EtOAc的Hex溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物93(2.06g,2.73mmol,78％)。LC-MS(方法C):tR＝1.50min；MS(m/z)[M+H]+C35H55N2O14Si计算值755.34，实测值755.32。
实施例63
Figure BDA0002922313000002172
将化合物93(700mg,0.927mmol)溶于吡啶(2mL)。添加购自Gelest Inc.的BIBSOTf(0.78mL,2.78mmol)。将反应搅拌30分钟，用EtOAc(50mL)稀释，用1M HCl(3x 50mL洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物94(723mg,0.758mmol,82％)。LC-MS(方法C):tR＝1.85min；MS(m/z)[M+H]+C47H81N2O14Si2计算值953.52，实测值953.34。
实施例64
Figure BDA0002922313000002181
将化合物94(723mg,0.758mmol)溶于DCM(2mL)。添加CDT(373mg,2.28mmol)并将反应搅拌30分钟。将反应用EtOAc(50mL)稀释，用H2O(3x 50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到无色固体状化合物95(790mg,0.753mmol,99％)，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法C):tR＝1.86min；MS(m/z)[M+H]+C50H82N5O15Si2计算值1048.53，实测值1049.29。
将化合物95(395mg,0.376mmol)溶于0.5mL无水DMF并直接添加至甲磺酸依喜替康(21-a,25mg,0.047mmol)固体，然后是DIPEA(0.081mL,0.47mmol)。将反应搅拌过夜(约15小时)。通过UPLC-MS观察到完全转化。用EtOAc(20mL)稀释，用饱和NH4Cl(3x 20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到作为粗产物的化合物96，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法C):tR＝1.89min；MS(m/z)[M+H]+C72H101N5O19Si2计算值1414.66，实测值1414.71。
将化合物96(0.047mmol)溶于1mL无水DMF。添加AcOH(200μL)。向反应添加TBAF 1M的THF溶液(0.28mL)。45分钟后观察到完全转化。二氧化硅(100mg)以淬灭氟化物。过滤反应物，并通过制备型HPLC 21mm 5-60-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物97(45mg,0.046mmol,98％)。LC-MS(方法A):tR＝1.53min；MS(m/z)[M+H]+C47H49N5O17计算值974.31，实测值974.10。
实施例65
Figure BDA0002922313000002191
稀释化合物97(45mg,0.046mmol)以形成10mM DMSO溶液(4.6mL)。添加PBS 7.4(10x,4.6mL)以制备5mM溶液。添加乙酰基酯酶800单位/mL的溶液以形成2.5mM药物连接子溶液(9.2mL)。将反应在40℃下搅拌过夜(约15小时)。观察到完全转化。将反应稀释至200mL冷MeOH中，离心，收集上清液，浓缩，并通过制备型HPLC 21mm 10-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物98(30mg,0.035mmol)。LC-MS(方法A):tR＝1.30min；MS(m/z)[M+H]+C41H43N5O14计算值848.28，实测值847.97。
实施例66
Figure BDA0002922313000002201
将由Nature Biotechnology(2014)32:1059-1062的方法制备的马来酰亚胺-Dpr(Boc)-OH(65,26.6mg,0.0936mmol)溶于0.5mL无水DMF并冷却至0℃。添加二甲基吡啶(0.022mL,0.19mmol)，然后是COMU(38.7mg,0.0905mmol)。将反应搅拌30分钟。将活化的马来酰亚胺-Dpr(Boc)-OH溶液直接添加至化合物98(30mg,0.035mmol)固体。将反应搅拌60分钟，此时观察到完全转化。用AcOH淬灭反应，并通过制备型HPLC 21mm 10-95％MeCN的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色固体状化合物99(4.5mg,4.0μmol,13％)。LC-MS(方法A):tR＝1.72min；MS(m/z)[M+H]+C53H57N7O19计算值1114.37，实测值1114.69。
实施例67
Figure BDA0002922313000002202
将化合物99(4.5mg,4.0μmol)溶于20％TFA的DCM溶液中。25分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化为化合物100。将反应真空浓缩并通过制备型HPLC 10mm 10-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到白色粉末状化合物100(3.91mg,3.86μmol,96％)。LC-MS(方法A):tR＝1.31min；MS(m/z)[M+H]+C48H50N7O17计算值1014.32，实测值1014.07。
实施例68
Figure BDA0002922313000002211
将根据实施例26的方法制备的化合物45(82mg,0.097mmol)和称为7-MAD-MDCPT的化合物13(14mg,0.033mmol)溶于DCM(2mL)，然后是DMF(0.5mL)。将DCM蒸发掉以将反应混合物浓缩入DMF。30分钟后未观察到转化为产物，另外未观察到化合物45的水解。将DIPEA(0.1mL)加入反应混合物中，接着透明的红色反应混合物变得不透明。将反应在室温下搅拌过夜(～15h)。观察到约50％的药物转化为所需的药物连接子产物，剩余约10％的活化CDT连接子水解。[注意：使用MeOH稀释剂进行UPLC-MS分析，在t＝30分钟(反应中性)观察到连接子-CDT，在t＝15h(添加碱后)观察到连接子-OCOMe]。将反应在真空下于45℃缓慢浓缩60分钟。将反应混合物在60℃加热4小时，直到通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应真空浓缩，然后通过柱层析法0-5％MeOH的DCM溶液纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到白色固体状化合物101(28mg,0.023mmol,70％)。LC-MS(方法A):tR＝2.17min；MS(m/z)[M+H]+C61H58N5O21计算值1196.36，实测值1196.19。
实施例69
Figure BDA0002922313000002221
将化合物101，28mg,0.023mmol)溶于MeOH(0.5mL)和THF(0.5mL)。添加LiOH(25mg,1.0mmol)。将反应超声处理以溶解LiOH，然后搅拌。10分钟后添加水(0.5mL)。90分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化为脱保护的葡糖醛酸。添加哌啶(0.05mL)。再过60分钟后，观察到Fmoc完全脱保护。用AcOH(0.2mL)淬灭反应。将反应浓缩，然后通过制备型HPLC 10mm Max-RP使用5-60-95％MeCN的H2O溶液(0.05％TFA梯度)纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物102(10.1mg,0.0121mmol,51.8％)。LC-MS(方法A):tR＝1.05min；MS(m/z)[M+H]+C39H40N5O16计算值834.25实测值833.71。
实施例70
Figure BDA0002922313000002222
将化合物102(10.1mg,0.0121mmol)溶于DMF(0.2mL)。添加3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(9.7mg,0.036mmol)。添加DIPEA(13μL,0.073mmol)。将反应搅拌15分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.05mL)淬灭，然后通过制备型HPLC 10mm Max RP C12 5-60-95％MeCN的H2O溶液(0.05％TFA)纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色粉末状化合物103(5.53mg,0.00561mmol,46.4％)。LC-MS(方法A)tR＝1.24min；MS(m/z)[M+H]+C46H45N6O19计算值985.27，实测值985.45。
实施例74
Figure BDA0002922313000002231
根据实施例60的方法制备的化合物92(500mg,0.65mmol)溶于MeOH(10mL)。添加LiOH(500mg,21mmol)。将反应超声处理，并搅拌5分钟。添加H2O，搅拌5分钟。观察到完全转化。将反应用AcOH淬灭，真空浓缩并通过制备型HPLC纯化。将含有所需产物的部分真空浓缩以得到无色固体状化合物104(295mg,0.469mmol,72％)。LC-MS(方法C):tR＝1.23min；MS(m/z)[M+H]+C29H49N2O11Si计算值629.31，实测值629.01。
实施例72
Figure BDA0002922313000002232
