CN112481365A - 冻干pcr预混液的试剂 - Google Patents
冻干pcr预混液的试剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112481365A CN112481365A CN201910867009.5A CN201910867009A CN112481365A CN 112481365 A CN112481365 A CN 112481365A CN 201910867009 A CN201910867009 A CN 201910867009A CN 112481365 A CN112481365 A CN 112481365A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- freeze
- pcr premix
- pcr
- melitriose
- reduced
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title abstract description 12
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims abstract description 13
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 claims description 72
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 67
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 57
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 52
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 30
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 30
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 29
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 29
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 28
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 28
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 105
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 49
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 5
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及分子生物学领域，具体而言，提供了一种冻干PCR预混液的试剂。本发明通过采用在PCR预混液中添加稳定处方实现PCR预混液的冻干，稳定处方组分简单，冻干成品成型良好，稳定期长，且稳定处方不影响PCR扩增效率。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种冻干PCR预混液的试剂。
背景技术
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种分子生物学技术，用于扩增特定的基因片段，目前该技术已在全世界范围内广泛应用，因其具有较高的灵敏度，优良的特异性，并且具有操作简便，快捷等优点，在生物和医学研究中起到了举足轻重的作用。
目前市场流通的用于基因检测的PCR试剂大部分为液体试剂，且扩增所需的各个组分通常需要分几管分装，常温储存并不稳定，需要进行超低温保存和运输，这就给储存和运输带来很大不便，同时试剂的效期短，在检测操作中增加了环境中气溶胶对扩增体系的污染风险。对此，将液体试剂混合冻干制备成冻干的PCR预混液进行保存为目前的一种改进方法。
市场上冻干的PCR预混液按照是否含有扩增引物分为两种，一种是冻干PCR扩增预混液，另外一种是冻干PCR酶预混液，其区别在于，前者为设计好的针对目的基因的全混检测试剂，直接加水复溶后，添加待检样本即可检测；而后者仅含有PCR扩增所需的酶，有的还含有扩增所需的底物，其可根据需求应用于各类目的基因的检测。目前冻干PCR预混液的冻干难点之一是稳定处方，稳定处方不仅需要保证冻干PCR预混液成型，保存期理想，更重要的是引入的处方不干扰、不破坏预混液各试剂的PCR扩增效率。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，以保证冻干PCR预混液成型，保存期理想，更重要的是引入的处方不干扰、不破坏预混液各试剂的PCR扩增效率。
本发明的第二目的在于提供一种冻干PCR预混液的方法。
本发明的第三目的在于提供冻干的PCR预混液，以缓解现有技术中冻干的PCR预混液相较于冻干前扩增效率差距大等问题。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，所述稳定处方包括如下a)-c)任一种组成：
a)氢化麦芽糖；
b)氢化麦芽糖和蜜里三糖；
c)氢化麦芽糖和蜜里三糖，以及，海藻糖、乳糖或蔗糖中的至少一种。
进一步地，所述氢化麦芽糖的使用终浓度为3-10w/v％，优选为5-10w/v％，进一步优选为6-10w/v％。
进一步地，所述蜜里三糖的使用终浓度为2-10w/v％，优选为6-10w/v％，进一步优选为7-10w/v％。
进一步地，所述海藻糖的使用终浓度为3-12w/v％，优选为6-12w/v％，进一步优选为7-11w/v％。
进一步地，所述乳糖的使用终浓度为0.3-3w/v％，优选为0.3-1w/v％，进一步优选为0.4-0.9w/v％。
进一步地，所述蔗糖的使用终浓度为2-9w/v％，优选为6-9w/v％，进一步优选为7-8w/v％。
进一步地，所述PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。
一种冻干PCR预混液的方法，在PCR预混液中加入稳定处方，经冻干得到冻干的PCR预混液。
上述方法制备得到的冻干的PCR预混液。
一种包括上述冻干的PCR预混液的试剂盒。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的用于冻干PCR预混液的稳定处方，由如下a)-c)任一种组成：a)氢化麦芽糖；b)氢化麦芽糖和蜜里三糖；c)氢化麦芽糖和蜜里三糖，以及，海藻糖、乳糖或蔗糖中的至少一种。氢化麦芽糖是一种冻干赋形剂，氢化麦芽糖的官能团是羟基，在冻干过程中对活性蛋白具有保护作用，本发明通过实验首次发现氢化麦芽糖作为用于冻干PCR预混液的稳定处方不会影响PCR的扩增反应，同时可以良好的保证冻干成型，具有稳定扩增Ct值和荧光值的效果。蜜里三糖为低聚物，带有五个结晶水，在环境中不吸潮，从而避免轧盖之前产品与室外空气接触的空档吸潮，进而解决了因产品吸潮而导致的产品性能不稳定性问题。此外，氢化麦芽糖和蜜里三糖又具有协同作用，氢化麦芽糖为冻干赋形剂，蜜里三糖为低温保护剂，低温保护剂和赋形剂结合既能使冻干成型又能起到对活性蛋白的保护作用。另外，海藻糖、乳糖和蔗糖也都具有稳定和低温保护的作用，并且令人意外的是还能一定程度提高PCR扩增效率，从而可以提高冻干的PCR预混液的整体性能。
本发明提供的冻干PCR预混液的方法，该方法简单易操作，制备冻干PCR预混液成本低。
本申请提供的冻干的PCR预混液与冻干前的PCR预混液性能差异小，并且有效期大大延长，稳定性更好，扩增效率相当或更好，包含该冻干的PCR预混液的试剂盒的稳定性和有效期也将得到显著的改善。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，包括如下a)-c)任一种组成：
a)氢化麦芽糖；
b)氢化麦芽糖和蜜里三糖；
c)氢化麦芽糖和蜜里三糖，以及，海藻糖、乳糖或蔗糖中的至少一种。
氢化麦芽糖是一种冻干赋形剂，氢化麦芽糖的官能团是羟基，在冻干过程中对活性蛋白具有保护作用，本发明通过实验首次发现氢化麦芽糖作为用于冻干PCR预混液的稳定处方不会影响PCR的扩增反应，同时可以良好的保证冻干成型，具有稳定扩增Ct值和荧光值的效果。
蜜里三糖为低聚物，带有五个结晶水，在环境中不吸潮，从而避免轧盖之前产品与室外空气接触的空档吸潮，进而解决了因产品吸潮而导致的产品性能不稳定性问题。
此外，氢化麦芽糖和蜜里三糖又具有协同作用，氢化麦芽糖为冻干赋形剂，蜜里三糖为低温保护剂，低温保护剂和赋形剂结合既能使冻干成型又能起到对活性蛋白的保护作用。
另外，海藻糖、乳糖和蔗糖也都具有稳定和低温保护的作用，并且令人意外的是还能一定程度提高PCR扩增效率，从而可以提高冻干的PCR预混液的整体性能。需要说明的是，方案c)中稳定处方可以为氢化麦芽糖、蜜里三糖和海藻糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖和乳糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖和蔗糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖、海藻糖和乳糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖、海藻糖和蔗糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖、乳糖和蔗糖；氢化麦芽糖、蜜里三糖、海藻糖、乳糖和蔗糖。
可以理解的是，本发明提供的各物质使用终浓度是指在应用于PCR预混液冻干保存时，各物质的使用浓度，具体含义为：以待冻干PCR预混液体积为参照需要加入的各物质质量。
在优选地实施方式中，对于a)，稳定处方由氢化麦芽糖组成，氢化麦芽糖的使用终浓度为3-10w/v％，优选为5-10w/v％，进一步优选为6-10w/v％。氢化麦芽糖的使用终浓度典型但非限制性的为3w/v％、4w/v％、5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％、9w/v％或10w/v％。本发明对氢化麦芽糖的用量进行了限定，正是由于实验证明上述浓度对PCR预混液的冷冻稳定性效果较优，并且通过进一步地优化限定，效果更好。
在优选地实施方式中，对于b)，稳定处方由氢化麦芽糖和蜜里三糖组成，氢化麦芽糖的使用终浓度为3-10w/v％，优选为5-10w/v％，进一步优选为6-10w/v％；蜜里三糖的使用终浓度为2-10w/v％，优选为6-10w/v％，进一步优选为7-10w/v％。蜜里三糖的使用终浓度典型但非限制性的为2w/v％、3w/v％、4w/v％、5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％、9w/v％或10w/v％。本发明研究发现，在氢化麦芽糖的基础上加入蜜里三糖，蜜里三糖在PCR预混液冻干中可以起到低温保护的作用，同时防止冻干产品的吸潮现象，对稳定冻干的PCR预混液具有良好效果，进一步研究发现，蜜里三糖在本发明提供的浓度范围内效果较好，对浓度的逐步优化也提高了效果。
在优选地实施方式中，对于c)，稳定处方由氢化麦芽糖和蜜里三糖，以及，海藻糖、乳糖或蔗糖中的至少一种组成。氢化麦芽糖的使用终浓度为3-10w/v％，优选为5-10w/v％，进一步优选为6-10w/v％；蜜里三糖的使用终浓度为2-10w/v％，优选为6-10w/v％，进一步优选为7-10w/v％。当含有海藻糖时，海藻糖的使用终浓度为3-12w/v％，优选为6-12w/v％，进一步优选为7-11w/v％；当含有乳糖时，乳糖的使用终浓度为0.3-3w/v％，优选为0.3-1w/v％，进一步优选为0.4-0.9w/v％；当含有蔗糖时，蔗糖的浓度为2-9w/v％，优选为6-9w/v％，进一步优选为7-8w/v％。
需要说明的是，海藻糖的使用终浓度典型但非限制性的为3w/v％、4w/v％、5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％、9w/v％、10w/v％、11w/v％或12w/v％。乳糖的使用终浓度典型但非限制性的为0.3w/v％、0.5w/v％、1w/v％、1.5w/v％、2w/v％、2.5w/v％或3w/v％。蔗糖的使用终浓度典型但非限制性的为2w/v％、3w/v％、4w/v％、5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％或9w/v％。
研究发现海藻糖、乳糖和蔗糖可以提高冻干的PCR预混液的稳定性，本发明提供的海藻糖、乳糖和蔗糖的使用终浓度科学合理，通过进一步地优化限定，效果进一步改善。
在优选地实施方式中，PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。PCR预混液可以为多种类型，可以为只含有酶的PCR酶预混液，含有酶和dNTPS的PCR酶预混液，含有扩增引物、酶和dNTPS的PCR扩增预混液，等等，本发明提供的稳定处方均可适用。
一种冻干PCR预混液的方法，在PCR预混液中加入上述的稳定处方，经冻干得到冻干的PCR预混液。该方法简单易操作，制备冻干PCR预混液成本低。
本发明提供上述方法制备得到的冻干的PCR预混液。
本发明最后提供包括上述冻干的PCR预混液的试剂盒。
本申请提供的冻干的PCR预混液与冻干前的PCR预混液性能差异小，并且有效期大大延长，稳定性更好，，扩增效率相当或更好，包含该冻干的PCR预混液的试剂盒的稳定性和有效期也将得到显著的改善。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明实施例中用到的用于冻干的PCR预混液为如下三种：
1号：PCR扩增预混液：含有0.05U/μl-0.1U/μl的DNA聚合酶，HSV-F0.2μM，HSV-R0.2μM，HSV-P 0.04μM，0.1mM-5mM的Mg2+，0.1mM-0.5mM的dNTP，10mM-30mM(NH4)2SO4，10mM-100mM Tris-HCl、0.0lmg-4mg/ml BSA。
HSV-F序列为5’-TTATCCCATTCCTTTTGGTTCTTT-3’(SEQ ID NO.1)。
HSV-R序列为5’-GGGTCATGTTGGGGCTT-3’(SEQ ID NO.2)。
HSV-P探针序列为5’-TGGGTTGGTGGTGGAGGAGA-3’(SEQ ID NO.3)。
2号：PCR酶预混液1：DNA聚合酶，dNTP。
3号：PCR酶预混液2：DNA聚合酶。
下面各实施例中给出的各物质“w/v％”是以上述3种PCR预混液为参照进行的限定。
采用实施例1-37和对比例1-3的稳定处方对1-3号PCR预混液进行冻干，冻干体积根据需要设定为10-40ul，同时以不添加任何稳定处方的PCR预混液作为对照，37℃考核1个月(以冻干后保存0h的活性为参照，37℃考核1个月的活性预估为4℃保存2年的活性)，以液态PCR预混液为参照，检测实施例与对比例、对照例的性能，检测Ct值和荧光值。
测试方法：
1、取相同浓度的同一核酸样品10ul，分别添加超纯水复溶的1-3号冻干产品或液体PCR预混液，其中添加2、3号冻干产品的样品需按液体PCR预混液补加相应试剂，震荡混匀并瞬时离心后上机。
2、上机：在荧光定量实时PCR仪上设置反应程序如下：
3、通道选择：FAM；
4、运行结束后，相对法分析自动分析结果。
其中，成型差的产品并未进行稳定性测试。
结果如下：
参照：液态PCR预混液，其检测的CT值为26.0。
对照：不添加任何稳定处方的PCR预混液直接进行冻干，1-3号冻干产品成型差，CT值为31.2-32.4，荧光值比液态下降71％-80％。
实施例1
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖1w/v％组成。1-3号冻干产品成型差，CT值为27.2-28.0，荧光值比液态下降12％-15％。
实施例2
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖12w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为27.9-28.8，荧光值比液态下降16％-18％，37℃考核1个月活性下降19％-21％。
实施例3
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖3w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.8-26.3，荧光值比液态下降6％-8％，37℃考核1个月活性下降20％-23％。
实施例4
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.8-26.2，荧光值比液态下降3％-5％，37℃考核1个月活性下降19％-21％。
实施例5
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.3，荧光值比液态下降3％-5％，37℃考核1个月活性下降19％-21％。
实施例6
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.8-26.1，荧光值比液态下降1％-3％，37℃考核1个月活性下降18％-20％。
实施例7
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖3w/v％和蜜里三糖1w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.2，荧光值比液态下降5％-8％，37℃考核1个月活性下降16％-19％。
实施例8
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％和蜜里三糖15w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.3，荧光值比液态下降3％-5％，37℃考核1个月活性下降14％-16％。
实施例9
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％和蜜里三糖2w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.2，荧光值比液态下降3％-5％，37℃考核1个月活性下降3％-6％。
实施例10
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％和蜜里三糖7w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.3，荧光值比液态下降3％-5％，37℃考核1个月活性下降19％-21％。
实施例11
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％和蜜里三糖10w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.9-26.2，荧光值比液态下降2％-5％，37℃考核1个月活性下降2％-6％。
实施例12
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％和蜜里三糖9w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.8-26.2，荧光值比液态下降0％-2％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例13
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖3w/v％，蜜里三糖10w/v％和海藻糖1w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为26.0-26.2，荧光值比液态下降2％-4％，37℃考核1个月活性下降2％-5％。
实施例14
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖2w/v％和海藻糖15w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.7-26.2，荧光值比液态下降3％-6％，37℃考核1个月活性下降3％-7％。
实施例15
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖7w/v％和海藻糖3w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.2-25.8，荧光值比液态高0％-2％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例16
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％，蜜里三糖9w/v％和海藻糖6w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.0-25.5，荧光值比液态下降0％-2％，37℃考核1个月活性下降1％-3％。
实施例17
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖10w/v％和海藻糖12w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.2-25.6，荧光值比液态下降0％-1％，37℃考核1个月活性下降0％-2％。
实施例18
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖7w/v％和海藻糖7w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.4-25.7，荧光值比液态下降0％-2％，37℃考核1个月活性下降0％-2％。
实施例19
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％和海藻糖9w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.1-25.2，荧光值比液态提高1％-2％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例20
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖3w/v％，蜜里三糖10w/v％和乳糖0.1w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为26.0-26.3，荧光值比液态下降0％-2％，37℃考核1个月活性下降2％-4％。
实施例21
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖2w/v％和乳糖5w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.4-25.8，荧光值比液态下降2％-4％，37℃考核1个月活性下降2％-6％。
实施例22
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％和乳糖0.3w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.6-25.7，荧光值比液态提高3％-6％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例23
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％，蜜里三糖7w/v％和乳糖3w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.2-25.4，荧光值比液态提高2％-5％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例24
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖10w/v％和乳糖1w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.6-25.8，荧光值比液态提高3％-5％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例25
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％，蜜里三糖10w/v％和乳糖0.4w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.0-25.5，荧光值比液态提高1％-2％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例26
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖7w/v％和乳糖0.9w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.4-25.7，荧光值比液态提高3％-5％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例27
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％和乳糖0.6w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.6-25.8，荧光值比液态提高2％-6％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例28
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖3w/v％，蜜里三糖10w/v％和蔗糖1w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.8-26.1，荧光值比液态提高0％-2％，37℃考核1个月活性下降1％-4％。
实施例29
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖10w/v％，蜜里三糖2w/v％和蔗糖12w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.3-25.5，荧光值比液态下降0％-1％，37℃考核1个月活性下降2％-4％。
实施例30
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％和蔗糖2w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.2-25.4，荧光值比液态提高3％-6％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例31
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％，蜜里三糖7w/v％和蔗糖9w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.0-25.2，荧光值比液态提高5％-7％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例32
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖7w/v％和蔗糖7w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为25.1-25.3，荧光值比液态提高5％-8％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例33
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖6w/v％，蜜里三糖9w/v％和蔗糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为24.9-25.4，荧光值比液态提高5％-7％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例34
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％，乳糖0.6w/v％和蔗糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为24.8-25.2，荧光值比液态提高6％-9％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例35
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％，海藻糖9w/v％和乳糖0.6w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为24.9-25.0，荧光值比液态提高8％-10％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例36
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％，海藻糖9w/v％和蔗糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为24.6-25.0，荧光值比液态提高9％-12％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
实施例37
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由氢化麦芽糖8w/v％，蜜里三糖9w/v％，海藻糖9w/v％，乳糖0.6w/v％和蔗糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为24.2-24.5，荧光值比液态提高13-17％，37℃考核1个月活性下降0％-3％。
对比例1
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由蜜里三糖9w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为30.8-31.4，荧光值比液态降低40％-44％，37℃考核1个月活性下降13％-18％。
对比例2
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由蜜里三糖9w/v％，海藻糖9w/v％，乳糖0.6w/v％和蔗糖8w/v％组成。1-3号冻干产品成型好，CT值为28.4-29.0，荧光值比液态降低25％-29％，37℃考核1个月活性下降12％-15％。
对比例3
一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，由山梨糖醇8w/v％组成。1-3号冻干产品成型差，CT值为28.9-29.5，荧光值比液态下降14％-19％。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东菲鹏生物有限公司
<120> 冻干PCR预混液的试剂
<130> 2019
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ttatcccatt ccttttggtt cttt 24
<210> 2
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gggtcatgtt ggggctt 17
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tgggttggtg gtggaggaga 20
Claims (10)
1.一种用于冻干PCR预混液的稳定处方，其特征在于，所述稳定处方包括如下a)-c)任一种组成：
a)氢化麦芽糖；
b)氢化麦芽糖和蜜里三糖；
c)氢化麦芽糖和蜜里三糖，以及，海藻糖、乳糖或蔗糖中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的稳定处方，其特征在于，所述氢化麦芽糖的使用终浓度为3-10w/v％，优选为5-10w/v％，进一步优选为6-10w/v％。
3.根据权利要求1所述的稳定处方，其特征在于，所述蜜里三糖的使用终浓度为2-10w/v％，优选为6-10w/v％，进一步优选为7-10w/v％。
4.根据权利要求1所述的稳定处方，其特征在于，所述海藻糖的使用终浓度为3-12w/v％，优选为6-12w/v％，进一步优选为7-11w/v％。
5.根据权利要求1所述的稳定处方，其特征在于，所述乳糖的使用终浓度为0.3-3w/v％，优选为0.3-1w/v％，进一步优选为0.4-0.9w/v％。
6.根据权利要求1所述的稳定处方，其特征在于，所述蔗糖的使用终浓度为2-9w/v％，优选为6-9w/v％，进一步优选为7-8w/v％。
7.根据权利要求1-6任一项所述的稳定处方，其特征在于，所述PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。
8.一种冻干PCR预混液的方法，其特征在于，在PCR预混液中加入权利要求1-7任一项所述的稳定处方，经冻干得到冻干的PCR预混液。
9.权利要求8所述的方法制备得到的冻干的PCR预混液。
10.一种包括权利要求9所述的冻干的PCR预混液的试剂盒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910867009.5A CN112481365A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 冻干pcr预混液的试剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910867009.5A CN112481365A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 冻干pcr预混液的试剂 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112481365A true CN112481365A (zh) | 2021-03-12 |
Family
ID=74920999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910867009.5A Pending CN112481365A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 冻干pcr预混液的试剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112481365A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015092870A (ja) * | 2013-11-13 | 2015-05-18 | 東ソー株式会社 | 長期保存可能な核酸増幅試薬 |
| CN105463125A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 江苏正大天创生物工程有限公司 | 核酸扩增体系及其冻干保护剂 |
| US20170029870A1 (en) * | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Seiko Epson Corporation | Lyophilized reagent, mixed reagent solution, and method for storing lyophilized reagent |
| WO2017184028A1 (en) * | 2016-04-18 | 2017-10-26 | Limited Liability Company "Nearmedic Plus" | Stabilized mixture of reagents for molecular diagnostics |
| CN110093403A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-08-06 | 融智生物科技（青岛）有限公司 | 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法 |
-
2019
- 2019-09-12 CN CN201910867009.5A patent/CN112481365A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015092870A (ja) * | 2013-11-13 | 2015-05-18 | 東ソー株式会社 | 長期保存可能な核酸増幅試薬 |
| US20170029870A1 (en) * | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Seiko Epson Corporation | Lyophilized reagent, mixed reagent solution, and method for storing lyophilized reagent |
| CN105463125A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 江苏正大天创生物工程有限公司 | 核酸扩增体系及其冻干保护剂 |
| WO2017184028A1 (en) * | 2016-04-18 | 2017-10-26 | Limited Liability Company "Nearmedic Plus" | Stabilized mixture of reagents for molecular diagnostics |
| CN110093403A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-08-06 | 融智生物科技（青岛）有限公司 | 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2021508B1 (en) | Ambient temperature stable kits for molecular diagnostics | |
| Zheng et al. | Abundance and community composition of methanotrophs in a Chinese paddy soil under long-term fertilization practices | |
| CN112501268B (zh) | 一种基于纳米孔测序的快速鉴别呼吸道微生物引物组、试剂盒及其应用 | |
| CN109652357B (zh) | 细胞共培养下生长缺陷的牛支原体突变株及应用 | |
| US9273303B2 (en) | Dried and stabilized ready-to-use composition containing nucleic acid polymerization enzymes for molecular biology applications | |
| US20240169179A2 (en) | Novel class 2 type ii and type v crispr-cas rna-guided endonucleases | |
| CN113502354A (zh) | 一种用于移植患者感染的病原体检测引物和探针组、试剂盒及应用 | |
| CN112143821A (zh) | Fret检测白色念珠菌，新生隐球菌和肺炎克雷伯杆菌的试剂及其应用 | |
| US20020039771A1 (en) | Method for producing complex multienzymatical, storage resistant reaction mixtures and use thereof | |
| US20130280695A1 (en) | Method, device and test kit for molecular-biological reactions | |
| CN112481365A (zh) | 冻干pcr预混液的试剂 | |
| CN114752703A (zh) | 一种新型冠状病毒核酸的冻干型检测试剂及其制备方法 | |
| CN112704062A (zh) | 一种细胞保存液及其使用方法 | |
| KR20140110138A (ko) | 교차오염 억제용 ｕｄｇ를 함유한 중합효소연쇄반응액의 동결건조물 | |
| CN112481253A (zh) | 用于pcr预混液的冻干保护处方 | |
| WO2018138913A1 (ja) | 保存溶液およびその保存溶液を用いた検体の保存方法、特に、検体のｄｎａおよび有機酸やポリアミン類などの化学物質の保存溶液およびその保存溶液を用いた保存方法 | |
| CN102533704A (zh) | 即配即用型的胰蛋白酶制剂 | |
| CN115521990A (zh) | 一种用于检测虾苗镰刀菌的冻干pcr试剂及应用其检测虾苗镰刀菌的方法 | |
| CN116287120A (zh) | 一种可常温保存且可60℃高温下保存唾液样本中人源细胞核酸dna与rna的保存液及其制备方法 | |
| CN115558662A (zh) | 一种针对microRNA反复冻融保护剂及其应用 | |
| CN102703434B (zh) | 基于多孔材料的多聚酶链反应试剂保存方法及反应试剂 | |
| Aftenie et al. | Comparison Between Currently Used Blood Samples And New Saliva Dna Collection Method For Quality Of Genomic Dna And Genotyping | |
| CN105950599A (zh) | 猪链球菌噬菌体裂解酶的冻干保护剂 | |
| Hill et al. | Stabilizing blood samples using osmolytes for forensic DNA analysis | |
| Chen et al. | Screening, Identification and Fermentation Property of a Yeast Strain R6 Accumulating Alpha-ketoglutaric Acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |