KR20210010486A - 암의 치료 - Google Patents

암의 치료 Download PDF

Info

Publication number
KR20210010486A
KR20210010486A KR1020207035232A KR20207035232A KR20210010486A KR 20210010486 A KR20210010486 A KR 20210010486A KR 1020207035232 A KR1020207035232 A KR 1020207035232A KR 20207035232 A KR20207035232 A KR 20207035232A KR 20210010486 A KR20210010486 A KR 20210010486A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
neutralizing agent
nkg2a
val
thr
Prior art date
Application number
KR1020207035232A
Other languages
English (en)
Inventor
샤드 에사 압둘라
아쇼크 쿠마르 굽타
쉬양 송
Original Assignee
메디뮨 리미티드
이나뜨 파르마
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메디뮨 리미티드, 이나뜨 파르마 filed Critical 메디뮨 리미티드
Publication of KR20210010486A publication Critical patent/KR20210010486A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 암, 특히 DNA 미스매치 복구 결핍을 특징으로 하지 않는 암을 치료하기 위한 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제의 용도에 관한 것이다. 암의 치료 방법뿐만 아니라 DNA 미스매치 복구 결핍을 특징으로 하지 않는 암을 치료하는 데 유용한 조성물 및 키트가 제공된다.

Description

암의 치료
본 발명은 암, 특히 DNA 미스매치 복구 결핍을 특징으로 하지 않는 암을 치료하기 위한 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제의 용도에 관한 것이다. MSS 암의 치료가 포함된다. 본 발명은 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암의 치료에 특히 유용하다.
NK 세포 활성은 활성화 및 저해 신호가 모두 관여되는 복잡한 기전에 의해 조절된다. NK 세포 매개 인식 및 HLA 클래스 I 결핍 표적 세포의 사멸에서 중요한 역할을 담당하는 몇몇 구별되는 NK-특이적 수용체가 확인되었다. 자연 세포독성 수용체(NCR)는 NK 세포에서 특이적으로 발현되는 활성화 수용체 단백질 클래스 및 이들을 발현하는 유전자를 나타낸다. NCR의 예에는 NKp30, NKp44 및 NKp46이 포함된다. 이들 수용체는 Ig 수퍼패밀리의 구성원이며, 특정한 모노클로날 항체에 의해 유도되는 이들의 가교는 강력한 NK 세포 활성화로 이어져서 세포내 Ca++ 수준 증가, 세포독성 유발 및 림포카인 방출, 그리고 여러 유형의 표적 세포에 대한 NK 세포독성의 활성화를 일으킨다.
CD94/NKG2A는 림프구의 하위세트에서 확인되는 저해 수용체이다. CD94/NKG2A는 CD94/NKG2A-리간드 HLA-E를 발현하는 세포에 대한 소정 림프구의 사이토카인 방출 및 세포독성 반응을 제한한다. HLA-E는 또한 소정 종양 세포 및 활성화된 내피 세포에 의해 가용성 형태로 분비되는 것으로 나타났다. CD94/NKG2A 신호전달을 저해하는 항체는 HLA-E 양성 표적 세포에 대한 림프구의 사이토카인 방출 및 세포용해 활성, 예컨대 HLA-E 발현 종양 세포 또는 바이러스 감염 세포에 대한 CD94/NKG2A-양성 NK 세포의 반응을 증가시킬 수 있다. 따라서 항-NKG2A 항체의 중화는 암 치료에서 유용할 수 있다.
결장직장암(CRC)은 모든 암의 10% 내지 15%를 차지하며, 서구 세계에서의 암 사망의 주된 원인이다. 전이성 CRC(mCRC) 치료를 위한 표준 케어는 세포독성 제제의 사용에 머물러있다. 보다 최근에는, 면역치료제가 CRC에서 평가되었다. Le 등(N Engl J Med. 2015;372:2509-2520)은 항-PD1(programmed death 1) 면역 체크포인트 저해제인 펨브롤리주맙으로 CRC에서 2상 임상 연구를 수행하였고, 면역-관련 객관적 반응률 및 면역-관련 PFS율이 각각 MSI-H CRC에 있어서 40%(10명 중 4명의 환자) 및 78%(9명 중 7명의 환자), 그리고 현미부수체(microsatellite) 안정형/숙달형 MSS CRC에 있어서 0%(18명 중 0명의 환자) 및 11%(18명 중 2명의 환자)임을 확인하였다. MSS CRC 환자 18명 중 11명에 비해, MSI-H CRC를 갖는 10명 중 1명의 환자만 질병 진행을 경험하였다.
불행하게도, 화학치료제 및/또는 표적화된 치료법은 비-MSI-H CRC를 갖는 환자에게 충분하고/하거나 지속적인 항-종양 반응을 제공하지 않는다. 따라서, DNA 복구 결핍 없이 치료받는 환자에 대한 이익을 개선할 필요성이 당분야에 존재한다.
본 발명은 특히, MSS-CRC를 갖는 인간 환자가 NKG2A-중화 제제 모날리주맙 및 PD-1-중화 제제 두르발루맙으로 치료받는 경우, 유망한 항-종양 반응을 나타내었다는 관찰에 기인한다. PD-1-중화 제제는 MSS-CRC에 그다지 적합하지 않은 것으로 여겨졌으나, 놀랍게도 이들 두 제제의 조합이 MSS-CRC 치료를 위해 유익할 수 있음이 확인되었다. 이론에 구애받고자 하지 않고, HLA-E/NKG2A축의 중화는 MSS-CRC 종양을 숙주 면역계에 의한 인식 및/또는 용해에 민감하게 만들 수 있을 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 방지, 및/또는 항-종양 면역 반응의 유발을 필요로 하는 개체에서 암을 치료 및/또는 방지하고/하거나 항-종양 면역 반응을 유발하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 개체는 비-고-MSI 종양을 갖고, 이 방법은 상기 개체를 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 치료하는 단계를 포함한다. 하나의 구현예에서, 종양은 저-MSI 종양이다. 또 다른 구현예에서, 종양은 MSS이다. 하나의 구현예에서, 암 또는 종양은 결장직장암(CRC), 선택적으로 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암(mCRC)이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 방지, 및/또는 항-종양 면역 반응의 유발을 필요로 하는 개체에서 암을 치료 및/또는 방지하고/하거나 항-종양 면역 반응을 유발하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 개체는 DNA 미스매치 복구(MMR) 결함이 아닌 종양을 갖고, 이 방법은 상기 개체를 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 치료하는 단계를 포함한다. 하나의 구현예에서, 종양은 저-MSI 종양이다. 또 다른 구현예에서, 종양은 MSS이다. 하나의 구현예에서, 암 또는 종양은 결장직장암(CRC), 선택적으로 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암(mCRC)이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 항-종양 면역 반응의 유발을 필요로 하는 개체에서 암을 치료하고/하거나 항-종양 면역 반응을 유발하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 개체는 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암, 선택적으로 전이성 결장직장암을 갖고, 이는 고-MSI(MSI-H)가 아니며, 이 방법은 상기 개체를 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 치료하는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 항-종양 면역 반응의 유발을 필요로 하는 개체에서 암을 치료하고/하거나 항-종양 면역 반응을 유발하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 개체는 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암, 선택적으로 전이성 결장직장암을 갖고, 이는 현미부수체 저-불안정성(저-MSI) 또는 현미부수체 안정형(MSS)이며, 이 방법은 상기 개체를 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 치료하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, (i) DNA 미스매치-복구 결함이 아닌 종양을 갖는 개체를 확인하는 단계 및 (ii) 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 유효량의 제제 및 PD-1을 중화하는 유효량의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암, 선택적으로 CRC 또는 mCRC를 치료하거나 방지하는 방법이 제공된다.
하나의 구현예에서, (i) 고-MSI 종양이 아닌 종양을 갖는 개체를 확인하는 단계 및 (ii) 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 유효량의 제제 및 PD-1을 중화하는 유효량의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암, 선택적으로 CRC 또는 mCRC를 치료하거나 방지하는 방법이 제공된다.
하나의 구현예에서, (i) MSS 종양인 종양을 갖는 개체를 확인하는 단계 및 (ii) 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 유효량의 제제 및 PD-1을 중화하는 유효량의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암, 선택적으로 CRC 또는 mCRC를 치료하거나 방지하는 방법이 제공된다.
또 다른 구현예에서, 암, 선택적으로 CRC 또는 mCRC를 갖는 개체가 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제를 이용한 치료로부터 특정 이익을 이끌어낼 것인지, 이에 반응성일 것인지, 및/또는 이에 적합할 것인지를 결정하는 방법이 제공되며, 이 방법은 상기 개체가 DNA 미스매치-복구 결함인 종양을 갖는지를 결정하는 단계를 포함하고, 여기서 종양이 DNA 미스매치-복구 결함이 아니라는 결정은 개체가 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 제제를 이용한 치료로부터 특정 이익을 이끌어내고/이끌어내거나, 이에 반응성이고/반응성이거나, 이에 적합할 것임을 시사한다.
또 다른 구현예에서, 암, 선택적으로 CRC 또는 mCRC를 갖는 개체가 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제를 이용한 치료로부터 특정 이익을 이끌어낼 것인지, 이에 반응성일 것인지, 및/또는 이에 적합할 것인지를 결정하는 방법이 제공되며, 이 방법은 상기 개체가 현미부수체 불안정성이 없는 종양을 갖는지(예로, 개체가 MSS 종양을 갖는지)를 결정하는 단계를 포함하고, 여기서 종양에 현미부수체 불안정성이 없다(예로, 개체가 MSS 종양을 갖는다)는 결정은 개체가 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 제제를 이용한 치료로부터 특정 이익을 이끌어내고/이끌어내거나, 이에 반응성이고/반응성이거나, 이에 적합할 것임을 시사한다.
현미부수체 불안정성은 손상된 DNA 미스매치 복구(MMR)로 인해 초래되는 유전적 과돌연변이성 상태이다. MSI의 존재는 MMR이 정상적으로 기능하지 않고 있다는 표현형 증거를 나타낸다. 대부분의 경우에서, MSI 종양에서의 불안정성에 대한 유전적 근거는 5개의 인간 MMR 유전자: MSH2, MLH1, MSH6, PMS2, 및 PMS1 중 어느 하나 이상의 선천성 생식계열 변경이다. 따라서, 종양에서의 현미부수체 불안정성은 현미부수체 마커 및/또는 MMR 유전자를 평가하여 결정될 수 있다.
하나의 구현예에서, 종양이 현미부수체 불안정성을 갖지 않는(예로 종양이 현미부수체 안정형(MSS)인) 개체를 확인하는 단계는 (a) 종양 세포를 포함하는 개체로부터 생물학적 샘플을 수득하는(예로 생검을 수득하는 것을 포함하는) 단계, (b) 생물학적 샘플 내에서 종양 세포의 현미부수체 상태를 결정하는 단계를 포함한다. 개체가 현미부수체 불안정성을 특징으로 하지 않는 종양을 갖는다(예로, 종양이 MSS이며, 종양은 현미부수체 안정성을 특징으로 한다)는 발견은 개체가 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 유리하게 치료받을 수 있음을 시사한다.
하나의 구현예에서, 종양 세포의 현미부수체 상태를 결정하는 단계는 종양 세포에서 DNA 미스매치 복구(MMR) 단백질의 발현 변경을 검출하는 단계를 포함하며, 선택적으로 MMR 단백질은 MSH2, MLH1, MSH6, PMS2, 및 PMS1로부터 선택되고, 선택적으로 MMR 유전자 또는 단백질은 MSH2, MLH1, MSH6 및 PMS2로부터 선택된다. 하나의 구현예에서, 개체가 적어도 하나의 MMR 단백질의 감소 또는 부재를 특징으로 하는 종양을 갖는다는 발견은 종양이 현미부수체 불안정성을 특징으로 함을 시사한다. 종양이 적어도 하나의 MMR 단백질의 감소 또는 부재를 갖지 않는 개체는 종양이 현미부수체 안정성을 특징으로 하며(예로 MSS) 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 유리하게 치료받을 수 있음을 시사하는 것으로 특정될 수 있다. 예를 들어 MMR 단백질 감소는 DNA 미스매치 복구 결핍을 평가하기 위한 표준 방법 및 가이드라인에 따라 평가될 수 있다. 선택적으로 MMR 단백질의 발현 감소는 MSS와 연관된 참조 값 대비 감소에 대응할 수 있고; 선택적으로 MMR 단백질의 발현 감소는 MSI와 연관된 참조 값에 대응할 수 있다. 대안적으로, 적어도 하나의 MMR 단백질의 감소는, 예를 들어, 동일한 개체의 건강한 조직에서 측정된 동일한 MMR 단백질(들)의 수준, 또는 상이한 시기에 분석된 동일한 개체의 종양 샘플에서 측정된 동일한 MMR 단백질(들)의 수준, 또는 건강한 개체, 예컨대 암을 앓고 있지 않은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 동일한 MMR 단백질(들)의 평균 수준일 수 있는 참조 값과 대비되어 평가될 수 있다.
하나의 구현예에서, 종양 세포의 현미부수체 상태를 결정하는 단계는 현미부수체 마커 또는 현미부수체 마커 패널에서 변경을 검출하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 변경은 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, MONO27, D5S346, D2S123 및 D17S250으로 구성된 군으로부터, 보다 구체적으로 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및 MONO27로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 현미부수체 마커에서 검출된다. 종양이 고-빈도 현미부수체 불안정성을 갖지 않는 개체는 종양이 현미부수체 안정성(MSS) 또는 낮은 현미부수체 불안정성(저-MSI)을 특징으로 하며, 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제 및 PD-1을 중화하는 제제로 유리하게 치료받을 수 있음을 시사한다.
하나의 구현예에서, 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제는, 선택적으로 인간 HLA-E와 인간 NKG2A 단백질 간 상호작용을 저해하여, 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화하는 단백질(예로 항체)이다. 하나의 구현예에서, 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제는 인간 NKG2A 폴리펩타이드에 결합하며, 인간 HLA-E와 인간 NKG2A 단백질 간 상호작용을 저해하거나 저해하지 않으면서 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화하는 단백질(예로 항체)이다. 하나의 구현예에서, 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제는 인간 HLA-E 폴리펩타이드에 결합하며 인간 HLA-E와 인간 NKG2A 단백질 간 상호작용을 저해하는 단백질(예로 항체)이다.
하나의 구현예에서, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 제제는 PD-1의 저해 활성을 중화하는 항-PD-1 또는 항-PDL-1 항체이다. 개체는 인간으로 특정될 수 있다.
하나의 구현예에서, 결함 DNA 미스매치 복구를 특징으로 하지 않는 종양(예로, CRC, mCRC)을 갖는 개체에서 종양-침윤 CD8+ T 세포 및/또는 NK 세포의 활성 및/또는 수를 증가시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 치료 활성량의 화합물 및 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 치료 활성량의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, 현미부수체 불안정성을 특징으로 하지 않는(예로 MSS로 특징지어진 암) 종양(예로, CRC, mCRC)을 갖는 개체에서 종양-침윤 CD8+ T 세포 및/또는 NK 세포의 활성 및/또는 수를 증가시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 치료 활성량의 화합물 및 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 치료 활성량의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, 현미부수체 불안정성을 특징으로 하지 않는(예로 MSS로 특징지어진 암) 결장직장암(예로, mCRC)의 치료에 사용하기 위한, NKG2A를 중화하는 제제, 선택적으로 항-NKG2A 항체가 제공되며, 여기서 NKG2A를 중화하는 제제는 PD-1을 중화하는 제제, 선택적으로 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와의 조합으로 투여된다.
하나의 구현예에서, 현미부수체 불안정성을 특징으로 하지 않는(예로 MSS로 특징지어진 암) 결장직장암(예로, mCRC)의 치료에 사용하기 위한, 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 제제, 선택적으로 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 항체가 제공되며, 여기서 인간 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 제제는 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 제제, 선택적으로 항-NKG2A 항체와의 조합으로 투여된다.
본원의 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 개체는 방사선치료법, 수술, 화학치료법, 및/또는 생물학적 제제를 이용한 치료로 사전 치료를 제공받았다.
이들 양태는 본원에서 제공되는 발명의 설명에서 보다 충분히 설명되며, 추가적인 양태, 특징, 및 장점은 이로부터 자명해질 것이다.
도 1은 MSS-CRC 시험의 확장 코호트에서 각각의 환자(수평축)에 대한 기준선으로부터의 종양 크기의 최고 변화(%, 왼쪽 수직축) 및 평가 가능한 집단에서의 치료 반응 기간(주, z축)의 3D 표현이다.
도 2는 도 1에 비해 더 긴 기간의 MSS-CRC 시험의 확장 코호트에서 각각의 환자(수평축)에 대한 기준선으로부터의 종양 크기의 최고 변화(%, 왼쪽 수직축) 및 평가 가능한 집단에서의 치료 반응 기간(주, z축)의 3D 표현이다.
정의
명세서에서 사용되는 단수는 하나 이상을 의미할 수 있다. 단어 "포함하는"과 함께 사용되는 경우, 청구범위(들)에서 사용되는 단수는 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 본원에서 사용되는 "또 다른"은 적어도 제2의 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
"포함하는"이 사용되는 경우, 이는 선택적으로 "로 본질적으로 구성되는" 또는 "로 구성되는"에 의해 대체될 수 있다.
NKG2A(OMIM 161555, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 NKG2 전사체 그룹의 구성원이다(Houchins, et al. (1991) J. Exp. Med. 173:1017-1020). NKG2A는 25 kb에 걸쳐 7개 엑손에 의해 인코딩되며, 일부 차별적 스플라이싱을 나타낸다. CD94와 함께, NKG2A는 NK 세포, α/β T 세포, γ/δ T 세포 및 NKT 세포의 하위세트의 표면 상에서 확인되는, 이종이량체성 저해 수용체 CD94/NKG2A를 형성한다. 저해 KIR 수용체와 유사하게, 이는 그 세포질 도메인에 ITIM을 보유한다. 본원에서 사용되는 "NKG2A"는 NKG2A 유전자 또는 인코딩되는 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형을 나타낸다. 인간 NKG2A는 3개 도메인에 233개 아미노산을 포함하며, 하기 서열에서 세포질 도메인이 잔기 1 내지 70을 포함하고, 막통과 영역이 잔기 71 내지 93을 포함하고, 세포외 영역이 잔기 94 내지 233을 포함한다:
Figure pct00001
NKG2C(OMIM 602891, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨) 및 NKG2E(OMIM 602892, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 NKG2 전사체 그룹의 2가지 다른 구성원이다(Gilenke, et al. (1998) Immunogenetics 48:163-173). CD94/NKG2C 및 CD94/NKG2E 수용체는 림프구의 하위세트, 예컨대 NK 세포 및 T-세포의 표면 상에서 확인되는 활성화 수용체이다.
HLA-E(OMIM 143010, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함됨)는 세포 표면 상에서 발현되고 펩타이드, 예로, 다른 MHC 클래스 I 분자의 신호 서열로부터 유래되는 단편의 결합에 의해 조절되는 비전통적 MHC 분자이다. HLA-E의 가용성 버전도 동정되었다. 그 T-세포 수용체 결합 특성에 부가하여, HLA-E는 CD94/NKG2A, CD94/NKG2B 및 CD94/NKG2C에 특이적으로 결합함으로써, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T-세포(NKG) 및 T 세포(α/β 및 γ/δ)의 하위세트에 결합한다(예로, 그 전체 개시가 본원에 참조로 포함되는 Braud et al. (1998) Nature 391:795-799 참고). HLA-E의 표면 발현은 표적 세포를 CD94/NKG2A+ NK, T, 또는 NKT 세포 클론에 의한 용해로부터 보호한다. 본원에서 사용되는 "HLA-E"는 HLA-E 유전자 또는 인코딩되는 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형을 나타낸다.
본 발명의 맥락에서, "NKG2A-", 또는 "CD94/NKG2A-", "양성 림프구", 또는 "제한 림프구"는 세포 표면 상에서 CD94/NKG2A를 발현하는 림프구 계통 세포(예로 NK-세포, NKT-세포 및 T-세포)를 나타내며, 예로 CD94 및 NKG2A 상의 조합 에피토프 또는 및 NKG2A 단독 상의 에피토프를 특이적으로 인식하는 항체를 사용하는 유세포측정에 의해 검출될 수 있다. "NKG2A 양성 림프구"에는 또한 림프구 기원의 불멸 세포주(예로 NKL, NK-92)가 포함된다.
본 발명의 맥락에서, "NKG2A의 저해 활성을 감소시킨다", "NKG2A를 중화한다" 또는 "NKG2A의 저해 활성을 중화한다"는 CD94/NKG2A가 림프구 반응, 예컨대 사이토카인 방출 및 세포독성 반응으로 이어지는 세포내 공정에 부정적으로 영향을 미치는 그 능력이 저해되는 과정을 나타낸다. 이는, 예를 들어 NK- 세포 또는 T-세포 기반 세포독성 검정에서 측정될 수 있고, 여기서 CD94/NKG2A 양성 림프구에 의한 HLA-E 양성 세포의 사멸을 자극하는 치료 화합물의 능력이 측정된다. 하나의 구현예에서, NKG2A를 중화하는 항체 조제물은 CD94/NKG2A-제한 림프구의 세포독성에서 적어도 10% 증대, 선택적으로 상기 림프구 세포독성에서 적어도 40% 또는 50% 증대, 선택적으로 상기 림프구 세포독성"에서 적어도 70% 증대, 선택적으로 NK 세포독성의 적어도 70% 증대를 유도하며, 본원에 기재된 세포독성 검정을 나타낸다. 항-NKG2A 항체가 HLA-E와의 CD94/NKG2A 상호작용을 감소시키거나 차단하는 경우, 이는 CD94/NKG2A-제한 림프구의 세포독성을 증가시킬 수 있다. 이는, 예를 들어, 예로 CD94/NKG2A를 발현하는 NK 세포 및 HLA-E를 발현하는 표적 세포를 사용하는 표준 4-시간 시험관내 세포독성 검정에서 평가될 수 있다. 이러한 NK 세포는 CD94/NKG2A가 HLA-E를 인식하기 때문에 HLA-E를 발현하는 표적을 효율적으로 사멸시키지 않아서, 림프구-매개 세포용해를 예방하는 저해 신호전달의 개시 및 전파로 이어진다. 이러한 시험관내 세포독성 검정은, 예를 들어 문헌[Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)]에 기재된 바와 같이, 당분야에 널리 공지된 표준 방법에 의해 수행될 수 있다. 항체가 림프구를 자극하여 표적 세포, 예컨대 P815, K562 세포, 또는 적절한 종양 세포를 사멸시키는 능력을 평가하기 위한 크롬 방출 및/또는 다른 파라미터가 또한 문헌[Sivori et al., J. Exp. Med. 1997;186:1129-1136; Vitale et al., J. Exp. Med. 1998; 187:2065-2072; Pessino et al. J. Exp. Med. 1998;188:953-960; Neri et al. Clin. Diag. Lab. Immun. 2001;8:1131-1135; Pende et al. J. Exp. Med. 1999;190:1505-1516]에 개시되며, 각각의 전체 개시가 본원에 참조로 포함된다. 표적 세포는 NK 세포의 첨가 전에 51Cr으로 표지된 후, 사멸 결과, 세포로부터 배지로의 51Cr 방출에 비례하는 것으로 사멸이 추산된다. CD94/NKG2A가 HLA-E에 결합하는 것을 방지하는 항체의 첨가는 CD94/NKG2A를 통해 저해 신호전달의 개시 및 전파를 방지한다. 따라서, 이러한 제제의 첨가는 표적 세포의 림프구-매개 사멸을 증가시킨다. 이에 따라 상기 단계로, 예로 리간드 결합의 차단에 의해 CD94/NKG2A-유도 음성 신호전달을 방지하는 제제가 확인된다. 특정한 51Cr-방출 세포독성 검정에서, CD94/NKG2A-발현 NK 효과기-세포는 HLA-E-음성 LCL 721.221 표적 세포를 사멸시킬 수 있지만 HLA-E-발현 LCL 721.221-Cw3 대조군 세포는 덜 사멸시킨다. 대조적으로, CD94/NKG2A가 없는 YTS 효과기-세포는 두 세포주를 모두 효율적으로 사멸시킨다. 따라서, NK 효과기 세포는 CD94/NKG2A를 통한 HLA-E-유도 저해 신호전달로 인해 HLA-E+ LCL 721.221-Cw3 세포를 덜 효율적으로 사멸시킨다. NK 세포가 이러한 51Cr-방출 세포독성 검정에서 본원에 기재된 차단 항-CD94/NKG2A 항체와 사전-인큐베이션되면, HLA-E-발현 LCL 721.221-Cw3 세포는 항체-농도-의존적 양상으로 더 효율적으로 사멸된다. 항-NKG2A 항체의 저해 활성(즉, 세포독성 증강능)도 임의의 여러 다른 방식으로, 예로 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 문헌[Sivori et al., J. Exp. Med. 1997;186:1129-1136]에 기재된 바와 같은 세포내 자유 칼슘에 대한 그 효과에 의해 평가될 수 있다. NK 세포 세포독성의 활성화는, 예를 들어 사이토카인 생산(예로 IFN-γ 생산) 또는 세포독성 마커(예로 CD107 또는 CD137 가동화)에서의 증가를 측정하여 평가될 수 있다. 예시적인 프로토콜에서, PBMC로부터의 IFN-y 생산은 세포 표면 및 세포질내 염색 및 배양 4일 후 유세포측정에 의한 분석에 의해 평가된다. 간략하게, 브레펠딘 A(Sigma Aldrich)가 배양 말기 4시간 동안 5 ㎍/㎖의 최종 농도로 첨가된다. 이어서 세포가 항-CD3 및 항-CD56 모노클로날 항체와 인큐베이션된 후 투과화(IntraPrep™; Beckman Coulter) 및 PE-항-IFN-y 또는 PE-IgG1(Pharmingen)로 염색된다. 폴리클로날 활성화 NK 세포로부터의 GM-CSF 및 IFN-y 생산이 ELISA(GM-CSF: DuoSet Elisa, R&D Systems, Minneapolis, MN, IFN-y: OptElA 세트, Pharmingen)를 사용하여 상청액 중에서 측정된다.
하나의 구현예에서, 결함 DNA 미스매치 복구를 특징으로 하지 않는 종양(예로, CRC, mCRC)을 갖는 개체에서 종양-침윤 CD8+ T 세포 및/또는 NK 세포의 활성 및/또는 수를 증가시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 치료 활성량의 화합물 및 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 치료 활성량의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, 현미부수체 불안정성을 특징으로 하지 않는(예로 MSS로 특징지어진 암) 종양(예로, CRC, mCRC)을 갖는 개체에서 종양-침윤 CD8+ T 세포 및/또는 NK 세포의 활성 및/또는 수를 증가시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 개체에 저해 수용체 NKG2A를 중화하는 치료 활성량의 화합물 및 PD-1 폴리펩타이드를 중화하는 치료 활성량의 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용되는 "치료" 및 "치료하다" 등은 일반적으로 원하는 약리학적 및 생리학적 효과를 얻는 것을 의미한다. 효과는 질병, 증상 또는 이의 질환의 방지 또는 부분적 방지라는 관점에서 예방적일 수 있고/있거나 질병, 질환, 증상 또는 질병에 기인하는 유해 효과의 부분적 또는 전체적 근치라는 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "치료"는 포유류, 특히 인간에서 질병의 임의의 치료를 포함하며, (a) 질병에 대한 소인이 있을 수 있지만 아직 이를 가진 것으로 진단받지 않은 대상체에서 질병이 생기는 것의 방지, 예컨대 방지적 조기 무증상 개입; (b) 예를 들어 질병을 갖는 것으로 진단받은 대상체에서, 질병 저해, 예로, 그의 발생의 정지; 또는 질병 경감, 예로, 질병 및/또는 그의 증상 또는 질환의 퇴행 유도, 예컨대 손상의 개선 또는 복원을 포함한다. 선택적으로, 치료는 종양 부담의 감소, 병소 크기 및/또는 수의 감소, 암의 진행 감소 또는 지연(예로, 무진행 생존의 증가), 암 전이의 지연 또는 방지 및/또는 생존의 증가를 유도할 수 있다(예로 유도하는 방법으로 특징지어질 수 있음). 선택적으로 치료는, 예로 표준 기준, 선택적으로 RECIST 기준에 따라, 대상체에서 안정형 질병, 부분 반응 또는 전체 반응을 유도하거나 제공할 수 있다(예로, 유도하거나 제공하는 방법으로 특징지어질 수 있음).
"암의 치료" 등이 NKG2A 중화 제제(예로 항체) 및/또는 PD-1 중화 제제(예로 항체)를 참조하여 언급되는 경우에는 항상 하기가 포함된다:
(a) 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 암의 치료를 가능하게 하는 용량(치료 유효량)으로, 선택적으로 본원에서 특정된 바와 같은 용량(양)으로, 이러한 치료를 필요로 하는 개체, 포유류, 특히 인간에 (적어도 하나의 치료에 있어서) NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제를(예로, 함께 또는 각각 별도로 약학적으로 허용 가능한 담체 물질 중에) 투여하는 단계를 포함하는, 방법;
(b) 암의 치료를 위한 NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제의 용도;
(c) (특히 인간에서) 암의 치료에 사용하기 위한, NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제;
(d) (특히 인간에서) 암의 치료에 사용하기 위한 NKG2A 중화 제제로서, 상기 NKG2A 중화 제제는 PD-1 중화 제제와의 조합으로 투여되는, NKG2A 중화 제제;
(e) (특히 인간에서) 암의 치료에 사용하기 위한 PD-1 중화 제제로서, 상기 PD-1 중화 제제는 NKG2A 중화 제제와의 조합으로 투여되는, PD-1 중화 제제;
(f) 암 치료용 약학 조제물의 제조를 위한 NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제의 용도,
(g) NKG2A 중화 제제 및/또는 PD-1 중화 제제를 약학적으로 허용 가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 위한 약학 조제물의 제조를 위해 NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제를 사용하는 방법,
(h) 암을 치료하는 데 적절한 유효 용량의 NKG2A 중화 제제 및/또는 PD-1 중화 제제를 포함하는 약학 조제물;
(i) 본 출원이 출원되는 국가에서 특허를 부여받을 수 있는 요지 사안에 따른, (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g), 및 (h)의 임의의 조합.
본원에서 사용되는 용어 "생검"은 진단을 확립하기 위한 것과 같은, 검사 목적을 위한 조직의 제거로서 정의된다. 생검 유형의 예에는 시린지에 부착된 바늘을 통한 것과 같이, 흡입의 적용에 의한 것, 조직 단편의 기구적 제거에 의한 것; 내시경을 통해 적절한 기구로의 제거에 의한 것; 전체 병소 등의 수술적 절제에 의한 것 등이 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 나타낸다. 중쇄 내 불변 도메인의 유형에 따라, 항체는 5가지 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중 하나에 할당된다. 이들 중 몇몇은 하위클래스 또는 이소형, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등으로 추가 구분된다. 예시적인 면역글로불린(항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드쇄로 이루어지며, 각각의 쌍은 1개의 "경쇄"(약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 N-말단은 일차적으로 항원 인식에 관여하는 약 100개 내지 110개 이상 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 용어 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH)는 이들 경쇄 및 중쇄를 각각 나타낸다. 상이한 면역글로불린 클래스에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 "알파", "델타", "엡실론", "감마" 및 "뮤"로 명명된다. 상이한 면역글로불린 클래스의 서브유닛 구조 및 3차원 배치는 잘 공지되어 있다. IgG는 이들이 생리적 상황에서 가장 일반적인 항체이므로, 그리고 이들이 실험실 환경에서 가장 쉽게 제조되므로, 본원에서 채용되는 예시적인 항체 클래스이다. 선택적으로 항체는 모노클로날 항체이다. 항체의 구체예에는 인간화, 키메라, 인간, 또는 달리-인간-적합 항체가 있다. "항체"에는 또한 임의의 본원에 기재되는 항체의 임의의 단편 또는 유도체가 포함된다.
용어 "~에 특이적으로 결합한다"란 항체가 단백질의 재조합 형태, 여기에서의 에피토프, 또는 단리된 표적 세포의 표면 상에 존재하는 원상태 단백질을 사용하여 평가되는 바와 같이, 경쟁적 결합 검정에서 결합 파트너, 예로 항-NKG2A 항체에 있어서 NKG2A, 항-PD-L1 항체에 있어서 PD-L1, 항-PD-1 항체에 있어서 PD-1에 바람직하게 결합할 수 있음을 의미한다. 특이적 결합을 결정하기 위한 경쟁적 결합 검정 및 다른 방법은 당분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어 결합은 방사선 표지, 물리적 방법, 예컨대 질량 분광측정, 또는 예로 세포형광계측 분석(예로 FACScan)을 사용하여 검출되는 직접적 또는 간접적 형광 표지를 통해 검출될 수 있다. 대조군, 비특이적 제제를 사용해서 나타나는 양을 초과하는 결합은 제제가 표적에 결합함을 시사한다. NKG2A에 특이적으로 결합하는 제제는 NKG2A 단독에 또는 CD94와의 이량체로서의 NKG2A에 결합할 수 있다.
항체가 특정한 모노클로날 항체"와 경쟁한다"고 언급되는 경우, 이는 항체가 재조합 분자(예로, NKG2A) 또는 표면 발현 분자(예로, NKG2A)를 사용하는 결합 검정에서 모노클로날 항체와 경쟁함을 의미한다. 예를 들어, 평가 항체가 결합 검정에서 NKG2A 폴리펩타이드 또는 NKG2A-발현 세포에 대한 임의의 SEQ ID NO: 4 내지 8의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체의 결합을 감소시키는 경우, 항체는 이러한 항체와 각각 "경쟁한다"고 언급된다.
본원에서 사용되는 용어 "친화도"란, 에피토프에 대한 항체의 결합 강도를 의미한다. 항체의 친화도는 [Ab] x [Ag] / [Ab-Ag]로 정의되는 해리 상수 Kd에 의해 주어지며, 여기서 [Ab-Ag]는 항체-항원 복합체의 몰 농도이고, [Ab]는 미결합 항체의 몰 농도이고, [Ag]는 미결합 항원의 몰 농도이다. 친화도 상수 Ka는 1/Kd로 정의된다. 모노클로날 항체의 친화도 결정 방법은 문헌[Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. 및 Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993) 및 Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983)]에서 확인될 수 있고, 상기 참고문헌은 전체가 본원에 참조로 포함된다. 모노클로날 항체의 친화도를 결정하기 위해 당분야에 널리 공지된 하나의 표준 방법은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 스크리닝의 사용이다(예컨대 BIAcore™ SPR 분석 장치를 사용하는 분석에 의해).
본원의 맥락 내에서, "결정기"는 폴리펩타이드 상의 상호작용 또는 결합 부위를 지칭한다.
용어 "에피토프"란 항원성 결정기를 나타내며, 항체가 결합하는 항원 상 지역 또는 영역이다. 단백질 에피토프는 결합에 직접 관여되는 아미노산 잔기뿐만 아니라 특정한 항원 결합 항체 또는 펩타이드에 의해 효과적으로 차단되는 아미노산 잔기, 즉 항체의 "발자국(footprint)" 내의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이는, 예로 항체 또는 수용체와 조합될 수 있는 복잡한 항원 분자 상의 가장 간단한 형태 또는 가장 작은 구조 영역이다. 에피토프는 선형 또는 입체형태/구조적일 수 있다. 용어 "선형 에피토프"는 아미노산의 선형 서열(일차 서열) 상에서 인접하는 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프로서 정의된다. 용어 "입체형태 또는 구조적 에피토프"는 전혀 인접하지 않고 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프로서 정의되며, 이에 따라 분자의 폴딩에 의해 서로 인접하게 되는 아미노산의 선형 서열의 분리된 부분(이차, 삼차 및/또는 사차 구조)을 나타낸다. 입체형태 에피토프는 3-차원 구조에 의존한다. 따라서 용어 '입체형태'란 종종 '구조적'과 상호교환적으로 사용된다.
용어 "제제"란 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 표시하기 위해 본원에서 사용된다. 용어 "치료제"는 생물학적 활성을 갖는 제제를 나타낸다.
본원에서의 목적을 위해, "인간화" 또는 "인간" 항체는 하나 이상의 인간 면역글로불린의 불변 및 가변 프레임워크 영역이 동물 면역글로불린의 결합 영역, 예로 CDR과 융합되는 항체를 나타낸다. 이러한 항체는 결합 영역이 유래되는 비-인간 항체의 결합 특이성을 유지하지만, 비-인간 항체에 대한 면역 반응을 회피하도록 설계된다. 이러한 항체는 항원성 유발접종에 반응하여 특이적 인간 항체를 생산하도록 "조작된" 트랜스제닉 마우스 또는 다른 동물로부터 수득될 수 있다(예로, 그 전체 교시가 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Green et al. (1994) Nature Genet 7:13; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856; Taylor et al. (1994) Int Immun 6:579] 참고). 완전 인간 항체는 모두 당분야에 널리 공지되어 있는, 유전적 또는 염색체 전달감염 방법뿐만 아니라 파지 디스플레이 기술에 의해서도 구축될 수 있다(예로, 문헌[McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-553] 참고). 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다(예로, 이들의 전문이 참조로 포함되는, 미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호 참고).
"키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위(가변 영역)가 상이하거나 변경된 클래스, 효과기 기능 및/또는 종의 불변 영역 또는 키메라 항체에 대해 새로운 특성을 부여하는 완전히 상이한 분자, 예로 효소, 독소, 호르몬, 성장 인자, 약물 등에 연결되도록 불변 영역, 또는 이들의 일부가 변경되거나, 대체되거나, 교환된; 또는 (b) 가변 영역 또는 이들의 일부가 상이하거나 변경된 항원 특이성을 갖는 가변 영역으로 변경되거나, 대체되거나, 교환된 항체 분자이다.
용어 "Fc 도메인", "Fc 부분" 및 "Fc 영역"은 항체 중쇄의 C-말단 단편, 예로 인간 γ(감마) 중쇄의 아미노산(aa) 약 230 내지 aa 약 450 또는 다른 유형의 항체 중쇄(예로, 인간 항체에 있어서 α, δ, ε 및 μ), 또는 이들의 천연 발생 동종이형에서의 그 대응부 서열을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 면역글로불린에 대해 일반적으로 허용되는 Kabat 아미노산 넘버링이 본 개시의 전체에 걸쳐 사용된다(문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., United States Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD] 참고).
용어 "단리된", "정제된" 또는 "생물학적으로 순수한"은 그 원상태 상태에서 확인되는 바와 같이 이들에 보통 수반되는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없는 물질을 나타낸다. 순도 및 균질성은 전형적으로 분석 화학 기법, 예컨대 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 결정된다. 조제물에 존재하는 주요 종인 단백질은 실질적으로 정제된다.
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 나타내기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 대응하는 천연 발생 아미노산의 인공적 화학 모사체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연 발생 아미노산 중합체 및 비천연 발생 아미노산 중합체에 적용된다.
용어 "재조합"은, 예로 세포, 또는 핵산, 단백질, 또는 벡터에 대해 사용되는 경우, 세포, 핵산, 단백질 또는 벡터가 이종성 핵산 또는 단백질의 도입 또는 원상태 핵산 또는 단백질의 변경에 의해 개질되었음을, 또는 세포가 이렇게 개질된 세포로부터 유래됨을 시사한다. 따라서, 예를 들어, 재조합 세포는 세포의 원상태(비재조합) 형태 내에서 확인되지 않는 유전자를 발현하거나 다르게 비정상적으로 발현되거나 하향 발현되거나 전혀 발현되지 않는 원상태 유전자를 발현한다.
본원에서의 맥락 내에서, 폴리펩타이드 또는 에피토프에 "결합하는" 항체라는 용어는 상기 결정기에 특이성 및/또는 친화도를 가지고 결합하는 항체를 지칭한다.
용어 "동일성" 또는 "동일한"은 2개 이상의 폴리펩타이드의 서열 간 관계에서 사용되는 경우, 2개 이상의 아미노산 잔기 스트링 간 매치 수에 의해 결정되는, 폴리펩타이드 간 서열 관련성 정도를 나타낸다. "동일성"은 특정한 수학 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 해결되는 갭 정렬(존재하는 경우)을 갖는 더 작은 2개 이상의 서열 간 동일한 매치 백분율을 측정한다. 관련 폴리펩타이드의 동일성은 공지된 방법에 의해 쉽게 계산될 수 있다. 이러한 방법에는, 비제한적으로 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo et al., SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988)]에 기재된 것들이 포함된다.
동일성 결정 방법은 평가되는 서열 간에 가장 큰 매치를 제공하도록 설계된다. 동일성 결정 방법은 공개적으로 사용 가능한 컴퓨터 프로그램에서 설명된다. 두 서열 간 동일성을 결정하기 위한 컴퓨터 프로그램 방법에는 GAP을 포함하는 GCG 프로그램 패키지(Devereux et al., Nucl. Acid. Res. 12, 387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASTN 및 FASTA(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215, 403-410 (1990))가 포함된다. BLASTX 프로그램은 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 및 다른 출처(BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul et al., 상기 문헌)에서 공개적으로 사용 가능하다. 널리 공지된 Smith Waterman 알고리즘도 동일성을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
NKG2A-중화 치료제
NKG2A 중화 제제는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 세포외 부분 또는 그 리간드 HLA-E에 결합하며 CD94/NKG2A 양성 림프구의 표면 상에서 발현되는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 저해 활성을 감소시킨다. 하나의 구현예에서 제제는 CD94/NKG2A에 대한 결합에서 HLA-E와 경쟁하며, 즉 제제는 CD94/NKG2A와 그 리간드 HLA-E 간 상호작용을 차단한다. 또 다른 구현예에서 제제는 NKG2A에 결합하지만 CD94/NKG2A에 대한 결합에서 HLA-E와 경쟁하지 않으며; 즉, 제제는 HLA-E와 동시에 CD94/NKG2A에 결합할 수 있다. 하나의 구현예에서, 제제는 NKG2A에 결합하는 항체이다. 항체는 CD94 및 NKG2A 상의 조합 에피토프 또는 및 NKG2A 단독 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 또 다른 구현예에서 제제는, HLA-E에 결합하며 인간 HLA-E와 인간 NKG2A 단백질 간 상호작용을 저해하는 항체이다.
하나의 양태에서, NKG2A 중화 제제는 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 키메라 항체로부터 선택된 항체이다. 하나의 양태에서, 제제는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체로부터 유래되는 불변 도메인을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 IgA, IgD, IgG, IgE 및 IgM 항체로부터 선택된 항체의 단편이다. 하나의 양태에서, 제제는 Fab 단편, Fab' 단편, Fab'-SH 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 중쇄 Ig(라마 또는 낙타 Ig), VHH 단편, 단일 도메인 FV 및 단일쇄 항체 단편으로부터 선택된 항체 단편이다. 하나의 양태에서, 제제는 scFV, dsFV, 미니바디(minibody), 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 카파바디(kappa body), IgNAR 및 다중특이적 항체로부터 선택된 합성 또는 반합성 항체-유래 분자이다.
선택적으로, 항-NKG2A 항체는 인간 Fcγ 수용체, 예컨대 CD16에 대한 실질적인 특이적 결합을 실증하지 않는다. 선택적으로, 항-NKG2A 항체는 하나 이상의 또는 모든 인간 CD16, CD32A, CD32B 또는 CD64에 대해 실질적인 특이적 결합이 없거나 낮거나 감소된 특이적 결합을 갖는다. 예시적인 항체는 Fcγ 수용체에 대해 결합하지 않는 것으로 공지되어 있거나 이에 대해 낮은 결합을 갖는 다양한 중쇄의 불변 영역을 포함할 수 있다. 하나의 이러한 예는 인간 IgG4 불변 영역이다. 하나의 구현예에서, IgG4 항체는 생체내에서 절반 항체의 형성을 방지하기 위한 개질(fab 팔 교환)을 포함하며, 예컨대, 항체는 EU-지수에 따라 위치 228에 대응하는 잔기 241에 세린에서 프롤린으로의 돌연변이를 포함하는 IgG4 중쇄를 포함한다(Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest", 5th ed., NIH, Bethesda, ML, 1991). 이러한 개질된 IgG4 항체는 생체내에서 온전하게 유지될 것이며, 이것이 결합 친화도를 변경할 수 있는 1가 방식으로 NKG2A에 결합하도록 생체내 fab 팔 교환을 거칠 원상태 IgG4와 대비되어, NKG2A에 대해 2가(고친화도) 결합을 유지할 것이다. 대안적으로 불변 영역, 예컨대 Fab 또는 F(ab')2 단편을 포함하지 않는 IgG4 항체 단편이 Fc 수용체 결합을 회피하기 위해 사용될 수 있다. Fc 수용체 결합은, 예를 들어 BIACORE 검정에서 Fc 수용체 단백질에 대한 항체의 결합 평가를 포함하는 당분야에 공지된 방법에 따라 평가될 수 있다. 또한, Fc 부분이 Fc 수용체에 대한 결합을 최소화하거나 제거하도록 개질된 임의의 인간 항체 유형(예로 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)이 사용될 수 있다(예로, 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 WO03101485 참고). 검정, 예컨대 Fc 수용체 결합을 평가하기 위한 세포 기반 검정은 당분야에 널리 공지되어 있으며, 예로, WO03101485에 기재되어 있다.
따라서 본 발명은 NKG2A에 결합하는 항체 또는 다른 제제에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항체는 인간 NKG2C 및/또는 NKG2E에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A에 결합한다.
본 발명의 하나의 양태에서, 제제는, 예로 NKG2A에 의한 HLA-E의 결합을 방해하여, CD94/NKG2A 수용체에서의 입체형태 변화를 방지하거나 유도하여 및/또는 CD94/NKG2A 수용체의 이량체화 및/또는 클러스터링에 영향을 미침으로써 CD94/NKG2A 신호전달을 방해하여 CD94/NKG2A-발현 림프구의 CD94/NKG2A-매개 저해를 감소시킨다.
본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 NKG2C에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 추가의 바람직한 양태에서, 제제는 NKG2C에 비해 적어도 150배, 200배, 300배, 400배, 또는 10,000배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 제제는 NKG2C, NKG2E 및/또는 NKG2H 분자에 비해 적어도 100배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 추가의 바람직한 양태에서, 제제는 NKG2C, NKG2C 및/또는 NKG2H 분자에 비해 적어도 150배, 200배, 300배, 400배, 또는 10,000배 더 낮은 KD로 NKG2A의 세포외 부분에 결합한다. 이는, 예를 들어 BiaCore 실험에서 측정될 수 있고, 여기서 고정화된 CD94/NKG2A(예로 CD94/NKG2 발현 세포로부터 정제되거나 바이오-시스템에서 생산됨)의 세포에 부분에 결합하는 제제의 능력이 측정되고 동일한 검정에서 유사하게 생산된 CD94/NKG2C 및/또는 다른 CD94/NKG2 변이체에 대한 제제의 결합과 비교된다. 대안적으로, CD94/NKG2A를 천연 발현하거나 과발현하는(예로 일시적 또는 안정한 전달감염 후) 세포에 대한 제제의 결합이 측정되고 CD94/NKG2C 및/또는 다른 CD94/NKG2 변이체를 발현하는 세포의 결합과 비교될 수 있다. 항-NKG2A 항체는 선택적으로 NKG2B에 결합할 수 있고, 이는 CD94와 함께 저해 수용체를 형성하는 NKG2A 스플라이스 변이체이다. 하나의 구현예에서, 친화도는 미국 특허 제8,206,709호에 개시된 방법을 사용하여, 예를 들어 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,206,709호의 실시예 8에 나타낸 바와 같이 Biacore에 의해 공유 고정화된 NKG2A-CD94-Fc 융합 단백질에 대한 결합을 평가하여 측정될 수 있다.
항-NKG2A 항체는, 예를 들어, 예로 VH1_18, VH5_a, VH5_51, VH1_f 및 VH1_46 및 JH6 J-절편으로부터 선택된 인간 수신체 서열로부터의 VH 인간 수신체 프레임워크, 또는 당분야에 공지된 다른 인간 생식계열 VH 프레임워크 서열을 포함하는, 인간화 항체일 수 있다. VL 영역 인간 수신체 서열은, 예로, VKI_O2/JK4일 수 있다.
하나의 구현예에서, 항체는 항체 Z270에 기반한 인간화 항체이다. 상이한 인간화 Z270 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4 내지 8에 나타나며, 선택적으로 C-말단 세린(S) 잔기를 추가로 포함한다. SEQ ID NO: 4의 HumZ270VH6 가변 영역은 인간 VH5_51 유전자에 기반하며; SEQ ID NO: 5의 HumZ270VH1 가변 영역은 인간 VH1_18 유전자에 기반하고; SEQ ID NO: 6의 humZ270VH5 가변 영역은 인간 VH5_a 유전자에 기반하고; SEQ ID NO: 7의 humZ270VH7 가변 영역은 인간 VH1_f 유전자에 기반하고; SEQ ID NO: 8의 humZ270VH8 가변 영역은 인간 VH1_46 유전자에 기반하고; 모두 인간 JH6 J-절편을 갖는다. 각각의 이들 항체는 각각의 인간화 구축물의 Kabat H-CDR2의 6개 C-말단 아미노산 잔기가 인간 수신체 프레임워크와 동일하므로, 항체에 대한 숙주 면역 반응의 낮은 가능성을 가지며, NKG2A에 대해 높은 결합 친화도를 보유한다. 정렬 프로그램 VectorNTI를 사용하여, humZ270VH1 및 humZ270VH5, humZ270VH6, humZ270VH7 및 humZ270VH8 간에 하기 서열 동일성: 78,2%(VH1 대 VH5), 79,0%(VH1 대 VH6), 88,7%(VH1 대 VH7) 및 96,0%(VH1 대 VH8)이 수득되었다.
하나의 양태에서, 제제는 (i) SEQ ID NO: 4 내지 8, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 (ii) SEQ ID NO: 9, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 (i) 임의의 SEQ ID NO: 10 내지 14의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
임의의 SEQ ID NO: 4 내지 8의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체는 NKG2A의 저해 활성을 중화하지만, 활성화 수용체 NKG2C, NKG2E 또는 NKG2H에 실질적으로 결합하지 않는다. 상기 항체는 또한 세포 표면 상에서 NKG2A로의 결합에 대해 HLA-E와 경쟁한다. 하나의 양태에서, 제제는 임의의 SEQ ID NO: 4 내지 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터 유래되는 H-CDR1, H-CDR2 및/또는 H-CDR3 서열을 포함한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터 유래된 L-CDR1, L-CDR2 및/또는 L-CDR3 서열을 포함한다.
중쇄 가변 영역
VH6
Figure pct00002
VH1:
Figure pct00003
VH5:
Figure pct00004
VH7:
Figure pct00005
VH8:
Figure pct00006
경쇄 가변 영역
Figure pct00007
중쇄(가변 영역 도메인 아미노산은 밑줄침)
VH6:
Figure pct00008
VH1:
Figure pct00009
VH5:
Figure pct00010
VH7:
Figure pct00011
VH8:
Figure pct00012
경쇄(가변 영역 도메인 아미노산은 밑줄침)
Figure pct00013
모날리주맙, 중쇄 및 경쇄 상의 CDR
Kabat 넘버링 방식에 따른 중쇄 CDR:
Figure pct00014
Kabat 넘버링 방식에 따른 경쇄 CDR:
Figure pct00015
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 4 내지 8(또는 SEQ ID NO: 10 내지 14)의 잔기 31 내지 35에 대응하는 H-CDR1, SEQ ID NO: 4 내지 8(또는 SEQ ID NO: 10 내지 14)의 잔기 50 내지 60(선택적으로 인간 기원 아미노산을 포함하는 경우 50 내지 66)에 대응하는 H-CDR2, 및 SEQ ID NO: 4 내지 8(또는 SEQ ID NO: 10 내지 14)의 잔기 99 내지 114(Kabat에 따른 95 내지 102)에 대응하는 H-CDR3을 포함하는 항체이다. 하나의 구현예에서, H-CDR2는 SEQ ID NO: 4 내지 8(또는 SEQ ID NO: 10 내지 14)의 잔기 50 내지 66에 대응한다. 선택적으로, CDR은 1개, 2개, 3개, 또는 4개 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 9 또는 15의 잔기 24 내지 34에 대응하는 L-CDR1, SEQ ID NO: 9 또는 15의 잔기 50 내지 56에 대응하는 L-CDR2, 및 SEQ ID NO: 9 또는 15의 잔기 89 내지 97에 대응하는 L-CDR3을 포함하는 항체이다. 선택적으로, CDR은 1개, 2개, 3개, 또는 4개 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 31 내지 35에 대응하는 H-CDR1, SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 50 내지 60(선택적으로 50 내지 66)에 대응하는 H-CDR2, 및 SEQ ID NO: 4 내지 8의 잔기 99 내지 114(Kabat에 따른 95 내지 102)에 대응하는 H-CDR3, SEQ ID NO: 9의 잔기 24 내지 34에 대응하는 L-CDR1, SEQ ID NO: 9의 잔기 50 내지 56에 대응하는 L-CDR2, 및 SEQ ID NO: 9의 잔기 89 내지 97에 대응하는 L-CDR3을 포함하는 항체이다.
하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 SEQ ID NO: 16 내지 18의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 19 내지 21의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는 항체이다.
하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 5의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항-NKG2A 항체인 모날리주맙이다. 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 11의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 15의 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항-NKG2A 항체인 모날리주맙이다.
하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH로부터 유래된 H-CDR1, H-CDR2 및/또는 H-CDR3 서열을 포함한다. 본 발명의 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 갖는 VL로부터 유래된 L-CDR1, L-CDR2 및/또는 L-CDR3 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, 제제는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH로부터 유래된 H-CDR1, H-CDR2 및/또는 H-CDR3 서열, 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 갖는 VL로부터 유래된 L-CDR1, L-CDR2 및/또는 L-CDR3 서열을 포함한다. SEQ ID NO: 22의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 23의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체는 NKG2A의 저해 활성을 중화하며, 또한 활성화 수용체 NKG2C, NKG2E 또는 NKG2H에 결합한다. 상기 항체는 세포 표면 상에서 NKG2A로의 결합에 대해 HLA-E와 경쟁하지 않는다(즉, 이는 NKG2A의 비경쟁적 길항제임).
Figure pct00016
하나의 양태에서, 제제는 가변-중쇄(VH) 도메인(SEQ ID NO: 22의 아미노산 잔기 31 내지 35, 50 내지 60, 62, 64, 66, 및 99 내지 108 및 가변-경쇄(VL) 도메인(SEQ ID NO: 23)의 아미노산 잔기 24 내지 33, 49 내지 55, 및 88 내지 96을 포함하며, 선택적으로 1개, 2개, 3개, 또는 4개 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 하나의 양태에서, 제제는 인간화 항체, 예를 들어 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 PCT 공개 번호 WO2009/092805에 개시된 바와 같은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제제이다.
하나의 양태에서, 제제는 임의의 상기 언급된 항체가 결합하는 CD94/NKG2A 에피토프에 대해 유도된 완전 인간 항체이다.
상기 언급된 항체가 사용될 수 있지만, 항체가 NKG2A의 저해 활성의 중화를 유도하는 한, 다른 항체가 NKG2A 폴리펩타이드의 임의의 부분을 인식하고 이에 대해 유도될 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, NKG2A, 바람직하게는 비배타적으로 인간 NKG2A의 임의의 단편, 또는 NKG2A 단편의 임의의 조합이 항체를 유도하기 위한 면역원으로서 사용될 수 있고, 항체는 이들이 본원에 기재된 바와 같이 NKG2A 발현 NK 세포 상에서 그렇게 할 수 있는 한, NKG2A 폴리펩타이드 내의 임의의 위치에서의 에피토프를 인식할 수 있다. 선택적으로, 에피토프는 SEQ ID NO: 4 내지 8의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체에 의해 특이적으로 인식되는 에피토프이다.
하나의 양태에서, 제제는 인간 CD94/NKG2A 수용체의 세포외 부분에 대한 결합에서 미국 특허 제8,206,709호(그 개시가 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 humZ270 항체와 경쟁한다. 경쟁적 결합은, 예를 들어 BiaCore 실험에서 측정될 수 있고, 여기서 humZ270으로 포화된 고정화된 CD94/NKG2A 수용체(예로 CD94/NKG2 발현 세포로부터 정제되거나 바이오-시스템에서 생산됨)의 세포외 부분의 결합에 대한 제제의 능력이 측정된다. 대안적으로, CD94/NKG2A 수용체를 천연 발현하거나 과발현하며(예로, 일시적 또는 안정적인 전달감염 후) 포화 용량의 Z270과 사전-인큐베이션된 세포에 대한 제제의 결합이 측정된다. 하나의 구현예에서, 경쟁적 결합은 미국 특허 제8,206,709호에 개시된 방법을 사용하여, 예를 들어 그 개시가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,206,709호의 실시예 15에 기재된 바와 같이 유세포측정에 의해 Ba/F3-CD94-NKG2A 세포에 대한 결합을 평가하여 측정될 수 있다.
PD-1 중화 제제
본원에서 사용되는 용어 "PD-1"은 또한 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA를 포함하는, 수용체의 CD28 패밀리의 저해 구성원인 단백질 PD-1(Programmed Death 1)("Programmed Cell Death 1"로도 언급됨)을 나타낸다. 전체 인간 PD-1 서열은 하기에 나타낸 바와 같이, GenBank 접근 번호 U64863 하에 확인될 수 있다:
Figure pct00017
"PD-1"에는 또한 PD-1 유전자 또는 인코딩된 단백질의 임의의 변이체, 유도체, 또는 이소형이 포함된다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포, 및 골수 세포 상에서 발현된다(Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). 패밀리의 초기 구성원인 CD28 및 ICOS는 모노클로날 항체의 첨가 후 T 세포 증식의 증대에 대한 기능적 효과에 의해 발견되었다(Hutloff et al. (1999) Nature 397:263-266; Hansen et al. (1980) Immunogenics 10:247-260). PD-1에 대한 2개의 리간드, PD-L1 및 PD-L2가 확인되었고, 이는 PD-1에 대한 결합 시 T 세포 활성화를 하향조절하는 것으로 나타났다(Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1 및 PD-L2 둘 모두는, PD-1에는 결합하지만 다른 CD28 패밀리 구성원에는 결합하지 않는 B7 상동체이다.
전체 인간 PD-L1 서열은 하기에 나타낸 바와 같이, UniProtKB/Swiss-Prot, 식별자 Q9NZQ7-1 하에 확인될 수 있다:
Figure pct00018
PD-L1은 다양한 인간 암에서 풍부하다(Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). PD-1과 PD-L1 간 상호작용은 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개 증식의 감소, 및 암성 세포에 의한 면역 회피를 일으킨다(Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). 면역 억제는 PD-1과 PD-L1의 국소 상호작용을 저해하여 역전될 수 있고, 효과는 PD-1과 PD-L2의 상호작용이 또한 차단되는 경우 추가적이다.
PD-1 중화 제제는, PD-1을 중화하거나 인간 PD-1의 저해 활성을 감소시키는 제제이다. 본 발명의 맥락에서, "인간 PD-1의 저해 활성을 감소시킨다", "PD-1을 중화한다" 또는 "인간 PD-1의 저해 활성을 중화한다"는 PD-1과 하나 이상의 그 결합 파트너, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2의 상호작용으로 일어나는 그 신호 전달능에 있어서 PD-1이 저해되는 과정을 나타낸다. PD-1의 저해 활성을 중화하는 제제는 PD-1과 하나 이상의 그 결합 파트너, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2의 상호작용으로 일어나는 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 저해하거나, 폐지하거나, 방해한다. 이에 따라 이러한 제제는 T-세포 효과기 기능, 예컨대 증식, 사이토카인 생성 및/또는 세포독성을 증강시키기 위해, T 림프구 상에 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성적 공동-자극 신호를 감소시킬 수 있다. PD-1 중화 제제는 PD-1 및/또는 하나 이상의 그 결합 파트너, 예로 PD-L1 및 PD-L2와 상호작용할 수 있다.
일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 PD-L1의 PD-1로의 결합을 저해하는 항-PD-L1 모노클로날 항체이다. 일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 PD-1의 PD-L1로의 결합을 저해하는 항-PD-1 모노클로날 항체이다. 일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 면역부착소(예로, 불변 영역(예로, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역부착소이다.
일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 항체 YW243.55.S70, MPDL3280A(아테졸리주맙, Tecentriq®), MDX-1105, 및 두르발루맙(MEDI4736, Imfinzi®)으로 구성된 군으로부터 선택된다. BMS-936559로도 공지된 MDX-1105는 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 항체이다. 항체 YW243.55.S70은 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-L1이다. 또한 본 발명의 방법에 유용한 항-PD-L1 항체의 예, 및 이의 제조 방법은 본원에 참조로 포함되는 WO 2010/077634 A1 및 미국 특허 제8,217,149호에 기재된다.
일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 두르발루맙인 PD-L1 항체이다. 두르발루맙(MEDI4736, Imfinzi™)은 PD-1 및 CD80 수용체 둘 모두에 대한 PD-L1의 결합을 차단할 수 있는 인간 PD-L1에 대해 유도된 인간 모노클로날 항체이다. 두르발루맙에 관한 개시는 본원에 참조로 포함되는, 미국 특허 제8,779,108호 및 제9,493,565호에서 확인될 수 있다. 두르발루맙은 각각 아미노산 서열 SEQ ID NO: 26 및 SEQ ID NO: 27의 중쇄 및 경쇄를 갖는다. 두르발루맙의 중쇄 가변 영역을 SEQ ID NO: 24에 나타내며 두르발루맙의 경쇄 가변 영역을 SEQ ID NO: 25에 나타낸다.
또 다른 구현예에서, PD-1 중화 제제는 PD-L1로의 결합에 대해 두르발루맙과 경쟁하는 항-PD-L1 항체(또는 이의 항원-결합 부분)이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 두르발루맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 소정 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 두르발루맙과 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는다.
하나의 양태에서, PD-1 중화 제제(예로 두르발루맙으로부터 유래된 제제)는 (i) SEQ ID NO: 24, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역, 및 (ii) SEQ ID NO: 25, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 양태에서, PD-1 중화 제제(예로 두르발루맙으로부터 유래된 제제)는 (i) SEQ ID NO: 26, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 중쇄, 및 (ii) SEQ ID NO: 27, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 경쇄를 포함한다. 하나의 양태에서, PD-1 중화 제제는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역으로부터 유래되는 H-CDR1, H-CDR2 및/또는 H-CDR3 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, PD-1 중화 제제는 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로부터 유래되는 L-CDR1, L-CDR2 및/또는 L-CDR3 서열을 포함한다. 선택적으로, CDR은 Kabat에 따라 결정된다.
하나의 양태에서, PD-1 중화 제제는 각각 SEQ ID NO: 28 내지 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 각각 SEQ ID NO: 31 내지 33의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 포함한다.
두르발루맙의 중쇄 가변 영역:
Figure pct00019
두르발루맙의 경쇄 가변 영역
Figure pct00020
두르발루맙의 중쇄(가변 영역은 밑줄침)
Figure pct00021
두르발루맙의 경쇄(가변 영역은 밑줄침)
Figure pct00022
두르발루맙, 중쇄 CDR:
Figure pct00023
두르발루맙, 경쇄 CDR:
Figure pct00024
또 다른 구현예에서, PD-1 중화 제제는 아테졸리주맙(MPDL3280A, Tecentriq®, CAS 등록 번호: 1422185-06-5)인 항-PD-L1 항체이다. 선택적으로, 항-PD-L1 항체는 하기 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역:
Figure pct00025
또는
Figure pct00026
및 하기 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다:
Figure pct00027
하나의 양태에서, PD-1 중화 제제는 (i) SEQ ID NO: 37, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역, 및 (ii) SEQ ID NO: 38, 또는 이와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
Figure pct00028
일부 구현예에서, PD-1 중화 제제는 PD-1의 PD-L1로의 결합을 저해하는 항-PD-1 항체이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙("OPDIVO®"로도 공지됨; 이전에 5C4, BMS-936558, MDX-1106, 또는 ONO-4538로 명명됨)은, PD-1 리간드(PD-L1 및 PD-L2)와의 상호작용을 선택적으로 방지하여 항종양 T-세포 기능의 하향조절을 차단하는 완전 인간 IgG4(S228P) PD-1 면역 체크포인트 저해제 항체이다(미국 특허 제8,008,449호; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56). 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체 또는 이의 단편은 PD-1로의 결합에 대해 니볼루맙과 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 소정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙과 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙("KEYTRUIDA®", 람브롤리주맙, 및 MK-3475로도 공지됨)은 인간 세포 표면 수용체 PD-1에 대해 유도된 인간화 모노클로날 IgG4 항체이다. 펨브롤리주맙은, 예를 들어, 미국 특허 제8,900,587호에 기재되어 있다). 펨브롤리주맙은 재발성 또는 난치성 흑색종 및 진행형 NSCLC의 치료를 위해 FDA에 의해 승인되었다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체(또는 이의 항원-결합 부분)는 PD-1로의 결합에 대해 펨브롤리주맙과 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 소정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙과 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는다.
NKG2A 중화 제제 또는 aPD-1 중화 제제, 예컨대 항체는 1 ㎎/㎖ 내지 500 ㎎/㎖의 농도로 약학 제형물에 포함될 수 있고, 여기서 상기 제형물은 2.0 내지 10.0의 pH를 갖는다. NKG2A 중화 제제 및 PD-1 중화 제제는 동일한 또는 별도의 약학 제형물에 포함될 수 있다. 제형물은 완충 시스템, 보존제(들), 등장화제(들), 킬레이트화제(들), 안정화제 및 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 약학 제형물은 수성 제형물, 즉 물을 포함하는 제형물이다. 이러한 제형물은 전형적으로 용액 또는 현탁액이다. 추가 구현예에서, 약학 제형물은 수용액이다. 용어 "수성 제형물"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 제형물로 정의된다. 마찬가지로, 용어 "수용액"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 용액으로 정의되며, 용어 "수성 현탁액"은 적어도 50%w/w 물을 포함하는 현탁액으로 정의된다.
또 다른 구현예에서, 약학 제형물은 냉동 건조 제형물이며, 사용 전에 의사 또는 환자가 용매 및/또는 희석제를 여기에 첨가한다.
또 다른 구현예에서, 약학 제형물은 임의의 사전 용해 없이 바로 사용할 수 있는 건조 제형물(예로 냉동-건조되거나 분무-건조됨)이다.
추가 양태에서, 약학 제형물은 이러한 항체의 수용액 및 완충액을 포함하며, 여기서 항체는 1 ㎎/㎖ 이상의 농도로 존재하며, 상기 제형물은 약 2.0 내지 약 10.0의 pH를 갖는다.
또 다른 구현예에서, 제형물의 pH는 약 2.0 내지 약 10.0, 약 3.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.5, 약 5.0 내지 약 8.0 및 약 5.5 내지 약 7.5로 구성된 목록으로부터 선택된 범위이다.
추가 구현예에서, 완충액은 아세트산 나트륨, 탄산 나트륨, 시트레이트, 글리실글리신, 히스티딘, 글리신, 라이신, 아르기닌, 인산 2수소 나트륨, 인산 수소 2나트륨, 인산 나트륨 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 바이신, 트리신, 말산, 숙시네이트, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아스파르트산 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 이들 특정한 완충액 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적 구현예를 구성한다.
추가 구현예에서, 제형물은 약제학적으로 허용 가능한 보존제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 등장화제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 또한 킬레이트화제를 포함한다. 본 발명의 추가 구현예에서, 제형물은 안정화제를 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 제형물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 편의성을 위해, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995]을 참조한다.
다른 성분이 본 발명의 약학 제형물에 존재할 수 있음이 가능하다. 이러한 추가 성분에는 수화제, 유화제, 항산화제, 증량제, 등장성 개질제, 킬레이트화제, 금속 이온, 유성 비히클, 단백질(예로, 인간 혈청 알부민, 젤라틴 또는 단백질) 및 쯔비터이온(예로, 아미노산, 예컨대 베타인, 타우린, 아르기닌, 글리신, 라이신 및 히스티딘)이 포함될 수 있다. 이러한 추가 성분은, 당연히 본 발명의 약학 제형물의 전반적 안정성에 부정적 영향을 미치지 않아야 한다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는, 몇몇 투여 경로, 예를 들어, 정맥내를 통할 수 있다. 적합한 항체 제형물은 또한 이미 개발된 다른 치료적 모노클로날 항체와의 경험을 조사하여 결정될 수 있다.
또한 키트, 예를 들어 하기가 포함되는 키트가 제공된다:
(i) NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체, 및 PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 약학 조성물, 또는
(ii) PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 제1 약학 조성물, 및 NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체를 함유하는 제2 약학 조성물, 또는
(iii) NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체를 함유하는 약학 조성물, 및 상기 NKG2A 중화 제제를 PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 투여하기 위한 지침, 또는
(iv) PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 약학 조성물, 및 상기 PD-1 중화 제제를 NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체와 투여하기 위한 지침.
약학 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것으로 특정될 수 있다. NKG2A 또는 PD-1 중화 제제는 선택적으로 본원에서의 임의의 방법에 사용하는 데 적합한 치료 유효량으로 존재하는 것으로 특정될 수 있다. 키트에는 선택적으로 예로 실시자(예로, 의사, 간호사, 또는 환자)가 그 내부에 함유된 조성물을 암(예로, 고형 종양, 특히 DNA 미스매치-복구 결함이 아니고/아니거나 2개 이상의 현미부수체 메이커에서 검출된 현미부수체 불안정성을 갖지 않는 종양)을 갖는 환자에게 투여할 수 있도록 하기 위한 투여 일정을 포함하는 지침이 또한 포함될 수 있다. 임의의 구현예에서, 키트에는 선택적으로 상기 NKG2A 중화 제제를 상기 PD-1 중화 제제와 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여하기 위한 지침이 포함될 수 있다. 키트에는 또한 시린지가 포함될 수 있다.
선택적으로, 키트에는 상기 제공된 방법에 따라 단회 투여를 위해, 각각 유효량의 NKG2A 중화 제제, 및/또는 PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 또는 PD-L1 항체를 함유하는 단회-용량 약학 조성물의 다중 패키지가 포함된다. 약학 조성물(들)을 투여하기 위해 필요한 기기 또는 장치가 또한 키트에 포함될 수 있다. 예를 들어, 키트는 일정량의 항-NKG2A, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 하나 이상의 사전-충전 시린지를 제공할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 인간 환자에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 키트를 제공하며, 여기서 상기 암 또는 종양은 MSI-H가 아니고/아니거나 DNA 미스매치 복구 결함이 아니고, 키트는 하기를 포함한다:
(a) 임의의 SEQ ID NO: 4 내지 8에 나타낸 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 9에 나타낸 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 포함하는 항-NKG2A 항체의 용량; 및/또는
(b) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 용량, 선택적으로 두르발루맙의 용량, 선택적으로 두르발루맙의 중쇄 및 경쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 선택적으로 SEQ ID NO: 24에 나타낸 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 25에 나타낸 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 포함하는 항-PD-L1 항체의 용량; 및
(c) 선택적으로, 본원에 기재된 임의의 방법에서 상기 항-NKG2A 항체 및/또는 상기 항-PD-1 또는 PD-L1 항체를 사용하기 위한 지침.
하나의 구현예에서, 본 발명은 인간 환자에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 키트를 제공하며, 여기서 상기 암 또는 종양은 MSI-H가 아니고/아니거나 DNA 미스매치 복구 결함이 아니고, 키트는 하기를 포함한다:
(a) SEQ ID NO: 16 내지 18의 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 19 내지 21의 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는 항-NKG2A 항체의 용량; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 28 내지 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 31 내지 33의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는 항-PD-L1 항체의 용량; 및
(c) 선택적으로, 본원에 기재된 임의의 방법에서 상기 항-NKG2A 항체 및/또는 상기 항-PD-1 또는 PD-L1 항체를 사용하기 위한 지침.
악성 종양의 진단, 예후, 및 치료
DNA 미스매치 복구 결함이 아니고/아니거나 현미부수체 안정형인 종양을 특징으로 하는 암, 특히 결장직장암, 선택적으로, 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암의 진단, 예후, 모니터링 및 치료에 유용한 방법이 기재된다. 본원에서 사용되는 결장직장암(CRC)은 결장암, 직장암, 및 결장직장암(결장 및 직장 영역 둘 모두의 암)을 나타낸다.
현미부수체는 게놈 전체에 걸쳐 분포된 DNA의 반복 서열이다. 이들 현미부수체의 길이는 사람에 따라 매우 가변적이지만, 각각의 개체는 세트 길이의 현미부수체를 갖는다. 이들 반복 서열은 일반적이며, 정상이다. 인간에서 가장 일반적인 현미부수체는 CA의 디뉴클레오타이드 반복이며, 이는 게놈에 걸쳐 수만 회 일어난다. 그러나 DNA 복구 유전자에 돌연변이를 갖는 세포에서, 이들 서열 중 일부는 오류를 축적하고 더 길어지거나 더 짧아진다. 개체의 DNA에서 비정상적으로 길거나 짧은 현미부수체의 출현은 현미부수체 불안정성(MSI)으로 언급된다. 현미부수체 불안정성은 손상된 DNA 미스매치 복구(MMR)로 인해 초래되는 유전적 과돌연변이성 상태이다. 현미부수체 불안정성(MSI)의 존재는 MMR이 정상 기능하지 않고 있다는 표현형 증거를 나타낸다. 현미부수체 불안정성의 부재는 현미부수체 안정성(MSS)으로 명명된다.
MSI는 결장직장암, 자궁내막암, 난소암 및 위암을 포함하는 몇몇 암에서의 핵심 인자이다(Soreide et al. (2006) The British Journal of Surgery 93:395-406; Ali-Fehmi et al. (2006) International Journal of Gynecological Pathology 25:223-229; Vauhkonen et al. (2006) Clinical Gastroenterology 20:651-674).
결장직장암 연구는 MSI 발생에 대한 2가지 기전을 실증하였다. 첫 번째는 유전성 비폴립 결장직장암(HNPCC) 또는 린치(Lynch) 증후군이며, 여기서 DNA 미스매치-복구 유전자에서의 선천성 돌연변이는 현미부수체 반복 복제 오류가 교정되지 않고 진행되도록 유도한다. 복제 오류는 주요 종양 억제인자 유전자를 불활성화하거나 변경하는 프레임변화 돌연변이, 및 궁극적으로 암의 방지를 일으킨다. MSI가 결장직장암을 유발하는 두 번째 기전은 필수 DNA 미스매치-복구 유전자를 침묵화하는 후생적 변화이다. 두 경우 모두에서, 종양 억제인자 유전자 코딩 영역 내의 현미부수체 삽입 및 결실은 제어되지 않는 세포 분열 및 종양 성장을 일으킨다.
미국 국립 암 연구소(National Cancer Institute)에 의해 HNPCC 종양에서 MSI에 대해 스크리닝하기 위한 5개의 마커가 권고되었다(종종 "베세다(Bethesda) 마커"로 불림). MSI 존재의 상기 5개의 마커는 2개의 모노뉴클레오타이드 반복 BAT25 및 BAT26, 및 3개의 디뉴클레오타이드 반복 D5S346, D2S123, 및 D17S250이다(Umar et al (2004) Journal of the National Cancer Institute 96:261-268). 일반적으로, 5개의 "베세다 마커" 중 2개에서의 MSI 검출은 MSI의 양성 결과 또는 높은 확률(고-MSI 또는 MSI-H)로 간주된다. 생물학적 샘플에서 MSI를 검출하는 표준 방법에는, 이의 민감성 및 특이성에 대해 선택된 5개의 모노뉴클레오타이드 마커가 포함되는 Promega™의 현미부수체 불안정성 검정(MSI 분석 시스템)의 사용이 포함되며, 이들 5개의 마커는 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 및 MONO27이다(Bacher et al. (2004) Disease Markers 20:237-250).
대부분의 경우에서, MSI 종양에서의 불안정성에 대한 유전적 근거는 5개의 인간 MMR 유전자: MSH2, MLH1, MSH6, PMS2, 및 PMS1 중 어느 하나 이상의 선천성 생식계열 변경이다.
선택된 테트라뉴클레오타이드 반복에서의 상승된 현미부수체 변경(EMAST)으로 불리는 또 다른 MSI가 최근에 발견되었다. 그러나, EMAST는 MMR로부터 유래되지 않는다는 점에서 독특하며, 일반적으로 TP53 돌연변이와 연관된다(Boland et al. (2010) Gastroenterology 138 (6): 2073-2087).
따라서, 종양에서의 현미부수체 불안정성은 현미부수체 마커 및/또는 MMR 유전자를 평가하여 결정될 수 있다.
소정 구현예에서, NKG2A-중화 제제와 PD-1 중화 제제의 조합으로 치료받는 개체는 불안정성(MSS)을 갖지 않고 임의의 MSH2, MLH1, MSH6 및 PMS2 유전자 또는 단백질(선택적으로 또한 PMS1)에서 변경(예로 돌연변이, 발현 결핍)을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명에는 (i) DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는 개체를 확인하는 단계, 및 (ii) 개체에 유효량의 NKG2A-중화 제제 및 유효량의 PD-1 중화 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 종양, 예로, 결장직장 종양을 치료하는 방법이 포함된다. 선택적으로 개체는, 현미부수체 불안정성을 갖지 않고(MSS 안정형이고) 임의의 MSH2, MLH1, MSH6 및 PMS2 유전자 또는 단백질에서 변경을 갖지 않는 종양을 갖는다.
종양의 DNA 미스매치 복구 상태, 선택적으로 개체에서의 MMR 상태 및/또는 현미부수체 상태는 본원에 개시된 임의의 조성물을 투여하거나 임의의 방법을 이용하기 전에 측정될 수 있다.
개체로부터의, 예를 들어 생검으로부터의 생물학적 샘플이 수득되고 평가될 수 있다. MMR 상태 및/또는 현미부수체 상태는 당분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있으며, 예로, 문헌[Umar et al. Journal of the National Cancer Institute 2004;96(4):261-268 및 Bacher et al. Disease Markers 2004; 20:237-250]을 참고한다. 하나의 구현예에서, MMR 상태는 하기 단백질: MLH1, MSH2, MSH6, 또는 PMS2 중 어느 하나 이상의 발현의 존재 또는 부재를 실증하는 면역조직화학 분석에 의해 평가된다. 하나의 구현예에서, 현미부수체 상태는 현미부수체 마커, 예를 들어 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, MONO27, D5S346, D2S123, 및 D17S250에서 고-빈도 현미부수체 불안정성을 검출하여 평가된다. 하나의 구현예에서, 2개 이상의 현미부수체 마커, 예를 들어 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및/또는 MONO27에 대해 검출된 현미부수체 불안정성은 MSI-H 상태를 시사하는 반면, 단일 MSI 마커에 대한 현미부수체 불안정성 또는 평가된 임의의 MSI 마커에 대한 불안정성의 부재는 각각 현미부수체 저-불안정성(MSI-L) 및 현미부수체 안정형(MSS)으로 해석된다.
하나의 구현예에서, DNA 미스매치 복구 결함이 아니거나 MSS인 종양은 현미부수체 불안정성을 갖지 않거나 2개 이상 미만의 현미부수체 마커, 예를 들어 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 또는 MONO27에서 검출된 현미부수체 불안정성을 가지며, 단백질 MLH1, MSH2, MSH6, 또는 PMS2 중 어느 하나 이상에서 단백질 발현 부재를 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명에는 (i) MSS 종양을 갖는 개체를 확인하는 단계 및 (ii) 개체에 유효량의 NKG2A-중화 제제를 투여하고, 선택적으로 개체에 유효량의 PD-1 중화 제제를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 종양, 예로 결장직장 종양을 치료하는 방법이 포함된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 (i) 고-MSI(MSI-H) 종양이 아닌 종양(예로 MSS 또는 저-MSI 종양)을 갖는 개체를 확인하는 단계 및 (ii) 개체에 유효량의 NKG2A-중화 제제를 투여하고, 선택적으로 개체에 유효량의 PD-1 중화 제제를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 종양, 예로, 결장직장 종양을 치료하는 방법을 제공한다.
하나의 구현예에서, MSI-H 종양은 적어도 약 30% 초과의 불안정형 MSI 마커를 갖는다. 하나의 구현예에서, MSI-L 종양은 불안정형 MSI 마커를 갖지만, 상기 종양의 약 10%, 미만, 약 20% 미만, 또는 약 30% 미만의 MSI 마커가 불안정형 MSI 마커이다. 하나의 구현예에서, MSS 종양은 불안정형 MSI 마커를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 결장직장암은 약 30% 미만, 약 20% 미만 또는 약 10% 미만의 평가된 MSI 마커가 불안정성을 나타내는 경우, MSI-L이다. 일부 구현예에서, 결장직장암은 평가된 MSI 마커가 불안정성을 나타내지 않는 경우, MSS이다.
소정 구현예에서, 본 발명은 MSI-L 또는 MSS인 암을 치료하는 방법에 대한 것이다.
소정 구현예에서, 본 발명은 1) 종양의 현미부수체 상태를 확인하는 단계 및 2) 현미부수체 상태에 기반하여 대상체에 치료법(예로 NKG2A-중화 제제 및 PD-1-중화 제제)을 시행하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법에 대한 것이다. 다른 구현예에서 대상체는 MSI-L을 갖는다. 구현예에서, 환자는 MSI 안정형이다.
DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는 개체를 치료하는 경우, 인간 NKG2A 폴리펩타이드의 저해 활성을 중화하는 화합물(예로 항체)은 유리하게는 본원에서 기재되는 치료 요법에 따라, 선택적으로 암 세포를 제거하기 위한 수술을 받았거나 받고 있는, 암을 갖는 개체에 투여될 수 있다. 암, 특히 CRC 및 mCRC를 앓는 대상체를 치료하기 위해 선택적으로 PD-1-중화 제제, 예로 중화 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 부재 하에 또는 선택적으로 이와의 조합으로 중화 항-NKG2A 항체. 하나의 구현예에서, 본 발명은 고형 종양(예로, 고형 종양, 진행형 난치성 고형 종양)을 갖는 대상체를 치료하기 위해 항-NKG2A 항체, 및 선택적으로 조합된 추가 항-PD-1 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 항-NKG2A 항체는 임의의 SEQ ID NO: 4 내지 8의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 9의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 구현예에서, PD-1의 저해 활성을 중화하는 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 두르발루맙 및 MPDL3280A로 구성된 군, 특히 두르발루맙으로부터 선택된다.
본원에서 사용되는 보조 또는 조합 투여(공동-투여)에는 동일하거나 상이한 투여형으로 화합물을 동시에 투여하거나, 화합물을 별도로 투여(예로, 순차적으로 투여)하는 것이 포함된다. 따라서, NKG2A-중화 제제는 PD-1-중화 제제와의 조합으로 사용된다. 예를 들어, 항-NKG2A 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 단일 제형물로 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로, NKG2A-중화 제제 및 PD-1-중화 제제는 별도 투여를 위해 제형화될 수 있고 동시적으로 또는 순차적으로 투여된다.
선택적으로, 개체는 치료제, 예로 화학치료제 또는 방사선치료법을 이용한 치료 및/또는 수술에도 불구하고(예로, 동안 또는 후에) 내성이고/이거나, 반응하지 않고/않거나, 재발하고/하거나 진행된 암을 가질 수 있다. 본원에서의 임의의 구현예에서, 치료 반응은 널리 공지된 기준, 예로 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST), 예컨대 버전 1.1(문헌[Eisenhauer et al. (2009) Eur. J. Cancer 45:228-247] 참고), 또는 면역-관련 반응 기준(irRC)(문헌[Wolchock et al. (2009) Clinical Cancer Research 15:7412-7420] 참고)에 따라 정의되고/되거나 평가될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 개시는 DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는 개체에서 CRC의 치료 또는 방지 방법을 제공하며, 이 방법은 하기를 포함한다:
a) DNA 미스매치-복구 결함이 아닌 종양을 갖는 개체를 확인하고, 선택적으로 개체로부터 종양 세포를 포함하는 생물학적 샘플을 수득하고 종양이 DNA 미스매치-복구 결함인지를 결정하는 단계,
b) 개체로부터의 샘플에서 PD-L1을 발현하는 세포(예로 종양 세포, 종양 침윤 면역 세포, 종양 침윤 대식구)를 검출하는 단계, 및
c) PD-L1을 발현하는 세포가 샘플에 포함되어 있다고 결정할 시, 개체에 PD-1의 저해 활성을 중화하는 제제와의 조합으로 NKG2A의 저해 활성을 중화하는 제제를 투여하는 단계. PD-L1 참조 수준은 임의의 적합한 통상적으로 사용되는 참조 수준을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 1% 이상, 선택적으로 5% 이상, 선택적으로 10% 이상, 선택적으로 50% 이상의 종양 세포, 또는 종양 조직 샘플로부터의 세포가 PD-L1을 발현하는 경우(예로 면역조직화학-기반 검정을 사용함). 이러한 검정의 예에는 Dako Denmark A/S의 pharmDx로부터의 PD-L1 IHC 22C3 검정이 포함된다. 이 검정에서, PD-L1 발현 수준은 PD-L1에 대한 종양 세포 염색 백분율(0% 내지 100%)인 종양 비율 스코어(TPS)를 이용하여 측정된다. 선택적으로, 참조 수준은 비-고 PD-L1 발현에 대한 수준이며, 선택적으로 여기서 50% 미만의 종양 세포가 PD-L1을 발현한다(예로, 환자가 50% 미만의 TPS를 가짐).
본원에 기재된 치료 요법 및 방법은 개체로부터 수득되는 생물학적 샘플(예로 암 세포, 암 조직 또는 암-인접 조직을 포함하는 생물학적 샘플)에서의 세포 상에서 발현 HLA-E를 검출하는 사전 단계와 함께, 또는 이러한 단계 없이 이용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원에서 개시된 방법으로 치료되는 암은 고수준의 HLA-E를 특징으로 하는 암이다. 그러나, 암을 갖는 환자가 종양 세포의 표면 상에서 HLA-E의 발현을 평가하는 사전 검출 단계와 함께, 또는 이러한 단계 없이 NKG2A 중화 제제로 치료받을 수 있음이 이해될 것이다. 유리하게는, 치료 방법은 개체로부터 종양의 생물학적 샘플에서(예로 종양 세포 상에서) HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 생물학적 샘플이 HLA-E를 발현한다(예컨대 뚜렷이 발현한다; 참조물에 비해, 항-HLA-E 항체로 고수준으로, 높은 염색 세기로 HLA-E를 발현한다)는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제를 사용하는 치료로부터 매우 큰 이익을 얻을 수 있는 암을 가짐을 시사한다. 하나의 구현예에서, 이 방법은 생물학적 샘플에서 HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드의 발현 수준을 결정하는 단계 및 이 수준을 건강한 개체에 대응하는 참조 수준(예컨대, 값, 약한 세포 표면 염색 등)과 비교하는 단계를 포함한다. 생물학적 샘플이 참조 수준에 비해 증가된 수준으로 HLA-E 핵산 또는 폴리펩타이드를 발현한다는 결정은 개체가 NKG2A를 저해하는 제제로 치료받을 수 있는 암을 가짐을 시사할 수 있다.
개체가 HLA-E 폴리펩타이드를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은, 예를 들어 암 세포를 포함하는 개체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계(예로 생검을 수행함으로써), 상기 세포를 HLA-E 폴리펩타이드에 결합하는 항체와 접촉시키는 단계 및 세포가 이들의 표면 상에 HLA-E를 발현하는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 개체가 HLA-E 폴리펩타이드를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은 면역조직화학 검정을 수행하는 단계를 포함한다. 선택적으로 개체가 HLA-E를 발현하는 암 세포를 갖는지 여부의 결정은 유세포측정 검정을 수행하는 단계를 포함한다.
치료 방법에서, NKG2A-중화 제제가 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와의 조합으로 투여되는 경우, NKG2A-중화 제제 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 별도로, 함께 또는 순차적으로, 또는 칵테일로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전에 투여된다. 예를 들어, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전 대략 0일 내지 30일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 전 약 30분 내지 약 2주, 약 30분 내지 약 1주, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 1일, 또는 약 1일 내지 5일에 투여된다. 일부 구현예에서, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후 대략 0일 내지 30일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, NKG2A-중화 제제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 투여 후 약 30분 내지 약 2주, 약 30분 내지 약 1주, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 1일 또는 약 1일 내지 5일에 투여된다.
항-NKG2A 항체로 인간을 치료하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, NKG2A를 저해하는 유효량의 항체를 환자에 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 이 방법은 적어도 1개 용량의 항-NKG2A 항체가 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다.
항-NKG2A 항체로 인간을 치료하기 위한 예시적인 치료 프로토콜에는, 예를 들어, NKG2A를 저해하는 항체 및 인간 PD-1의 저해 활성을 중화시키는 항체 각각의 유효량을 환자에 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 이 방법은 적어도 1개 용량의 항-NKG2A 항체가 0.1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏ 또는 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되고 적어도 1개 용량의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체가 1 ㎎/체중㎏ 내지 20 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다.
하나의 구현예에서, 방법은 적어도 1회 투여 사이클을 포함하며, 여기서 사이클은 8주 이하의 기간이고, 각각의 적어도 1회 사이클 동안, 항-NKG2A 항체의 2개, 3개 또는 4개 용량이 1 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 각각의 사이클은 1 ㎎/체중㎏ 내지 20 ㎎/체중㎏의 용량으로 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 2개, 3개 또는 4개 용량의 투여를 추가로 포함한다.
항-NKG2A 항체는 유리하게는 실질적으로 완전한(예컨대, 90%, 95%) 수용체 포화(예컨대, NKG2A-발현 세포 상에서, 예를 들어 PBMC에서 항-NKG2A 항체의 적정에 의해 평가됨)를 위해 요구되는 농도보다 적어도 10배, 20배 또는 30배 더 높은 순환 중 농도를 달성하는 양으로 또는 선택적으로 실질적으로 완전한 수용체 포화(예컨대, NKG2A-발현 세포 상에서, 예를 들어 PBMC에서 항-NKG2A 항체의 적정에 의해 평가됨)를 위해 요구되는 농도보다 적어도 10배, 20배 또는 30배 더 높은 혈관외 조직(예컨대 종양 조직 또는 환경) 내 농도를 달성하는 양으로 투여될 수 있다.
NKG2A+ NK 세포 반응은 HLA-E 발현 표적 세포를 향한 NKG2A-발현 NK 세포의 세포독성 활성의 적합한 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 예에는 NK 세포 활성화 마커, 예를 들어 CD107 또는 CD137 발현에 기반하는 검정이 포함된다. 유리하게는 적어도 10 ㎍/㎖의 연속(최소) 조직 농도를 달성하고/하거나 유지하기 위한 양의 항-NKG2A 항체가 투여될 수 있다. 예를 들어, 조직에서 10 ㎍/㎖을 달성하기/유지하기 위해 달성되고/되거나 유지될 혈액 농도는 100 ㎍/㎖ 내지 110 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 120 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 130 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 140 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 150 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 200 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖ 내지 250 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖ 내지 300 ㎍/㎖일 수 있다.
항-NKG2A 항체, 예컨대 NKG2A+ NK 세포 반응에 대해 약 10 ㎍/㎖의 EC100을 갖는 본원의 실시예에서 사용되는 humZ270(모날리주맙)에 대한 예시적인 치료 프로토콜은 항-NKG2A 항체의 적어도 1개 용량이 약 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 4 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 6 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 8 ㎎/체중㎏, 또는 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏의 용량으로 투여되는 적어도 1회 투여 사이클을 포함한다. 선택적으로, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개 용량의 항-NKG2A 항체가 투여된다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 2주 내지 8주이다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 8주이다. 하나의 구현예에서, 투여 사이클은 8주이며 2주마다 1개 용량의 항-NKG2A 항체의 투여(즉, 총 4개 용량)를 포함한다.
본원에서의 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 약 2주마다 1회 투여된다.
항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 예시적 치료 프로토콜에는, 예를 들어 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 연속 투여 간에 적어도 40 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속 혈액 농도를 유지하기 위해 효과적인 양으로 1개월 당 2회 항-NKG2A 항체를 환자에게 투여하는 단계가 포함되며, 2 ㎎/체중㎏ 내지 10 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/체중㎏ 내지 6 ㎎/체중㎏, 선택적으로 2 ㎎/㎏ 내지 4 ㎎/체중㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/체중㎏이다. 이들 용량은 치료 사이클 전체에 걸쳐 적어도 40 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속 혈액 농도를 제공하기 위해 선택적으로 투여될 수 있다. 40 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 혈액 농도 달성은 결과적으로 항체, 예컨대 인간화 Z270(모날리주맙)에 있어서 EC50에 대응하는, 약 4 ㎍/㎖의 조직(예로, 혈관외 조직, 종양 환경) 농도를 제공할 것으로 예상된다.
항-NKG2A 항체와 사용하기 위한 예시적 치료 프로토콜에는, 예를 들어 유효량의 항-NKG2A 항체를 환자에게 투여하는 단계가 포함되며, 여기서 항체는 1개월 당 2회 투여되며, 항-NKG2A 항체의 적어도 2회 연속 투여 간에 적어도 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속 혈액 농도를 유지하기 위해 효과적인 양은 4 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏, 선택적으로 4 ㎎/㎏ 내지 6 ㎎/㎏, 선택적으로 4 ㎎/㎏ 내지 8 ㎎/㎏, 선택적으로 약 4 ㎎/㎏, 선택적으로 약 6 ㎎/㎏, 선택적으로 약 8 ㎎/㎏, 또는 선택적으로 약 10 ㎎/㎏이다. 이들 용량은 치료 사이클 전체에 걸쳐 적어도 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 연속 혈액 농도를 제공하기 위해 선택적으로 투여될 수 있다. 100 ㎍/㎖의 항-NKG2A 항체의 혈액 농도 달성은 결과적으로 항체, 예컨대 인간화 Z270에 있어서 EC100에 대응하는, 약 10 ㎍/㎖의 조직(예로, 혈관외, 종양 환경) 농도를 제공할 것으로 예상된다.
소정 구현예에서, 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙)의 용량(예로 각각의 용량)은 0.1 ㎎/㎏, 0.3 ㎎/㎏, 1 ㎎/㎏, 3 ㎎/㎏, 4 ㎎/㎏, 6 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏으로 투여된다. 소정 구현예에서, 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙)의 용량(예로 각각의 용량)은, 선택적으로 2주마다 투여되는, 7.5 ㎎, 22.5 ㎎, 75 ㎎, 225 ㎎ 또는 750 ㎎의 고정 용량으로 투여된다. 소정 구현예에서, 항-PD-1 항체의 용량(예로 각각의 용량)은 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏, 선택적으로 10 ㎎/㎏으로 투여된다. 소정 구현예에서, 항-PD-L1 항체(예로 두르발루맙)의 용량(예로 각각의 용량)은 10 ㎎/㎏, 15 ㎎/㎏, 20 ㎎/㎏ 또는 25 ㎎/㎏으로, 선택적으로 750 ㎎의 총 용량으로, 선택적으로 1500 mg의 총 용량으로 선택적으로 4주마다 투여된다. 소정 구현예에서, 조합 치료법은 항-PD-1 또는 PD-L1 항체가 더 낮은 용량으로 투여될 수 있도록 허용한다.
하나의 구현예에서, 항-NKG2A 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 하기 용량으로 투여된다:
(a) 0.1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏ 항-NKG2A 항체 및 (i) 1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체 또는 (ii) 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체;
(b) 1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏ 항-NKG2A 항체 및 (i) 1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏의 항-PD-1 항체 또는 (ii) 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체;
(c) 225 ㎎ 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙) 및 750 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체(예로 두르발루맙);
(d) 750 ㎎ 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙) 및 750 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체(예로 두르발루맙);
(e) 225 ㎎ 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙) 및 1500 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체(예로 두르발루맙); 또는
(f) 750 ㎎ 항-NKG2A 항체(예로 모날리주맙) 및 1500 ㎎/㎏의 항-PD-L1 항체(예로 두르발루맙).
본원에서의 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-NKG2A 항체는 약 2주마다 1회, 선택적으로 4주마다 1회 투여된다. 본원에서의 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 약 4주마다 1회 투여된다.
하나의 구현예에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및/또는 항-NKG2A 항체는 i.v.에 의해 투여된다. 하나의 구현예에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 4주마다 투여되며 항-NKG2A 항체는 2주마다 투여되고, 여기서 4주마다 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및 NKG2A 항체는 동일한 날에, 선택적으로 또한 i.v.에 의해 투여된다.
하나의 구현예에서, 개체가 NKG2A를 저해하는 제제(및 선택적으로 또한 인간 PD-1의 저해 활성을 중화하는 제제)를 이용한 치료에 적합한지를 평가하는 방법이 제공되며, 이 방법은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 종양 DNA 미스매치 복구 상태를 평가하는 단계를 포함한다. 개체가 DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는다는 결정은 환자가, 선택적으로 또한 인간 PD-1의 저해 활성을 중화하는 제제와의 조합으로, NKG2A를 저해하는 제제로 치료될 수 있는 암을 가짐을 시사한다. 하나의 구현예에서, 이 방법은 개체가 본원에 개시되는 투여 요법에 따라 투여되는 NKG2A를 저해하는 제제 및 인간 PD-1의 저해 활성을 중화하는 제제를 이용한 치료에 적합한지를 평가하기 위해 사용된다.
또 다른 양태에서, 본 개시에 따른 투여량 및 빈도로 일정량의 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간 개체에서 암 진행 위험을 감소시키고/시키거나, CRC, 선택적으로 mCRC에서 추가 암 위험을 감소시키고/시키거나 암 진행을 감소시키기 위한 치료 요법을 제공하는 방법이 제공된다. 추가 양태에서, 개체에서 암 완화를 촉진하기 위해, 본 개시에 따른 투여량 및 빈도로 개체에 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체, 예컨대 인간 환자에서 암, 특히 결장직장암의 완화를 촉진하는 방법이 제공된다. 추가 양태에서, 개체에서 암 완화를 촉진하기 위해, 본 개시에 따른 투여량 및 빈도로 개체에 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체, 예컨대 인간 환자에서 암, 특히 결장직장암의 재발을 방지하는 방법이 제공되며, 그 암은 전술한 항암 치료 후 완화 상태에 있다. 추가 양태에서, 환자에 NKG2A-중화 제제 및 PD-1-중화 제제를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암, 특히 결장직장암으로 진단받은 인간 환자에서 관련 기간에 걸쳐 생존 가능성을 증가시키는 방법이 제공된다. 또 다른 양태에서, 환자에게 그의 삶의 질을 개선하기 위한 유효량으로 NKG2A-중화 제제 및 PD-1 중화 제제를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암 환자의 삶의 질을 개선하는 방법이 제공된다. 추가 양태에서, 본원에서 기재된 방법은, 예를 들어 암 세포의 총 수가 감소되도록, 인간에서 암 세포의 수를 유의미하게 감소시키기 위해 적용될 수 있다. 관련된 맥락에서, 포유류, 예컨대 인간 암 환자에서의 암 세포, 특히 결장직장암 세포를 (예로 직접적으로 또는 간접적으로 이의 사멸을 유도하여) 사멸시키는 방법이 제공된다. 본원에 기재된 방법의 또 다른 구현예에서, 상기 개체는 고-MSI(MSI-H)가 아니고/아니거나 DNA 미스매치 복구(MMR) 결함이 아닌 종양을 갖는다.
PD-1 중화 제제와 조합된 NKG2A-중화 제제는 하나 이상의 추가 치료제 또는 치료법과의 조합 투여(공동-투여)로 투여될 수 있다.
실시예
실시예 1: 용량 확인은 모날리주맙과 조합된 두르발루맙의 1상 다기관, 공개-표지, 단일-아암 용량-증량 및 용량-확장 연구임
모날리주맙과 조합된 두르발루맙의 1상, 다기관, 공개-표지, 단일-아암 용량-증량 및 용량-확장 연구(WHO Drug Information Vol. 30, No. 1, 2016 참고; 또한 IPH2201로 언급됨; SEQ ID NO: 11의 중쇄 및 SEQ ID NO: 15의 경쇄를 갖는 항체)를 수행하여, 선택된 진행형 고형 종양을 갖는 성인 대상체에서 안전성, 관용성, PK, 면역원성, 약력학, 및 항종양 활성을 평가하였다. 연구는 2개의 파트: 용량 증량 및 용량 확장으로 구성되었다.
대상체는 2회의 별도 IV 주입을 통해 두르발루맙 및 모날리주맙을 제공받았다. 대상체는 허용 불가능한 독성, 확인된 진행성 질병(PD) 보고, 또는 또 다른 사유로 인한 대상체 탈락(subject withdrawal) 보고 전까지 두르발루맙 및 모날리주맙을 제공받았다.
포함 기준에는 하기가 포함되었다:
1. 대상체는 진행형 재발성 또는 전이성 암의 조직학적 보고를 가져야 한다.
2. 대상체는 선택된 진행형 고형 종양을 가지며, 재발성/전이성 환경에서 적어도 하나의 라인의 표준 전신 치료법을 제공받았고 진행하였거나, 또는 이에 대해 난치성이어야 한다.
3. 대상체는 RECIST v1.1에 의해 측정 가능한 적어도 하나의 병소를 가져야 한다.
제외 기준은 하기와 같았다:"
1. 면역치료법 제제를 이용한 사전 치료. 항종양 백신을 이용한 사전 치료는 논의 시 의학적 모니터링과 함께 허용될 수 있다.
2. 두르발루맙이 단독으로 또는 조합으로 포함되는 임상 연구에 사전 참여(여기서 이 연구는 등록 목적(registrational intent)을 가지며, 일차 종결점에 대한 분석은 아직 완료되지 않음)
3. 최초 용량의 두르발루맙 및 모날리주맙 전 4주 이내에 임의의 통상적 또는 연구 항암 치료법 수령
4. 암 치료를 위한 임의의 동시적 화학치료법, 면역치료법, 생물학적 또는 호르몬 치료법. 암-비관련 질환에 대한 호르몬의 동시적 사용은 허용 가능하다. 완화 목적을 갖는 단리된 병소의 국소 치료는 사전 상의 및 의학적 모니터링에 대한 동의와 함께 DLT-평가 기간 이후 허용 가능하다.
5. 최초 용량 전 14일 이내에 면역억제 약제의 동시적 또는 사전 사용.
순차적 코호트의 대상체는 4개의 계획된 용량 수준 중 하나(2주마다(Q2W) 22.5 ㎎, 75 ㎎, 225 ㎎, 또는 750 ㎎)의 모날리주맙과의 조합으로 두르발루맙(4주마다(Q4W) 1500 ㎎)을 제공받았다.
증량된 모날리주맙과 두르발루맙으로 치료받은 15명의 환자에 있어서, 중단을 야기한 치료-관련 유해 사례(TRAE), 3/4등급 TRAE, DLT, 및 사망은 없었고; MTD에는 도달하지 않았다. 12명의 환자(80%)에서 임의의 등급의 TRAE가 관찰되었다; 가장 빈번한 것은 설사였다(n=4). 확장된 40명 환자에서의 안전성은 증량에서와 유사하였다: 19명의 환자(48%)가 임의의 등급의 TRAE를 가졌고, 1명의 환자는 3/4등급 TRAE(패혈증)를 가졌다. 조합된 두 약물의 PK는 상호작용을 나타내지 않았다. 모날리주맙 PK는 최고 용량 수준에서 직선성(linearity)에 근접하였고, 이에 따라 확장을 위해 선택되었다.
시험의 용량-증량 파트의 말기에, 최대 관용 용량(MTD)에 도달하지 않았고, 모날리주맙(750 ㎎ Q2W) 및 두르발루맙(1500 ㎎ Q4W)의 코호트 4 투여는 용량 증량 위원회(DEC)에 의해 안전한 것으로 간주되었다. 이어서 이들 용량을 현재 진행 중인 연구의 용량 확장 파트에 채용한다. 최초 용량 수준에서 허용 불가능한 독성에 직면하는 경우, 두르발루맙 1500 ㎎ Q4W 및 모날리주맙 7.5 ㎎ Q2W 용량을 사용하여 용량 탈-증량 코호트를 시행할 것이다.
실시예 2: I상 임상 연구의 CRC 용량 확장 파트에서 모날리주맙 및 두르발루맙으로 치료받은 MSS 결장직장암 환자에서의 반응
1상 연구의 용량-확장 파트는 현재 치료법으로 적절히 치료되지 않는 암에 대응하는 4개 코호트에 환자를 모집하는 것을 목표로 한다. 코호트 중 하나에 재발성 또는 전이성 MSS-CRC 대상체가 포함되었다. MSS-CRC 코호트에서, 모든 대상체는 스크리닝 동안 돌연변이 평가를 보고하고 등록을 위해 질병 평가로부터 종양 위치를 확인해야 했으며, CRC 암은 평가에 의해 보고된 바와 같이, 결함 DNA 미스매치 복구(현미부수체 불안정성)를 갖지 않아야 한다.
결함 DNA 미스매치 복구는 (i) 현미부수체 마커(BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 또는 MONO-27)의 2개 이상의 패널에서 검출된 변화를 갖는 고-빈도 현미부수체 불안정성, 또는 (ii) 하기 단백질: MLH1, MSH2, MSH6, 또는 PMS2 중 어느 하나 이상의 단백질 발현의 부재를 실증하는 면역조직화학 분석 중 어느 하나에 의해 정의되었다.
대상체 코호트는 2주마다(Q2W) 모날리주맙 750 ㎎과의 조합으로 두르발루맙(4주마다(Q4W) 1500 ㎎)을 제공받았다.
결과는 MSS-CRC 확장 코호트(환자의 58%는 적어도 3 라인의 사전 치료법을 제공받았음, 유효성에 대해 평가 가능한 n=37)에서, 3명의 확인된 부분 반응(PR)(반응이 부분 반응으로부터 확인되지 않은 완전 반응까지 개선된 1명의 환자 포함), 및 200일 초과 동안 치료법을 계속하여 종양이 감소된 3명의 환자를 포함하는 11명의 안정형 질병(SD)이 있음을 나타내었다. 16주차의 질병 제어율(DCR)은 24%였다.
MSS-CRC 확장 코호트에서의 치료 기간 및 기준선으로부터의 종양 크기 변화 퍼센트를 도 1에 나타낸다.
상술된 CRC에서 모날리주맙 및 두르발루맙에 대한 I상 임상 연구의 용량 확장 파트의 업데이트는 하기 결과를 나타낸다.
대상체 코호트는 2주마다(Q2W) 모날리주맙 750 ㎎과의 조합으로 두르발루맙(4주마다(Q4W) 1500 ㎎)을 제공받았다.
결과는 MSS-CRC 확장 코호트(환자의 60%는 적어도 3 라인의 사전 치료법을 제공받았음, 유효성에 대해 평가 가능한 n=39)에서, 1명의 확인된 완전 반응, 2명의 확인된 부분 반응(PR) 및 11명의 안정형 질병(SD)이 있음을 나타내었다(표 1 및 표 2).
[표 1]
사전 항암 치료 - 치료 대상 집단(as treated population)
Figure pct00029
Figure pct00030
[표 2]
반응을 평가 가능한 집단에서의 질병 반응
Figure pct00031
16주차의 질병 제어율(DCR)은 31%였고 24주차에는 18%였다(표 3).
[표 3]
반응을 평가 가능한 집단에서의 질병 반응
Figure pct00032
Figure pct00033
지금까지 수득된 중앙값 OS는 고무적이게도 10.6개월이며, 이는 유사한 집단에서 5.7개월의 Lonsurf/TAS-102 중앙값 OS(Mayer et al, 2015, N. Engl. J. Med. 372:1909-1919) 또는 6.4개월의 레고라페닙(regorafenib) 보고 중앙값 OS(Grothey et al, Lancet 2013, 381(9863): 303-312)에 비해 나은 것이다.
상기 MSS-CRC 확장 코호트에서의 치료 기간 및 기준선으로부터의 종양 크기 변화 퍼센트를 도 1에 비해 더 긴 기간에 대해 도 2에 나타낸다.
결론적으로, 상기 인간 대상 임상 최초로 모날리주맙과 두르발루맙 조합의 용량 증량이 완료되었고, 관리 가능한 독성 프로필을 실증하였다. 데이터는 모날리주맙과 두르발루맙의 조합이 PD-1/PD-L1 차단에 대해 비반응성 이력을 갖는 집단인 MSS-CRC를 갖는 환자들에게 개선된 이익을 가져다줄 수 있음을 시사한다.
본원에서 인용된 공보, 특허 출원 및 특허를 포함하는 모든 참고문헌은 이들의 전문이 본원에 참조로 포함되고, 그리고 본원에서 다른 곳에서 수행된 특정 문헌에 대한 임의의 별도로 제공된 포함과 무관하게 각각의 참고문헌이 참조로 포함됨을 개별적이고 구체적으로 나타낸 것과 동일한 정도로 및 본원에 그 전문(법에서 허용되는 최대 정도까지)을 나타낸 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에서 제공되는 모든 정확한 값은 대응하는 근사값을 나타낸다(예로, 특정한 인자 또는 측정치에 대해 제공되는 모든 정확한 예시 값은 적절한 경우, "약"에 의해 수식되는, 대응하는 근사 측정치를 또한 제공하는 것으로 간주될 수 있다). "약"이 수치와 연계되어 사용되는 경우, 이는 명시된 수치의 ±10%에 대응하는 값을 포함하는 것으로 명시될 수 있다.
요소 또는 요소들에 대해 "포함하는", "갖는", "포함되는" 또는 "함유하는"과 같은 용어를 사용하는 본 발명의 임의의 양태 또는 구현예의 본원에서의 기재는 달리 언급되거나 문맥 상 명확히 금기되지 않는 한, 특정 요소 또는 요소들"로 구성되는", "로 본질적으로 구성되는" 또는 "을 실질적으로 포함하는" 본 발명의 유사한 양태 또는 구현예에 대한 뒷받침을 제공하려는 것이다(예로, 특정 요소를 포함하는 것으로 본원에 기재된 조성물은 달리 나타내거나 문맥 상 명확히 금기되지 않는 한, 해당 요소로 구성되는 조성물을 또한 기재하는 것으로 이해되어야 한다).
본원에서 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적 언어(예로, "예컨대")의 사용은 단순히 본 발명을 더 잘 예시하기 위한 것이며, 달리 청구되지 않는 한, 본 발명의 범위에 제한을 부과하지 않는다. 명세서에서의 어떤 말도 임의의 청구되지 않은 요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 시사하는 것으로 간주되어서는 안 된다.
SEQUENCE LISTING <110> MedImmune Ltd Innate Pharma <120> TREATMENT OF CANCER <130> NKG2A-114-WO-PCT <150> US 62/671,521 <151> 2018-05-15 <160> 38 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asp Asn Gln Gly Val Ile Tyr Ser Asp Leu Asn Leu Pro Pro Asn 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Leu 20 25 30 Ala Thr Glu Gln Glu Ile Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gln Lys Ala 35 40 45 Ser Gln Asp Phe Gln Gly Asn Asp Lys Thr Tyr His Cys Lys Asp Leu 50 55 60 Pro Ser Ala Pro Glu Lys Leu Ile Val Gly Ile Leu Gly Ile Ile Cys 65 70 75 80 Leu Ile Leu Met Ala Ser Val Val Thr Ile Val Val Ile Pro Ser Thr 85 90 95 Leu Ile Gln Arg His Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg Thr Gln Lys 100 105 110 Ala Arg His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn 115 120 125 Ser Cys Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu 130 135 140 Leu Ala Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu 145 150 155 160 Glu Glu Met Lys Phe Leu Ser Ile Ile Ser Pro Ser Ser Trp Ile Gly 165 170 175 Val Phe Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Met Asn Gly Leu 180 185 190 Ala Phe Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys 195 200 205 Ala Val Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser 210 215 220 Ile Ile Tyr His Cys Lys His Lys Leu 225 230 <210> 2 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Phe Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 165 170 175 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 180 185 190 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 195 200 205 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 210 215 220 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 225 230 235 240 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 245 250 255 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 260 265 270 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 275 280 285 <210> 3 <211> 290 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu 1 5 10 15 Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr 20 25 30 Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu 35 40 45 Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile 50 55 60 Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser 65 70 75 80 Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn 85 90 95 Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr 100 105 110 Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val 115 120 125 Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val 130 135 140 Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr 145 150 155 160 Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser 165 170 175 Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn 180 185 190 Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr 195 200 205 Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu 210 215 220 Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His 225 230 235 240 Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr 245 250 255 Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys 260 265 270 Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu 275 280 285 Glu Thr 290 <210> 4 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH6 <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 5 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH1 <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 6 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH5 <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 7 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH7 <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 8 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH8 <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 10 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH6 heavy chain <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 11 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH1 heavy chain <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 12 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH5 heavy chain <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 13 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH7 heavy chain <400> 13 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 14 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH8 heavy chain <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR1 <400> 16 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR2 <400> 17 Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR3 <400> 18 Gly Gly Tyr Asp Phe Asp Val Gly Thr Leu Tyr Trp Phe Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR1 <400> 19 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR2 <400> 20 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR3 <400> 21 Gln His His Tyr Gly Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 22 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Ile Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg His Gly Asp Tyr Pro Arg Phe Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region <400> 23 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region of Durvalumab <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 25 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region of Durvalumab <400> 25 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 26 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Durvalumab <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 27 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of Durvalumab <400> 27 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR1 <400> 28 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR2 <400> 29 Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-CDR3 <400> 30 Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR1 <400> 31 Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR2 <400> 32 Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-CDR3 <400> 33 Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 34 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 <210> 36 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region <400> 36 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 37 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain <400> 37 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 38 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain <400> 38 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (46)

  1. 암의 치료 및/또는 항-종양 면역 반응의 유발을 필요로 하는 개체에서 암을 치료하고/하거나 항-종양 면역 반응을 유발하는 방법으로서, 상기 개체에 치료 유효량의 NKG2A 중화 제제 및 치료 유효량의 PD-1 중화 제제를 투여하는 단계를 포함하며, 상기 개체는 고-MSI(MSI-H)가 아니고/아니거나 DNA 미스매치 복구(MMR) 결함이 아닌 종양을 갖는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 개체는 2개 이상의 현미부수체 마커에서 검출된 현미부수체(microsatellite) 불안정성을 갖지 않는 종양을 갖고, 선택적으로 상기 개체는 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및 MONO27로 구성된 군으로부터 선택된 현미부수체 마커 중 2개 이상에서 검출된 변경을 갖지 않는 종양을 갖는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 개체는 DNA 미스매치 복구(MMR) 단백질의 발현 변경을 갖지 않는 종양을 갖고, 선택적으로 상기 개체는 MSH2, MLH1, MSH6 및 PMS2로부터 선택된 적어도 하나의 MMR 단백질의 발현의 감소 또는 부재를 갖지 않는 종양을 갖는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 현미부수체 안정형(MSS)인 종양을 갖는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 결장직장암, 결장암 및 직장암으로 구성된 군으로부터 선택된 암을 갖는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 결장직장암, 선택적으로 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암을 갖는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 MSS-결장직장암(MSS-CRC)을 갖는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은
    a) 상기 개체가 MSI-H 및/또는 DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는지를 결정하고, 선택적으로 상기 개체가 2개 이상의 현미부수체 마커에서 검출된 현미부수체 불안정성을 갖지 않는 종양을 갖는지를 결정하는 예비 단계로서, 선택적으로 상기 개체는 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및 MONO27로 구성된 군으로부터 선택된 현미부수체 마커 중 2개 이상에서 검출된 변경을 갖지 않는 종양을 갖는, 예비 단계; 및/또는
    b) 상기 개체가 DNA 미스매치 복구(MMR) 단백질의 발현 변경을 갖지 않는 종양을 갖는지, 선택적으로 상기 개체가 MSH2, MLH1, MSH6, 및 PMS2로부터 선택된 적어도 하나의 MMR 단백질의 발현의 감소 또는 부재를 갖지 않는 종양을 갖는지를 결정하는 예비 단계
    를 포함하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 인간 NKG2A 단백질에 결합하는 항체, 선택적으로 인간화 또는 인간 항-NKG2A 항체인, 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 NKG2A의 HLA-E로의 결합을 저해하는 항체인, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 SEQ ID NO: 16 내지 18의 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 19 내지 21의 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 모날리주맙인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 항체인, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 인간 PD-1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이며, 선택적으로 상기 PD-1 중화 제제는 인간 항-PD-1 항체인, 방법.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 인간 PD-L1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이며, 선택적으로 상기 PD-1 중화 제제는 인간 항-PD-L1 항체인, 방법.
  16. 제1항 내지 제13항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 SEQ ID NO: 28 내지 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 31 내지 33의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제13항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 두르발루맙인, 방법.
  18. 제1항 내지 제13항 및 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 모날리주맙이며 상기 PD-1 중화 제제는 두르발루맙인, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제 및 상기 PD-1 중화 제제는 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여되는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제 및 상기 PD-1 중화 제제는 별도 투여를 위해 제형화되며 동시적으로 또는 순차적으로 투여되는, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 0.1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 투여되며 상기 PD-1 중화 제제는 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 투여되고, 선택적으로 상기 NKG2A 중화 제제는 10 ㎎/㎏의 용량으로 투여되고 상기 PD-1 중화 제제는 20 ㎎/㎏의 용량으로 투여되고, 선택적으로 상기 NKG2A 중화 제제는 2주마다 750 ㎎의 고정 용량으로 투여되는 모날리주맙이고 상기 PD-1 중화 제제는 4주마다 1500 ㎎/㎏의 고정 용량으로 투여되는 두르발루맙인, 방법.
  22. MSS-CRC 환자의 종양에 대한 항-종양 활성을 증가시키기 위한 키트로서,
    (i) NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체, 및 PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 약학 조성물, 또는
    (ii) PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 제1 약학 조성물, 및 NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체를 함유하는 제1 약학 조성물, 또는
    (iii) NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체를 함유하는 약학 조성물, 및 상기 NKG2A 중화 제제를 PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 투여하기 위한 지침, 또는
    (iv) PD-1 중화 제제, 예컨대 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 함유하는 약학 조성물, 및 상기 PD-1 중화 제제를 NKG2A 중화 제제, 예컨대 항-NKG2A 항체와 투여하기 위한 지침을 포함하고,
    MSS-CRC의 치료를 필요로 하는 환자에서 MSS-CRC의 치료에 사용하는 데 적합한 키트.
  23. 제22항에 있어서, 상기 키트는 MSS-CRC의 치료에 사용하기 위한 지침을 추가로 포함하는, 키트.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 모날리주맙이며 상기 PD-1 중화 제제는 두르발루맙인, 키트.
  25. 암을 갖는 인간 개체를 치료하는 데 사용하기 위한 NKG2A 중화 제제로서, 개체는 MSI-H가 아니고/아니거나 DNA 미스매치-복구(MMR) 결함이 아닌 종양을 갖고, 상기 NKG2A 중화 제제는 PD-1 중화 제제와의 조합으로 투여되는, NKG2A 중화 제제.
  26. 암을 갖는 인간 개체를 치료하는 데 사용하기 위한 PD-1 중화 제제로서, 개체는 MSI-H가 아니고/아니거나 DNA 미스매치-복구(MMR) 결함이 아닌 종양을 갖고, 상기 PD-1 중화 제제는 NKG2A 중화 제제와의 조합으로 투여되는, PD-1 중화 제제.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 개체는 2개 이상의 현미부수체 마커에서 검출된 현미부수체 불안정성을 갖지 않는 종양을 갖고, 선택적으로 상기 개체는 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및 MONO27로 구성된 군으로부터 선택된 현미부수체 마커 중 2개 이상에서 검출된 변경을 갖지 않는 종양을 갖는, 제제.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 DNA 미스매치 복구(MMR) 단백질의 발현 변경을 갖지 않는 종양을 갖고, 선택적으로 상기 개체는 MSH2, MLH1, MSH6, 및 PMS2로부터 선택된 적어도 하나의 MMR 단백질의 발현의 감소 또는 부재를 갖지 않는 종양을 갖는, 제제.
  29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 현미부수체 안정형(MSS)인 종양을 갖는, 제제.
  30. 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 결장직장암, 결장암 및 직장암으로 구성된 군으로부터 선택된 암을 갖는, 제제.
  31. 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 결장직장암, 선택적으로 진행형 재발성 또는 전이성 결장직장암을 갖는, 제제.
  32. 제25항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 MSS-결장직장암(MSS-CRC)을 갖는, 제제.
  33. 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는
    a) 상기 개체가 MSI-H 및/또는 DNA 미스매치 복구 결함이 아닌 종양을 갖는지를 결정하고, 선택적으로 상기 개체가 2개 이상의 현미부수체 마커에서 검출된 현미부수체 불안정성을 갖지 않는 종양을 갖는지를 결정하고/하거나(선택적으로 상기 개체는 BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, 및 MONO27로 구성된 군으로부터 선택된 현미부수체 마커 중 2개 이상에서 검출된 변경을 갖지 않는 종양을 가짐);
    b) 상기 개체가 DNA 미스매치 복구(MMR) 단백질의 발현 변경을 갖지 않는 종양을 갖는지를 결정하고, 선택적으로 상기 개체가 MSH2, MLH1, MSH6, 및 PMS2로부터 선택된 적어도 하나의 MMR 단백질의 발현의 감소 또는 부재를 갖지 않는 종양을 갖는지를 결정하는
    예비 단계를 거친, 제제.
  34. 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 인간화 또는 인간 NKG2A 단백질에 결합하는 항체, 선택적으로 인간 또는 인간화 항-NKG2A 항체인, 제제.
  35. 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 NKG2A의 HLA-E로의 결합을 저해하는 항체인, 제제.
  36. 제25항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 SEQ ID NO: 16 내지 18의 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 19 내지 21의 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 각각 포함하는, 제제.
  37. 제25항 내지 제34항 및 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 모날리주맙인, 제제.
  38. 제25항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 항체인, 제제.
  39. 제25항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 인간 PD-1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이며, 선택적으로 상기 PD-1 중화 제제는 인간 항-PD-1 항체인, 제제.
  40. 제25항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 인간 PD-L1 폴리펩타이드에 결합하는 항체이며, 선택적으로 상기 PD-1 중화 제제는 인간 항-PD-L1 항체인, 제제.
  41. 제25항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 SEQ ID NO: 28 내지 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 31 내지 33의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3 도메인을 포함하는, 제제.
  42. 제25항 내지 제39항 및 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-1 중화 제제는 두르발루맙인, 제제.
  43. 제25항 내지 제39항, 제41항 및 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 모날리주맙이며 상기 PD-1 중화 제제는 두르발루맙인, 제제.
  44. 제25항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제 및 상기 PD-1 중화 제제는 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여되는, 제제.
  45. 제25항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제 및 상기 PD-1 중화 제제는 별도 투여를 위해 제형화되며 동시적으로 또는 순차적으로 투여되는, 제제.
  46. 제25항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2A 중화 제제는 0.1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 투여되며 상기 PD-1 중화 제제는 1 ㎎/㎏ 내지 20 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 투여되고, 선택적으로 상기 NKG2A 중화 제제는 2주마다 750 ㎎의 고정 용량으로 투여되는 모날리주맙이고 상기 PD-1 중화 제제는 4주마다 1500 ㎎의 고정 용량으로 투여되는 두르발루맙인, 제제.
KR1020207035232A 2018-05-15 2019-05-14 암의 치료 KR20210010486A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862671521P 2018-05-15 2018-05-15
US62/671,521 2018-05-15
PCT/EP2019/062305 WO2019219658A1 (en) 2018-05-15 2019-05-14 Treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210010486A true KR20210010486A (ko) 2021-01-27

Family

ID=66752041

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207035232A KR20210010486A (ko) 2018-05-15 2019-05-14 암의 치료

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210253694A1 (ko)
EP (1) EP3793607A1 (ko)
JP (1) JP2021523170A (ko)
KR (1) KR20210010486A (ko)
CN (1) CN112203691A (ko)
AU (1) AU2019270277A1 (ko)
CA (1) CA3099820A1 (ko)
EA (1) EA202092696A1 (ko)
MA (1) MA52627A (ko)
SG (1) SG11202011117VA (ko)
TW (1) TW202011989A (ko)
WO (1) WO2019219658A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200133233A (ko) 2018-03-13 2020-11-26 이나뜨 파르마 두부경부암의 치료
WO2021219048A1 (zh) * 2020-04-30 2021-11-04 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种靶向nkg2a和pd-l1的双特异性抗体及应用
EP4150058A4 (en) * 2020-05-13 2024-06-19 Nanjing Legend Biotech Co Ltd COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING HOST REJECTION OF ALLOGENIC CELLS USING SIMIEN ICP47 AND ITS VARIANTS
CN117730094A (zh) * 2021-07-16 2024-03-19 克莱格医学有限公司 用于肿瘤免疫学的组合物和方法
AU2022361653A1 (en) * 2021-10-04 2024-05-02 Les Laboratoires Servier Cancer therapy targeting nkg2a

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
DE60334453D1 (de) 2002-05-30 2010-11-18 Macrogenics Inc Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten
ES2427646T5 (es) 2005-05-09 2017-08-22 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Anticuerpos monoclonales humanos contra muerte programada 1 (PD1) y métodos para el tratamiento del cáncer mediante el uso de anticuerpos anti-PD-1 solos o combinados con otros agentes inmunoterapéuticos
MX2007015942A (es) 2005-07-01 2008-03-07 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada.
DK2426150T3 (en) 2006-06-30 2018-01-22 Novo Nordisk As ANTI-NKG2A ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
RS53072B (en) 2007-06-18 2014-04-30 Merck Sharp & Dohme B.V. HUMAN RECEPTOR ANTIBODIES PROGRAMMED DEATH PD-1
CA2712220A1 (en) 2008-01-24 2009-07-30 Novo Nordisk A/S Humanized anti-human nkg2a monoclonal antibody
HUE034832T2 (hu) 2008-12-09 2021-12-28 Hoffmann La Roche Anti-PD-L1 antitestek és alkalmazásuk T-sejt-funkció fokozására
ES2646863T3 (es) 2009-11-24 2017-12-18 Medimmune Limited Agentes de unión específica contra B7-H1
SG11201701385WA (en) * 2014-08-28 2017-03-30 Academisch Ziekenhuis Leiden Cd94/nkg2a and/or cd94/nkg2b antibody, vaccine combinations
CN107001466B (zh) * 2014-09-16 2021-10-26 依奈特制药公司 对淋巴细胞中抑制途径的中和
JP2019503349A (ja) * 2015-12-17 2019-02-07 ノバルティス アーゲー Ｐｄ−１に対する抗体分子およびその使用
SG11201805831RA (en) * 2016-01-21 2018-08-30 Innate Pharma Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021523170A (ja) 2021-09-02
AU2019270277A1 (en) 2021-01-07
EA202092696A1 (ru) 2021-04-05
CN112203691A (zh) 2021-01-08
US20210253694A1 (en) 2021-08-19
EP3793607A1 (en) 2021-03-24
TW202011989A (zh) 2020-04-01
SG11202011117VA (en) 2020-12-30
WO2019219658A1 (en) 2019-11-21
MA52627A (fr) 2021-03-24
CA3099820A1 (en) 2019-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11572410B2 (en) Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes
RU2769569C2 (ru) Нейтрализация ингибиторных путей в лимфоцитах
US20210253694A1 (en) Treatment of cancer
KR20200133233A (ko) 두부경부암의 치료
CN113929782B (zh) 对淋巴细胞中抑制途径的中和
NZ729207B2 (en) Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes