CN112226477A - 一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 - Google Patents
一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112226477A CN112226477A CN202011092222.2A CN202011092222A CN112226477A CN 112226477 A CN112226477 A CN 112226477A CN 202011092222 A CN202011092222 A CN 202011092222A CN 112226477 A CN112226477 A CN 112226477A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- shellfish
- novel
- enzymolysis
- micromolecular
- protease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 title claims abstract description 53
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 23
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 21
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 15
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004537 pulping Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 18
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 12
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 12
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims description 8
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 6
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 claims description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 claims description 3
- 241000237509 Patinopecten sp. Species 0.000 claims description 3
- 241000490567 Pinctada Species 0.000 claims description 3
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 abstract description 3
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 abstract description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract 1
- POLBLONFVZXVPI-UHFFFAOYSA-N N-methyl-sec-pseudobrucine Natural products O=C1CC2C3C(CC4=O)OCC=C2CN(C)CCC11C3N4C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 POLBLONFVZXVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FLBVMURVUYAZMG-UHFFFAOYSA-N Novacin Natural products CN1CCC23C4C5C(CC(=O)N4c6cc(C)c(C)cc26)OCC=C(C1)C5CC3=O FLBVMURVUYAZMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 description 4
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 4
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 2
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 2
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 2
- 241000514719 Mactra quadrangularis Species 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000263300 Paphia undulata Species 0.000 description 1
- 241000237503 Pectinidae Species 0.000 description 1
- 241001245601 Perna viridis Species 0.000 description 1
- 241001212699 Pinctada martensii Species 0.000 description 1
- 108010054866 Shellfish Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 235000021404 traditional food Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
- A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用，包括以下步骤：S1、取海洋贝类去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，制得肉糜；S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加3‑6倍体积水，pH为6.4‑7.4，煮沸15‑30min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解过程中同时进行超声处理，酶解结束后进行灭酶处理，在8000‑13000r/min的转速下离心10‑15min，上清液通过孔径为30‑55nm的滤膜进行超滤分离，收集经滤膜截留的大分子多肽液，喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽。本发明制备的新型海洋贝类小分子免疫活性肽除了具有显著的抗氧化活性外，还具有抑制酪氨酸酶活性、减少紫外损伤、抑制黑色素生成、促进皮肤新陈代谢和伤口愈合、促进毛发生长等作用。
Description
技术领域
本发明涉及应用海洋生物技术领域，尤其涉及一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用。
背景技术
我国作为贝类养殖大国，海洋贝类养殖产量已达年均1000万吨以上，并且数量仍在不断增长，是我国海水养殖业的极其重要的一部分。但是，我国贝类除鲜销以外，贝类加工方式仍以人力为主，加工的产品以干制品和冷冻品等传统食品占主导，发展停滞在初级阶段。马氏珠母贝、翡翠贻贝、波纹巴非蛤等低值海洋贝类，其蛋白质营养价值高，氨基酸含量丰富且均衡，是优质的食品蛋白源。同时，这些海洋贝类蛋白酶解物中富含多肽、低聚肽、氨基酸等功能性营养成分，能够产生一些具有特殊生理功能的生物活性肽，可作为化妆品、营养食品和天然药物等的优质来源，具有广泛的应用前景，能使海洋低值贝类得到充分利用，实现其经济价值，为我国海洋贝类资源的高值化发展拓宽新的渠道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用，使海洋贝类得到充分利用，实现其经济价值，对我国海洋贝类资源的高值化发展具有十分重要的意义。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
本发明第一方面提供一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、取海洋贝类去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加3-6倍体积水，pH为6.4-7.4，煮沸15-30min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解过程中同时进行超声处理，酶解结束后进行灭酶处理，在8000-13000r/min的转速下离心10-15min，上清液通过孔径为30-55nm的滤膜进行超滤分离，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为180-220℃，进料速度为30-45ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH7.6-8.0；培养条件：32-35℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH7.6-8.0；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在40％以上，32-35℃，培养18小时。
优选地，S1中，所述海洋贝类为珍珠贝、扇贝、四角蛤和牡蛎中的一种或几种。
优选地，S1中，所述匀浆处理的搅拌速率为2000-10000rpm，时间为10-15min。
优选地，S2中，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为1-3:3-15。
优选地，S2中，所述酶解的时间为1-2h。
优选地，S2中，所述超声处理的功率为180-200W，所述超声处理的温度为25-40℃，所述声处理的时间为10-15min。
优选地，S2中，所述灭酶处理的具体过程为：加热至90-120℃并保持搅拌2-12min。
优选地，S2中，膜过滤的压强为1.0-1.5MPa，分离温度为40-50℃。
本发明第二方面提供由上述制备方法制得的新型海洋贝类小分子免疫活性肽。
本发明第三方面提供所述新型海洋贝类小分子免疫活性肽在护肤品中的应用。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明制备的新型海洋贝类小分子免疫活性肽除了具有显著的抗氧化活性外，还具有抑制酪氨酸酶活性、减少紫外线引起的皮肤损伤、抑制黑色素生成、促进皮肤新陈代谢和伤口愈合、促进毛发生长等作用，对肽的抗氧化活性也有显著的增强作用。
附图说明
图1为本发明中新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法的流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
如图1所示，本发明第一方面提供一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、取海洋贝类去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加3-6倍体积水，pH为6.4-7.4，煮沸15-30min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解过程中同时进行超声处理，酶解结束后进行灭酶处理，在8000-13000r/min的转速下离心10-15min，上清液通过孔径为30-55nm的滤膜进行超滤分离，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为180-220℃，进料速度为30-45ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH7.6-8.0；培养条件：32-35℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH7.6-8.0；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在40％以上，32-35℃，培养18小时。
作为一个优选实施例，S1中，所述海洋贝类为珍珠贝、扇贝、四角蛤和牡蛎中的一种或几种。
作为一个优选实施例，S1中，所述匀浆处理的搅拌速率为2000-10000rpm，时间为10-15min。
作为一个优选实施例，S2中，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为1-3:3-15。
作为一个优选实施例，S2中，所述酶解的时间为1-2h。
作为一个优选实施例，S2中，所述超声处理的功率为180-200W，所述超声处理的温度为25-40℃，所述声处理的时间为10-15min。
作为一个优选实施例，S2中，所述灭酶处理的具体过程为：加热至90-120℃并保持搅拌2-12min。
作为一个优选实施例，S2中，膜过滤的压强为1.0-1.5MPa，分离温度为40-50℃。
本发明第二方面提供采用上述制备方法制得的新型海洋贝类小分子免疫活性肽。
本发明第三方面提供采用上述新型海洋贝类小分子免疫活性肽在护肤品中的应用。
实施例1
一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、取珍珠贝去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，所述匀浆处理的搅拌速率为2000rpm，时间为10min，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加3倍体积水，pH为6.4，煮沸15min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解的时间为1h，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为1:3，酶解过程中同时进行超声处理，所述超声处理的功率为180W，所述超声处理的温度为25℃，所述声处理的时间为10min，酶解结束后加热至90℃并保持搅拌2min进行灭酶处理，在8000r/min的转速下离心10min，上清液通过孔径为30nm的滤膜进行超滤分离，膜过滤的压强为1.0MPa，分离温度为40℃，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为180℃，进料速度为30ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH7.6；培养条件：32℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH7.6；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在50％，32℃，培养18小时。
实施例2
一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、取扇贝去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，所述匀浆处理的搅拌速率为6000rpm，时间为13min，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加5倍体积水，pH为7.0，煮沸25min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解的时间为1h，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为2:10，酶解过程中同时进行超声处理，所述超声处理的功率为190W，所述超声处理的温度为30℃，所述声处理的时间为13min，酶解结束后加热至100℃并保持搅拌8min进行灭酶处理，在11000r/min的转速下离心12min，上清液通过孔径为45nm的滤膜进行超滤分离，膜过滤的压强为1.3MPa，分离温度为45℃，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为200℃，进料速度为35ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH8.0；培养条件：35℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH8.0；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在60％，35℃，培养18小时。
实施例3
一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、取四角蛤去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，所述匀浆处理的搅拌速率为10000rpm，时间为15min，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加6倍体积水，pH为7.4，煮沸30min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解的时间为2h，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为3:15，酶解过程中同时进行超声处理，所述超声处理的功率为200W，所述超声处理的温度为40℃，所述声处理的时间为15min，酶解结束后加热至120℃并保持搅拌12min进行灭酶处理，在13000r/min的转速下离心15min，上清液通过孔径为55nm的滤膜进行超滤分离，膜过滤的压强为1.5MPa，分离温度为50℃，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为220℃，进料速度为45ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH7.8；培养条件：34℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH7.8；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在50％，33℃，培养18小时。
应用例
1.实验原理：CAM方法常用于皮肤刺激的检测中。利用CAM膜或者血管呈现的特定信息，如出血、血管溶解、凝血、小血管直径微小改变等，可以评估受试物产生的刺激能力。
2.实验材料：实施例1-3中制备的新型海洋贝类免疫活性肽。
3.实验方法：在常规温度和湿度条件下，进行受精鸡卵的孵育阶段，每组实验鸡胚数分别为15只。在每个鸡胚的绒毛尿囊膜上放置1个硅酮橡胶环，内加35mg样品(粉末状)。将天窗用透明胶封住，放入(37.5±0.5)℃培养箱。加样40m in后，将鸡胚从培养箱中取出，移去透明胶和天窗周围的蛋壳以便观察。用放大镜灯观察硅酮橡胶环和鸡胚绒毛尿囊膜的状况，环外有异常情况的鸡胚将被剔除，计算RC50值进行皮肤刺激性试验。结果如表1所示：
表1
| 试验样品 | RC<sub>50</sub>(％) | CAMVA试验分级 |
| 实施例1 | 100 | Ⅲ |
| 实施例2 | 99 | Ⅲ |
| 实施例3 | 100 | Ⅲ |
注：CAM VA试验分级中，RC50＜1.0％，判定化学物为轻刺激及以上，设为“Ⅰ”；RC50为1.0～20.0％，判定化学物为微刺激，设为“Ⅱ”；RC50＞20.0％，判定化学物为无刺激，设为“Ⅲ”。
由表1中数据可知，采用本发明方法制备的新型海洋贝类小分子免疫活性肽对皮肤无刺激性，是一款天然、安全、高效的产品。
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取海洋贝类去壳去脏后进行清洗、打浆、匀浆，制得肉糜；
S2、在经步骤S1制得的所述肉糜中加3-6倍体积水，pH为6.4-7.4，煮沸15-30min，冷却至室温后先加入粗酶液，再加入蛋白酶进行酶解，酶解过程中同时进行超声处理，酶解结束后进行灭酶处理，在8000-13000r/min的转速下离心10-15min，上清液通过孔径为30-55nm的滤膜进行超滤分离，收集经滤膜截留的大分子多肽液，并于进风温度为180-220℃，进料速度为30-45ml/min的条件下进行喷雾干燥后，制得新型海洋贝类小分子免疫活性肽；
其中，所述粗酶液的制备过程为：取假单胞菌(Pseudomonas sp.)nic22依次经种子培养基、罐发酵培养基发酵培养后，离心，取上清液，得粗酶液；
所述种子培养基组份如下：1％蛋白胨、1％氯化钠、0.5％酵母提取物、余量水，pH 7.6-8.0；培养条件：32-35℃，150rpm，摇床培养18小时；
所述罐发酵培养基组份如下：1.6％玉米粉、0.1％MnSO4、0.08％KH2PO4、1％KCl、余量水，pH7.6-8.0；接种量：7wt％液体种子，培养条件：溶氧DO维持在40％以上，32-35℃，培养18小时。
2.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S1中，所述海洋贝类为珍珠贝、扇贝、四角蛤和牡蛎中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S1中，所述匀浆处理的搅拌速率为2000-10000rpm，时间为10-15min。
4.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S2中，所述蛋白酶为诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的混合物，且所述诺维信碱性蛋白酶和诺维信风味蛋白酶的体积比为1-3:3-15。
5.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S2中，所述酶解的时间为1-2h。
6.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S2中，所述超声处理的功率为180-200W，所述超声处理的温度为25-40℃，所述声处理的时间为10-15min。
7.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S2中，所述灭酶处理的具体过程为：加热至90-120℃并保持搅拌2-12min。
8.根据权利要求1所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法，其特征在于，S2中，膜过滤的压强为1.0-1.5MPa，分离温度为40-50℃。
9.由权利要求1-8中任一项所述的制备方法制得的新型海洋贝类小分子免疫活性肽。
10.权利要求9所述的新型海洋贝类小分子免疫活性肽在护肤品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011092222.2A CN112226477A (zh) | 2020-10-13 | 2020-10-13 | 一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011092222.2A CN112226477A (zh) | 2020-10-13 | 2020-10-13 | 一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112226477A true CN112226477A (zh) | 2021-01-15 |
Family
ID=74113458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011092222.2A Pending CN112226477A (zh) | 2020-10-13 | 2020-10-13 | 一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112226477A (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1456097A (zh) * | 2003-04-26 | 2003-11-19 | 李扬远 | 功能性海洋食品及其生产方法 |
| CN101177669A (zh) * | 2007-05-29 | 2008-05-14 | 云南烟草科学研究院 | 一种用微生物制备的粗酶液及其应用 |
| CN101736064A (zh) * | 2010-01-20 | 2010-06-16 | 山东大学 | 酶解海洋贝类免疫增强肽的制备方法与应用 |
| CN102188332A (zh) * | 2011-03-31 | 2011-09-21 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种含有海洋贝类活性肽的化妆品及其制备方法和应用 |
| CN104472848A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-04-01 | 广东海洋大学 | 一种基于模拟消化制备海洋低值贝类低聚肽的方法 |
| CN106282286A (zh) * | 2016-10-14 | 2017-01-04 | 浙江双屿生物股份有限公司 | 一种小分子贝类多肽的提取方法 |
| CN106544384A (zh) * | 2015-09-17 | 2017-03-29 | 广西正五海洋产业股份有限公司 | 一种从贝类加工副产物中提取活性肽的方法 |
| CN107557414A (zh) * | 2017-10-11 | 2018-01-09 | 广西南宁荣威德新能源科技有限公司 | 一种贝壳活性物质的提取方法 |
-
2020
- 2020-10-13 CN CN202011092222.2A patent/CN112226477A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1456097A (zh) * | 2003-04-26 | 2003-11-19 | 李扬远 | 功能性海洋食品及其生产方法 |
| CN101177669A (zh) * | 2007-05-29 | 2008-05-14 | 云南烟草科学研究院 | 一种用微生物制备的粗酶液及其应用 |
| CN101736064A (zh) * | 2010-01-20 | 2010-06-16 | 山东大学 | 酶解海洋贝类免疫增强肽的制备方法与应用 |
| CN102188332A (zh) * | 2011-03-31 | 2011-09-21 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种含有海洋贝类活性肽的化妆品及其制备方法和应用 |
| CN104472848A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-04-01 | 广东海洋大学 | 一种基于模拟消化制备海洋低值贝类低聚肽的方法 |
| CN106544384A (zh) * | 2015-09-17 | 2017-03-29 | 广西正五海洋产业股份有限公司 | 一种从贝类加工副产物中提取活性肽的方法 |
| CN106282286A (zh) * | 2016-10-14 | 2017-01-04 | 浙江双屿生物股份有限公司 | 一种小分子贝类多肽的提取方法 |
| CN107557414A (zh) * | 2017-10-11 | 2018-01-09 | 广西南宁荣威德新能源科技有限公司 | 一种贝壳活性物质的提取方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 于小航等: "一株中性蛋白酶产生菌的筛选及产酶条件优化", 《工业微生物》 * |
| 夏克胜等: "米曲霉粗酶和商业蛋白酶对马氏珍珠贝肉酶解特性的比较", 《食品与发酵工业》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2021142880A1 (zh) | 一种蛤蜊活性肽的生产方法 | |
| CN113088548A (zh) | 一种牡蛎抗氧化活性肽的制备方法 | |
| CN110684816A (zh) | 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用 | |
| CN101240313B (zh) | 一种鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法 | |
| CN101972004A (zh) | 牡蛎酶解物的制备方法及应用 | |
| CN109402204B (zh) | 一种小球藻免疫活性肽的制备方法 | |
| WO2019119998A1 (zh) | 一种适用于贻贝的蛋白源重金属脱除剂及其制备方法 | |
| US20210301314A1 (en) | Preparation method and application of sea cucumber protein peptides | |
| CN107893098A (zh) | 一种海洋鱼低聚肽及其制备方法和应用 | |
| CN112790392A (zh) | 一种海参肽的制备方法 | |
| CN111493292B (zh) | 一种以海洋生物和/或海产品加工废弃物为原料制备精膏的方法 | |
| CN105859839B (zh) | 一种促进仔猪生长的生物活性肽及其制备方法和应用 | |
| CN110846366B (zh) | 一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法 | |
| CN108588053B (zh) | 动物蛋白水解专用酶及其制备方法 | |
| CN104522798B (zh) | 一种发酵磷虾饮料及其制作方法 | |
| CN109806383A (zh) | 一种鳗鱼肽在制备促进免疫的食品、药品或保健品中的应用 | |
| CN112226477A (zh) | 一种新型海洋贝类小分子免疫活性肽的制备方法和应用 | |
| CN101982113A (zh) | 一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法 | |
| CN112779308A (zh) | 一种小分子牡蛎肽的制备方法 | |
| CN103276038A (zh) | 一种试剂级蛋白胨的生产方法 | |
| JPS6017495B2 (ja) | 酵母製品およびその製造方法 | |
| CN103937858A (zh) | 一种从裂壶藻藻粕制备抗氧化剂的方法 | |
| CN111758921B (zh) | 一种鸡胚蛋粉和饮料及其加工工艺 | |
| TWI722976B (zh) | 營養組成物之用途 | |
| CN113912704B (zh) | 一种具有修复酒精损伤人胃黏膜细胞的鱼源胶原蛋白水解物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210115 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |