CN112379021A - 一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法。该方法对盐酸克林霉素胶囊中的有关物质、溶出度、含量均进行了测定，且可实现对林可霉素，7‑表林可霉素，克林霉素B，脱氢克林霉素，7‑差向克林霉素，克林霉素异构体等杂质的检测。对有关物质进行了方法学验证，包括定量限、检测限、准确度、耐用性。结果表明，本发明的方法灵敏度较高，可以满足分析要求。
Description
技术领域
本发明涉及一种药品的杂质与质量检测方法，特别涉及一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法。本发明属于医药技术领域。
背景技术
克林霉素于1966年由Magerlein等以氯离子取代林可霉素分子中第7位的羟基首次合成而得，70年代其制剂成品上市，该品抗菌活性强，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌具有明显抗菌活性，对衣原体，支原体、恶性疟原虫和弓形虫亦有杀灭作用。在用于治疗多种感染包括危及生命的重症感染患者方面都取得了良好的疗效。日前临床应用的克林霉素有三种制剂:克林霉素的盐酸盐、软脂酸盐和磷酸酯，后两种制剂本身无抗菌作用但是在体内可迅速被水解成活性的克林霉素。
克林霉素对革兰氏阳性需氧菌、链球菌、葡萄球菌具有抗菌活性，对多种厌氧菌、衣原体、支原体、疟原虫和弓形虫也具有抗菌活性。核糖体的50s亚单位，通过抑制肽链的延长而抑制细菌蛋白质的合成，通过去除细菌表面A蛋白质和绒毛状外衣，使其易被吞噬和杀灭。同时对机体免疫系统有增强免疫调节作用，增强多型核白细胞的吞噬和杀菌功能，改变细菌表面活性和抑制细菌毒素的产生。克林霉素在多形核白细胞和巨噬细胞内积聚，使浓度超过细胞外40倍，这也许是克林霉素具有较强杀灭细胞内细菌能力的原因，克林霉素可有效的减少或防止多糖——蛋白复合物的形成，使细菌不易粘附到骨组织，从而易被巨噬细胞和抗生素所杀灭。
克林霉素主要用于治疗金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性球菌和各种厌氧菌引起的感染。临床使用治疗扁桃体炎和咽炎，突出优点是对β溶血性链球菌和其它细菌产生β-内酰胺酶稳定，不像青霉素那样可引起严重过敏。Brook等分别用青霉素、红霉素、克林霉素治疗急性扁桃体炎，一年后发现青霉素14例中12例有反复，红霉素14例8例反复，而克林霉素中15例仅1例反复。用于治疗肺部感染，近年来引起肺部感染的厌氧菌中产生β内酰胺酶的菌株如脆弱杆菌，某些产黑素类杆菌相对为多，克林霉素对绝大多数产酶菌株均有较强的抗菌活性，在肺组织中的浓度又高，是目前治疗厌氧菌引起的肺部感染的最佳药物。在骨关节感染方面，克林霉素在治疗敏感菌所致的急慢性骨髓炎和关节炎时疗效显著。用于治疗痤疮，也有很高疗效。用于治疗心内膜炎、脓毒症、口腔感染、糖尿病及妇科感染等(AZDS)并发症卡氏肺囊虫肺炎的治疗取得了很好效果。1990～1992年Black和Hillier等的临床研究显示，1200例不同病情重度的肺囊虫肺炎患者，联用克林霉素和Primaxin后90％以上患者取得了良好疗效；联用克林霉与小剂量Primaxin可成功预防肺囊虫肺炎的复发。Filice等在实验动物中发现克林霉素对弓形虫感染有效，FerrerS等报道对人弓形虫也有治疗作用。克林霉素对重症感染尤其厌氧感染应静脉滴注、禁忌大剂量快速滴注。与庆大霉素具有协同作用，与TMP联用可提高临床治疗，减少药物的不良反应，本品可成功地与阿米卡星、妥布霉素、甲氧西林、头孢菌素类和氟喹诺酮类等抗菌药品联用。
盐酸克林霉素在合成过程中会产生一些副产物及降解产物，产生的杂质抗菌活性降低、毒性增加，影响临床使用效果，因此有必要对这些杂质进行鉴定和控制。盐酸克林霉素合成中6个有关物质，分别为林可霉素异构体(1)，林可霉素(2)，克林霉素B(3)，7-表克林霉素(4)，克林霉素异构体(5)及去氢克林霉素(6)。除林可霉素，克林霉素B和7-表克林霉素外，其余均未被各国药典收载。
公开号为CN 103487518 A的专利申请公开了一种操作简便，迅速、精确的方法用于检测注射用盐酸克林霉素中的杂质林可霉素、克林霉素B和7-差向克林霉素，采用液相色谱检测上述杂质，HLPC检测条件：流动相为磷酸二氢钾溶液-甲醇体积比为50-60:50-40，杂质林可霉素、克林霉素B和7-差向克林霉素检测波长为208-212nm。然而，该专利申请仅对注射用盐酸克林霉素的杂质林可霉素、克林霉素B和7-差向克林霉素和含量进行了检测，而无法实现对其他杂质的检测。
为此，本发明提出了一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与含量检测方法，该方法对盐酸克林霉素胶囊中的有关物质、溶出度、含量均进行了测定，且对林可霉素，7-表林可霉素，克林霉素B，脱氢克林霉素，7-差向克林霉素，克林霉素异构体等杂质定位方法及限度等进行了研究。本发明方法灵敏度较高，可以满足分析要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法，包括以下步骤：
(1)溶液配制：
取装量差异项下内容物，混匀，精密称取适量，加流动相溶解并稀释制成每lml中含内容物4.0mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取克林霉素适量，用流动相定量稀释制成每lml中含80μg克林霉素的溶液，作为对照溶液；
(2)液相色谱检测
色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以pH值7.3～7.7，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比50-60：40-50的混合溶液为流动相；
流速：为每分钟0.8～1.2mL；
检测波长：为210nm；
柱温：25～35℃；
(3)杂质以及克林霉素的含量检测：
精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，按外标法以峰面积计算对所含有的杂质以及克林霉素的含量进行检测；
(4)溶出度检测
溶液配制：取盐酸克林霉素胶囊，置沉降篮内，按照溶出度与释放度测定法(中国药典2015年版通则0931第二法)，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量滤过，作为供试品溶液；另取克林霉素对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
检测：精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算每粒的溶出量，色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以pH值7.3～7.7，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比50-60：40-50的混合溶液为流动相；
流速：为每分钟0.8～1.2mL；
检测波长：为210nm。
柱温：35～45℃。
其中，优选的，步骤(2)中是以pH值7.5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比55：45的混合溶液为流动相。
其中，优选的，步骤(2)中的流速为每分钟1.0mL。
其中，优选的，步骤(2)中的柱温为30℃。
其中，优选的，步骤(4)中是以pH值7.5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比55：45的混合溶液为流动相。
其中，优选的，步骤(4)中的流速为每分钟1.0mL。
其中，优选的，步骤(4)中的柱温为40℃。
其中，优选的，所述的杂质包括林可霉素异构体，林可霉素，克林霉素B，7-表林克霉素，克林霉素异构体及去氢克林霉素。
其中，优选的，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，林可霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.5倍，7-表林可霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，克林霉素B峰面积不大于对照溶液主峰面积，脱氢克林霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，7-差向克林霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.75倍，克林霉素异构体峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，其他单个杂质峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.05倍，各杂质峰面积的和不大于对照溶液主峰面积的3倍时，认为产品质量合格，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积的0.025倍的峰可忽略不计。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明的方法对盐酸克林霉素胶囊中的有关物质、溶出度、含量均进行了测定，且能够实现对林可霉素，7-表林可霉素，克林霉素B，脱氢克林霉素，7-差向克林霉素，克林霉素异构体等杂质的检测。对有关物质进行了方法学验证，包括定量限、检测限、准确度、耐用性。结果表明，本方法灵敏度较高，可以满足分析要求。
附图说明
图1为杂质定位色谱图；
图2为检测限色谱图；
图3为林可霉素、7-差向克林霉素准确度低浓度色谱图；
图4为林可霉素、7-差向克林霉素准确度中浓度色谱图；
图5为林可霉素、7-差向克林霉素准确度高浓度色谱图；
图6为7-表林可霉素、克林霉素B准确度低浓度色谱图；
图7为7-表林可霉素、克林霉素B准确度中浓度色谱图；
图8为7-表林可霉素、克林霉素B准确度高浓度色谱图；
图9为脱氢克林霉素、克林霉素异构体准确度低浓度色谱图；
图10为脱氢克林霉素、克林霉素异构体准确度中浓度色谱图；
图11为脱氢克林霉素、克林霉素异构体准确度高浓度色谱图；
图12为耐用性流速0.8ml/min色谱图；
图13为耐用性流速1.2ml/min色谱图；
图14为耐用性柱温25℃色谱图；
图15为耐用性柱温35℃色谱图；
图16为耐用性pH 7.3色谱图；
图17为耐用性pH 7.7色谱图；
图18为耐用性流动相40％色谱图；
图19为耐用性流动相50％色谱图；
图20为耐用性色谱柱waters色谱图；
图21为耐用性色谱柱diamonsil色谱图；
图22为溶出度色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将随着描述而清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。
实施例1
1.有关物质测定
a色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(每lml中含磷酸二氢钾6.8mg，用25％的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5)-乙腈(体积比55：45)为流动相；
流速：为每分钟1.0mL；
检测波长：为210nm；
柱温：30℃。
b溶液配制：
取装量差异项下内容物，混匀，精密称取适量，加流动相溶解并稀释制成每lml中含内容物4.0mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取适量克林霉素，用流动相定量稀释制成每lml中含80μg克林霉素的溶液，作为对照溶液。
c已知杂质定位方法及限度：
精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，杂质定位色谱图如图1所示。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，林可霉素(相对保留时间约为0.3)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(1.0％)，7-表林可霉素(相对保留时间约为0.37)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍(0.5％)，克林霉素B(相对保留时间约为0.65)峰面积不得大于对照溶液主峰面积(2.0％)，脱氢克林霉素(相对保留时间约为0.73)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍(0.5％)，7-差向克林霉素(相对保留时间约为0.8)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.75倍(1.5％)，克林霉素异构体(相对保留时间约为0.86)峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍(0.5％)，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.05倍(0.10％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(6.0％)。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积的0.025倍(0.05％)的峰可忽略不计。
d有关物质检查方法学：
(d-1)定量限、检测限
取杂质对照品贮备液，加流动相稀释逐级成不同浓度的溶液，直至检测出信噪比(S/N)≥3时的浓度，即为检测限；检测出信噪比(S/N)≥10时的浓度，即为定量限。
可接受标准：定量限：S/N≥10
定量限验证结果：林可霉素0.08μg/ml(0.002％)、7-表林可霉素0.14μg/ml(0.004％)、克林霉素B 0.24μg/ml(0.006％)、z-脱氢克林霉素0.12μg/ml(0.003％)、E-脱氢克林霉素0.11μg/ml(0.003％)、7-差向克林霉素0.26μg/ml(0.006％)、克林霉素异构体0.27μg/ml(0.007％)、克林霉素0.32μg/ml(0.007％)。
可接受标准：定量限重复性：保留时间RSD≤1.0％，峰面积RSD≤10.0％。
验证结果：6份定量限溶液，各成分保留时间RSD均小于1.0％，峰面积RSD均小于10.0％，本法定量限重复性良好。
可接受标准：检测限：S/N≥3
验证结果：结果如图2所示。检测限：林可霉素0.03μg/ml(0.001％)、7-表林可霉素0.04μg/ml(0.001％)、克林霉素B 0.07μg/ml(0.002％)、Z-脱氢克林霉素0.04μg/ml(0.001％)、E-脱氢克林霉素0.03μg/ml(0.001％)、7-差向克林霉素0.08μg/ml(0.002％)、克林霉素异构体0.08μg/ml(0.002％)、克林霉素0.09μg/ml(0.002％)。说明本方法灵敏度较高，可以满足分析要求。
(d-2)准确度
对照品贮备液的配制：
分别称取杂质对照品，加流动相溶解并稀释至刻度，制得7-差向克林霉素对照品贮备液(0.1mg/mL)、林可霉素对照品贮备液(0.36mg/mL)、克林霉素B对照品贮备液(0.5mg/mL)、7-表林可霉素对照品贮备液(0.16mg/mL)、脱氢克林霉素对照品贮备液(0.16mg/mL)、克林霉素异构体对照品贮备液(0.16mg/mL)，备用。
对照品溶液的配制：
7-差向克林霉素及林可霉素对照品溶液：精密量取7-差向克林霉素对照品贮备液2.0ml，林可霉素对照品贮备液1.2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制2份。
7-表林可霉素及克林霉素B对照品溶液：精密量取7-表林可霉素对照品贮备液1.5ml，克林霉素B对照品贮备液1.3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制2份。
脱氢克林霉素及克林霉素异构体对照品溶液：精密量取脱氢克林霉素对照品贮备液1.3ml，克林霉素异构体对照品贮备液1.5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制2份。
供试品溶液的配制：
供试品贮备液的配制：取供试品内容物约0.6g，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
7-差向克林霉素及林可霉素：
1)80％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-差向克林霉素对照品贮备液0.6ml，林可霉素对照品贮备液0.8ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
2)100％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-差向克林霉素对照品贮备液1.0ml，林可霉素对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
3)120％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-差向克林霉素对照品贮备液1.4ml，林可霉素对照品贮备液1.2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
7-表林可霉素及克林霉素B：
1)80％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-表林可霉素对照品贮备液0.7ml，克林霉素B对照品贮备液0.7ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
2)100％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-表林可霉素对照品贮备液1.0ml，克林霉素B对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
3)120％供试品：精密量取供试品储备液2ml，7-表林可霉素对照品贮备液1.3ml，克林霉素B对照品贮备液1.3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
脱氢克林霉素及克林霉素异构体：
1)80％供试品：精密量取供试品储备液2ml，脱氢克林霉素对照品贮备液0.7ml，克林霉素异构体对照品贮备液0.7ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
2)100％供试品：精密量取供试品储备液2ml，脱氢克林霉素对照品贮备液1.0ml，克林霉素异构体对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
3)120％供试品：精密量取供试品储备液2ml，脱氢克林霉素对照品贮备液1.3ml，克林霉素异构体对照品贮备液1.3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，平行配制3份。
精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，依次注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率及RSD％。
可接受标准：林可霉素、克林霉素B、7-差向克林霉素回收率：92％～105％，7-表林可霉素、脱氢克林霉素、克林霉素异构体回收率：90％～108％，RSD≤2.0％。
验证结果：林可霉素、克林霉素B、7-差向克林霉素：低、中、高三个不同浓度(限度浓度的80％、100％、120％)的样品溶液的回收率均在92％～105％范围内，RSD分别为1.32％、1.93％、1.50％。
7-表林可霉素、脱氢克林霉素、克林霉素异构体：低、中、高三个不同浓度(限度浓度的80％、100％、120％)的样品溶液的回收率均在90％～108％范围内，RSD分别为1.65％、1.32％、1.04％，色谱图如图3-11所示。
(d-3)耐用性
空白溶剂：流动相
对照品溶液：取克林霉素对照品(约含克林霉素10mg)，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配2份。
供试品溶液：取供试品内容物300mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配2份
精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，依次注入液相色谱仪，记录色谱图。
可接受标准：系统适用性溶液中各峰间的分离度＞2.0各杂质含量极差＜0.1％。
验证结果：耐用性流速0.8ml/min以及1.2ml/min下色谱图如图12、13所示。流速在0.8ml/min～1.2ml/min内，系统适用性溶液中各杂质与主成分间的分离度均大于2.0。供试品溶液中各已知杂质均可检出，杂质数量均为6个，各杂质含量极差均小于0.1％；表明流速在该范围内耐用。
柱温在25℃～35℃内，系统适用性溶液中各杂质与主成分间的分离度均大于2.0。供试品溶液中各已知杂质均可检出，杂质数量均为6个，各杂质含量极差均小于0.1％；表明柱温在该范围内耐用，色谱图如图14和15所示。
水相pH在7.3～7.7内，系统适用性溶液中各杂质与主成分间的分离度均大于2.0。供试品溶液中各已知杂质均可检出，杂质数量均为6个，各杂质含量极差均小于0.1％；表明水相pH在该范围内耐用，色谱图如图16和17所示。
有机相比例在40％～50％内，系统适用性溶液中各杂质与主成分间的分离度均大于2.0。供试品溶液中各已知杂质均可检出，杂质数量均为6个，各杂质含量极差均小于0.1％；表明有机相比例在该范围内耐用，色谱图如图18和19所示。
不同品牌的C18色谱柱，系统适用性溶液中各杂质与主成分间的分离度均大于2.0。供试品溶液中各已知杂质均可检出，杂质数量均为6个，各杂质含量极差均小于0.1％；表明所选择色谱柱均耐用，色谱图如图20和21所示。
2.含量测定
1)盐酸克林霉素胶囊的制备
生产配方及组成如表1所示：
表1盐酸克林霉素胶囊批处方组成
| 处方组成 | 批用量(kg) |
| 盐酸克林霉素 | 30.00 |
| 乳糖 | 33.96 |
| 玉米淀粉 | 18.80 |
| 滑石粉 | 2.00 |
| 硬脂酸镁 | 0.64 |
| 明胶空心胶囊 | 200000粒 |
| 共制成 | 20万粒 |
生产工艺：
(1)预处理
将玉米淀粉、乳糖、盐酸克林霉素经40-60目筛分机筛分，筛分后的乳糖、玉米淀粉、盐酸克林霉素分别置洁净容器中，标明标识卡，备用。
(2)备料
按处方量称取预处理后的玉米淀粉、乳糖、盐酸克林霉素；按批处方量分别准确称取滑石粉和硬脂酸镁，备用。
(3)混合
先核对品名、规格、批号、数量等，确认无误后，将称量好的盐酸克林霉素、干燥的淀粉、乳糖、滑石粉依次放到混合机内，设定转速800-1400r/min，混合10-20分钟，加入硬脂酸镁继续混合5-10分钟，出料，装入双层洁净袋中，取样，检验，将装好的中间产品密封，挂好标识卡，转入中间站，待验。
(4)充填、抛光
领取检验合格的盐酸克林霉素胶囊药粉、明胶空心胶囊，并核对品名、批号、数量等状态信息，并确认无误。
设备安装囊冲头，检查全自动胶囊充填机上、下模块、刮粉器、计量盘、计量杆等各部件是否安装正确，自动上料及各运动部件安装牢靠，点动运行无异常。
根据中间产品药粉检验结果计算充填理论装量，每粒装量按克林霉素计算应为0.15g，装量差异为理论装量的±6％。
(5)铝塑包装(铝塑包装：9粒/板)
铝塑岗位人员按生产指令将该品种的铝塑模具(规格为9粒/板)、“批号”、“有效期至”等字粒安装好，并检查设备各部件是否完好。核对转入的盐酸克林霉素胶囊粒、PVC、铝箔的品名、物料编码、规格、数量，确认无误后准备生产。用自动高速泡罩包装机进行泡罩包装。
在生产过程中，随时检查铝塑板的外观，文字打印清晰、热合严密、起泡冲裁等情况。自检铝塑板合格后，装入周转箱中，计数，标明标识卡，转入中转室，请验，检验。
按照上述方法分别制备了三批中试样品，并用以下方法进行检测。
2)杂质与质量检测
a溶液配制：
供试品溶液的配制：取装量差异项下内容物，混匀，精密称取适量，加流动相溶解并稀释制成每lml中含内容物4.0mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
对照溶液的配制：精密量取适量克林霉素，用流动相定量稀释制成每lml中含80μg克林霉素的溶液，作为对照溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算克林霉素(C18H33C1N2O5S)的含量。
b杂质对照品贮备液的配制：
分别称取杂质对照品，加流动相溶解并稀释至刻度，制得7-差向克林霉素对照品贮备液(0.1mg/mL)、林可霉素对照品贮备液(0.36mg/mL)、克林霉素B对照品贮备液(0.5mg/mL)、7-表林可霉素对照品贮备液(0.16mg/mL)、脱氢克林霉素对照品贮备液(0.16mg/mL)、克林霉素异构体对照品贮备液(0.16mg/mL)，备用。
c杂质对照品溶液的配制：
1.7-差向克林霉素及林可霉素对照品溶液：精密量取7-差向克林霉素对照品贮备液2.0ml，林可霉素对照品贮备液1.2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。
2.7-表林可霉素及克林霉素B对照品溶液：精密量取7-表林可霉素对照品贮备液1.5ml，克林霉素B对照品贮备液1.3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。
3.脱氢克林霉素及克林霉素异构体对照品溶液：精密量取脱氢克林霉素对照品贮备液1.3ml，克林霉素异构体对照品贮备液1.5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。
d色谱条件：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(每lml中含磷酸二氢钾6.8mg，用25％的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5)-乙腈(体积比55：45)为流动相；柱温为30℃；流速每分钟1ml；检测波长为210nm；
e系统适用性：
取克林霉素对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每lml中含4.0mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；克林霉素主峰的保留时间约为10分钟。克林霉素B峰(相对保留时间约为0.65)与7-差向克林霉素峰(相对保留时间约为0.8)和7-差向克林霉素峰与克林霉素峰间的分离度均应大于3.0。
分别按照上述方法对本发明制备得到的盐酸克林霉素胶囊三批中试样品以及不同厂家生产的盐酸克林霉素胶囊中的有关物质以及含量进行检测，结果如表2以及表3所示。
表2盐酸克林霉素胶囊三批中试样品检验结果
表3不同厂家检测结果
3.溶出度
a色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(每lml中含磷酸二氢钾6.8mg，用25％的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5)-乙腈(55：45)为流动相；
流速：为每分钟1.0mL；
检测波长：为210nm；
柱温：40℃。
b溶液配制：
取本发明制备得到的盐酸克林霉素胶囊1粒，置沉降篮内，照溶出度与释放度测定法(中国药典2015年版通则0931第二法)，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量滤过，作为供试品溶液。另取克林霉素对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
c检测：
精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算每粒的溶出量。限度为标示量的80％，应符合规定，溶出度色谱图如图22所示。
Claims (9)
1.一种盐酸克林霉素胶囊的杂质与质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)溶液配制：
取装量差异项下内容物，混匀，精密称取适量，加流动相溶解并稀释制成每lml中含内容物4.0mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取克林霉素适量，用流动相定量稀释制成每lml中含80μg克林霉素的溶液，作为对照溶液；
(2)液相色谱检测
色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以pH值7.3～7.7，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比50-60：40-50的混合溶液为流动相；
流速：为每分钟0.8～1.2mL；
检测波长：为210nm；
柱温：25～35℃；
(3)杂质以及克林霉素的含量检测：
精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，按外标法以峰面积计算对所含有的杂质以及克林霉素的含量进行检测；
(4)溶出度检测
溶液配制：取盐酸克林霉素胶囊，置沉降篮内，按照溶出度与释放度测定法(中国药典2015年版通则0931第二法)，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量滤过，作为供试品溶液；另取克林霉素对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
检测：精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算每粒的溶出量，色谱条件如下：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以pH值7.3～7.7，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比50-60：40-50的混合溶液为流动相；
流速：为每分钟0.8～1.2mL；
检测波长：为210nm。
柱温：35～45℃。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中是以pH值7.5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比55：45的混合溶液为流动相。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的流速为每分钟1.0mL。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的柱温为30℃。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中是以pH值7.5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比55：45的混合溶液为流动相。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的流速为每分钟1.0mL。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的柱温为40℃。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的杂质包括林可霉素异构体，林可霉素，克林霉素B，7-表林克霉素，克林霉素异构体及去氢克林霉素。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，林可霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.5倍，7-表林可霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，克林霉素B峰面积不大于对照溶液主峰面积，脱氢克林霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，7-差向克林霉素峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.75倍，克林霉素异构体峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.25倍，其他单个杂质峰面积不大于对照溶液主峰面积的0.05倍，各杂质峰面积的和不大于对照溶液主峰面积的3倍时，认为产品质量合格，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积的0.025倍的峰可忽略不计。
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