CN112386254A - 一种防止用于nk细胞培养外周血凝血的采集袋及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于采血技术领域，尤其是一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋。其包括采血袋、采血针、采血管和抗凝剂，抗凝剂放置在采血袋中，所述采血管的一端连接采血袋，另一端连接采血针。本发明采用采血袋收集外周血，并且将肝素钠作为抗凝剂预先放置在采血袋中，肝素钠抗凝剂的浓度为5000iu/ml，采用本发明的采集袋和采血方法能够有效的防止外周血凝血，并且每次的采血量大，采血方便，采集的外周血也易于保存。

Description

一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋及方法
技术领域
本发明涉及采血技术领域，尤其涉及一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋及方法。
背景技术
细胞过继免疫治疗是肿瘤生物治疗的重要方法之一，在多种免疫活性因子的作用下，通过体外培养可以消除肿瘤患者体内的免疫抑制因素，有效活化和扩增免疫活性细胞，回输体内后可直接杀伤或诱导免疫效应细胞杀伤肿瘤细胞。过继免疫治疗有很多优越性，其免疫细胞在体外处理，可绕过体内免疫障碍的种种机制，从而选择性地激发抗肿瘤免疫应答。另外，在体外培养条件下，对肿瘤抗原耐受的免疫细胞可被逆转。目前，基因工程可大量克隆不同细胞因子及抗原多肽，使体外活化扩展大量抗肿瘤免疫细胞更为方便，避免一些制剂体内大量应用带来的严重副反应。因此，过继免疫治疗成为近年来肿瘤免疫治疗中的热点，为晚期患者开辟了新的治疗途径。但作为一种新的治疗手段，治疗方案及标准尚待进一步规范和统一，应用时机及途径等问题尚需进一步探讨。
常用于细胞免疫治疗的细胞包括细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞、树突状细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞等。其中，NK细胞是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。NK细胞的优势在于其不需抗原致敏和MHC限制就可以识别并杀伤肿瘤细胞，在机体抗肿瘤及早期抗病毒等免疫应答中起着重要作用。因此，NK细胞对肿瘤病人的治疗有很大的前景，但是NK细胞在体内所占的比例低、数量少，限制了NK细胞的应用，所以体外扩增NK细胞技术就开始发展。
单个的NK核细胞通常取自自体外周血，目前的采血装置和采血方法都存在一定的缺陷，主要是采用采血管收集外周血，将抗凝剂放置在采血管中，并且抗凝剂的种类和浓度也选用不恰到，造成抗凝效果不佳，血液流出血管后容易发生凝固。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中采血不方便，外周血容易发生凝固等缺陷，提供了一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋及方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋，包括采血袋、采血针、采血管和抗凝剂，抗凝剂放置在采血袋中，所述采血管的一端连接采血袋，另一端连接采血针。
优选的，所述抗凝剂为肝素钠。
优选的，所述采血袋为100-200mL。
优选的，所述采血管的长度为900mm。
本发明还提供一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，采用上述采集袋，首先抽取肝素钠抗凝剂加入采血袋中，然后热合采血管；用采血针收集外周血加入含有抗凝剂的采血袋中，封口后保存。
优选的，所述肝素钠抗凝剂的浓度为5000iu/ml。
优选的，所述外周血和肝素钠抗凝剂的体积比为1:0.004。
优选的，所述肝素钠抗凝剂的配置方法为：取1g肝素钠加入32ml灭菌纯水，得到肝素钠抗凝剂。
本发明的抗凝剂肝素钠能干扰凝血过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。主要通过激活抗凝血酶III，增强抗凝血酶III对活化的凝血因子的抑制作用，从而妨碍凝血酶原变为凝血酶、纤维蛋白原变成纤维蛋白，并不破坏钙离子的状态和数量。
有益效果：本发明采用采血袋收集外周血，并且将肝素钠作为抗凝剂预先放置在采血袋中，肝素钠抗凝剂的浓度为5000iu/ml，采用本发明的采集袋和采血方法能够有效的防止外周血凝血，并且每次的采血量大，采血方便，采集的外周血也易于保存。
附图说明
图1为本发明提出的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋。
图中：1采血袋、2采血针、3采血管。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
参照图1，一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋，包括采血袋1、采血针2、采血管3和抗凝剂，抗凝剂放置在采血袋1中，所述采血管3的一端连接采血袋1，另一端连接采血针2。
本发明所述抗凝剂为肝素钠抗凝剂，肝素钠抗凝剂的浓度为5000iu/ml，取1g肝素钠加入32ml灭菌纯水混合得到。抗凝剂肝素钠能干扰凝血过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。主要通过激活抗凝血酶III，增强抗凝血酶III对活化的凝血因子的抑制作用，从而妨碍凝血酶原变为凝血酶、纤维蛋白原变成纤维蛋白，并不破坏钙离子的状态和数量。
本发明采血袋1为100mL或200mL，采用采血袋1和肝素钠抗凝剂结合，每次的采血量大，采血方便，采集的外周血也易于保存。
本发明还提供了一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，抽取肝素钠抗凝剂加入采血袋中，然后热合采血管；用采血针收集外周血加入含有抗凝剂的采血袋中，封口后保存；外周血和肝素钠抗凝剂的体积比为1:0.004。
对比例1
对比例1和实施例1的区别在于将采血袋1替换成采血管。
肝素钠抗凝剂浓度对抗凝效果的影响试验:
1、试验步骤
（1）取3个EP管，编号为1号管、2号管和3号管，向2号管内加入100ul灭菌纯水、3号管内加入300ul灭菌纯水，向3个管内加入100ul浓度为10000iu/ml肝素钠抗凝剂，混匀。
（2）分别从1号管、2号管、3号管内吸取20ul、40ul、80ul悬液放入3个50ml离心管，盖上管盖，编号为1号离心管、2号离心管、3号离心管。
（3）抽取40ml外周血放入新的50ml离心管，快速用电动移液器分别吸取10ml外周血放入1号离心管、2号离心管及3号离心管，观察外周血是否凝血，管内剩余10ml外周血做阳性对照,离心管编号为4号离心管。
2、试验结果
10min后观察发现4号离心管外周血凝血，1号离心管、2号离心管、3号离心管未发生凝血反应。
持续观察24小时观察发现1号离心管、2号离心管、3号离心管未发生凝血反应。1号离心管细胞数量为0.56*108，细胞活率为100%，2号离心管细胞数量为0.55*108，细胞活率为100%，3号离心管细胞数量为0.55*108，细胞活率为100%。
持续观察36小时观察发现1号离心管、2号离心管、3号离心管未发生凝血反应。1号离心管细胞数量为0.65*108，细胞活率为100%，2号离心管细胞数量为0.64*108，细胞活率为100%，3号离心管细胞数量为0.61*108，细胞活率为100%。
持续观察48小时观察发现1号离心管、2号离心管、3号离心管未发生凝血反应。1号离心管细胞数量为0.53*108，细胞活率为98.15%，2号离心管细胞数量为0.57*108，细胞活率为100%，3号离心管细胞数量为0.55*108，细胞活率为97.37%。
3、实验结论
保证外周血与肝素钠活性单位的配比（1ml外周血：20iu肝素钠）不变的情况下，不同浓度肝素钠抗凝剂（10000iu/ml、5000iu/ml、2500iu/ml）均能保证外周血不发生凝血反应，但是浓度为5000iu/ml的肝素钠抗凝剂的离心管内持续观察48h后细胞数量和细胞存活率最高，所以此浓度的肝素钠抗凝剂其抗凝效果最好，后期细胞的存活率也最高。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋，其特征在于，包括采血袋（1）、采血针（2）、采血管（3）和抗凝剂，抗凝剂放置在采血袋（1）中，所述采血管（3）的一端连接采血袋（1），另一端连接采血针（2）。
2.根据权利要求1所述的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋，其特征在于，所述抗凝剂为肝素钠。
3.根据权利要求1所述的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的采集袋，其特征在于，所述采血袋（1）为100-200mL。
4.一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，其特征在于，
抽取肝素钠抗凝剂加入采血袋中，然后热合采血管；用采血针收集外周血加入含有抗凝剂的采血袋中，封口后保存。
5.根据权利要求4所述的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，其特征在于，所述肝素钠抗凝剂的浓度为5000iu/ml。
6.根据权利要求4所述的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，其特征在于，所述外周血和肝素钠抗凝剂的体积比为1:0.004。
7.根据权利要求4所述的一种防止用于NK细胞培养外周血凝血的方法，其特征在于，所述肝素钠抗凝剂的配置方法为：取1g肝素钠加入32ml灭菌纯水，得到肝素钠抗凝剂。
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