CN112274655A - 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用 - Google Patents

一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112274655A
CN112274655A CN202011286955.XA CN202011286955A CN112274655A CN 112274655 A CN112274655 A CN 112274655A CN 202011286955 A CN202011286955 A CN 202011286955A CN 112274655 A CN112274655 A CN 112274655A
Authority
CN
China
Prior art keywords
drug
pcm
loaded
citric acid
carrier
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011286955.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN112274655B (zh
Inventor
郭一飞
沈一平
张雪洁
王向涛
韩美华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Original Assignee
Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC filed Critical Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority to CN202011286955.XA priority Critical patent/CN112274655B/zh
Publication of CN112274655A publication Critical patent/CN112274655A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112274655B publication Critical patent/CN112274655B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及高分子药物制剂领域，具体涉及一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法与应用。本发明公开的纳米载药颗粒是以PCM为载体包载疏水性药物制得，具体如下：将PCM与疏水性药物分别溶于有机溶剂中，随后将含有PCM和疏水性药物的有机相在超声或搅拌条件下滴注至水相中，最终采用透析法去除有机溶剂得到纳米载药颗粒。本发明公开的纳米载药颗粒不仅制备工艺简单，而且载药量高、缓释效果好；经试验表明，所述PCMNPs既能提高药物抗肿瘤作用，又能提高肿瘤抑制率，且所述PCMNPs能提高小鼠体重，降低药物毒副作用，极具市场应用与推广前景。

Description

一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及高分子药物制剂领域，具体涉及一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法与应用。
背景技术
疏水性化合物因溶解度低，导致口服生物利用度低，药效得不到充分发挥，因此，如何有效提高难溶性化合物的溶解度是难溶性药物研发和成药的关键。据统计，全球约有40％的候选化合物因水溶性差而在药物开发研制中被淘汰，而在新发现的活性候选化合物中疏水性化合物占70％左右。同时，部分疏水性药物有较为明显的毒副作用，如阿霉素其存在多种副作用，如:恶心、呕吐、发热等，而累积性心肌毒性是其最严重的毒副作用之一，严重时可导致威胁生命的心脏疾病。
目前，提高难溶性药物溶解度的方法有成盐、共溶剂、微粉化、制成固体分散体和前药，但每种方法都有一定的局限性。纳米药物传递系统已成为现代药剂学研究的热点之一，并被广泛应用于疏水药物的传递。用高分子材料构建的纳米药物传递系统具有包封率高、药物释放可控、避免药物降解、靶向性好的优点。
聚柠檬酸材料(PCM)是以柠檬酸甲基丙烯酸酯为单体聚合而成的新型高分子材料，它具有合成成本低、产率高、易在体内降解、生物相容性好的优点。且PCM可通过带有负电荷羧基与具有正电荷端基的药物通过静电力作用制备成纳米颗粒(NPs)。
因此，如何提供一种制备工艺简单、性能优异的以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法是本领域技术人员亟待解决的技术难题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒，其不仅制备工艺简单，而且载药量高、缓释效果好。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，所述纳米载药颗粒是以PCM为载体，通过静电力作用物理包载疏水性药物制得，其与化学偶联包载药物相比具有操作简单，避免有机溶剂残留等优异特点；所述方法具体包括如下步骤：
(1)将PCM与疏水性药物分别溶于有机溶剂中，得到有机相I和有机相II，备用；
(2)将有机相I和有机相II涡旋混匀后，以5滴/s的速度滴注至水相中，得到产物溶液；
(3)采用透析法去除所述产物溶液中的有机溶剂，最终得到所述纳米载药颗粒。
本发明公开保护的制备方法工艺操作简单、重复性好，且通过该方法制备的纳米载药颗粒能实现难溶性药物的体内缓释、改善其体内分布、增强药物抗肿瘤药效及降低毒副作用。
示范性的，参见说明书附图1～2，本发明通过粒径分布及扫描电镜测试对所述以聚柠檬酸为载体制备的纳米载药颗粒进行了结构表征。
优选的，上述制备方法还包括高压均质：将所述纳米载药颗粒高压均质以降低颗粒的粒径；其中，所述高压均质的压力为1000～2000bar，优选为1500～1800bar；循环次数≥5次。
优选的，所述步骤(1)中的有机溶剂至少为DMF、DMSO、甲醇、乙醇、乙腈中的一种。
需要说明的是，所述有机溶剂能与水互溶，且所述有机溶剂优选为DMF。
进一步优选的，所述步骤(1)中，PCM与疏水性药物的质量比为1：(1～8)，且所述疏水性药物在所述有机溶剂中的浓度为5～20mg/mL。
更进一步的，PCM与疏水性药物的质量比为1：4，且疏水性药物在有机溶剂中的浓度为8～20mg/mL。
优选的，所述步骤(2)中，超声温度为15～35℃，超声功率为150～200W，超声时间为5～30min。
更进一步的，超声温度为10～25℃，超声功率为150～200W，超声时间为10～15min。
优选的，所述步骤(2)中，搅拌温度为10℃～50℃，搅拌速率为800～1200r/min，搅拌时间为10～30min。
优选的，所述步骤(3)中的透析时间为2～4h，透析速度为2L/h。
本发明的另一目的是提供上述方法制备的纳米载药颗粒。
所述纳米载药颗粒是以PCM为载体包载疏水性药物制得；其中所述PCM是以柠檬酸甲基丙烯酸酯为单体聚合得到。
本发明公开的纳米载药颗粒不仅制备工艺简单，而且载药量高、缓释效果好；经试验表明，所述PCMNPs既能提高药物抗肿瘤作用，又能提高肿瘤抑制率，且所述PCM NPs能提高小鼠体重，降低药物毒副作用，极具市场应用与推广前景。
本发明还有一个目的，就是提供上述以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒在药物制剂中的应用。
在一些应用场景中，还包括所述纳米载药颗粒在注射剂中的应用。
进一步需要说明的是，所述应用场景中，水相分散介质为葡萄糖水溶液调和成5％葡萄糖生理等渗体系以用于静脉给药途径。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法与应用，具有如下优异效果：
本发明公开制备的纳米载药颗粒不仅制备工艺简单，而且载药量高、缓释效果好；经试验表明，所述PCM NPs既能提高药物抗肿瘤作用，又能提高肿瘤抑制率，且所述PCM NPs对小鼠体重没有影响，可降低药物的毒副作用，极具市场应用与推广前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明PCM-DOX NPs的平均粒径分布图。
图2为本发明PCM-DOX NPs扫描电镜照片。
图3为本发明PCM-DOX NPs在PBS中的体外释放曲线。
图4为本发明PCM-DOX NPs 4T1细胞毒性考察。
图5为本发明PCM-DOX NPs对4T1荷瘤小鼠体内的抗肿瘤药效；其中a)为荷瘤小鼠肿瘤体积随时间变化曲线；b)为荷瘤小鼠抑瘤率。
图6为本发明PCM-DOX NPs对4T1荷瘤小鼠的毒副作用；其中a)为荷瘤小鼠体重随时间变化曲线；b)为荷瘤小鼠肝脾指数。
图7为本发明PCM-DOX NPs对4T1荷瘤小鼠心脏的毒副作用；其中a)为心脏重量、体重及心体重量比，b)为4T1荷瘤小鼠血清中LDH、AST、CK、CK-MB含量；c)和d)为4T1荷瘤小鼠肿瘤组织H&E染色分析，其中c)为DOX组，d)为PCM-DOX NPs组。
具体实施方式
下面将结合本发明说明书附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，不仅制备工艺简单，而且制备的纳米载药颗粒载药量高、缓释效果好，能够降低药物的毒副作用，适于市面推广与应用。
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。
下述实施例均以PCM为载体通过上述本发明公开的制备方法包载疏水性药物制备纳米载药颗粒。
实施例1
将20mg阿霉素(DOX)与5mgPCM溶于1mL DMF中，超声条件下将上述溶液滴入5mL去离子水中，溶液转移至透析袋(MWCO 8000～14000Da)中以去离子水透析4h(2L/h)除去有机相DMF和未负载上的游离药物，透析后在1600bar下高压均质5次即得PCM-DOX NPs。
其中，产物纳米载药颗粒的粒径为110.4nm，多分散指数(PDI)为0.18，Zeta电位为-29mV。
实施例2
将20mg甲氨蝶呤(MTX)与5mgPCM溶于1mL DMF中，超声条件下滴加入5mL去离子水中，溶液转移至透析袋(MWCO 8000～14000Da)中以去离子水透析4h(2L/h)除去有机相DMF和未负载上的游离药物，透析后1600bar下高压均质5次即得PCM-MTX NPs。
其中，产物纳米载药颗粒的粒径为289.5nm，多分散指数(PDI)为0.58，Zeta电位为-27.5mV。
实施例3
将20mg鬼臼毒素(POD)与5mg PCM溶于1mL DMF中，超声条件下滴加入5mL去离子水中，溶液转移至透析袋(MWCO 8000～14000Da)中以去离子水透析4h(2L/h)除去有机相DMF和未负载上的游离药物，透析后1600bar下高压均质5次即得PCM-POD NPs NPs。
其中，产物纳米载药颗粒的粒径为655.4nm，多分散指数(PDI)为0.57，Zeta电位为-24.8mV。
本发明内容不仅限于上述各实施例的内容，其中一个或几个实施例的组合同样也可以实现本发明目的。
为了进一步验证本发明的优异效果，发明人还进行了如下实验：
实验1：PCM-DOX NPs的形貌观察
将实施例1制备的PCM-DOX NPs溶液(4mg/mL)稀释100倍，滴于干净的硅胶片上晾干，使用导电胶固定，随后在负压、电流30mA的条件下喷金6min，升高电压至30mV，使用扫描电镜观察纳米颗粒形态，如图2所示。
由图2可知，PCM-DOX NPs呈不规则球状，大小较为均一
实验2：PCM-DOX NPs载药量和包封率考察
将实施例1制备的PCM-DOX NPs精密称重后，分别加入1mL色谱甲醇，涡旋15min使被负载的药物充分溶解后，13000r/min条件下高速离心30min，取上清液加入色谱甲醇稀释20倍后上样检测模型药物质量，按下列公式计算：
载药量(DLC％)＝负载药物总质量/纳米粒总质量×100％，
包封率(EE％)＝负载药物总质量/投入药物总质量×100％。
结果为DLC％＝68.3％，EE％＝85.37％
实验3：PCM-DOX NPs放置稳定性考察
将实施例1制备的PCM-DOX NPs溶液(4mg/mL)于4℃条件下密封放置，分别在预先设置的时间点0、2、4、6、8、10、12和14d取样，室温条件下马尔文Nano-ZS粒度仪测定其粒径，平行测量3次。
粒径变化结果见下表1所示：
表1
Time(d) Size(nm) PDI
0 84.48 11.8 0.19 0.02
2 102.5 15.4 0.18 0.02
4 101.3 12.2 0.16 0.04
6 116.1 15.1 0.14 0.02
8 113.9 14.5 0.13 0.07
10 121.4 10.8 0.15 0.04
12 119.4 17.6 0.19 0.05
14 122.2 14.9 0.17 0.04
由上述表1数据可知，PCM-DOX NPs在14天内放置稳定性较好。
实验4：PCM-DOX NPs在0.9％NaCl溶液，5％葡萄糖溶液，PBS和小鼠血浆中的稳定性考察
将实施例1制备的PCM-DOX NPs溶液(4mg/mL)分别与1.8％盐水、10％葡萄糖溶液和2X PBS按照1:1等体积混合成混合溶液中分散介质终浓度为0.9％盐水、5％葡萄糖溶液和1X PBS，或与小鼠血浆1:4比例(v/v)混合后，37℃孵育，在0、2、4、6和8h取样，测定粒径和电位，平行测量3次。
粒径变化结果见下表2所示：
表2
Time(h) 5％Glu Plasma
0 180 15.3 190 23.6
2 171.5 18.1 155.7 15.3
4 176.6 13.7 164.8 19.3
6 173.2 14.7 144.9 10.1
8 178.3 19.9 132.7 16.4
由上述表2数据可知，PCM-DOX NPs在5％Glu和小鼠血浆中能稳定存在。
实验5：PCM-DOX NPs体外释放实验
采用透析法进行体外药物释放试验，具体操作如下：
分别精密吸取2份PCM-DOX NPs(1mg/mL)2mL和DOX原药溶液，装入预先去离子水浸泡处理过的透析袋(MWCO 8000～14000Da)内，将扎紧袋口后，分别加入到50mL以释放介质为PBS的溶液(pH＝7.4，pH＝5.5，1％SDS)中，在37℃水浴中搅拌(100r/min)。在预设时间点下(0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、48、72、96、120和144h)取释放外液1mL,同时补充入等体积、等温度的释药介质，取出外液按上述色谱条件测定浓度，计算出药物累计释放百分比并绘制累计释放曲线，每个样品平行3份同时实验，实验结果见图3。
由图3可知，释药全程无明显突释现象，具有明显缓释效果。
实验6：PCM-DOX NPs在4T1细胞的体外细胞毒性考察
在37℃、5％CO2条件下，将对数生长期4T1细胞以8×103个/孔的密度接种于96孔板中。温育24h后，以空白培养基为对照，用新鲜的RPMI-1640培养基或DMEM培养基将DOX溶液、PCM-DOX NPs稀释成0.01、0.1、0.5、1、2、5、10、20和100μg/mL加入孔中，每孔150μL，每个浓度6个复孔。分别培养48和72h后，每孔加入CCK-8溶液10μL，孵育1.5h后用酶标仪在450nm波长测定光OD值。并通过GraphPadprism 5软件计算半数抑制浓度(50％Concentrationofinhibition，IC50)，且
细胞抑制率(％)＝(1-给药组OD值/对照组OD均值)×100％。
具体实验结果如图4所示，结果表明本发明公开制备的PCM-DOX纳米颗粒能显著提高DOX对4T1细胞的增殖抑制作用，且分别培养48和72h后各给药组的IC50见下表3所示：
表3
Figure BDA0002782683850000081
由上述表3数据可知，PCM-DOX NPs在给药48和72h后对4T1细胞具有明显抑制作用，对比DOX组呈现显著性差异。
实验7：PCM-DOX NPs在4T1荷瘤小鼠的抗肿瘤药效研究
按上述实验6公开的方法培养4T1细胞，并用RPMI-1640培养基配制成1×107个/mL的细胞悬液，BalB/c小鼠右侧腋下皮下注射0.2mL 4T1细胞悬液，待肿瘤体积生长到150mm3左右时，每组10只随机分成4组：阴性对照组为生理盐水尾静脉注射、阳性对照组为DOX尾静脉注射液、给药浓度3mg/kg，PCM尾静脉注射液组、给药浓度为0.75mg/kg，PCM-DOX NPs尾静脉注射液组、给药剂量3mg/kg。
其中，尾静脉注射给药每两天一次，给药第一次记为第0天并监测小鼠体重及肿瘤体积(肿瘤体积＝(长×宽×宽)/2)。给药第7次48h后称量小鼠体重及肿瘤体积，采用心脏取血法取小鼠血液，制备成血清后冷藏备用。
将小鼠脱颈处死，并将肿瘤组织完全剥离，摘取小鼠心脏、肝脏和脾，称量重量，按公式计算体内肿瘤抑制率(tumor inhibition rate，TIR)及肝脾指数(Liver index，LI，Spleen index，SI)，并用SPSS 24软件分析显著性差异。随后，将小鼠肿瘤组织及心脏组织使用4％组织固定液固定备用。具体结果如图5和图6所示。
结果表明，各给药组肿瘤体积生长过程中，DOX组在给药第4、8和14天瘤体积生长发生反弹，PCM-DOX NPs组在给药第14天发生反弹，PCM组给药后瘤体积未见明显抑制作用，PCM-DOX NPs组瘤体积对比DOX组瘤体积具有显著性差异(*P＜0.05)，PCM-DOX NPs组与DOX组瘤体积对比5％葡萄糖组均具显著性差异(**P＜0.01)(如图5a所示)。且DOX组抑瘤率为45.43±17.53％，PCM-DOXNPs的抑瘤率为64.52±13.44％，其相比于DOX组具有极显著差异(***P＜0.001)(如图5b所示)，且小鼠体重及肝脾指数均与Glu组无显著性差异(如图6所示)。
实验8：小鼠心肌毒性试验
称取小鼠心脏组织的重量后，对比各组差异进行分析。随后，使用全自动生化仪检测实验7中制备的小鼠血清中乳酸脱氢酶LDH、谷草转氨酶AST、磷酸肌酸激酶CK和磷酸肌酸激酶同工酶CK-MB释放量指标。将实验7中的小鼠肿瘤组织及心脏组织用4％组织固定液固定，5mm的组织切片用苏木精和伊红染色，光学显微镜下观察组织形态。
实验结果见图7，通过对比4T1荷瘤小鼠心脏重量(图7a)可以发现，DOX组小鼠心脏重量明显下降，与PCM-DOX NPs组心脏重量对比具有显著性差异(**P＜0.01)；
并对4T1荷瘤小鼠血清中乳酸脱氢酶LDH、谷草转氨酶AST、磷酸肌酸激酶CK和磷酸肌酸激酶同工酶CK-MB含量检测，结果见图7b，PCM-DOX NPs组能有效抑制LDH、CK及CK-MB释放，与DOX组对比具有显著性差异(**P＜0.01)；
此外，对比DOX组和PCM-DOX NPs组心脏组织切片观察结果(图7c及图7d)，DOX组心肌细胞发生明显细胞核溶解现象，大量心肌细胞凋亡，而PCM-DOXNPs组心肌细胞核无溶解、碎裂和萎缩等现象，有少量炎性浸润发生。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述纳米载药颗粒是以PCM为载体包载疏水性药物制得；具体包括如下步骤：
(1)将PCM与疏水性药物分别溶于有机溶剂中，得到有机相I和有机相II，备用；
(2)将有机相I和有机相II涡旋混匀后，滴注至水相中，得到产物溶液；
(3)采用透析法去除所述产物溶液中的有机溶剂，最终得到所述纳米载药颗粒。
2.根据权利要求1所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，还包括高压均质：将所述纳米载药颗粒高压均质以降低颗粒的粒径；其中，所述高压均质的压力为100～200MPa，循环次数≥5次。
3.根据权利要求1所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的有机溶剂至少为DMF、DMSO、甲醇、乙醇、乙腈中的一种。
4.根据权利要求3所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，PCM与疏水性药物的质量比为1：(1～8)，且所述疏水性药物在所述有机溶剂中的浓度为5～20mg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，超声温度为15～35℃，超声功率为150～250W，超声时间为5～30min。
