CN112480279A - 一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 - Google Patents
一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112480279A CN112480279A CN202011443047.7A CN202011443047A CN112480279A CN 112480279 A CN112480279 A CN 112480279A CN 202011443047 A CN202011443047 A CN 202011443047A CN 112480279 A CN112480279 A CN 112480279A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kelp
- polysaccharide
- sulfated polysaccharide
- molecular weight
- volume
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 101
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 100
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 100
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 title claims abstract description 66
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 14
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 7
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 38
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 27
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 16
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 16
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 5
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 241001474374 Blennius Species 0.000 claims description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 3
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 claims description 2
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 36
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 26
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]2O)O)O[C@H](CO)[C@H]1O DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 229920001543 Laminarin Polymers 0.000 description 13
- 239000005717 Laminarin Substances 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 7
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 6
- 241000015177 Saccharina japonica Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- UBXYXCRCOKCZIT-UHFFFAOYSA-N biphenyl-3-ol Chemical group OC1=CC=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1 UBXYXCRCOKCZIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 6
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 6
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 5
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 4
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001466453 Laminaria Species 0.000 description 4
- 241000131694 Tenericutes Species 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 241000425347 Phyla <beetle> Species 0.000 description 3
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 3
- 241000605059 Bacteroidetes Species 0.000 description 2
- 241001309423 Lactonifactor Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004192 high performance gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000013224 high-fat diet-induced obese mouse Methods 0.000 description 2
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 2
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000565686 Dehalobacter Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 238000013218 HFD mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 241000160321 Parabacteroides Species 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 241000566961 Thelephora Species 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N edaravone Chemical compound O=C1CC(C)=NN1C1=CC=CC=C1 QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008558 metabolic pathway by substance Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Inorganic materials [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/20—Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
- A23L33/21—Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了一种小分子量海带硫酸化多糖及应用,所述多糖按如下方法制备:将海带粉末用乙醇水溶液回流提取,获得脱脂海带粉;脱脂海带粉中加稀盐酸浸提,收集上清液;浓缩,缓慢加入CaCl2水溶液,静置沉淀,收集上清液;过滤,浓缩,以蒸馏水为透析液,室温透析,收集截留液;浓缩,加入95%乙醇,静置沉淀;收集沉淀,烘干,得到海带粗多糖;海带粗多糖溶于蒸馏水中,加入抗坏血酸和过氧化氢,室温搅拌;超滤;浓缩,乙醇沉淀,得到小分子量海带硫酸化多糖。本发明所述海带硫酸化多糖硫酸基含量为44.6±0.9%,糖醛酸含量为28.9±2.1%,总糖含量为56.7±4.2%,相对分子质量为12±0.5kDa。
Description
技术领域
本发明涉及一种小分子量海带多糖及其制备与在预防肥胖和调节肠道菌群结构中的应用。
背景技术
根据世界卫生组织规定身体质量指数(BMI)≥30为肥胖,是脂肪过度累积的一种状态。中国肥胖人口已达9000万,已经成为全球肥胖人口最多的国家。肥胖是世界范围内导致人类死亡的第五大因素,每年至少有280万人由于肥胖相关疾病死亡。肠道菌是一组位于肠道内与宿主协同作用的共生微生物群,它不仅参与免疫调节和物质代谢,还与多种疾病密切相关。肠道菌群失衡被认为是肥胖的一个重要诱因。海带 (Laminaria japonica)是一种多年生冷水性的大型食用藻类。主要分布于北太平洋与大西洋沿海地区。硫酸化多糖是海带中最主要的活性化合物之一。近年来,从海带中提取的硫酸化多糖被报道有多种生物学活性,包括抗氧化,抗炎,抗癌和免疫调节等活性。因此,制备和筛选可以预防肥胖和调节肠道菌群结构的硫酸化多糖有巨大的潜力和应用价值。
海带硫酸化多糖因组分复杂,分子量大等因素,严重影响了对其体内吸收和代谢的研究,也导致其生物活性的不稳定性。目前,小分子量海带硫酸化多糖的报道较少,尚未见其预防肥胖和调节肠道菌方面的报道。本发明制备的小分子量海带硫酸化多糖可以显著预防高脂饮食引起的体重增加,并且可以显著调节高脂饮食诱导肥胖小鼠的肠道菌群紊乱,不仅可以作为预防肥胖的药品和食品添加剂使用,还可以作为益生元及治疗肠道菌群紊乱的药物和食品添加剂使用。
发明内容
