CN112345754B - 一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器 - Google Patents

一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器，包括血红素、Au@Ag、H2O2和适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2和H3，序列依次如SEQ ID No:1‑5所示。本发明的传感器具有检测速度快、操作简单、价格低廉、检测限低、特异性高等优点，可以弥补外泌体现有检测方法的缺陷与不足，实现对其快速、准确的定量检测。

Description

一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器
技术领域
本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器。
背景技术
外泌体（Exosome）是大多数细胞类型分泌的直径为30-100 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。它们携带其亲代细胞的分子信息，并富含膜蛋白和遗传物质，可进行细胞间的通讯。外泌体内含有大量蛋白质、脂质、DNA、RNA，可调节多种生理或病理反应，包括有血管生长、肿瘤细胞侵袭与转移、免疫应答等。都有潜力成为潜在的生物标志物。肿瘤细胞分泌的外泌体的含量在血液中的含量很高，每毫升血液中含有超过109个外泌体，以利用外泌体作为生物标志物进行检测会有更高的灵敏度，有助于癌症的早期检测。
外泌体在作为生物标志物在癌症早期诊断方面具有广阔的应用前景，目前报道的检测外泌体的方法包括质谱和免疫分析，包括western blot和酶联免疫试验（ELISA），都可以鉴定大量的外泌体蛋白，但是这些方法需要繁琐的样品前处理，因此限制了它们快速筛选外泌体的应用。因此急需一种快速、准确、简便、微量的分析方法，以对外泌体进行检测。近几年，DNA生物传感检测技术凭借其高灵敏性和特异性得到广泛的关注。其中，比色生物传感器在生物学、医学等领域所扮演的角色越来越重要。相对于其他检测手段，比色技术具有显著的优势，灵敏度高、特异性强、价格低廉。
发明内容
解决以上现有技术检测外泌体的繁琐的样品前处理过程的问题，本发明提供了一种特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于比色技术检测外泌体的生物传感器。
本发明的另一目的是提供一种上述生物传感器在检测外泌体中的应用与方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器，包括适配体EpCAM Apt和CD63Apt，发卡探针H1、H2和H3，血红素、Au@Ag纳米棒和H2O2；
所述适配体EpCAM Apt的序列如SEQ ID No: 1所示，所述适配体CD63 Apt的序列如SEQ ID No: 2所示，所述发卡探针H1的序列如SEQ ID No: 3所示，所述发卡探针H2的序列如SEQ ID No: 4所示，所述发卡探针H3的序列如SEQ ID No: 5所示。
所述Au@Ag纳米棒采用以下方法制备获得：
（1）将CTAB溶液和HAuCl4溶液混匀后加入NaBH4溶液，振荡后25℃水浴，获得种子溶液；
（2）CTAB溶液和AgNO3溶液混匀后加入HAuCl4溶液，混合后加入抗坏血酸溶液，28℃下，加入种子溶液，生长8h后，离心后弃上清，沉淀即Au纳米棒；
（3）Au纳米棒以CTAB溶液重悬，加入PVP（聚乙烯吡咯烷酮）溶液和AgNO3溶液混合后加入抗坏血酸溶液和NaOH溶液，30℃水浴反应至终点，离心后弃上清，沉淀即Au@Ag纳米棒。
步骤（1）中，HAuCl4和NaBH4的摩尔比为1:2-2.5。
步骤（2）中，HAuCl4和AgNO3的摩尔比为40-50:1；HAuCl4和抗坏血酸的摩尔比为1:0.1-0.15；HAuCl4和种子的摩尔比为1:0.0001-0.0002。
步骤（1）中，HAuCl4和CTAB的摩尔比为1:400；步骤（2）中，HAuCl4和CTAB的摩尔比为1:20。
步骤（3）中，Au纳米棒和AgNO3的摩尔比为4166-4168:1；AgNO3和抗坏血酸的摩尔比为1:50；抗坏血酸和NaOH的摩尔比为1:1-1.5；Au纳米棒和PVP单体的摩尔比为1.4-1.6:1。
一种上述生物传感器在制备检测外泌体试剂中的应用。
一种含有上述生物传感器的试剂盒。
进一步的，所述试剂盒中还包括PBS缓冲液和系列浓度外泌体溶液。
本发明的检测原理如下：
适配体和发卡探针的序列如下所示：
EpCAM Apt（SEQ ID No: 1）：
CACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTGTTTTTTTTTTTTTTTCTTACT GTTCATCGCTTC
CD63 Apt（SEQ ID No: 2）：
ATGGGTCTCACTATGGGTACAGTAAGTTTTTTTTTTTTTTTCACCCCACCTCGCTCCCGTGACACTAAT GCTA
H1（SEQ ID No: 3）：
TGGGTAGGGCGGGTGAAGCGATGAACCCATAGTGAGACCCATCTTCATGGGTCAAGACATGGGTCTCAC TATGGGT
H2（SEQ ID No: 4）：
TGGGTAGGGCGGGTAGTGAGACCCATGTCTTGACCCATGAAGATGGGTTCATCGCTTCATGGGTCAAGA CATGGGT
H3（SEQ ID No: 5）：
TGGGTAGGGCGGGTGTCTTGACCCATGAAGCGATGAACCCATATGGGTCTCACTATGGGTTCATCGCT TCATGGGT。
EpCAM Apt双下划线部分是EpCAM（上皮细胞粘附分子）的aptamer，CD63 Apt双下划线部分是CD63的aptamer。EpCAM Apt虚线部分、CD63 Apt虚线部分是互补序列。当目标物存在时，目标物与EpCAM Apt和CD63 Apt特异性结合，EpCAM Apt和CD63 Apt互补配对，将两条链拉近，EpCAM Apt和CD63 Apt曲线部分作为trigger去触发CHA反应（DNA的催化发夹自组装反应）。H1、H2、H3曲线部分是劈开的G四联体序列。EpCAM Apt和CD63 Apt曲线部分是H1双下滑线部分的互补序列，将H1打开，H1双虚线部分与H2的双下划线部分互补，将H2打开，H2的虚线部分与H3的双下滑线部分互补，又将H3打开，进而触发CHA。通过上述无限次循环实现指数放大，产生大量的G四联体从而实现信号放大。产生的G四联体，加入血红素后，形成类过氧化物酶，在H2O2存在时，产生羟基自由基，对Au@Ag材料进行刻蚀，产生颜色变化，通过紫外-可见光变化检测外泌体的量。
本发明具有以下优点：
本发明提供的生物传感器检测限低，利用核酸适配体的特异性识别，利用适配体与外泌体的结合实现了对目标物的高特异性检测；使得EpCAM Apt、CD63 Apt两条链相互邻近，从而形成trigger，而trigger进一步打开H1，H1继而打开H2，H2又会将H3打开，从而触发CHA反应，实现颜色的变化。提高了检测的灵敏度，实现对目标物外泌体的超灵敏检测；检测限可达到3× 105个/mL；该传感器的构建简单，有效避免了多步加入样品可能带来的污染、繁琐的样品前处理过程，具有操作简单、反应速度快、性能稳定等优势；检测原理的主要过程均是在均相中实现的，提高了反应速度，降低了操作的复杂程度，实现了目标物的快速，简单，灵敏的检测；制作该生物传感器的工艺成本低，适用于产业化中低廉的要求。适用于肿瘤外泌体的检测和生物传感器产业化的实际应用。
该传感器具有检测速度快、操作简单、价格低廉、检测限低、特异性高等优点，可以弥补外泌体现有检测方法的缺陷与不足，实现对其快速、准确的定量检测。
附图说明
图1为本发明生物传感器的原理图；
图2为发卡探针H1浓度优化检测结果图；
图3为H2O2浓度优化检测结果图；
图4为反应时间优化检测结果图；
图5为生物传感器对不同浓度外泌体的紫外-可见光扫描；
图6为不同浓度外泌体的标准曲线。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1 外泌体的制备
MCF-7细胞培养在37℃包含5 % CO2 潮湿空气中，培养基为MEM、10%的小牛血清、1%抗生素，每两天传代一次：用移液器吸出培养基，PBS冲洗3次，加入0.25%的胰酶2-3mL，胰酶均匀盖满瓶壁，消化2-5min左右，待细胞缩起，变圆，浮起，加入培养基2-3mL，吹打成单细胞悬液，分瓶即可。
将MCF-7细胞培养三天，吸出培养基，以2000×g离心20 min，将细胞碎片从培养基中移除，再10000×g离心45 min，上清液以0.20 μm注射器过滤器过滤，滤液以10000×g（40000 rpm）离心150 min，获取外泌体，然后加入PBS（pH 7.4）重悬，-80℃储存待用。
实施例2 Au@Ag纳米棒的制备
（1）金种子的制备方法：取5 mL CTAB溶液(0.2 M)与5 mL HAuCl4溶液(0.0005 M)倒置数次混合均匀；将新配制的NaBH4 (0.01M) 0.6 mL加入上述混合溶液中，振荡2 min，25℃水浴1h，获得种子溶液；
（2）生长溶液的制备方法：将100 mL CTAB溶液(0.2 M)与6 mL AgNO3 (0.004 M)混合，加入HAuCl4 (0.01M) 100 mL溶液，轻轻混合；再加入抗坏血酸1.4 mL (0.0788M)，溶液颜色迅速由暗黄色变为无色；在28℃的条件下，在生长液中加入240 μL步骤（1）中的种子溶液；反应8小时，8500 rpm离心10分钟，弃上清，沉淀用0.1 M CTAB溶液重悬；重复离心，沉淀再次以0.8mL 0.1 M CTAB溶液重悬，获得CTAB-AuNRs溶液；
（3）Au@Ag的制备方法：在上述CTAB-AuNRs溶液中加入2.4 mL 3 wt% PVP（平均分子量10000）和240 μL硝酸银(1.0 mM)混合；在混合溶液中加入抗坏血酸120 μL (0.1 M)和氢氧化钠200 μL (0.1 M)；最后将溶液放置在30℃水浴中，直到颜色不变，然后将反应液8500 rpm离心10分钟，沉淀即Au@Ag纳米棒。以0.5 mM CTAB中重悬至636nm下吸光度为0.5，得Au@Ag纳米棒溶液。
实施例3 H1浓度变化对外泌体检测的影响
按照SEQ ID No: 1-4所示序列合成所需适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2、H3，然后按照以下步骤筛选H1最佳浓度：
（1）取6只EP管，在管中分别加入10 μL实施例1中制备的外泌体与EpCAM Apt (1 μL，5 μM)、CD63 Apt (1 μL，5 μM)、5×PBS buffer（pH 7.4）混合，37℃，反应30 min；
（2）然后分别加入等体积不同浓度H1溶液，使其终浓度分别为0.2 μM，0.4 μM，0.6μM，0.8 μM，1 μM，1.2 μM，然后分别加入H2 (1 μL，1 μM)、H3 (1 μL，1 μM)，37℃，反应90min；
（3）然后分别加入血红素（1μL，1 μM），37 ℃反应30 min；再分别加入H2O2（2μL，40mM），最后加入15 μL Au@Ag纳米棒溶液，用于紫外-可见光扫描吸光度进行检测，扫描范围400-800 nm。
结果如图2所示，从图中可以看出，检测到的紫外波长值随着H1的浓度增大红移逐渐增加，当浓度超过1.0 μM后，紫外波长趋于稳定；所以H1的最佳浓度为1.0 μM。
实施例3 H2O2浓度变化对外泌体检测的影响
取实施例2合成的适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2、H3，然后按照以下步骤筛选H2O2最佳浓度：
（1）取6只EP管，在管中分别加入10 μL实施例1中制备的外泌体与EpCAM Apt (1 μL，5 μM)、CD63 Apt (1 μL，5 μM)、5×PBS buffer（pH 7.4）混合，37℃，反应30 min；
（2）然后分别加入H1 (1 μL，1 μM)、H2 (1 μL，1 μM)、H3 (1 μL，1 μM)，37℃，反应90 min；
（3）然后分别加入血红素（1μL，1 μM），37 ℃反应30 min；再分别加入等体积不同浓度H2O2，使浓度分别为20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM，最后加入15 μL Au@Ag纳米棒溶液，用于紫外-可见光扫描吸光度进行检测，扫描范围400-800 nm。
结果如图3所示，从图中可以看出，检测到的紫外波长值随着H2O2的浓度增大红移逐渐增加，当浓度超过40 mM后，紫外波长趋于稳定；所以H2O2的最佳浓度为40 mM。
实施例4 反应时间对外泌体检测的影响
取实施例2合成的适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2、H3，然后按照以下步骤筛选最佳反应时间：
（1）取6只EP管，在管中分别加入10 μL实施例1中制备的外泌体与EpCAM Apt (1 μL，5 μM)、CD63 Apt (1 μL，5 μM)、5×PBS buffer（pH 7.4）混合，37℃，反应30 min；
（2）然后分别加入H1 (1 μL，1 μM)、H2 (1 μL，1 μM)、H3 (1 μL，1 μM)，37℃，分别反应50 min、60 min、70 min、80 min、90 min、100 min；
（3）然后分别加入血红素（1μL，1 μM），37 ℃反应30 min；再分别加入H2O2（2μL，40mM），最后加入15 μL Au@Ag纳米棒溶液，用于紫外-可见光扫描吸光度进行检测，扫描范围400-800 nm。
结果如图4所示，从图中可以看出，检测到的紫外波长值随着反应时间增大红移逐渐增加，当时间超过90 min后，紫外波长趋于稳定。所以最佳的反应时间为90 min。
实施例5 生物传感器对不同浓度外泌体的检测
取实施例2合成的适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2、H3，然后按照以下步骤检测不同浓度的外泌体：
（1）将实施例1制备的外泌体稀释，并用Nanosight LM10（马尔文）标定浓度；取7只EP管，在管中分别加入10 μL不同浓度的外泌体，使浓度分别为0, 1.0×105 particle/mL,1.0×106 particle/mL, 1.0×107 particle/mL, 1.0×108 particle/mL, 1.0×109 particle/mL, 1.0×1010 particle/mL再与EpCAM Apt (1 μL，5 μM)、CD63 Apt (1 μL，5 μM)、5×PBS buffer（pH 7.4）混合，37℃，反应30 min；
（2）然后分别加入H1 (1 μL，1 μM)、H2 (1 μL，1 μM)、H3 (1 μL，1 μM)，37℃，反应90 min；
（3）然后分别加入血红素（1μL，1 μM），37 ℃反应30 min；再分别加入H2O2（2μL，40mM），最后加入15 μL Au@Ag纳米棒溶液，用于紫外-可见光扫描吸光度进行检测，扫描范围400-800 nm。
结果如图5所示，从图中可以看出，检测到的紫外波长值随着外泌体增大红移逐渐增加。以不同外泌体下测定的吸光度值与不含外泌体的吸光值差值为纵坐标，以不同外泌体浓度为横坐标作图，如图6所示，获得回归方程为y = -45.61905+ 11.17143x，相关系数为0.9970，由此计算优化后的生物传感器的检测限为6.0×104 particle /mL。
序列表
<110> 济南大学
<120> 一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器
<130> 20200925
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 81
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EpCAM Apt
<400> 1
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<210> 2
<211> 73
<212> DNA
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<220>
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<212> DNA
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<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H2
<400> 4
tgggtagggc gggtagtgag acccatgtct tgacccatga agatgggttc atcgcttcat 60
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<211> 76
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<220>
<223> H3
<400> 5
tgggtagggc gggtgtcttg acccatgaag cgatgaaccc atatgggtct cactatgggt 60
tcatcgcttc atgggt 76

Claims (8)

1.一种基于Au@Ag检测外泌体的比色生物传感器，其特征在于，包括适配体EpCAM Apt和CD63 Apt，发卡探针H1、H2和H3，血红素、Au@Ag纳米棒和H2O2；
所述适配体EpCAM Apt的序列如SEQ ID No: 1所示，所述适配体CD63 Apt的序列如SEQID No: 2所示，所述发卡探针H1的序列如SEQ ID No: 3所示，所述发卡探针H2的序列如SEQID No: 4所示，所述发卡探针H3的序列如SEQ ID No: 5所示。
2.根据权利要求1所述的比色生物传感器，其特征在于，所述Au@Ag纳米棒采用以下方法制备获得：
（1）将CTAB溶液和HAuCl4溶液混匀后加入NaBH4溶液，振荡后25℃水浴，获得种子溶液；
（2）CTAB溶液和AgNO3溶液混匀后加入HAuCl4溶液，混合后加入抗坏血酸溶液，28℃下，加入种子溶液，生长8h后，离心后弃上清，沉淀即Au纳米棒；
（3）Au纳米棒以CTAB溶液重悬，加入PVP（聚乙烯吡咯烷酮）溶液和AgNO3溶液混合后加入抗坏血酸溶液和NaOH溶液，30℃水浴反应至终点，离心后弃上清，沉淀即Au@Ag纳米棒。
3.根据权利要求2所述的比色生物传感器，其特征在于，步骤（1）中，HAuCl4和NaBH4的摩尔比为1:2-2.5；HAuCl4和CTAB的摩尔比为1:400。
4.根据权利要求2所述的比色生物传感器，其特征在于，步骤（2）中，HAuCl4和AgNO3的摩尔比为40-50:1；HAuCl4和抗坏血酸的摩尔比为1:0.1-0.15；HAuCl4和种子的摩尔比为1:0.0001-0.0002； HAuCl4和CTAB的摩尔比为1:20。
5.根据权利要求2所述的比色生物传感器，其特征在于，步骤（3）中，Au纳米棒和AgNO3的摩尔比为4166-4168:1；AgNO3和抗坏血酸的摩尔比为1:50；抗坏血酸和NaOH的摩尔比为1:1-1.5；Au纳米棒和PVP单体的摩尔比为1.4-1.6:1。
6.一种如权利要求1-5任一所述生物传感器在制备检测外泌体试剂中的应用。
7.一种含有如权利要求1-5任一所述生物传感器的试剂盒。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括PBS缓冲液和系列浓度外泌体溶液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112458152B (zh) * 2021-01-13 2024-05-24 南京大学 基于球形核酸的级联信号放大高灵敏检测外泌体
CN113552103B (zh) * 2021-07-20 2022-12-30 济南大学 一种基于CRISPR-Cas系统的检测外泌体的荧光生物传感器
CN113584131B (zh) * 2021-07-20 2023-07-28 济南大学 一种基于Au@Ag检测UDG的比色生物传感器
CN113899900B (zh) * 2021-10-08 2024-05-24 安徽师范大学 一种用于mcf7外泌体检测的适配体传感器及其制备方法及mcf7外泌体的检测方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104975079A (zh) * 2015-05-28 2015-10-14 广东省生态环境与土壤研究所 基于DNA纳米结构的17β-雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒
WO2018075502A1 (en) * 2016-10-17 2018-04-26 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Unimolecular aptamer-based sensors for pathogen detection
CN110632300A (zh) * 2019-09-20 2019-12-31 济南大学 基于核酸适配体检测沙门氏菌的生物传感器及其制备方法和应用
CN110988355A (zh) * 2019-11-29 2020-04-10 南方医科大学南方医院 基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台及其制备方法与应用
CN111426834A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 基于双适配体检测外泌体的生物传感器及其制备方法与应用
CN111521808A (zh) * 2020-05-26 2020-08-11 济南大学 一种检测多氯联苯的生物传感器及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104975079A (zh) * 2015-05-28 2015-10-14 广东省生态环境与土壤研究所 基于DNA纳米结构的17β-雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒
WO2018075502A1 (en) * 2016-10-17 2018-04-26 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Unimolecular aptamer-based sensors for pathogen detection
CN110632300A (zh) * 2019-09-20 2019-12-31 济南大学 基于核酸适配体检测沙门氏菌的生物传感器及其制备方法和应用
CN110988355A (zh) * 2019-11-29 2020-04-10 南方医科大学南方医院 基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体双膜蛋白共表达检测平台及其制备方法与应用
CN111426834A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 基于双适配体检测外泌体的生物传感器及其制备方法与应用
CN111521808A (zh) * 2020-05-26 2020-08-11 济南大学 一种检测多氯联苯的生物传感器及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Danhua Zhou et al.A label-free and enzyme-free aptasensor for visual Cd2+ detection based on split DNAzyme fragments .《Anal. Methods》.2019,第11卷第3546-3551页. *
张园 ; 张海霞 ; .核酸探针及其在生物分析中的应用.分析试验室.2020,(第09期),第1002-1012页. *
蔡小蕾 ; 郭鹏 ; 赖国松 ; .链置换反应触发G-四链体DNA酶双向自组装用于高灵敏均相比色生物传感.化学与生物工程.2020,(第06期),第24-32页. *

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