CN112203691A

CN112203691A - 癌症的治疗

Info

Publication number: CN112203691A
Application number: CN201980031725.8A
Authority: CN
Inventors: S·E·阿布杜拉; A·K·古普塔; 宋绪阳
Original assignee: Innate Pharma SA; MedImmune Ltd
Current assignee: Innate Pharma SA; MedImmune Ltd
Priority date: 2018-05-15
Filing date: 2019-05-14
Publication date: 2021-01-08
Also published as: AU2019270277A1; WO2019219658A1; SG11202011117VA; KR20210010486A; EA202092696A1; JP2021523170A; MA52627A; TW202011989A; CA3099820A1; EP3793607A1; US20210253694A1

Abstract

本发明涉及NKG2A中和剂和PD‑1中和剂用于治疗癌症、特别是特征不在于DNA错配修复缺陷的癌症的用途。提供了治疗癌症的方法，以及可用于治疗特征不在于DNA错配修复缺陷的癌症的组合物和试剂盒。

Description

癌症的治疗

技术领域

本发明涉及NKG2A中和剂和PD-1中和剂用于治疗癌症、特别是特征不在于DNA错配修复缺陷的癌症的用途。包括MSS癌症的治疗。本发明特别适用于治疗晚期复发性或转移性结直肠癌。

背景技术

NK细胞活性受到涉及活化性信号和抑制性信号的复杂机制的调节。已经鉴定了若干种不同的NK特异性受体，这些受体在NK细胞介导的HLA I类缺陷靶细胞的识别和杀伤中起重要作用。天然细胞毒性受体(NCR)是指一类活化受体蛋白以及表达它们的基因，这些受体在NK细胞中特异性表达。NCR的实例包括NKp30、NKp44和NKp46。这些受体是Ig超家族的成员，并且它们通过特异性单克隆抗体诱导的交联导致强烈的NK细胞活化，从而导致细胞内Ca⁺⁺水平增加，触发细胞毒性和淋巴因子释放，并且活化针对许多类型的靶细胞的NK细胞毒性。

CD94/NKG2A是在淋巴细胞亚群上发现的抑制性受体。CD94/NKG2A限制细胞因子释放和某些淋巴细胞对表达CD94/NKG2A-配体HLA-E的细胞的细胞毒性反应。还发现HLA-E由某些肿瘤细胞和活化的内皮细胞以可溶性形式分泌。抑制CD94/NKG2A信号传导的抗体可以增加淋巴细胞对HLA-E阳性靶细胞的细胞因子释放和细胞溶解活性，诸如CD94/NKG2A阳性NK细胞对表达HLA-E的肿瘤细胞或病毒感染细胞的反应。因此，中和抗NKG2A抗体可以用于治疗癌症。

结直肠癌(CRC)占所有癌症的10％-15％，并且是西方世界癌症死亡的主要原因。治疗转移性CRC(mCRC)的医护标准仍然是使用细胞毒性剂。最近，已经在CRC中测试了免疫治疗剂。Le等人(N Engl J Med.[新英格兰医学杂志]2015；372：2509-2520)使用帕姆单抗(pembrolizumab，一种抗程序性死亡1免疫检查点抑制剂)在CRC中进行了2期临床研究，发现免疫相关的客观反应率和免疫相关的PFS率对MSI-H CRC分别为40％(10名患者中的4名)和78％(9名患者中的7名)，并且对微卫星稳定/熟练的MSS CRC分别为0％(18名患者中的0名)和11％(18名患者中的2名)。与11/18的MSS CRC患者相比，10名MSI-H CRC患者中只有1名出现疾病进展。

遗憾的是，化学治疗剂和/或靶向疗法不能为患有非MSI-H CRC的患者提供足够和/或持久的抗肿瘤反应。因此，本领域需要对不具有DNA修复缺陷的治疗患者提供改善的益处。

发明内容

本发明尤其在以下观察中产生：当用NKG2A中和剂莫纳利珠单抗(monalizumab)和PD-1中和剂德瓦鲁单抗(durvalumab)治疗时，患有MSS-CRC的人类患者显示出有希望的抗肿瘤反应。尽管已经认为PD-1中和剂不太适合MSS-CRC，但令人惊讶地发现这两种药剂的组合可以有益于治疗MSS-CRC。不希望受理论的束缚，可能是HLA-E/NKG2A轴的中和可以使MSS-CRC肿瘤对通过宿主免疫系统进行的识别和/或裂解敏感。

在一个方面中，本发明提供了在对其有需要的个体中治疗和/或预防癌症和/或引发抗肿瘤免疫反应的方法，其中，所述个体患有非MSI高肿瘤，该方法包括用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗所述个体。在一个实施例中，肿瘤是MSI低的。在另一个实施例中，肿瘤是MSS。在一个实施例中，癌症或肿瘤是结直肠癌(CRC)，任选地是晚期复发性或转移性结直肠癌(mCRC)。

在一个方面中，本发明提供了在对其有需要的个体中治疗和/或预防癌症和/或引发抗肿瘤免疫反应的方法，其中，所述个体患有非DNA错配修复(MMR)缺陷性的肿瘤，该方法包括用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗所述个体。在一个实施例中，肿瘤是MSI低的。在另一个实施例中，肿瘤是MSS。在一个实施例中，癌症或肿瘤是结直肠癌(CRC)，任选地是晚期复发性或转移性结直肠癌(mCRC)。

在一个方面中，本发明提供了在对其有需要的个体中治疗癌症和/或引发抗肿瘤免疫反应的方法，其中，所述个体患有非MSI高(MSI-H)的晚期复发性或转移性结直肠癌，任选地转移性结直肠癌，该方法包括用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗所述个体。

在一个方面中，本发明提供了在对其有需要的个体中治疗癌症和/或引发抗肿瘤免疫反应的方法，其中，所述个体患有微卫星不稳定性低(MSI-Low)的或微卫星稳定(MSS)的晚期复发性或转移性结直肠癌，任选地转移性结直肠癌，该方法包括用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗所述个体。

在一个实施例中，提供了一种用于在个体中治疗或预防癌症任选地CRC或mCRC的方法，该方法包括：(i)鉴定患有非DNA错配修复缺陷性的肿瘤的个体，并且(ii)向个体施用有效量的中和抑制性受体NKG2A的药剂和有效量的中和PD-1的药剂。

在一个实施例中，提供了一种用于在个体中治疗或预防癌症任选地CRC或mCRC的方法，该方法包括：(i)鉴定患有非MSI高肿瘤的肿瘤的个体，并且(ii)向个体施用有效量的中和抑制性受体NKG2A的药剂和有效量的中和PD-1的药剂。

在一个实施例中，提供了一种用于在个体中治疗或预防癌症任选地CRC或mCRC的方法，该方法包括：(i)鉴定患有是MSS肿瘤的肿瘤的个体，并且(ii)向个体施用有效量的中和抑制性受体NKG2A的药剂和有效量的中和PD-1的药剂。

在另一个实施例中，提供了一种用于确定患有癌症任选地CRC或mCRC的个体是否将从使用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂的治疗中获得特定的益处、对该治疗反应和/或适合该治疗的方法，该方法包括确定所述个体是否患有是DNA错配修复缺陷性的肿瘤，其中，确定肿瘤是非DNA错配修复缺陷性的指示该个体将从使用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和人类PD-1多肽的药剂的治疗中获得特定的益处、对该治疗反应和/或适合该治疗。

在另一个实施例中，提供了一种用于确定患有癌症任选地CRC或mCRC的个体是否将从使用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂的治疗中获得特定的益处、对该治疗反应和/或适合该治疗的方法，该方法包括确定所述个体是否患有缺乏微卫星不稳定性的肿瘤(例如，该个体患有MSS肿瘤)，其中，确定肿瘤缺乏微卫星不稳定性(例如，该个体患有MSS肿瘤)指示该个体将从使用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和人类PD-1多肽的药剂的治疗中获得特定的益处、对该治疗反应和/或适合该治疗。

微卫星不稳定性是由受损的DNA错配修复(MMR)导致的遗传超突变性的情况。MSI的存在代表MMR不能正常运作的表型证据。在大多数情况下，MSI肿瘤中的不稳定性的遗传基础是五种人类MMR基因中任何一种或多种的遗传性生殖系改变：MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1。因此，可以通过评估微卫星标记和/或MMR基因来确定肿瘤中的微卫星不稳定性。

在一个实施例中，鉴定其肿瘤不具有微卫星不稳定性(例如，其肿瘤是微卫星稳定(MSS)的肿瘤)的个体的步骤包括：(a)从包含肿瘤细胞的个体中获得生物样品(例如，包括获得活组织检查)，(b)确定生物样品内的肿瘤细胞的微卫星状态。个体患有特征不在于微卫星不稳定性的肿瘤(例如，肿瘤是MSS，肿瘤的特征在于微卫星稳定性)的发现指示该个体可以有利地用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂进行治疗。

在一个实施例中，确定肿瘤细胞的微卫星状态的步骤包括检测肿瘤细胞中DNA错配修复(MMR)蛋白表达的改变，任选地其中，该MMR蛋白选自MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1，任选地其中，该MMR基因或蛋白选自MSH2、MLH1、MSH6和PMS2。在一个实施例中，个体患有特征在于至少一种MMR蛋白的减少或缺失的肿瘤的发现指示肿瘤的特征在于微卫星不稳定性。其肿瘤不具有至少一种MMR蛋白的减少或缺失的个体可以被指定为指示肿瘤的特征在于微卫星稳定性(例如，MSS)，并且可以有利地用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗。例如，可以根据用于评估DNA错配修复缺陷的标准方法和指南来评估MMR蛋白的减少。任选地，MMR蛋白的表达的降低可以对应于与MSS相关联的参考值相比的降低；任选地，MMR蛋白的表达的降低对应于与MSI相关联的参考值。替代性地，可以通过与参考值进行比较来评估至少一种MMR蛋白的减少，该参考值可以是，例如，在同一个体的健康组织中测量的一种或多种相同MMR蛋白的水平，或者在不同时间段分析的同一个体的肿瘤样品中测量的一种或多种相同MMR蛋白的水平，或来自健康个体诸如未患癌症的个体的生物样品中一种或多种相同MMR蛋白的平均水平。

在一个实施例中，确定肿瘤细胞的微卫星状态的步骤包括检测微卫星标记或微卫星标记组的改变。任选地，在选自下组的一种或多种微卫星标记中检测改变，该组由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO27、D5S346、D2S123和D17S250，更具体地由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。其肿瘤不具有高频微卫星不稳定性的个体指示该肿瘤的特征在于微卫星稳定性(MSS)或微卫星不稳定性低(MSI-Low)，并且可以有利地用中和抑制性受体NKG2A的药剂和中和PD-1的药剂治疗。

在一个实施例中，中和抑制性受体NKG2A的药剂是任选地通过抑制人类HLA-E与人类NKG2A蛋白之间的相互作用来中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的蛋白质(例如，抗体)。在一个实施例中，中和抑制性受体NKG2A的药剂是结合人类NKG2A多肽并中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的蛋白质(例如，抗体)，该蛋白质抑制或不抑制人类HLA-E与人类NKG2A蛋白质之间的相互作用。在一个实施例中，中和抑制性受体NKG2A的药剂是结合人类HLA-E多肽并抑制人类HLA-E与人类NKG2A蛋白之间的相互作用的蛋白质(例如，抗体)。

在一个实施例中，中和人类PD-1多肽的药剂是中和PD-1的抑制性活性的抗PD-1或抗PDL-1抗体。该个体可以被指定为人类。

在一个实施例中，提供了一种在个体中增加肿瘤浸润性CD8+T细胞和/或NK细胞的活性和/或数量的方法，该个体患有特征不在于缺陷性DNA错配修复的肿瘤(例如，CRC、mCRC)，该方法包括向个体施用治疗活性量的中和抑制性受体NKG2A的化合物和治疗活性量的中和PD-1多肽的化合物。

在一个实施例中，提供了一种在个体中增加肿瘤浸润性CD8+T细胞和/或NK细胞的活性和/或数量的方法，该个体患有特征不在于微卫星不稳定性(例如，表征为MSS的癌症)的肿瘤(例如，CRC、mCRC)，该方法包括向个体施用治疗活性量的中和抑制性受体NKG2A的化合物和治疗活性量的中和PD-1多肽的化合物。

在一个实施例中，提供了中和NKG2A的药剂，任选地抗NKG2A抗体，该药剂用于治疗特征不在于微卫星不稳定性(例如，表征为MSS的癌症)的结直肠癌(例如，mCRC)，其中，中和NKG2A的药剂与中和PD-1的药剂任选地抗PD-1或抗PD-L1抗体组合施用。

在一个实施例中，提供了中和人类PD-1多肽的药剂，任选地抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体，该药剂用于治疗特征不在于微卫星不稳定性(例如，表征为MSS的癌症)的结直肠癌(例如，mCRC)，其中，中和人类PD-1多肽的药剂与中和抑制性受体NKG2A的药剂任选地抗NKG2A抗体组合施用。

在本文的任何实施例的一个方面中，该个体已接受过放射疗法、手术、化学疗法和/或用生物制剂治疗的预先治疗。

这些方面在本文提供的本发明的描述中将更加充分地描述，并且其他方面、特征和优点将由于该描述而变得明显。

附图说明

图1是在MSS-CRC试验的扩展群组中，针对每个患者(水平轴)在可评估群体中相对基线的肿瘤大小的最佳变化(以％表示，左侧垂直轴)和治疗响应的持续时间(以周表示，z轴)的3D表示。

图2是与图1相比，在更长时间段内在MSS-CRC试验的扩展群组中，针对每个患者(水平轴)在可评估群体中相对基线的肿瘤大小的最佳变化(以％表示，左侧垂直轴)和治疗响应的持续时间(以周表示，z轴)的3D表示。

具体实施方式

定义

如本说明书中所使用的，“一个(a)”或“一种(an)”可以意指一个/种或多个/种。如一项或多项权利要求中所使用的，当与单词“包括”结合使用时，单词“一个”或“一种”可以意指一个/种或多于一个/种。如本文所使用的，“另一个/种”可以意指至少第二个/种或更多个/种。

在使用“包含”的情况下，这可以任选地被“基本上由...组成”或“由...组成”代替。

NKG2A(OMIM 161555，其全部披露内容通过引用结合在此)是NKG2转录物组的成员(Houchins等人(1991)J.Exp.Med.[实验医学杂志]173：1017-1020)。NKG2A由跨越25kb的7个外显子编码，示出一些差异剪接。NKG2A与CD94一起形成异二聚体抑制性受体CD94/NKG2A，该受体存在于NK细胞、α/βT细胞、γ/δT细胞和NKT细胞的亚群的表面上。类似于抑制性KIR受体，它在其细胞质结构域中具有ITIM。如本文所使用的，“NKG2A”是指NKG2A基因或编码蛋白的任何变体、衍生物、或同种型。人类NKG2A在3个结构域中包含具有以下序列的233个氨基酸，其中细胞质结构域包含残基1-70，跨膜区包含残基71-93，并且胞外区包含残基94-233：

NKG2C(OMIM 602891，其全部披露内容通过引用结合在此)和NKG2E(OMIM 602892，其全部披露内容通过引用结合在此)是NKG2转录物组的另外两个成员(Gilenke等人(1998)Immunogenetics[免疫遗传学]48：163-173)。CD94/NKG2C和CD94/NKG2E受体是在淋巴细胞亚群(诸如NK细胞和T细胞)表面上发现的活化受体。

HLA-E(OMIM 143010，其全部披露内容通过引用结合在此)是非经典的MHC分子，例如像衍生自其他MHC I类分子的信号序列的片段，该分子在细胞表面上表达并且通过肽的结合进行调节。还鉴定了HLA-E的可溶性形式。除了其T细胞受体结合特性之外，HLA-E通过特异性结合CD94/NKG2A、CD94/NKG2B和CD94/NKG2C来结合天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T细胞(NKT)和T细胞(α/β和γ/δ)的亚群(参见例如，Braud等人(1998)Nature[自然]391：795-799，其全部披露内容通过引用结合在此)。HLA-E的表面表达保护靶细胞免于通过CD94/NKG2A+NK、T或NKT细胞克隆进行的裂解。如本文所使用的，“HLA-E”是指HLA-E基因或编码蛋白的任何变体、衍生物或同种型。

在本发明的上下文中，“NKG2A-”或“CD94/NKG2A-”，“阳性淋巴细胞”或“限制性淋巴细胞”是指在细胞表面上表达CD94/NKG2A的淋巴谱系的细胞(例如，NK细胞、NKT细胞和T细胞)，这些细胞可以通过例如使用特异性识别CD94和NKG2A上的组合表位或单独NKG2A上的表位的抗体进行流式细胞术来检测。“NKG2A阳性淋巴细胞”还包括淋巴来源的永生细胞系(例如，NKL、NK-92)。

在本发明的上下文中，“降低NKG2A的抑制性活性”、“中和NKG2A”或“中和NKG2A的抑制性活性”是指其中CD94/NKG2A的负面影响细胞内过程的能力受到抑制的过程，这些细胞内过程导致淋巴细胞反应，诸如细胞因子释放和细胞毒性反应。这可以例如在基于NK细胞或T细胞的细胞毒性测定中进行测量，其中测量治疗性化合物刺激CD94/NKG2A阳性淋巴细胞杀伤HLA-E阳性细胞的能力。在一个实施例中并参考本文所述的细胞毒性测定，中和NKG2A的抗体制品引起CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性增加至少10％，任选地所述淋巴细胞细胞毒性增加至少40％或50％，任选地所述淋巴细胞细胞毒性增加至少70％任选地NK细胞毒性增加至少70％。如果抗NKG2A抗体减少或阻断CD94/NKG2A与HLA-E的相互作用，则它可以增加CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性。这可以例如在使用例如表达CD94/NKG2A的NK细胞和表达HLA-E的靶细胞的标准的4小时体外细胞毒性测定中进行评估。这类NK细胞不能有效杀伤表达HLA-E的靶标，因为CD94/NKG2A识别HLA-E，从而导致防止淋巴细胞介导的细胞溶解的抑制性信号传导的起始和传播。这种体外细胞毒性测定可以通过本领域熟知的标准方法进行，例如，如在Coligan等人编，Current Protocols inImmunology[现代免疫学方法]，Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience[格林出版协会和威利跨学科出版社]，N.Y.[纽约]，(1992，1993)中所述。评估抗体刺激淋巴细胞杀伤靶细胞(诸如P815、K562细胞或适当的肿瘤细胞)的能力的铬释放和/或其他参数也披露于Sivori等人，J.Exp.Med.[实验医学杂志]1997；186：1129-1136；Vitale等人，J.Exp.Med.[实验医学杂志]1998；187：2065-2072；Pessino等人J.Exp.Med.[实验医学杂志]1998；188：953-960；Neri等人Clin.Diag.Lab.Immun.[临床和诊断实验室免疫学]2001；8：1131-1135；Pende等人J.Exp.Med.[实验医学杂志]1999；190：1505-1516，其中每个的全部披露内容通过引用结合在此。在加入NK细胞之前，用⁵¹Cr标记靶细胞，并且然后估计杀伤与⁵¹Cr由于杀伤而从细胞到培养基中的释放成比例。加入防止CD94/NKG2A与HLA-E结合的抗体导致防止经由CD94/NKG2A进行的抑制性信号传导的起始和传播。因此，加入这类药剂导致淋巴细胞介导的靶细胞杀伤增加。因此，此步骤鉴定了通过例如阻断配体结合来防止CD94/NKG2A诱导的负信号传导的药剂。在特定的⁵¹Cr释放细胞毒性测定中，表达CD94/NKG2A的NK效应细胞可以杀伤HLA-E阴性LCL 721.221靶细胞，但是不太好杀伤表达HLA-E的LCL721.221-Cw3对照细胞。相比之下，缺乏CD94/NKG2A的YTS效应细胞有效地杀伤两种细胞系。因此，由于经由CD94/NKG2A进行的HLA-E诱导的抑制性信号传导，NK效应细胞较低效地杀伤HLA-E⁺LCL 721.221-Cw3细胞。当NK细胞与此处所述的阻断性抗CD94/NKG2A抗体在这种⁵¹Cr释放细胞毒性测定中预温育时，表达HLA-E的LCL 721.221-Cw3细胞以抗体浓度依赖性方式被更有效地杀伤。抗NKG2A抗体的抑制性活性(即，细胞毒性增强的可能性)也可以通过许多其他方式中的任一种来评估，例如通过它对细胞内游离钙的影响来评估，如在例如Sivori等人J.Exp.Med.[实验医学杂志]1997；186：1129-1136中所述，其披露内容通过引用结合在此。可以例如通过测量细胞因子产生(例如，IFN-γ产生)或细胞毒性标记(例如，CD107或CD137动员)的增加来评估NK细胞细胞毒性的活化。在示例性方案中，通过细胞表面和胞质内染色以及在培养4天后通过流式细胞术的分析来评估来自PBMC的IFN-y产生。简而言之，在培养的最后4小时中加入布雷菲德菌素A(西格玛埃德里奇公司(Sigma Aldrich))，终浓度为5μg/ml。然后将细胞与抗CD3和抗CD56单克隆抗体一起温育，之后进行透化(IntraPrep^TM；贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))并用PE-抗-IFN-y或PE-IgG1(法明根公司(Pharmingen))染色。使用ELISA在上清液中测量来自多克隆活化的NK细胞的GM-CSF和IFN-y产生(GM-CSF：DuoSet Elisa，明尼苏达州明尼阿波利斯的R&D系统公司(R&DSystems，Minneapolis，MN)，IFN-y：OptElA set，法明根公司(Pharmingen))。

如本文所使用的，“治疗”(“treatment”和“treating”等)通常意指获得所希望的药理学和生理学效果。就预防或部分预防疾病或其症状或病状而言，该效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病、病状、症状或由于疾病造成的不良反应而言，该效果可以是治疗性的。如本文所使用的，术语“治疗”包括哺乳动物(特别是人类)的疾病的任何治疗，并且包括：(a)在可能易患疾病但尚未被诊断为患有该疾病的受试者中预防该疾病发生，诸如预防性早期无症状干预；(b)抑制疾病，例如遏制疾病的发展；或者例如在已被诊断患有该疾病的受试者中缓解疾病，例如引起疾病和/或其症状或病状的消退，诸如改善或修复损伤。任选地，治疗可以引起(例如，可以表征为引起的方法)肿瘤负荷的减少、病灶的大小和/或数量的减少、癌症进展的减少或延迟(例如，无进展存活的增加)、癌症转移的延迟或预防和/或存活的增加。任选地，治疗可以例如根据标准规范(任选地RECIST规范)在受试者中引起或提供(例如，可以表征为引起或提供的方法)稳定的疾病、部分反应或完全反应。

每当参考NKG2A中和剂(例如，抗体)和/或PD-1中和剂(例如，抗体)提及“癌症治疗”等时，包括：

(a)一种治疗癌症的方法，所述方法包括以允许治疗癌症的剂量(治疗有效量)、任选地以本文指定的剂量(量)向需要这种治疗的个体、哺乳动物(尤其是人类)施用(至少一次治疗)NKG2A中和剂和PD-1中和剂(例如，在药学上可接受的载体材料中一起或各自分开)的步骤；

(b)使用NKG2A中和剂和PD-1中和剂用于治疗癌症；

(c)NKG2A中和剂和PD-1中和剂，用于治疗癌症(尤其是在人类中)；

(d)NKG2A中和剂，用于治疗癌症(尤其是在人类中)，其中所述NKG2A中和剂与PD-1中和剂组合施用；

(e)PD-1中和剂，用于治疗癌症(尤其是在人类中)，其中所述PD-1中和剂与NKG2A中和剂组合施用；

(f)使用NKG2A中和剂和PD-1中和剂用于制造治疗癌症的药物制品，

(g)一种使用NKG2A中和剂和PD-1中和剂用于制造治疗癌症的药物制品的方法，包括将NKG2A中和剂和/或PD-1中和剂与药学上可接受的载体混合，

(h)包含适用于治疗癌症的有效剂量的NKG2A中和剂和/或PD-1中和剂的药物制品；

(i)根据在提交本申请的国家中允许申请专利的主题，(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、和(h)的任何组合。

如本文所使用的，术语“活组织检查”被定义为出于检查的目的取出组织，诸如以建立诊断。活组织检查的类型的实例包括通过应用抽吸，诸如通过附接到注射器的针头；通过仪器取出组织碎片；通过内窥镜用适当的器械取出；通过手术切除，诸如整个病灶；等。

如本文所使用的，术语“抗体”是指多克隆抗体和单克隆抗体。根据重链中恒定结构域的类型，抗体被指定为五个主要类别中的一种：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM。这些中的若干种进一步被分为亚类或同种型，诸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的N末端限定了约100至110或更多个氨基酸的可变区，该可变区主要负责抗原识别。术语可变轻链(V_L)和可变重链(V_H)分别指这些轻链和重链。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为“α”、“δ”、“ε”、“γ”和“μ”。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。IgG是本文使用的示例性抗体类别，因为它们是生理状态下最常见的抗体，并且因为它们最容易在实验室环境中制备。任选地，抗体是单克隆抗体。抗体的具体实例是人源化的、嵌合的、人类的或其他人类合适的抗体。“抗体”还包括本文所述的抗体的任一种的任何片段或衍生物。

术语“特异性结合”意指抗体可以优选地在竞争性结合测定中与结合配偶体结合，例如，抗NKG2A抗体结合NKG2A、抗PD-L1抗体结合PD-L1、抗PD-1抗体结合PD-1，如使用重组形式的蛋白质、其中的表位、或存在于分离的靶细胞表面上的天然蛋白质所评估的。竞争性结合测定和用于确定特异性结合的其他方法是本领域熟知的。例如，可以经由放射性标记、物理方法(诸如，质谱法)、或使用例如细胞荧光分析(例如，FACScan)检测直接或间接的荧光标记来检测结合。高于在对照非特异性药剂的情况下所见的量的结合指示药剂结合靶标。特异性结合NKG2A的药剂可以单独结合NKG2A或结合NKG2A与CD94的二聚体。

当抗体被称为与特定单克隆抗体“竞争”时，它意指抗体在使用重组分子(例如，NKG2A)或表面表达分子(例如，NKG2A)的结合测定中与单克隆抗体竞争。例如，如果测试抗体降低具有SEQ ID NO：4-8中的任一个的重链可变区和SEQ ID NO：9的轻链可变区的抗体在结合测定中与NKG2A多肽或表达NKG2A的细胞的结合，则称抗体分别与这种抗体“竞争”。

如本文所使用的，术语“亲和力”意指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力由解离常数Kd给出，定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合抗体的摩尔浓度，并且[Ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和常数K_a由1/Kd定义。用于确定单克隆抗体的亲和力的方法可见于Harlow等人，Antibodies：A LaboratoryManual[抗体：实验室手册]，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，Cold Spring Harbor，N.Y.[纽约冷泉港]，1988)，Coligan等人编，Current Protocolsin Immunology[现代免疫学方法]，Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience[格林出版协会和威利跨学科出版社]，N.Y.[纽约]，(1992，1993)，以及Muller，Meth.Enzymol.[酶学方法]92：589-601(1983)，这些参考文献通过引用以其全部内容结合在此。本领域熟知的用于确定单克隆抗体的亲和力的一种标准方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(诸如通过用BIAcore^TM SPR分析设备装置)。

在本文的上下文中，“决定簇”表示在多肽上相互作用或结合的位点。

术语“表位”是指抗原决定簇，并且是抗体结合的抗原上的区域或域。蛋白质表位可以包含直接涉及结合的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效阻断的氨基酸残基，即抗体“足迹”内的氨基酸残基。它是可以与例如抗体或受体结合的复杂抗原分子上的最简单形式或最小结构区域。表位可以是线性的或者构象的/结构的。术语“线性表位”被定义为由氨基酸的线性序列上连续的氨基酸残基构成的表位(一级结构)。术语“构象或结构表位”被定义为由不完全连续的并且因此代表通过分子折叠而彼此接近的氨基酸线性序列的分开部分的氨基酸残基构成的表位(二级、三级和/或四级结构)。构象表位取决于三维结构。因此，术语‘构象’经常与‘结构’可互换使用。

术语“药剂”在本文用于表示化学化合物、化学化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。术语“治疗剂”是指具有生物活性的药剂。

为了本文的目的，“人源化”或“人类”抗体是指其中一种或多种人类免疫球蛋白的恒定框架区和可变框架区与动物免疫球蛋白的结合区(例如，CDR)融合的抗体。设计这类抗体以维持衍生出结合区的非人类抗体的结合特异性，但避免针对非人类抗体的免疫反应。这类抗体可以从转基因小鼠或已经“工程化”以响应抗原攻击产生特异性人类抗体的其他动物中获得(参见例如Green等人(1994)Nature Genet[自然遗传学]7：13；Lonberg等人(1994)Nature[自然]368：856；Taylor等人(1994)Int Immun[国际免疫学]6：579，这些文献的全部传授内容通过引用结合在此)。完全人类抗体也可以通过遗传方法或染色体转染方法以及噬菌体展示技术来构建，所有这些都是本领域已知的(参见例如，McCafferty等人(1990)Nature[自然]348：552-553)。人类抗体还可以通过体外活化的B细胞生成(参见例如，美国专利号5,567,610和5,229,275，这些专利通过引用以其全部内容结合在此)。

“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，这样使得抗原结合位点(可变区)被连接到不同的或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区，或连接到赋予嵌合抗体新的特性的完全不同的分子(例如，酶、毒素、激素、生长因子、药物等)；或者(b)可变区或其部分被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。

术语“Fc结构域”、“Fc部分”和“Fc区”是指抗体重链的C末端片段，例如，人类γ(伽马)重链的约氨基酸(aa)230至约aa 450或者它在其他类型的抗体重链中的对应序列(例如，人类抗体的α、δ、ε和μ)，或其天然存在的同种异型。除非另外指明，否则在本披露中使用通常接受的免疫球蛋白的Kabat氨基酸编号(参见Kabat等人(1991)Sequences of Proteinof Immunological Interest[具有免疫性兴趣的蛋白序列]，第5版，United StatesPublic Health Service[美国公共卫生署]，National Institute of Health[国立卫生研究院]，Bethesda，MD[马里兰州贝塞斯达])。

术语“分离的”、“纯化的”或“生物学上纯的”是指基本上或实质上不含如在其天然状态中所发现的通常伴随它的组分。纯度和均质性典型地使用分析化学技术来确定，诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法。作为制品中存在的主要物质的蛋白质基本上是纯化的。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用以指示氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物以及非天然存在的氨基酸聚合物。

当参考例如细胞、或核酸、蛋白质、或载体使用时，术语“重组”指示细胞、核酸、蛋白质或载体已经通过引入异源核酸或蛋白质或改变天然核酸或蛋白质来修饰，或者指示细胞衍生自如此修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞中未发现的基因或表达以其他方式异常表达(低表达或完全不表达)的天然基因。

在本文的上下文中，术语“结合”多肽或表位的抗体表示以特异性和/或亲和力结合所述决定簇的抗体。

当在两个或更多个多肽的序列之间的关系中使用时，术语“同一性”或“相同的”是指多肽之间的序列相关性程度，如通过两个或更多个氨基酸残基的串之间的匹配数量所确定的。“同一性”测量两个或更多个序列中较小的序列之间相同匹配的百分比，其中间隙比对(如果有的话)由特定数学模型或计算机程序(即，“算法”)解决。通过已知方法可以容易地计算相关多肽的同一性。这类方法包括但不限于以下中描述的那些方法：ComputationalMolecular Biology[计算分子生物学]，Lesk，A.M.编，Oxford University Press，NewYork[纽约牛津大学出版社]，1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects[生物计算：信息学和基因组计划]，Smith，D.W.编，Academic Press，New York[纽约学术出版社]，1993；Computer Analysis of Sequence Data，Part 1[序列数据的计算机分析，第1部分]，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.编，Humana Press，New Jersey[新泽西州胡玛纳出版社]，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology[分子生物学中的序列分析]，vonHeinje，G.，Academic Press[学术出版社]，1987；Sequence Analysis Primer[序列分析引物]，Gribskov，M.和Devereux，J.编，M.Stockton Press，New York[纽约斯托克顿出版社]，1991；以及Carillo等人，SIAM J.Applied Math.[应用数学SIAM杂志]48，1073(1988)。

设计用于确定同一性的方法以给出测试序列之间的最大匹配。描述了在公开可用的计算机程序中确定同一性的方法。用于确定两个序列之间的同一性的计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAP(Devereux等人，Nucl.Acid.Res.[核酸研究]12，387(1984)；Genetics Computer Group，University of Wisconsin，Madison，Wis.[威斯康星州麦迪逊的威斯康星大学遗传学计算机组])、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215，403-410(1990))。BLASTX程序可从国家生物技术信息中心(NCBI)和其他来源公开获得(BLAST Manual[BLAST手册]，Altschul等人NCB/NLM/NIH Bethesda，Md.[马里兰州贝塞斯达]20894；Altschul等人，如上)。熟知的Smith Waterman算法也可以用于确定同一性。

NKG2A中和治疗剂

NKG2A中和剂结合人类CD94/NKG2A受体的细胞外部分或其配体HLA-E，并降低在CD94/NKG2A阳性淋巴细胞表面上表达的人类CD94/NKG2A受体的抑制性活性。在一个实施例中，该药剂与HLA-E竞争结合CD94/NKG2A，即该药剂阻断CD94/NKG2A与其配体HLA-E之间的相互作用。在另一个实施例中，该药剂结合NKG2A但不与HLA-E竞争结合CD94/NKG2A；即，该药剂能够与HLA-E同时结合CD94/NKG2A。在一个实施例中，该药剂是结合NKG2A的抗体。抗体可以结合CD94和NKG2A上的组合表位或单独NKG2A上的表位。在另一个实施例中，该药剂是结合HLA-E并抑制人类HLA-E与人类NKG2A蛋白之间相互作用的抗体。

在一个方面中，NKG2A中和剂是选自完全人类抗体、人源化抗体和嵌合抗体的抗体。在一个方面中，该药剂包含衍生自人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的恒定结构域。在一个方面中，该药剂是选自IgA、IgD、IgG、IgE和IgM抗体的抗体的片段。在一个方面中，该药剂是选自以下的抗体片段：Fab片段、Fab′片段、Fab′-SH片段、F(ab)2片段、F(ab′)2片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、V_HH片段、单结构域FV、和单链抗体片段。在一个方面中，该药剂是选自以下的合成的或半合成的抗体衍生的分子：scFV、dsFV、微抗体、双抗体、三抗体、κ体、IgNAR和多特异性抗体。

任选地，抗NKG2A抗体不显示与人类Fcγ受体(例如，CD16)的实质特异性的结合。任选地，抗NKG2A抗体缺乏与人类CD16、CD32A、CD32B或CD64中的一种或多种或全部的实质特异性结合或与其具有低或降低的特异性结合。示例性抗体可以包含已知与Fcγ受体不结合或具有低结合的各种重链的恒定区。一个这种实例是人类IgG4恒定区。在一个实施例中，IgG4抗体包含防止在体内形成半抗体的修饰(fab臂交换)，例如，抗体包含IgG4重链，该重链包含根据EU-索引对应于位置228的残基241中的丝氨酸至脯氨酸突变(Kabat等人，“Sequences of proteins of immunological interest[具有免疫性兴趣的蛋白序列]”，第5版，NIH，Bethesda，ML[马里兰州贝塞斯达NIH]，1991)。这类修饰的IgG4抗体在体内保持完整并维持与NKG2A的二价(高亲和力)结合，这与天然IgG4相反，天然IgG4在体内经历fab臂交换，这样使得它们以可以改变结合亲和力的单价方式结合NKG2A。替代性地，不包含恒定区的抗体片段，诸如Fab或F(ab’)2片段，可以用于避免Fc受体结合。可以根据本领域已知的方法评估Fc受体结合，这些方法包括例如在BIACORE测定中测试抗体与Fc受体蛋白的结合。另外，可以使用任何人类抗体类型(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，其中Fc部分被修饰以最小化或消除与Fc受体的结合(参见例如，WO 03101485，其披露内容通过引用结合在此)。评估Fc受体结合的测定(例如像，基于细胞的测定)是本领域熟知的，并描述于例如WO03101485中。

因此，本发明涉及与NKG2A结合的抗体或其他药剂。在一个方面中，抗体以与人类NKG2C和/或NKG2E相比至少100倍低的KD结合NKG2A。

在本发明的一个方面中，该药剂通过干扰CD94/NKG2A信号传导来减少CD94/NKG2A介导的对表达CD94/NKG2A的淋巴细胞的抑制，例如通过干扰NKG2A与HLA-E的结合、预防或诱导CD94/NKG2A受体的构象变化、和/或影响CD94/NKG2A受体的二聚化和/或聚集。

在本发明的一个方面中，该药剂以与NKG2C相比至少100倍低的KD结合NKG2A的细胞外部分。在一个进一步优选的方面中，该药剂以与NKG2C相比至少150、200、300、400、或10,000倍低的KD结合NKG2A的细胞外部分。在本发明的另一个方面中，该药剂以与NKG2C、NKG2E和/或NKG2H分子相比至少100倍低的KD结合NKG2A的细胞外部分。在一个进一步优选的方面中，该药剂以与NKG2C、NKG2C和/或NKG2H分子相比至少150、200、300、400、或10,000倍低的KD结合NKG2A的细胞外部分。这可以在例如BiaCore实验中测量，其中测量药剂结合固定化CD94/NKG2A(例如，从表达CD94/NKG2的细胞纯化，或在生物系统中产生)的细胞外部分的能力，并且将其与在相同测定中药剂与类似产生的CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的结合进行比较。替代性地，可以测量药剂与天然表达或过表达(例如，在瞬时转染或稳定转染之后)CD94/NKG2A的细胞的结合，并将其与表达CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的细胞的结合进行比较。抗NKG2A抗体可以任选地结合NKG2B，NKG2B是与CD94一起形成抑制性受体的NKG2A剪接变体。在一个实施例中，亲和力可以使用美国专利号8,206,709中披露的方法来测量，例如通过使用Biacore来评估与共价固定的NKG2A-CD94-Fc融合蛋白的结合，如美国专利号8,206,709的实例8中所示，该专利的披露内容通过引用结合在此。

抗NKG2A抗体可以是人源化抗体，例如包含来自人类受体序列的VH人类受体框架，该框架选自例如VH1_18、VH5_a、VH5_51、VH1_f、和VH1_46、和JH6 J-区段、或本领域已知的其他人类种系VH框架序列。VL区人类受体序列可以是例如VKI_O2/JK4。

在一个实施例中，抗体是基于抗体Z270的人源化抗体。不同的人源化Z270重链可变区在SEQ ID NO：4-8中示出，任选地进一步包含C末端丝氨酸(S)残基。SEQ ID NO：4的HumZ270VH6可变区基于人类VH5_51基因；SEQ ID NO：5的HumZ270VH1可变区基于人类VH1_18基因；SEQ ID NO：6的humZ270VH5可变区基于人类VH5_a基因；SEQ ID NO：7的humZ270VH7可变区基于人类VH1_f基因；并且SEQ ID NO：8的humZ270VH8可变区基于人类VH1_46基因；全部具有人类JH6 J-区段。这些抗体中的每一种都保持与NKG2A的高亲和力结合，针对抗体的宿主免疫反应的可能性较低，因为人源化构建体中的每一种的Kabat H-CDR2的6个C末端氨基酸残基与人类受体框架相同。使用比对程序VectorNTI，获得humZ270VH1与humZ270VH5、humZ270VH6、humZ270VH7和humZ270VH8之间的以下序列同一性：78，2％(VH1与VH5)、79，0％(VH1与VH6)、88，7％(VH1与VH7)以及96，0％(VH1与VH8)。

在一个方面中，该药剂包含(i)SEQ ID NO：4-8或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和(ii)SEQ ID NO：9或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面中，该药剂包含(i)重链，其包含SEQ ID NO：10-14中的任一个的氨基酸序列或者与其至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列或者与其至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

具有SEQ ID NO：4-8中任一个的重链可变区和SEQ ID NO：9的轻链可变区的抗体中和NKG2A的抑制性活性，但基本上不结合活化受体NKG2C、NKG2E或NKG2H。此外，此抗体与HLA-E竞争结合细胞表面上的NKG2A。在一个方面中，该药剂包含衍生自具有SEQ ID NO：4-8中任一个的氨基酸序列的重链可变区的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在本发明的一个方面中，该药剂包含衍生自具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的轻链可变区的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。

重链可变区

VH6

VH1：

VH5：

VH7：

VH8：

轻链可变区

重链(可变区结构域氨基酸加下划线)

VH6：

VH1：

VH5：

VH7：

VH8：

轻链(可变区结构域氨基酸加下划线)

莫纳利珠单抗，重链和轻链上的CDR

根据Kabat编号方案的重链CDR：

H-CDR1：SYWMN(SEQ ID NO：16)

H-CDR2：RIDPYDSETHYAQKLQG(SEQ ID NO：17)

H-CDR3：GGYDFDVGTLYWFFDV(SEQ ID NO：18)

根据Kabat编号方案的轻链CDR：

L-CDR1：RASENIYSYLA(SEQ ID NO：19)

L-CDR2：NAKTLAE(SEQ ID NO：20)

L-CDR3：QHHYGTPRT(SEQ ID NO：21)

在一个方面中，抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO：4-8(或SEQ IDNO：10-14)的残基31-35的H-CDR1、对应于SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的残基50-60(当包括人类来源的氨基酸时，任选地50-66)的H-CDR2以及对应于SEQ ID NO：4-8(或SEQID NO：10-14)的残基99-114(根据Kabat的95-102)的H-CDR3。在一个实施例中，H-CDR2对应于SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的残基50-66。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个、或更多个氨基酸取代。

在一个方面中，抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO：9或15的残基24-34的L-CDR1、对应于SEQ ID NO：9或15的残基50-56的L-CDR2以及对应于SEQ ID NO：9或15的残基89-97的L-CDR3。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个、或更多个氨基酸取代。

在一个方面中，抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO：4-8的残基31-35的H-CDR1、对应于SEQ ID NO：4-8的残基50-60(任选地50-66)的H-CDR2以及对应于SEQID NO：4-8的残基99-114(根据Kabat的95-102)的H-CDR3、对应于SEQ ID NO：9的残基24-34的L-CDR1、对应于SEQ ID NO：9的残基50-56的L-CDR2以及对应于SEQ ID NO：9的残基89-97的L-CDR3。

在一个方面中，抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：分别具有SEQ ID NO：16-18的氨基酸序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：19-21的氨基酸序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域。

在一个方面中，该药剂是莫纳利珠单抗，即一种具有SEQ ID NO：5的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO：9的轻链可变区氨基酸序列的抗NKG2A抗体。在一个方面中，该药剂是莫纳利珠单抗，即一种具有SEQ ID NO：11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：15的轻链氨基酸序列的抗NKG2A抗体。

在一个方面中，该药剂包含衍生自具有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在本发明的一个方面中，该药剂包含衍生自具有SEQ IDNO：23的氨基酸序列的VL的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。在一个方面中，该药剂包含衍生自具有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列，以及衍生自具有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。具有SEQ ID NO：22的重链可变区和SEQ ID NO：23的轻链可变区的抗体中和NKG2A的抑制性活性，并且还结合活化受体NKG2C、NKG2E或NKG2H。此抗体不与HLA-E竞争结合细胞表面上的NKG2A(即，它是NKG2A的非竞争性拮抗剂)。

在一个方面中，该药剂包含可变重链(V_H)结构域(SEQ ID NO：22的氨基酸残基31-35、50-60、62、64、66、和99-108以及可变轻链(V_L)结构域(SEQ ID NO：23)的氨基酸残基24-33、49-55、和88-96，任选地具有一个、两个、三个、四个、或更多个氨基酸取代。在一个方面中，该药剂是人源化抗体，例如，如PCT公开号WO2009/092805中所披露的包含重链可变区和轻链可变区的药剂，该专利的披露内容通过引用结合在此。

在一个方面中，该药剂是完全人类抗体，该抗体针对上述抗体中的任一种结合的CD94/NKG2A表位而产生。

应当理解，虽然可以使用上述抗体，但是其他抗体也可以识别NKG2A多肽的任何部分并针对NKG2A多肽的任何部分而产生，只要该抗体引起NKG2A的抑制性活性的中和即可。例如，NKG2A的任何片段，优选但不限于人类NKG2A或NKG2A片段的任何组合，都可以用作免疫原以产生抗体，并且这些抗体可以识别NKG2A多肽内的任何位置处的表位，只要它们可以在如本文所述的表达NKG2A的NK细胞上这样做即可。任选地，该表位是由具有SEQ ID NO：4-8的重链可变区和SEQ ID NO：9的轻链可变区的抗体特异性识别的表位。

在一个方面中，该药剂与美国专利号8,206,709(其披露内容通过引用结合在此)中披露的humZ270抗体竞争结合人类CD94/NKG2A受体的细胞外部分。可以在例如BiaCore实验中测量竞争性结合，其中测量药剂用于结合用humZ270饱和的固定化CD94/NKG2A受体(例如，从表达CD94/NKG2的细胞纯化，或在生物系统中产生)的细胞外部分的能力。替代性地，测量药剂与细胞的结合，这些细胞天然表达或过表达(例如，在瞬时转染或稳定转染之后)CD94/NKG2A受体，并且已经与饱和剂量的Z270预温育。在一个实施例中，竞争性结合可以使用美国专利号8,206,709中披露的方法来测量，例如通过使用流式细胞术来评估与Ba/F3-CD94-NKG2A细胞的结合，如美国专利号8,206,709的实例15中所示，该专利的披露内容通过引用结合在此。

PD-1中和剂

如本文所使用的，术语“PD-1”是指蛋白质程序性死亡1(PD-1)(也称为“程序性细胞死亡1”)，是CD28受体家族的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。完整的人类PD-1序列可以GenBank登录号U64863找到，如下示出：

“PD-1”还包括PD-1基因或编码蛋白的任何变体、衍生物、或同种型。PD-1在活化的B细胞、T细胞、和骨髓细胞上表达(Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.[免疫学新见]14：391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol[免疫学杂志]170：711-8)。该家族的最初成员CD28和ICOS是通过加入单克隆抗体之后增强T细胞增殖的功能性效果而发现的(Hutloff等人(1999)Nature[自然]397：263-266；Hansen等人(1980)Immunogenics[免疫遗传学]10：247-260)。已经鉴定出两种PD-1配体，PD-L1和PD-L2，这些配体已示出在与PD-1结合时下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med[实验医学杂志]192：1027-34；Latchman等人(2001)Nat Immunol[自然免疫学]2：261-8；Carter等人(2002)Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志]32：634-43)。PD-L1和PD-L2两者都是与PD-1结合但不与其他CD28家族成员结合的B7同源物。

完整的人类PD-L1序列可以UniProtKB/Swiss-Prot标识符Q9NZQ7-1找到，如下示出：

PD-L1在多种人类癌症中广泛存在(Dong等人(2002)Nat.Med.[自然医学]8：787-9)。PD-1与PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润性淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖减少和癌细胞的免疫逃避(Dong等人(2003)J.Mol.Med.[分子医学杂志]81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学免疫疗法]54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.[临床癌症研究]10：5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用可以逆转免疫抑制，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效果是相加的。

PD-1中和剂是中和PD-1或降低人类PD-1的抑制性活性的药剂。在本发明的上下文中，“降低人类PD-1的抑制性活性”、“中和PD-1”或“中和人类PD-1的抑制性活性”是指其中由PD-1与其结合配偶体(诸如PD-L1或PD-L2)中的一种或多种的相互作用引起的PD-1的信号转导能力受到抑制的过程。中和PD-1的抑制性活性的药剂减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其结合配偶体(诸如PD-L1、PD-L2)中的一种或多种的相互作用引起的信号转导。因此，这种药剂可以减少由或通过T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，以便增强T细胞效应子功能，诸如增殖、细胞因子产生和/或细胞毒性。PD-1中和剂可以与PD-1和/或与其结合配偶体(诸如PD-L1和PD-L2)中的一种或多种相互作用。

在一些实施例中，PD-1中和剂是抑制PD-L1与PD-1的结合的抗PD-L1单克隆抗体。在一些实施例中，PD-1中和剂是抑制PD-1与PD-L1的结合的抗PD-1单克隆抗体。在一些实施例中，PD-1中和剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。

在一些实施例中，PD-1中和剂是抗PD-L1抗体。在一些实施例中，PD-1中和剂选自下组，该组由以下各项组成：YW243.55.S70、MPDL3280A(阿特珠单抗(atezolizumab)，

)、MDX-1105、和德瓦鲁单抗(MEDI4736，

)。MDX-1105，也称为BMS-936559，是WO2007/005874中描述的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70是WO 2010/077634中描述的抗PD-L1。可用于本发明的方法的抗PD-L1抗体的实例及其制备方法也描述于WO2010/077634 A1和美国专利号8,217,149中，这些专利通过引用结合在此。

在一些实施例中，PD-1中和剂是作为德瓦鲁单抗的PD-L1抗体。德瓦鲁单抗(MEDI4736，Imfinzi^TM)是针对人类PD-L1的能够阻断PD-L1与PD-1和CD80受体两者的结合的人类单克隆抗体。与德瓦鲁单抗相关的披露内容可以在美国专利号8,779,108和9,493,565中找到，这些专利通过引用结合在此。德瓦鲁单抗分别具有氨基酸序列SEQ ID NO：26和SEQID NO：27的重链和轻链。德瓦鲁单抗的重链可变区在SEQ ID NO：24中示出，并且德瓦鲁单抗的轻链可变区在SEQ ID NO：25中示出。

在另一个实施例中，PD-1中和剂是与德瓦鲁单抗竞争结合PD-L1的抗PD-L1抗体(或其抗原结合部分)。在一些实施例中，抗PD-L1抗体与德瓦鲁单抗结合相同的表位。在某些实施例中，抗PD-L1抗体具有与德瓦鲁单抗相同的重链和轻链CDR。

在一个方面中，PD-1中和剂(例如，衍生自德瓦鲁单抗的药剂)包含(i)SEQ ID NO：24或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区，和(ii)SEQ ID NO：25或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面中，PD-1中和剂(例如，衍生自德瓦鲁单抗的药剂)包含(i)SEQ ID NO：26或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链，和(ii)SEQ ID NO：27或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链。在一个方面中，PD-1中和剂包含衍生自包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的重链可变区的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在一个方面中，PD-1中和剂包含衍生自包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的轻链可变区的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。任选地，CDR根据Kabat确定。

在一个方面中，PD-1中和剂包含：分别具有SEQ ID NO：28-30的氨基酸序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：31-33的氨基酸序列的轻链L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3结构域。

德瓦鲁单抗的重链可变区：

德瓦鲁单抗的轻链可变区

德瓦鲁单抗的重链(可变区加下划线)

德瓦鲁单抗的轻链(可变区加下划线)

德瓦鲁单抗，重链CDR：

H-CDR1：GFTFSRYWMS(SEQ ID NO：28)

H-CDR2：NIKQDGSEKYYVDSVKG(SEQ ID NO：29)

H-CDR3：EGGWFGELAFDY(SEQ ID NO：30)

德瓦鲁单抗，轻链CDR：

L-CDR1：RASQRVSSSYLA(SEQ ID NO：31)

L-CDR2：DASSRAT(SEQ ID NO：32)

L-CDR3：QQYGSLPWT(SEQ ID NO：33)

在另一个实施例中，PD-1中和剂是作为阿特珠单抗的抗PD-L1抗体(MPDL3280A，

CAS登记号：1422185-06-5)。任选地，抗PD-L1抗体包含具有以下氨基酸序列的重链可变区：

或者

以及具有以下氨基酸序列的轻链可变区：

在一个方面中，PD-1中和剂包含(i)SEQ ID NO：37或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链或重链可变区，和(ii)SEQID NO：38或者与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链或轻链可变区。

在一些实施例中，PD-1中和剂是抑制PD-1与PD-L1的结合的抗PD-1抗体。在一个实施例中，抗PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗(也称为

以前称为5C4、BMS-936558、MDX-1106、或ONO-4538)是完全人类IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂抗体，该抗体选择性地阻止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)的相互作用，从而阻断抗肿瘤T细胞功能的下调(美国专利号8，008，449；Wang等人2014CancerImmunol Res.[癌症免疫学研究]2(9)：846-56)。在另一个实施例中，抗PD-1抗体或其片段与纳武单抗竞争结合PD-1。在一些实施例中，抗PD-1抗体与纳武单抗结合相同的表位。在某些实施例中，抗PD-1抗体具有与纳武单抗相同的重链和轻链CDR。

在另一个实施例中，抗PD-1抗体是帕姆单抗。帕姆单抗(也称为

兰伯丽珠单抗(lambrolizumab)和MK-3475)是针对人类细胞表面受体PD-1的人源化单克隆IgG4抗体。帕姆单抗描述于，例如，美国专利号8,900,587中)。帕姆单抗已被FDA批准用于治疗复发性或难治性黑素瘤和晚期NSCLC。在另一个实施例中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)与帕姆单抗竞争结合PD-1。在一些实施例中，抗PD-1抗体与帕姆单抗结合相同的表位。在某些实施例中，抗PD-1抗体具有与帕姆单抗相同的重链和轻链CDR。

NKG2A中和剂或PD-1中和剂(诸如抗体)可以从1mg/ml至500mg/ml的浓度掺入药物制剂中，其中所述制剂具有从2.0至10.0的pH。NKG2A中和剂和PD-1中和剂可以包含在相同的或单独的药物制剂中。该制剂可以进一步包含缓冲系统、一种或多种防腐剂、一种或多种张度剂、一种或多种螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在一个实施例中，药物制剂是含水制剂，即包含水的制剂。这种制剂典型地是溶液或悬浮液。在另一个实施例中，药物制剂是含水溶液。术语“含水制剂”被定义为包含至少50％w/w水的制剂。同样，术语“含水溶液”被定义为包含至少50％w/w水的溶液，并且术语“含水悬浮液”被定义为包含至少50％w/w水的悬浮液。

在另一个实施例中，药物制剂是冷冻干燥的制剂，医师或患者在使用之前向其中加入溶剂和/或稀释剂。

在另一个实施例中，药物制剂是准备在没有任何预先溶解的情况下使用的干燥制剂(例如，冷冻干燥或喷雾干燥的制剂)。

在另一个方面中，药物制剂包含这种抗体的含水溶液和缓冲液，其中抗体以从1mg/ml或更高的浓度存在，并且其中所述制剂具有从约2.0至约10.0的pH。

在另一个实施例中，制剂的pH在选自以下列表的范围内，该列表由以下各项组成：从约2.0至约10.0、约3.0至约9.0、约4.0至约8.5、约5.0至约8.0、和约5.5至约7.5。

在另一个实施例中，缓冲液选自下组，该组由以下各项组成：乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、双甘氨肽、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、和三(羟甲基)-氨基甲烷、二(羟乙基)甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸、苹果酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。这些特定缓冲液中的每一个构成本发明的替代性实施例。

在另一个实施例中，该制剂进一步包含药学上可接受的防腐剂。在另一个实施例中，该制剂进一步包含等渗剂。在另一个实施例中，该制剂还包含螯合剂。在本发明的另一个实施例中，该制剂进一步包含稳定剂。在另一个实施例中，该制剂进一步包含表面活性剂。为方便起见，请参考Remington：The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学的科学与实践]，第19版，1995。

其他成分可能存在于本发明的药物制剂中。这类附加成分可以包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、增量剂、张力调节剂、螯合剂、金属离子、油质媒介物、蛋白质(例如，人类血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如，氨基酸，诸如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然，这类附加成分不应当对本发明的药物制剂的总体稳定性产生不利影响。

根据本发明的药物组合物的施用可以通过若干种施用途径，例如静脉内施用进行。合适的抗体制剂也可以通过检查其他已经开发的治疗性单克隆抗体的经验来确定。

还提供了试剂盒，例如包括以下的试剂盒：

(i)含有NKG2A中和剂诸如抗NKG2A抗体和PD-1中和剂诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的药物组合物，或

(ii)含有PD-1中和剂诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的第一药物组合物，和含有NKG2A中和剂诸如抗NKG2A抗体的第二药物组合物，或

(iii)含有NKG2A中和剂(诸如抗NKG2A抗体)的药物组合物，和与PD-1中和剂(诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)一起施用所述NKG2A中和剂的说明书，或

(iv)含有PD-1中和剂(诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)的药物组合物，和与NKG2A中和剂(诸如抗NKG2A抗体)一起施用所述PD-1中和剂的说明书。

药物组合物可以任选地被指定为包含药学上可接受的载体。NKG2A或PD-1中和剂可以任选地被指定为以适用于本文的方法中的任一种的治疗有效量存在。试剂盒任选地还可以包括说明书，例如包括施用方案，以允许操作者(例如，医师、护士、或患者)向患有癌症(例如，实体瘤，特别是非DNA错配修复缺陷性的肿瘤和/或不具有在两个或更多个微卫星标记中检测到的微卫星不稳定性的肿瘤)的患者施用包含在这些试剂盒中的组合物。在任何实施例中，试剂盒任选地可以包括与所述PD-1中和剂同时、分开或依次施用所述NKG2A中和剂的说明书。该试剂盒还可以包括注射器。

任选地，这些试剂盒包括单剂量药物组合物的多个包装，每个含有有效量的NKG2A中和剂和/或PD-1中和剂(诸如抗PD-1或PD-L1抗体)，用于根据上文提供的方法进行单次施用。施用一种或多种药物组合物所必需的器械或装置也可以包括在试剂盒中。例如，试剂盒可以提供一个或多个预填充的注射器，这些注射器含有一定量的抗NKG2A抗体、抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

在一个实施例中，本发明提供了一种用于在人类患者中治疗癌症或肿瘤的试剂盒，其中所述癌症或肿瘤是非MSI-H的和/或非DNA错配修复缺陷性的，该试剂盒包括：

(a)一定剂量的抗NKG2A抗体，该抗体包含具有SEQ ID NO：4-8中的任一个中所列出序列的重链可变区的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO：9中所列出序列的轻链可变区的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域；和/或

(b)一定剂量的抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体，任选地一定剂量的德瓦鲁单抗，任选地一定剂量的抗PD-L1抗体，该抗体包含德瓦鲁单抗的重链和轻链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域，任选地具有SEQ ID NO：24中所列序列的重链可变区的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO：25中所列序列的轻链可变区的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域；以及

(c)任选地，用于在本文所述的任何方法中使用所述抗NKG2A抗体和/或所述抗PD-1或PD-L1抗体的说明书。

(a)一定剂量的抗NKG2A抗体，该抗体包含分别具有SEQ ID NO：16-18的序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：19-21的序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域；和/或

(b)一定剂量的抗PD-L1抗体，该抗体包含分别具有SEQ ID NO：28-30的氨基酸序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：31-33的氨基酸序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域；以及

恶性肿瘤的诊断、预后、和治疗

描述了可用于癌症的诊断、预后、监测和治疗的方法，该癌症特别是结直肠癌，任选地晚期复发性或转移性结直肠癌，其特征在于是非DNA错配修复缺陷性的肿瘤和/或是微卫星稳定的肿瘤。如本文所使用的，结直肠癌(CRC)是指结肠癌、直肠癌、和结直肠癌(结肠和直肠区域二者的癌症)。

微卫星是遍布基因组分布的重复的DNA序列。虽然这些微卫星的长度在人与人之间变化很大，但每个人都具有固定长度的微卫星。这些重复序列很常见，也很正常。人类中最常见的微卫星是CA的二核苷酸重复序列，该重复序列在整个基因组中出现数万次。然而，在具有DNA修复基因突变的细胞中，这些序列中的一些累积错误并变得更长或更短。个体DNA中异常长或短的微卫星的出现被称为微卫星不稳定性(MSI)。微卫星不稳定性是由受损的DNA错配修复(MMR)导致的遗传超突变性的情况。微卫星不稳定性(MSI)的存在代表MMR不能正常运作的表型证据。微卫星不稳定性的缺失被称为微卫星稳定性(MSS)。

MSI是若干种癌症的关键因素，这些癌症包括结直肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌和胃癌(Soreide等人(2006)The British Journal of Surgery[英国外科杂志]93：395-406；Ali-Fehmi等人(2006)International Journal of Gynecological Pathology[国际妇科病理学杂志]25：223-229；Vauhkonen等人(2006)Clinical Gastroenterology[临床胃肠病学]20：651-674)。

结直肠癌研究已经证明了MSI发生的两种机制。第一种是遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)或林奇综合征，其中DNA错配修复基因中的遗传性突变导致微卫星重复序列复制错误不被解决。复制错误导致移码突变，该移码突变使主要肿瘤抑制基因失活或改变，并最终预防癌症。MSI导致结直肠癌的第二种机制是表观遗传改变，该改变使基本的DNA错配修复基因沉默。在两种情况下，肿瘤抑制基因编码区内的微卫星插入和缺失导致不受控制的细胞分裂和肿瘤生长。

国家癌症研究所已推荐五种标记来筛选HNPCC肿瘤中的MSI(经常称为“贝塞斯达(Bethesda)标记”)。MSI存在的这五个标记是：两个单核苷酸重复序列BAT25和BAT26，以及三个二核苷酸重复序列D5S346、D2S123、和D17S250(Umar等人(2004)Journal of theNational Cancer Institute[国家癌症研究所杂志]96：261-268)。一般来讲，五个“贝塞斯达标记”中的两个中的MSI检测被认为是MSI的阳性结果或高概率(MSI高或MSI-H)。用于检测生物样品中MSI的标准方法包括使用Promega^TM的微卫星不稳定性测定(MSI分析系统)，该测定包括根据它们的敏感性和特异性选择的五种单核苷酸标记，这五种标记是：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24和MONO27(Bacher等人(2004)Disease Markers[疾病标记]20：237-250))。

在大多数情况下，MSI肿瘤中的不稳定性的遗传基础是五种人类MMR基因中任何一种或多种的遗传性生殖系改变：MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1。

最近发现了另一种MSI，称为选定的四核苷酸重复序列处升高的微卫星改变(EMAST)。然而，EMAST的独特之处在于它不是衍生自MMR，并且通常与TP53突变相关联(Boland等人(2010)Gastroenterology[胃肠病学]138(6)：2073-2087)。

因此，可以通过评估微卫星标记和/或MMR基因来确定肿瘤中的微卫星不稳定性。

在某些实施例中，用NKG2A中和剂和PD-1中和剂的组合治疗的个体没有不稳定性(MSS)，并且在MSH2、MLH1、MSH6和PMS2基因或蛋白质(进一步任选地PMS1)中的任一种中都没有改变(例如，突变、表达缺陷)。

在一些实施例中，本发明包括一种在个体中治疗肿瘤(例如，结直肠肿瘤)的方法，该方法包括：(i)鉴定患有非DNA错配修复缺陷性的肿瘤的个体，和(ii)向个体施用有效量的NKG2A中和剂和有效量的PD-1中和剂。任选地，个体患有不具有微卫星不稳定性的肿瘤(肿瘤是MSS稳定的)，并且在MSH2、MLH1、MSH6和PMS2基因或蛋白质中没有任何改变。

可以在施用任何组合物或使用本文披露的任何方法之前，在个体中测量肿瘤的DNA错配修复状态，任选地是MMR状态和/或微卫星状态。

可以获得并评估来自个体的生物样品，例如来自活组织检查的生物样品。MMR状态和/或微卫星状态可以通过本领域已知的任何方法来确定，参见例如，Umar等人Journal ofthe National Cancer Institute[国家癌症研究所杂志]2004；96(4)：261-268，以及Bacher等人Disease Markers[疾病标记]2004；20：237-250。在一个实施例中，通过免疫组织化学分析评估MMR状态，证明以下蛋白质中的任何一种或多种的表达的存在或不存在：MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2。在一个实施例中，通过检测微卫星标记中的高频微卫星不稳定性来评估微卫星状态，这些微卫星标记例如BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO27、D5S346、D2S123、和D17S250。在一个实施例中，检测到两种或更多种微卫星标记(例如BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和/或MONO27)的微卫星不稳定性指示MSI-H状态，而单个MSI标记的微卫星不稳定性或所测试的MSI标记中的任一种都没有不稳定性则分别被解释为微卫星不稳定性低(MSI-L)和微卫星稳定的(MSS)。

在一个实施例中，非DNA错配修复缺陷性的肿瘤或是MSS的肿瘤不具有微卫星不稳定性，或者在少于两个或更多个微卫星标记(例如，BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、或MONO27)中检测到微卫星不稳定性，并且在蛋白质MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2中的任一种或多种上不存在蛋白质表达。

在一些实施例中，本发明包括一种在个体中治疗肿瘤(例如，结直肠肿瘤)的方法，该方法包括：(i)鉴定患有MSS肿瘤的个体，和(ii)向个体施用有效量的NKG2A中和剂，任选地进一步向个体施用有效量的PD-1中和剂。在一些实施例中，本发明提供了一种治疗肿瘤(例如，结直肠肿瘤)的方法，该方法包括：(i)鉴定患有非MSI高(MSI-H)肿瘤(例如，MSS或MSI低肿瘤)的肿瘤的个体，和(ii)向个体施用有效量的NKG2A中和剂，任选地进一步向个体施用有效量的PD-1中和剂。

在一个实施例中，MSI-H肿瘤具有大于至少约30％的不稳定MSI标记。在一个实施例中，MSI-L肿瘤确实具有不稳定的MSI标记，但所述肿瘤的MSI标记的小于约10％、小于约20％、或小于约30％是不稳定的MSI标记。在一个实施例中，MSS肿瘤不具有不稳定的MSI标记。在一些实施例中，当小于约30％、小于约20％或小于约10％的所测试的MSI标记表现出不稳定性时，结直肠癌是MSI-L的。在一些实施例中，当所测试的MSI标记均未表现出不稳定性时，结直肠癌是MSS的。

在某些实施例中，本发明涉及一种治疗是MSI-L或MSS的癌症的方法。

在某些实施例中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括1)鉴定肿瘤的微卫星状态，和2)基于微卫星状态向受试者施用疗法(例如，NKG2A中和剂和PD-1中和剂)。在其他实施例中，受试者具有MSI-L。在实施例中，患者是MSI稳定的。

当治疗具有非DNA错配修复缺陷性肿瘤的个体时，可以有利地根据本文所述的治疗方案任选地向患有癌症的个体施用中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的化合物(例如，抗体)，该个体已经接受手术或正在进行手术以去除癌细胞。中和抗NKG2A抗体，任选地在不存在PD-1中和剂(例如，中和抗PD-1或抗PD-L1抗体)的情况下或任选地与该PD-1中和剂组合，来治疗罹患癌症(特别是CRC和mCRC)的受试者。在一个实施例中，本发明提供了一种抗NKG2A抗体和进一步任选地组合的抗PD-1抗体，以治疗患有实体瘤(例如，实体瘤、晚期难治性实体瘤)的受试者。在具体实施例中，抗NKG2A抗体包含SEQ ID NO：4-8中任一个的重链可变区和SEQ ID NO：9的轻链可变区。在一个实施例中，中和PD-1的抑制性活性的抗体选自下组，该组由以下各项组成：帕姆单抗、纳武单抗、德瓦鲁单抗和MPDL3280A，特别是德瓦鲁单抗。

如本文所使用的，辅助施用或组合施用(共施用)包括化合物以相同剂型或不同剂型的同时施用或化合物的分开施用(例如，依次施用)。因此，NKG2A中和剂可以与PD-1中和剂组合使用。例如，抗NKG2A抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体可以在单一制剂中同时施用。替代性地，可以配制NKG2A中和剂和PD-1中和剂以分开施用，并且同时施用或依次施用。

任选地，尽管进行手术和/或用治疗剂(例如，化学治疗剂或放射疗法)治疗(例如，在此期间或之后)，个体还是可能患有耐药、无反应、复发和/或进展的癌症。在本文的任何实施例中，治疗反应可以根据熟知的规范来定义和/或评估，例如根据实体瘤的反应评估规范(RECIST)，诸如版本1.1，参见Eisenhauer等人(2009)Eur.J.Cancer[欧洲癌症杂志]45：228-247，或者免疫相关的反应规范(irRC)，参见Wolchock等人(2009)Clinical CancerResearch[临床癌症研究]15：7412-7420。

在另一个实施例中，本披露提供了一种用于在患有非DNA错配修复缺陷性的肿瘤的个体中治疗或预防CRC的方法，该方法包括：

a)鉴定患有非DNA错配修复缺陷性的肿瘤的个体，任选地获得包含来自个体的肿瘤细胞的生物样品并确定肿瘤是否是DNA错配修复缺陷性的，

b)在来自个体的样品中检测表达PD-L1的细胞(例如，肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞、肿瘤浸润性巨噬细胞)，并且

c)一旦确定表达PD-L1的细胞包含在样品中，就向个体施用中和NKG2A的抑制性活性的药剂与中和PD-1的抑制性活性的药剂的组合。PD-L1参考水平的特征可以在于任何合适的常规使用的参考水平。例如，如果1％或更多、任选地5％或更多、任选地10％或更多、任选地50％或更多的肿瘤细胞或来自肿瘤组织样品的细胞表达PD-L1(例如，使用基于免疫组织化学的测定)。此类测定的实例包括来自丹麦达克A/S(Dako Denmark A/S)的pharmDx的PD-L1 IHC 22C3测定。在此测定中，使用肿瘤比例评分(TPS)，即针对PD-L1染色的肿瘤细胞的百分比(0％至100％)，测量PD-L1表达水平。任选地，参考水平是非高PD-L1表达的水平，任选地其中少于50％的肿瘤细胞表达PD-L1(例如，患者具有小于50％的TPS)。

本文所述的治疗方案和方法可以与在从个体获得的生物样品(例如，包含癌细胞、癌组织或癌旁组织的生物样品)中检测细胞上的HLA-E表达的先前步骤一起使用或不一起使用。在一个实施例中，用本文披露的方法治疗的癌症是特征在于高水平HLA-E的癌症。然而，应当理解，患有癌症的患者可以用NKG2A中和剂与评估HLA-E在肿瘤细胞表面上的表达的先前检测步骤一起或不一起进行治疗。有利地，治疗方法可以包括在来自个体的肿瘤的(例如，肿瘤细胞上的)生物样品中检测HLA-E核酸或多肽的步骤。确定生物样品表达HLA-E(例如，与参考相比的突出表达；高水平表达HLA-E、用抗HLA-E抗体高强度染色)指示个体患有癌症，该癌症可能会从用抑制NKG2A的药剂的治疗中获得强大的益处。在一个实施例中，该方法包括在生物样品中确定HLA-E核酸或多肽的表达水平，并将该水平与对应于健康个体的参考水平(例如，值、弱细胞表面染色等)进行比较。确定生物样品以与参考水平相比增加的水平表达HLA-E核酸或多肽可以指示个体患有可以用抑制NKG2A的药剂治疗的癌症。

确定个体是否患有表达HLA-E多肽的癌细胞可以，例如，包括从个体获得包含癌细胞的生物样品(例如，通过进行活组织检查)，使所述细胞与结合HLA-E多肽的抗体接触，并检测细胞是否在其表面上表达HLA-E。任选地，确定个体是否患有表达HLA-E的癌细胞包括进行免疫组织化学测定。任选地，确定个体是否患有表达HLA-E的癌细胞包括进行流式细胞术测定。

在治疗方法中，当NKG2A中和剂与抗PD-1或抗PD-L1抗体组合施用时，NKG2A中和剂和抗PD-1或抗PD-L1抗体可以分开、一起或依次施用，或以混合物形式施用。在一些实施例中，在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之前施用NKG2A中和剂。例如，可以在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之前大约0至30天施用NKG2A中和剂。在一些实施例中，在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之前从约30分钟至约2周、从约30分钟至约1周、从约1小时至约2小时、从约2小时至约4小时、从约4小时至约6小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至1天、或从约1至5天施用抗体NKG2A中和剂。在一些实施例中，在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体的同时施用NKG2A中和剂。在一些实施例中，在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之后施用NKG2A中和剂。例如，可以在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之后大约0至30天施用NKG2A中和剂。在一些实施例中，在施用抗PD-1或抗PD-L1抗体之后从约30分钟至约2周、从约30分钟至约1周、从约1小时至约2小时、从约2小时至约4小时、从约4小时至约6小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至1天、或从约1至5天施用NKG2A中和剂。

用抗NKG2A抗体治疗人类的示例性治疗方案包括，例如，向患者施用有效量的抑制NKG2A的抗体，其中该方法包括至少一个施用周期，其中以1-10mg/kg体重的剂量施用至少一个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，施用周期在2周与8周之间。

用抗NKG2A抗体治疗人类的示例性治疗方案包括，例如，向患者施用有效量的抑制NKG2A的抗体和中和人类PD-1的抑制性活性的抗体中的每一种，其中该方法包括至少一个施用周期，其中以0.1-10mg/kg体重或1-10mg/kg体重的剂量施用至少一个剂量的抗NKG2A抗体，并且以1-20mg/kg体重的剂量施用至少一个剂量的抗PD-1或抗PD-L1抗体。在一个实施例中，施用周期在2周与8周之间。

在一个实施例中，该方法包括至少一个施用周期，其中该周期为八周或更短的时间段，其中对于至少一个周期中的每一个，以1-10mg/kg体重的剂量施用两个、三个或四个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，每个周期进一步包括以1-20mg/kg体重的剂量施用两个、三个或四个剂量的抗PD-1或抗PD-L1抗体。

可以有利地施用抗NKG2A抗体，该施用量在循环中实现是基本上完全(例如，90％、95％)受体饱和所需的浓度的至少10倍、20倍或30倍高的浓度(例如，如通过滴定表达NKG2A的细胞上的抗NKG2A抗体所评估的，例如在PBMC中)，或者任选地，该施用量在血管外组织(例如，肿瘤组织或环境)中实现是基本上完全受体饱和所需的浓度的至少10倍、20倍或30倍高的浓度(例如，如通过在表达NKG2A的细胞上滴定抗NKG2A抗体所评估，例如在PBMC中)。

可以使用表达NKG2A的NK细胞对表达HLA-E的靶细胞的细胞毒活性的合适测定来评估NKG2A+NK细胞反应。实例包括基于NK细胞活化的标记(例如，CD107或CD137表达)的测定。有利地，可以施用一定量的抗NKG2A抗体，以便实现和/或维持至少10μg/ml的连续(最小)组织浓度。例如，为了在组织中实现/维持10μg/ml而实现和/或维持的血液浓度可以在100-110μg/ml、100-120μg/ml、100-130μg/ml、100-140μg/ml、100-150μg/ml、100-200μg/ml、100-250μg/ml或100-300μg/ml之间。

具有约10μg/ml的针对NKG2A+NK细胞反应的EC₁₀₀的用于本文的实例中的抗NKG2A抗体(诸如humZ270(莫纳利珠单抗))的示例性治疗方案包括至少一个施用周期，其中以约10mg/kg体重、任选地2-10mg/kg体重、任选地4-10mg/kg体重、任选地6-10mg/kg体重、任选地2-6mg/kg体重、任选地2-8mg/kg体重、或任选地2-4mg/kg体重的剂量施用至少一个剂量的抗NKG2A抗体。任选地，施用至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，施用周期在2周与8周之间。在一个实施例中，施用周期为8周。在一个实施例中，施用周期为8周，并且包括每两周施用一个剂量的抗NKG2A抗体(即，总共四个剂量)。

在本文的实施例中的任一个的一个方面中，抗NKG2A抗体约每两周施用一次。

用于与抗NKG2A抗体一起使用的示例性治疗方案包括例如，每月两次以一定量向患者施用抗NKG2A抗体，该量有效地在抗NKG2A抗体的至少两次连续施用之间维持至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度，抗NKG2A抗体在2-10mg/kg体重之间、任选地2-6mg/kg体重、任选地2-4mg/kg体重、任选地约4mg/kg体重。可以任选地施用这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。实现40μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度预期提供约4μg/ml的组织(例如，血管外组织、肿瘤环境)浓度，进而对应于抗体(诸如人源化Z270(莫纳利珠单抗))的EC₅₀。

用于与抗NKG2A抗体一起使用的示例性治疗方案包括例如，向患者施用有效量的抗NKG2A抗体，其中该抗体每月2次施用并且有效地在抗NKG2A抗体的至少两次连续施用之间维持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量在4-10mg/kg体重之间、任选地4-6mg/kg体重、任选地4-8mg/kg体重、任选地约4mg/kg体重、任选地约6mg/kg体重、任选地约8mg/kg体重、或任选地约10mg/kg体重。可以任选地施用这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。实现100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度预期提供约10μg/ml的组织(例如，血管外、肿瘤环境)浓度，进而对应于抗体(诸如人源化Z270)的EC₁₀₀。

在某些实施例中，抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)的剂量(例如，每个剂量)以0.1、0.3、1、3、4、6、8或10mg/kg施用。在某些实施例中，抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)的剂量(例如，每个剂量)以7.5mg、22.5mg、75mg、225mg或750mg的固定剂量施用，任选地每两周施用。在某些实施例中，抗PD-1抗体的剂量(例如，每个剂量)以1-20mg/kg、任选地以10mg/kg施用。在某些实施例中，抗PD-L1抗体(例如，德瓦鲁单抗)的剂量(例如，每个剂量)以10、15、20或25mg/kg、任选地以750mg总剂量、任选地以1500mg总剂量施用，任选地每4周施用。在某些实施例中，组合疗法允许抗PD-1或PD-L1抗体以较低剂量施用。

在一个实施例中，抗NKG2A抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体以下列剂量施用：

(a)0.1-10mg/kg抗NKG2A抗体和(i)1-10mg/kg抗PD-1抗体或(ii)1-20mg/kg抗PD-L1抗体；

(b)1-10mg/kg抗NKG2A抗体和(i)1-10mg/kg抗PD-1抗体或(ii)1-20mg/kg抗PD-L1抗体；

(c)225mg抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)和750mg/kg抗PD-L1抗体(例如，德瓦鲁单抗)；

(d)750mg抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)和750mg/kg抗PD-L1抗体(例如，德瓦鲁单抗)；

(e)225mg抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)和1500mg/kg抗PD-L1抗体(例如，德瓦鲁单抗)；或者

(f)750mg抗NKG2A抗体(例如，莫纳利珠单抗)和1500mg/kg抗PD-L1抗体(例如，德瓦鲁单抗)。

在本文的实施例中的任一个的一个方面中，抗NKG2A抗体约每两周施用一次，任选地每四周施用一次。在本文的实施例中的任一个的一个方面中，抗PD-1或抗PD-L1抗体约每四周施用一次。

在一个实施例中，抗PD-1或抗PD-L1抗体和/或抗NKG2A抗体通过静脉内施用。在一个实施例中，每四周施用抗PD-1或抗PD-L1抗体，并且每两周施用抗NKG2A抗体，其中每隔四周，抗PD-1或抗PD-L1抗体和NKG2A抗体在同一天施用，进一步任选地通过静脉内施用。

在一个实施例中，提供了一种用于评估个体是否适合用抑制NKG2A的药剂(和进一步任选地中和人类PD-1的抑制性活性的药剂)治疗的方法，该方法包括在来自个体的生物样品中评估肿瘤DNA错配修复状态。确定个体患有非DNA错配修复缺陷性的肿瘤指示患者患有可以用抑制NKG2A的药剂治疗的癌症，该药剂进一步任选地与中和人类PD-1的抑制性活性的药剂组合。在一个实施例中，该方法用于评估个体是否适合用根据本文披露的施用方案施用的抑制NKG2A的药剂和中和人类PD-1的抑制性活性的药剂治疗。

在另一个方面中，提供了一种降低癌症进展风险、降低CRC(任选地mCRC)中另外的癌症的风险和/或提供用于在人类个体中减少癌症进展的治疗方案的方法，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向患者施用一定量的NKG2A中和剂和PD-1中和剂。在另一个方面中，提供了一种在个体(诸如人类患者)中促进癌症(特别是结直肠癌)缓解的方法，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向个体施用包含NKG2A中和剂和PD-1中和剂的药物组合物，以便在个体中促进癌症缓解。在另一个方面中，提供了一种在个体(诸如人类患者)中预防癌症(特别是结直肠癌)复发的方法，该个体的癌症在先前的抗癌治疗之后处于缓解期，该方法包括以根据本披露的剂量和频率向个体施用包含NKG2A中和剂和PD-1中和剂的组合物，以便在个体中促进癌症缓解。在另一个方面中，提供了一种在被诊断患有癌症(特别是结直肠癌)的人类患者中增加相关时间段内存活的可能性的方法，该方法包括向患者施用包含NKG2A中和剂和PD-1中和剂的药物组合物。在另一个方面中，提供了一种改善癌症患者的生活质量的方法，该方法包括以有效改善患者的生活质量的量向患者施用包含NKG2A中和剂和PD-1中和剂的药物组合物。在另一个方面中，本文所述的方法可以用于显著减少人体中的癌细胞数量，这样使得例如癌细胞的总数减少。在相关意义上，提供了一种用于在哺乳动物(诸如人类癌症患者)中杀伤(例如，直接或间接导致死亡)癌细胞(特别是结直肠癌细胞)的方法。在本文所述的方法的再其他实施例中，所述个体患有非MSI高(MSI-H)的和/或非DNA错配修复(MMR)缺陷性的肿瘤。

NKG2A中和剂与PD-1中和剂的组合可以在与一种或多种另外的治疗剂或疗法组合施用(共施用)中来施用。

实例

实例1：剂量发现是德瓦鲁单抗与莫纳利珠单抗组合的1期多中心开放标签单臂剂量递增和剂量扩展研究

进行德瓦鲁单抗与莫纳利珠单抗组合的1期多中心开放标签单臂剂量递增和剂量扩展研究(参见WHO Drug Information[世界卫生组织药物信息]第30卷，1号，2016；也称为IPH2201；具有SEQ ID NO：11的重链和SEQ ID NO：15的轻链的抗体)以在患有选定的晚期实体瘤的成年受试者中评估安全性、耐受性、PK、免疫原性、药效学、和抗肿瘤活性。该研究由2个部分组成：剂量递增和剂量扩展。

受试者经由2次单独的静脉内输注接受德瓦鲁单抗和莫纳利珠单抗。受试者接受德瓦鲁单抗和莫纳利珠单抗，直到出现不可接受的毒性、确认进行性疾病(PD)的记录或受试者出于另一种原因退出的记录。

入选规范包括：

1.受试者必须具有晚期复发性或转移性癌症的组织学记录。

2.受试者必须在复发性/转移性环境中已接受至少一系列标准全身疗法并且已有所进展或者至少一系列标准全身疗法难以治愈，具有选定的晚期实体瘤。

3.受试者必须至少有一个可由RECIST v1.1测量的病灶

排除规范如下：”

1.用免疫疗法药剂预先治疗。在与医学监测者讨论后，可以允许使用抗肿瘤疫苗进行预先治疗。

2.之前参与包括单独或组合使用德瓦鲁单抗的临床研究，其中该研究具有登记意图并且主要终点的分析尚未完成

3.在第一剂量的德瓦鲁单抗和莫纳利珠单抗之前的4周内接受任何常规的或研究性的抗癌疗法

4.用于癌症治疗的任何同步化学疗法、免疫疗法、生物或激素疗法。针对非癌症相关的病状同步使用激素是可接受的。在DLT评估期之后，通过事先咨询并与医学监测者达成一致，可接受出于缓和意图的孤立性病灶的局部治疗。

5.在第一剂量之前的14天内正在使用或先前使用免疫抑制药物。

顺序组中的受试者接受德瓦鲁单抗(1500mg/4周(Q4W))与4个计划剂量水平(22.5、75、225、或750mg/2周(Q2W))中的1个下的莫纳利珠单抗的组合。

在使用递增的莫纳利珠单抗加德瓦鲁单抗治疗的15名患者中，没有导致停药的治疗相关的不良事件(TRAE)，没有3/4等级的TRAE，没有DLT，也没有死亡；未达到MTD。在12名患者(80％)中观察到任何等级的TRAE；最常见的是腹泻(n＝4)。40名扩展患者的安全性与递增相似：19名患者(48％)有任何等级的TRAE，1名患者有3/4等级的TRAE(败血症)。两种组合药物的PK显示没有相互作用。莫纳利珠单抗PK在最高剂量水平接近线性，因此被选择用于扩展。

在试验的剂量递增部分结束时，未达到最大耐受剂量(MTD)，并且剂量递增委员会(DEC)认为第4组给药莫纳利珠单抗(750mg Q2W)和德瓦鲁单抗(1500mg Q4W)是安全的。然后将这些剂量用于目前正在进行的研究的剂量扩展部分。如果在第一剂量水平遇到不可接受的毒性，将使用德瓦鲁单抗1500mg Q4W和莫纳利珠单抗7.5mg Q2W的剂量的剂量递减组。

实例2：用莫纳利珠单抗和德瓦鲁单抗治疗的MSS结直肠癌患者在I期临床研究的CRC剂量扩展部分中的反应

1期研究的剂量扩展部分旨在将患者招募到对应于用现有疗法不能充分治疗的癌症的四个组中。这些组中的一个包括复发性或转移性MSS-CRC受试者。在MSS-CRC组中，所有受试者需要在筛选期间进行记录的突变测试并从疾病评估中确认肿瘤位置以用于登记，并且CRC癌症必须没有缺陷性DNA错配修复(微卫星不稳定性)，如通过测试所记录的。

缺陷性DNA错配修复由以下任一种定义：(il高频微卫星不稳定性，其中在2个或更多个微卫星标记(BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、或MONO-27)组中检测到变化，或(ii)免疫组织化学分析表明缺少以下蛋白质中的任何一种或多种的蛋白质表达：MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2。

受试者组接受德瓦鲁单抗(1500mg/4周(Q4W))与750mg/2周(Q2W)的莫纳利珠单抗的组合。

结果显示，在MSS-CRC扩展组中(58％的患者接受过至少3个系列的先前疗法，n＝37可评估疗效)，存在3例确认的部分反应(PR)(包括一名其反应从部分反应改善到未确认的完全反应的患者)和11例稳定疾病(SD)，包括3名持续疗法＞200天的肿瘤减少的患者。16周的疾病控制率(DCR)为24％。

在MSS-CRC扩展组中，肿瘤大小相对于基线和治疗持续时间的百分比变化在图1中表示。

上述CRC中莫纳利珠单抗和德瓦鲁单抗的I期临床研究的剂量扩展部分的更新显示了随后的结果。

结果显示，在MSS-CRC扩展群组中(60％的患者接受过至少3个系列的先前治疗，n＝39可评估疗效)，其中有1例确诊完全响应，2例确诊部分响应(PR)和11例稳定疾病(SD)(表1和2)。

表1.先前的抗癌症治疗-作为治疗群体

表2.在响应可评估群体中的疾病反应

^a经由Kaplan-Meier方法评估的中值响应时间、和响应的中值持续时间和疾病控制的中值持续时间。

响应可评估的群体包括进行至少一次基线后疾病评估或在第一次基线后疾病评估之前由于死亡或疾病进展而中断的所治疗群体中的患者。

16周的疾病控制率(DCR)为31％，并且在24周为18％(表3)。

表3.在响应可评估群体中的疾病反应

在类似的群体中与Lonsurf/TAS-102中值OS为5.7个月(Mayer等人，N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]372：1909-1919)或与regorafenib报告的中值OS为6.4个月(Grothey等人，Lancet[柳叶刀]2013，381(9863)：303-312)相比更有利，目前为止获得的中值OS是令人鼓舞的，为10.6个月。

与图1相比，在更长的时间段内，在图2中表示此MSS-CRC扩展组中，肿瘤大小相对于基线和治疗持续时间的百分比变化。

总之，这种首次在人体内组合的莫纳利珠单抗加德瓦鲁单抗的剂量递增已经完成，从而证明了可控的毒性特征。数据指示，莫纳利珠单抗加德瓦鲁单抗的组合可以为MSS-CRC患者带来改善的益处，这些MSS-CRC患者是历史上对PD-1/PD-L1阻断无反应的人群。

在此引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利均通过引用以其全部内容结合在此，并且其程度如同每个参考文献被单独且具体地指示通过引用并入并且在本文完整地阐述(到法律允许的最大程度)，不考虑本文其他地方任何单独提供的特定文件的结合。

除非另外说明，否则本文提供的所有精确值均代表对应的近似值(例如，关于特定因子或测量值提供的所有精确示例性值均可以被视为还提供对应的近似测量值，在适当的情况下由“约”修饰)。当“约”与数字结合使用时，可以将这指定为包括对应于指定数字的+/-10％的值。

除非另外说明或明确与上下文相矛盾，否则关于一个或多个要素使用诸如“包含”、“具有”、“包括”或、“含有”等术语，本发明的任何方面或实施例的在本文的描述旨在提供对“由该特定的一个或多个要素组成”、“实质上由该特定的一个或多个要素组成”或“基本上包含该特定的一个或多个要素”的本发明的类似方面或实施例的支持(例如，除非另外说明或明确与上下文相矛盾，否则在本文描述为包含特定要素的组合物应当理解为还描述由该要素组成的组合物)。

本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围做出限制，除非另外要求。说明书中的语言不应当被解释为指示任何未要求保护的要素是实践本发明所必需的。

Claims

1.一种在对其有需要的个体中治疗癌症和/或引发抗肿瘤免疫反应的方法，其中，所述个体患有非MSI高(MSI-H)的和/或非DNA错配修复(MMR)缺陷性的肿瘤，该方法包括向所述个体施用治疗有效量的NKG2A中和剂和治疗有效量的PD-1中和剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述个体患有不具有在两个或更多个微卫星标记中检测到的微卫星不稳定性的肿瘤，任选地其中所述个体患有不具有在选自下组的两个或更多个微卫星标记中检测到的改变的肿瘤，该组由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，所述个体患有不具有DNA错配修复(MMR)蛋白表达改变的肿瘤，任选地其中所述个体患有不具有选自MSH2、MLH1、MSH6和PMS2的至少一种MMR蛋白表达降低或缺失的肿瘤。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述个体患有微卫星稳定(MSS)的肿瘤。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述个体患有选自下组的癌症，该组由以下各项组成：结直肠癌、结肠癌和直肠癌。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述个体患有结直肠癌，任选地晚期复发性或转移性结直肠癌。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述个体患有MSS-结直肠癌(MSS-CRC)。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述方法包括：

a)确定所述个体是否患有非MSI-H的和/或DNA错配修复缺陷性的肿瘤，任选地确定所述个体是否患有不具有在两个或更多个微卫星标记中检测到的微卫星不稳定性的肿瘤的准备步骤，任选地其中所述个体患有不具有在选自下组的两个或更多个微卫星标记中检测到的改变的肿瘤，该组由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27；和/或

b)确定所述个体是否患有不具有DNA错配修复(MMR)蛋白表达改变的肿瘤，任选地所述个体是否患有不具有选自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一种MMR蛋白表达降低或缺失的肿瘤的准备步骤。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂是结合人类NKG2A蛋白的抗体，任选地是人源化或人类抗NKG2A抗体。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂是抑制NKG2A与HLA-E结合的抗体。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂包含分别具有SEQ ID NO：16-18的序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：19-21的序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂是莫纳利珠单抗。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述PD-1中和剂是抗体。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述PD-1中和剂是结合人类PD-1多肽的抗体，任选地所述PD-1中和剂是人类抗PD-1抗体。

15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述PD-1中和剂是结合人类PD-L1多肽的抗体，任选地所述PD-1中和剂是人类抗PD-L1抗体。

16.根据权利要求1-13和15中任一项所述的方法，其中，所述PD-1中和剂包含分别具有SEQ ID NO：28-30的氨基酸序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQID NO：31-33的氨基酸序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域。

17.根据权利要求1-13和15-16中任一项所述的方法，其中，所述PD-1中和剂是德瓦鲁单抗。

18.根据权利要求1-13和15-17中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂是莫纳利珠单抗并且所述PD-1中和剂是德瓦鲁单抗。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂和所述PD-1中和剂同时、分开、或依次施用。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂和所述PD-1中和剂配制用于分开施用并且同时或依次施用。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂以从0.1至10mg/kg范围内的剂量施用并且所述PD-1中和剂以从1至20mg/kg范围内的剂量施用，任选地，所述NKG2A中和剂以10mg/kg的剂量施用并且所述PD-1中和剂以20mg/kg的剂量施用，任选地，所述NKG2A中和剂是每2周以750mg的固定剂量施用的莫纳利珠单抗并且所述PD-1中和剂是每4周以1500mg/kg的固定剂量施用的德瓦鲁单抗。

22.一种用于增加对MSS-CRC患者的肿瘤的抗肿瘤活性的试剂盒，该试剂盒包括：

(iii)含有NKG2A中和剂诸如抗NKG2A抗体的药物组合物，和与PD-1中和剂诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体一起施用所述NKG2A中和剂的说明书，或

(iv)含有PD-1中和剂诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的药物组合物，和与NKG2A中和剂诸如抗NKG2A抗体一起施用所述PD-1中和剂的说明书，

适用于在对其有需要的患者中治疗MSS-CRC。

23.根据权利要求22所述的试剂盒，其中，所述试剂盒进一步包括用于治疗MSS-CRC的说明书。

24.根据权利要求22至23中任一项所述的方法，其中，所述NKG2A中和剂是莫纳利珠单抗并且所述PD-1中和剂是德瓦鲁单抗。

25.一种NKG2A中和剂，该NKG2A中和剂用于治疗患有癌症的人类个体，其中，所述个体患有非MSI-H的和/或非DNA错配修复(MMR)缺陷性的肿瘤，其中所述NKG2A中和剂与PD-1中和剂组合施用。

26.一种PD-1中和剂，该PD-1中和剂用于治疗患有癌症的人类个体，其中，所述个体患有非MSI-H的和/或非DNA错配修复(MMR)缺陷性的肿瘤，其中所述PD-1中和剂与NKG2A中和剂组合施用。

27.根据权利要求25或26所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有不具有在两个或更多个微卫星标记中检测到的微卫星不稳定性的肿瘤，任选地其中所述个体患有不具有在选自下组的两个或更多个微卫星标记中检测到的改变的肿瘤，该组由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。

28.根据权利要求25至27中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有不具有DNA错配修复(MMR)蛋白表达改变的肿瘤，任选地其中所述个体患有不具有选自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一种MMR蛋白表达降低或缺失的肿瘤。

29.根据权利要求25至28中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有微卫星稳定(MSS)的肿瘤。

30.根据权利要求25至29中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有选自下组的癌症，该组由以下各项组成：结直肠癌、结肠癌和直肠癌。

31.根据权利要求25至30中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有结直肠癌，任选地晚期复发性或转移性结直肠癌。

32.根据权利要求25至31中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体患有MSS-结直肠癌(MSS-CRC)。

33.根据权利要求25至32中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述个体已经历确定以下的准备步骤：

a)所述个体是否患有非MSI-H的和/或DNA错配修复缺陷性的肿瘤，任选地确定所述个体是否患有不具有在两个或更多个微卫星标记中检测到的微卫星不稳定性的肿瘤，任选地其中所述个体患有不具有在选自下组的两个或更多个微卫星标记中检测到的改变的肿瘤，该组由以下各项组成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27；如/或

b)所述个体是否患有不具有DNA错配修复(MMR)蛋白表达改变的肿瘤，任选地所述个体是否患有不具有选自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一种MMR蛋白表达降低或缺失的肿瘤。

34.根据权利要求25至33中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂是结合人源化或人类NKG2A蛋白的抗体，任选地是人类或人源化抗NKG2A抗体。

35.根据权利要求25至33中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂是抑制NKG2A与HLA-E结合的抗体。

36.根据权利要求25至34中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂包含分别具有SEQ ID NO：16-18的序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及分别具有SEQ ID NO：19-21的序列的轻链L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3结构域。

37.根据权利要求25至34和36中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂是莫纳利珠单抗。

38.根据权利要求25至37中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述PD-1中和剂是抗体。

39.根据权利要求25至38中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述PD-1中和剂是结合人类PD-1多肽的抗体，任选地所述PD-1中和剂是人类抗PD-1抗体。

40.根据权利要求25至39中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述PD-1中和剂是结合人类PD-L1多肽的抗体，任选地所述PD-1中和剂是人类抗PD-L1抗体。

41.根据权利要求25和39中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述PD-1中和剂包含具有SEQ ID NO：28-30的氨基酸序列的重链H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3结构域以及具有SEQID NO：31-33的氨基酸序列的轻链L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3结构域。

42.根据权利要求25至39和41中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述PD-1中和剂是德瓦鲁单抗。

43.根据权利要求25至39和41-42中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂是莫纳利珠单抗并且所述PD-1中和剂是德瓦鲁单抗。

44.根据权利要求25至43中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂和所述PD-1中和剂同时、分开、或依次施用。

45.根据权利要求25至44中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂和所述PD-1中和剂配制用于分开施用并且同时或依次施用。

46.根据权利要求25至45中任一项所述的用于使用的药剂，其中，所述NKG2A中和剂以从0.1至10mg/kg范围内的剂量施用并且所述PD-1中和剂以从1至20mg/kg范围内的剂量施用，任选地，所述NKG2A中和剂是每2周以750mg的固定剂量施用的莫纳利珠单抗并且所述PD-1中和剂是每4周以1500mg的固定剂量施用的德瓦鲁单抗。