CN112390942A - 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用 - Google Patents

羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112390942A
CN112390942A CN201910761105.1A CN201910761105A CN112390942A CN 112390942 A CN112390942 A CN 112390942A CN 201910761105 A CN201910761105 A CN 201910761105A CN 112390942 A CN112390942 A CN 112390942A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methoxypolyethylene glycol
phosphatidylethanolamine
hydroxylated
soybean
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910761105.1A
Other languages
English (en)
Inventor
卫延安
侯凌华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing University of Science and Technology
Original Assignee
Nanjing University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing University of Science and Technology filed Critical Nanjing University of Science and Technology
Priority to CN201910761105.1A priority Critical patent/CN112390942A/zh
Publication of CN112390942A publication Critical patent/CN112390942A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/337—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing other elements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
    • C08G65/324—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
    • C08G65/332—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof
    • C08G65/3322—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof acyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/333—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen
    • C08G65/33303—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen containing amino group
    • C08G65/33306—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen containing amino group acyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
    • C08G65/3344—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur containing oxygen in addition to sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/335—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing phosphorus
    • C08G65/3353—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing phosphorus containing oxygen in addition to phosphorus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/338—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic and organic compounds

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种羟化大豆磷脂酰乙醇胺‑甲氧基聚乙二醇、制备方法及其在制备脂质体中的应用。以大豆磷脂与甲氧基聚乙二醇为原料，经过氧化、酰化、酰胺化、双氧水再氧化等一系列过程制得羟化大豆磷脂酰乙醇胺‑甲氧基聚乙二醇。本发明的羟化大豆磷脂酰乙醇胺‑甲氧基聚乙二醇作为添加剂加入脂质体中，能够明显提高脂质体的包封率。

Description

羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其在制备脂质体中的应用，属于医药载体技术领域。
背景技术
甲氧基聚乙二醇中含有亲水性结构-O-与疏水性结构-C-O-C-，因此具有两亲性。它除了能在水中拥有极优的溶解性外还能溶于四氢呋喃、丙酮、三氯甲烷、甲苯、乙醇等绝大部分极性较高的有机溶剂。因而在实际应用中，既能够用作亲水链段以改善其亲水性，同样也能够用作疏水链段改善其疏水性。甲氧基聚乙二醇不具备毒性，拥有极优的生物相容性且几乎不与生物体之间进行任何的反应，当它进入生物体后，由于能够在组织液中很好的溶解，因此可以通过机体的代谢作用被快速并及时排除体外，在生物医药领域有着普遍的运用。
大豆磷脂是大豆油生产过程中分离出来的油脚经过进一步高温精制、脱除水分及分离纯化等一系列处理后所得到的产物，原料易得，价格便宜。
目前抗癌靶向药物价格普遍较高，这与药物本身及其包覆载体的原料来源以及制备方法有着很大的关系。因此选择低成本的原料和简便的制备方法较为重要。甲氧基-聚乙二醇-磷脂(MPEG-DSPE)常作为包覆载体用于包覆药物形成脂质体。目前报道的制备MPEG-DSPE的方法大致分为两大类。一类是直接使用聚乙二醇或聚乙二醇单甲醚与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)在羰基二咪唑的作用下缩合制备，转化率为26％(Noriyuki Maeda,Yoshito Takeuchi,Miki Takada,etal.Synthesis of angiogenesis-targeted peptideand hydrophobized polyethylene glycol conjugate.Biooranic&Medicinal ChemistryLetters,2004,14:1015-1017)。另一类为将聚乙二醇或聚乙二醇单甲醚的羟基转化为羧基再转化为有较高活性的中间体活性脂，然后与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的氨基反应形成酰胺键(Shih-Kwang Wu,Ting-Guang,etal.Solid phase Method For Synthesis Peptide-Spacer-Lipid Conjugates,Conjugates Synthesized Thereby and Targeted LiposomesContaining The Same[P].US:0229017A1,2003-12-11)。这些制备方法都是使用高纯度的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)为原料。二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)的分子量较大且结构比较复杂，其通常采用柱层析和全合成的方法制备，反应步骤较多，反应困难，产率较低，因此较纯净的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)的价格非常昂贵。
发明内容
本发明的目的在于提供一种廉价易得、产率高的羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其在制备脂质体中的应用。本发明采用价格低廉的大豆磷脂与甲氧基聚乙二醇为原料，经过氧化、酰化、酰胺化、双氧水再氧化等一系列过程制备羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇，并将其作为膜材料制得相应的脂质体。
实现本发明目的的技术方案如下：
羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇(羟化SPE-MPEG)，结构式如下：
Figure BDA0002170319790000021
上述羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，在甲氧基聚乙二醇羧酸的二氯甲烷溶液中加入氯化亚砜，60～70℃下回流反应4～6h，减压蒸馏除去未反应的氯化亚砜和二氯甲烷，再加入无水乙醚，静置沉淀后，最后减压抽滤，得到甲氧基聚乙二醇酰氯；
步骤2，将大豆磷脂和甲氧基聚乙二醇酰氯搅拌溶于三氯甲烷中，滴加三乙胺，在40～50℃下反应3～6h，反应结束后，减压蒸馏除去三氯甲烷溶剂和未参加反应的三乙胺，然后向残余物中加入四氢呋喃，沉淀出盐酸三乙胺盐，离心分离，收集上清液，加入无水乙醚，静置沉淀后，减压抽滤，得到大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇；
步骤3，将大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇溶于乳酸中，缓慢加入30％的过氧化氢，反应1～3h，减压蒸馏除去未反应完全的乳酸和过氧化氢，透析，得到羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。
优选地，步骤1中，所述的静置沉淀时间为30～60min。
优选地，步骤2中，所述的大豆磷脂和甲氧基聚乙二醇酰氯的质量比为1:1～10:1，更优选为4:1。
优选地，步骤2中，所述的离心速度为4000～5000rpm。
优选地，步骤3中，所述的大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇和30％的过氧化氢的质量比为1:1～4:1，更优选为2:1。
优选地，步骤3中，透析中采用的透析袋的分子量为3000Da。
本发明还提供上述羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇在制备脂质体中的应用。
本发明还提供含有上述羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的空白脂质体。所述的脂质体包含磷脂和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。优选地，还包含胆固醇。更优选地，包含氢化大豆磷脂、胆固醇和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。作为优选，所述的氢化大豆磷脂、胆固醇和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的摩尔比为2:1:0.2。
进一步地，本发明提供负载活性物质的脂质体，所述的活性物质包封于上述的空白脂质体中。所述的活性物质为药物、化妆品中的活性物质或具有保健功能的物质。
上述负载活性物质的脂质体的制备方法，包括以下步骤：先将磷脂和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇溶于有机溶剂中，可选地加入胆固醇，得到均一的溶液，然后去除有机溶剂，成膜后，加入活性物质的水溶液，水化，超声均质，离心，过滤，得到负载活性物质的脂质体。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明使用价格低廉的大豆磷脂和甲氧基聚乙二醇为原料，经过氧化、酰化、酰胺化、双氧水再氧化的步骤合成，操作简单，产率高。在脂质体中添加羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇，能够显著提高脂质体的包封率。
附图说明
图1为本发明的羟化大豆磷脂乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的制备工艺流程图。
图2为脂质体的制备工艺流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详述。
甲氧基聚乙二醇羧酸的制备参考文献【陈龙，卫延安.聚乙二醇单甲醚羧基衍生物的制备.[J]精细化工.2013(10)】。
实施例1
第一步：称取10g的甲氧基聚乙二醇2000(MPEG2000)倒入容量为500mL的圆底烧瓶中，然后向烧瓶中加入100ml丙酮溶液，在常温下磁力搅拌直到MPEG2000全部溶解，最后使用滴液漏斗向烧瓶中逐滴加入4.5ml的琼斯试剂，在室温下反应24h。反应完成后，向其中滴加2ml的异丙醇使反应得以淬灭，而后抽滤并对滤液进行减压蒸馏以蒸除丙酮和多余的淬灭剂异丙醇，接着向烧瓶中加入适量的蒸馏水以形成溶液，然后向溶液中滴加10-20ml的碳酸氢钠的水溶液，直至溶液呈中性或弱碱性为止。将烧瓶中的水蒸干，然后加入20ml的三氯甲烷以使剩余物得到充分的萃取，而后抽滤并对所得滤液进行减压蒸馏以挥去三氯甲烷，接着向剩余物中滴加低浓度的盐酸溶液，直到所得溶液的pH值为1。旋蒸除去体系中的水和氯化氢气体，此时剩余物中有白色晶体析出，向体系中加入20ml的三氯甲烷以使剩余物得到充分的萃取，而后抽滤并对所得滤液进行减压蒸馏以挥去三氯甲烷，最后将剩余物在室温下放置一段时间，待其冷却后所得的白色固体即为中间产物甲氧聚乙二醇2000羧酸(MPEG2000-COOH)。产率：9.80g(98％)。IR:1738cm-1(羰基特征峰)，3482cm-1(-OH的伸缩振动峰)，1100cm-1(C-O-C的伸缩振动峰)。1HNMR(DMSO-D6):3.26(-O-CH3)，4.03(-O-CH2-COOH的次甲基)，3.32-3.60(重复单元-CH2-CH2-O-)，12.60(-COOH)。
第二步：称取4g的MPEG2000-COOH，将其用20ml的二氯甲烷溶解以得到均一的溶液，将所得溶液转移到容量为250mL的三口烧瓶中，磁力搅拌，设定反应温度为65℃，而后向反应体系中加入20ml的氯化亚砜，回流反应6h。待反应完成后，减压蒸馏以除去未反应的氯化亚砜及溶剂二氯甲烷，然后向残余物中加入无水乙醚，放置，待完全沉淀后，对其进行减压抽滤，从而得到甲氧基聚乙二醇2000酰氯，之后将产物放于真空干燥箱中干燥，以彻底除去氯化亚砜、二氯甲烷和无水乙醚。
第三步：称取8g的大豆磷脂，用三氯甲烷溶解，然后将所得溶液转移至容量为150mL的四口烧瓶中，磁力搅拌，而后滴加3mL的三乙胺，设定反应温度为45℃，然后称取2g的甲氧基聚乙二醇2000酰氯，用三氯甲烷溶解，待烧瓶内温度维持在45℃时，将所得溶液缓慢滴加至烧瓶内，反应4h。待反应完毕后，将溶液进行减压蒸馏以除去体系中的三氯甲烷溶剂以及未反应的三乙胺。然后向残余物中加入适量的四氢呋喃，以沉淀出盐酸三乙胺盐，接着对体系进行离心分离，设定转速为5000r/min。将离心管内所得的上清液转移到干净的离心管中再次离心，如此重复多次，然后收集最终离心后的上清液，接着减压蒸馏以挥去体系中的四氢呋喃，然后加入无水乙醚，放置，以沉淀出中间产物大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。产率：1.68g(84％)。
第四步：称取1g大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇，以乳酸溶解，然后向体系中加入1mL的30％的过氧化氢溶液，磁力搅拌，设定反应温度为60℃，反应2h。待反应完毕后，对剩余物进行减压蒸馏以出去乳酸和过氧化氢。产物放真空干燥箱中干燥。
第五步：将第四步中的产物转移到截留分子量为3000的半透膜中，以体积比为V缓冲液：V样品溶液＝100：1的条件下透析一周。其中缓冲液为去离子水，缓冲液置换频率为3～5次/天，磁力搅拌。透析完成后将保留液放置冷冻干燥机中干燥。得到最终产物羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000。产率：0.8g(80％)。IR：1738cm-1(羰基特征峰)，3702cm-1(羟基特征峰)，1100cm-1(C-O-C的伸缩振动峰)，1650cm-1(-C(O)NH-羰基伸缩振动峰)，1537cm-1(-C(O)NH—的氨基面内弯曲振动峰)。1HNMR:0.84(-CH3),1.25(-CH2-),1.47(-CH2-CH2-COOR),2.00(-CH2-C＝C-),2.15(-NH-C(O)-CH2-),2.30(-CH2-COOR),2.65(-C＝C-CH2-C＝C-),3.36(-O-CH3),3.40～3.60(-CH2-CH2-O-)，3.67(-P-O-CH2-CH2-),3.76(-CH2-O-P(O)-),4.15(-NH-C(O)-)4.18(P(O)-O-CH2-)，4.60(-CH2-CH-CH2-)，5.10(CH2-CH-CH2)，5.32(-CH＝C-),11.98(-CH2-CH(OH)-CH(OH)-)。
第六步：制备脂质体，并对其包封率进行检测。
(1)普通脂质体CLs的制备：组成为HSPC-Chol，摩尔比为2：1，其中HSPC为氢化大豆磷脂，Chol为胆固醇。称取氢化大豆磷脂96mg，胆固醇26mg于烧杯中，并加入5ml的三氯甲烷将其溶解制得均一的溶液。将溶液转移到烧瓶中，对其进行减压蒸馏，从而得到一层均匀的脂质薄膜，然后把烧瓶放置在真空干燥箱中以除去残余的三氯甲烷，而后加入5mlPBS缓冲溶液稀释的浓度约为10mmol/L的钙黄绿素以水化瓶壁上附着的脂质薄膜，设置水化温度为60℃，酰旋转水化2h，然后将烧瓶放入水浴中超声以得到脂质体的悬浊液，之后把所得的混悬液放入冰水浴中以对其进行探头超声，设定超声时间为6min，以使脂质体的粒径更均匀、更细化，接着将其倒入离心管中，3500r/min离心分离10min，弃去少量的沉淀，收集上清液体，而后选用孔径为0.22微米的微孔滤膜对所得液体进行挤压过滤三次，从而得到空白脂质体。
(2)长循环脂质体SSL的制备：组成为HSPC-Chol-羟化SPE-MPEG，摩尔比为2:1:0.2，其中HSPC为氢化大豆磷脂，Chol为胆固醇，羟化SPE-MPEG为羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。称取氢化大豆磷脂96mg，胆固醇26mg，羟化SPE-MPEG34mg于烧杯中，并加入5ml的三氯甲烷将其溶解制得均一的溶液。将溶液转移到烧瓶中，对其进行减压蒸馏，从而得到一层均匀的脂质薄膜，然后把烧瓶放置在真空干燥箱中以除去残余的三氯甲烷，而后加入5mlPBS缓冲溶液稀释浓度约为10mmol/L的钙黄绿素以水化瓶壁上附着的脂质薄膜，设置水化温度为60℃，先旋转水化2h，然后将烧瓶放入水浴中超声以得到脂质体的悬浊液，之后把所得的混悬液放入冰水浴中以对其进行探头超声，设定超声时间为6min，以使脂质体的粒径更均匀、更细化，接着将其倒入离心管中，设定3500r/min的转速对其进行离心分离10min，弃去少量的沉淀，收集上清液体，而后选用孔径为0.22微米的微孔滤膜对所得液体进行挤压过滤三次，得到长循环脂质体。
(3)包封率的测定
其计算公式为：EE％＝C1/C2X100％
评估脂质体包封率的具体步骤如下：
步骤一：移取0.1ml的包载钙黄绿素的脂质体加入到葡聚糖凝胶G-50柱中以对其进行离心纯化(PBS缓冲液作为淋洗剂)，并用离心管接受脂质体1流份。
步骤二：向离心管中滴加一定量的10％的TritonX-100溶液对脂质体进行破坏，然后用PBS缓冲液稀释并定容至适宜的体积。
步骤三：采用紫外分光光度计在钙黄绿素对应的最大吸收波长处对其吸光度进行检测，将检测值代入标准曲线中从而算出脂质体悬液所包封的钙黄绿素的质量浓度(C1)。
步骤四：移取0.1ml的包载钙黄绿素的脂质体2，然后向悬液中直接加入一定量的10％的TritonX-100溶液对脂质体进行破坏，用PBS缓冲液稀释并定容至适宜的体积，对其吸光度进行检测，将检测值代入标准曲线中算出脂质体中所含钙黄绿素的总重量浓度(C0)。
步骤五：重复以上操作三次以上，求出空白脂质体和长循环脂质体的平均包封率。
表1普通脂质体和添加羟化SPE-MPEG的长循环脂质体的包封率
Figure BDA0002170319790000061
Figure BDA0002170319790000071
从表1可以看出，添加羟化SPE-MPEG后制备的长循环脂质体的包封率为8.52％，较未添加羟化SPE-MPEG的普通脂质体4.90％的包封率，具有明显提升。
实施例2
第一步：称取6g的甲氧基聚乙二醇1200(MPEG2000)倒入容量为500mL的圆底烧瓶中，然后向烧瓶中加入100ml丙酮溶液，在常温下磁力搅拌直到MPEG2000全部溶解，最后使用滴液漏斗向烧瓶中逐滴加入4.5ml的琼斯试剂，在室温下反应24h。后续处理方法同上。产率：5.60g(93％)。IR:1730cm-1(羰基特征峰)，3472cm-1(-OH的伸缩振动峰)，1090cm-1(C-O-C的伸缩振动峰)。1HNMR(DMSO-D6):3.29(-O-CH3)，3.98(-O-CH2-COOH的次甲基)，3.25-3.54(重复单元-CH2-CH2-O-)，12.48(-COOH)。
第二步：称取2.4g的MPEG1200-COOH，将其用20ml的二氯甲烷溶解以得到均一的溶液，将所得溶液转移到容量为250mL的三口烧瓶中，磁力搅拌，设定反应温度为65℃，而后向反应体系中加入20ml的氯化亚砜，回流反应6h。待反应完成后，减压蒸馏以除去未反应的氯化亚砜及溶剂二氯甲烷，然后向残余物中加入无水乙醚，放置，待完全沉淀后，对其进行减压抽滤，从而得到甲氧基聚乙二醇1200酰氯，之后将产物放于真空干燥箱中干燥一段时间，以彻底除去氯化亚砜、二氯甲烷和无水乙醚。
第三步：称取4g的大豆磷脂，用三氯甲烷溶解，然后将所得溶液转移至容量为150mL的四口烧瓶中，磁力搅拌，而后滴加3mL的三乙胺，设定反应温度为45℃，然后称取1g的甲氧基聚乙二醇1200酰氯，用三氯甲烷溶解，待烧瓶内温度维持在45℃时，将所得溶液缓慢滴加至烧瓶内，反应4h。待反应完毕后，将溶液进行减压蒸馏以除去体系中的三氯甲烷溶剂以及未反应的三乙胺。然后向残余物中加入适量的四氢呋喃，以沉淀出盐酸三乙胺盐，接着对体系进行离心分离，设定转速为5000r/min。将离心管内所得的上清液转移到干净的离心管中再次离心，如此重复多次，然后收集最终离心后的上清液，接着减压蒸馏以挥去体系中的四氢呋喃，然后加入无水乙醚，放置，以沉淀出中间产物大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。产率：0.79g(79％)。
第四步：称取1g大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇1200，以2ml的乳酸溶解，然后向体系中加入1mL的30％的过氧化氢溶液，磁力搅拌，设定反应温度为55℃，反应1h。待反应完毕后，对剩余物进行减压蒸馏以出去乳酸和过氧化氢。产物放真空干燥箱中干燥。
第五步：将第四步中的产物转移到截留分子量为2000的半透膜中，以体积比为V缓冲液：V样品溶液＝100：1的条件下透析一周。其中缓冲液为去离子水，缓冲液置换频率为3～5次/天，磁力搅拌。透析完成后将保留液放置冷冻干燥机中干燥。得到最终产物羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇1200。产率：0.78g(78％)。IR：1734cm-1(羰基特征峰)，3697cm-1(羟基特征峰)，1102cm-1(C-O-C的伸缩振动峰)，1657cm-1(-C(O)NH-羰基伸缩振动峰)，1532cm-1(-C(O)NH—的氨基面内弯曲振动峰)。1HNMR:0.83(-CH3),1.29(-CH2-),1.37(-CH2-CH2-COOR),2.00(-CH2-C＝C-),2.17(-NH-C(O)-CH2-),2.35(-CH2-COOR),2.70(-C＝C-CH2-C＝C-),3.37(-O-CH3),3.44～3.65(-CH2-CH2-O-)，3.69(-P-O-CH2-CH2-),3.74(-CH2-O-P(O)-),4.13(-NH-C(O)-)4.20(P(O)-O-CH2-)，4.62(-CH2-CH-CH2-)，5.13(CH2-CH-CH2)，5.38(-CH＝C-),12.02(-CH2-CH(OH)-CH(OH)-)。

Claims (10)

1.羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇，结构式如下：
Figure FDA0002170319780000011
2.根据权利要求1所述的羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1，在甲氧基聚乙二醇羧酸的二氯甲烷溶液中加入氯化亚砜，60～70℃下回流反应4～6h，减压蒸馏除去未反应的氯化亚砜和二氯甲烷，再加入无水乙醚，静置沉淀后，最后减压抽滤，得到甲氧基聚乙二醇酰氯；
步骤2，将大豆磷脂和甲氧基聚乙二醇酰氯搅拌溶于三氯甲烷中，滴加三乙胺，在40～50℃下反应3～6h，反应结束后，减压蒸馏除去三氯甲烷溶剂和未参加反应的三乙胺，然后向残余物中加入四氢呋喃，沉淀出盐酸三乙胺盐，离心分离，收集上清液，加入无水乙醚，静置沉淀后，减压抽滤，得到大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇；
步骤3，将大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇溶于乳酸中，缓慢加入30％的过氧化氢，反应1～3h，减压蒸馏除去未反应完全的乳酸和过氧化氢，透析，得到羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述的静置沉淀时间为30～60min；步骤2中，所述的离心速度为4000～5000rpm。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述的大豆磷脂和甲氧基聚乙二醇酰氯的质量比为1:1～10:1，更优选为4:1。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述的大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇和30％的过氧化氢的质量比为1:1～4:1，更优选为2:1。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，透析中采用的透析袋的分子量为3000Da。
7.根据权利要求1所述的羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇在制备脂质体中的应用。
8.含有羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的空白脂质体，其特征在于，所述的脂质体包含磷脂和权利要求1所述的羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇；优选地，还包含胆固醇；更优选地，包含氢化大豆磷脂、胆固醇和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇；作为优选，所述的氢化大豆磷脂、胆固醇和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇的摩尔比为2:1:0.2。
9.负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的活性物质包封于权利要求8所述的的空白脂质体中；所述的活性物质为药物、化妆品中的活性物质或具有保健功能的物质。
10.根据权利要求9所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：先将磷脂和羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇溶于有机溶剂中，可选地加入胆固醇，得到均一的溶液，然后去除有机溶剂，成膜后，加入活性物质的水溶液，水化，超声均质，离心，过滤，得到负载活性物质的脂质体。
CN201910761105.1A 2019-08-17 2019-08-17 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用 Pending CN112390942A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910761105.1A CN112390942A (zh) 2019-08-17 2019-08-17 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910761105.1A CN112390942A (zh) 2019-08-17 2019-08-17 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112390942A true CN112390942A (zh) 2021-02-23

Family

ID=74603143

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910761105.1A Pending CN112390942A (zh) 2019-08-17 2019-08-17 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112390942A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015699A (zh) * 2007-01-17 2007-08-15 东南大学 聚乙二醇－磷脂酰乙醇胺聚合物或它的药用酸加成盐及在制药中的应用
CN103145977A (zh) * 2013-03-08 2013-06-12 苏州东南药业股份有限公司 一种mPEG2000-DSPE钠盐的制备方法
CN103360590A (zh) * 2012-04-12 2013-10-23 南京康海磷脂生物技术有限公司 一种甲氧基聚乙二醇-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法
CN103626993A (zh) * 2013-11-05 2014-03-12 南京理工大学 聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物及其制备

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015699A (zh) * 2007-01-17 2007-08-15 东南大学 聚乙二醇－磷脂酰乙醇胺聚合物或它的药用酸加成盐及在制药中的应用
CN103360590A (zh) * 2012-04-12 2013-10-23 南京康海磷脂生物技术有限公司 一种甲氧基聚乙二醇-二脂肪酰磷脂酰乙醇胺的制备方法
CN103145977A (zh) * 2013-03-08 2013-06-12 苏州东南药业股份有限公司 一种mPEG2000-DSPE钠盐的制备方法
CN103626993A (zh) * 2013-11-05 2014-03-12 南京理工大学 聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物及其制备

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨阳等: ""一种改性磷脂的合成工艺及性能"", 《化工进展》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103550781B (zh) 树状大分子自组装药物载体及其制备方法和应用
JP2000510513A (ja) 低ステロール且つ高トリグリセライドの微生物性油を得るための極性溶媒によるステロール抽出
JP4875612B2 (ja) カチオン性アミノ酸型脂質
CN113292608B (zh) 一种外泌体药物递送系统及其制备方法和应用
CN102391498B (zh) 一种聚乙二醇二脂肪酸甘油酯衍生物及其在药物传递中的应用
EP1177217B1 (fr) Cyclodextrines amphiphiles, leur preparation et leur utilisation pour solubiliser des systemes organises et incorporer des molecules hydrophobes
CN101792461A (zh) 一种注射用大豆卵磷脂的制备工艺
US6679822B2 (en) Polyalkylene oxide-modified phospholipid and production method thereof
CN110123754B (zh) 一种靶向作用于树突细胞的苍耳亭纳米胶束及制备方法和应用
CN112390942A (zh) 羟化大豆磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇、制备方法及其应用
CN110604820A (zh) 一种双重敏感型聚合物-药物连接物及其制备方法和应用
JP4540287B2 (ja) ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法
JP2002531572A (ja) 脱油ホスファチドの製造プロセス
CN103626993A (zh) 聚乙二醇单甲醚大豆磷脂酰乙醇胺衍生物及其制备
CN111329838B (zh) 一种紫杉醇脂质体药物组合物及其制备方法
CN114456233A (zh) 一种细胞穿透肽-甾醇耦合物及其制备方法
CN110105335B (zh) 酰胺键联接的萘酰亚胺多功能化合物的合成及应用
CN114405298A (zh) 纯化聚乙二醇类缀合脂质的方法
JP2001072693A (ja) 精製卵黄レシチンの製造法
CN111393501A (zh) 牛磺酸-3-脱氢-鹅脱氧胆酸的半缩酮形式结构及牛磺酸-3-脱氢-鹅脱氧胆酸的制法
JP2001504508A (ja) 発酵により生成したクラブラン酸の精製
CN115192523B (zh) 一种以苯硼酸酯为连接单元的雷公藤红素前药自组装纳米粒及其制备方法和应用
CN113230415B (zh) 岩藻糖与环糊精修饰多肽靶向动脉粥样硬化相关巨噬细胞纳米载体系统及其制备方法和应用
KR102657315B1 (ko) 바이오리피드 계면활성제, 이의 제조방법 및 이를 이용하는 엑소좀 유사체의 제조방법
CN106831853A (zh) 7‑乙基‑10‑o‑叔丁基二苯基硅基喜树碱‑20‑o‑甘氨酸盐酸盐的制备工艺

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210223