CN112451683B - Timp-1在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了TIMP‑1在制备治疗创伤性脑损伤血脑屏障功能失调药物中的应用，药物的形式可以是粉针、水剂、脂质体、纳米材料。TIMP‑1蛋白能提高脑外伤小鼠转棒实验潜伏期；提高脑外伤小鼠在平衡木上的运动平衡能力；减少脑组织伊文思蓝通透性。在脑微血管内皮细胞HBMEC中，TIMP‑1可参与维持细胞间紧密连接完整性，上调紧密连接复合体表达、减少荧光素酶渗漏、增加细胞间电阻。本发明还提供了TIMP‑1蛋白作为CD63‑Integrinβ1配体在制备血脑屏障失调所致中枢神经系统疾病治疗药物中的应用，TIMP‑1发挥作用需要通过与细胞膜复合体CD63‑Integrinβ1结合，调控细胞骨架重要分子F‑actin组装进而维持细胞间紧密连接完整性。TIMP‑1蛋白在治疗创伤性脑损伤血脑屏障功能失调具有良好的应用前景。

Description

TIMP-1在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及基质金属蛋白酶内源性抑制剂-1(Tissueinhibitor metalloproteinases-1,TIMP-1)在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
背景技术
创伤性脑损伤(Traumaitc brain injury,TBI)，是由于各种外伤导致脑组织严重损害的疾病，是神经外科领域常见的急症之一，目前已成为全世界青壮年人群致残和死亡的第一位原因。目前临床上的主要治疗策略是手术清创、去血肿、以及甘露醇降低颅内压，但FDA对该疾病尚无批准药物。脑外伤的治疗难点并不是由于它对机体造成的首次损伤，而是首次损伤后血脑屏障功能失调，外周血中大量炎症因子和免疫细胞进入脑组织、启动免疫应答，造成中枢神经系统二次损伤，继而引发一系列临床症状，如运动障碍、认知障碍、癫痫等，给家庭和社会带来沉重的经济和精神负担。因此，改善血脑屏障功能异常、维持其完整性是TBI治疗的重要策略。
血脑屏障(blood brain barrier,BBB)是存在于大脑血液循环与神经组织之间的特殊屏障，其主要功能是维持脑组织稳态，调节脑内物质交换平衡，保护脑组织免受侵害[3]。血脑屏障是由无窗孔的脑微血管内皮细胞、基膜、周细胞及星形胶质细胞足突共同组成的一个细胞复合体[7]，其中脑微血管内皮细胞作为血脑屏障的主要组成部分，是构成血脑屏障的第一道屏障，细胞间紧密连接(tight junction，TJ)，形成脑微血管内皮细胞高电阻和细胞旁途径低渗透，保证血脑屏障结构的完整性。TJ蛋白由胞浆黏附蛋白(zonulaoccludens protein,ZO)，跨膜蛋白Occludin、Claudin，和粘附连接蛋白等组成。目前发现，在多种TBI模型中，TJ相关蛋白的表达发生改变，从而破坏血脑屏障的完整性。无论是在液压冲击还是控制型皮质撞击损伤模型，均观察到Claudin-5、ZO-1表达明显下调。而TBI发生后，多种继发性的病理因素也会进一步影响血脑屏障关键组分的表达和定位：(1)在缺氧条件下，小鼠脑微血管内皮细胞bEND.3Claudin-5表达下调，跨膜细胞电阻下降，细胞旁通透性增加。(2)TBI通常伴有炎症反应，其中炎性因子IL-1β可下调细胞连接处Occludin和ZO-1表达，不仅能促进中性粒细胞浸润，还可引起紧密连接分子Occludin、ZO-1、Claudin-5、VE-cadherin的细胞定位改变和表达量减少。
基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1(Tissue inhibitor metalloproteinases–1,TIMP–1)是TIMP家族的成员，是一种分泌蛋白，可抑制基质金属蛋白酶(MMPs)，氨基酸序列如图1所示。以往对TIMP-1分子功能的研究主要集中于肿瘤领域，研究发现该基因在多种肿瘤中表达上调，可作为肿瘤预后不良标志物。过表达TIMP-1分子会增加肿瘤细胞的成瘤性，促进肿瘤内部的血管生成。近期对TIMP-1分子的生理功能研究报道提出，在正常生理条件下，TIMP-1可上调VEGF表达，促进血管生成和重塑；而TIMP-1敲除鼠血管通透性明显增加。以上研究提示，TIMP-1可能通过调控血管生成进而参与维持血脑屏障的完整性，可能是调控血脑屏障功能的重要分子。
基于前期研究报道，本发明主要目的是探索TIMP-1能否作为分泌蛋白通过调控血管完整性进而保护中枢神经系统疾病造成的血脑屏障功能失调。本发明发现，TIMP-1蛋白能提高脑外伤小鼠转棒实验潜伏期；提高脑外伤小鼠在平衡木上的运动平衡能力；减少脑组织伊文思蓝通透性。在离体脑外伤模型中，TIMP-1蛋白可通过与细胞膜复合体CD63-Integrinβ1结合，逆转细胞间连接复合体表达下调、细胞旁通透性增加、细胞间电阻降低等体外血脑屏障受损相关表型，参与维持细胞间紧密连接完整性。在治疗脑外伤急性期血脑屏障损伤治疗具有应用前景。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供基质金属蛋白酶内源性抑制剂-1在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供了基质金属蛋白酶内源性抑制剂-1在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
其中，所述的基质金属蛋白酶内源性抑制剂-1的氨基酸序列为：
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(2)序列表中SEQ ID NO.2-SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加
1-13个氨基酸形成的基本上保持相同生物学功能的氨基酸序列。
本发明技术方案的第二方面是提供了一种编码基质金属蛋白酶内源性抑制剂-1的核酸分子在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
所述的核酸分子的序列为：序列表中SEQ ID NO.16-SEQ ID NO.30所述的核苷酸序列或SEQ ID NO.16-SEQ ID NO.30所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
本发明技术方案的第三方面是提供了一种含有第二方面所述核酸分子的表达载体在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
本发明技术方案的第四方面是提供了一种含有第二方面所述核酸分子或第三方面所述表达载体的宿主细胞在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用。
所述的宿主细胞选自细菌，酵母，曲霉菌，植物细胞，或昆虫细胞。
上述第一方面到第四方面所述的创伤性脑损伤包括创伤性脑损伤所致的血脑屏障功能失调，以及与血脑屏障功能失调相关的中枢神经系统疾病。
有益技术效果：
经动物实验证实，本发明所述TIMP-1蛋白能提高脑外伤小鼠转棒实验潜伏期；提高脑外伤小鼠在平衡木上的运动平衡能力；减少脑组织伊文思蓝通透性。
经细胞实验证实，本发明所述TIMP-1分子可参与维持细胞间紧密连接完整性。细胞内TIMP-1缺失可导致细胞紧密连接复合体表达下调、细胞间缝隙连接变大、粘附相关蛋白VE-cadherin由膜定位变为胞浆定位、荧光素酶渗漏增多、细胞间电阻降低。
经细胞实验证实，本发明所述TIMP-1蛋白能减轻脑外伤离体模型中细胞间连接受损情况。具体表现为上调紧密连接复合体表达、减少荧光素酶渗漏、逆转细胞间电阻降低。
本发明提供了上述TIMP-1蛋白作为CD63-Integrinβ1配体在制备血脑屏障失调所致中枢神经系统疾病治疗药物中的应用。经细胞实验证实，本发明所述TIMP-1蛋白作为分泌蛋白，需要通过与细胞膜复合体CD63-Integrinβ1结合，调控细胞骨架重要分子F-actin组装进而维持细胞间紧密连接完整性。
附图说明
图1不同剂量TIMP-1对脑外伤小鼠转棒实验潜伏期的影响
图2不同剂量TIMP-1对脑外伤小鼠平衡木评分的影响
图3不同剂量TIMP-1对脑外伤小鼠平衡木上行走错误步数的影响
图4不同剂量TIMP-1对脑外伤小鼠血脑屏障通透性的影响
图5 HBMEC细胞敲减TIMP-1后细胞紧密连接蛋白复合体表达量变化
图6 HBMEC细胞敲减TIMP-1后粘附相关蛋白VE-Cadherin定位变化
图7 HBMEC细胞敲减TIMP-1后细胞间连接受损(A)HBMEC细胞敲减TIMP-1后荧光素酶渗透增多；(B)HBMEC细胞敲减TIMP-1后细胞间电阻降低。
图8 TIMP-1对离体脑外伤模型血脑屏障损伤的保护作用(A)外源加入TIMP-1可恢复细胞紧密连接蛋白复合体表达受损；(B)外源加入TIMP-1可减少荧光素酶渗漏；(C)外源加入TIMP-1可逆转细胞间电阻降低。
图9 TIMP-1与CD63-Integrinβ1相互作用实验验证(A)TIMP-1抗体与HBMEC细胞裂解物进行免疫沉淀，用TIMP-1、CD63和Integrinβ1抗体进行Western blots检测结果；(B)Integrinβ1抗体与HBMEC细胞裂解物进行免疫沉淀，用TIMP-1和Integrinβ1抗体进行Western blots检测结果；(C)CD63抗体与HBMEC细胞裂解物进行免疫沉淀，用TIMP-1和CD63抗体进行Western blots检测结果。
图10 TIMP-1通过膜复合物CD63-Integrinβ1调控细胞紧密连接蛋白复合体的表达和细胞旁通透性(A)敲减CD63或者Integrinβ1后，TIMP-1不能调控细胞紧密连接蛋白复合体表达；