本发明目的是提供一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与在制备预防肥胖制品或调节肠道菌群结构制剂中的应用。所述的海带硫酸化多糖资源丰富、无毒副作用,能有效预防高脂饮食引起的体重增加和肠道菌群紊乱。可以作为功能食品或药品等的主要成分,用于防治各种因素导致的肥胖和肠道菌群紊乱。
本发明采用的技术方案是:
本发明提供一种小分子量海带硫酸化多糖,所述海带硫酸化多糖按如下方法制备:
(1)脱脂:将海带粉与体积浓度70~100%乙醇水溶液混合,回流提取2~4h,冷却过滤,滤饼干燥(优选50~70℃),获得脱脂海带粉;
(2)稀盐酸提取:室温下,向步骤(1)脱脂海带粉中加0.1M稀盐酸浸提3h (优选提取两次),离心,收集上清液;
(3)除海藻胶:将步骤(2)中的上清液浓缩5-10倍体积,获得浓缩液;搅拌下(优选300rpm)向浓缩液中缓慢加入0.04g/mL的CaCl2水溶液,静置沉淀(不少于15min),离心,收集上清液;
(4)透析:将步骤(3)中的上清液过滤(优选中速滤纸,孔径30-50μm),滤液浓缩2-5倍体积,获得浓缩液;将浓缩液在透析袋内,以蒸馏水为透析液,室温透析24~48h,收集截留液;
(5)乙醇沉淀:步骤(4)截留液浓缩2-5倍体积,加入体积浓度95%乙醇水溶液,在0~4℃下静置沉淀12~24h;离心,收集沉淀,烘干(优选50~70℃),得到海带粗多糖;
(6)酸降解:步骤(5)海带粗多糖溶于蒸馏水中,加入抗坏血酸和过氧化氢,室温搅拌2h;超滤;滤液浓缩2-5倍体积后,同步骤(5)进行乙醇沉淀(即加入体积浓度95%乙醇水溶液,在0~4℃下静置沉淀12~24h;离心,收集沉淀,烘干(优选50~70℃)),得到小分子量海带硫酸化多糖。
进一步,步骤(1)-步骤(6)所述离心均为8000rpm离心10min。
进一步,步骤(1)中海带粉末是将质量含水量3-4%的海带粉碎,过80目筛,得到海带粉末。
进一步,步骤(1)中体积浓度70~100%乙醇水溶液体积用量以海带粉末重量计为20-30mL/g,优选30mL/g,乙醇水溶液浓度优选为95%。
进一步,步骤(2)中稀盐酸体积用量以脱脂海带粉质量计为20-40mL/g,优选30mL/g。
进一步,步骤(3)CaCl2水溶液体积加入量以浓缩液体积计为0.6mL/mL。
进一步,步骤(4)中所述透析袋截留分子量为14kDa。
进一步,步骤(5)中所述95%乙醇与浓缩后的截留液体积比为3:1,静置沉淀条件为4℃沉淀12h。
进一步,步骤(6)中所述超滤膜截留分子量为10kDa。
进一步,步骤(6)中所述蒸馏水加入量以海带粗多糖质量计为100mL/g,抗坏血酸加入量以海带粗多糖质量计为0.5g/g,过氧化氢加入量以海带粗多糖质量计为 0.3mL/g。
本发明还提供一种所述小分子量海带硫酸化多糖在制备预防肥胖的药品或食品添加剂中的应用。
本发明还涉及所述小分子量海带硫酸化多糖在制备治疗肠道菌群紊乱制剂中的应用,所述制剂作为益生元,或者治疗肠道菌群紊乱的药物和食品添加剂。
本发明所述小分子量海带硫酸化多糖可以与其他药物联用,可制成为注射剂或口服制剂。
与现有技术相比,本发明有益效果主要体现在:
(1)本发明所述小分子量海带硫酸化多糖硫酸基含量为44.6±0.9%,糖醛酸含量为28.9±2.1%,总糖含量为56.7±4.2%,相对分子质量为12±0.5kDa。
(2)本发明的制备方法快速提取小分子量海带硫酸化多糖,能耗低,操作容易,工艺成本低等特点,有开发成预防肥胖和调节肠道菌药物或食品添加剂的前景。
(3)本发明所述小分子量海带硫酸化多糖可以显著调节高脂饮食诱导肥胖小鼠的肠道菌群紊乱,进而显著降低禁食血糖和体重作用。在调节肠道菌和防治肥胖及代谢综合征等新药和特医食品开发领域,具有广阔的开发应用前景。
附图说明
图1为小分子量海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养小鼠体重和禁食血糖的影响图。其中,A为小鼠体重随时间变化分析,横坐标代表实验时间,纵坐标代表不同组别小鼠体重;B为第16周时,各组小鼠体重增量对比分析,横坐标代表不同组别小鼠,纵坐标代表小鼠体重增加量;C为小鼠禁食血糖随时间变化分析,横坐标代表实验时间,纵坐标代表不同组别小鼠血糖;D为第12周时,各组小鼠血糖对比分析,横坐标代表不同组别小鼠,纵坐标代表小鼠血糖。ND组为正常饮食组,HFD组为高脂饮食对照组,R组为小分子量海带硫酸化多糖实验组,*P<0.05vs.ND group;#P<0.05vs. HFD group。
图2为门水平小分子量海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群结构的调节作用图。其中,A为各组小鼠肠道菌群α-多样性分析;B为各组小鼠肠道菌群门水平组成分析;C为各组小鼠的放线菌门(Actinobacteria)含量分析;D为各组小鼠的拟杆菌门(Bacteroidetes)含量分析;E为各组小鼠的软壁菌门(Tenericutes)含量分析。 ND组为正常饮食组,HFD组为高脂饮食对照组,R组为小分子海带硫酸化多糖实验组,*P<0.05vs.NDgroup;#P<0.05vs.HFD group。
图3为属水平小分子量海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群结构的调节作用图。其中,A为各组小鼠的f_S24.7.g_菌属含量分析;B为各组小鼠的 g_Lactonifactor菌属含量分析;C为各组小鼠的g_Macellibacteroides菌属含量分析; D为各组小鼠的f_Bifidobacteriaceae菌属含量分析;E为各组小鼠的g_Parabacteroides 菌属菌属含量分析;F为各组小鼠的g_Dehalobacterium菌属含量分析。ND组为正常饮食组,HFD组为高脂饮食对照组,R组为小分子海带硫酸化多糖实验组,*P<0.05 vs.ND group;#P<0.05vs.HFD group。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
本发明中速滤纸孔径30-50μm;室温为25-30℃。
实施例1:小分子量海带硫酸化多糖的制备和结构分析
1、多糖提取
(1)脱脂:将质量含水量3-4%的海带粉碎,过80目筛,得到海带粉。称取海带粉120g,按照料液比1:30(g/mL)加入体积浓度95%乙醇水溶液,煮沸冷凝回流3 小时,冷却过滤,滤渣在65℃下烘干,得到脱脂的海带粉100g。
(2)稀盐酸提取:取脱脂的海带粉100g,按料液比1:30(g/mL)加入0.1M稀盐酸,室温浸提3h,提取两次,离心,收集上清液2200mL;
(3)除海藻胶:步骤(2)上清液2200mL浓缩5倍体积,在300rpm搅拌条件下加入0.04g/mL的CaCl2水溶液264mL,加入完毕后,静止30min沉淀海藻酸纳,再以8000rpm的速度离心10分钟,收集上清液600mL。
(4)透析:步骤(3)上清液600mL用中速滤纸(孔径30-50μm)过滤,滤液在55℃抽真空浓缩3倍体积,浓缩液加入透析袋(截留分子量为14kDa),以蒸馏水为透析液,在4℃条件透析48h,得到截留液210mL。
(5)乙醇沉淀:步骤(4)截留液210mL在55℃抽真空浓缩3倍体积,以浓缩后的截留液体积比为1:3加入95%乙醇,4℃放置12小时使海带多糖充分沉淀。以8000 rpm的速度离心10分钟,在65℃下烘干沉淀12小时,得到3.7g海带粗多糖。
(6)酸降解:将3.7g海带粗多糖溶于370mL蒸馏水中,加入1.85g抗坏血酸和1.11mL过氧化氢,室温搅拌2h,超滤(超滤膜截留分子量10kDa),截留液浓缩4倍体积,并按上述步骤(5)再次醇沉,离心,烘干,得到1.85g小分子量的海带硫酸化多糖。
2、多糖结构鉴定
对步骤1制备的小分子量海带硫酸化多糖的理化性质进行分析,包括总糖含量测定、糖醛酸含量测定、硫酸根含量测定,分子量分布和单糖组成测定。
(1)总糖含量测定
采用苯酚-硫酸法测定样品中总糖含量:精确称量110℃烘干至恒重的葡萄糖10mg,溶于去离子水中,配成0.1mg/mL的葡萄糖标准液,分别移取0.1、0.3、0.5、0.7、 0.9mL葡萄糖标准液并用去离子水补水至1mL,然后加入体积浓度5%苯酚水溶液 0.5mL及浓硫酸(质量浓度98%)2.5mL,充分混匀后,避光静置20min,用酶标仪在 490nm处测定其吸光值A490。以葡萄糖浓度为横坐标,以A490为纵坐标,绘制标准曲线,曲线方程为y=3.5589x+0.0052,R2=0.9981,y为A490nm吸光值,x为糖浓度mg/mL。
精确称取适量海带硫酸化多糖样品,用去离子水配成0.1mg/mL多糖溶液,准确吸取1mL多糖溶液,按上述操作步骤测定吸光值,用标准曲线计算多糖样品中的总糖含量为56.7±4.2%。
(2)糖醛酸测定
采用间羟基联苯法测定多糖样品中糖醛酸含量。准确称取葡萄糖醛酸7.5mg,用去离子水配制0.15mg/mL葡萄糖醛酸标准溶液50mL,分别移取0.02、0.04、0.06、 0.08、0.1mL的葡萄糖醛酸标准液并用去离子水补水至0.1mL,然后在冰水浴条件下加入硫酸-硼砂溶液6mL摇匀,100℃水浴5min,冰水浴冷却至室温,加入间羟基联苯溶液0.1mL摇匀,室温放置15min,使用酶标仪在520nm处测定其吸光值A520。以葡萄糖醛酸浓度为横坐标,以A520吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,曲线方程为 y=3.7151x+0.0017,R2=0.9972,y为A520nm吸光值,x为糖醛酸浓度(mg/mL)。
精确称取适量多糖样品,用去离子水配成1mg/mL多糖溶液,准确吸取0.1mL 多糖溶液,按上述操作步骤测定吸光值,用标准曲线计算多糖样品中的糖醛酸含量为 28.9±2.1%。
硫酸-硼砂溶液的配制:准确称取硼砂(NaB4O7.10H2O)1.1925g,加入浓硫酸(质量浓度98%)40mL,摇晃溶解后,加入浓硫酸定溶至250mL得到硫酸-硼砂溶液(浓度为4.77mg/mL)。
间羟基联苯溶液的配制:准确称取0.25g的NaOH,加30mL去离子水溶解,然后加入间羟基联苯75mg,摇晃溶解后加去离子水定容至50mL,得到间羟基联苯溶液(浓度为1.5mg/mL)。
(3)硫酸根含量测定
准确称取35mg硫酸钾用去离子水配制0.35mg/mL硫酸钾(即0.193mg/mL硫酸根)标准溶液100mL。分别移取0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,2.5mL硫酸钾标准溶液,加去离子水定容至3mL,加0.2M HCl水溶液3.8mL,明胶-氯化钡溶液1mL,充分摇匀,室温反应30min,使用酶标仪在500nm测吸光度。以硫酸根浓度为横坐标,以A500吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,曲线方程为y=0.6774x+0.0849, R2=0.9914,y为A500nm吸光值,x为硫酸根浓度(mg/mL)。
精确称取25mg多糖样品溶于6mL 2.0M HCl水溶液中,110℃烘箱中水解6h,取出冷却至室温、中速滤纸过滤,滤液用去离子水定容于25mL容量瓶中得到水解多糖溶液。准确吸取3mL水解多糖溶液,按上述操作步骤测定吸光值,用标准曲线计算多糖样品中的硫酸根含量为44.6±0.9%。
明胶-氯化钡溶液的配制:称取0.5g明胶,加入60mL去离子水,在70℃下溶解后,4℃静置过夜得到明胶溶液。称取烘干的0.5g氯化钡,并转移到配好的明胶溶液中,静置2h后即为明胶-氯化钡溶液(浓度为8.33mg/mL)。
(4)分子量分布
多糖的平均分子量(Mw)通过配备有折射率检测器(RID)的高效凝胶渗透色谱仪(HPGPC)测定。使用的色谱柱为TSK-GEL G5000 PWXL(7.8×300mm)和G3000 PWXL(7.8×300mm)。
将步骤1制备的海带硫酸化多糖配制成15mg/mL的水溶液,0.22μm水膜过滤获得检测样品。不同分子量的葡聚糖标准品(4kDa,12.6kDa,60.6kDa,420kDa, 820kDa)分别配制成5mg/mL的水溶液,分别通过0.22μm水膜过滤获得标准样品。色谱柱保持在25℃,进样20μL,使用0.1M NaNO3水溶液以0.5mL/min的流速洗脱。根据葡聚糖标准品的不同分子量对数值和保留时间的关系绘制标定曲线,曲线方程为 y=-0.1961x+10.996,R2=0.9902,y为分子量对数值,x为保留时间(分钟)。根据标准曲线计算出样品中分子量大小为12±0.5kDa。
(5)单糖组成
单糖的分析是利用PMP衍生化方法。将5mg的小分子量海带硫酸化多糖溶解在5mL的4M三氟乙酸(TFA)水溶液中,在110℃下水解8h,得到样品水解液。随后用蒸发器55℃把样品水解液浓缩至干,加入1mL甲醇,再用蒸发器55℃将样品-甲醇液浓缩至干,以此重复3次以除去残留的TFA。然后用1mL的离子水去溶解最后浓缩至干的样品。将300μL样品与0.3M的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液200 μL,0.3M的NaOH水溶液200μL混合,在60℃下衍生化1h,然后冷却至室温。随后,通过添加0.3M的HCl水溶液200μL终止反应,加入2mL的氯仿摇晃2min 后,除去下层的氯仿,再加入2mL的氯仿摇晃2min后,除去下层的氯仿,将上层水相通过0.45μm膜过滤,并利用Eclipse XDB-C18色谱柱,柱温25℃,流动相为乙腈:0.1M的磷酸二氢钾和磷酸氢二钾缓冲液(pH=6.8)=83:17(V/V),上样体积20 μL,在HPLC上进行紫外254nm波长分析。
同样条件下,用混合标准品水溶液(含岩藻糖2.12mg/mL、半乳糖1.8mg/mL)代替样品,测试254nm处的各个吸收峰的面积。以单糖浓度为横坐标,以吸收峰的面积为纵坐标,绘制标准曲线,曲线方程分别为岩藻糖(Fuc)y=37.261x+1.7099, R2=0.9956;半乳糖(Gal)y=45.105x+0.5559,R2=0.9995;y为不同单糖吸收峰的面积 (mAV*s),x为不同单糖浓度(mg/mL)。根据标准曲线计算出样品中单糖的组成,小分子量海带硫酸化多糖中半乳糖(Gal)和岩藻糖(Fuc)的比值为0.01:1。
综上所述,该海带多糖分子量为12±0.5kDa,总糖含量为56.7±4.2%,硫酸基含量为44.6±0.9%,糖醛酸含量为28.9±2.1%,结果见表1。
表1展示了所有已公开专利中海带多糖的结构信息,可知本发明中的海带多糖相较于已公开的这些海带多糖,结构信息更完整,岩藻糖和硫酸根含量更高,并且是小分子量的海带硫酸化多糖。
表1海带多糖结构分析比较
实施例2:海带硫酸化多糖的降血糖和抗肥胖活性
雄性C57BL/6小鼠(6周大,20-24g)17只,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。所有动物均在24±1℃的环境中进行12小时照明和12小时黑暗循环,并提供食物和水,适应1周后,将所有小鼠分为正常饮食组(ND,6只小鼠用正常饲料和正常灭菌水喂养),高脂饮食对照组(HFD,6只小鼠用高脂饲料和正常灭菌水喂养)和多糖处理实验组(R, 5只小鼠用高脂饲料和含多糖的灭菌水喂养,多糖剂量1mg/mL)。多糖如表2所示,包括实施例1制备的海带硫酸化多糖。
每只小鼠分别在每周通过体重测量仪测定小鼠体重,并绘制小鼠体重曲线。分别于第2,4,8,12周通过血糖仪测定血浆中禁食血糖浓度(禁食16h),并绘制小鼠血糖曲线。在第16周后,实验结束,取小鼠盲肠内容物,在Illumina Miseq PE300高通量测序平台(杭州开泰生物技术有限公司)进行基因测序。测序完成后,在QIIME2多组学分析平台进行物种组成分析,通过STAMP和GraphPad绘图软件进行数据分析。
动物实验结果:
如图1所示(海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养小鼠体重和禁食血糖的影响图),正常饮食组小鼠(ND)在实验过程中的体重增长最少,显著低于高脂饮食对照组(HFD)和多糖处理实验组(R),其中海带硫酸化多糖可以明显抑制高脂饮食诱导的体重增加,同时可以较好地降低高脂饮食引起的禁食血糖升高。这说明海带硫酸化多糖有很好的预防肥胖效果,且显示了优异的维持血糖稳定的作用。表2展示了所有已公开专利中多糖的抗肥胖活性特点,与其他多糖可以减肥不同的是,本发明中的小分子量海带多糖有很好的预防肥胖效果,且显示了优异的维持血糖稳定的作用。
表2抗肥胖活性比较
如图2所示(门水平海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群结构的调节作用图),通过16S rRNA高通量测序分析了16周的高脂饮食和多糖喂养对小鼠盲肠内容物中微生物菌群的影响。结果表明,高脂饮食会引起肠道菌α-多样性降低,而同时喂养了海带硫酸化多糖的小鼠肠道菌群α-多样性有升高的趋势(图2中A)。从门水平上看,高脂饮食显著升高了放线菌门(Actinobacteria)的丰度,降低了拟杆菌门 (Bacteroidetes)和软壁菌门(Tenericutes)的丰度,而海带硫酸化多糖可以降低高脂饮食引起的放线菌门丰度升高,升高拟杆菌门和软壁菌门丰度(图2中B-E)。上述结果表明,海带硫酸化多糖在门水平对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群具有调节作用。
如图3所示(属水平海带硫酸化多糖对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群结构的调节作用图),从属水平上看,高脂饮食会引起g_Lactonifactor(催乳素菌), f_Bifidobacteriaceae;g_(双歧杆菌)和g_Dehalobacterium(脱盐杆菌)菌属相对丰度的升高,而同时喂养海带硫酸化多糖时可以显著缓解这些菌丰度的升高(图3中B,D, F)。同时,高脂饮食会引起f_S24.7.g_(S24.7菌),g_Macellibacteroides(屠场杆状菌) 和g_Parabacteroides(副杆菌)菌属相对丰度的降低,海带提取多糖R可以不同程度缓解它们丰度的降低(图3中A,C,E)。上述结果表明,海带硫酸化多糖在属水平对高脂饮食喂养的小鼠肠道菌群具有调节作用。表3展示了所有已公开专利中多糖调节肠道菌的活性,可知本发明中的小分子量海带多糖,不仅可以增加拟杆菌门的丰度(与其他多糖类似),还可以显著降低高脂饮食小鼠的放线菌门丰度和升高软壁菌门丰度,显著缓解高脂饮食引起的g_Lactonifactor,f__Bifidobacteriaceae;g__, g_Dehalobacterium,f_S24.7.g_,g_Macellibacteroides和g_Parabacteroides等菌属相对丰度紊乱。
表3多糖调节肠道菌群比较
本发明的实施方式并不受所述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变,替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于所述海带硫酸化多糖按如下方法制备:
(1)脱脂:将海带粉与体积浓度70~100%乙醇水溶液混合,回流提取2~4h,冷却过滤,滤饼干燥,获得脱脂海带粉;
(2)稀盐酸提取:室温下,向步骤(1)脱脂海带粉中加0.1M稀盐酸浸提3h,离心,收集上清液;
(3)除海藻胶:将步骤(2)中的上清液浓缩5-10倍体积,获得浓缩液;搅拌下向浓缩液中缓慢加入0.04g/mL的CaCl2水溶液,静置沉淀,离心,收集上清液;
(4)透析:将步骤(3)中的上清液过滤,滤液浓缩2-5倍体积,获得浓缩液;将浓缩液在透析袋内,以蒸馏水为透析液,室温透析24~48h,收集截留液;
(5)乙醇沉淀:步骤(4)截留液浓缩2-5倍体积,加入体积浓度95%乙醇水溶液,在0~4℃下静置沉淀12~24h;离心,收集沉淀,烘干,得到海带粗多糖;
(6)酸降解:步骤(5)海带粗多糖溶于蒸馏水中,加入抗坏血酸和过氧化氢,室温搅拌2h;超滤;滤液浓缩2-5倍体积后,同步骤(5)进行乙醇沉淀,得到小分子量海带硫酸化多糖。
2.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(1)中海带粉是将质量含水量3-4%的海带粉碎,过80目筛,得到海带粉。
3.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(1)中体积浓度70~100%乙醇水溶液体积用量以海带粉末重量计为20-30mL/g。
4.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(2)中稀盐酸体积用量以脱脂海带粉质量计为20-40mL/g。
5.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(3)CaCl2水溶液体积加入量以浓缩液体积计为0.6mL/mL。
6.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(4)中所述透析袋截留分子量为14kDa。
7.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(5)中所述95%乙醇与截留液体积比为3:1,静置沉淀条件为4℃沉淀12h。
8.如权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖,其特征在于步骤(6)中所述超滤膜截留分子量为10kDa;所述蒸馏水加入量以海带粗多糖质量计为100mL/g,抗坏血酸加入量以海带粗多糖质量计为0.5g/g,过氧化氢加入量以海带粗多糖质量计为0.3mL/g。
9.一种权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖在制备预防肥胖的药品或食品添加剂中的应用。
10.一种权利要求1所述小分子量海带硫酸化多糖在制备治疗肠道菌群紊乱制剂中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011443047.7A CN112480279A (zh) | 2020-12-08 | 2020-12-08 | 一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011443047.7A CN112480279A (zh) | 2020-12-08 | 2020-12-08 | 一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112480279A true CN112480279A (zh) | 2021-03-12 |
Family
ID=74941230
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011443047.7A Pending CN112480279A (zh) | 2020-12-08 | 2020-12-08 | 一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112480279A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113912745A (zh) * | 2021-08-12 | 2022-01-11 | 浙江大学 | 一种糖胺聚糖的分离纯化方法及硫酸化寡糖的制备方法 |
CN115417934A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-12-02 | 威海迪普森生物科技有限公司 | 一种高含量岩藻低聚糖海带提取物的制备方法 |
CN115991796A (zh) * | 2023-02-06 | 2023-04-21 | 福建农林大学 | 一种辅助降血糖低分子量海带多糖的制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1616494A (zh) * | 2004-10-18 | 2005-05-18 | 中国科学院海洋研究所 | 低分子量海藻硫酸多糖的制备方法 |
CN101912408A (zh) * | 2010-06-24 | 2010-12-15 | 首都医科大学 | 褐藻多糖硫酸酯在制备预防和治疗糖尿病血管疾病药物中的应用 |
CN103539863A (zh) * | 2012-07-12 | 2014-01-29 | 中国科学院海洋研究所 | 褐藻来源的富含葡萄糖醛酸的低硫酸化杂聚糖在制备治疗帕金森病药物和保健品中的应用 |
-
2020
- 2020-12-08 CN CN202011443047.7A patent/CN112480279A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1616494A (zh) * | 2004-10-18 | 2005-05-18 | 中国科学院海洋研究所 | 低分子量海藻硫酸多糖的制备方法 |
CN101912408A (zh) * | 2010-06-24 | 2010-12-15 | 首都医科大学 | 褐藻多糖硫酸酯在制备预防和治疗糖尿病血管疾病药物中的应用 |
CN103539863A (zh) * | 2012-07-12 | 2014-01-29 | 中国科学院海洋研究所 | 褐藻来源的富含葡萄糖醛酸的低硫酸化杂聚糖在制备治疗帕金森病药物和保健品中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张文静: ""两种褐藻中褐藻多糖硫酸酯的结构解析与活性研究"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士) 基础科学辑》 * |
段萌萌: ""褐藻多糖对高脂小鼠肠道菌群的调节及其特异性解析"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士) 工程科技Ⅰ辑》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113912745A (zh) * | 2021-08-12 | 2022-01-11 | 浙江大学 | 一种糖胺聚糖的分离纯化方法及硫酸化寡糖的制备方法 |
CN115417934A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-12-02 | 威海迪普森生物科技有限公司 | 一种高含量岩藻低聚糖海带提取物的制备方法 |
CN115417934B (zh) * | 2022-09-02 | 2023-09-26 | 威海迪普森生物科技有限公司 | 一种高含量岩藻低聚糖海带提取物的制备方法 |
CN115991796A (zh) * | 2023-02-06 | 2023-04-21 | 福建农林大学 | 一种辅助降血糖低分子量海带多糖的制备方法 |
CN115991796B (zh) * | 2023-02-06 | 2024-04-30 | 福建农林大学 | 一种辅助降血糖低分子量海带多糖的制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112480279A (zh) | 一种小分子量海带硫酸化多糖及其制备与应用 | |
Huang et al. | Extraction, purification, structural characterization, and gut microbiota relationship of polysaccharides: A review | |
Cai et al. | Characteristics and antifatigue activity of graded polysaccharides from Ganoderma lucidum separated by cascade membrane technology | |
Pak et al. | Functional perspective of black fungi (Auricularia auricula): Major bioactive components, health benefits and potential mechanisms | |
CN111285939B (zh) | 一种具有抗氧化和调节肠道菌群功效的海蒿子多糖及其制备方法与应用 | |
CN111116771B (zh) | 裙带菜提取多糖及其在制备α-葡萄糖苷酶活性抑制药物中的应用 | |
CN108727509B (zh) | 一种毛竹笋壳阿拉伯半乳聚糖及其制备和用途 | |
CN104619329B (zh) | 用于治疗与升高的诱导型一氧化氮合酶相关联的疾病的半乳糖‑鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物 | |
CN110128562B (zh) | 一种抗肿瘤补骨脂多糖及其提取分离方法和在制备抗肿瘤药物方面的应用 | |
CN114163545A (zh) | 一种枸杞多糖及其在降血糖中的应用 | |
Chen et al. | Extraction, structural characterization and biological activities of polysaccharides from mulberry leaves: A review | |
CN116751315B (zh) | 一种假蜜环菌菌丝体均一多糖及其制备方法和应用 | |
CN106749733B (zh) | 一种泡叶藻硫酸酯化多糖及其制备方法、应用 | |
CN109232756B (zh) | 一种碱蓬多糖提取物及其制备方法和应用 | |
CN116925163A (zh) | 一种低频超声获取玫瑰苷的方法 | |
CN101011412A (zh) | 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗肝脏疾病的药物中的用途 | |
CN112794925B (zh) | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 | |
CN110227080B (zh) | 甘露葡萄糖醛酸多(寡)糖及其衍生物在制备治疗和/或预防2型糖尿病药物中的应用 | |
CN114027510A (zh) | 一种蛋白核小球藻多糖混合物及其制备方法和作为新型益生元的应用 | |
CN115124629B (zh) | 一种海藻多糖钙的制备及其应用 | |
CN114292343B (zh) | 一种白蜡多年菌胞外多糖和胞内多糖制备方法及其在调节肠道微生物菌群与降血糖应用 | |
Chung et al. | Characteristics of water-soluble polysaccharide, showing inhibiting activity on α-glucosidase, in Cordyceps militaris | |
CN115043956B (zh) | 一种接骨木多糖及其多糖组合物与应用 | |
JP7312485B2 (ja) | アディポネクチン分泌促進剤 | |
CN113980152B (zh) | 一种桦褐孔菌均一多糖及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210312 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |