CN112353940A - 一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用 - Google Patents

一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用 Download PDF

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Abstract

本公开揭示了一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用，属于生物技术领域。一种用于预防或治疗抑郁症的药物，含有CAPON抑制剂。具体地，该CAPON抑制剂可以是能够干扰CAPON表达的RNA或其前体、减少CAPON和nNOS耦联的CAPON蛋白或其编码序列或CAPON的特异性抗体。

Description

一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用
技术领域
本公开涉及生物技术领域，具体涉及一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用。
背景技术
抑郁症是一种普遍存在，以显著持久的心境低落、身体乏力、悲伤、失眠和快感缺失等为主要临床症状的情感障碍类疾病，世界卫生组织的流行病学数据显示，约3.5亿人患有抑郁症，具有极高的社会危害性。
海马近年来被认为是研究抑郁症病理生理学的关键脑区，在众多抑郁症的动物模型以及抑郁症病人中都发现了海马体积的减小、神经元萎缩(包括树突萎缩、分枝减少和树突棘丢失等)、突触可塑性的改变。
发明内容
针对现有技术的不足，本公开提出了一种用于预防或治疗抑郁症的药物及其应用。
本公开的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用于预防或治疗抑郁症的药物。
可选地，所述CAPON抑制剂为能够干扰CAPON表达的RNA或其前体。
可选地，所述RNA为CAPON-RNAi，其序列为：
5’-GCAGCAACAACAGACACAA-3’(SEQ ID No.1)；
5’-GGACGGTGTCAAGGTGATT-3’(SEQ ID No.2)；
5’-GGGAATGACATTCTGGAAT-3’(SEQ ID No.3)；
5’-GGGTGACAGTTTGGATGAT-3’(SEQ ID No.4)。
可选地，所述CAPON抑制剂为减少CAPON和nNOS耦联的CAPON蛋白或其编码序列。
可选地，所述CAPON抑制剂为CAPON的特异性抗体。
可选地，所述序列为CAPON序列选自SEQ ID No.6的氨基酸序列中第379-503位的、第484-503位的和第492-503位的。
可选地，所述CAPON抑制剂为多克隆抗体或单克隆抗体。
可选地，所述CAPON抑制剂为多核苷酸、多肽、表达载体、小分子化合物中的一种或多种。
可选地，所述药物为在海马局部给药的剂型和/或全身给药的剂型。
另外，本公开还揭示了上述抑制剂在预防或治疗抑郁症的药物中的应用，以及筛选或测试治疗抑郁症的有效成分的方法，包括：
一种筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分的方法，包括以下步骤：构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，且所述非人动物模型中的海马CAPON是高表达的；所述高表达指≥150％(按mRNA水平或蛋白水平)；
观察所述非人动物模型中的抑郁表型，并与对照组进行比较。
一种筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分的方法，包括以下步骤：构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，且提供空白对照组作为对比，评估所述测试物作为CAPON抑制剂对所述非人动物模型的CAPON抑制效果。
附图说明
下面结合附图对本公开作进一步的说明。
图1显示了抑郁小鼠海马中CAPON表达以及CAPON与nNOS耦联增加。(A)Westernblot实验显示慢性温和应激(CMS)诱导的抑郁小鼠海马CAPON表达显著高于对照组。组织中大量表达的actin被用于加载控制。蛋白表达进行定量标准化。(B)CO-IP实验显示CMS诱导的抑郁小鼠海马nNOS与CAPON耦联明显高于对照组。蛋白表达进行定量标准化，显示慢性温和应激(CMS)诱导的抑郁小鼠海马CAPON mRNA水平增加。(C)海马中CAPON mRNA的qPCR分析。所有数据均表示为平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与对照组相比。
图2显示了CAPON在神经元中的分布以及对神经元突触可塑性的影响。(A)免疫荧光染色显示CAPON免疫阳性信号在神经元中的分布。(B)CAPON过表达降低神经元树突棘密度。所有数据均表示为平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与对照组相比。
图3海马神经元中过量表达CAPON导致小鼠出现抑郁表型。(A)增加海马神经元CAPON表达诱导小鼠在悬尾实验中的不动时间增加，表现出显著的抑郁表型。(B)海马神经元CAPON过表达小鼠在强迫游泳实验中不动时间增加，表现出显著的抑郁表型。所有数据均表示为平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与对照组相比。
图4下调海马神经元中CAPON表达有效缓解抑郁症状。(A)敲减海马神经元中CAPON表达逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在悬尾实验中表现出的抑郁表型。(B)敲减海马神经元中CAPON表达逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在强迫游泳实验中表现出的抑郁表型。
图5阻断海马nNOS-CAPON耦联有效缓解抑郁症状。(A-B)将AAV-CAPON-125C-GFP或者AAV-CAPON-20C-GFP输入小鼠海马组织，阻断海马CAPON与nNOS耦联。(A)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在悬尾实验中表现出的抑郁表型。(B)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在强迫游泳实验中表现出的抑郁表型。
图6阻断海马nNOS-CAPON耦联有效缓解抑郁症状。(A-B)将Tat-CAPON-12C输入小鼠海马组织，阻断海马CAPON与nNOS耦联。(A)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在悬尾实验中表现出的抑郁表型。(B)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在强迫游泳实验中表现出的抑郁表型。
图7为不同CAPON shRNA敲除效率的体外验证。运用蛋白免疫印迹的方法，检测海马组织中CAPON被不同序列shRNA敲除的效率。
图8为不同nNOS-CAPON解耦联剂的解耦联效率验证。运用免疫共沉淀结合蛋白印迹的方法，检测发现不同解耦联剂显著减少海马组织中nNOS与CAPON相互作用。
图9为小分子化合物阻断海马nNOS-CAPON耦联有效缓解抑郁症状。(A)本公开的示例中的小分子化合物逆转慢性束缚应激(CRS)导致的海马CAPON与nNOS耦联增加。(B)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在悬尾实验中表现出的抑郁表型。(C)阻断海马nNOS-CAPON耦联逆转慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠在强迫游泳实验中表现出的抑郁表型。
具体实施方式
下面将结合本公开实施例中的附图，对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本公开一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本公开保护的范围。
在本公开的一个示例中，揭示了一种非人类动物实验模型及其实验方法，具体地，例如为是一种小鼠实验模型，实验步骤如下所示。
首先，取成年(6-8周龄)C57BL/6及ICR小鼠，用于行为测试：5只/笼，12小时明暗周期(7am-7pm有光)。所有小鼠都能够自由摄取稳定的水和食物，所有的动物实验经过东南大学动物保护和使用委员会的批准。
构建慢性温和应激模型，其造模方法可以是为期4周的包括禁水、禁食、限制活动、湿笼、斜笼、昼夜颠倒和强迫游泳等应激处理。最后一次造模结束后24h，进行FST及TST测试，测试结束后24h取出海马组织，进行表达量分析。
构建慢性束缚应激模型，举例而言，可将成年C57BL/6雄性小鼠依据实验分组后，每天给予应激组2小时的束缚应激，连续14天，对照组每天放入新笼子2小时。最后一次造模结束后24h，进行TST测试，测试结束后24h取出海马组织，进行表达量分析。
将上述海马组织细胞样品用1×PBS洗3次后，在4％多聚甲醛中固定15min，随后1×PBS洗3次后室温封闭1h，加入一抗CAPON(1:1000,Abcam)4℃孵育过夜。次日吸去一抗后用1×PBS洗3次后，加入荧光二抗Cy3(1:200,Jackson)室温避光孵育2h。1×PBS洗3次后封片。
小鼠经异氟烷麻醉后，断头取脑。冰上快速分离海马组织并冻于-80℃中。样品在RIPA裂解液内，其中裂解液的成分例如为20mMTris-HCl[pH 7.5]、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1％NP-40、1％脱氧胆酸钠(sodiumdeoxycholate)、1mM PMSF、10μg/ml抑酶肽(aprotinin)、1μg/ml抑肽素(pepstatinA)和1μg/ml亮抑蛋白酶肽(leupeptin)。完成组织破碎裂解后，12000rpm离心15min取上清。用BCA法测定蛋白浓度后，以每孔15-20μg蛋白上样，10％SDS-PAGE胶进行电泳分离，PVDF膜转印做Western印迹。所用一抗为anti-CAPON(1:10000,Abcam)，anti-nNOS(1:4000,Millipore),anti-Actin(1:40000,Abcam)，对于免疫印迹结果的定量，使用Image J软件进行统计分析。
然后再将按上述方法提取的海马组织蛋白上清中加入nNOS抗体，4℃振摇孵育过夜。次日在蛋白上清中加入Protein G-琼脂糖珠，4℃孵育10h。5000rpm离心后将蛋白上清吸出，将琼脂糖珠-蛋白-抗体复合物用1×PBS重悬清洗5-6次。最后12000rpm离心，弃去上清，用50μl 1×PBS重悬复合物，加5×loading buffer 100℃水浴变性10min，用于WesternBlotting分析。
小鼠麻醉后断头，置冰上快速取双侧海马置于玻璃匀浆器，按10mg组织加1mlTRIzol的比例彻底匀浆至无明显组织块，静置5min，使组织完全裂解。加入200μl氯仿，振荡混匀至乳浊液，静置15min，4℃，12000g,离心10min，弃去上清，RNA沉淀于管底。加入l ml预冷的75％乙醇，振荡离心管，清洗沉淀，4℃，7500g离心5min，弃上清。将沉淀晾干，用20μl无RNA酶水溶解RNA沉淀。取一部分进行紫外定量及琼脂糖电泳以鉴定RNA纯度及完整性，另每组取10μl RNA样品置薄壁管中，加入0.05μg/μl Oligo(dT)2μl，混匀后于70℃加5min，立即冰浴；离心，加入以下试剂：5×M-MLV buffer 4μl，10mmol/L dNTP lμl,40u/μl RNasin0.5ul,200u/μl M-MLV lμl,RNase free water1.5μl。混匀后于37℃反应1小时；最后95℃加热10min。逆转录反应结束后进行PCR扩增，扩增引物见表1所示。
表1
Figure BDA0002790918680000061
小鼠麻醉后断头，置冰上快速取脑组织于等量A、B液中室温避光浸泡2周后，取出脑组织于C液中4℃再次浸泡72h。振荡切片成100μm厚的脑片并刷片至包被处理的载玻片上晾干，铺上少量C液；待晾干后先用DDW洗2次×4min，在脑片上滴加染色液(D液：E液：DDW＝1：1：2)避光染10min，再次放入DDW中洗2次×4min。分别于50％，75％，95％乙醇中脱水4min后放入无水乙醇中继续脱水10min。二甲苯处理12min后用中性树胶封片。
制备CAPON的过表达病毒AAV-hSyn-CAPON-L-GFP、CAPON的过表达片段病毒AAV-hSyn-CAPON-20C-GFP和AAV-hSyn-CAPON-125C-GFP。将CAPON-L、CAPON-20C和CAPON-125C基因克隆进pAOV.SYN.EGFP.3FLAG质粒得到pAOV.SYN.CAPON-L.EGFP.3FLAG、pAOV.SYN.CAPON-20C.EGFP.3FLAG和pAOV.SYN.CAPON-125C.EGFP.3FLAG，并由和元生物技术(上海)股份有限公司包被成AAV病毒。
CAPON干扰病毒AAV-hSyn-CAPON-shRNA–EGFP(CAPON的干扰RNA-shRNA：5’-GGGTGACAGTTTGGATGAT-3’)，对照病毒AAV-hSyn-EGFP均由上海泰廷生物科技有限公司制备质粒和包被。Tat-CAPON12C(YGRKKRRQRRRELGDSLDDEIAV)重组蛋白及对照肽Tat-CAPON12C/A22D(YGRKKRRQRRRELGDSLDDEIDV)购买自上海吉尔多肽有限公司。
小鼠注射上述病毒：小鼠经异氟烷麻醉后，固定于立体定位仪上(RWD)。每只小鼠每侧海马注入1ul纯化浓缩的AAV病毒(～10E12感染单位/ml)，海马立体定位坐标(前后距离Bregma：-2.3mm(AP)，左右旁开±1.5mm(ML)，皮层表面往下-2.0mm(DV))。使用瑞沃德微量进样器缓慢注入(100nl/min)，注射结束留针5min，然后再5min内缓慢移出注射器针头。术后3周，开展行为学实验以及随后的组化分析实验。
其中行为学实验的实验项目例如为但不限于强迫游泳测试与悬尾测试。
在本示例中，小鼠强迫游泳圆柱形容器的直径为12cm，高25cm。测试水深为14cm，水温23-24℃。摄像头从侧边记录小鼠在6min内的游泳情况。采用双盲方式统计小鼠游泳6min内后5min的不动时间，即动物的漂浮姿势或者四肢完全没有活动的时间。
在本示例中，可用医用胶带固定小鼠尾部，距离小鼠尾巴尖端三分之一位置，放于离地面50cm的水平挂钩台使小鼠的头部向下自然垂落，并保持周围环境对小鼠无影响。小鼠在该状态下会极力挣扎并企图摆脱束缚，随后慢慢放弃挣扎从而进入绝望静止状态。采用双盲方式统计小鼠悬尾7min内后6min的不动时间，即动物四肢完全没有活动的时间。
本示例中的所有数据都以平均值±SEM。对于所有的行为数据，采用two-tailedStudent's t-tests或one-way ANOVA followed by Tukey's post hoc test。
针对于上述示例中的抑郁小鼠，下面分析小鼠模型的构建情况。如图1显示了在动物体内观察抑郁小鼠海马中CAPON表达以及CAPON与nNOS耦联。图1A是蛋白质免疫印迹及统计结果，图1B是qPCR的结果，共同显示了CMS诱导的抑郁小鼠海马中CAPON蛋白以及mRNA水平表达显著高于对照组。图1C是蛋白质免疫共沉淀结果，显示了CMS诱导的抑郁小鼠海马中CAPON与nNOS耦联显著增加。
图2A运用免疫荧光染色显示了CAPON分布在神经元的胞浆及突起上。图2B利用高尔基染色显示了CAPON过表达降低神经元树突棘密度。从而揭示了CAPON在神经元中的分布以及对神经元突触可塑性的影响。
在本公开的一些示例中，可以运用立体定位技术将AAV-hSyn-CAPON-L-GFP病毒注射至海马验证海马神经元中CAPON对抑郁行为的调控作用。图3A显示增加海马神经元CAPON表达诱导小鼠在悬尾实验中的不动时间增加。图3B显示增加海马神经元CAPON表达诱导小鼠在强迫游泳实验中的不动时间增加，能够证明海马神经元中过量表达CAPON导致小鼠出现抑郁表型。
在本公开的一些示例中，可以采用AAV2/5病毒表达CAPON的短发卡RNA(shRNA)来下调CRS模型小鼠海马CAPON蛋白的表达水平，具体地，可以采用如下步骤。
将根据下表中构建的4个CAPON的干扰RNA，即SEQ ID No.1～4，的shRNA克隆到WX231-L载体(购自于上海泰廷生物科技有限公司，Cat#：WX231)上：
Figure BDA0002790918680000091
克隆采用的引物序列如下表2所示：
表2
Figure BDA0002790918680000101
由上海和元生物科技股份有限公司将CAPON-shRNA包装成AAV病毒并用于CAPON功能下调实验。
利用立体定位技术将AAV-hSyn-CAPON-shRNA-GFP及AAV hSyn-GFP对照病毒注射至成年C57BL/6雄性小鼠海马并恢复2周后，连续14天每天给予应激组2小时的束缚应激，对照组每天放入新笼子2小时。最后一次造模结束后24h，进行TST测试，测试结束后24h取出海马组织，进行表达量分析。
图7所示不同CAPON shRNA敲除效率的体外验证。运用蛋白免疫印迹的方法，检测体海马组织中CAPON被不同序列shRNA敲除的效率。敲除效率为CAPON-shRNA-4>CAPON-shRNA-3>CAPON-shRNA-1>CAPON-shRNA-2.
如图4所示，CRS应激会导致小鼠在悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显增加，显示抑郁表型。利用AAV-hSyn-CAPON-shRNA-GFP病毒下调海马CAPON表达后可明显缓解小鼠的抑郁表型。通过上述实验能够进一步地证明CAPON的表达与抑郁表型的关系。
在本公开的一些示例中，可以通过构建CAPON抑制剂病毒AAV-hSyn-CAPON-125C-GFP和AAV-hSyn-CAPON-20C-GFP减少CAPON和nNOS耦联，具体地可以按照如下步骤操作。
将CAPON-20C和CAPON-125C基因克隆进pAOV.SYN.EGFP.3FLAG质粒得到pAOV.SYN.CAPON-20C.EGFP.3FLAG和pAOV.SYN.CAPON-125C.EGFP.3FLAG，随后将其与pAAVHelper质粒以及AAV Rep/Cap表达质粒共同转染AAV-293细胞系。经纯化后得到稳定的AAV病毒。
克隆采用的引物序列如下表3所示：
表3
Figure BDA0002790918680000111
利用立体定位技术将AAV-hSyn-CAPON-125C-GFP和AAV-hSyn-CAPON-20C-GFP及AAV-GFP对照病毒注射至成年C57BL/6雄性小鼠海马并恢复2周后，连续14天每天给予应激组2小时的束缚应激，对照组每天放入新笼子2小时。最后一次造模结束后24h，进行TST测试，测试结束后24h取出海马组织，进行表达量分析。
图8所示，运用免疫共沉淀结合蛋白印迹的方法，检测发现AAV-hSyn-CAPON-125C-GFP和AAV-hSyn-CAPON-20C-GFP解耦联剂显著减少海马组织中nNOS与CAPON相互作用。
图5所示，CRS应激会导致小鼠在悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显增加，显示抑郁表型。利用AAV-hSyn-CAPON-125C-GFP和AAV-hSyn-CAPON-20C-GFP解耦联剂阻断海马nNOS与CAPON耦联后可明显缓解小鼠的抑郁表型。
在本公开的一些示例中，可以通过阻断海马nNOS-CAPON耦联以有效缓解抑郁症状。举例而言，可以构建小分子肽，其中Tat-CAPON12C(YGRKKRRQRRRELGDSLDDEIAV)重组蛋白及对照肽Tat-CAPON12C/A22D(YGRKKRRQRRRELGDSLDDEIDV)购买自上海吉尔多肽有限公司。
利用立体定位技术将Tat-CAPON-12C解耦联剂以及对照肽Tat-CAPON-12C/A22D注射至成年C57BL/6雄性小鼠海马并恢复2周后，连续14天每天给予应激组2小时的束缚应激，对照组每天放入新笼子2小时。最后一次造模结束后24h，进行TST测试，测试结束后24h取出海马组织，进行表达量分析。
图8所示，运用免疫共沉淀结合蛋白印迹的方法，检测发现Tat-CAPON-12C解耦联剂相对于其对照肽Tat-CAPON-12C/A22D显著减少海马组织中nNOS与CAPON相互作用。
图6所示，CRS应激会导致小鼠在悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显增加，显示抑郁表型。利用Tat-CAPON-12C解耦联剂阻断海马nNOS与CAPON耦联后可明显缓解小鼠的抑郁表型。
在本公开的一些示例中，可以通过构建小分子化合物，能够缓解小鼠的抑郁表型，其结构通式为：
Figure BDA0002790918680000131
其中，R1为甲基、乙基、丙基或异丙基；R2为异丙基或异丁基；R3为羧基的甲酯、乙酯、丙酯、异丙酯、冰片基酯或5-四氮唑基。
具体地，可以利用立体定位技术将上述小分子化合物注射至成年C57BL/6雄性小鼠海马并恢复2周后，连续14天每天给予应激组2小时的束缚应激，对照组每天放入新笼子2小时。最后一次造模结束后24小时，进行FST和TST测试，测试结束后24小时取出海马组织，进行表达量分析。
图9所示运用免疫共沉淀结合蛋白印迹的方法，检测发现CAPON-i显著逆转海马组织中CRS导致的nNOS与CAPON相互作用增加。同时CRS应激会导致小鼠在悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显增加，显示抑郁表型。利用小分子化合物阻断海马nNOS与CAPON耦联后可明显缓解小鼠的抑郁表型。
根据上述示例的实验可以得出，海马CAPON是抑郁症的一个至关重要的调节因子，运用分子、形态、行为学等手段，确定了CAPON在神经元中广泛表达，改变神经元的树突可塑性，进而调节抑郁表型。并且，通过实验，进一步地验证了通过抑制CAPON表达以及减少或阻断CAPON和nNOS耦联等手段能够缓解或者消除抑郁表型。
在上述示例中，抑制CAPON表达是指能够减少CAPON的mRNA和蛋白水平。CAPON和nNOS耦联是指CAPON的一段氨基酸序列可以和nNOS相互结合。解开nNOS与CAPON耦联的蛋白可与正常蛋白发生竞争性作用，从而降低正常蛋白发挥的活性。解开nNOS-CAPON耦联的蛋白可通过给予在目标组织或细胞可表达的载体(载体上携带可表达的解开耦联的蛋白基因和/或其表达因子)等方式在目标组织或细胞表达。
因此，在本公开的另一些示例中，还揭示了通过抑制CAPON的表达预防或治疗抑郁症的方法。进一步地，涉及CAPON抑制剂在制备预防或治疗抑郁症药物中的应用。
在本公开的一些示例中，所述的CPAON抑制剂例如为能够干扰CAPON表达的RNA或其前体，更具体地说，其中的RNA可以是CAPON-RNAi，其序列为：
5’-GCAGCAACAACAGACACAA-3’(SEQ ID No.1)；
5’-GGACGGTGTCAAGGTGATT-3’(SEQ ID No.2)；
5’-GGGAATGACATTCTGGAAT-3’(SEQ ID No.3)；
5’-GGGTGACAGTTTGGATGAT-3’(SEQ ID No.4)。
在本公开的一些示例中，所述CAPON抑制剂例如为CAPON的特异性抗体，所述的特异性抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。
在本公开的一些示例中，所述CAPON抑制剂为减少CAPON和nNOS耦联的CAPON蛋白或其编码序列。举例而言，可以是CAPON的羧基端片段，对应CAPON序列例如为SEQ ID No.6的氨基酸序列中第379-503位的、第484-503位的与第492-503位的。
在本公开的一些示例中，所述的CAPON抑制剂包括但不限于以下形式：多核苷酸、多肽、表达载体中的一种或多种。
在本公开的一些示例中，所述的用于治疗或预防抑郁症的药物具体可以是在海马局部给药的剂型和/或全身给药的剂型。
更进一步地，本公开还揭示了一种筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分的方法，具体包括以下步骤：构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，且所述非人动物模型中的海马CAPON是高表达的；所述高表达指≥150％(按mRNA水平或蛋白水平)。观察所述非人动物模型中的抑郁表型，并与对照组进行比较。
在本公开的另一些示例中，还可以采用以下步骤筛选或测试所述有效成分，构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，且提供空白对照组作为对比，评估所述测试物作为CAPON抑制剂对所述非人动物模型的CAPON抑制效果。
基于CAPON表达与抑郁症的关联，通过上述示例的方法能够筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分。
另外还需要说明的是，在本公开中，所述抑郁症可以特别指“海马介导的抑郁症”，本公开的上述示例，反映了海马神经元的结构可塑性，特别是树突的复杂度改变在抑郁症的产生中具有重要作用。这是本领域已知的治疗抑郁症的机制和药物未能针对的抑郁症病理机制和治疗抑郁症的分子水平上的靶目标。因此，本公开的上述示例中所述的药物可以适用于在其它抗抑郁方法和药物不起效的抑郁症患者中使用。而上述示例中所述的有效成分，可以是对于治疗产生积极效果的药物成分或者药物组合
本公开揭示的方法和药物可以是在海马中局部起效的方法和药物。对于用于神经组织的药物，特别是脑病神经组织，例如海马来说，将药物的作用限定在目标组织是有益的。用于海马的方法或药物需要考虑该方法或药物是否能够在海马发挥药物的有效性，包括药物是否能到达海马，以及在海马中是否能达到起效的浓度等。在本公开的一些示例中，所述药物可以在海马局部给药的剂型。可以通过局部给药的方式来到达将药物作用限定在目标组织，例如通过将药物制成可通过套管植入海马局部给药的剂型。又例如，将药物制成植入组织后缓释的剂型等。另外还可将上述药物制成组织特异性的靶向药物递送系统的形式。例如可以通过将具有促进神经元可塑性的小分子化合物或生物活性分子(核酸如蛋白编码DNA或mRNA分子、蛋白如抗体等)与能够特异性结合在海马特异性表达的蛋白结合的抗体连接形成能够识别和结合海马的细胞的复合分子。
在本公开的示例中，所述的治疗包括：改良、减轻、减少或预防与抑郁症相关的症状的进行中的过程或结果；改善与抑郁症相关的症状的进行中的过程或结果；使处于导致特定机体功能损伤的疾病或病症中的机体功能正常化的进行中的过程或结果；或者引发疾病的一种或多种临床可测定的参数改善的进行中的过程或结果。
在本公开的示例中，治疗目的是预防或减慢(减轻)不希望的生理情况、病症或疾病，或获得有益的或期望的结果。
该结果可以是，例如医学的、生理学的、临床的、物理治疗、职业治疗，面向保健人员或患者；或本领域理解为“生活品质”或日常生活活动的参数。本公开中，有益的或期望的临床结果包括但不限于，减轻症状；减小/缩小该情况、病症或疾病的程度；稳定(即非恶化)该情况、病症或疾病。在公开的一些示例中，治疗还可以包括引发临床有效响应而没有过度水平的副作用。
在本公开的示例中，治疗也包括与如果不接受治疗的预期的存活期相比延长存活期。治疗还可以指给药药物或对患者执行医疗程度。
本公开中所称的治疗还可以是预防(防止)、治愈虚弱或病、或改良患者的临床情况，包括降低病程或疾病严重度，或主观改善患者的生活品质或延长患者的存活期。
以上示例是对本公开进行的说明，不能将其看成是对本公开的限制，除非另外指出。本公开的实践将使用有机化学、聚合物化学、生物技术等的常规技术，显然除在上述说明和实施例中所特别描述之外，还可以别的方式实现本公开。其它在本公开范围内的各个方面与改进将对本公开所属领域的技术人员显而易见。根据本公开的教导，许多改变和变化是可行的，因此其在本公开的范围之内。
Figure BDA0002790918680000181
Figure BDA0002790918680000191

Claims (10)

1.一种用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，包括用于抑制CAPON在细胞中表达的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述抑制剂为：
能够干扰CAPON表达的RNA或其前体；或
减少CAPON和nNOS耦联的CAPON蛋白或其编码序列；或
CAPON的特异性抗体；或
能够抑制CAPON在细胞中表达的多核苷酸、多肽、表达载体、小分子化合物中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述RNA为CAPON-RNAi，其序列为：
5’-GCAGCAACAACAGACACAA-3’(SEQ ID No.1)；
5’-GGACGGTGTCAAGGTGATT-3’(SEQ ID No.2)；
5’-GGGAATGACATTCTGGAAT-3’(SEQ ID No.3)；
5’-GGGTGACAGTTTGGATGAT-3’(SEQ ID No.4)。
4.根据权利要求2所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述序列为选自SEQ ID No.6的氨基酸序列中第379-503位的、第484-503位的和第492-503位的。
5.根据权利要求2所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述CAPON的特异性抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。
6.根据权利要求2所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述小分子化合物的结构符合通式：
Figure FDA0002790918670000021
其中，R1为甲基、乙基、丙基或异丙基；R2为异丙基或异丁基；R3为羧基的甲酯、乙酯、丙酯、异丙酯、冰片基酯或5-四氮唑基。
7.根据权利要求1所述的用于预防或治疗抑郁症的药物，其特征在于，所述药物为在海马局部给药的剂型和/或全身给药的剂型。
8.权利要求1～7所述的抑制剂在预防或治疗抑郁症的药物中的应用。
9.一种筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，且所述非人动物模型中的海马CAPON是高表达的；所述高表达指≥150％(按mRNA水平或蛋白水平)；
观察所述非人动物模型中的抑郁表型，并与对照组进行比较。
10.一种筛选或测试用于治疗抑郁症的有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建抑郁症的非人动物模型，注射测试物至所述非人动物模型中，评估所述测试物作为CAPON的抑制剂对所述非人动物模型的CAPON抑制效果。
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