(B)敲减CD63或者Integrinβ1后，TIMP-1不能逆转细胞荧光素酶渗漏增多表型；(C)敲减CD63或者Integrinβ1后，TIMP-1不能逆转细胞间电阻降低表型；
图11 TIMP-1通过复合物CD63-Integrinβ1调控细胞粘附相关蛋白VE-Cadherin定位
图12 TIMP-1通过复合物CD63-Integrinβ1调控细胞骨架F-actin组装
具体实施方式
实施例1.TIMP-1对脑外伤小鼠的保护作用
1.实验动物
SPF级雄性C57BL/6J小鼠22-25g，雄性，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。
2.脑外伤模型制作
小鼠异氟烷麻醉后，在右侧冠状缝后0.8mm、中线旁1.3mm处切开头皮，钻一直径3mm骨孔。采用改进的Feeney自由落体损伤装置，用20g重的击锤从25cm处自由坠落冲击撞杆，打击深度3mm，缝合头皮。假手术组小鼠切开头皮钻孔后缝合头皮，不作击锤打击。
3.动物分组和给药：
小鼠分为假手术组、模型组、TIMP-1低剂量组(30μg/kg)、TIMP-1中剂量组(90μg/kg)、TIMP-1高剂量组(270μg/kg)，每组13-16只。术后2小时尾静脉注射重组TIMP-1，连续给药三天。
4.行为学研究
转棒实验：小鼠放置于直径3.5cm转棒仪上，转轮的初速度调到4rpm/min，将小鼠放到转轮上后，180s内均匀加速至40rpm/min，记录3次掉下来的潜伏期，180s为分界值，超过180s按180s记录，重复3次。
平衡木实验：将小鼠置于宽6mm、长1m的木质平衡木上，平衡木悬高30cm。(1)7分制平衡木评分评价小鼠在平衡木上的平衡能力，其中7分为小鼠通过平衡木过程中左后肢少于两次滑落；6分为左后肢滑落次数少于50％；5分为左后肢滑落次数多于50％但少于100％；4分为左后肢全部滑落；3分为左后肢完全不在平衡木上；2分为小鼠能在平衡木上平衡，但不能通过平衡木；1分为小鼠无法在平衡木上平衡。(2)让小鼠在平衡木上行走50步，记录50步内小鼠左后肢从平衡木上的滑落次数。
5.血脑屏障通透性测定
小鼠尾静脉注射4％伊文思蓝溶液3ml/kg。2h后麻醉，心脏灌注生理盐水，断头取脑，冰上快速分离大脑半球，称重后置于1ml甲酰胺溶液中，45℃恒温培养箱孵育48h，用酶标仪(波长632nm)测定吸光度值。根据线性回归方程计算出溶液中伊文思蓝的浓度。
6.数据统计分析
数据均以均数±标准误(mean±SEM)表示，统计分析采用单因素方差分析或双因素方差分析，“#”表示与对照组相比，其中##P<0.01；“*”表示与对照组相比，其中**P<0.01，*P<0.05。
7.结果
发明人通过转棒实验来检测小鼠的运动能力。脑外伤模型组小鼠在转棒上的运动时间明显减少。连续三天给药，高剂量TIMP-1(270μg/kg)每天均可显著提高小鼠在转棒上的运动能力；中剂量TIMP-1(90μg/kg)在第二天和第三天可明显提高小鼠在转棒上的运动能力；低剂量TIMP-1(30μg/kg)无明显作用(图1)。以上结果说明，TIMP-1可显著提高脑外伤小鼠的运动能力。
发明人通过平衡木实验来检测小鼠的平衡能力，具体检测指标为平衡木评分和记录小鼠左后肢滑落次数。(1)平衡木评分：脑外伤模型组小鼠平衡木实验评分明显降低。连续三天给药，高剂量TIMP-1(270μg/kg)第二天和第三天可显著提高小鼠平衡木实验评分；中剂量TIMP-1(90μg/kg)在第三天可明显提高小鼠平衡木实验评分；低剂量TIMP-1(30μg/kg)无明显作用(图2)。(2)左后肢滑落次数：脑外伤模型组小鼠左后肢滑落次数明显增加。连续三天给药，高剂量TIMP-1(270μg/kg)第三天可明显减少小鼠左后肢滑落次数；中剂量TIMP-1(90μg/kg)和低剂量TIMP-1(30μg/kg)无明显作用(图3)。以上结果说明，TIMP-1可显著提高脑外伤小鼠的平衡能力。
发明人通过伊文思兰实验来检测小鼠血脑屏障通透性。脑外伤模型组小鼠伊文思兰含量明显增加。连续三天给药，TIMP-1可剂量依赖性减少小鼠伤侧脑组织伊文思兰含量，其中高剂量组(270μg/kg)和中剂量组(90μg/kg)有显著性差异(图4)。以上结果说明，TIMP-1可显著改善脑外伤小鼠血脑屏障受损。
实施例2.TIMP-1缺失可导致脑微血管内皮细胞HBMEC细胞间紧密连接受损，血脑屏障完整性破坏
1.细胞渗透性实验
将HBMEC细胞(对照组、敲除TIMP-1组)接种于鼠尾胶原I包被的0.4μm Transwell小室中，将小室置于24孔板中，给药处理后，加入分子量40Kd的FITC-Dextran至上室，终浓度为1mg/ml。2h后收集小室下面孔中的培养基，荧光酶标仪检测FITC-Dextran渗漏量。
2.跨膜细胞电阻值(TEER)的测定
将HBMEC接种于鼠尾胶原I包被的0.4μm Transwell小室中，将小室置于12孔板，给药处理后，将Millicell-ERS的电极长端插入Transwell下室，短端插入Transwell上室，读数。3次测量值的均值作为实际TEER，不接种细胞的小室为空白对照，所得电阻值为空白TEER，细胞单层TEER＝(实测TEER－空白TEER)×Transwell有效膜面积，单位用Ω·cm2表示。
3.胞膜蛋白提取
离体细胞实验采用生物素标记、NeutrAvidin珠子富集提取法提取胞膜蛋白。
细胞用DPBS洗三次，加入0.2mg/ml Sulfo-NHS-SS-Biotin，4℃避光30min，加入中和液(7.5g甘氨酸/1000mlTBS)，以中和残留的未与胞膜结合的biotin，4℃避光10min。收集细胞，加入1ml NP-40裂解液，冰上30min。13000rpm离心取上清，加入20μl NeutrAvidin珠子，4℃过夜。第二天4℃5000rpm离心1min，弃上清。加入1ml裂解液，4℃5000rpm离心1min，弃上清，重复五次。加入20μl 2Xloading buffer，99℃10min。5000rpm离心1min，收集上清即为膜蛋白。
4.免疫荧光染色及激光共聚焦分析
细胞爬片用4％多聚甲醛室温固定15min，使用5％BSA封闭，同时用0.02％TritonX-100打孔，室温30min。一抗用封闭液稀释，4℃过夜。用PBS洗去一抗，每次1ml，洗3次，每次震摇5min。用PBS稀释荧光素标记的二抗，避光条件下与细胞爬片室温孵育1h。用PBS洗去二抗，每次1ml，洗3次，每次震摇5min，超纯水洗两次，用甘油封片。
5.数据统计分析
数据均以均数±标准误(mean±SEM)表示，统计分析采用单因素方差分析，“*”表示与对照组相比，其中*P<0.05，**P<0.01。
6.结果
HBMEC细胞敲减TIMP-1后，紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5表达下调，VE-Cadherin表达无明显变化，但胞膜上VE-Cadherin表达下调(图5)。免疫荧光结果表明，TIMP-1下调导致VE-Cadherin由膜定位转变为胞浆定位(图6)，且可看到细胞间有明显缝隙(白色箭头所示)。利用transwell小室检测细胞间缝隙连接完整性，结果表面TIMP-1缺失使得细胞间荧光素酶渗漏增多(图7A)，细胞间电阻变低(图7B)，表明细胞间紧密连接受损，细胞旁通透性增加。
实施例3.TIMP-1对离体脑外伤模型血脑屏障损伤的保护作用
1.离体脑外伤模型
利用缺氧小室建立脑外伤体外模型：HBMEC细胞培养基中加入IL-1β至终浓度20ng/ml，将各组细胞培养皿放入stemcell缺氧小室，小室最下层放置装有10ml无菌水的大培养皿，缺氧小室连续10min通入95％氮气、5％CO2混合气体以确保细胞完全置于缺氧环境中，之后将小室放置于37℃孵箱培养24h。
2.数据统计分析
数据均以均数±标准误(mean±SEM)表示，统计分析采用单因素方差分析，“#”表示与对照组相比，其中##P<0.01；“*”表示与对照组相比，其中*P<0.05，**P<0.01。
3.结果
HBMEC细胞在IL-1β+缺氧条件下，连接复合体表达下调，荧光素渗漏增多，细胞间电阻降低，外源加入重组TIMP-1可浓度依赖性逆转损伤(图8)。表明TIMP-1对离体脑外伤模型血脑屏障损伤具有保护作用。
实施例4.TIMP-1通过与细胞膜复合体CD63-Integrinβ1结合，调控细胞骨架重要分子F-actin组装进而维持细胞间紧密连接完整性。
1.免疫共沉淀
HBMEC细胞用细胞刮刀刮下，用预冷的PBS洗一遍后，加入裂解液(50mMTris-HCl,150mMNaCl,1％NP-40,pH 7.5)，冰上裂解30min，于4℃13,000rpm离心20min，取上清测定蛋白浓度，每个实验组所用蛋白总量控制在0.8-1mg。每组加入3μg抗体，4℃旋转孵育过夜。第二天，加入30μl Protein G，4℃旋转孵育4h。用细胞裂解液洗柱料，每次1ml，共6次，洗去未结合的蛋白，加入2×上样缓冲液，99℃加热7min，离心取上清，进行Western blot分析。
2.数据统计分析
数据均以均数±标准误(mean±SEM)表示，统计分析采用单因素方差分析，“#”表示与对照组相比，其中##P<0.01；“*”表示与对照组相比，其中**P<0.01；ns表示与模型组比无统计学差异。
3.结果
TIMP-1可与HBMEC细胞膜复合物CD63-Integrinβ1结合
