CN112300223A - 一种环烯醚萜苷化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出一种环烯醚萜苷化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，并通过细胞实验验证了本发明制备的含氮环烯醚萜苷类化合物，表现出了优良的抗炎作用，可作为研制新型抗炎药物的先导化合物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种环烯醚萜苷化合物及其制备方法和应用。
背景技术
炎症是十分常见而又重要的基本病理过程，体表的外伤感染和各器官的大部分常见病和多发病都属于炎症性疾病，如疖、痈、肺炎、肝炎、肾炎等。
IL-6(白介素-6)是炎症介质的一种，主要由单核巨噬细胞、Th2细胞、血管内皮细胞以及成纤维细胞产生，通过刺激活化B细胞增殖分泌抗体，刺激T细胞增殖和CTL活化，以及刺激肝细胞合成急性期蛋白等参途径参与炎症反应。
IL-6抑制剂(IL-6i)通过靶向IL-6来抑制免疫炎症级联反应，在慢性炎症性疾病中起到治疗作用。
托珠单抗是抗体药物，是唯一的一种获FDA批准治疗关节炎的IL-6抑制剂。但托珠单抗作为抗体药物，存在价格昂贵、保存和使用不方便等缺点。开发新的具有更好IL-6抑制作用的化合物依然具有重要的应用价值。从天然资源中寻找有效成分，发现具有开发前景的新类型结构化合物作为先导化合物，是新药研究的有效途径。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种从山银花药材中分离制备出一种具有抗炎活性的化合物及其制法和应用。
本发明提出了一种环烯醚萜苷化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，该化合物具有如下结构：
本发明还提出了一种如前所述环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂用乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱部位，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用甲醇水溶液梯度洗脱后，再经制备高效液相色谱分离。
具体地，所述环烯醚萜苷化合物的制备方法包括以下步骤：
取山银花药材，用60-80％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、25-35:65-75、48-52:48-52、92-100:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为48％～52％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以94-96:4-5:0、89-91:9-11:0、89-91:9-11:1、79-81:19-21:2、68-70:28-30:5、58-60:38-40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为79-81:19-21:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用28-32:68-72、48-52:48-52、67-73:29-31、58-62:39-41、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，经制备高效液相色谱分离。
本发明进一步提出了化合物Ⅰ-Ⅳ或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，该化合物Ⅰ-Ⅳ具有如下结构：
本发明还提出了如前任一所述的化合物在制备抗炎药物或IL-6抑制剂中的应用。
本发明还提出了一种抗炎药物或IL-6抑制剂，其包括如前任一所述的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，和药学上可接受的辅料。
具体地，所述抗炎药物或IL-6抑制剂的剂型为口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药制剂。
进一步地，所述抗炎药物或IL-6抑制剂可以是药剂学上所说的任何一种剂型，包括片剂、胶囊剂、软胶囊、凝胶剂、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、静脉乳剂、脂质体注射剂、栓剂、缓释制剂或控释制剂。
本发明还提出了化合物Ⅰ-Ⅳ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂用乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱部位，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用甲醇水溶液梯度洗脱后，再经凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离。
具体地，所述化合物Ⅰ-Ⅳ的制备方法包括以下步骤：
取山银花药材，用60-80％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、25-35:65-75、48-52:48-52、92-100:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为48％～52％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以94-96:4-5:0、89-91:9-11:0、89-91:9-11:1、79-81:19-21:2、68-70:28-30:5、58-60:38-40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为79-81:19-21:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用28-32:68-72、48-52:48-52、67-73:29-31、58-62:39-41、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，其中，48-52:48-52的洗脱部位的馏分、67-73:29-31的洗脱部位的馏分、58-62:39-41的洗脱部位的馏分分别为二次第一馏分、二次第二馏分、二次第三馏分；
所述二次第一馏分经凝胶柱色谱分离用甲醇水48-52:48-52等度洗脱，经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅰ和Ⅳ；
所述二次第二馏分和所述二次第三馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅱ和Ⅲ。
具体地，所述二次第一馏分经制备高效液相色谱分离中，其流动相为乙腈和甲酸的水溶液，所述乙腈和甲酸的水溶液中乙腈、甲酸以及水的体积比为(22～24):0.1:(76～78)，流速为3.5～4.5ml/min，保留时间为4.5～5.5min得所述式Ⅰ化合物，或保留时间为5.5～7.5min得所述式Ⅳ化合物；所述二次第二馏分经制备高效液相色谱分离中，其流动相为乙腈和甲酸的水溶液，所述乙腈和甲酸的水溶液中乙腈、甲酸和水的体积比为(24～26):0.1:(74～76)，流速为3.5～4.5ml/min，保留时间为18.9～20.9min，得所述式Ⅱ化合物；所述二次第三馏分经制备高效液相色谱分离中，其流动相为乙腈和甲酸的水溶液，所述乙腈和甲酸的水溶液中乙腈、甲酸和水的体积比为(17～19):0.1:(81～83)，流速为3.5～4.5ml/min，保留时间为15.5～16.5min，得所述式Ⅲ化合物。
进一步地，所述化合物Ⅰ-Ⅳ的制备方法包括以下步骤：
取山银花药材，用70％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、30:70、50:50、95:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为50％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以95:5:0、90:10:0、90:10:1、80:20:2、70:30:5、60:40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为80:20:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用30:70、50:50、60:40、70:30、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，其中，50:50的洗脱部位的馏分、70:30的洗脱部位的馏分、60:40的洗脱部位的馏分分别为二次第一馏分、二次第二馏分、二次第三馏分；其中，
所述二次第一馏分经凝胶柱色谱分离用甲醇水48-52:48-52等度洗脱，经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅰ和Ⅳ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝23:77:0.1，v:v:v，流速：4ml/min；
所述二次第二馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅱ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝25:75:0.1，v:v:v，流速：4ml/min；
和所述二次第三馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅲ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝18:82:0.1，v:v:v，流速：4ml/min。
本发明从山银花中首次提取制备了新的环烯醚萜苷类化合物，而且进一步分离出4个含氮环烯醚萜苷类化合物，通过HR-ESI-MS、NMR、IR、UV等现代波谱学手段确证了这4个含氮环烯醚萜苷类化合物的化学结构、理化性质。并通过细胞实验验证了这4个含氮环烯醚萜苷类化合物的抗炎活性，表现出了优良的抗炎作用，可作为研制新型抗炎药物的先导化合物。上述环烯醚萜苷类化合物的制备方法各工艺参数易于控制、简单、快速，使环烯醚萜苷类化合物的制备更为容易。
附图说明
图1为化合物Ⅰ的UV谱图；
图2为化合物Ⅰ的IR谱图；
图3为化合物Ⅰ的HR-ESI-MS谱图；
图4为化合物Ⅰ的1H-NMR谱图；
图5为化合物Ⅰ的13C-NMR谱图；
图6为化合物Ⅰ的DEPT-135谱图；
图7为化合物Ⅰ的1H-1H COSY谱图；
图8为化合物Ⅰ的HSQC谱图；
图9为化合物Ⅰ的HMBC谱图；
图10为化合物Ⅰ的NOESY谱图；
图11为化合物Ⅰ-Ⅳ的主要NOESY相关；
图12为化合物Ⅰ-Ⅳ的CD和ECD比对图(为是化合物I和II的CD和ECD对比图，B是化合物III和IV的CD和ECD的对比图)。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明，以便能够更好地理解本发明的方案以及其各个方面的优点。然而，以下描述的具体实施方式和实施例仅是说明的目的，而不是对本发明的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
其次，需要注意的是，本发明所涉及的未注明的浓度均为体积百分含量(v/v)。其它除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。另，本发明如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明。
本实施方式提供的各化合物及其制备方法、应用中所用原料及试剂均可由市场购得，除液相色谱用甲醇和乙腈为色谱纯外，其余试剂均为分析纯。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1环烯醚萜苷类化合物的制备及结构鉴定
1.仪器：
核磁共振实验：瑞士Bruker Avance 2600全数字化超导核磁共振仪；紫外光谱：日本分光JASCOV-550紫外-可见光谱仪；红外光谱：日本分光JASCO FT/IR-480 plus红外光谱仪，KBr压片；ESI-MS：FINIGAN LCQ Advantage MAX质谱仪；HR-ESI-MS以及UPLC-Q-TOF-MS：Waters Synapt G2 Q-TOF-MS；分析型高效液相色谱(Waters)：Waters e2695+DAD 2998；制备型高效液相色谱仪(Waters)：Waters 1515+2489 UV/Visible；色谱柱：C18 column(Phenomenex Gemini,5μm,4.6×250mm)；C18column(Phenomenex Gemini,5μm,10×250mm)；C18column(Waters,Aquity,BEH,1.7μm,3.0×150mm)；多功能酶标仪：Synergy HT(Bio-Tek Instruments Inc.,Burleigh,USA)；Thermo Scientific BB15型CO2细胞培养箱，美国热电；Nikon TS100型倒置显微镜；超净工作台，AIRTECH，型号：A10051560；ZW-A型微量振荡器，常州国华仪器有限公司；Therom VarioSkan Flash多功能读数仪；移液器：Therom公司；离心机：湘仪，型号：L530。
2.材料以及试剂：
山银花药材：产地山东，供货商为亳州市坤源医药有限公司；Diaion HP20：Mitsubishi Chemical公司；层析硅胶(100-200目、200-300目)：青岛海洋化工公司；硅胶薄层预制板：烟台市化学工业研究所；Sephadex LH-20：Amersham Biosciences；RP-18柱层析填料(12nm,S-50um)：YMC；甲醇(色谱级)：BCR；乙腈(色谱级)：Merck公司；氘代试剂：CIL；其余色谱柱层析用化学试剂均为分析纯，购自广州化学试剂厂；DMEM/HIGH GLUCOSE，Gibco，Cat:C11995500BT,Lot:8118035；FBS：Lonsera，Cat:S711-001S，Lot：NR06611；LPS：南京大治生物科技有限公司；DMSO，阿拉丁，货号：D103277，批号：D1712055；24孔板，JET公司，货号TCP-010-024；0.25％Trypsin-EDTA，Gibco，Lot：1697785；Mouse IL-6ELISA kit，Invitrogen,Cat:BMS603-2，Lot:167147019。
3.实验过程：
取35kg山银花药材，经70％乙醇水加热回流提取，提取液减压浓缩除去乙醇，得到浸膏(LM)。浸膏经大孔树脂用0:100、30:70、50:50、95:5的乙醇水梯度洗脱(4个柱体积)，收集50％的乙醇水溶液洗脱部位(LM-3)，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉。
冻干粉经正相硅胶柱色谱用氯仿、甲醇以及水(95:5:0，90:10:0，90:10:1，80:20:2，70:30:5，60:40:8)进行梯度洗脱(4个柱体积)，得到含化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的馏分(一次馏分，3E，80:20:2洗脱部位)。馏分3E经ODS柱色谱分离用甲醇水梯度(30:70，50:50，60:40，70:30，100:0)(4个柱体积)洗脱，得含化合物Ⅰ和化合物Ⅳ的馏分(二次第一馏分，E6，50:50洗脱部位)，含化合物Ⅱ的馏分(二次第二馏分，E8，70:30洗脱部位)以及含化合物Ⅲ的馏分(二次第三馏分E10，60:40洗脱部位)。馏分E6经凝胶柱色谱分离用甲醇水(50:50)等度洗脱，得含化合物Ⅰ和Ⅳ的馏分(三次馏分，E6D)，馏分E6D经制备高效液相色谱(CH3CN:H2O:HCOOH＝23:77:0.1，v:v:v，流速：4ml/min)分离制备得到化合物Ⅰ(17.7mg，保留时间tR＝5.0min)和化合物Ⅳ(15.9mg，保留时间tR＝6.5min)。馏分E8经制备高效液相色谱(CH3CN:H2O:HCOOH＝25:75:0.1，v:v:v，流速：4ml/min)分离制备得到化合物Ⅱ(14.5mg，保留时间tR＝19.9min)。馏分E10经制备高效液相色谱(CH3CN:H2O:HCOOH＝18:82:0.1，v:v:v，流速：4ml/min)分离制备得到化合物Ⅲ(19.3mg，保留时间tR＝16.0min)。
4.环烯醚萜苷类化合物结构鉴定
化合物Ⅰ：浅黄色胶状固体。[α]29D-32.7(c＝0.53,in CH3OH),UV(CH3OH)λmax(logε):210(4.45),236(4.16)。HR-ESI-MS给出m/z 584.1725[M+Na]+(计算值为584.1744)，确定化合物分子式为C27H31NO12，计算不饱和度为13。
1H-NMR(600MHz,in CD3OD)图谱，低场区可见一组单取代末端双键质子信号[δH5.42(1H,ddd,J＝17.2,10.4,9.6Hz,H-8),5.18(1H,dd,J＝17.2,1.7Hz,H-10a),5.16(1H,dd,J＝10.4,1.7Hz,H-10b)]、一个糖端基质子信号[δH 4.62(1H,d,J＝7.9Hz,H-1″)]以及典型环烯醚萜类化合物3位的三取代双键质子信号[δH 7.37(1H,d,J＝1.8Hz,H-3)]和1位半缩醛的质子信号[δH 5.41(1H,d,J＝4.0Hz,H-1)]。此外，低场区还有一组邻二取代苯环芳香质子信号[δH 7.30(1H,ddd,J＝7.9,7.7,1.0Hz,H-6′),7.19(1H,dd,J＝7.9,1.0Hz,H-4′),7.09(1H,ddd,J＝7.9,7.7,1.0Hz,H-5′),6.96(1H,dd,J＝7.9,1.0Hz,H-7′)]和一个孤立的亚甲基氢信号[δH 3.27(1H,d,J＝17.2Hz,H-8′a),2.67(1H,d,J＝17.2Hz,H-8′b)]。
化合物Ⅰ的酸水解和糖基衍生化实验，提示分子中含有D-葡萄糖，结合糖的端基质子的偶合常数(J＝7.9Hz)，确定化合物Ⅰ的结构中含有β-D-葡萄糖基。1H-1H COSY谱中显示两组自旋耦合体系H1/H-9/H-5/H-6/H-7和H-9/H-8/H-10，结合HMBC相关信号H-3/C-1,4,5,11，H-1/C-3,5,8，以及一个甲氧基与C-11的远程相关，推出了化合物Ⅰ具有典型裂环环烯醚萜化合物特征的结构片段A。
化合物13C-NMR(150MHz,in CD3OD图谱共显示27个碳信号，除去邻二取代苯基、结构片段A和6个糖基碳信号，还剩余4个碳信号，包括：3个季碳(δC 178.3,176.0,56.8)和1个亚甲基(δC40.9)，结合分子式信息以及化合物的不饱和度为13，可知结构中还有两个环，即这剩余的四个碳原子与杂原子成两个环。
HMBC谱中，H-6、H-7、H-4′、H-8′均和季碳(C-3′,δC 56.8)存在明显的远程相关，结合相关峰H-8′/C-3′a,7，H-8′/C-2′,9′，H-7/C-2′可确定结构片段A、苯环、亚甲基(C-8′)都直接和C-3′相连接；C-7′a(δC 142.6)的化学位移提示N原子连接在苯环的C-7′a位上。结合分子式和羰基的化学位移特征，推断出苷元，进一步根据HMBC的远程相关峰(H-1″/C-1，H-1/C-1″)，确定β-D-葡萄糖基连接在C-1位置。确定了化合物的平面结构。
是本发明还通过NOSEY确定化合物Ⅱ-Ⅳ的结构，在化合物Ⅰ-Ⅳ的NOESY图谱中可见H-1/H-6/H-8相关，提示H-1/H-6/H-8和H-5/H-9在相反的位置，所以化合物C-1，C-5和C-6的绝对构型和经典的环烯醚萜的绝对构型是相同的，确定为1S,5S和9R.化合物Ⅰ-ⅣC-7and C-3′位的绝对构型则是通过NOE和CD和计算ECD比对确定的.在化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的NOESY谱中：H-7/H-8′exo,H-8′endo/H-4′确定H-7与苯环位于内酯环的异侧；相反的，化合物Ⅲ和化合物Ⅳ的NOESY谱中：H-7/H-8′exo/H-4′相关确定H-7与苯环位于内酯环的同侧。然后它们的绝对构型则是通过实测CD和计算ECD比对确定的。结果,化合物Ⅰ-Ⅳ的C-7and C-3′位的绝对构型被分别确定为7R/3′R,7S/3′S,7S/3′R,and 7R/3′S。这样,化合物Ⅰ为新化合物，命名为(7R,3′R)-lonijapospiroside A(Ⅰ),化合物Ⅱ-Ⅳ命名为lonijapospiroside A(Ⅱ),(7S,3′R)-lonijapospiroside A(Ⅲ)和7R,3′S)-lonijapospiroside A(Ⅳ).碳氢信号归属见表1。以上化合物Ⅰ的HR-ESI-MS、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、DEPT-135、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY、CD和ECD图谱详见附图1～附图12。
表1化合物Ⅰ-Ⅳ的碳氢核磁数据归属(in CD3OD)
实施例2炎症因子IL-6抑制活性测试方法：
1.实验过程：
化合物Ⅰ-Ⅳ用DMSO配制成所需浓度的母液(100mM)，取1.2μL加入1199μL无血清DMEM，混匀后在24孔板中每孔加入495μL。
将Raw264.7细胞以0.25％胰酶(含0.02％EDTA)消化，含10％FBS的DMEM培养基调整细胞密度为1×105个/ml，均匀接种至24孔板，每孔400μl。种板后放入培养箱培养24小时。培养24小时后，取出24孔板，吸去上清液，加入无血清的DMEM培养基配制的含药培养基：①溶剂对照组：每孔加入495μl含千分之一DMSO的无血清DMEM培养基；②模型组：每孔加入495μl含千分之一DMSO的无血清DMEM培养基；③给药样品组：每孔加495μl含相应浓度样品的培养基。
加药完毕后将24孔板放入CO2细胞培养箱培养1小时。1小时后，除溶剂对照组外，其余每孔加入5μl的100μg/ml的LPS(终浓度为1μg/ml)，溶剂对照组每孔加入5μl的无血清的DMEM培养基，加药完毕后将24孔板放入CO2细胞培养箱继续培养18小时。18小时后收集细胞培养液，并用无血清DMEM稀释5倍，按Elisa试剂盒说明书检测IL-6含量。
2.实验结果：
实验结果表明，从表2可以看出化合物I-IV在100μM的浓度下均能抑制IL-6的产生，表明化合物I-IV具有潜在的抗炎活性，可作为抗炎药物的先导化合物。
表2表14化合物I-IV对炎症因子的抑制率(％)
| Compounds | IL-6 |
| 塞来昔布 | 65.6±1.8 |
| I | 23.2±0.9 |
| II | 26.1±2.0 |
| III | 13.2±2.5 |
| IV | 33.7±1.1 |
由以上实验可知，本发明提出的化合物有一定的抗炎活性，其为新颖的天然抗炎药物的开发提供了新的选择。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种环烯醚萜苷化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，该化合物具有如下结构：
2.一种如权利要求1所述环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂用乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱部位，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用甲醇水溶液梯度洗脱后，再经制备高效液相色谱分离。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用60-80％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、25-35:65-75、48-52:48-52、92-100:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为48％～52％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以94-96:4-5:0、89-91:9-11:0、89-91:9-11:1、79-81:19-21:2、68-70:28-30:5、58-60:38-40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为79-81:19-21:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用28-32:68-72、48-52:48-52、67-73:29-31、58-62:39-41、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，经制备高效液相色谱分离。
4.化合物Ⅰ-Ⅳ或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，该化合物Ⅰ-Ⅳ具有如下结构：
5.如权利要求1或4所述的化合物在制备抗炎药物或IL-6抑制剂中的应用。
6.一种抗炎药物或IL-6抑制剂，其特征在于，包括权利要求1或4所述的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体、前药分子、代谢物，和药学上可接受的辅料。
7.如权利要求6所述的抗炎药物或IL-6抑制剂，其特征在于，所述抗炎药物或IL-6抑制剂的剂型为口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药制剂。
8.一种如权利要求4所述化合物Ⅰ-Ⅳ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂用乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱部位，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用甲醇水溶液梯度洗脱后，再经凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用60-80％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、25-35:65-75、48-52:48-52、92-100:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为48％～52％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以94-96:4-5:0、89-91:9-11:0、89-91:9-11:1、79-81:19-21:2、68-70:28-30:5、58-60:38-40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为79-81:19-21:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用28-32:68-72、48-52:48-52、67-73:29-31、58-62:39-41、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，其中，48-52:48-52的洗脱部位的馏分、67-73:29-31的洗脱部位的馏分、58-62:39-41的洗脱部位的馏分分别为二次第一馏分、二次第二馏分、二次第三馏分；
所述二次第一馏分经凝胶柱色谱分离用甲醇水48-52:48-52等度洗脱，经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅰ和Ⅳ；所述二次第二馏分和所述二次第三馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅱ和Ⅲ。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取山银花药材，用70％乙醇水溶液加热回流提取，得到提取液，除去所述提取液中的乙醇，得到浸膏；
将上述浸膏经大孔树脂以0:100、30:70、50:50、95:5的乙醇水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积分数为50％的乙醇水溶液的洗脱部位，减压浓缩和冷冻干燥，得到冻干粉；
将所述冻干粉经正相硅胶柱色谱以95:5:0、90:10:0、90:10:1、80:20:2、70:30:5、60:40:8的氯仿和甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集氯仿、甲醇以及水的体积比为80:20:2的洗脱部位的馏分，得到一次馏分；
将所述一次馏分用ODS柱色谱分离，用30:70、50:50、60:40、70:30、100:0的甲醇水溶液梯度洗脱后，收集不同部位的馏分，得到二次馏分，其中，50:50的洗脱部位的馏分、70:30的洗脱部位的馏分、60:40的洗脱部位的馏分分别为二次第一馏分、二次第二馏分、二次第三馏分；其中，
所述二次第一馏分经凝胶柱色谱分离用甲醇水48-52:48-52等度洗脱，经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅰ和Ⅳ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝23:77:0.1，v:v:v，流速：4ml/min；
所述二次第二馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅱ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝25:75:0.1，v:v:v，流速：4ml/min；
和所述二次第三馏分经制备高效液相色谱分离得到化合物Ⅲ，分离条件：CH3CN:H2O:HCOOH＝18:82:0.1，v:v:v，流速：4ml/min。
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Non-Patent Citations (3)
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|---|
| ZHIXIANG LIU，ET AL.: "Secondary metabolites from the flower buds of Lonicera japonica and their in vitro anti-diabetic activities", 《FITOTERAPIA》 * |
| ZHONG-FEI ZHENG，ET AL.: "Four new N-contained iridoid glycosides from flower buds of Lonicera japonica", 《JOURNAL OF ASIAN NATURAL PRODUCTS》 * |
| 杨倩茹，等: "金银花与山银花化学成分及其差异的研究进展", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
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