6.根据权利要求1所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，搅拌温度为10℃～50℃，搅拌速率为800～1200r/min，搅拌时间为10～30min。
7.根据权利要求1所述的一种以聚柠檬酸为载体制备纳米载药颗粒的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的透析时间为2～4h，透析速度为2L/h。
8.一种如权利要求1～7任一所述方法制备的纳米载药颗粒，其特征在于，所述纳米载药颗粒是以PCM为载体包载疏水性药物制得；其中所述PCM是以柠檬酸甲基丙烯酸酯为单体聚合得到。
9.一种如权利要求1～7任一所述方法制备的纳米载药颗粒或如权利要求8所述的纳米载药颗粒在药物制剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的一种纳米载药颗粒的应用，其特征在于，还包括纳米载药颗粒在注射剂中的应用。
CN202011286955.XA 2020-11-17 2020-11-17 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用 Active CN112274655B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011286955.XA CN112274655B (zh) 2020-11-17 2020-11-17 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011286955.XA CN112274655B (zh) 2020-11-17 2020-11-17 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112274655A true CN112274655A (zh) 2021-01-29
CN112274655B CN112274655B (zh) 2023-01-10

Family

ID=74399579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011286955.XA Active CN112274655B (zh) 2020-11-17 2020-11-17 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112274655B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111777460A (zh) * 2020-07-17 2020-10-16 深圳万禾农业科技有限公司 一种适合盐碱土地和高硬度水质的全水溶性肥料及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101708335A (zh) * 2008-10-06 2010-05-19 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 pH敏感树枝状聚合物药物载体
US20100324315A1 (en) * 2010-08-30 2010-12-23 Fatemeh Atyabi Poly(citric acid) functionalized carbon nanotube drug delivery system
CN109535294A (zh) * 2018-11-29 2019-03-29 中国医学科学院药用植物研究所 一种含有柠檬酸甲基丙烯酸酯单体单元的聚合物及其在去除重金属离子中的应用
CN109646681A (zh) * 2019-01-16 2019-04-19 西安交通大学 一种用于体内靶向肿瘤成像与治疗的纳米基因载体及其制备方法和应用
CN110859826A (zh) * 2019-12-09 2020-03-06 深圳先进技术研究院 一种脑肿瘤靶向的仿生载药纳米颗粒及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101708335A (zh) * 2008-10-06 2010-05-19 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 pH敏感树枝状聚合物药物载体
US20100324315A1 (en) * 2010-08-30 2010-12-23 Fatemeh Atyabi Poly(citric acid) functionalized carbon nanotube drug delivery system
CN109535294A (zh) * 2018-11-29 2019-03-29 中国医学科学院药用植物研究所 一种含有柠檬酸甲基丙烯酸酯单体单元的聚合物及其在去除重金属离子中的应用
CN109646681A (zh) * 2019-01-16 2019-04-19 西安交通大学 一种用于体内靶向肿瘤成像与治疗的纳米基因载体及其制备方法和应用
CN110859826A (zh) * 2019-12-09 2020-03-06 深圳先进技术研究院 一种脑肿瘤靶向的仿生载药纳米颗粒及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GHEYBI, HOMA等: "《Nanosized micelles self-assembled from amphiphilic poly(citric acid)-poly(ε-caprolactone)-poly(citric acid) copolymers》", 《POLYMER BULLETIN》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111777460A (zh) * 2020-07-17 2020-10-16 深圳万禾农业科技有限公司 一种适合盐碱土地和高硬度水质的全水溶性肥料及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112274655B (zh) 2023-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bhadra et al. PEGylated peptide dendrimeric carriers for the delivery of antimalarial drug chloroquine phosphate
EP2289946A1 (en) A polyglycol modified chitosan oligosaccharide fatty acid graft, preparation method thereof and use of the same
Yang et al. Construction of pH/glutathione responsive chitosan nanoparticles by a self-assembly/self-crosslinking method for photodynamic therapy
Yin et al. Polydopamine-modified ZIF-8 nanoparticles as a drug carrier for combined chemo-photothermal osteosarcoma therapy
CN105131182B (zh) 普朗尼克‑聚(β‑氨基酯)聚合物及其合成和应用方法
CN107714675B (zh) 一种藤黄酸核壳结构复合纳米制剂及其制备方法
CN112545988B (zh) 氢溴酸常山酮-tpgs聚合物胶束及其制备方法
Das et al. Preparation of a size selective nanocomposite through temperature assisted co-assembly of gelatin and pluronic F127 for passive targeting of doxorubicin
CN107126426B (zh) 一种盐酸阿霉素自组装聚合物纳米粒及其制备方法
CN112274655B (zh) 一种以聚柠檬酸为载体的纳米载药颗粒及其制备方法及应用
CN109303768B (zh) 一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法
CN115040496B (zh) 中空介孔聚多巴胺载脂溶性色素纳米粒的制备方法
CN108524529B (zh) 基于两性离子及叶酸靶向的酸敏感性阿霉素前药及其制备方法与应用
CN112516114B (zh) 载花青素纳米粒
CN113244234B (zh) 一种金色酰胺醇酯-半枝莲碱-棕榈酸酯自组装纳米粒及其制备方法和应用
CN108888773B (zh) 自组装球形药物纳米制剂及其制备方法与用途
CN114948880B (zh) 一种咖啡酸苯乙酯纳米稳定缓释剂型的制备方法
CN107854430B (zh) 一种紫杉醇口服纳米混悬剂及其制备方法
CN113633786B (zh) 一种牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊及其制备方法
CN107011515B (zh) 一种三嵌段聚合物及其制备方法
CN112843035B (zh) 一种药物及用途和其制备方法
CN112353782A (zh) 一种以聚谷氨酸多肽为载体的纳米载药颗粒及其制备方法与应用
CN115089561A (zh) 一种细胞膜包被的前药纳米粒、制备方法及应用
CN113842462A (zh) 一种透明质酸-小分子自组装纳米药物的制备方法与应用
CN117085001B (zh) 一种双重靶向核壳结构纳米载药颗粒的制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant