CN112469397B - 包含可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和酰化的人乳铁蛋白衍生肽的纳米颗粒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种纳米颗粒，其包含核和在所述核上的酰化的人乳铁蛋白衍生肽，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与所述SEQ.ID.No.1的序列相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，并且其中所述人乳铁蛋白衍生肽的N端被C₁₆‑单酰基酰化。

Description

包含可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和酰化的人乳铁蛋 白衍生肽的纳米颗粒

技术领域

本申请涉及一种包含可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和酰化的人乳铁蛋白衍生肽的纳米颗粒。

背景技术

乳酸聚合物，例如聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物(PLGA)，是可生物降解的聚合物，并且是本领域所公知的，例如，从EP1468035、US6706854、WO2007/009919A2、EP1907023A、EP2263707A、EP2147036、EP0427185或US5610266中可知。

从WO 2007/048599、WO 2007/076904A1、WO 2012/069089和WO2015181138A1中可知如本文所公开的具有根据SEQ.ID.No.1KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的人乳铁蛋白衍生肽。

WO2015/181138A1描述了基于磷酸钙纳米颗粒核、活性成分、乳酸聚合物包衣和包括人乳铁蛋白衍生肽的阳离子聚合物包衣的纳米颗粒。

Hassert等人((2012)Chemistry&Biodiversity，第9卷，第2648–2658页)描述了“On-ResinSynthesis of an Acylated and Fluorescence-Labeled Cyclic IntegrinLigand for modification of Poly(lactic-co-glycolic acid)”。脂质化的c[RGDfK]肽用于包括用于包衣PLGA的第二功能性。棕榈酰化的整联蛋白-脂肽对PLGA具有高的亲和力。

发明内容

本发明涉及一种纳米颗粒，其包含核和在所述核上的酰化的人乳铁蛋白衍生肽，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物，所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，并且其中人乳铁蛋白衍生肽的N端被C₁₆-单酰基酰化。

人乳铁蛋白衍生肽(hLFF)通常显示出生物细胞穿透功能(例如WO 2007/048599或WO 2007/76904A1中的细胞穿透肽(CPP))，这意味着当与活性药物成分(API)同时递送给人细胞时，人乳铁蛋白衍生肽有助于并促进细胞中API的吸收。

本发明人惊奇地发现，具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列或与序列SEQ.ID.No.1的氨基酸位置相差不超过8个氨基酸的序列的C₁₆酰化的人乳铁蛋白衍生肽作为基于可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物的纳米颗粒的包衣的组合，优于包含未酰化或经不同酰化的人乳铁蛋白衍生肽的相应的纳米颗粒。特别地，与其他用LumogenF305荧光标记的包含具有不同酰化的hLFF肽的包衣的纳米颗粒或没有hLFF包衣的纳米颗粒相比，用Lumogen F305荧光标记的纳米颗粒的相对荧光(每100个A549肺癌细胞)更佳。

具体实施方式

纳米颗粒

本发明涉及一种纳米颗粒，其包含核和在所述核上的包衣，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物，其中所述包衣包含酰化的人乳铁蛋白衍生肽，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，并且其中人乳铁蛋白衍生肽的N端被C₁₆-单酰基酰化。

由于亲水性聚合物可以作为可生物再吸收的聚酯的一部分或作为单独的聚合物存在，因此存在可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物的四种可能的组合。

包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物的所述纳米颗粒可以是

i)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

ii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯，或

iii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

iv)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯。

可生物再吸收的聚酯与亲水性聚合物的比例

酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为约1重量％至100重量％或5重量％至75重量％，优选为约25重量％至75重量％。

平均粒度

所述纳米颗粒的平均粒度(Z-Ave)可以在约50nm至900nm、50至300nm的范围内，优选为约200nm至300nm，最优选为约220至280nm。所述纳米颗粒通常为球形。

粒度分布

所述纳米颗粒的粒度分布(PDI)可以在0.5或更小、0.05-0.3、0.08-0.2、0.09-0.19的范围内。所述纳米颗粒通常为球形。

根据Malvern(参考ISO 13321:1996规范)对PdI的定义是基于累积量分析进行的，进行累积量分析以拟合如下相关函数：Ln(C(tau))＝a+b*tau+c*tau²，三阶拟合，其中PdI＝2c/b²。

Zeta电位

纳米颗粒的Zeta电位(ZP)通常为正或至少中性，优选为约0mV至50mV，优选为约1mV至40mV，最优选为5mV至30mV。可使用采用Smoluchowski近似的Zetasizer Nano ZS仪器(Malvern，激光:λ＝532nm)测量平均粒度(Z-Ave)、粒度分布(PDI)和Zeta电位(ZP)。

所述纳米颗粒的特征在于，所述可生物再吸收的聚酯是聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、乳酸-乙醇酸共聚物、聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物、乳酸-乙醇酸-己内酯三元共聚物、乳酸-己内酯共聚物、聚二噁烷酮或乳酸-三亚甲基碳酸酯共聚物或上述聚合物的任意共混物。

所述纳米颗粒的特征在于，不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯包含聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)。

所述纳米颗粒的特征在于，在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为70:30至30:70，优选为60:40至40:60，最优选为55:45至45:55。

所述纳米颗粒的特征在于，不具有亲水性聚合物部分或具有聚合物部分的可生物再吸收的聚酯具有0.1-0.5dL/g，优选0.1-0.3dL/g或0.35-0.5dL/g的特性粘度IV。

所述纳米颗粒的特征在于，所述亲水性聚合物或亲水性聚合物部分是聚乙二醇。

所述纳米颗粒的特征在于，具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯包含具有嵌段结构AB、BA或ABA的聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物，其中A是聚(乳酸-共-乙醇酸)，B是聚(乙二醇)，并且其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约0.1-25％，优选10-20％。

所述纳米颗粒的特征在于，所述可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物部分包含在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物和聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的混合物中，其中，在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55；在聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，其中A为聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)，B为聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约10-20％。

所述纳米颗粒的特征在于，聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物与聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的重量比为60:40至99.9:0.1，优选为80:20至99.8:0.2，最优选为95:5至99.5:0.5。

所述纳米颗粒的特征在于，在人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列中存在至少两个半胱氨酸残基。

所述纳米颗粒的特征在于，人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列的长度为14至30个氨基酸，优选18至26个氨基酸，最优选20至24个氨基酸。

所述纳米颗粒的特征在于包含生物活性成分。

所述纳米颗粒的特征在于，所述生物活性成分选自止痛药、抗生素或抗感染药、抗体、抗癫痫药、植物抗原、抗风湿药、β受体阻滞剂(betablocker)、苯并咪唑衍生物、β-受体阻滞剂(beta-blocker)、心血管药物、化学治疗剂、CNS药物、洋地黄糖苷、胃肠道药物(例如质子泵抑制剂)、酶、激素、液体或固体天然提取物、矿物质营养素、核酸、寡核苷酸、肽、激素、蛋白质、肽、蛋白质、微量元素、泌尿科药物、维生素和疫苗或选自它们的任意混合物。

所述纳米颗粒的特征在于其包含诊断标志物。

所述纳米颗粒的特征在于，所述可生物再吸收的聚酯是PLGA，PLGA为聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)。

所述纳米颗粒的特征在于，在聚(D,L-丙交酯-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为70:30至30:70，优选为60:40至40:60，最优选为55:45至45:55。

所述纳米颗粒的特征在于，所述可生物再吸收的聚酯具有0.1-0.5dL/g，优选0.1-0.3dL/g或0.3-0.5dL/g的特性粘度IV。

所述纳米颗粒的特征在于，其中所述不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯是聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、乳酸-乙醇酸共聚物、乳酸-乙醇酸-己内酯三元共聚物、乳酸-己内酯共聚物、聚二噁烷酮或乳酸-三亚甲基碳酸酯共聚物或上述聚合物的任意共混物。

所述纳米颗粒的特征在于，其中所述可生物再吸收的聚酯是聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物和聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的混合物，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，其中A为聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)，B为聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约10-20％。

所述纳米颗粒的特征在于，聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物与聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的重量比为60:40至99:1，优选为80:98至98:2，最优选为85:15至95:5。

所述纳米颗粒的特征在于，在人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列中存在至少两个半胱氨酸残基。

所述纳米颗粒的特征在于，人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列具有14至30个氨基酸，优选18至26个氨基酸，最优选20至24个氨基酸的长度。

所述纳米颗粒的特征在于包含生物活性成分。

所述纳米颗粒的特征在于所述生物活性成分为DNA或RNA。

所述纳米颗粒的特征在于包含诊断标志物。

所公开的纳米颗粒可以通过乳液技术制备，例如通过乳液溶剂蒸发或萃取或沉淀来制备。所公开的纳米颗粒可以通过沉淀技术来制备。可以用油包水液滴产生双乳液，该油包水液滴优选在水相中包含生物活性成分或诊断标志物并在油相中包含可生物再吸收的聚酯。使用可包括稳定剂的第二过量的水相，可产生水包油包水(water-in-oil-in-water)液滴。然后可以用吸附在核的表面上的C16-酰化的人乳铁蛋白衍生肽包衣纳米颗粒核。

所公开的纳米颗粒可进一步在核中或在核上包含药学上可接受的赋形剂。例如，所述纳米颗粒可以具有内部磷酸钙结构。从WO2015/181138A1可知这样的纳米颗粒结构。核中的其他赋形剂可以是聚-L-赖氨酸或聚乙烯亚胺。

A549(人肺癌)细胞的相对荧光

所公开的包含50重量％的C₁₆-乙酰化的人乳铁蛋白衍生肽和作为荧光标志物的Lumogen F305的纳米颗粒在流式细胞仪中每100个A549人肺癌细胞显示相对荧光，该相对荧光是包含C₂酰化的人乳铁蛋白衍生肽而非C₁₆乙酰化的人乳铁蛋白衍生肽的可相比的纳米颗粒的相对荧光的五倍或更多倍或十倍或更多倍。

所公开的包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物的纳米颗粒包含50％重量的C₁₆乙酰化的人乳铁蛋白衍生肽和作为荧光标志物的Lumogen F305，其在流式细胞仪中每100个A549人肺癌细胞显示相对荧光，该相对荧光是包含相同的可生物再吸收的聚酯但不包含亲水性聚合物的可相比的纳米颗粒的相对荧光的三倍或更多倍。

相对荧光可以计算为

适合的测量和计算程序如下：可以对未染色的阴性对照的活A549细胞群进行门控(gated)，并将其设定为Lumogen F305 Red阴性细胞。为每个测量的样品建立直方图，x轴为相对荧光，y轴为活细胞数。x轴的中值代表活细胞群的荧光强度，因此代表了纳米颗粒缔合和细胞摄取的量。由于细胞计数的差异，以每100个细胞计算相对荧光。

可生物再吸收的聚酯

所述纳米颗粒包含核，该核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物。亲水性聚合物可以作为聚合物的亲水性部分共价结合到可生物再吸收的聚酯上，或者可以作为单独的聚合物存在。因此，可生物再吸收的聚酯可以是具有或不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯。具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯理解为可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或包含亲水性聚合物的可生物再吸收的聚酯。

所述可生物再吸收的聚酯通常是疏水性聚合物。就本发明而言，所述可生物再吸收的聚酯广义上优选为乳酸聚合物或基于乳酸的聚合物，例如基于如丙交酯(L-丙交酯、D-丙交酯、DL-丙交酯、内消旋丙交酯)、乙交酯、ε-己内酯、二噁烷酮、三亚甲基碳酸酯、δ-戊内酯、γ-丁内酯和类似的可聚合杂环的均聚物或共聚物。这些聚合物可以由聚合物链中的一个或多个不同的单体模块组成，例如乙二醇。可生物再吸收的聚酯是广泛用于生产可生物再吸收的外科植入物的原料，并且还用作配制肠胃外释放体系的药物载体。

可生物再吸收的聚酯优选地选自由选自a)至i)的单体组分或单体组分的混合物合成的乳酸聚合物或共聚物：

a)D和L-丙交酯，

b)L-丙交酯和乙交酯，

c)D,L-丙交酯和乙交酯，

d)L-丙交酯和ε-己内酯，

e)L-丙交酯和二噁烷酮，

f)L-丙交酯和三亚甲基碳酸酯，

g)L-丙交酯、D-丙交酯、内消旋丙交酯或D,L-丙交酯，

h)L-丙交酯，

i)D,L-丙交酯，

j)L-丙交酯、D-丙交酯、内消旋丙交酯或D,L-丙交酯和ε-己内酯的统计分布的单体单元，

k)L-丙交酯、D-丙交酯、内消旋丙交酯或D,L-丙交酯和二噁烷酮的统计分布的单体单元，

i)L-丙交酯、D-丙交酯、内消旋丙交酯或D,L-丙交酯和三亚甲基碳酸酯的统计分布的单体单元。

不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯可以是聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、乳酸-乙醇酸共聚物、乳酸-乙醇酸-己内酯共聚物、乳酸-己内酯共聚物、聚二噁烷酮或乳酸-三亚甲基碳酸酯共聚物或上述聚合物的任意共混物。

优选地，不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯可以是聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物，其特性粘度IV优选为0.1-2.0[dL/g]、0.12-1.2[dL/g]、0.14-1.0[dL/g]、0.16-0.44[dL/g]、0.16-0.24[dL/g](特性粘度IV可以在0.1％w/v下，在CHCl₃中于25℃用Ubbelhode尺寸0c的玻璃毛细管粘度计测量)。

不具有亲水性聚合物部分的适合的可生物再吸收的聚酯可以是聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物(PLGA)，在该聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为80:20至20:80、70:30至30:70、60:40至40:60。特性粘度(IV)可以为0.1–0.5[dL/g]或0.12–0.45[dL/g](特性粘度可以在0.1％w/v下，在CHCl₃中于25℃用Ubbelhode尺寸0c玻璃毛细管粘度计测量)。

不具有亲水性聚合物部分的适合的可生物再吸收的聚酯可以是

RG503或

RG 503H，它们是特性粘度IV为0.16-0.44[dL/g]或0.16–0.24[dL/g]的聚(D,L-丙交酯-乙交酯/50:50)共聚物。

另一种适合的不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯是

RG 502或

RG 502H，它们是特性粘度IV为0.16–0.44[dL/g]或0.16–0.24[dL/g]的聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯/50:50(mol％))共聚物。

具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯可以是具有嵌段结构AB、BA或ABA的聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物(PLGA-PEG、PEG-PLGA或PLGA-PEG-PLGA)，其中A是聚(乳酸-共-乙醇酸)，B是聚(乙二醇)，并且其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约0.1-40％、0.1-25％、0.5-4％，优选10-20％。

具有约15重量％的PEG含量的适合的相应的市售PLGA-PEG AB-嵌段共聚物例如为

RGP d 50155或

Select 5050DLG mPEG 5000。

不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯与具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯的最优选组合为聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物与聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的混合物，其中，在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，在聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，其中A为聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)，B为聚(乙二醇)，并且其中聚(乙二醇)嵌段占嵌段共聚物(PLGA/PLGA-PEG)重量的约10-20％。优选地，在该混合物中，聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物与聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的重量比为60:40至99:1，优选为80:98至98:2，最优选为85:15至95:5。

“可生物再吸收的聚酯”中的术语“可生物再吸收的”是指优选基于乳酸的聚合物的聚酯，其在植入或注射到人体或动物体内后，与体液接触，在缓慢的水解反应中分解成低聚物。水解最终产物(例如乳酸或乙醇酸)被代谢为二氧化碳和水。术语“可生物再吸收的聚酯”经常使用的其他可替换的表达方式是“可再吸收的聚酯”、“生物可降解的聚酯”或“吸附性聚酯”。

这些种类的可生物再吸收的聚酯或生物可降解的聚酯聚合物通常是本领域众所周知的，例如从EP1468035、US6706854、WO2007/009919A2、EP1907023A、EP2263707A、EP214703、EP0427185或US5610266中可知。根据生产方法，聚合物可以具有不同的端基，例如酯或酸端基。

亲水性聚合物

所述纳米颗粒包含核，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物。所述亲水性聚合物可以作为聚合物的亲水性部分共价结合到可生物再吸收的聚酯，或者可以作为单独的聚合物存在。亲水性聚合物可以定义为在25℃下在至少pH3至pH10的宽pH范围内是水溶性或水溶胀性的聚合物。优选地，所述亲水性聚合物是线性聚合物。优选地，所述亲水性聚合物未交联。

作为单独的聚合物或作为可生物再吸收的聚合物的一部分的亲水性聚合物部分存在的亲水性聚合物优选地是聚乙二醇(PEG)。从PEG 300、PEG1000、PEG 2000、PEG 4000、PEG 5000直至PEG 10.000或PEG 20.000的类型的聚乙二醇都是适合的。聚乙二醇(PEG)的同义词是聚环氧乙烷(PEO)或聚氧乙烯(POE)。术语PEG通常用于分子量较低的聚合物，例如20,000g/mol或更低。术语PEO通常用于具有较高分子量的聚合物，例如20,000g/mol或更高。

C₁₆单酰化的人乳铁蛋白衍生肽(C₁₆-hLFF)

所述纳米颗粒包含核和在所述核上的酰化的人乳铁蛋白衍生肽，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物。“在核上”是指酰化的人乳铁蛋白衍生肽存在于核的表面上，分别包衣在核上或吸收在核的表面上。酰化的人乳铁蛋白衍生肽在核上的包衣或吸收优选是非共价相互作用的结果。

C₁₆单酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，其中该肽在其N端(氨基酸主链上的NH₂基团)被C₁₆单酰基(棕榈酰基)酰化或取代。举例来说，在序列SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的情况下，N端是第一个氨基酸“K”(赖氨酸)的氨基酸主链的NH₂基团，C端是最后一个氨基酸“R”(精氨酸)的氨基酸主链的COOH基团。由于化学合成，C₁₆单酰化的人乳铁蛋白衍生肽可以以C端酰胺(-CONH₂)的形式存在。

在所述纳米颗粒中，酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为约1重量％至100重量％或5重量％至75重量％，优选为约25重量％至75重量％。

如本领域众所周知，具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的人乳铁蛋白衍生肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽优选是由单一氨基酸化学合成的。人乳铁蛋白衍生肽的酰化可以通过用相应的C₁₆单酰基分子对肽进行标准化学酰化来进行。标准化学酰化技术是本领域技术人员所熟知的。相应的C₁₆酰化的人乳铁蛋白衍生肽也可按需商购。

用于C₁₆酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸位置的氨基酸序列的肽。

要进行C₁₆单酰化的人乳铁蛋白衍生肽可以具有14至30个、19至28个、20至25个、21至23个或最优选22个氨基酸的长度。优选地，人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列可包括两个或更多个或恰好两个半胱氨酸残基。优选地，人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列可包括至少两个半胱氨酸残基，其可以形成内在的半胱氨酸-半胱氨酸桥(胱氨酸桥)。优选地，两个半胱氨酸残基以氧化形式存在，以形成内在的胱氨酸桥。优选地，两个半胱氨酸残基对应于肽序列SEQ ID No.1的2和19位或与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列。

要酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，其优选可通过化学合成制备或产生。在这种情况下，具有SEQ IDNo.1KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列或具有与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸位置的氨基酸序列的肽可以合成为C端酰胺和/或具有N端乙酰基。

在这个意义上，术语“氨基酸位置不同”应理解为与序列SEQ.ID.No.1相比，在某个位置存在不同的氨基酸，或者在某个位置不存在氨基酸，或者在该序列中存在其他氨基酸，或其他氨基酸添加到该序列中，或以上这些情况的任何组合。

最优选地，包含在酰化肽中的人乳铁蛋白衍生肽与序列SEQ.ID.No.1相差不超过8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸位置，其中存在至少两个半胱氨酸残基。优选地，存在对应于SEQ.ID.No.1的位置2和19的两个半胱氨酸。优选地，所述半胱氨酸残基以氧化形式存在，从而形成内在的半胱氨酸-半胱氨酸桥(胱氨酸桥)。为了形成有效的二硫键，可将肽以2mM的浓度溶于pH8的50mM的Hepes缓冲液中，并在37℃下氧化2小时(Wallbrecher等人，Cell MolLife Sci.2014年7月；71(14):2717-29)。

可以使用固相肽合成(EMC microcollections)将人乳铁蛋白衍生肽合成为C端酰胺。为了形成有效的二硫键，可以将肽以2mM的浓度溶于pH8的50mM Hepes缓冲液中，并在37℃下氧化2小时(Wallbrecher等人，Cell Mol Life Sci.。2014年7月；71(14):2717-29)。

生物活性成分

所述纳米颗粒可以包含一种或多种生物活性成分。

本文使用的术语“生物活性剂”包括包括在用于药物或药用目的的药物制剂或剂型之中或之上的目的化合物，以提供某种形式的治疗效果或引起某种类型的生物响应或活性。

就本申请而言，生物活性成分是可以递送至哺乳动物或人体以获得治疗效果和/或治愈疾病的物质。优选地，生物活性成分在20℃下是水溶性的。

在“药物活性成分”的意义上，可以使用术语“生物活性成分”，其又具有与“活性药物成分(API)”相同的含义。

可以将人乳铁蛋白衍生肽特别是如所公开的C16酰化的人乳铁蛋白衍生肽视为赋形剂，以用于例如平衡纳米颗粒的Zeta电位特性或用于支持将生物活性成分递送到细胞中，但其本身不被视为生物活性成分。

本发明优选地可用于具有改善的细胞递送性的纳米颗粒，以递送具有改善的生物利用度的生物活性成分或用于递送诊断标志物。

用于缓释配制的包衣药物剂型中的生物活性成分的治疗和化学类别为(例如)止痛药、抗生素或抗感染药、抗体、抗癫痫药、植物抗原、抗风湿药、β受体阻滞剂、苯并咪唑衍生物、β-受体阻滞剂、心血管药物、化学治疗剂、中枢神经系统药物、洋地黄苷、胃肠道药物(例如质子泵抑制剂)、酶、激素、液体或固体天然提取物、核酸、寡核苷酸、肽激素、蛋白质、治疗性细菌、肽、蛋白质(金属)盐(例如天冬氨酸盐)、氯化物、原酸酯、泌尿科药物、维生素、微量元素、矿物质或疫苗。

生物活性成分或药物活性成分的实例可以为：阿坎酸(acamprosat)、七叶素、淀粉酶、乙酰水杨酸、肾上腺素、5-氨基水杨酸、金霉素、杆菌肽、巴沙拉嗪(balsalazine)、β-胡萝卜素、比卡鲁胺、比沙可啶、菠萝蛋白酶、菠萝蛋白酶、布地奈德、降钙素、carbamacipine、卡铂、头孢菌素、西曲瑞克、克拉霉素、氯霉素、西咪替丁、西沙必利、克拉屈滨、氯氮卓(clorazepate)、cromalyn、1-脱氨基半胱氨酸-8-D-精氨酸-加压素、德伦环烷、地肽瑞里、右兰索拉唑、双氯芬酸、去羟肌苷、洋地黄毒苷和其他洋地黄糖苷、双氢链霉素、二甲硅油、双丙戊酸钠、屈螺酮、度洛西汀、酶、红霉素、埃索美拉唑、雌激素、依托泊苷、艾塞那肽、法莫替丁、氟化物、大蒜油、胰高血糖素、GLP-1、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肝素、氢化可的松、人类生长激素(hGH)、布洛芬、艾普拉唑、胰岛素、干扰素、白介素、内含子A、酮洛芬、兰索拉唑、亮丙瑞林醋酸脂酶、硫辛酸、锂、激肽、美金刚、美沙拉嗪、乌洛托品、米拉美林、矿物质、米诺拉唑(minoprazole)、萘普生、纳他霉素、呋喃妥因、新生霉素、奥沙拉嗪、奥美拉唑、orothates、胰酶、泮托拉唑、甲状旁腺激素、帕罗西汀、青霉素、perprazol、吲哚洛尔、多粘菌素、钾、普伐他汀、泼尼松、丙谷美辛(Proglumetacin)、普罗加胺(progabide)、原生长抑素(pro-somatostatin)、蛋白酶、喹那普利、雷贝拉唑、雷尼替丁、雷诺嗪、瑞波西汀、芦丁、生长抑素链霉素、枯草菌素、柳氮磺吡啶、磺胺、坦洛新、替那拉唑、thrypsine、丙戊酸、加压素、维生素、锌，包括它们的盐、衍生物、多晶型物、同晶型物，或任意类型的混合物或其组合。

生物学活性成分可以是“小分子”或肽，不同于人乳铁蛋白衍生肽。适合的肽的实例为例如肽激素，例如人生长激素。生物活性成分可以是蛋白质。适合的蛋白质的实例为(例如)抗体、白介素、干扰素或基于蛋白质的疫苗。

生物活性成分可以是核酸，例如DNA或RNA。DNA或RNA可以是双链或单链的。DNA可以是质粒DNA(pDNA)。

药物活性成分可以是siRNA(小干扰RNA)。

术语“siRNA”是本领域技术人员所熟知的。典型的siRNA可以定义为具有约19-23个碱基对长度的双链RNA，其中单链可以在3'末端重叠两个核苷酸。siRNA是大双链RNA的裂解产物，例如由病毒在其于活细胞中的复制过程中产生的细胞mRNA或RNA。可以通过例如“Dicer”酶将这些类型的RNA切割为siRNA，“Dicer”酶是III型RNase。siRNA在转录后基因沉默过程中发挥重要作用。更长的siRNA，例如60个或更长的碱基对，也可以通过表达载体合成。因此，为了实现特定的治疗效果和/或治愈特定疾病，将siRNA用作活性成分颇受关注。

生物或活性药物成分的其他实例是：

药物活性物质可能属于一种或多种活性成分类别，例如ACE抑制剂、肾上腺素能药物、肾上腺皮质类固醇、痤疮治疗剂、醛糖还原酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、α-糖苷酶抑制剂、α1拮抗剂、酒精滥用药物、氨基酸类、杀变形虫剂、同化剂(anabolics)、强壮药、麻醉添加剂、麻醉剂(非吸入性)、麻醉剂(局部)、镇痛药、雄激素、心绞痛治疗剂、拮抗剂、抗过敏药、如PDE抑制剂的抗过敏药、治疗哮喘的抗过敏药、其他的抗过敏药(例如白三烯拮抗剂、抗贫血药、抗雄激素物质、抗焦虑剂、抗关节炎药、抗心律不齐药、抗动脉粥样硬化药、抗生素、抗胆碱能药、抗惊厥药、抗抑郁药、抗糖尿病药、止泻药、抗利尿剂、解毒药、止吐药、抗癫痫药、抗纤维蛋白溶解药、抗癫痫药、驱虫药(antihelmintics)、抗组胺药、抗低血压药、抗高血压药、抗高血压药、抗低血压药、抗凝血剂、抗真菌药、抗雌激素药、抗雌激素药(非甾类)、抗帕金森氏病药、抗炎药剂、抗增殖活性成分、抗原生动物活性成分、抗风湿药、抗吸血虫药、抗痉挛药、抗血栓药、镇咳药、食欲抑制剂、动脉硬化药、抑菌剂、β-受体阻滞剂(beta-blockers)、β-受体阻滞剂(beta-receptor blockers)、支气管扩张剂、碳酸酐酶抑制剂、化疗药、利胆药、胆碱能药物、胆碱能激动剂、胆碱酯酶抑制剂、用于治疗溃疡性结肠炎的药剂、环氧合酶抑制剂、利尿剂、杀外寄生虫剂、催吐药、酶、酶抑制剂、酶抑制剂、抗呕吐活性成分、溶纤溶剂、抑真菌剂、痛风药物治疗剂、青光眼治疗剂、糖皮质激素、糖皮质类固醇、止血剂、强心苷、组胺H2拮抗剂、激素类及其抑制剂、免疫治疗剂、强心剂、抗球虫药、缓泻药、降脂药、胃肠治疗剂、疟疾治疗剂、偏头痛药物治疗剂、杀微生物剂、克罗恩病、转移抑制剂、偏头痛药物治疗剂、矿物制剂、促进运动的活性成分、肌肉松弛剂、精神抑制药、用于治疗雌激素的活性成分、用于治疗骨质疏松的活性成分、耳科药、抗帕金森氏病药、植物药、质子泵抑制剂、前列腺素、用于治疗良性前列腺增生的活性成分、用于治疗瘙痒的活性成分、牛皮癣活性成分、精神活性药物、自由基清除剂、肾素拮抗剂、甲状腺治疗剂、用于治疗皮脂溢的活性成分、抗晕船的活性成分、痉挛药、α-和β-拟交感神经药、血小板凝集抑制剂、镇定剂、溃疡治疗剂、其他溃疡治疗剂、治疗尿路结石的药剂、病毒抑制剂、维生素、细胞因子、用于和细胞抑制剂联合治疗的活性成分、细胞抑制剂。

适合的活性成分的实例为：阿卡波糖、乙酰水杨酸、阿巴卡韦、醋氯芬酸、阿柔比星、阿昔洛韦、放线菌素、阿达木单抗、阿德福韦、阿德福韦二匹伏酯、腺苷甲硫氨酸、肾上腺素及肾上腺素衍生物、α-半乳糖苷酶、β-阿加西酶、阿仑珠单抗、阿莫曲坦、alphacept、别嘌醇、阿莫曲坦、阿洛司琼、前列地尔、金刚烷胺、氨溴索、氨磺必利、氨氯地平、阿莫西林、5-对氨水杨酸、阿米替林、氨氯地平、阿莫西林、氨普那韦、阿那白滞素、阿那曲唑、雄激素及雄激素衍生物、阿扑吗啡、阿立哌唑、三氧化二砷、蒿甲醚、阿替洛尔、阿托伐他汀、阿托西班、硫唑嘌呤、壬二酸、巴比土酸衍生物、巴柳氮、巴利昔单抗、beclapermin、倍氯米松、bemiparin、苯二氮类、倍他司汀、贝沙罗汀(bexaroten)、苯扎贝特、比卡鲁胺、比马前列素、波生坦、botulinustoxim、溴莫尼定、布林唑胺、布地奈德、布地品、丁苯羟酸、布美他尼、丁丙诺啡、安非他酮、butizine、降钙素、钙拮抗剂、钙盐、坎地沙坦、卡培他滨、卡托普利、卡马西平、carifenacin、卡维地洛、卡泊芬净、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄cefalosporins、头孢托仑、头孢丙烯、塞来考昔、cepecitabine、cerivastatim、西替利嗪、西曲瑞克、西妥昔单抗、鹅去氧胆酸、绒促性素、环孢素、西多福韦、西咪替丁、环丙沙星、顺铂、克拉屈滨、克拉霉素、克拉维酸、克林霉素、氯丁替诺、可乐定、氯吡格雷、可待因、咖啡因、考来烯胺、色甘酸、复方新诺明、香豆素及香豆素衍生物、达贝泊汀、半胱胺、半胱氨酸、阿糖胞苷、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达克珠单抗、达福普汀、达那肝素、达哌唑、达贝泊汀、defepripone、地昔帕明、地西卢定、desloaratadine、去氨加压素、去氧孕烯、地奈德、右布洛芬、右酮洛芬、disoproxil、地西泮及地西泮衍生物、双肼屈嗪、地尔硫、茶苯海明、二甲亚砜、dimeticon、特戊酰氧甲基、dipyridarnoi、多拉司琼、多潘立酮、及多潘立酮(domperidane)衍生物、donepzil、多巴胺、多沙唑嗪、doxorubizin、多西拉敏、双氯芬酸、双丙戊酸钠、屈大麻酚、屈螺酮、屈曲克凝α、度他雄胺、依巴斯汀、益康唑、依法韦仑、eletripan、emidastine、恩曲他滨、依那普利、encepur、恩他卡朋、enfurvirtide、麻黄碱、肾上腺素、依普利酮、依泊汀及依泊汀衍生物、依普洛沙坦、依替巴肽、厄他培南、艾美拉唑、雌激素及雌激素衍生物、依那西普、乙水杨胺、ethinestradiol、依托芬那酯、依托贝特、乙羟茶碱、依托孕烯、依托泊苷、依西美坦、艾塞那肽、exetimib、泛昔洛韦、法莫替丁、faropenandaloxate、非洛地平、非诺贝特、芬太尼、芬替康唑、非索非那定、非那雄胺、氟康唑、氟达拉滨、氟桂利嗪、氟尿嘧啶、氟西汀、氟比洛芬、氟吡汀、氟他胺、氟伐他汀、促滤泡素、福米韦生、fondaparinux、福莫特罗、磷霉素(fosfomicin)、夫罗曲坦、呋塞米、夫西地酸、钆贝酸盐、加兰他敏、戈洛帕米、更昔洛韦、加尼瑞克、加替沙星、吉非替尼、吉非贝齐、庆大霉素、吉哌隆、GLP-1、孕激素及孕激素衍生物、银杏、格拉默、格列本脲、格列吡嗪、高血糖素、山梨糖醇及山梨糖醇衍生物、氨基葡萄糖及氨基葡萄糖衍生物、糖苷抗生素类、谷胱甘肽、甘油及甘油衍生物、下丘脑激素类、戈舍瑞林、格帕沙星、促旋酶抑制剂、胍乙啶、促旋酶抑制剂、氯化高铁血红素、卤泛群、氟哌啶醇、作为口服抗糖尿病药的尿素衍生物、肝素及肝素衍生物、强心苷、透明质酸、肼屈嗪、氢氯噻嗪及氢氯噻嗪衍生物、hydroxyomeprazole、羟嗪、ibritumomab、布洛芬、伊达比星、ifliximab、异环磷酰胺、伊洛前列素、伊马替尼、咪达普利、伊米苷酶、丙米嗪、咪喹莫特、咪达普利、吲哚美辛、吲哚拉明、英利昔单抗、胰岛素、甘精胰岛素制剂、干扰素类、厄贝沙坦、伊立替康、异康唑、异丙肾上腺素、伊曲康唑、伊伐布雷定、碘及碘衍生物、小连翘属植物、钾盐、酮康唑、酮洛芬、酮替芬、拉西地平、兰索拉唑、拉罗尼酶、拉坦前列素、来氟米特、来匹卢定、乐卡地平、来普立宁、来曲唑、左醋美沙朵、左乙拉西坦、左西替利嗪、左旋多巴、左羟丙哌嗪(levodrpropicin)、左美沙酮、利考非隆、利奈唑胺、lipinavir、硫辛酸及硫辛酸衍生物、赖诺普利、利舒脲、洛非帕明、洛度沙胺、洛美沙星、洛莫司汀、洛哌丁胺、洛匹那韦、氯雷他定、氯诺昔康、氯沙坦、本芴醇、促黄体素、镁盐、大环内酯抗生素类、锰福地吡、马普替林、甲苯达唑、美贝维林、美克洛嗪、甲芬那酸、甲氟喹、美洛昔康、美金刚、甲吲洛尔、甲丙氨酯、美罗培南、美沙拉秦、甲琥胺、安乃近、二甲双胍、美沙酮、甲氨喋呤、5-氨基-4-氧代戊酸甲酯、methylnaloxone、methylnaloxone、甲基纳曲酮、哌甲酯、甲泼尼龙、美噻吨(metixen)、甲氧氯普胺、美托洛尔、甲硝唑、米安色林、米贝拉地尔、咪康唑、米非司酮、米格列醇、miglustad、米诺环素、米诺地尔、米索前列醇、丝裂霉素、咪唑斯汀、莫达非尼、莫昔普利、孟鲁司特、莫罗凝血素(moroctocog)、吗啡喃类、吗啡及吗啡衍生物、莫西沙星、麦角生物碱类、纳布啡、纳洛酮、萘普生、那拉曲坦、那可丁、那他霉素、那格列奈、奈必洛尔、奈法唑酮、奈非那韦、新斯的明、neramexan、奈韦拉平、尼麦角林、尼可刹米、硝苯地平、尼氟酸、尼莫地平、尼莫唑、尼莫司汀、奈西立肽、尼索地平、诺氟沙星、novaminesulphone、那可丁、制霉菌素、氧氟沙星、oktotride、奥氮平、奥美沙坦、奥沙拉秦、奥塞米韦、奥美拉唑、奥莫康唑、昂丹司琼、奥利司他、奥塞米韦、奥沙西罗、苯唑西林、奥沙利铂、奥沙普秦、oxcarbacepin、oxicodone、奥昔康唑、羟甲唑啉、帕利珠单抗、palanosetron、泮托拉唑、对乙酰氨基酚、帕瑞考昔、帕罗西汀、培门冬酶、聚乙二醇化干扰素、pegfilgrastrim、喷昔洛韦、口服青霉素类、喷他佐辛、喷替茶碱、己酮可可碱、肽抗生素类、培哚普利、奋乃静、哌替啶、植物提取物、安替比林、非尼拉敏、苯基丁酸、苯妥英、吩噻嗪、芬赛林、保泰松、苯妥英、吡美莫司、匹莫齐特、吲哚洛尔、吡格列酮、哌嗪、吡拉西坦、哌仑西平、吡贝地尔、吡吲哚(pirlindol)、吡罗昔康、普拉克索(pramipexol)、普兰林肽、普伐他汀、哌唑嗪、普鲁卡因、丙嗪、丙哌维林、普萘洛尔、丙酸衍生物、异丙安替比林、前列腺素、丙硫异烟胺、丙羟茶碱、喹硫平、喹那普利、喹普利拉、奎奴普丁(quinupristine)、雷米普利、雷尼替丁、雷贝拉唑、雷洛昔芬(raloxifen)、雷诺嗪、拉布立酶、瑞波西汀(reboxetin)、repaclinides、瑞普特罗、利舍平、revofloxacin、利巴韦林、利福平、利鲁唑、利美索龙、利塞膦酸盐、利培酮、利托那韦、利妥昔单抗、rivastimen、risatriptan、罗非考昔、罗匹尼罗(ropinirol)、罗哌卡因、罗格列酮、罗沙替丁、罗红霉素、螺可吉宁(ruscogenin)、罗苏伐他汀、芦丁及芦丁衍生物、沙巴草、沙丁胺醇、水杨酸类、沙美特罗、沙康唑、甲状腺激素类、东莨菪碱、司来吉兰、舍他康唑、舍吲哚、舍曲林、司维拉姆、西布曲明、西地那非、硅酸盐、辛伐他汀、西罗莫司、谷甾醇、索他洛尔、司谷氨酸、司氟沙星、大观霉素、螺旋霉素、螺普利、螺内酯、司他夫定、链霉素、硫糖铝、舒芬太尼、舒巴坦、磺酰胺、柳氮磺胺吡啶、舒必利、舒他西林、舒噻美(sultiam)、舒马普坦、氯琥珀胆碱、他克林、他克莫司、他达拉非、taliolol、他沙利定、他莫昔芬、他索纳明、他扎罗汀、替加氟、替加色罗、泰利霉素、替米沙坦、替莫泊芬、替莫唑胺、替那拉唑、替奈普酶、替尼泊苷、替诺福韦、替诺昔康、特立帕肽、特拉唑嗪、特比萘芬、特布他林、特非那定、特立帕肽、特利加压素、特他洛尔、睾酮及睾酮衍生物、四环素类、四氢唑林、替唑生坦、可可碱、茶碱、茶碱衍生物、甲巯咪唑、塞替派、thr.生长因子类、噻加宾、硫必利、替勃龙、噻氯匹定、替利定、噻吗洛尔、替硝唑、噻康唑、硫鸟嘌呤、tiotropium、噻克索酮、tirazetam、替罗拉胺、替罗非班、替扎尼定、妥拉唑林、甲苯磺丁脲、托卡朋、托萘酯、托哌酮、托特罗定、托吡酯、托泊替康、托拉塞米、曲马朵、曲马唑啉、群多普利、反苯环丙胺、曲匹地尔、曲妥珠单抗、曲伏前列素、曲唑酮、trepostinil、曲安西龙及曲安西龙衍生物、氨苯喋啶、三氟哌多、曲氟尿苷、曲美他嗪、甲氧苄啶、曲米帕明、曲吡那敏、曲普利啶、trifosfamide、曲金刚胺、氨丁三醇、tropalpine、曲伐沙星、曲克芦丁、妥洛特罗、胰蛋白质酶类、酪胺、短杆菌素、乌拉地尔、熊去氧胆酸、茶碱熊去氧胆酸、伐昔洛韦、伐地考昔、缬更昔洛韦、丙戊酸、缬沙坦、万古霉素、伐地那非、维库氯铵、文拉法辛、维拉帕米、维替泊芬、阿糖腺苷、氨己烯酸、维洛沙秦、长春碱、长春胺、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、长春西丁、维喹地尔、维生素D及维生素D的衍生物、伏立康唑、华法林、尼克占替诺、希美加群、希帕胺、扎鲁司特、扎西他滨、扎来普隆、扎那米韦、齐多夫定、齐拉西酮、唑来膦酸、佐米曲、唑吡坦、zoplicone、佐替平等。

需要时，所述活性成分也可以以其药学上可接受的盐或衍生物的形式使用，并且在手性活性成分的情况下，可以同时使用旋光异构体和外消旋体或非对映异构体的混合物。需要时，本发明的组合物还可包含两种或更多种的活性药物成分。

诊断标志物

所公开的所述纳米颗粒可以包含诊断标志物。诊断标志物可以是荧光标志物，例如

-B-乙二胺或

F305，或用于临床诊断的放射性标志物。标志物与所述纳米颗粒可以通过化学反应共价连接或通过范德华力(氢键)非共价连接或通过离子相互作用连接。

剂型

本申请公开了包含大量纳米颗粒的药物剂型，所述纳米颗粒包含一种或多种生物活性成分或一种或多种诊断标志物，其中所述剂型包含丸剂(pellet)、片剂、胶囊、喷雾剂、气雾剂、散剂(powder)、小袋、栓剂或注射液或分散液。

本申请中要求保护的多层形式的药物主要在多颗粒药物形式上是有意义的。因此，公开了包含大量本文所述的纳米颗粒的药物剂型，其中所述剂型可包含丸剂、片剂、胶囊或注射液或分散液。

术语含有丸的片剂(pellet-containing tablet)或压缩片剂是本领域技术人员所熟知的。这样的片剂可以具有例如约5至25mm的尺寸。通常，指定的多个含活性成分的小丸与粘合赋形剂一起压缩在其中以产生公知的片剂形式。在口服和与体液接触后，该片剂形式崩解并释放丸粒。压缩片剂兼具单剂型的摄食优点与多剂型的优点，例如剂量精确度。

术语小片剂是本领域技术人员所熟知的。小片剂小于传统片剂并可具有大约1至4mm的尺寸。类似于丸剂，小片剂是用于多剂型的单剂型。与尺寸可相同的丸剂相比，小片剂通常具有表面更规则的优点，其可更精确和更均匀地包衣。小片剂可包封在胶囊，如明胶胶囊中提供。这样的胶囊在口服和与胃液或肠液接触后崩解并释放小片剂。小片剂的另一用途是个别微调活性成分剂量。在这种情况下，患者可直接摄入与要治疗的疾病的严重程度以及与其个体体重匹配的指定数目的小片剂。小片剂不同于如上文论述的含有丸的压缩片剂。

术语小袋是本领域技术人员所熟知的。它是指小型密封包装，其通常以含有丸剂的液体形式或干燥的丸剂或粉末的形式含有活性成分。小袋本身只是包装形式，其不能被摄入。小袋的内容物可以溶解在水中，或者作为有利的特征可以直接浸泡或摄入而无需另外的液体。对于患者来说，当在没有水可用的情况下摄取剂型时，后者是有利的特征。小袋是片剂、小片剂或胶囊的替代剂型。

术语胶囊是本领域技术人员所熟知的。胶囊就像小袋一样，是含有丸剂的液体的容器，或者是干丸剂或粉末的容器。但是，与小袋相反，胶囊由药学上可接受的赋形剂组成，例如明胶或羟丙基甲基纤维素，其能像片剂一样被摄入。胶囊在口服摄入并与胃液或肠液接触后崩解，释放出所含的多种单元。用于制药目的的胶囊可以购买到不同的标准尺寸。为了抵抗胃液并在小肠或结肠中控制释放，胶囊可设有肠溶衣，例如阴离子纤维素或阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物(

L30D.

L100-55、

S或

FS聚合物类型)。

用途

本申请进一步公开了所述纳米颗粒在制备适于口服或肠胃外递送所述纳米颗粒中所包括的生物活性成分或诊断标志物的药物组合物的方法中的用途。

本申请公开了包含如本文所述的生物活性成分或诊断标志物的纳米颗粒，其用作用于经口服、肺、鼻、口颊、阴道或肠胃外递送生物活性成分的药物或药物的一部分，或用作诊断标志物。

项目

本发明的特征在于以下各项：

第1：一种纳米颗粒，其包含核和在所述核上的酰化的人乳铁蛋白衍生肽，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与所述SEQ.ID.No.1的序列相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，并且其中所述人乳铁蛋白衍生肽的N端被C₁₆-单酰基酰化。

2、根据第1项所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物为

i)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

ii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯，或

iii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

iv)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯。

3、根据第1或2项所述的纳米颗粒，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为约1重量％至100重量％或5重量％至75重量％，优选为约25重量％至75重量％。

4、根据第1至3项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯与亲水性聚合物的重量比为60:40至99.9:0.1，优选为80:20至99.8:0.2，最优选为95:5至99.5:0.5。

5、根据第1至4项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中平均粒度(Z-Ave)在约50nm至900nm的范围内，优选为约100nm至350nm，最优选为约200nm至300nm。

6、根据第1至5项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中粒度分布(PDI)在小于0.3、或0.05至0.3、0.08至0.2或0.09至0.19的范围内。

7、根据第1至6项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的Zeta电位为约0mV至50mV，优选为约1mV至40mV，最优选为5mV至30mV。

8、根据第1至7项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯是聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、乳酸-乙醇酸共聚物、乳酸-乙醇酸-己内酯三元共聚物、乳酸-己内酯共聚物、聚二噁烷酮或乳酸-三亚甲基碳酸酯共聚物或上述聚合物的任意共混物。

9、根据第1至8项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯包含聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)。

10、根据第1至9项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中在所述聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为70:30至30:70，优选为60:40至40:60，最优选为55:45至45:55。

11、根据第1至10项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中不具有亲水性聚合物部分或具有聚合物部分的可生物再吸收的聚酯具有0.1-0.5dL/g，优选0.1-0.3dL/g、或0.3-0.5dL/g的特性粘度IV。

12、根据第1至11项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述亲水性聚合物或所述亲水性聚合物部分是聚乙二醇。

13、根据第1至12项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯包含具有嵌段结构AB、BA或ABA的聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物，其中A是聚(乳酸-共-乙醇酸)，B是聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约0.1-40％、0.1-25％、0.2-4％，优选10-20％。

14、根据第1至13项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物部分包含在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物和聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的混合物中，其中，在所述聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，在所述聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，优选为55:45至45:55，其中A为聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)，B为聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的约10-20％。

15、根据第14项所述的纳米颗粒，其中聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物与聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的重量比为60:40至99.9:0.1，优选为80:20至99.8:0.2，最优选为95:5至99.5:0.5。

16、根据第1至15项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中在所述人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列中存在至少两个半胱氨酸残基。

17、根据第1至16项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述人乳铁蛋白衍生肽的氨基酸序列的长度为14至30个氨基酸，优选18至26个氨基酸，最优选20至24个氨基酸。

18、根据第1至17项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中包含生物活性成分。

19、根据第18项所述的纳米颗粒，其中所述生物活性成分选自止痛药、抗生素或抗感染药、抗体、抗癫痫药、植物抗原、抗风湿药、β受体阻滞剂、苯并咪唑衍生物、β-受体阻滞剂、心血管药物、化学治疗剂、CNS药物、洋地黄糖苷、胃肠道药物(例如质子泵抑制剂)、酶、激素、液体或固体天然提取物、核酸、寡核苷酸、肽、激素、蛋白质、肽、蛋白质、泌尿科药物、疫苗、维生素、微量元素、矿物质或它们的任意混合物。

20、根据第1至19项中一项或多项所述的纳米颗粒，其包含诊断标志物。

21、根据第18至20项中一项或多项所述的纳米颗粒作为用于经口服、肺、鼻、口颊、阴道或肠胃外递送生物活性成分的药物或药物的一部分或作为诊断标志物的用途。

22、药物剂型，其包含大量的根据第18至20项中一项或多项所述的纳米颗粒，其中所述剂型包含丸剂、片剂、胶囊、喷雾剂、气雾剂、散剂、栓剂或注射液或分散液。

实施例

材料

表1：酰化的人乳铁蛋白肽的结构(hLFF氨基酸序列对应于SEQ.ID.No.1＝KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR)

材料	供应商
		C<sub>16</sub>-(单)酰基人乳铁蛋白衍生肽	EMC，Tübingen

单酰基

图1：酰化和双酰化的人乳铁蛋白肽的结构。

表2：用于沉淀测试的化合物

材料	供应商
		Hepes	Sigma-Aldrich Chemie GmbH(Taufkirchen,Germany)

表3：用于荧光素胺-和罗丹明-B-PLGA的化合物

表4：用于制备颗粒的化合物

表5：用于分析表征和生物测定的化合物

表6：用于制备颗粒的装置

表7：用于分析表征和生物测定的装置

方法：

肽

可以使用固相肽合成(EMC microcollections)将所有肽合成为C端酰胺。为了形成有效的二硫键，可将hLFF肽以2mM的浓度溶于pH 8的50mM的Hepes缓冲液中，并在37℃下氧化2小时(Wallbrecher等人，Cell Mol Life Sci.2014年7月；71(14):2717-29)。

实施例1：HLFF肽沉淀试验

hLFF肽经过一个冻融循环(在-18℃冷冻)测试沉淀，以浓度2mM将hLFF肽溶解在50mM Hepes pH 8缓冲液中。

荧光素胺-PLGA颗粒和罗丹明-B-乙二胺-PLGA颗粒的制备。

荧光素胺异构体I-PLGA(FA-PLGA)通过使用Horisawa等人(Pharm Res.2002年2月；19(2):132-9)和Weiss等人(J Nanosci Nanotechnol.2006年9月-10月；6(9-10)：3048-56)的方法偶联PLGA(

RG 503H，Evonik Industries，Darmstadt,Germany)和荧光素胺而制得。

荧光素胺异构体I(FA)从Aldrich Chemical Inc.(Milwaukee,Wisconsin,USA)获得。将PLGA(3.07g)和FA(0.0583g)完全溶于30mL乙腈中，其中含有0.0408g 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(WSC)，并在室温下温育2小时。将得到的结合荧光素胺的D,L-丙交酯/乙交酯共聚物(FA-PLGA；

RG 503H)先用蒸馏水洗涤，再用二氯甲烷洗涤，然后使用旋转蒸发仪(REN-1S,Iwaki,Osaka,Japan)干燥。

为了制备颗粒，将50mg的FA-PLGA溶解在1.5mL的乙酸乙酯中。通过在约6W下超声处理一分钟制备(主要(primary))w/o乳液。然后，将2.5mL的25mg/mL的PVA溶液(Mowiol 4-88,Kuraray Europe GmbH,Hattersheim am Main,Germany)添加到乳液中。将混合物再次在约15W下超声处理60秒，得到第二乳液。通过加入milli-Q使乳液的体积增加到20mL。随着体积增加，乳液滴中的乙酸乙酯超过了两种部分可溶的溶剂的非混溶性边界，并且FA-PLGA纳米颗粒从乳液中沉淀出来。

丽丝胺罗丹明-B-乙二胺购自Life Technologies(Darmstadt,Germany)，且使用Weiss等人的方法将其与PLGA(

RG 503H)(Evonik Industries，Darmstadt,Germany)共价偶联，所述方法对荧光素胺和PLGA的改变很小(J NanosciNanotechnol.2006Sep-Oct；6(9-10):3048-56)。

通过将50mg罗丹明B PLGA(RhB-PLGA)溶解在1.5mL乙酸乙酯中制备颗粒。然后加入2.5mL的25mg/mL PVA溶液，并将混合物在约16W下超声处理一分钟。通过加入milli-Q将所得乳液的体积增加至20mL。

用Lumogen F305 Red标记的PLGA和PLGA/EG-PLGA颗粒的制备

使用了PLGA(

Select 5050DLG mPEG 5000(15％),EvonikNutrition&Care GmbH,Darmstadt,Germany)以及PLGA与PEG-PLGA(

Select5050DLG mPEG 5000(15％)，Evonik Nutrition&Care GmbH，Darmstadt,Germany)的混合物。该混合物的比例(PLGA/PEG-PLGA)为90:10w/w。在每一配制物中，使用20mg。

使用Vortex混合器将聚合物溶解在含有Lumogen R305 Red(0.08mg mL^-1，2250μL)的乙酸乙酯溶液中。Lumogen F305 Red的浓度取决于聚合物的量，且以基于聚合物量1％的lumogen使用。此为有机溶液。由硝酸钙(6.25mM，55.85μL)和磷酸氢二钠(3.74mM，55.85μL)制备水溶液1，并在用Vortex混合器持续混合(1分钟，2-3级)的条件下添加。将该水溶液1和BSA溶液(20mg mL^-1，20μL)添加至有机溶液中。

然后在20,000min^-1下使用Ultra Turrax T25历时4分钟，同时冷却以产生第一油包水乳液(W/O)。

然后在恒定混合(涡旋混合器)下将该W/O乳液逐滴添加到1％PVA(9mL)中。添加后，将乳液在15 000min^-1下用Ultra Turrax T25进一步乳化4分钟，同时在冰浴中冷却。

然后在40℃和240mbar下蒸发W/O/W乳液的溶剂，在旋转蒸发仪中在130rpm下旋转15分钟，然后在通风橱中于350rpm的磁力搅拌器下于室温下旋转90分钟。之后，通过在4℃和13000x g下离心10分钟来洗涤纳米颗粒分散液。将所得丸剂重新悬浮于10mL无RNase的水中。

颗粒的hLFF包衣和冷冻干燥

将C₂-hLFF和C₁₆-hLFF肽(20mg mL^-1)在混合(Vortex混合器，1分钟，1-2级)下添加到1.0mL颗粒悬浮液中，并在加热恒温振荡器HTMR 133中在25℃和300rpm下温育120分钟。C₂-hLFF或C₁₆-hLFF的最终包衣相对于可生物再吸收的聚酯的量为10重量％或50重量％。为了去除过量的hLFF，将悬浮液在4℃和13000x g下离心10分钟。弃去上清液，将丸剂重新悬浮于2.5mL无RNase的水中。

为了冷冻干燥样品，将150μL的50％海藻糖溶液添加到3mL颗粒悬浮液中，快速混合并装入4mL玻璃小瓶中。将它们在液氮中速冻，然后使用Christ冷冻干燥机EPSILON 2-6DAC冻干。

粒度测量

为了分析粒度、粒度分布和Zeta电位，采用Smoluchowski近似使用ZetasizerNano ZS仪器(Malvern，激光：λ＝532nm)。粒度数据是指散射强度分布(z-平均)。

使用Zetasizer Nano ZS仪器(Malvern，激光：λ＝532nm)分析在用hLFF包衣之前和之后的粒度和粒度分布。

细胞摄取测定

用浓度为0.4mg mL^-1(基于聚合物含量)的肽包衣的罗丹明-PLGA颗粒将HeLa和Caco-2细胞在37℃下温育2小时，然后进行荧光显微镜检查。

用浓度为0.46mg mL^-1(基于聚合物含量)的肽包衣的Lumogen-PLGA和PLGA/PEG-PGLA纳米颗粒将A549细胞在37℃温育2小时，然后进行荧光显微镜检查。因此，将冻干的纳米颗粒重新悬浮于无酚红的无FBS MEM中，并添加丙酮酸、NEAA和庆大霉素。未处理且因此未染色的细胞用作阴性对照。

在用PBS洗涤后，拍摄显微照片，并用1mL EDTA/PBS分离细胞以进行流式细胞仪分析(样品体积200mL；流速100μL min-¹；最大事件计数：5×10⁴)，并收集在1.5mL微量离心管中。

显微照片显示，包含C₁₆-hLFF的罗丹明-PLGA纳米颗粒具有很高的细胞摄取率，同时与HeLa和CaCO-2细胞很少聚集。与未包衣的纳米颗粒和C₂-hLFF-纳米颗粒相比，结果更佳。

结果

肽沉淀试验

在几个冻融循环中测试了酰化和双酰化的人乳铁蛋白肽溶液的沉淀。结果表明，与所有其他测试的肽相比，只有乙酰基-hLFF和C₁₆-hLFF溶液不会沉淀。

实施例2

包衣颗粒的粒度分布及其Zeta电位的变化

表1A-F：

表8A、8B、8C：包含酰化(C2，C16)人乳铁蛋白肽的FA-PLGA颗粒(所有测量一式两份)。在包衣后1天、4天和8天进行测量。

表8D、8E、8F：包含酰化的(C2，C16)人乳铁蛋白肽的罗丹明-PLGA颗粒(所有测量一式两份)。在包衣后1天、4天和8天进行测量。

表8A、8D示出了以nm为单位的粒度Z-Ave值；

表8B、8E示出了粒度分布(多分散指数PDI)值。

表8C、8F示出了Zeta电位(ZP)值。

结果

对稳定粒度分布(目标<400nm)、低于0.3的PDI以及在所有情况下均稳定转变为正值的Zeta电位的评估表明，只有C₁₆-hLFF肽可产生适当的结果。PLGA颗粒的C16-hLFF包衣可产生均匀大小的小颗粒，这些颗粒随时间保持正的Zeta电位。

另外，C16-hLFF包衣的PLGA颗粒结合了高细胞摄取和很少聚集的优点，并且优于标准的乙酰化hLFF。

实施例3

表9：用乙酰化的hLFF或C₁₆-hLFF包衣的PLGA和PEG-PLGA纳米颗粒的Zeta电位(mv)；包衣纳米颗粒30分钟(A)或12小时(B)。

结果

此外，与PLGA和C₂-hLFF肽相比，在PEG-PLGA颗粒上测试C₁₆-hLFF包衣。令人惊讶的是，与C₂-hLFF相比，C₁₆-hLFF得到了改善的PEG-PLGA功能性。长期包衣仅提供稍高的Zeta电位。

实施例4：

表10：用Lumogen标记的经hLFF或C₁₆-hLFF包衣的PLGA和PLGA/PEG-PLGA纳米颗粒的粒度(Z-Ave)、粒度分布(PDI)和Zeta电位(ZP)。

实施例5

A549细胞中纳米颗粒摄取的流式细胞仪检测结果

门控未染色阴性对照的活细胞群，并将其设置为Lumogen F305 Red阴性细胞。为每个测量的样品建立直方图，x轴为相对荧光，y轴为活细胞数。

x轴的中值代表活细胞群的荧光强度，因此代表了纳米颗粒缔合和摄取的量。

由于细胞计数的差异，以每100个细胞计算相对荧光。

表2：流式细胞仪分析结果

如表中所示，用C16-hLFF包衣得到最高的相对荧光值，因此PLGA/PEG-PLGA和PLGA聚合物的纳米颗粒的摄取都是最佳。此外，通过将hLFF或C16-hLFF的量从10％增加到50％，可以改善摄取。

序列表

<110> 赢创运营有限公司

<120> 包含可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和酰化的人乳铁蛋白衍生肽的纳米颗粒

<130> 2015P00205WO

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 肽

<222> (1)..(22)

<400> 1

Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro

1 5 10 15

Val Ser Cys Ile Lys Arg

20

201500205 Ausland 30

Claims (23)

1.纳米颗粒，其包含核和在所述核上的酰化的人乳铁蛋白衍生肽，所述核包含可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，其中所述亲水性聚合物是可生物再吸收的聚酯的一部分或单独的聚合物，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽是具有SEQ ID No.1:KCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKR的氨基酸序列的肽或具有与所述SEQ.ID.No.1的序列相差不超过8个氨基酸位置的氨基酸序列的肽，并且其中所述人乳铁蛋白衍生肽的N端被C₁₆-单酰基酰化，

其中所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物为

i)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

ii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯，或

iii)具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯和亲水性聚合物，或

iv)不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯、亲水性聚合物和具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯，

其中所述不具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯是聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、乳酸-乙醇酸共聚物、乳酸-乙醇酸-己内酯三元共聚物、乳酸-己内酯共聚物、聚二噁烷酮或乳酸-三亚甲基碳酸酯共聚物或上述聚合物的任意共混物，

所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为1重量％至100重量％。

2.根据权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为5重量％至75重量％。

3.根据权利要求2所述的纳米颗粒，其中所述酰化的人乳铁蛋白衍生肽相对于所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物的量为25重量％至75重量％。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯与亲水性聚合物的重量比为60:40至99.9:0.1。

5.根据权利要求4所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯与亲水性聚合物的重量比为80:20至99.8:0.2。

6.根据权利要求4所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯与亲水性聚合物的重量比为95:5至99.5:0.5。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中平均粒度(Z-Ave)在50nm至900nm的范围内。

8.根据权利要求7所述的纳米颗粒，其中平均粒度(Z-Ave)在100nm至350nm的范围内。

9.根据权利要求7所述的纳米颗粒，其中平均粒度(Z-Ave)在200nm至300nm的范围内。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中粒度分布(PDI)在0.5或更小、或0.05至0.3、0.08至0.2或0.09至0.19的范围内。

11.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的Zeta电位为0mV至50mV。

12.根据权利要求11所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的Zeta电位为1mV至40mV。

13.根据权利要求11所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的Zeta电位为5mV至30mV。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中所述亲水性聚合物或所述亲水性聚合物部分是聚乙二醇。

15.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中具有亲水性聚合物部分的可生物再吸收的聚酯包含具有嵌段结构AB、BA或ABA的聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物，其中A是聚(乳酸-共-乙醇酸)，B是聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的0.1-25％。

16.根据权利要求15所述的纳米颗粒，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的10-20％。

17.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中所述可生物再吸收的聚酯和所述亲水性聚合物包含在聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物和聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物的混合物中，其中，在所述聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，在所述聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为60:40至40:60，其中A为聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)，B为聚(乙二醇)，其中聚(乙二醇)嵌段占所述嵌段共聚物重量的10-20％。

18.根据权利要求17所述的纳米颗粒，其中，在所述聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为55:45至45:55。

19.根据权利要求17所述的纳米颗粒，其中，在所述聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)AB嵌段共聚物中，以摩尔份计，D,L-丙交酯与乙交酯的比例为55:45至45:55。

20.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中包含一种或多种生物活性成分。

21.根据权利要求1至3中任一项所述的纳米颗粒，其中包含一种或多种诊断标志物。

22.根据权利要求20或21所述的纳米颗粒在制备用于经口服、肺、鼻、口颊、阴道或肠胃外递送生物活性成分的药物或药物的一部分或诊断标志物中的用途。

23.药物剂型，其包含根据权利要求20或21所述的纳米颗粒，其中所述剂型包含丸剂、片剂、胶囊、喷雾剂、气雾剂、散剂、栓剂或注射液或分散液。