用TIMP-1抗体在HBMEC细胞中进行免疫沉淀，TIMP-1亲和洗脱组分中可检测到Integrinβ1和CD63；用Integrinβ1或CD63抗体进行免疫沉淀，再亲和洗脱组分中均能检测到TIMP-1。表明TIMP-1可与HBMEC细胞膜复合物CD63-Integrinβ1结合，三者间存在相互作用(图9)。TIMP-1通过胞膜复合物CD63-Integrinβ1调控细胞紧密连接复合体的表达和细胞旁通透性
在明确TIMP-1可与膜复合物CD63-Integrinβ1结合后，进一步探讨TIMP-1是否通过结合该膜复合物进而调控紧密连接蛋白表达和定位。结果发现，敲减CD63或者Integrinβ1后，外源加入TIMP-1不能逆转缺氧+IL-1β对细胞造成的损伤，包括紧密连接蛋白表达下调、VE-Cadherin定位改变、荧光素酶渗透增多、细胞间电阻下降(图10、图11)，表明TIMP-1作为分泌蛋白，需要通过与细胞膜复合体CD63-Integrinβ1结合，从而发挥对血脑屏障的保护作用。因此，TIMP-1蛋白可作为CD63-Integrinβ1配体用于制备血脑屏障失调所致中枢神经系统疾病的治疗药物。
TIMP-1通过胞膜复合物CD63-Integrinβ1调控细胞骨架重要分子F-actin组装进而维持细胞间紧密连接完整性。
HBMEC细胞在正常培养条件下F-actin主要分布在细胞边缘，在缺氧+IL-1β条件下，细胞在应激条件下actin多聚化组装成为F-actin，在细胞内部或者细胞边缘的某一个方向形成应力纤维，引起细胞收缩迁移，最终会导致细胞间连接减弱，增加BBB渗透性。外源加入TIMP-1可以减轻actin多聚化程度，而在敲减CD63或者Integrinβ1后，TIMP-1对F-actin的调控作用消失(图12)。
上述实施例只为说明本发明的技术构思特点，其目的在于让熟悉此领域的人士能够了解本发明的内容并据此实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 中国医学科学院药物研究所
<120> TIMP-1在制备预防或治疗创伤性脑损伤药物中的应用
<160> 30
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 184
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1(Homo sapiens)
<400> 1
Cys Thr Cys Val Pro Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp
1 5 10 15
Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr
20 25 30
Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly
35 40 45
Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro
50 55 60
Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser
65 70 75 80
Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile
85 90 95
Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln
100 105 110
Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr
115 120 125
Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His
130 135 140
Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln
145 150 155 160
Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp
165 170 175
Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
180
<210> 2
<211> 184
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 突变体(Homo sapiens)
<400> 2
Cys Thr Cys Val Pro Pro Ala Pro Ala Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp
1 5 10 15
Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr
20 25 30
Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly
35 40 45
Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro
50 55 60
Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser
65 70 75 80
Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile
85 90 95
Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln
100 105 110
Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr
115 120 125
Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His
130 135 140
Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln
145 150 155 160
Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp
165 170 175
Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
180
<210> 3
<211> 183
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体1(Homo sapiens)
<400> 3
Thr Cys Val Pro Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu
1 5 10 15
Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr
20 25 30
Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe
35 40 45
Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala
50 55 60
Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu
65 70 75 80
Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr
85 90 95
Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg
100 105 110
Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val
115 120 125
Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys
130 135 140
Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser
145 150 155 160
Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln
165 170 175
Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
180
<210> 4
<211> 182
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体2(Homo sapiens)
<400> 4
Cys Val Pro Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val
1 5 10 15
Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu
20 25 30
Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln
35 40 45
Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met
50 55 60
Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu
65 70 75 80
Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr
85 90 95
Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg
100 105 110
Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe
115 120 125
Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu
130 135 140
Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg
145 150 155 160
His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser
165 170 175
Leu Arg Ser Gln Ile Ala
180
<210> 5
<211> 181
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体3(Homo sapiens)
<400> 5
Val Pro Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile
1 5 10 15
Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr
20 25 30
Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala
35 40 45
Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu
50 55 60
Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe
65 70 75 80
Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys
85 90 95
Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly
100 105 110
Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro
115 120 125
Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp
130 135 140
Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His
145 150 155 160
Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu
165 170 175
Arg Ser Gln Ile Ala
180
<210> 10
<211> 180
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体4(Homo sapiens)
<400> 10
Pro Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg
1 5 10 15
Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln
20 25 30
Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu
35 40 45
Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser
50 55 60
Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu
65 70 75 80
Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser
85 90 95
Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe
100 105 110
Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys
115 120 125
Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr
130 135 140
Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu
145 150 155 160
Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg
165 170 175
Ser Gln Ile Ala
180
<210> 10
<211> 179
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体5(Homo sapiens)
<400> 10
Pro His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala
1 5 10 15
Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg
20 25 30
Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly
35 40 45
Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val
50 55 60
Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile
65 70 75 80
Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe
85 90 95
Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr
100 105 110
Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu
115 120 125
Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp
130 135 140
Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala
145 150 155 160
Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser
165 170 175
Gln Ile Ala
<210> 10
<211> 178
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体6(Homo sapiens)
<400> 10
His Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys
1 5 10 15
Phe Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr
20 25 30
Glu Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp
35 40 45
Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys
50 55 60
Gly Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala
65 70 75 80
Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val
85 90 95
Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys
100 105 110
Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser
115 120 125
Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln
130 135 140
Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys
145 150 155 160
Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln
165 170 175
Ile Ala
<210> 10
<211> 177
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体7(Homo sapiens)
<400> 10
Pro Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe
1 5 10 15
Val Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu
20 25 30
Ile Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala
35 40 45
Ala Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly
50 55 60
Tyr Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly
65 70 75 80
Lys Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala
85 90 95
Pro Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr
100 105 110
Tyr Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile
115 120 125
Pro Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu
130 135 140
Leu Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu
145 150 155 160
Pro Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile
165 170 175
Ala
<210> 10
<211> 176
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体8(Homo sapiens)
<400> 10
Gln Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val
1 5 10 15
Gly Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile
20 25 30
Lys Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala
35 40 45
Asp Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr
50 55 60
Phe His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys
65 70 75 80
Leu Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro
85 90 95
Trp Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr
100 105 110
Thr Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro
115 120 125
Cys Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu
130 135 140
Gln Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro
145 150 155 160
Arg Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170 175
<210> 11
<211> 175
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体9(Homo sapiens)
<400> 11
Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly
1 5 10 15
Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys
20 25 30
Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp
35 40 45
Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe
50 55 60
His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu
65 70 75 80
Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp
85 90 95
Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr
100 105 110
Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys
115 120 125
Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln
130 135 140
Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170 175
<210> 12
<211> 174
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体10(Homo sapiens)
<400> 12
Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr
1 5 10 15
Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met
20 25 30
Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile
35 40 45
Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His
50 55 60
Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln
65 70 75 80
Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn
85 90 95
Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val
100 105 110
Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys
115 120 125
Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu
145 150 155 160
Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170
<210> 13
<211> 173
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体11(Homo sapiens)
<400> 13
Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro
1 5 10 15
Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr
20 25 30
Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg
35 40 45
Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg
50 55 60
Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp
65 70 75 80
Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser
85 90 95
Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly
100 105 110
Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu
115 120 125
Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser
130 135 140
Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro
145 150 155 160
Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170
<210> 14
<211> 172
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体12(Homo sapiens)
<400> 14
Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu
1 5 10 15
Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys
20 25 30
Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe
35 40 45
Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser
50 55 60
His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly
65 70 75 80
Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu
85 90 95
Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys
100 105 110
Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln
115 120 125
Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu
130 135 140
Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly
145 150 155 160
Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170
<210> 15
<211> 171
<212> PRT
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体13(Homo sapiens)
<400> 15
Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly Thr Pro Glu Val
1 5 10 15
Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys Met Thr Lys Met
20 25 30
Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp Ile Arg Phe Val
35 40 45
Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe His Arg Ser His
50 55 60
Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu Gln Asp Gly Leu
65 70 75 80
Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp Asn Ser Leu Ser
85 90 95
Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr Val Gly Cys Glu
100 105 110
Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys Lys Leu Gln Ser
115 120 125
Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln Gly Ser Glu Lys
130 135 140
Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg Glu Pro Gly Leu
145 150 155 160
Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
165 170
<210> 16
<211> 555
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1(Homo sapiens)
<400> 16
tgcacctgtg tcccacccca cccacagacg gccttctgca attccgacct cgtcatcagg 60
gccaagttcg tggggacacc agaagtcaac cagaccacct tataccagcg ttatgagatc 120
aagatgacca agatgtataa agggttccaa gccttagggg atgccgctga catccggttc 180
gtctacaccc ccgccatgga gagtgtctgc ggatacttcc acaggtccca caaccgcagc 240
gaggagtttc tcattgctgg aaaactgcag gatggactct tgcacatcac tacctgcagt 300
tttgtggctc cctggaacag cctgagctta gctcagcgcc ggggcttcac caagacctac 360
actgttggct gtgaggaatg cacagtgttt ccctgtttat ccatcccctg caaactgcag 420
agtggcactc attgcttgtg gacggaccag ctcctccaag gctctgaaaa gggcttccag 480
tcccgtcacc ttgcctgcct gcctcgggag ccagggctgt gcacctggca gtccctgcgg 540
tcccagatag cctga 555
<210> 17
<211> 554
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 突变体(Homo sapiens)
<400> 17
tgcacctgtg tcccaccgct ccagctacgg ccttctgcaa ttccgacctc gtcatcaggg 60
ccaagttcgt ggggacacca gaagtcaacc agaccacctt ataccagcgt tatgagatca 120
agatgaccaa gatgtataaa gggttccaag ccttagggga tgccgctgac atccggttcg 180
tctacacccc cgccatggag agtgtctgcg gatacttcca caggtcccac aaccgcagcg 240
aggagtttct cattgctgga aaactgcagg atggactctt gcacatcact acctgcagtt 300
ttgtggctcc ctggaacagc ctgagcttag ctcagcgccg gggcttcacc aagacctaca 360
ctgttggctg tgaggaatgc acagtgtttc cctgtttatc catcccctgc aaactgcaga 420
gtggcactca ttgcttgtgg acggaccagc tcctccaagg ctctgaaaag ggcttccagt 480
cccgtcacct tgcctgcctg cctcgggagc cagggctgtg cacctggcag tccctgcggt 540
cccagatagc ctga 554
<210> 18
<211> 552
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体1(Homo sapiens)
<400> 18
acctgtgtcc caccccaccc acagacggcc ttctgcaatt ccgacctcgt catcagggcc 60
aagttcgtgg ggacaccaga agtcaaccag accaccttat accagcgtta tgagatcaag 120
atgaccaaga tgtataaagg gttccaagcc ttaggggatg ccgctgacat ccggttcgtc 180
tacacccccg ccatggagag tgtctgcgga tacttccaca ggtcccacaa ccgcagcgag 240
gagtttctca ttgctggaaa actgcaggat ggactcttgc acatcactac ctgcagtttt 300
gtggctccct ggaacagcct gagcttagct cagcgccggg gcttcaccaa gacctacact 360
gttggctgtg aggaatgcac agtgtttccc tgtttatcca tcccctgcaa actgcagagt 420
ggcactcatt gcttgtggac ggaccagctc ctccaaggct ctgaaaaggg cttccagtcc 480
cgtcaccttg cctgcctgcc tcgggagcca gggctgtgca cctggcagtc cctgcggtcc 540
cagatagcct ga 552
<210> 19
<211> 549
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体2(Homo sapiens)
<400> 19
tgtgtcccac cccacccaca gacggccttc tgcaattccg acctcgtcat cagggccaag 60
ttcgtgggga caccagaagt caaccagacc accttatacc agcgttatga gatcaagatg 120
accaagatgt ataaagggtt ccaagcctta ggggatgccg ctgacatccg gttcgtctac 180
acccccgcca tggagagtgt ctgcggatac ttccacaggt cccacaaccg cagcgaggag 240
tttctcattg ctggaaaact gcaggatgga ctcttgcaca tcactacctg cagttttgtg 300
gctccctgga acagcctgag cttagctcag cgccggggct tcaccaagac ctacactgtt 360
ggctgtgagg aatgcacagt gtttccctgt ttatccatcc cctgcaaact gcagagtggc 420
actcattgct tgtggacgga ccagctcctc caaggctctg aaaagggctt ccagtcccgt 480
caccttgcct gcctgcctcg ggagccaggg ctgtgcacct ggcagtccct gcggtcccag 540
atagcctga 549
<210> 20
<211> 546
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体3(Homo sapiens)
<400> 20
gtcccacccc acccacagac ggccttctgc aattccgacc tcgtcatcag ggccaagttc 60
gtggggacac cagaagtcaa ccagaccacc ttataccagc gttatgagat caagatgacc 120
aagatgtata aagggttcca agccttaggg gatgccgctg acatccggtt cgtctacacc 180
cccgccatgg agagtgtctg cggatacttc cacaggtccc acaaccgcag cgaggagttt 240
ctcattgctg gaaaactgca ggatggactc ttgcacatca ctacctgcag ttttgtggct 300
ccctggaaca gcctgagctt agctcagcgc cggggcttca ccaagaccta cactgttggc 360
tgtgaggaat gcacagtgtt tccctgttta tccatcccct gcaaactgca gagtggcact 420
cattgcttgt ggacggacca gctcctccaa ggctctgaaa agggcttcca gtcccgtcac 480
cttgcctgcc tgcctcggga gccagggctg tgcacctggc agtccctgcg gtcccagata 540
gcctga 546
<210> 21
<211> 543
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体4(Homo sapiens)
<400> 21
ccaccccacc cacagacggc cttctgcaat tccgacctcg tcatcagggc caagttcgtg 60
gggacaccag aagtcaacca gaccacctta taccagcgtt atgagatcaa gatgaccaag 120
atgtataaag ggttccaagc cttaggggat gccgctgaca tccggttcgt ctacaccccc 180
gccatggaga gtgtctgcgg atacttccac aggtcccaca accgcagcga ggagtttctc 240
attgctggaa aactgcagga tggactcttg cacatcacta cctgcagttt tgtggctccc 300
tggaacagcc tgagcttagc tcagcgccgg ggcttcacca agacctacac tgttggctgt 360
gaggaatgca cagtgtttcc ctgtttatcc atcccctgca aactgcagag tggcactcat 420
tgcttgtgga cggaccagct cctccaaggc tctgaaaagg gcttccagtc ccgtcacctt 480
gcctgcctgc ctcgggagcc agggctgtgc acctggcagt ccctgcggtc ccagatagcc 540
tga 543
<210> 22
<211> 540
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体5(Homo sapiens)
<400> 22
ccccacccac agacggcctt ctgcaattcc gacctcgtca tcagggccaa gttcgtgggg 60
acaccagaag tcaaccagac caccttatac cagcgttatg agatcaagat gaccaagatg 120
tataaagggt tccaagcctt aggggatgcc gctgacatcc ggttcgtcta cacccccgcc 180
atggagagtg tctgcggata cttccacagg tcccacaacc gcagcgagga gtttctcatt 240
gctggaaaac tgcaggatgg actcttgcac atcactacct gcagttttgt ggctccctgg 300
aacagcctga gcttagctca gcgccggggc ttcaccaaga cctacactgt tggctgtgag 360
gaatgcacag tgtttccctg tttatccatc ccctgcaaac tgcagagtgg cactcattgc 420
ttgtggacgg accagctcct ccaaggctct gaaaagggct tccagtcccg tcaccttgcc 480
tgcctgcctc gggagccagg gctgtgcacc tggcagtccc tgcggtccca gatagcctga 540
<210> 23
<211> 537
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体6(Homo sapiens)
<400> 23
cacccacaga cggccttctg caattccgac ctcgtcatca gggccaagtt cgtggggaca 60
ccagaagtca accagaccac cttataccag cgttatgaga tcaagatgac caagatgtat 120
aaagggttcc aagccttagg ggatgccgct gacatccggt tcgtctacac ccccgccatg 180
gagagtgtct gcggatactt ccacaggtcc cacaaccgca gcgaggagtt tctcattgct 240
ggaaaactgc aggatggact cttgcacatc actacctgca gttttgtggc tccctggaac 300
agcctgagct tagctcagcg ccggggcttc accaagacct acactgttgg ctgtgaggaa 360
tgcacagtgt ttccctgttt atccatcccc tgcaaactgc agagtggcac tcattgcttg 420
tggacggacc agctcctcca aggctctgaa aagggcttcc agtcccgtca ccttgcctgc 480
ctgcctcggg agccagggct gtgcacctgg cagtccctgc ggtcccagat agcctga 537
<210> 25
<211> 534
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体7(Homo sapiens)
<400> 25
ccacagacgg ccttctgcaa ttccgacctc gtcatcaggg ccaagttcgt ggggacacca 60
gaagtcaacc agaccacctt ataccagcgt tatgagatca agatgaccaa gatgtataaa 120
gggttccaag ccttagggga tgccgctgac atccggttcg tctacacccc cgccatggag 180
agtgtctgcg gatacttcca caggtcccac aaccgcagcg aggagtttct cattgctgga 240
aaactgcagg atggactctt gcacatcact acctgcagtt ttgtggctcc ctggaacagc 300
ctgagcttag ctcagcgccg gggcttcacc aagacctaca ctgttggctg tgaggaatgc 360
acagtgtttc cctgtttatc catcccctgc aaactgcaga gtggcactca ttgcttgtgg 420
acggaccagc tcctccaagg ctctgaaaag ggcttccagt cccgtcacct tgcctgcctg 480
cctcgggagc cagggctgtg cacctggcag tccctgcggt cccagatagc ctga 534
<210> 25
<211> 531
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体8(Homo sapiens)
<400> 25
cagacggcct tctgcaattc cgacctcgtc atcagggcca agttcgtggg gacaccagaa 60
gtcaaccaga ccaccttata ccagcgttat gagatcaaga tgaccaagat gtataaaggg 120
ttccaagcct taggggatgc cgctgacatc cggttcgtct acacccccgc catggagagt 180
gtctgcggat acttccacag gtcccacaac cgcagcgagg agtttctcat tgctggaaaa 240
ctgcaggatg gactcttgca catcactacc tgcagttttg tggctccctg gaacagcctg 300
agcttagctc agcgccgggg cttcaccaag acctacactg ttggctgtga ggaatgcaca 360
gtgtttccct gtttatccat cccctgcaaa ctgcagagtg gcactcattg cttgtggacg 420
gaccagctcc tccaaggctc tgaaaagggc ttccagtccc gtcaccttgc ctgcctgcct 480
cgggagccag ggctgtgcac ctggcagtcc ctgcggtccc agatagcctg a 531
<210> 26
<211> 528
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体9(Homo sapiens)
<400> 26
acggccttct gcaattccga cctcgtcatc agggccaagt tcgtggggac accagaagtc 60
aaccagacca ccttatacca gcgttatgag atcaagatga ccaagatgta taaagggttc 120
caagccttag gggatgccgc tgacatccgg ttcgtctaca cccccgccat ggagagtgtc 180
tgcggatact tccacaggtc ccacaaccgc agcgaggagt ttctcattgc tggaaaactg 240
caggatggac tcttgcacat cactacctgc agttttgtgg ctccctggaa cagcctgagc 300
ttagctcagc gccggggctt caccaagacc tacactgttg gctgtgagga atgcacagtg 360
tttccctgtt tatccatccc ctgcaaactg cagagtggca ctcattgctt gtggacggac 420
cagctcctcc aaggctctga aaagggcttc cagtcccgtc accttgcctg cctgcctcgg 480
gagccagggc tgtgcacctg gcagtccctg cggtcccaga tagcctga 528
<210> 27
<211> 525
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体10(Homo sapiens)
<400> 27
gccttctgca attccgacct cgtcatcagg gccaagttcg tggggacacc agaagtcaac 60
cagaccacct tataccagcg ttatgagatc aagatgacca agatgtataa agggttccaa 120
gccttagggg atgccgctga catccggttc gtctacaccc ccgccatgga gagtgtctgc 180
ggatacttcc acaggtccca caaccgcagc gaggagtttc tcattgctgg aaaactgcag 240
gatggactct tgcacatcac tacctgcagt tttgtggctc cctggaacag cctgagctta 300
gctcagcgcc ggggcttcac caagacctac actgttggct gtgaggaatg cacagtgttt 360
ccctgtttat ccatcccctg caaactgcag agtggcactc attgcttgtg gacggaccag 420
ctcctccaag gctctgaaaa gggcttccag tcccgtcacc ttgcctgcct gcctcgggag 480
ccagggctgt gcacctggca gtccctgcgg tcccagatag cctga 525
<210> 28
<211> 522
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体11(Homo sapiens)
<400> 28
ttctgcaatt ccgacctcgt catcagggcc aagttcgtgg ggacaccaga agtcaaccag 60
accaccttat accagcgtta tgagatcaag atgaccaaga tgtataaagg gttccaagcc 120
ttaggggatg ccgctgacat ccggttcgtc tacacccccg ccatggagag tgtctgcgga 180
tacttccaca ggtcccacaa ccgcagcgag gagtttctca ttgctggaaa actgcaggat 240
ggactcttgc acatcactac ctgcagtttt gtggctccct ggaacagcct gagcttagct 300
cagcgccggg gcttcaccaa gacctacact gttggctgtg aggaatgcac agtgtttccc 360
tgtttatcca tcccctgcaa actgcagagt ggcactcatt gcttgtggac ggaccagctc 420
ctccaaggct ctgaaaaggg cttccagtcc cgtcaccttg cctgcctgcc tcgggagcca 480
gggctgtgca cctggcagtc cctgcggtcc cagatagcct ga 522
<210> 29
<211> 519
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体12(Homo sapiens)
<400> 29
tgcaattccg acctcgtcat cagggccaag ttcgtgggga caccagaagt caaccagacc 60
accttatacc agcgttatga gatcaagatg accaagatgt ataaagggtt ccaagcctta 120
ggggatgccg ctgacatccg gttcgtctac acccccgcca tggagagtgt ctgcggatac 180
ttccacaggt cccacaaccg cagcgaggag tttctcattg ctggaaaact gcaggatgga 240
ctcttgcaca tcactacctg cagttttgtg gctccctgga acagcctgag cttagctcag 300
cgccggggct tcaccaagac ctacactgtt ggctgtgagg aatgcacagt gtttccctgt 360
ttatccatcc cctgcaaact gcagagtggc actcattgct tgtggacgga ccagctcctc 420
caaggctctg aaaagggctt ccagtcccgt caccttgcct gcctgcctcg ggagccaggg 480
ctgtgcacct ggcagtccct gcggtcccag atagcctga 519
<210> 30
<211> 516
<212> DNA
<213> 基质金属蛋白酶内源性抑制剂–1 截短体13(Homo sapiens)
<400> 30
aattccgacc tcgtcatcag ggccaagttc gtggggacac cagaagtcaa ccagaccacc 60
ttataccagc gttatgagat caagatgacc aagatgtata aagggttcca agccttaggg 120
gatgccgctg acatccggtt cgtctacacc cccgccatgg agagtgtctg cggatacttc 180
cacaggtccc acaaccgcag cgaggagttt ctcattgctg gaaaactgca ggatggactc 240
ttgcacatca ctacctgcag ttttgtggct ccctggaaca gcctgagctt agctcagcgc 300
cggggcttca ccaagaccta cactgttggc tgtgaggaat gcacagtgtt tccctgttta 360
tccatcccct gcaaactgca gagtggcact cattgcttgt ggacggacca gctcctccaa 420
ggctctgaaa agggcttcca gtcccgtcac cttgcctgcc tgcctcggga gccagggctg 480
tgcacctggc agtccctgcg gtcccagata gcctga 516

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1.TIMP-1和CD63-Integrinβ1在制备治疗血脑屏障失调所致中枢神经系统疾病的药物中的应用。
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TIMP1 preserves the blood-brain barrier through interacting with CD63/integrin β 1 complex and regulating downstream FAK/RhoA signaling;Jingshu Tang等;《Acta Pharm Sin B》;20200305;第10卷(第6期);第987-1003页 *
TIMP1通过与CD63/整合素β1复合物相互作用并调节下游FAK/RhoA信号保护血脑屏障;唐婧姝等;《中国药理学与毒理学杂志》;20210930;第35卷(第9期);第672-673页 *

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