将化合物104(295mg,0.469mmol)溶于无水吡啶并冷却至0℃。在15分钟内滴加BIBSOTf(0.392mL,1.41mmol)，添加每个化学计量当量后，通过UPLC-MS检查是否完成。将反应用EtOAc(100mL)稀释，用1M HCl(3x 100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过柱层析法50G KP-Sil,10-100％EtOAc的Hex溶液纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到无色固体状化合物105(301mg,0.363mmol,77％)。LC-MS(方法C):tR＝1.65min；MS(m/z)[M+H]+C41H75N2O11Si2计算值827.49，实测值827.31。
实施例73
Figure BDA0002922313000002241
将化合物105(218mg,0.264mmol)溶于无水DCM(1mL)并冷却至0℃。将来自实施例2的化合物5(0.087mmol)反应溶液直接添加至DCM反应溶液中。使反应混合物在1小时内升温至室温。在室温下搅拌16小时。用MeOH淬灭反应，然后通过快速层析法50G KP-Sil 0-10％MeOH的DCM溶液纯化。将包含所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物106(66.1mg,0.0467mmol,53％)。LC-MS(方法C):tR＝1.76min；MS(m/z)[M+H]+C72H106N5O20Si2计算值1416.70，实测值1416.74。
实施例74
Figure BDA0002922313000002242
将化合物106(66.1mg,0.0467mmol)溶于DCM(2mL)。添加TFA(0.4mL)。将反应搅拌20分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应真空浓缩，得到黄色固体状化合物107，其无需进一步纯化即可用于下一步。LC-MS(方法A):tR＝1.68min；MS(m/z)[M+H]+C67H98N5O18Si2计算值1316.64，实测值1316.80。
将化合物107(0.0467mmol)溶于无水DMF(1mL)。添加AcOH(200μL)，然后是TBAF 1M的THF溶液(200uL)。将反应在室温搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。加入二氧化硅(～100mg)以淬灭氟阴离子。将反应混合物通过注射器过滤器过滤，用2x 1mL 2:1DMA:H2O 10％AcOH冲洗，并通过制备型HPLC 30mm 10-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物108(33.5mg,0.0383mmol,82％)。LC-MS(方法A):tR＝1.16；MS(m/z)[M+H]+C42H45N5O16计算值875.29，实测值875.82。
实施例75
Figure BDA0002922313000002251
将化合物108(33.5mg,0.0383mmol)溶于DMF。向反应添加DIPEA(0.040mL,0.23mmol)，然后是3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,30.6mg,115mmol)。将反应搅拌90分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH淬灭，并通过Prep-HPLC-21mm纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物109a(26.2mg,0.0255mmol,67％)。LC-MS(方法A):tR＝1.39min；MS(m/z)[M+H]+C49H51N6O19计算值1027.32，实测值1026.88。
对实施例10的化合物18a-18p中的任何一种使用类似的方法以制备通式109的药物连接子化合物
Figure BDA0002922313000002261
其中R是实施例10的化合物18a-18p中提供的R基团的任何一个，包括从化合物18q开始合成的化合物，其中R是正戊基(化合物109b)。
实施例76
Figure BDA0002922313000002262
对实施例10的化合物18a-18p中的任何一种使用类似的方法以制备通式1114的药物连接子化合物：
Figure BDA0002922313000002271
其中R是实施例10的化合物18a-18p中提供的R基团的任何一个，包括从化合物18h开始合成的化合物，其中R是正戊基(化合物114a)以及从化合物6开始合成的化合物，其中R是正丁基(化合物114b)。
实施例77
按照实施例76和实施例44和45的反应方案制备式115化合物：
Figure BDA0002922313000002272
其中下标n为4-24的整数，并且R为实施例10的化合物18a-18提供的R基团中的任何一个。
实施例78
按照实施例26-28的方案制备式116化合物：
Figure BDA0002922313000002281
其中R是实施例7的喜树碱化合物14a-14z中与化合物45的偶联反应相容的任何基团，只要R取代基中不存在反应性亲核基团。
实施例78
按照实施例14和实施例73-75的方案制备式117化合物：
Figure BDA0002922313000002282
实施例79
Figure BDA0002922313000002283
将根据Bioconjugate Chem.(2009)20:1242–1250的方法制备的化合物6(19.0mg,0.0424mmol)溶于无水DCM(0.5mL)。向反应添加DMAP(15.4mg,0.127mmol)、Sc(OTf)3(12.5mg,0.0254mmol)、Boc-Sar-OH(24.1mg,127mmol)和DIC(21μL,136mmol)。将反应搅拌90分钟。通过柱层析法0-5％MeOH的DCM溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物2。LC-MS(方法A):tR＝1.52min；MS(m/z)[M+H]+C33H38N3O9计算值620.26，实测值619.96。
实施例80
Figure BDA0002922313000002291
将化合物118(25.2mg,0.0407mmol)溶于20％TFA的DCM溶液(2mL)。将反应搅拌15分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应真空浓缩以得到黄色固体状化合物119，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法A):tR＝0.93min；MS(m/z)[M+H]+C28H30N3O7计算值520.21，实测值519.87。
将化合物119(0.0407mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。添加DIPEA(35μL,0.203mmol)，然后是获自Broadpharm(CAS:955094-26-5)的Mal-amido-PEG2-NHS(52mg,0.122mmol)。将反应搅拌90分钟，用AcOH(50μL)淬灭，并通过制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物120(18.9mg,0.0228mmol,56％)。LC-MS(方法A):tR＝1.16min；MS(m/z)[M+H]+C42H48N5O13计算值830.32，实测值829.86。化合物120是通式Z’-A-S*-W-CPT2的示例性药物连接子化合物。
实施例81
Figure BDA0002922313000002301
将N-(3-羟丙基)马来酰亚胺(455mg,2.93mmol)溶于无水DCM(4mL)中。甲苯中的光气20％w/w，并将反应搅拌60分钟，然后在氮气流下浓缩，然后在真空中浓缩以提供粗制化合物122，将其以50mg/mL的浓度在DCM中重构并直接用于下一步。
将根据Bioconjugate Chem.(2009)20:1242–1250的方法制备的化合物6(10mg,0.022mmol)溶于无水DCM(0.5mL)。向反应添加DMAP(3mg,0.02mmol)。将在之前步骤中制备的化合物64的氯甲酸酯溶液(1mL)添加到反应中。将反应搅拌90分钟。观察到约50％转化为所需产物。将反应通过FCC 10G Biotage Ultra 0-5％MeOH的DCM溶液纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状的化合物65(7.5mg,0.012mmol,53％)。LC-MS(方法A):tR＝2.17min；MS(m/z)[M+H]+C33H32N3O10计算值630.21，实测值629.98。化合物122是通式Z’-A-CPT2的示例性药物连接子化合物。
实施例82
Figure BDA0002922313000002311
将根据实施例1的方法制备的化合物2(45mg,0.088mmol)溶于无水DCM(0.5mL)。向反应添加DIPEA(0.05mL)和DMAP(11mg,0.09mmol)。将在之前所述的化合物64的氯甲酸酯溶液(1.1mL)添加到溶液中并将反应搅拌60分钟。观察到约70％转化为所需产物。用MeOH淬灭反应，然后通过二氧化硅10％MeOH的DCM溶液过滤。浓缩洗脱液以得到白色固体状化合物123(0.088mmol)，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法B):tR＝1.91min；MS(m/z)[M+H]+C36H42N3O9Si计算值688.27，实测值687.99。
将粗制化合物123(0.088mmol)溶于DMF(2mL)。将AcOH(0.5mL)添加至反应混合物，然后是TBAF 1M的THF溶液(0.440mL,0.444mmol)。将反应搅拌30分钟，并且通过制备型HPLC21mm 5-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物124(10.24,0.01785mmol,20％)。LC-MS(方法A):tR＝1.24min；MS(m/z)[M+H]+C30H28N3O9计算值574.18，实测值573.90。化合物124是通式Z’-A-CPT3的示例性药物连接子化合物。
实施例83
Figure BDA0002922313000002321
