CN112322555B - 一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于玉米病害生物防治技术领域，公开了一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用。本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株为Paenibacillus polymyxa SF05，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2020年7月31日，保藏号为CCTCC NO：M 2020384，保藏地址：中国武汉，武汉大学。该玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株可以有效抑制立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、大斑突脐孢菌(Exserohilum turcicum)、玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)和串珠镰刀菌(Fusurium verticillioides)的生长，并能诱导玉米抗病相关基因的表达量上调，增强玉米抗病性，可在生产上有效防治玉米纹枯病。

Description

一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用
技术领域
本发明涉及玉米病害生物防治技术领域，具体是涉及一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用。
背景技术
玉米(Zea mays L.)是我国重要的粮食经济作物，主要种植区域在东北、华北和西南山区，江浙沿海地区也有部分种植。玉米病害的发生直接影响玉米的产量和品质。玉米上常见的真菌病害包括玉米纹枯病、大斑病、小斑病和穗腐病等，这些病害的发生给玉米生产带来严重的损失，立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、大斑突脐孢菌(Exserohilumturcicum)、玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)和串珠镰刀菌(Fusuriumverticillioides)可以在玉米上分别引起上述四种病害。其中，玉米纹枯病通常危害玉米的叶鞘、茎秆和穗部，调查显示，我国多数玉米产地的玉米纹枯病发病率在40％以上，发病后通常减产10％以上，严重时甚至绝收。玉米大斑病主要在北方和西南地区流行，玉米大斑病的发生往往会导致玉米减产20％左右，严重时可达50％。玉米小斑病区别于大斑病，在黄淮海夏玉米区发生较为普遍，一般发生率在 50％以上，造成减产10-20％。玉米穗腐病发生后严重影响玉米穗的品质，食用感染的穗可能会造成人类或动物食物中毒。
目前防治玉米真菌病害的主要方法还是依靠农业防治、种植抗性品种和化学防治手段，生物防治手段还较少。然而化学农药对环境和人类的危害已经越来越大，因此利用生物防治的方法防治玉米病害的研究越来越多。研究发现，黄绿木霉、绿色木霉、产几丁质霉等多种真菌可以有效抑制玉米纹枯病菌的生长。一些枯草芽孢杆菌菌株也可以用于玉米纹枯病的生物防治。
发明内容
本发明的目的是为了克服玉米真菌病害生物防治手段较少的不足，提供一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用。本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株可以有效抑制立枯丝核菌、大斑突脐孢菌、玉蜀黍平脐蠕孢菌和串珠镰刀菌的生长，并能诱导玉米抗病相关基因的表达量上调，增强玉米抗病性。
为达到本发明的目的，本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株为Paenibacillus polymyxa SF05，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2020年7月31日，保藏号为CCTCC NO：M 2020384，保藏地址：中国武汉，武汉大学。
本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株对健康玉米幼苗有促生作用，因此，另一方面，本发明还提供了一种上述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株的应用，所述应用是将该玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株作为苗期生物肥料使用。
此外，本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌可以抑制玉米主要真菌病害病原菌的生长，并诱导玉米抗性基因表达量上调，因此，再一方面，本发明还提供了一种上述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株作为玉米增强抗病性的诱抗剂的应用。
再一方面，本发明的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株可以有效抑制立枯丝核菌、大斑突脐孢菌、玉蜀黍平脐蠕孢菌和串珠镰刀菌，因此，本发明还提供了一种上述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株在防治立枯丝核菌、大斑突脐孢菌、玉蜀黍平脐蠕孢菌和串珠镰刀菌中的一种或多种的应用。
本发明公开的玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株经鉴定命名为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SF05，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO：M2020384。本发明菌株在培养条件下对玉米主要真菌病害病原菌的生长有抑制作用，喷洒后对健康的玉米苗有促生和诱抗作用，大田条件下对玉米纹枯病防治效果明显，可以作为玉米的生物农药，同时也可以作为玉米的生物肥料和诱抗剂。
附图说明
图1是本发明多粘类芽孢杆菌SF05拮抗玉米主要病原真菌的效果图，将玉米病原真菌与多粘类芽孢杆菌SF05共同接种于PDA培养基中，置于28℃培养箱拮抗培养7d，A:vsRhizoctonia solani；B:vs Exserohilum turcicum；C: vs Bipolaris maydis；D:vsFusurium verticillioides。
图2是本发明多粘类芽孢杆菌SF05处理玉米苗24h后各部位抗病相关基因表达量变化，将多粘类芽孢杆菌SF05均匀喷洒于三叶期玉米苗全株24h 后，取苗的根、茎(含叶鞘)、叶(不含叶鞘)三个部分进行qRT-PCR，以 LB液体培养基处理为对照。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
此外，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1：多粘类芽孢杆菌SF05的分离与鉴定
本发明菌株多粘类芽孢杆菌SF05分离自玉米叶鞘表面，具体操作方法如下：
(1)取出现纹枯病症状的玉米叶鞘组织，用解剖刀切成3×3mm大小；
(2)将组织置于70％酒精中表面消毒5s，用无菌水漂洗15s，重复三次；
(3)用无菌吸水纸吸干组织表面水分；
(4)将叶鞘组织置于PDA平板中央，将平板置于28℃，培养箱培养2d；
(5)组织周围长出白色菌丝，但部分培养基出现抑菌圈，挑取抑菌圈中心细菌于新的LB平板纯化；
(6)挑取分离得到的生防菌落于新鲜的LB液体培养基，28℃震荡培养至浓度约为1×108CFU/ml；
(7)在PDA平板中央放置一个直径5mm的玉米纹枯病菌菌块，取10μl 菌液滴于距菌块2cm处的四个角，置于28℃培养7d；
(8)筛选抑菌圈最大的菌株继续进行拮抗实验，连续培养5代后仍保持较好抑菌活性的菌株进行菌落形态和生物学特征鉴定。
上述分离得到的菌株主要菌落形态和生物学特征如下：SF05β-半乳糖苷酶活性阳性，V-P测试阳性，明胶酶阳性，脲酶阴性，可利用甘油、核糖、 D-木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖等多种碳源产酸。BIOLOG结果显示，SF05在pH＝6条件下可生长，不耐受8％NaCl环境，可以利用糊精、D- 麦芽糖、D-麦海藻糖、D-纤维二糖、龙胆二糖、蔗糖、D-松二糖、水苏糖等碳源进行生长。
多粘类芽孢杆菌SF05 16S rDNA的序列如下：
CTCACCACCTTCGGCGGCTGGCTCCCTTGCGGGTTACCCCACCGAC TTCGGGTGTTGTAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGACC CGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCAATTCC GACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGACCGGCT TTTCTAGGATTGGCTCCACCTCGCGATTTCGCTTCCCGTTGTACCGGCCA TTGTAGTACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTGCTTAGAGTGCCC AGCTTGACCTGCTGGCAACTAAGCATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGA CTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACC TGTCTCCTCTGTCCCGAAGGAAAGCCATATCTCTACAGCGATCAGAGGG ATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACAT ACTCCACTGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTG CGACCGTACTCCCCAGGCGGAATGCTTAATGTGTTAACTTCGGCACCAA GGGTATCGAAACCCCTAACACCTAGCATTCATCGTTTACGGCGTGGACT ACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGCGT CAGTTACAGCCCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCT CTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTC AAGCTCCCCAGTTTCCAGTGCGACCCGAAGTTGAGCCTCGGGATTAAA CACCAGACTTAAAGAGCCGCCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCG GACAACGCTTGCCCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAG CCGGGGCTTTCTTCTCAGGTACCGTCACTCTTGTAGCAGTTACTCTACA AGACGTTCTTCCCTGGCAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCA CTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGGCTTTCGCCCATTGCGGAAGATTCCC TACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGG CCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCGCCTTGGTAGGCCTTT ACCCCACCAACTAGCTAATGCGCCGCAGGCCCATCCACAAGTGACAGA TTGCTCCGTCTTTCCTCCCTCTCCCATGCAGGAAAAGGATGTATCGGGT ATTAGCTACCGTTTCCGGTAGTTATCCCTGTCTTGTGGGCAGGTTGCCT ACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAGGTTATATAGAAGCAAGCTTCTA ATATAACCCCGCTCGACTGCATTATAGCACACGCAG
结合上述的16S rDNA测序，该细菌鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)，命名为SF05，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2020年7月31日，保藏号：M 2020384，保藏地址：中国武汉，武汉大学。实施例2：多粘类芽孢杆菌SF05抑菌活性测定
本发明的多粘类芽孢杆菌SF05抑菌活性测定采用拮抗培养法，具体操作如下：
(1)挑取新鲜的多粘类芽孢杆菌SF05菌落于新鲜的LB液体培养基， 28℃震荡培养至浓度约为1×108CFU/ml；
(2)在PDA平板中央放置一个直径5mm的病原真菌菌块，取10μl菌液滴于距菌块2cm处的四个角，采用的病原真菌主要是立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)、大斑突脐孢菌(Exserohilum turcicum)、玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)和串珠镰刀菌(Fusurium verticillioides)；
(3)以无菌水代替多粘类芽孢杆菌SF05进行对照试验；
(4)置于28℃培养，待对照组真菌恰好长满培养皿后测量处理组和对照组菌落直径，计算抑制率。抑制率(％)＝100×(处理组菌落直径- 菌碟直径)/(对照组菌落直径-菌碟直径)。
测量发现，多粘类芽孢杆菌SF05对立枯丝核菌的抑制率为76.27％，对大斑突脐孢菌的抑制率为69.69％，对玉蜀黍平脐蠕孢菌的抑制率为73.84％，对串珠镰刀菌的抑制率为67.83％(如图1所示)，由此可见，多粘类芽孢杆菌SF05对上述四种病原真菌的抑菌活性较好。
实施例3：多粘类芽孢杆菌SF05对苗期玉米的促生作用
本发明的多粘类芽孢杆菌SF05对苗期玉米促生效果的测定主要采用喷雾法，具体操作如下：
(1)挑取新鲜的多粘类芽孢杆菌SF05菌落于新鲜的LB液体培养基中， 28℃震荡培养至浓度为1×108CFU/ml；
(2)用喷雾器将菌液喷洒三叶期玉米苗(品种：浙甜20)，直至菌液液滴均匀地粘附于玉米所有的叶片与茎杆上，但不形成小细流往下流；
(3)用喷雾器将LB液体培养基以相同的方式处理，同时育苗同一品种长势相近的玉米苗，作为对照；
(4)温室培养16d后测量地上部鲜重和株高，与对照组的数据进行比较。
经测量发现，多粘类芽孢杆菌SF05处理后的玉米苗株高平均为40.75cm，地上部鲜重平均为3.89克，对照组玉米苗株高平均为32.75cm，地上部鲜重平均为2.01克，多粘类芽孢杆菌SF05处理后的玉米苗株高较对照组株高增加 24.42％，地上部鲜重增加93.53％，由此可见，多粘类芽孢杆菌SF05可以促进苗期玉米的生长。
实施例4：多粘类芽孢杆菌SF05对玉米抗性基因表达的诱导
本发明的多粘类芽孢杆菌SF05对玉米抗性基因表达的诱导主要采用喷雾后提取RNA进行qRT-PCR，具体操作如下：
(1)挑取新鲜的多粘类芽孢杆菌SF05菌落于新鲜的LB液体培养基中， 28℃震荡培养至浓度约为1×108CFU/ml；
(2)用喷雾器将菌液喷洒三叶期玉米苗(品种：浙甜20)，直至菌液液滴均匀地粘附于玉米所有的叶片与茎杆上，但不形成小细流；
(3)用喷雾器将LB液体培养基以相同的方式处理，同时育苗同一品种长势相近的玉米苗，作为对照；
(4)处理24h后剪取处理组和对照组的根、茎(含叶鞘)和叶部(不含叶鞘)组织，利用TIANGEN植物总RNA提取试剂盒(DP432)提取植物组织总RNA，用紫外分光光度仪测定RNA浓度；
(5)用反转录试剂盒将RNA反转录至同一浓度的cDNA，反转录方法：首先进行基因组DNA去除，定量RNA 1μg加入4×gDNA wiper Mix 4μl，用RNase-free ddH2O将体系补齐至16μl，用移液器轻轻吸打混匀，42℃反应2min；再用上一步的产物进行反转录，向上一步的反应管中直接加入5×HiScript III qRT SuperMix 4μl，用移液器轻轻吸打混匀，37℃反应15min，85℃变性5sec，产物待用或保存于-20℃冰箱；
(6)qRT-PCR：qRT-PCR反应体系(20μl)如下：2×ChamQ Universal SYBR qPCRMaster Mix 10μl，Primer F(10μM)0.4μl，Primer R(10 μM)0.4μl，Template cDNA 1μl，ddH2O 8.2μl。qRT-PCR使用的引物序列见表1，引物由上海擎科生物科技有限公司合成；反应条件为：95℃预变性30s，95℃5s，58℃30s，共45个循环；溶解曲线温度：95℃15s，58℃60s，95℃15s。
表1 qRT-PCR引物序列
Figure BDA0002816119330000081
Figure BDA0002816119330000091
(7)数据分析：本方法使用Actin为内参基因，通过△△Ct计算玉米抗病基因的相对表达量变化，计算公式为：相对表达量＝2^(△Ct处理样本-△Ct对照同一位置样本)，△Ct＝Ct抗病基因-Ct内参基因，处理样本即步骤(4)中接种后24小时后的取样样本。
qRT-PCR结果(表2)显示，处理组根部大部分抗病基因较对照组略微下调，但变化不大，仅OPR1下调量较大，处理组茎部PR1基因表达量是对照组表达量的4.72倍，其余抗病基因与处理组根部表达量变化类似，处理组叶部PR1基因表达量变化与处理组根部类似，而其余抗病基因的表达量都是对照组表达量的3.01-10.08倍，出现明显的上调。综上所述，多粘类芽孢杆菌 SF05可以诱导玉米抗病基因的表达量上调，且不同的部位诱导的抗病基因有所差异。
实施例5：多粘类芽孢杆菌SF05田间防治玉米纹枯病效果
本发明的多粘类芽孢杆菌SF05田间防治玉米纹枯病效果实验采用喷雾后调查病害等级的方法，具体操作如下：
(1)挑取新鲜的多粘类芽孢杆菌SF05菌落于新鲜的LB液体培养基中， 28℃震荡培养至浓度约为1×108CFU/ml；
(2)按1:1的比例将菌液和无菌水混匀，共5L，作为处理组药剂；
(3)喷洒前按照《玉米抗病虫性鉴定技术规范》中鉴定玉米纹枯病单株病情级别的划分标准调查田间病害发生情况；
(4)在玉米灌浆初期用喷雾器将菌液喷洒于玉米茎基部至第一叶鞘之间的茎杆上，化学防治对照组用相同体积的苯甲·嘧菌酯悬浮液喷洒，阴性对照组用相同体积的无菌水喷洒；
(5)喷洒后25d玉米进入乳熟后期(R4)按照步骤(2)中的方法中鉴定玉米纹枯病单株病情级别的划分标准调查田间病害发生情况，病情指数计算方法如下：
Figure BDA0002816119330000101
用药前的田间调查发现两个品种均无纹枯病发生；处理后田间病害调查结果(表2)发现，生物防治和化学防治后的红甜糯18病情指数显著低于无菌水处理的玉米，病情指数降低67.8％以上，化学防治效果略好于生物防治效果，脆甜321的防治效果也与红甜糯18类似，病情指数降低60.4％以上，但生物防治效果略好于化学防治。
表2 红甜糯18和脆甜321用药后田间病害调查结果
Figure BDA0002816119330000102
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 浙江省农业科学院
<120> 一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1452
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ctcaccacct tcggcggctg gctcccttgc gggttacccc accgacttcg ggtgttgtaa 60
actctcgtgg tgtgacgggc ggtgtgtaca agacccggga acgtattcac cgcggcatgc 120
tgatccgcga ttactagcaa ttccgacttc atgtaggcga gttgcagcct acaatccgaa 180
ctgagaccgg cttttctagg attggctcca cctcgcgatt tcgcttcccg ttgtaccggc 240
cattgtagta cgtgtgtagc ccaggtcata aggggcatga tgatttgacg tcatccccac 300
cttcctccgg tttgtcaccg gcagtctgct tagagtgccc agcttgacct gctggcaact 360
aagcataagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg 420
acaaccatgc accacctgtc tcctctgtcc cgaaggaaag ccatatctct acagcgatca 480
gagggatgtc aagacctggt aaggttcttc gcgttgcttc gaattaaacc acatactcca 540
ctgcttgtgc gggtccccgt caattccttt gagtttcagt cttgcgaccg tactccccag 600
gcggaatgct taatgtgtta acttcggcac caagggtatc gaaaccccta acacctagca 660
ttcatcgttt acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg 720
cgcctcagcg tcagttacag cccagagagt cgccttcgcc actggtgttc ctccacatct 780
ctacgcattt caccgctaca cgtggaattc cactctcctc ttctgcactc aagctcccca 840
gtttccagtg cgacccgaag ttgagcctcg ggattaaaca ccagacttaa agagccgcct 900
gcgcgcgctt tacgcccaat aattccggac aacgcttgcc ccctacgtat taccgcggct 960
gctggcacgt agttagccgg ggctttcttc tcaggtaccg tcactcttgt agcagttact 1020
ctacaagacg ttcttccctg gcaacagagc tttacgatcc gaaaaccttc atcactcacg 1080
cggcgttgct ccgtcaggct ttcgcccatt gcggaagatt ccctactgct gcctcccgta 1140
ggagtctggg ccgtgtctca gtcccagtgt ggccgatcac cctctcaggt cggctacgca 1200
tcgtcgcctt ggtaggcctt taccccacca actagctaat gcgccgcagg cccatccaca 1260
agtgacagat tgctccgtct ttcctccctc tcccatgcag gaaaaggatg tatcgggtat 1320
tagctaccgt ttccggtagt tatccctgtc ttgtgggcag gttgcctacg tgttactcac 1380
ccgtccgccg ctaggttata tagaagcaag cttctaatat aaccccgctc gactgcatta 1440
tagcacacgc ag 1452

Claims (9)

1.一种玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株，其特征在于，玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株为Paenibacillus polymyxa SF05，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏起始日期为2020年7月31日，保藏号为CCTCC NO：M 2020384，保藏地址：中国武汉，武汉大学。
2.权利要求1所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株的应用，其特征在于，所述应用是将该玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株作为苗期生物肥料使用。
3.权利要求1所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株的应用，其特征在于，所述应用是将所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株作为玉米增强抗病性的诱抗剂。
4.权利要求1所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株的应用，其特征在于，所述应用是使用所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株防治立枯丝核菌、大斑突脐孢菌、玉蜀黍平脐蠕孢菌和串珠镰刀菌中的一种或多种。
5.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包含权利要求1所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株或其培养物。
6.根据权利要求5所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为液体菌剂、粉剂或颗粒剂。
7.根据权利要求5所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂作为植物苗期生物肥料使用。
8.根据权利要求5所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂作为植物增强抗病性的诱抗剂。
9.一种肥料，其特征在于，所述肥料中包含权利要求1所述玉米叶鞘表面多粘类芽孢杆菌菌株或其培养物。
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CN104513802B (zh) * 2014-12-15 2017-07-07 浙江省东阳玉米研究所 一种玉米内生枯草芽孢杆菌及其生防应用
CN105132324B (zh) * 2015-09-07 2018-09-28 哈尔滨师范大学 一株小麦根际多粘类芽孢杆菌wxd 6-4及其应用

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