向根据实施例14制备的化合物24的氯甲酸酯反应混合物中加入根据Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2002)12:217-219的方法制备的固体化合物125(291mg,0.390mmol)。10分钟后通过UPLC-MS观察到产物的转化。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，然后通过柱层析法0-10％MeOH的DCM溶液粗纯化。浓缩含有所需产物和杂质的级分(游离药物，连接子)以得到淡黄色固体状化合物126，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法C):tR＝1.85min；MS(m/z)[M+H]+C77H80N5O11Si计算值1278.56，实测值1278.09。
将化合物126溶于50％Et2NH的DCM溶液。将反应搅拌30分钟，这时通过UPLC-MS观察到完全的Fmoc脱保护。将反应混合物真空浓缩。蒸发后，观察到TBS保护基完全脱保护。通过柱层析法0-10％MeOH的DCM溶液纯化反应。将含有所需产物和少量杂质的级分真空浓缩以得到灰白色固体状化合物127(100mg,0.10mmol,41％)，其无需进一步纯化用于下一步。Rt＝1.03min疏水方法UPLC。MS(m/z)[M+H]+C56H56N5O9计算值942.41，实测值942.18。
将粗制化合物127(100mg,0.10mmol)溶于无水DMF(2mL)。添加DIPEA(0.037mL,0.212mmol)，然后是MP-PEG8-OSu(81mg,117mmol)。5分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化。用MeOH和AcOH淬灭反应，真空浓缩以得到粗制化合物128，其无需进一步纯化用于下一步。
将粗制化合物128溶于20％TFA的DCM溶液并搅拌1小时。将反应真空浓缩并通过制备型HPLC纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到灰白色固体状化合物129(31.0mg,0.0249mmol,23％)。LC-MS(方法A):tR＝1.37min；MS(m/z)[M+H]+C62H82N7O20计算值1244.56，实测值1243.93。化合物129是通式Z’-A-S*-W-RL-CPT3的示例性药物连接子化合物。
实施例84
Figure BDA0002922313000002331
向来自实施例3的化合物7的氯甲酸酯溶液(0.334mmol)一次性添加根据Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2002)12:217-219的方法制备的化合物125(372mg,0.499mmol)。将反应搅拌45分钟。使用前述样品制备，观察到氯甲酸酯几乎完全转化为所需产物。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过FCC 50G KP-Sil 0-5％MeOH的DCM溶液使用分步梯度纯化。将含有所需产物和杂质混合物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物130(450mg,～80％w/w,0.294mmol)，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法A):tR＝1.61min；MS(m/z)[M+H]+C74H70N5O12计算值1220.50，实测值1220.16。
将粗制化合物130(0.294mmol)溶于10mL 50％Et2HN的DCM溶液。将反应搅拌30分钟，此时通过UPLC-MS观察到几乎完全转化。将反应真空浓缩以得到黄色固体状化合物131，其无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法A):tR＝1.20min；MS(m/z)[M+H]+C59H60N5O10计算值998.43，实测值998.26。
将来自之前步骤的粗制化合物131(0.294mmol)溶于无水DCM(5mL)。添加溶于DMF(250mg/mL)的MP-Peg8-OSu(483mg,0.701mmol)。添加DIPEA(0.3mL)并将反应搅拌30分钟，通过UPLC-MS观察到完全转化为化合物132。含有化合物132的反应混合物无需进一步纯化用于下一步骤。LC-MS(方法A):tR＝1.37min；MS(m/z)[M+H]+C85H102N7O22计算值1572.71，实测值1571.90。
将含有粗制化合物132的反应混合物(化合物57，0.294mmol)淬灭并用TFA(1mL)酸化。将反应在室温搅拌20分钟，此时观察到完全转化。将反应真空浓缩，并通过制备型HPLC30mm C18 10-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色固体状化合物133(107mg,0.0823mmol,28％)。LC-MS(方法A):tR＝1.17min；MS(m/z)[M+H]+C65H86N7O21计算值1300.59，实测值1300.69。化合物133是通式Z’-A-S*-W-RL-CPT2的示例性药物连接子化合物。
实施例85
Figure BDA0002922313000002351
将根据Bioconjugate Chem.(2006)17:831-840的方法制备的化合物43(143.4mg,0.1916mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。添加DIPEA(0.0334mL,0.192mmol)。向DMF溶液添加双-(五氟苯基)碳酸酯(75.5mg,0.192mmol,购自TCI America，产品号B3604)。将反应搅拌30分钟，然后添加来自实施例7的0.5mL无水DMF中的化合物14a(28.7mg,0.0639mg)。将反应在室温搅拌2小时。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.035mL)淬灭，然后通过制备型HPLC在21.2x 250mm Max-RP柱上使用30-95％MeCN于0.05％TFA的H2O中的梯度来纯化。将含有所需产物的部分真空浓缩以得到黄色固体状化合物133(76.6mg,0.0623mmol,98％)。LC-MS(方法F):tR＝1.68min；MS(m/z)[M+H]+C63H62N5O21计算值1224.39，实测值1224.46。
实施例86
Figure BDA0002922313000002352
将化合物133(76.6mg,0.0623mmol)溶于THF:MeOH 1:1(2mL)。将反应在冰/水浴中冷却。添加LiOH(45mg,1.9mmol)并将反应搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到转化为乙酸酯脱保护的产物。将H2O(1mL)添加至反应混合物。将反应搅拌60分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.2mL)淬灭，真空浓缩并通过制备型HPLC使用21.2x 250mm Max-RP柱，用5-40-95％MeCN于0.05％TFA的H2O梯度洗脱来纯化。将包含所需化合物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物134(33.3mg,0.0386mmol,62％)。LC-MS(方法D):tR＝1.09min；MS(m/z)[M+H]+C41H44N5O16计算值862.28，实测值862.16。
实施例87
Figure BDA0002922313000002361
将化合物134(33.3mg,0.0386mmol)溶于无水DMF(0.5mL)和DIPEA(0.020mL,0.116mmol)，并添加购自TCI America(产品号S0427)的3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,15.4mg,0.0580mmol)。将反应搅拌30分钟。5分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.020mL)淬灭，并通过制备型HPLC在21.2x 250mm Max-RP上使用5-40-95％MeCN于0.05％TFA的H2O洗脱来纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物135(21.85mg,0.02157mmol,55.8％)。LC-MS(方法D):tR＝1.27min；MS(m/z)[M+H]+C48H49N6O19计算值1013.30，实测值1013.38。
实施例88
Figure BDA0002922313000002371
将实施例10的化合物18q(100.0mg,0.2094mmol)溶于无水DCM(4mL)。向反应添加甲苯中的光气20％w/w(2mL,3.51mmol)。将反应在氮气流下浓缩，然后在高真空下进一步干燥。添加DIPEA(0.11mL,0.63mmol)，并搅拌反应以溶解所有组分。将反应搅拌30分钟，此时观察到完全转化。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过柱层析法在25G KP-Sil柱上用0-6％MeOH的DCM溶液洗脱来纯化。浓缩含有所需产物和药物相关杂质的级分以得到黄色固体状化合物113(186.6mg,0.1474mmol,70％)。该产物无需进一步纯化用于下一步。LC-MS(方法D):tR＝2.14min；MS(m/z)[M+H]+C66H68N5O21计算值1266.44，实测值1266.57。
实施例89
Figure BDA0002922313000002372
将化合物136(186.6mg,0.1474mmol)溶于20％二乙胺的DMF溶液(2mL)。将反应搅拌50分钟，这时观察到Fmoc保护基几乎完全脱保护。将反应物真空浓缩并再溶于MeOH(2mL)。添加NaOMe(0.5M于MeOH中,1.77mL,0.884mmol)，并将反应在室温搅拌20分钟。20分钟后通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH中和，真空浓缩，并通过制备型HPLC在21.2x 250mm Max-RP柱上用5-40-95％MeCN于0.05％TFA的H2O溶液洗脱来纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物137(22.5mg,0.0257mmol,17％)。LC-MS(方法D):tR＝1.13min；MS(m/z)[M+H]+C43H50N5O15计算值876.33，实测值876.22。
实施例90
Figure BDA0002922313000002381
将化合物137(22.5mg,0.0257mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。向反应添加DIPEA(0.027mL,0.15mmol)，然后是3-(马来酰亚胺)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,20.5mg,0.0771mmol,购自TCI America，产品号S0427)。将反应搅拌5分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.030mL)淬灭，并通过制备型HPLC在21.2x 250mm MaxRP柱上用5-40-95％MeCN于0.05％TFA的H2O洗脱来纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物138a(11.36mg,0.01106mmol,43.1％)。LC-MS(方法D):tR＝1.33min；MS(m/z)[M+H]+C50H55N6O18计算值1027.36，实测值027.15。
实施例91
按照实施例88-90的方法制备通式138的药物连接子化合物：
Figure BDA0002922313000002391
其中R是实施例10的化合物18a-18p提供的R基团的任何一个，包括合成的药物连接子化合物，其中R是从化合物18r开始的环丙基(化合物138b)，除了甘露糖残基部分被葡糖醛酸代替。
实施例92
Figure BDA0002922313000002392
将如实施例21和22所描述制备的化合物30(623mg,0.694mmol)溶于无水DCM(4ml)。向反应添加多聚甲醛(208mg,6.94mmol)，然后是TMSBr(0.12mL,0.925mmol)。将反应在室温下搅拌30分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化为活化的氯甲基中间体。将反应物通过注射器过滤器过滤，用DCM 2mL冲洗，并添加甲苯(2mL)以共沸最终混合物。将洗脱液真空浓缩以得到无色固体。将实施例10的化合物18m(100.0mg,0.2313mmol)与甲苯共沸。将氯甲基中间体溶于无水CHCl3(6mL)中并直接添加至化合物18m，然后添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP,0.17mL,0.93mmol)。将反应在室温搅拌15小时，用MeOH淬灭，并真空浓缩。含有化合物139的粗反应混合物不经纯化用于下一步骤。
将粗制化合物139(0.2313mmol)溶于1:1MeOH:THF(4mL)。添加LiOH(55.4mg,2.31mmol)并将反应搅拌30分钟。添加H2O(2mL)并将反应搅拌30分钟。将反应用AcOH(0.1mL)淬灭，真空浓缩，并使用Biotage Ultra C18 60G柱，通过反相快速柱层析用5-30-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O中的梯度洗脱来纯化。浓缩含有所需产物和杂质的级分，并通过制备型HPLC再纯化，使用21.2x 250mm Max-RP柱，用5-30-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O中的梯度洗脱。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物140(40.9mg,0.0417mmol,18％)。LC-MS(方法D):tR＝1.23min；MS(m/z)[M+H]+C45H50N5O18S计算值980.29，实测值980.20。
实施例93
Figure BDA0002922313000002401
将化合物140(40.9mg,0.0417mmol)溶于无水DMF(1mL)。添加DIPEA(43μL,0.25mmol)，然后是3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(28,33.3mg,0.125mmol，购自TCI America，产品号为S0427)。将反应搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(5μL)淬灭，并通过制备型HPLC纯化，在21.2x 250mm MaxRP柱上用5-40-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液洗脱。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物141(8.94mg,7.90μmol,19％)。LC-MS(方法D):tR＝1.47min；MS(m/z)[M+H]+C52H55N6O21S计算值1131.31，实测值1131.43。
实施例94
Figure BDA0002922313000002411
将实施例54制备的化合物80(200mg,0.262mmol)溶于DCM(4mL)。添加多聚甲醛(250mg)，然后是TMSCl(2mL)。将反应搅拌20分钟，这时通过将2μL等分试样淬灭到98μLMeOH中而观察到完全转化为活化的氯甲基中间体，从而通过UPLC-MS观察到相应的MeOH加合物。通过注射器过滤器过滤反应，用DCM(2mL)冲洗，并添加甲苯(2mL)。真空蒸发溶剂，将最终产物置于高真空下直至准备使用。如WO 2006/006196所述制备Fmoc-三(羟甲基)氨基甲烷(THAM)。将Fmoc-THAM(270mg,0.786mmol)溶于DCM(2mL)，并直接添加到活化的中间体中。添加DIPEA(0.136mL,0.786mmol)，并将反应搅拌1小时。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用MeOH淬灭，真空浓缩，并通过柱层析法使用50G KP-Sil柱以及20-100％EtOAc的Hex溶液梯度纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物142(242.3mg,0.2264mmol,86％)。LC-MS(方法D):tR＝2.04min；MS(m/z)[M+H]+C50H60N3O21S计算值1070.34，实测值1070.42。
实施例95
Figure BDA0002922313000002421
将化合物142(242.3mg,0.2264mmol)溶于MeOH:THF 1:1(4mL)并用冰/水浴冷却。向反应添加LiOH(54mg,2.6mmol)并搅拌30分钟。向反应添加H2O(2mL)，使其升温至室温并搅拌30分钟。观察到完全转化为脱保护的产物。将反应用AcOH中和，真空浓缩，并使用Biotage C18 Ultra 30G柱用5-20-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液梯度洗脱来通过反相快速层析法纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到无色固体状化合物143(88.3mg,0.125mmol,55％)。LC-MS(方法D):tR＝0.60min；MS(m/z)[M+H]+C28H42N3O16S计算值708.23，实测值707.84。
实施例96
Figure BDA0002922313000002422
将化合物143(88.3mg,0.125mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。向反应添加化合物20b(30.0mg,0.0618mmol)，然后是DIPEA(0.032mL,0.024mmol)。将反应搅拌30分钟，这时观察到完全转化为产物。将反应用AcOH(0.050mL)淬灭，然后通过制备型HPLC使用21.2x 250mmMax-RP柱，用5-40-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液梯度洗脱来纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物144(1.69mg,0.00104mmol,1.7％)。LC-MS(方法D):tR＝1.03min；MS(m/z)[M+H]+C50H58N5O22S计算值1112.33，实测值1112.42。
实施例97
Figure BDA0002922313000002431
将三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(2.00g,4.72mmol)溶于3:1的水:乙醇(8mL)中。向反应混合物添加氯甲酸2,2,2-三氯乙酯(1.32mL,4.72mmol)。将反应在60℃下搅拌60分钟。将反应冷却至室温，用EtOAc(100mL)稀释，用1M HCl(3x 100mL)洗涤，用饱和NaCl(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到无色固体状化合物145(1.64g,5.52mmol,58％)。LC-MS(方法D):tR＝1.06min；MS(m/z)[M+H]+C7H13Cl3NO5计算值295.99，实测值296.12。
实施例98
Figure BDA0002922313000002432
将化合物80(300mg,0.334mmol)溶于DCM(2mL)。添加多聚甲醛(300mg,10.0mmol)，然后是TMSCl(1mL)。将反应搅拌10分钟，这时通过将2μL等分试样稀释到98μL MeOH中并通过UPLC-MS观察到MeOH加合物而观察到完全转化。用注射器过滤器过滤反应，用DCM(1mL)洗涤，浓缩后加入甲苯(2mL)以共沸最终混合物。将洗脱液真空浓缩以得到无色固体。在使用前，将化合物145与甲苯共沸。将活化的氯甲基化合物溶于无水DCM(1mL，在Mol Sieves上额外干燥)。添加DIPEA(0.23mL，1.3mmol)，然后是化合物145。将反应搅拌30分钟，此时观察到完全转化。用MeOH(0.1mL)淬灭反应，真空浓缩以得到无色固体状化合物146，其无需纯化用于下一步。LC-MS(方法D):tR＝2.16min；MS(m/z)[M+H]+C50H60Cl3N4O22S计算值1205.25，实测值1205.16。
将粗制化合物146(0.334mmol)溶于1:1:1MeOH:THF:AcOH(3mL)中。添加锌粉(218mg,3.34mmol)，并将反应搅拌10分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化为脱保护产物。将反应过滤，并将洗脱液浓缩。使用30x 250mm Max-RP柱，通过制备型HPLC 5-30-50-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液纯化粗产物。将含有所需产物的级分在真空中浓缩直至体积减少一半，用饱和NaHCO3水溶液将其变为碱性，然后用CHCl3(3x 50mL)和EtOAc(3x 50mL)萃取。合并有机相，并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩以得到白色固体状化合物147(103.4mg,0.1003mmol,30％)。LC-MS(方法D):tR＝1.65min；MS(m/z)[M+H]+C47H59N4O20S计算值1031.34，实测值1031.42。
实施例99
Figure BDA0002922313000002441
将化合物147(103.4mg,0.1003mmol)溶于无水DMF(0.5mL)。添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP,0.036mL,0.20mmol)，然后是化合物20b(97.3mg,0.201mmol)。将反应搅拌60分钟，此时通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(0.030mL)淬灭，然后通过使用50GBiotage C18超柱的反相快速柱层析法用5-60-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液的梯度洗脱来纯化。浓缩含有所需产物的级分以得到灰白色固体状化合物148(18.7mg,0.0130mmol,13％)。LC-MS(方法D):tR＝1.79min；MS(m/z)[M+H]+C69H75N6O26S计算值1435.44，实测值1435.27。
实施例100
Figure BDA0002922313000002451
将化合物148(18.7mg,0.0130mmol)溶于MeOH(1mL)。添加NaOMe(0.5M于MeOH中,0.026mL,0.013mmol)，然后将反应搅拌30分钟。添加H2O(1mL)，然后是LiOH(1.5mg,0.065mmol)，并将反应搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化为脱保护的产物。将反应用AcOH中和，浓缩并通过制备型HPLC使用10x 250mm柱，用5-25-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O溶液的梯度洗脱来纯化。将含有所需产物的级分真空浓缩以得到黄色固体状化合物149(3.9mg,0.0036mmol,28％)。LC-MS(方法D):tR＝0.92min；MS(m/z)[M+H]+C47H57N6O21S计算值1073.33，实测值1073.81。
实施例101
Figure BDA0002922313000002461
将化合物149(3.9mg,0.0036mmol)溶于无水DMF(0.2mL)。添加DIPEA(1.3μL,0.0073mmol)，然后是3-(马来酰亚胺基)-丙酸N-琥珀酰亚胺酯(1.1mg,0.0040mmol,购自TCI America，产品号S0427)。将反应搅拌30分钟。通过UPLC-MS观察到完全转化。将反应用AcOH(5μL)淬灭，并通过制备型HPLC在10x 250mm MaxRP柱上用5-30-95％MeCN于0.1％甲酸的H2O洗脱而纯化。将含有所需产物的级分冻干以得到黄色粉末状化合物126(0.23mg,0.19μmol,5％).Rt＝1.06min CORTECS C18通用方法UPLC。MS(m/z)[M+H]+C54H62N7O24S计算值1224.36，实测值1224.46。
生物学实施例
体外小分子和ADC评估
对多种癌细胞系评估了体外效能。所有细胞系均通过在IDEXX Bioresearch处的STR图谱分析进行鉴定并在复苏后培养不超过2个月。将在对数期生长中的培养细胞在含150μl补充有20％FBS的RPMI 1640的96孔板中接种24小时。以4x工作浓度制备抗体-药物缀合物在细胞培养基中的系列稀释液，并向96孔板中加入50μl的每种稀释液。在加入测试物后，将细胞与测试物一起于37℃下孵育4天。96小时后，通过
Figure BDA0002922313000002462
(Promega,Madison,WI)评估生长抑制并在酶标仪上测量发光。EC50值(一式三份测定)在此定义为相对于未经处理的对照导致细胞生长减少50％的浓度。
喜树碱缀合方法
在50％丙二醇(PG)1X PBS混合物中制备其中一个或多个链间二硫键已转化为半胱氨酸残基的全部或部分还原的ADC。将一半的PG添加到还原的mAb中，并将一半的PG添加到具有由马来酰亚胺部分组成的Z'组分的喜树碱药物连接子化合物的1mM DMSO储备溶液中。将PG/药物-连接子混合物以25％的比例添加到还原的mAb中。添加喜树碱药物-连接子化合物完成后，通过用活性炭(1mg的炭比1mg的mAb)处理去除过量的化合物。然后通过过滤去除炭，并使用NAP5或PD10柱将生成的ADC缓冲液交换为1X PBS pH 7.4中的5％海藻糖。
对于其中Z'由炔烃部分组成的喜树碱药物连接子化合物，以相同的方式用含马来酰亚胺的化合物即N6-重氮-N2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)-L-赖氨酸处理还原的抗体，以提供叠氮基标记的抗体，向其中添加100摩尔％过量的含炔烃的喜树碱药物-连接子化合物。向所得混合物中添加由100mM CuSO4和100mM三羟丙基三唑基甲胺(THPTA)的1:5混合物制得的溶液，以使CuSO4的终浓度为0.5mM，然后添加100mM氨基胍溶液，以使溶液中氨基胍的最终浓度为5mM，抗坏血酸钠溶液的量为100mM，因此抗坏血酸钠的最终浓度也为5mM。根据需要添加其他喜树碱药物连接子以完成缀合，同时添加足够量的1:5CuSO4:THPTA和抗坏血酸钠溶液以维持其原始浓度。叠氮化物和炔烃官能团之间的反应产生喜树碱ADC，其具有由三唑环系统组成的药物连接子部分。
体内模型方法
所有实验均根据动物护理和使用委员会在实验室动物护理评估和鉴定协会完全认可的设施中进行。在786-0、L540cy、BXPC3、Colo205和Caki-1模型中进行了功效实验。将肿瘤细胞以细胞悬液形式皮下植入免疫受损的SCID或裸鼠中。植入肿瘤后，当平均肿瘤体积达到约100mm3时将小鼠随机分成研究组(每组5只小鼠)。ADC或对照经由腹膜内注射给药一次。使用公式(L x W2)/2确定肿瘤体积随时间的变化。当肿瘤体积达到750mm3时，对动物实施安乐死。在植入后10-12周后，将表现出持久消退的小鼠终止。
ADC血浆稳定性测定
将所有ADC储备液标准化为2.5mg/mL。使用前将柠檬酸化小鼠(Balb C)的2.5mL单次使用等分试样保存在-80摄氏度下。如下制备ADC在小鼠血浆中的储备溶液。ADC(50μg)在200μL血浆中(每个时间点,0.25mg/mL)，最终PBS浓度为13.85。将血浆样品在37摄氏度下孵育6小时、1天、3天和7天的时间点，并一式两份采样。在每个时间点后，将样品保存在-80摄氏度下直到对其进行分析。制备IgSelect在1X PBS中的50％浆液。对于每个时间点的样品，向3μM滤板添加50μL IgSelect浆液，并施加真空以除去上清液。洗涤树脂(2X 1mL 1XPBS)，并在每次洗涤后施加真空。施加样品(180μL)，并在4摄氏度下振摇滤板(1200rpm)1小时。然后施加真空以除去血浆。用1mL PBS+50mM NaCl、1mL PBS和1mL水洗涤树脂，并在每次洗涤后施加真空。然后在Waters 350μL收集板上方将样品板在500xg下离心2分钟。通过用50μL Gly pH 3(2x50uL)处理从树脂洗脱ADC，在4℃下以500rpm混合2分钟，在500xg下离心3分钟到350μL 96孔板中，每个孔含有10μL 1M的Tris pH7.4缓冲液。使用UV-Vis酶标仪测定ADC浓度。使用每个样品1μL PNGase将样品去糖基化并在37摄氏度下孵育1小时。通过添加12μL 100mM的DTT还原每个ADC并在37摄氏度下孵育15分钟。最后，使用15min PLRP-MS方法分析样品(10或50μL注射)以评估轻链和重链构成。
ADC PK分析实验方法
此程序描述了用于定量啮齿动物K2EDTA血浆中的总人IgG的方法。
该方法使用生物素缀合的鼠抗人轻链κmAb(SDIX)作为捕获试剂，并使用与Alexafluor-647缀合的相同抗体作为检测试剂，来定量人抗体和/或抗体-药物缀合物测试物作为K2EDTA啮齿动物血浆中的总抗体(TAb)。使用GyroLab xPloreTM平台进行测定，该平台利用含有微流控结构的圆盘，该圆盘具有纳升规模的链霉亲和素包被珠柱，配体结合测定将在其上进行。简言之，根据需要，用幼龄混养啮齿动物K2EDTA血浆稀释研究样品，然后将其与校准物、对照和血浆空白液一起用Rexxip-HX缓冲液以1:10的最低要求稀释度(MRD)稀释，然后加载到96-孔样品板中。向96-孔试剂板中加入在具有Tween-20的pH 7.4磷酸盐缓冲盐水(PBS-T)中的1ug/mL生物素-抗人κ捕获试剂、在Rexxip F缓冲液中的25nM AF647-抗人κ检测试剂和PBS-T清洗缓冲液，将两个板均密封并加到仪器中。在GyroLab Control软件中建立运行文件，并将样品模板导出到Excel以允许输入样品名称和稀释系数。然后，在开始运行之前，将该模板导入回GyroLab Control中。测定按特定顺序进行：首先将生物素化的捕获试剂施加到BioAffy1000 CD，用PBS-T冲洗圆盘，然后添加经稀释的血浆空白液、标准物、对照和样品。在随后的PBS-T冲洗后，施加AF647-缀合的检测试剂。在最终的PBS-T冲洗后，用激光诱导荧光检测(激发波长：635nm)读取圆盘的每个柱。使用GyroLabEvaluator软件对在1％PMT下检测到的响应进行5-参数逻辑回归(5-PL)以将荧光响应转换为样品中存在的ng/mL总抗体。
啮齿动物K2EDTA血浆中总人IgG的定量的测定范围为：对于未缀合的抗体测试物，22.9ng/mL(LLOQ)至50,000ng/mL(ULOQ)；对于ADC，22.9ng/mL(LLOQ)至100,000ng/mL(ULOQ)。质量控制水平设定为80.0ng/mL(LQC)、800ng/mL(MQC)和8,000ng/mL(HQC2)和40,000ng/mL(HQC1)。
该测试方法适用于啮齿动物K2EDTA血浆中总人IgG的定量测定，以支持非GLP非临床研究。在Seattle Genetics，该方法以cGMP或GLP相容方式使用是不合格或未验证的。
结果
在下表中，ADC和CPT游离药物的IC50值分别以ng/mL和mmol/mL浓度给出，括号内的值表示在最高测试浓度下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比(ADC为1000ng/mL，CPT游离化合物为1μM，除非另有说明)。暴露于ADC 96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。ND＝未确定。Ag1是指靶向癌细胞上普遍存在且易于内在化的抗原的抗体并且h00是非结合性对照抗体；Ag2是指靶向CD30抗原的cAC10；Ag3是指靶向T淋巴细胞上发现的岩藻糖基化外周血抗原的抗体；Ag4是指靶向活化的T和B淋巴细胞表面抗原的抗体；和Ag5是指靶向外周血淋巴细胞共有的表面抗原的抗体。
当发现喜树碱缀合物在一种或多种测试细胞系中具有体外活性时，发现下表中的体内数据与体外数据相关。出乎意料的是，发现一些体外活性差的化合物在体内显示出良好的活性。
h00缀合物通常用于测定喜树碱缀合物是否具有免疫学特异性。然而，将一些测试的缀合物设计为具有一定的不稳定性，因此一旦缀合物结合靶抗原，就能够在靶细胞附近释放游离药物而无需内在化。因此，在没有这种缀合物的抗原结合的情况下，预期喜树碱药物单元的一些丢失。
表1.基于葡糖醛酸的喜树碱DAR 8 ADC的体外细胞毒性。灰色单元格中的值对应于IC50(ng/mL)浓度。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC 96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。
Figure BDA0002922313000002511
Figure BDA0002922313000002521
Figure BDA0002922313000002531
表2.基于非葡糖醛酸的喜树碱DAR 8ADC的体外细胞毒性。灰色单元格中的值对应于IC50(ng/mL)浓度。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC 96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。
Figure BDA0002922313000002532
Figure BDA0002922313000002541
灰色单元格，IC50值(ng/mL):+>1K；100≤++≤1000；+++<100。
透明单元格，1ug/mL下最大抑制％：+<20％；++≥20％。
ND是未测定。
表3.葡糖醛酸喜树碱DAR 8Ag2和Ag3 ADC的体外细胞毒性效力。浓度对应于IC50(ng/mL)值。括号中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。
Figure BDA0002922313000002542
Figure BDA0002922313000002551
表4A-C.葡糖醛酸喜树碱DAR 8 ADC的体外细胞毒性效力。A.抗-Ag2 ADC，B.抗-Ag4 ADC和C.抗-Ag5 ADC。灰色单元格中的浓度对应于IC50(ng/mL)值。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC 96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。
A.
Figure BDA0002922313000002552
B.
Figure BDA0002922313000002553
C.
Figure BDA0002922313000002554
表5.选择基于抗Ag2葡糖醛酸的DAR8喜树碱ADC针对具有可变Ag2表达的Ag2+肿瘤细胞系的体外细胞毒性效力。灰色单元格中的值对应于IC50(ng/mL)浓度。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。每个括号内的值是癌细胞上靶抗原的平均拷贝数。
Figure BDA0002922313000002561
表6.葡糖醛酸喜树碱ADC Ag2-(67)对Ag2(+)亲本DEL和Ag2(+)、MDR(+)、DEL-BVR细胞系的细胞毒活性。在存在本妥昔单抗的情况下培养亲本DEL淋巴瘤细胞系以诱导MDR表型的过表达，从而产生DEL本妥昔单抗的耐药系(DEL-BVR)。测定亲本(DEL)和MDR+(DEL-BVR)系的IC50值(灰色单元格,ng/mL)。包括本妥昔单抗(Ag2-vcMMAE(8))ADC作为对照。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(10000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。暴露于ADC 96小时后，通过CellTiter-Glo染色测定细胞活力。
Figure BDA0002922313000002562
表7.通过CellTitre-Glo、MM.1R和MM.1R Ag5 KO luc+细胞的3:1共培养物和MM.1R Ag5 KO luc+细胞评估针对MM.1R细胞(Ag5阳性)活力的Ag5(抗Ag5)葡糖醛酸喜树碱ADC的IC50值(ng/mL)的表格，活力由Bright-Glo评估。灰色单元格中的浓度对应于IC50(ng/mL)值。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(1000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比。
Figure BDA0002922313000002571
表8.Ag5-(67)处理的MM.1R、3:1共培养物和MM.1R Ag5 KO luc+以及MM.1R Ag5KO luc+细胞的IC50值(ng/mL)。灰色单元格中的浓度对应于IC50(ng/mL)值。透明单元格中的值表示在最高测试浓度(10000ng/mL)下保留的细胞相对于未处理细胞的百分比(参见图1)。
Figure BDA0002922313000002572
表9.通过PLRP-MS测定喜树碱DAR8 ADC在小鼠血浆中于37摄氏度下孵育的稳定性，以量化药物载量(参见图2和13)
Figure BDA0002922313000002573
Figure BDA0002922313000002581
＊IMMU是靶向在European Journal of Medicinal Chemistry(2019)167:583-593所描述的CL2A的喜树碱缀合物。

Claims (35)

1.一种具有式L-(Q-D)p的喜树碱缀合物或其盐，其中
L为来自靶向剂，尤其来自选择性结合癌细胞抗原的抗体的配体单元；
下标p是1-16的整数；
Q为具有选自以下的式的连接子单元：-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、Z-A-S*-W-、-Z-A-S*-W-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-B(S*)-W-RL-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-，
其中Z为延伸子单元；
A为键或接头单元；
B为并行接头单元；
S*为分配剂；
RL为可释放连接子；
W为氨基酸单元；
Y为间隔子单元；和
D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的药物单元：
Figure FDA0002922312990000011
Figure FDA0002922312990000021
其中
RB为选自H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；
RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；
RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和
其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和
其中当Q是-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上的羟基或氨基取代基中任一个的杂原子，或
其中当Q是-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-，或当Q是-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-，其中RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放单元时，D的共价连接点是CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6的内酯环上羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6上的氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，和
条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-和-Z-A-B(S*)-RL-Y-的-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
2.根据权利要求1所述的喜树碱缀合物，其中Q是具有选自以下的式的连接子单元：
-Z-A-RL-；-Z-A-RL-Y-；-Z-A-S*-RL-；-Z-A-B(S*)-RL-；
-Z-A-S*-RL-Y-；和-Z-A-B(S*)-RL-Y-,
其中A是接头单元和RL是葡糖苷酸单元。
3.根据权利要求2所述的喜树碱缀合物，其中D的共价连接点是通过CPT1-CPT7中任何一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
4.根据权利要求2所述的喜树碱缀合物，其中D是CPT1、CPT4、CPT6或CPT7，
其中与CPT1的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是-Z-A-不是任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基，
其中与CPT4的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，
其中与CRF6的共价连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H，和
其中与CPT7的共价连接点是通过其伯羟基官能团之一的氧原子。
5.根据权利要求2、3或4所述的喜树碱缀合物，其中葡糖苷酸单元具有下式：
Figure FDA0002922312990000041
其中Su是单糖的己糖形式；
O’表示能够被糖苷酶裂解的糖苷键的氧原子；
标记有单星号(*)的波浪线表示与其中RF和RF’的至少一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6上的氨基取代基的氮原子共价连接的位点，或与间隔子单元(Y)共价连接的位点，或表示与CPT1-CPT7中任一个的内酯环中羟基取代基的氧原子共价连接的位点；和
标记有双星号(**)的波浪线表示与Q的其余部分共价连接的位点，
尤其是葡糖苷酸单元具有下式：
Figure FDA0002922312990000042
6.根据权利要求5所述的喜树碱缀合物，其中
Q是具有-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-的式的连接子单元；和
间隔子单元(Y)具有下式：
Figure FDA0002922312990000043
其中EWG是吸电子基团；
O*代表来自D的羟基官能团的氧原子；
与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；和
与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点，或
间隔子单元(Y)具有下式：
Figure FDA0002922312990000051
当D是其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6，和
其中EWG是吸电子基团；
与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；和
与羰基碳原子相邻的波浪线表示与CPT1、CPT4或CPT6的氨基取代基的氮原子共价连接的位点。
7.根据权利要求5所述的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中三唑部分任选由来自化学修饰的靶向剂的叠氮基取代基与药物连接子化合物的炔基部分的1,3-二极环加成而形成，其中所述靶向剂是缀合物配体单元的前体，或
-Z-A-由可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成，或由任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环的琥珀酰亚胺基-丙酰基部分构成，
条件是D具有通过其氨基取代基的氮原子的共价连接并且-Z-A-由琥珀酰亚胺基和三唑基部分构成，任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或当D是CPT1时由可衍生自mDPR部分的琥珀酸酰胺部分构成，或
条件是D具有与其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接并且当D是CPT1时，-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，其任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分。
8.根据权利要求7所述的喜树碱缀合物或其盐，其中Q具有下式：
Figure FDA0002922312990000061
其中-Z-A-是优选具有水解形式的其琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分，其中琥珀酰亚胺环可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR部分；
标记有单星号(*)的波浪线表示与取代CPT1-CPT7中任何一个的内酯环的羟基官能团的氧原子、或与其中RF和RF’是-H的CPT1、CPT4或CPT6的胺官能团的氮原子、或与间隔子单元共价连接的位点；和
标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点，或
Q具有下式：
Figure FDA0002922312990000062
当Q是Q-Z-A-S*-RL时任选具有水解形式的其琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中
下标n为1-50的整数，优选4；
标记有单星号(*)的波浪线表示与CPT1-CPT7任何一个的羟基或胺官能团的杂原子或与间隔单元(Y)共价连接的位点；和
标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
9.根据权利要求6所述的喜树碱缀合物或其盐，其中-Q-D具有以下结构：
Figure FDA0002922312990000071
任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中波浪线表示琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的位点，或-Q-D具有以下结构：
Figure FDA0002922312990000072
或其盐，或-Q-D具有以下结构：
Figure FDA0002922312990000081
或其盐，并且其中波浪线表示琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的位点，其中琥珀酰亚胺环为水解形式的琥珀酸酰胺部分。
10.根据权利要求1所述的喜树碱缀合物，其中
Q是具有选自–Z-A-、-Z-A-S*-W-和–Z-A-B(S*)-W-的式的连接子单元，
其中A是接头单元，或
Q是具有选自-Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-和-Z-A-B(S*)-W-RL-的式的连接子单元，
其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放连接子。
11.根据权利要求10所述的喜树碱缀合物，其中
Q是具有选自–Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中
RL具有下式：
Figure FDA0002922312990000082
其中
标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；和
标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
12.根据权利要求10或11所述的喜树碱缀合物，其中
-Q-D具有式-Z-A-S*-W-RL-D，其中
D是其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6，其每一个与胺官能团的氮原子共价连接；和
W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸、N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元，或D是具有与内酯环上羟基取代基的氧原子共价连接的CPT1-CPT7；和W是选自谷氨酸或赖氨酸的氨基酸单元。
13.根据权利要求12所述的喜树碱缀合物，其中-Z-A-由琥珀酰亚胺基-链烷酰基部分或琥珀酰亚胺基和三唑部分构成，各自任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，或可衍生自喜树碱-连接子化合物的mDPR的琥珀酸酰胺部分，或
其中-Z-A-具有下式：
Figure FDA0002922312990000091
任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
14.根据权利要求11所述的喜树碱缀合物，其中
Q是具有选自-Z-A-S*-RL-和–Z-A-S*-W-RL-的式的连接子单元，其中
S*具有下式：
Figure FDA0002922312990000092
其中下标n是2-36的整数，
与氮原子相邻的波浪线表示与A的羰基碳原子共价连接的位点，并且与羰基碳原子相邻的波浪线表示与-Z-A-S*-RL-的RL或与–Z-A-S*-W-RL-的W的胺官能团的氮原子共价连接的位点，
尤其是任一式的Q的–Z A-具有下式：
Figure FDA0002922312990000101
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*的胺官能团的氮原子共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
15.根据权利要求11所述的喜树碱缀合物，其中Q是具有式–Z-A-S*-W-或–Z-A-S-W-RL-的连接子单元，其中任一式中的–Z-A-S*-W-具有下式：
Figure FDA0002922312990000102
任选具有水解形式的琥珀酰亚胺环作为琥珀酸酰胺部分，其中下标n是2-10的整数，优选2-4的整数；其中标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点；并且标记有三星号(***)的波浪线表示与L的硫原子共价连接的点。
16.根据权利要求10所述的喜树碱缀合物或其盐，其中–Q-D具有以下结构：
Figure FDA0002922312990000103
Figure FDA0002922312990000111
其中波浪线表示任选以水解形式作为琥珀酸酰胺部分的琥珀酰亚胺环与配体单元的硫原子共价连接的点。
17.喜树碱-连接子化合物，具有选自以下的式：
(vii)Z’-A-RL-D；
(viii)Z’-A-RL-Y-D；
(ix)Z’-A-S*-RL-D；
(x)Z’-A-S*-RL-Y-D；
(xi)Z’-A-B(S*)-RL-D；
(xii)Z’-A-B(S*)-RL-Y-D；
(vii)Z’-A-D
(viii)Z’-A-S*-W-D
(ix)Z’-A-B(S*)-W-D
(x)Z’-A-S*-W-RL-D；和
(xi)Z’-A-B(S*)-W-RL-D
其中
Z’为延伸子单元前体；
A为键或接头单元；
B为并行接头单元；
S*为分配剂；
RL为可释放连接子；
Y为间隔子单元；和
D为选自以下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6和CPT7的喜树碱化合物：
Figure FDA0002922312990000121
RB为选自-H、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8环烷基、(C3-C8环烷基)-C1-C4烷基、苯基和苯基-C1-C4烷基的成员；
RC为选自C1-C6烷基和C3-C6环烷基的成员；
RF和RF’各自为独立地选自-H、C1-C8烷基、C1-C8羟烷基、C1-C8氨基烷基、(C1-C4烷基氨基)-C1-C8烷基、N,N-(C1-C4羟烷基)(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N,N-二(C1-C4烷基)氨基-C1-C8烷基、N-C1-C4羟烷基-C1-C8氨基烷基、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羟烷基-C(O)-、C1-C8氨基烷基-C(O)-、C3-C10环烷基、(C3-C10环烷基)-C1-C4烷基、C3-C10杂环烷基、(C3-C10杂环烷基)-C1-C4烷基、苯基、苯基-C1-C4烷基、二苯基-C1-C4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-C4烷基的成员；或
RF和RF’与各自连接的氮原子组合形成具有0至3个取代基的5-、6-或7-元环，所述取代基选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2；和
其中RB、RC、RF和RF’的环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基部分被0至3个选自卤素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基和-N(C1-C4烷基)2的取代基取代；和
其中当喜树碱-连接子化合物为式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)或式(vi)时，D的共价连接点为CPT1-CPT7任何一个的羟基或氨基取代基任一个的杂原子，或
其中当喜树碱-连接子化合物为式(vii)、式(viii)或(ix)或当喜树碱-连接子化合物为其中RL为除葡糖苷酸单元之外的可释放单元的式(iii)、式(iv)、式(x)或式(xi)时，D的共价连接点是CPT1-CPT7任何一个的内酯环上羟基取代基的氧原子；和
条件是当共价连接点是CPT6的氨基取代基的氮原子时，RF和RF’的至少一个是-H，和
条件是当D是具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的喜树碱-连接子化合物的Z’-A-不是琥珀酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基部分。
18.根据权利要求17所述的喜树碱-连接子化合物，其具有选自式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)的式，其中A是接头单元并且RL是葡糖苷酸单元，尤其具有下式：
Figure FDA0002922312990000141
其中标记有单星号(*)的波浪线表示与D或与间隔子单元(Y)共价连接的位点；并且标记有双星号(**)的波浪线表示与A、B或S*共价连接的点。
19.根据权利要求18所述的喜树碱-连接子化合物，其中D的共价连接点是通过CPT1-CPT7任何一个的内酯环上的羟基取代基的氧原子。
20.根据权利要求18所述的喜树碱-连接子化合物，其中D是CPT1、CPT4或CPT6，其中
CPT1的连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是Z'-A-不是马来酰亚胺基-己酰基-β-丙氨酰基，
CPT4的连接点是通过其胺官能团的氮原子，和
CPT6的连接点是通过其胺官能团的氮原子，条件是RF和RF’的至少一个是-H。
21.根据权利要求17所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(iii)、式(iv)、式(v)和式(vi)，其中S*是PEG基团。
22.根据权利要求18所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D是CPT1-CPT7任何一个；并且间隔子单元(Y)具有下式：
Figure FDA0002922312990000142
其中EWG是吸电子基团；
O*代表来自D的羟基官能团的氧原子；
与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；和
与O*相邻的波浪线表示与D的其余部分共价连接的位点，或
D选自其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4和CPT6；和
间隔子单元(Y)具有下式：
Figure FDA0002922312990000151
其中
EWG是吸电子基团；
与氮原子相邻的波浪线表示与葡糖苷酸单元的羰基碳原子共价连接的位点；和
与羰基碳原子相邻的波浪线表示与其中RF和RF’的每一个是-H的CPT1、CPT4或CPT6的胺官能团的氮原子共价连接的位点。
23.根据权利要求17-22任一项的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分或mDPR构成，其碱性氮原子任选被酸不稳定的保护基质子化或保护，
条件是当D为具有通过其氨基取代基的氮原子共价连接的CPT1时，Z’-A-由mDPR构成，特别是
当D为CPT1时，Z’-A-由mDPR或马来酰亚胺基-链烷酰基-β-丙氨酰基部分构成，条件是D具有与其内酯环上的羟基取代基的氧原子的共价连接。
24.根据权利要求17所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(vii)、式(viii)或式(ix)，其中A是接头单元，或其具有式(i)、式(iii)、式(x)或式(xi)，其中A是接头单元并且RL是除葡糖苷酸单元以外的可释放连接子。
25.根据权利要求24所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(i)、式(iii)或式(x)，其中
RL具有下式：
Figure FDA0002922312990000161
其中
标记有双星号(**)的波浪线表示与D共价连接的位点；和
标记有单星号(*)的波浪线表示与A、S*或W共价连接的点。
26.根据权利要求25所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(x)，其中W是选自N-甲基-甘氨酸(肌氨酸)、N-甲基-丙氨酸、N-甲基-β-丙氨酸、缬氨酸和N-甲基-缬氨酸的氨基酸单元。
27.根据权利要求24、25或26所述的喜树碱-连接子化合物，其中Z’-A-由马来酰亚胺基-链烷酰基部分或mDPR构成，其碱性氮原子任选被酸不稳定的保护基质子化或保护。
28.根据权利要求24、25或26所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(iii)或式(x)，其中Z’-A-具有选自以下的式：
Figure FDA0002922312990000162
其中标记有双星号(**)的波浪线表示与S*共价连接的位点。
29.根据权利要求24、25或26所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(iii)或式(x)，其中S*具有下式：
Figure FDA0002922312990000163
其中下标n是2-36的整数。
30.根据权利要求24或25所述的喜树碱-连接子化合物，其具有式(viii)或式(x)，其中Z’-A-S*-W-具有下式：
Figure FDA0002922312990000171
其中下标n是2-10的整数，优选2-4的整数；标记有双星号(**)的波浪线表示与D或RL共价连接的位点。
31.根据权利要求17所述的喜树碱-连接子化合物或其盐，其具有以下结构：
Figure FDA0002922312990000172
Figure FDA0002922312990000181
32.喜树碱缀合物在制备用于治疗受试者癌症的药物中的用途，其中所述喜树碱缀合物具有权利要求1所述的式，尤其是所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤，优选淋巴瘤或白血病。
33.一种药学可接受的组合物，其包含权利要求1所述的喜树碱缀合物和至少一种药学可接受的赋形剂。
34.用于治疗需要其的受试者中的癌症的组合物，其中所述组合物由有效量的权利要求1所述的喜树碱缀合物构成，尤其是所述癌症选自淋巴瘤、白血病和实体瘤，优选淋巴瘤或白血病。
35.一种制备权利要求1所述的喜树碱缀合物的方法，所述方法包括接触具有对权利要求17的喜树碱-连接子化合物的Z’具有反应性的官能团的靶向剂的步骤，从而在结构分别对应于靶向剂和Z’的喜树碱缀合物的配体单元和延伸子单元(Z)之间形成共价键，尤其是
靶向剂是具有至少一个半胱氨酸残基的抗体，其中反应性官能团是硫醇并且Z’由马来酰亚胺部分构成，或
靶向剂是经修饰以具有含叠氮的残基作为反应性官能团的抗体并且Z’由炔烃官能团构成，其中所述叠氮化物和炔烃官能团能够进行1,3-二极环加成反应以形成三唑环系统。
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