TW202011989A

TW202011989A - 癌症之治療

Info

Publication number: TW202011989A
Application number: TW108116510A
Authority: TW
Inventors: 雪德艾沙阿布杜拉; 艾索克庫馬爾尬普塔; 宋緒陽
Original assignee: 英商梅迪繆思有限公司; 法商天賜製藥公司
Priority date: 2018-05-15
Filing date: 2019-05-14
Publication date: 2020-04-01
Also published as: JP2021523170A; WO2019219658A1; CN112203691A; JP7531404B2; US20210253694A1; EA202092696A1; JP2024102055A; AU2019270277A1; KR20210010486A; SG11202011117VA; EP3793607A1; CA3099820A1; MA52627A

Abstract

本發明涉及NKG2A中和劑和PD-1中和劑用於治療癌症、特別是特徵不在於DNA錯配修復缺陷的癌症之用途。提供了治療癌症之方法，以及可用於治療特徵不在於DNA錯配修復缺陷的癌症的組成物和試劑盒。

Description

癌症之治療

本發明涉及NKG2A中和劑和PD-1中和劑用於治療癌症、特別是特徵不在於DNA錯配修復缺陷的癌症之用途。包括MSS癌症之治療。本發明特別適用於治療晚期復發性或轉移性結直腸癌。

背景技術

NK細胞活性受到涉及活化性訊號和抑制性訊號的複雜機制的調節。已經鑒定了若干種不同的NK特異性受體，這些受體在NK細胞介導的HLA I類缺陷靶細胞的識別和殺傷中起重要作用。天然細胞毒性受體(NCR)係指一類活化受體蛋白以及表現它們的基因，這些受體在NK細胞中特異性表現。NCR的實例包括NKp30、NKp44和NKp46。這些受體係Ig超家族的成員，並且它們藉由特異性單株抗體誘導的交聯導致強烈的NK細胞活化，從而導致細胞內Ca⁺⁺水平增加，觸發細胞毒性和淋巴因數釋放，並且活化針對許多類型的靶細胞的NK細胞毒性。

CD94/NKG2A係在淋巴細胞亞群上發現的抑制性受體。CD94/NKG2A限制細胞因子釋放和某些淋巴細胞對表現CD94/NKG2A-配位基HLA-E的細胞的細胞毒性反應。還發現HLA-E由某些腫瘤細胞和活化的內皮細胞以可溶性形式分泌。抑制CD94/NKG2A訊號傳導的抗體可以增加淋巴細胞對HLA-E陽性靶細胞的細胞因子釋放和細胞溶解活性，諸如CD94/NKG2A陽性NK細胞對表現HLA-E的腫瘤細胞或病毒感染細胞的反應。因此，中和抗NKG2A抗體可以用於治療癌症。

結直腸癌(CRC)占所有癌症的10%-15%，並且是西方世界癌症死亡的主要原因。治療轉移性CRC(mCRC)的醫護標準仍然是使用細胞毒性劑。最近，已經在CRC中測試了免疫治療劑。Le等人(N Engl J Med.[新英格蘭醫學雜誌]2015年；372：2509-2520)使用帕姆單抗(pembrolizumab，一抗程式性死亡1免疫檢查點抑製劑)在CRC中進行了2期臨床研究，發現免疫相關的客觀反應率和免疫相關的PFS率對MSI-H CRC分別為40%(10名患者中的4名)和78%(9名患者中的7名)，並且對微衛星穩定/熟練的MSS CRC分別為0%(18名患者中的0名)和11%(18名患者中的2名)。與11/18的MSS CRC患者相比，10名MSI-H CRC患者中只有1名出現疾病進展。

遺憾的是，化學治療劑和/或靶向療法不能為患有非MSI-H CRC的患者提供足夠和/或持久的抗腫瘤反應。因此，本領域需要對不具有DNA修復缺陷的治療患者提供改善的益處。

本發明尤其在以下觀察中產生：當用NKG2A中和劑莫納利珠單抗(monalizumab)和PD-1中和劑德瓦魯單抗(durvalumab)治療時，患有MSS-CRC的人類患者顯示出有希望的抗腫瘤反應。儘管已經認為PD-1中和劑不太適合MSS-CRC，但令人驚訝地發現這兩種藥劑的組合可以有益於治療MSS-CRC。不希望受理論的束縛，可能是HLA-E/NKG2A軸的中和可以使MSS-CRC腫瘤對藉由宿主免疫系統進行的識別和/或裂解敏感。

在一個方面中，本發明提供了在對其有需要的個體中治療和/或預防癌症和/或引發抗腫瘤免疫反應之方法，其中，所述個體患有非MSI高腫瘤，該方法包括用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療所述個體。在一個實施方式中，腫瘤係MSI低的。在另一個實施方式中，腫瘤係MSS。在一個實施方式中，癌症或腫瘤係結直腸癌(CRC)，視情況是晚期復發性或轉移性結直腸癌(mCRC)。

在一個方面中，本發明提供了在對其有需要的個體中治療癌症和/或引發抗腫瘤免疫反應之方法，其中，所述個體患有非MSI高(MSI-H)的晚期復發性或轉移性結直腸癌，視情況地轉移性結直腸癌，該方法包括用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療所述個體。。

在一個方面中，本發明提供了在對其有需要的個體中治療癌症和/或引發抗腫瘤免疫反應之方法，其中，所述個體患有非MSI高(MSI-H)的晚期復發性或轉移性結直腸癌，視情況轉移性結直腸癌，該方法包括用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療所述個體。

在一個方面中，本發明提供了在對其有需要的個體中治療癌症和/或引發抗腫瘤免疫反應之方法，其中，所述個體患有微衛星不穩定性低(MSI-Low)的或微衛星穩定性(MSS)的晚期復發性或轉移性結直腸癌，視情況轉移性結直腸癌，該方法包括用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療所述個體。

在一個實施方式中，提供了一種用於在個體中治療或預防癌症視情況CRC或mCRC之方法，該方法包括：(i)鑒定患有非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤的個體，並且(ii)向個體給予有效量的中和抑制性受體NKG2A的藥劑和有效量的中和PD-1的藥劑。

在一個實施方式中，提供了一種用於在個體中治療或預防癌症視情況CRC或mCRC之方法，該方法包括：(i)鑒定患有非MSI高腫瘤的腫瘤的個體，並且(ii)向個體給予有效量的中和抑制性受體NKG2A的藥劑和有效量的中和PD-1的藥劑。

在一個實施方式中，提供了一種用於在個體中治療或預防癌症視情況CRC或mCRC之方法，該方法包括：(i)鑒定患有是MSS腫瘤的腫瘤的個體，並且(ii)向個體給予有效量的中和抑制性受體NKG2A的藥劑和有效量的中和PD-1的藥劑。

在另一個實施方式中，提供了一種用於確定患有癌症視情況CRC或mCRC的個體是否將從使用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑的治療中獲得特定的益處、對該治療反應和/或適合該治療之方法，該方法包括確定所述個體是否患有是DNA錯配修復缺陷性的腫瘤，其中，確定腫瘤係非DNA錯配修復缺陷性的指示該個體將從使用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和人類PD-1多肽的藥劑的治療中獲得特定的益處、對該治療反應和/或適合該治療。

在另一個實施方式中，提供了一種用於確定患有癌症視情況CRC或mCRC的個體是否將從使用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑的治療中獲得特定的益處、對該治療反應和/或適合該治療之方法，該方法包括確定所述個體是否患有缺乏微衛星不穩定性的腫瘤(例如，該個體患有MSS腫瘤)，其中，確定腫瘤缺乏微衛星不穩定性(例如，該個體患有MSS腫瘤)指示該個體將從使用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和人類PD-1多肽的藥劑的治療中獲得特定的益處、對該治療反應和/或適合該治療。

微衛星不穩定性係由受損的DNA錯配修復(MMR)導致的遺傳超突變性的情況。MSI的存在代表MMR不能正常運作的表型證據。在大多數情況下，MSI腫瘤中的不穩定性的遺傳基礎係五種人類MMR基因中任何一種或多種的遺傳性生殖系改變：MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1。因此，可以藉由評估微衛星標記和/或MMR基因來確定腫瘤中的微衛星不穩定性。

在一個實施方式中，鑒定其腫瘤不具有微衛星不穩定性(例如，其腫瘤係微衛星穩定性(MSS)腫瘤)的個體的步驟包括：(a)從包含腫瘤細胞的個體中獲得生物樣品(例如，包括獲得活組織檢查)，(b)確定生物樣品內的腫瘤細胞的微衛星狀態。個體患有特徵不在於微衛星不穩定性的腫瘤(例如，腫瘤是MSS，腫瘤的特徵在於微衛星穩定性)的發現指示該個體可以有利地用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑進行治療。

在一個實施方式中，確定腫瘤細胞的微衛星狀態的步驟包括檢測腫瘤細胞中DNA錯配修復(MMR)蛋白表現的改變，視情況其中，該MMR蛋白選自MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1，視情況其中，該MMR基因或蛋白選自MSH2、MLH1、MSH6和PMS2。在一個實施方式中，個體患有特徵在於至少一種MMR蛋白的減少或缺失的腫瘤的發現指示腫瘤的特徵在於微衛星不穩定性。其腫瘤不具有至少一種MMR蛋白的減少或缺失的個體可以被指定為指示腫瘤的特徵在於微衛星穩定性(例如，MSS)，並且可以有利地用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療。例如，可以根據用於評估DNA錯配修復缺陷的標準方法和指南來評估MMR蛋白的減少。視情況，MMR蛋白的表現的降低可以對應於與MSS相關聯的參考值相比的降低；視情況，MMR蛋白的表現的降低對應於與MSI相關聯的參考值。替代性地，可以藉由與參考值進行比較來評估至少一種MMR蛋白的減少，該參考值可以是，例如，在同一個體的健康組織中測量的一種或多種相同MMR蛋白的水平，或者在不同時間段分析的同一個體的腫瘤樣品中測量的一種或多種相同MMR蛋白的水平，或來自健康個體諸如未患癌症的個體的生物樣品中一種或多種相同MMR蛋白的平均水平。

在一個實施例中，確定腫瘤細胞的微衛星狀態的步驟包括檢測微衛星標記或微衛星標記組的改變。視情況，在選自以下群組之一種或多種微衛星標記中檢測改變，該群組由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO27、D5S346、D2S123和D17S250，更具體地由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。其腫瘤不具有高頻微衛星不穩定性的個體指示腫瘤的特徵在於微衛星穩定性(MSS)或低微衛星不穩定性(MSI-Low)，並且可以有利地用中和抑制性受體NKG2A的藥劑和中和PD-1的藥劑治療。

在一個實施方式中，中和抑制性受體NKG2A的藥劑係視情況藉由抑制人類HLA-E與人類NKG2A蛋白之間的相互作用來中和人類NKG2A多肽的抑制性活性的蛋白質(例如，抗體)。在一個實施方式中，中和抑制性受體NKG2A的藥劑係結合人類NKG2A多肽並中和人類NKG2A多肽的抑制性活性的蛋白質(例如，抗體)，該蛋白質抑制或不抑制人類HLA-E與人類NKG2A蛋白質之間的相互作用。在一個實施方式中，中和抑制性受體NKG2A的藥劑係結合人類HLA-E多肽並抑制人類HLA-E與人類NKG2A蛋白之間的相互作用的蛋白質(例如，抗體)。

在一個實施方式中，中和人類PD-1多肽的藥劑係中和PD-1的抑制性活性的抗PD-1或抗PDL-1抗體。該個人可以被指定為人類。

在一個實施方式中，提供了一種在個體中增加腫瘤浸潤性CD8+T細胞和/或NK細胞的活性和/或數量之方法，該個體患有特徵不在於缺陷性DNA錯配修復的腫瘤(例如，CRC、mCRC)，該方法包括向個體給予治療活性量的中和抑制性受體NKG2A的化合物和治療活性量的中和PD-1多肽的化合物。

在一個實施方式中，提供了一種在個體中增加腫瘤浸潤性CD8+T細胞和/或NK細胞的活性和/或數量之方法，該個體患有特徵不在於微衛星不穩定性(例如，表徵為MSS的癌症)的腫瘤(例如，CRC、mCRC)，該方法包括向個體給予治療活性量的中和抑制性受體NKG2A的化合物和治療活性量的中和PD-1多肽的化合物。

在一個實施方式中，提供了中和NKG2A的藥劑，視情況抗NKG2A抗體，該藥劑用於治療特徵不在於微衛星不穩定性(例如，表徵為MSS的癌症)的結直腸癌(例如，mCRC)，其中，中和NKG2A的藥劑與中和PD-1的藥劑視情況抗PD-1或抗PD-L1抗體組合給予。

在一個實施方式中，提供了中和人類PD-1多肽的藥劑，視情況抗PD-L1抗體或抗PD-1抗體，該藥劑用於治療特徵不在於微衛星不穩定性(例如，表徵為MSS的癌症)的結直腸癌(例如，mCRC)，其中，中和人類PD-1多肽的藥劑與中和抑制性受體NKG2A的藥劑視情況抗NKG2A抗體組合給予。

在本文的任何實施方式的一個方面中，該個體已接受過放射療法、手術、化學療法和/或用生物製劑治療的預先治療。

這些方面在本文提供的本發明的描述中將更加充分地描述，並且其他方面、特徵和優點將由於該描述而變得明顯。

[圖1]是在MSS-CRC試驗的擴展群組中，針對每個患者(水平軸)在可評估群體中相對基線的腫瘤大小的最佳變化(以%表示，左側垂直軸)和治療響應的持續時間(以週表示，z軸)的3D表示。

[圖2]是與圖1相比，在更長時間段內在MSS-CRC試驗的擴展群組中，針對每個患者(水平軸)在可評估群體中相對基線的腫瘤大小的最佳變化(以%表示，左側垂直軸)和治療響應的持續時間(以週表示，z軸)的3D表示。

定義

如本說明書中所使用的，「一個或一種(a/an)」可以意指一個/種或多個/種。如一項或多項申請專利範圍中所使用的，當與單詞「包括」結合使用時，單詞「一個或一種」可以意指一個/種或多於一個/種。如本文所使用的，「另一個/種」可以意指至少第二個/種或更多個/種。

在使用「包含」的情況下，這可以視情況被「基本上由...組成」或「由...組成」代替。

NKG2A(OMIM 161555，其全部揭露內容藉由引用結合在此)係NKG2轉錄物組的成員(Houchins等人(1991年)J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]173：1017-1020)。NKG2A由跨越25kb的7個外顯子編碼，示出一些差異剪接。NKG2A與CD94一起形成異二聚體抑制性受體CD94/NKG2A，該受體存在於NK細胞、α/β T細胞、γ/δ T細胞和NKT細胞的亞群的表面上。類似於抑制性KIR受體，它在其細胞質結構域中具有ITIM。如本文所使用的，「NKG2A」係指NKG2A基因或編碼蛋白的任何變體、衍生物、或同種型。人類NKG2A在3個結構域中包含具有以下序列的233個胺基酸，其中細胞質結構域包含殘基1-70，跨膜區包含殘基71-93，並且胞外區包含殘基94-233：

(SEQ ID NO：1)。

NKG2C(OMIM 602891，其全部揭露內容藉由引用結合在此)和NKG2E(OMIM 602892，其全部揭露內容藉由引用結合在此)係NKG2轉錄物組的另外兩個成員(Gilenke等人(1998年)Immunogenetics[免疫遺傳學]48：163-173)。CD94/NKG2C和CD94/NKG2E受體係在淋巴細胞亞群(諸如NK細胞和T細胞)表面上發現的活化受體。

HLA-E(OMIM 143010，其全部揭露內容藉由引用結合在此)係非經典的MHC分子，例如像衍生自其他MHC I類分子的訊號序列的片段，該分子在細胞表面上表現並且藉由肽的結合進行調節。還鑒定了HLA-E的可溶性形式。除了其T細胞受體結合特性之外，HLA-E藉由特異性結合CD94/NKG2A、CD94/NKG2B和CD94/NKG2C來結合天然殺傷(NK)細胞、天然殺傷T細胞(NKT)和T細胞(α/β和γ/δ)的亞群(參見例如，Braud等人(1998年)Nature[自然]391：795-799，其全部揭露內容藉由引用結合在此)。HLA-E的表面表現保護靶細胞免於藉由CD94/NKG2A+NK、T或NKT細胞殖株進行的裂解。如本文所使用的，「HLA-E」係指HLA-E基因或編碼蛋白的任何變體、衍生物或同種型。

在本發明的上下文中，「NKG2A-」或「CD94/NKG2A-」，「陽性淋巴細胞」或「限制性淋巴細胞」係指在細胞表面上表現CD94/NKG2A的淋巴譜系的細胞(例如，NK細胞、NKT細胞和T細胞)，這些細胞可以藉由例如使用特異性識別CD94和NKG2A上的組合表位或單獨NKG2A上的表位的抗體進行流動式細胞測量術來檢測。「NKG2A陽性淋巴細胞」還包括淋巴來源的永生細胞系(例如，NKL、NK-92)。

在本發明的上下文中，「降低NKG2A的抑制性活性」、「中和NKG2A」或「中和NKG2A的抑制性活性」係指其中CD94/NKG2A的負面影響細胞內過程的能力受到抑制的過程，這些細胞內過程導致淋巴細胞反應，諸如細胞因子釋放和細胞毒性反應。這可以例如在基於NK細胞或T細胞的細胞毒性測定中進行測量，其中測量治療性化合物刺激CD94/NKG2A陽性淋巴細胞殺傷HLA-E陽性細胞的能力。在一個實施方式中並參考本文所述的細胞毒性測定，中和NKG2A的抗體製品引起CD94/NKG2A限制性淋巴細胞的細胞毒性增加至少10%，視情況所述淋巴細胞細胞毒性增加至少40%或50%，視情況所述淋巴細胞細胞毒性增加至少70%」，視情況NK細胞毒性增加至少70%。如果抗NKG2A抗體減少或阻斷CD94/NKG2A與HLA-E的相互作用，則它可以增加CD94/NKG2A限制性淋巴細胞的細胞毒性。這可以例如在標準的4小時體外細胞毒性測定中評價，使用例如表現CD94/NKG2A的NK細胞和表現HLA-E的靶細胞的標準的4小時體外細胞毒性測定中進行評估。此類NK細胞不能有效殺死表現HLA-E的靶標，因為CD94/NKG2A識別HLA-E，從而導致防止淋巴細胞介導的細胞溶解的抑制性訊號傳導的起始和傳播。這種體外細胞毒性測定可以藉由本領域熟知的標準方法進行，例如，如在Coligan等人編，Current Protocols in Immunology[現代免疫學方法]，Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience[格林出版協會和威利跨學科出版社]，N.Y.[紐約]，(1992年，1993年)中所述。評估抗體刺激淋巴細胞殺傷靶細胞(諸如P815、K562細胞或適當的腫瘤細胞)的能力的鉻釋放和/或其他參數也揭露於Sivori等人，J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]1997；186：1129-1136；Vitale等人，J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]1998年；187：2065-2072；Pessino等人J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]1998年；188：953-960；Neri等人Clin.Diag.Lab.Immun.[臨床和診斷實驗室免疫學]2001年；8：1131-1135；Pende等人J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]1999年；190：1505-1516，其中每個的全部揭露內容藉由引用結合在此。在加入NK細胞之前，用⁵¹Cr標記靶細胞，並且然後估計殺傷與⁵¹Cr由於殺傷而從細胞到培養基中的釋放成比例。加入防止CD94/NKG2A與HLA-E結合的抗體導致防止經由CD94/NKG2A進行的抑制性訊號傳導的起始和傳播。因此，加入這類藥劑導致淋巴細胞介導的靶細胞殺傷增加。因此，此步驟鑒定了藉由例如阻斷配位基結合來防止CD94/NKG2A誘導的負訊號傳導的藥劑。在特定的⁵¹Cr釋放細胞毒性測定中，表現CD94/NKG2A的NK效應細胞可以殺傷HLA-E陰性LCL 721.221靶細胞，但是不太好殺傷表現HLA-E的LCL 721.221-Cw3對照細胞。相比之下，缺乏CD94/NKG2A的YTS效應細胞有效地殺傷兩種細胞系。因此，由於經由CD94/NKG2A進行的HLA-E誘導的抑制性訊號傳導，NK效應細胞較低效地殺傷HLA-E⁺ LCL 721.221-Cw3細胞。當NK細胞與此處所述的阻斷性抗CD94/NKG2A抗體在這種⁵¹Cr釋放細胞毒性測定中預溫育時，表現HLA-E的LCL 721.221-Cw3細胞以抗體濃度依賴性方式被更有效地殺傷。抗NKG2A抗體的抑制性活性(即，細胞毒性增強的可能性)也可以藉由許多其他方式中的任一種來評估，例如藉由它對細胞內游離鈣的影響來評估，如在例如Sivori等人J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]1997年；186：1129-1136中所述，其揭露內容藉由引用結合在此。可以例如藉由測量細胞因子產生(例如，IFN-γ產生)或細胞毒性標記(例如，CD107或CD137動員)的增加來評估NK細胞細胞毒性的活化。在示例性方案中，藉由細胞表面和胞質內染色以及在培養4天後藉由流動式細胞測量術的分析來評估來自PBMC的IFN-y產生。簡而言之，在培養的最後4小時中加入佈雷菲德菌素(Brefeldin)A(西格瑪埃德里奇公司(Sigma Aldrich))，終濃度為5μg/ml。然後將細胞與抗CD3和抗CD56單株抗體一起溫育，之後進行透化(IntraPrep^TM；貝克曼庫爾特公司(Beckman Coulter))並用PE-抗-IFN-y或PE-IgG1(法明根公司(Pharmingen))染色。使用ELISA在上清液中測量來自多株活化的NK細胞的 GM-CSF和IFN-y產生(GM-CSF：DuoSet Elisa，明尼蘇達州明尼阿波利斯的R&D系統公司(R&D Systems,Minneapolis,MN)，IFN-y：OptEiA set，法明根公司(Pharmingen))。

如本文所使用的，「治療」(「treatment」和「treating」等)通常意指獲得所希望的藥理學和生理學效果。就預防或部分預防疾病或其症狀或病狀而言，該效果可以是預防性的，和/或就部分或完全治癒疾病、病狀、症狀或由於疾病造成的不良反應而言，該效果可以是治療性的。如本文所使用的，術語「治療」包括哺乳動物(特別是人類)的疾病的任何治療，並且包括：(a)在可能易患疾病但尚未被診斷為患有該疾病的受試者中預防該疾病發生，諸如預防性早期無症狀干預；(b)抑制疾病，例如遏制疾病的發展；或者例如在已被診斷患有該疾病的受試者中緩解疾病，例如引起疾病和/或其症狀或病狀的消退，諸如改善或修復損傷。視情況，治療可以引起(例如，可以表徵為引起的方法)腫瘤負荷的減少、病灶的大小和/或數量的減少、癌症進展的減少或延遲(例如，無進展存活的增加)、癌症轉移的延遲或預防和/或存活的增加。視情況，治療可以例如根據標準規範(視情況RECIST規範)在受試者中引起或提供(例如，可以表徵為引起或提供的方法)穩定的疾病、部分反應或完全反應。

每當參考NKG2A中和劑(例如，抗體)和/或PD-1中和劑(例如，抗體)提及「癌症治療」等時，包括：

(a)一種治療癌症的方法，所述方法包括以允許治療癌症的劑量(治療有效量)、視情況以本文指定的劑量(量)向需要這種治療的個體、哺乳動物(尤其是人類)給予(至少一次治療)NKG2A中和劑和PD-1中和劑(例如，在藥學上可接受的載體材料中一起或各自分開)的步驟；

(b)使用NKG2A中和劑和PD-1中和劑用於治療癌症；

(c)NKG2A中和劑和PD-1中和劑，用於治療癌症(尤其是在人類中)；

(d)NKG2A中和劑，用於治療癌症(尤其是在人類中)，其中所述NKG2A中和劑與PD-1中和劑組合給予；

(e)PD-1中和劑，用於治療癌症(尤其是在人類中)，其中所述PD-1中和劑與NKG2A中和劑組合給予；

(f)使用NKG2A中和劑和PD-1中和劑用於製造治療癌症的藥物製品，

(g)一種使用NKG2A中和劑和PD-1中和劑用於製造治療癌症的藥物製品之方法，包括將NKG2A中和劑和/或PD-1中和劑與藥學上可接受的載體混合，

(h)包含適用於治療癌症的有效劑量的NKG2A中和劑和/或PD-1中和劑的藥物製品；

(i)根據在提交本申請的國家中允許申請專利的主題，(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、和(h)的任何組合。

如本文所使用的，術語「活組織檢查」被定義為出於檢查的目的取出組織，諸如以建立診斷。活組織檢查的類型的實例包括藉由應用抽吸，諸如藉由附接到注射器的針頭；藉由儀器取出組織碎片；藉由內窺鏡用適當的器械取出；藉由手術切除，諸如整個病灶；等。

如本文所使用的，術語「抗體」係指多株抗體和單株抗體。根據重鏈中恒定結構域的類型，抗體被指定為五個主要類別中的一種：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM。這些中的若干種進一步被分為亞類或同種型，諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。示例性免疫球蛋白(抗體)結構單元包括四聚體。每個四聚體由兩對相同的多肽鏈構成，每對具有一條「輕」鏈(約25kDa)和一條「重」鏈(約50-70kDa)。每條鏈的N末端限定了約100至110或更多個胺基酸的可變區，該可變區主要負責抗原識別。術語可變輕鏈(V_L)和可變重鏈(V_H)分別指這些輕鏈和重鏈。對應於不同類別的免疫球蛋白的重鏈恒定結構域分別稱為「α」、「δ」、「ε」、「γ」和「μ」。不同類別的免疫球蛋白的亞基結構和三維構型係熟知的。IgG係本文使用的示例性抗體類別，因為它們係生理狀態下最常見的抗體，並且因為它們最容易在實驗室環境中製備。視情況，抗體係單株抗體。抗體的具體實例係人源化的、嵌合的、人類的或其他人類合適的抗體。「抗體」還包括本文所述的抗體的任一種的任何片段或衍生物。

術語「特異性結合」意指抗體可以較佳的是在競爭性結合測定中與結合配偶體結合，例如，抗NKG2A抗體結合NKG2A、抗PD-L1抗體結合PD-L1、抗PD-1抗體結合PD-1，如使用重組形式的蛋白質、其中的表位、或存在於分離的靶細胞表面上的天然蛋白質所評估的。競爭性結合測定和用於確定特異性結合的其他方法係本領域熟知的。例如，可以經由放射性標記、物理方法(諸如，質譜法)、或使用例如細胞螢光分析(例如，FACScan)檢測直接或間接的螢光標記來檢測結合。高於在對照非特異性藥劑的情況下所見的量的結合指示藥劑結合靶標。特異性結合NKG2A的藥劑可以單獨結合NKG2A或結合NKG2A與CD94的二聚體。

當抗體被稱為與特定單株抗體「競爭」時，它意指抗體在使用重組分子(例如，NKG2A)或表面表現分子(例如，NKG2A)的結合測定中與單株抗體競爭。例如，如果測試抗體降低具有SEQ ID NO：4-8中的任一個的重鏈可變區和SEQ ID NO：9的輕鏈可變區的抗體在結合測定中與NKG2A多肽或表現NKG2A的細胞的結合，則稱抗體分別與這種抗體「競爭」。

如本文所使用的，術語「親和力」意指抗體與表位結合的強度。抗體的親和性藉由解離常數Kd(定義為[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag])給出其中[Ab-Ag]係抗體-抗原複合體的莫耳濃度，[Ab]係未結合抗體的莫耳濃度，並且[Ag]係未結合的抗原的莫耳濃度。親和常數K_a由1/Kd定義。用於確定單株抗體的親和力的方法可見於Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual[抗體：實驗室手冊]，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港實驗室出版社]，Cold Spring Harbor,N.Y.[紐約冷泉港]，1988年)，Coligan等人編，Current Protocols in Immunology[現代免疫學方法]，Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience[格林出版協會和威利跨學科出版社]，N.Y.[紐約]，(1992年，1993年)，以及Muller,Meth.Enzymol.[酶學方法]92：589-601(1983年)，這些參考文獻藉由引用以其全部內容結合在此。本領域熟知的用於確定單株抗體的親和力的一種標準方法係使用表面電漿共振(SPR)篩選(諸如藉由用BIAcore^TM SPR分析設備裝置)。

在本文的上下文中，「決定簇」表示在多肽上相互作用或結合的位點。

術語「表位」係指抗原決定簇，並且係抗體結合的抗原上的區域或域。蛋白質表位可以包含直接涉及結合的胺基酸殘基以及被特異性抗原結合抗體或肽有效阻斷的胺基酸殘基，即抗體「足跡」內的胺基酸殘基。它係可以與例如抗體或受體結合的複雜抗原分子上的最簡單形式或最小結構區域。表位可以是線性的或者構象的/結構的。術語「線性表位」被定義為由胺基酸的線性序列上連續的胺基酸殘基構成的表位(一級結構)。術語「構象或結構表位」被定義為由不完全連續的並且因此代表藉由分子折疊而彼此接近的胺基酸線性序列的分開部分的胺基酸殘基構成的表位(二級、三級和/或四級結構)。構象表位取決於三維結構。因此，術語‘構象’經常與‘結構’可互換使用。

術語「藥劑」在本文用於表示化學化合物、化學化合物的混合物、生物大分子或由生物材料製成的提取物。術語「治療劑」係指具有生物活性的藥劑。

為了本文的目的，「人源化」或「人類」抗體係指其中一種或多種人類免疫球蛋白的恒定框架區和可變框架區與動物免疫球蛋白的結合區(例如，CDR)融合的抗體。設計這類抗體以維持衍生出結合區的非人類抗體的結合特異性，但避免針對非人類抗體的免疫反應。這類抗體可以從轉基因小鼠或已經「工程化」以響應抗原攻擊產生特異性人類抗體的其他動物中獲得(參見例如Green等人(1994年)Nature Genet[自然遺傳學]7：13；Lonberg等人(1994年)Nature[自然]368：856；Taylor等人(1994年)Int Immun[國際免疫學]6：579，這些文獻的全部傳授內容藉由引用結合在此)。完全人類抗體也可以藉由遺傳方法或染色體轉染方法以及噬菌體展示技術來構建，所有這些都是本領域已知的(參見例如，McCafferty等人(1990年)Nature[自然]348：552-553)。人類抗體還可以藉由體外活化的B細胞生成(參見例如，美國專利案號5,567,610和5,229,275，這些專利藉由引用以其全部內容結合在此)。

「嵌合抗體」係一種抗體分子，其中(a)恒定區或其部分被改變、替換或交換，這樣使得抗原結合位點(可變區)被連接到不同的或改變的類別、效應子功能和/或物種的恒定區，或連接到賦予嵌合抗體新的特性的完全不同的分子(例如，酶、毒素、激素、生長因子、藥物等)；或者(b)可變區或其部分被具有不同的或改變的抗原特異性的可變區改變、替換或交換。

術語「Fc結構域」、「Fc部分」和「Fc區」係指抗體重鏈的C末端片段，例如，人類γ(伽馬)重鏈的約胺基酸(aa)230至約aa 450或者它在其他類型的抗體重鏈中的對應序列(例如，人類抗體的α、δ、ε和μ)，或其天然存在的同種異型。除非另外指明，否則在本揭露中使用通常接受的免疫球蛋白的Kabat胺基酸編號(參見Kabat等人(1991)Sequences of Protein of Immunological Interest[具有免疫性興趣的蛋白序列]，第5版，United States Public Health Service[美國公共衛生署]，National Institute of Health[國立衛生研究院]，Bethesda,MD[馬里蘭州貝塞斯達])。

術語「分離的」、「純化的」或「生物學上純的」係指基本上或實質上不含如在其天然狀態中所發現的通常伴隨它的組分。純度和均質性典型地使用分析化學技術來確定，諸如聚丙烯醯胺凝膠電泳或高效液相層析法。作為製品中存在的主要物質的蛋白質基本上是純化的。

術語「多肽」、「肽」和「蛋白質」在本文可互換使用以指示胺基酸殘基的聚合物。這些術語適用於胺基酸聚合物，其中一個或多個胺基酸殘基係相應的天然存在的胺基酸的人工化學模擬物，並且適用於天然存在的胺基酸聚合物以及非天然存在的胺基酸聚合物。

當參考例如細胞、或核酸、蛋白質、或載體使用時，術語「重組」指示細胞、核酸、蛋白質或載體已經藉由引入異源核酸或蛋白質或改變天然核酸或蛋白質來修飾，或者指示細胞衍生自如此修飾的細胞。因此，例如，重組細胞表現在天然(非重組)形式的細胞中未發現的基因或表現以其他方式異常表現(低表現或完全不表現)的天然基因。

在本文的上下文中，術語「結合」多肽或表位的抗體表示以特異性和/或親和力結合所述決定簇的抗體。

當在兩個或更多個多肽的序列之間的關係中使用時，術語「同一性」或「相同的」係指多肽之間的序列相關性程度，如藉由兩個或更多個胺基酸殘基的串之間的匹配數量所確定的。「同一性」測量兩個或更多個序列中較小的序列之間相同匹配的百分比，其中間隙比對(如果有的話)由特定數學模型或電腦程式(即，「演算法」)解決。藉由已知方法可以容易地計算相關多肽的同一性。這類方法包括但不限於以下中描述的那些方法：Computational Molecular Biology[計算分子生物學]，Lesk,A.M.編，Oxford University Press,New York[紐約牛津大學出版社]，1988年；Biocomputing：Informatics and Genome Projects[生物計算：資訊學和基因組計畫]，Smith,D.W.編，Academic Press,New York[紐約學術出版社]，1993年；Computer Analysis of Sequence Data,Part 1[序列資料的電腦分析，第1部分]，Griffin,A.M.和Griffin,H.G.編，Humana Press,New Jersey[新澤西州胡瑪納出版社]，1994年；Sequence Analysis in Molecular Biology[分子生物學中的序列分析]，von Heinje,G.,Academic Press[學術出版社]，1987年；Sequence Analysis Primer[序列分析引物]，Gribskov,M.和Devereux,J.編，M.Stockton Press,New York[紐約斯托克頓出版社]，1991年；以及Carillo等人，SIAM J.Applied Math.[應用數學SIAM雜誌]48,1073(1988年)。

設計用於確定同一性的方法以給出測試序列之間的最大匹配。描述了在公開可用的電腦程式中確定同一性的方法。用於確定兩個序列之間的同一性的電腦程式方法包括GCG套裝程式，包括GAP(Devereux等人，Nucl.Acid.Res.[核酸研究]12,387(1984年)；Genetics Computer Group,University of Wisconsin,Madison,Wis.[威斯康辛州麥迪森的威斯康辛大學遺傳學電腦組])、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等人，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]215,403-410(1990年))。BLASTX程式可從國家生物技術資訊中心(NCBI)和其他來源公開獲得(BLAST Manual[BLAST手冊]，Altschul等人NCB/NLM/NIH Bethesda,Md.[馬里蘭州貝塞斯達]20894；Altschul等人，如上)。熟知的Smith Waterman演算法也可以用於確定同一性。

NKG2A中和治療劑

NKG2A中和劑結合人類CD94/NKG2A受體的細胞外部分或其配位基HLA-E，並降低在CD94/NKG2A陽性淋巴細胞表面上表現的人類CD94/NKG2A受體的抑制性活性。在一個實施方式中，該藥劑與HLA-E競爭結合CD94/NKG2A，即該藥劑阻斷CD94/NKG2A與其配位基HLA-E之間的相互作用。在另一個實施方式中，該藥劑結合NKG2A但不與HLA-E競爭結合CD94/NKG2A；即，該藥劑能夠與HLA-E同時結合CD94/NKG2A。在一個實施方式中，該藥劑係結合NKG2A的抗體。抗體可以結合CD94和NKG2A上的組合表位或單獨NKG2A上的表位。在另一個實施方式中，該藥劑係結合HLA-E並抑制人類HLA-E與人類NKG2A蛋白之間相互作用的抗體。

在一個方面中，NKG2A中和劑係選自完全人類抗體、人源化抗體和嵌合抗體的抗體。在一個方面中，該藥劑包含衍生自人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體的恒定結構域。在一個方面中，該藥劑係選自IgA、IgD、IgG、IgE和IgM抗體的抗體的片段。在一個方面中，該藥劑係選自以下的抗體片段：Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)2片段、F(ab')2片段、Fv片段、重鏈Ig(美洲駝或駱駝Ig)、V_HH片段、單結構域FV、和單鏈抗體片段。在一個方面中，該藥劑係選自以下的合成的或半合成的抗體衍生的分子：scFV、dsFV、微抗體、雙抗體、三抗體、κ體、IgNAR和多特異性抗體。

視情況，抗NKG2A抗體不顯示與人類Fcγ受體(例如，CD16)的實質特異性的結合。視情況，抗NKG2A抗體缺乏與人類CD16、CD32A、CD32B或CD64中的一種或多種或全部的實質特異性結合或與其具有低或降低的特異性結合。示例性抗體可以包含已知與Fcγ受體不結合或具有低結合的各種重鏈的恒定區。一個這種實例係人類IgG4恒定區。在一個實施方式中，IgG4抗體包含防止在體內形成半抗體的修飾(fab臂交換)，例如，抗體包含IgG4重鏈，該重鏈包含根據EU-索引對應於位置228的殘基241中的絲胺酸至脯胺酸突變(Kabat等人，「Sequences of proteins of immunological interest[具有免疫性興趣的蛋白序列]」，第5版，NIH,Bethesda,ML[馬里蘭州貝塞斯達NIH],1991年)。這類修飾的IgG4抗體在體內保持完整並維持與NKG2A的二價(高親和力)結合，這與天然IgG4相反，天然IgG4在體內經歷fab臂交換，這樣使得它們以可以改變結合親和力的單價方式結合NKG2A。替代性地，不包含恒定區的抗體片段，諸如Fab或F(ab’)2片段，可以用於避免Fc受體結合。可以根據本領域已知的方法評估Fc受體結合，這些方法包括例如在BIACORE測定中測試抗體與Fc受體蛋白的結合。另外，可以使用任何人類抗體類型(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，其中Fc部分被修飾以最小化或消除與Fc受體的結合(參見例如，WO 03101485，其揭露內容藉由引用結合在此)。評估Fc受體結合的測定(例如像，基於細胞的測定)係本領域熟知的，並描述於例如WO 03101485中。

因此，本發明涉及與NKG2A結合的抗體或其他藥劑。在一個方面中，抗體以與人類NKG2C和/或NKG2E相比至少100倍低的KD結合NKG2A。

在本發明的一個方面中，該藥劑藉由干擾CD94/NKG2A訊號傳導來減少CD94/NKG2A介導的對表現CD94/NKG2A的淋巴細胞的抑制，例如藉由干擾NKG2A與HLA-E的結合、預防或誘導CD94/NKG2A受體的構象變化、和/或影響CD94/NKG2A受體的二聚化和/或聚集。

在本發明的一個方面中，該藥劑以與NKG2C相比至少100倍低的KD結合NKG2A的細胞外部分。在一個進一步較佳的方面中，該藥劑以與NKG2C相比至少150、200、300、400、或10,000倍低的KD結合NKG2A的細胞外部分。在本發明的另一個方面中，該藥劑以與NKG2C、NKG2E和/或NKG2H 分子相比至少100倍低的KD結合NKG2A的細胞外部分。在一個進一步較佳的方面中，該藥劑以與NKG2C、NKG2C和/或NKG2H分子相比至少150、200、300、400、或10,000倍低的KD結合NKG2A的細胞外部分。這可以在例如BiaCore實驗中測量，其中測量藥劑結合固定化CD94/NKG2A(例如，從表現CD94/NKG2的細胞純化，或在生物系統中產生)的細胞外部分的能力，並且將其與在相同測定中藥劑與類似產生的CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2變體的結合進行比較。替代性地，可以測量藥劑與天然表現或過表現(例如，在暫態轉染或穩定轉染之後)CD94/NKG2A的細胞的結合，並將其與表現CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2變體的細胞的結合進行比較。抗NKG2A抗體可以視情況結合NKG2B，NKG2B係與CD94一起形成抑制性受體的NKG2A剪接變體。在一個實施方式中，親和力可以使用美國專利案號8,206,709中揭露的方法來測量，例如藉由使用Biacore來評估與共價固定的NKG2A-CD94-Fc融合蛋白的結合，如美國專利案號8,206,709的實例8中所示，該專利的揭露內容藉由引用結合在此。

抗NKG2A抗體可以是人源化抗體，例如包含來自人類受體序列的VH人類受體框架，該框架選自例如VH1_18、VH5_a、VH5_51、VH1_f、和VH1_46、和JH6 J-區段、或本領域已知的其他人類種系VH框架序列。VL區人類受體序列可以是例如VKI_O2/JK4。

在一個實施方式中，抗體係基於抗體Z270的人源化抗體。不同的人源化Z270重鏈可變區在SEQ ID NO：4-8中示出，視情況進一步包含C末端絲胺酸(S)殘基。SEQ ID NO：4的HumZ270VH6可變區基於人類VH5_51基因；SEQ ID NO：5的HumZ270VH1可變區基於人類VH1_18基因；SEQ ID NO：6的humZ270VH5可變區基於人類VH5_a基因；SEQ ID NO：7的humZ270VH7可變區基於人類VH1_f基因；並且SEQ ID NO：8的humZ270VH8可變區基於人類VH1_46基因；全部具有人類JH6 J-區段。這些抗體中的每一種都保持與NKG2A的高親和力結合，針對抗體的宿主免疫反應的可能性較低，因為人源化構建體中的每一種的Kabat H-CDR2的6個C末端胺基酸殘基與人類受體框架相同。使用比對程式VectorNTI，獲得humZ270VH1與humZ270VH5、humZ270VH6、humZ270VH7和humZ270VH8之間的以下序列同一性：78,2%(VH1與VH5)、79,0%(VH1與VH6)、88,7%(VH1與VH7)以及96,0%(VH1與VH8)。

在一個方面中，該藥劑包含(i)SEQ ID NO：4-8或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的重鏈可變區，和(ii)SEQ ID NO：9或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區。在一個方面中，該藥劑包含(i)重鏈，其包含SEQ ID NO：10-14中的任一個的胺基酸序列或者與其至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列，和(ii)輕鏈，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列或者與其至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列。

具有SEQ ID NO：4-8中任一個的重鏈可變區和SEQ ID NO：9的輕鏈可變區的抗體中和NKG2A的抑制性活性，但基本上不結合活化受體NKG2C、NKG2E或NKG2H。此外，此抗體與HLA-E競爭結合細胞表面上的NKG2A。在一個方面中，該藥劑包含衍生自具有SEQ ID NO：4-8中任一個的胺基酸序列的重鏈可變區的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在本發明的一個方面中，該藥劑包含衍生自具有SEQ ID NO：9的胺基酸序列的輕鏈可變區的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。

重鏈可變區 VH6

(SEQ ID NO：4)

VH1：

(SEQ ID NO：5)

VH5：

(SEQ ID NO：6)

VH7：

(SEQ ID NO：7)

VH8：

(SEQ ID NO：8)

輕鏈可變區

(SEQ ID NO：9)

重鏈(可變區結構域胺基酸加底線) VH6：

(SEQ ID NO：10)

VH1：

(SEQ ID NO：11)

VH5：

(SEQ ID NO：12)

VH7：

(SEQ ID NO：13)

VH8：

(SEQ ID NO： 14)

輕鏈(可變區結構域胺基酸加底線)

(SEQ ID NO：15)

莫納利珠單抗，重鏈和輕鏈上的CDR 根據Kabat編號方案的重鏈CDR：

H-CDR1：SYWMN(SEQ ID NO：16)

H-CDR2：RIDPYDSETHYAQKLQG(SEQ ID NO：17)

H-CDR3：GGYDFDVGTLYWFFDV(SEQ ID NO：18)

根據Kabat編號方案的輕鏈CDR：

L-CDR1：RASENIYSYLA(SEQ ID NO：19)

L-CDR2：NAKTLAE(SEQ ID NO：20)

L-CDR3：QHHYGTPRT(SEQ ID NO：21)

在一個方面中，抗NKG2A抗體係包含以下的抗體：對應於SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的殘基31-35的H-CDR1、對應於SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的殘基50-60(當包括人類來源的胺基酸時，視情況50-66)的H-CDR2以及對應於SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的殘基99-114(根據Kabat的95-102)的H-CDR3。在一個實施方式中，H-CDR2對應於SEQ ID NO：4-8(或SEQ ID NO：10-14)的殘基50-66。視情況，CDR可以包含一個、兩個、三個、四個、或更多個胺基酸取代。

在一個方面中，抗NKG2A抗體係包含以下的抗體：對應於SEQ ID NO：9或15的殘基24-34的L-CDR1、對應於SEQ ID NO：9或15的殘基50-56的L-CDR2以及對應於SEQ ID NO：9或15的殘基89-97的L-CDR3。視情況，CDR可以包含一個、兩個、三個、四個、或更多個胺基酸取代。

在一個方面中，抗NKG2A抗體係包含以下的抗體：對應於SEQ ID NO：4-8的殘基31-35的H-CDR1、對應於SEQ ID NO：4-8的殘基50-60(視情況50-66)的H-CDR2以及對應於SEQ ID NO：4-8的殘基99-114(根據Kabat的95-102)的H-CDR3、對應於SEQ ID NO：9的殘基24-34的L-CDR1、對應於SEQ ID NO：9的殘基50-56的L-CDR2以及對應於SEQ ID NO：9的殘基89-97的L-CDR3。

在一個方面中，抗NKG2A抗體係包含以下的抗體：分別具有SEQ ID NO：16-18的胺基酸序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：19-21的胺基酸序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域。

在一個方面中，該藥劑係莫納利珠單抗，即一種具有SEQ ID NO：5的重鏈可變區胺基酸序列和SEQ ID NO：9的輕鏈可變區胺基酸序列的抗 NKG2A抗體。在一個方面中，該藥劑係莫納利珠單抗，即一種具有SEQ ID NO：11的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO：15的輕鏈胺基酸序列的抗NKG2A抗體。

在一個方面中，該藥劑包含衍生自具有SEQ ID NO：22的胺基酸序列的VH的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在本發明的一個方面中，該藥劑包含衍生自具有SEQ ID NO：23的胺基酸序列的VL的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。在一個方面中，該藥劑包含衍生自具有SEQ ID NO：22的胺基酸序列的VH的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列，以及衍生自具有SEQ ID NO：23的胺基酸序列的VL的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。具有SEQ ID NO：22的重鏈可變區和SEQ ID NO：23的輕鏈可變區的抗體中和NKG2A的抑制性活性，並且還結合活化受體NKG2C、NKG2E或NKG2H。此抗體不與HLA-E競爭結合細胞表面上的NKG2A(即，它係NKG2A的非競爭性拮抗劑)。

(SEQ ID NO：22)

(SEQ ID NO：23)

在一個方面中，該藥劑包含可變重鏈(V_H)結構域(SEQ ID NO：22的胺基酸殘基31-35、50-60、62、64、66、和99-108以及可變輕鏈(V_L)結構域(SEQ ID NO：23)的胺基酸殘基24-33、49-55、和88-96，視情況具有一個、兩個、三個、四個、或更多個胺基酸取代。在一個方面中，該藥劑係人源化抗體，例如，如PCT公開號WO 2009/092805中所揭露的包含重鏈可變區和輕鏈可變區的藥劑，該專利的揭露內容藉由引用結合在此。

在一個方面中，該藥劑係完全人類抗體，該抗體針對上述抗體中的任一種結合的CD94/NKG2A表位而產生。

應當理解，雖然可以使用上述抗體，但是其他抗體也可以識別NKG2A多肽的任何部分並針對NKG2A多肽的任何部分而產生，只要該抗體引起NKG2A的抑制性活性的中和即可。例如，NKG2A的任何片段，較佳的是但不限於人類NKG2A或NKG2A片段的任何組合，都可以用作免疫原以產生抗體，並且這些抗體可以識別NKG2A多肽內的任何位置處的表位，只要它們可以在如本文所述的表現NKG2A的NK細胞上這樣做即可。視情況，該表位係由具有SEQ ID NO：4-8的重鏈可變區和SEQ ID NO：9的輕鏈可變區的抗體特異性識別的表位。

在一個方面中，該藥劑與美國專利案號8,206,709(其揭露內容藉由引用結合在此)中揭露的humZ270抗體競爭結合人類CD94/NKG2A受體的細胞外部分。可以在例如BiaCore實驗中測量競爭性結合，其中測量藥劑用於結合用humZ270飽和的固定化CD94/NKG2A受體(例如，從表現CD94/NKG2的細胞純化，或在生物系統中產生)的細胞外部分的能力。替代性地，測量藥劑與細胞的結合，這些細胞天然表現或過表現(例如，在暫態轉染或穩定轉染之後)CD94/NKG2A受體，並且已經與飽和劑量的Z270預溫育。在一個實施方式中，競爭性結合可以使用美國專利案號8,206,709中揭露的方法來測量，例如藉由使用流動式細胞測量術來評估與Ba/F3-CD94-NKG2A細胞的結合，如美國專利案號8,206,709的實例15中所示，該專利的揭露內容藉由引用結合在此。

PD-1中和劑

如本文所使用的，術語「PD-1」係指蛋白質程式性死亡1(PD-1)(也稱為「程式性細胞死亡1」)，係CD28受體家族的抑制性成員，該家族還包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。完整的人類PD-1序列可以GenBank登錄號U64863找到，如下示出：

(SEQ ID NO：2)。

「PD-1」還包括PD-1基因或編碼蛋白的任何變體、衍生物、或同種型。PD-1在活化的B細胞、T細胞、和骨髓細胞上表現(Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.[免疫學新見]14：391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol[免疫學雜誌]170：711-8)。該家族的最初成員CD28和ICOS係藉由加入單株抗體之後增強T細胞增殖的功能性效果而發現的(Hutloff等人(1999)Nature[自然]397：263-266；Hansen等人(1980)Immunogenics[免疫遺傳學]10：247-260)。已經鑒定出兩種PD-1配位基，PD-L1和PD-L2，這些配位基已示出在與PD-1結合時下調T細胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med[實驗醫學雜誌]192：1027-34；Latchman等人(2001)Nat Immunol[自然免疫學]2：261-8；Carter等人(2002年)Eur J Immunol[歐洲免疫學雜誌]32：634-43)。PD-L1和PD-L2兩者都是與PD-1結合但不與其他CD28家族成員結合的B7同源物。

完整的人類PD-L1序列可以UniProtKB/Swiss-Prot識別字Q9NZQ7-1找到，如下示出：MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL

(SEQ ID NO：3)。

PD-L1在多種人類癌症中廣泛存在(Dong等人(2002)Nat.Med.[自然醫學]8：787-9)。PD-1與PD-L1之間的相互作用導致腫瘤浸潤性淋巴細胞減少、T細胞受體介導的增殖減少和癌細胞的免疫逃避(Dong等人(2003)J.Mol.Med.[分子醫學雜誌]81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫學免疫療法]54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.[臨床癌症研究]10：5094-100)。藉由抑制PD-1與PD-L1的局部相互作用可以逆轉免疫抑制，並且當PD-1與PD-L2的相互作用也被阻斷時，該效果係相加的。

PD-1中和劑係中和PD-1或降低人類PD-1的抑制性活性的藥劑。在本發明的上下文中，「降低人類PD-1的抑制性活性」、「中和PD-1」或「中和人類PD-1的抑制性活性」係指其中由PD-1與其結合配偶體(諸如PD-L1或PD-L2)中的一種或多種的相互作用引起的PD-1的訊號轉導能力受到抑制的過程。中和PD-1的抑制性活性的藥劑減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與其結合配偶體(諸如PD-L1、PD-L2)中的一種或多種的相互作用引起的訊號轉導。因此，這種藥劑可以減少由或藉由T淋巴細胞上表現的細胞表面蛋白介導的負共刺激訊號，以便增強T細胞效應子功能，諸如增殖、細胞因子產生和/或細胞毒性。PD-1中和劑可以與PD-1和/或與其結合配偶體(諸如PD-L1和PD-L2)中的一種或多種相互作用。

在一些實施方式中，PD-1中和劑係抑制PD-L1與PD-1的結合的抗PD-L1單株抗體。在一些實施方式中，PD-1中和劑係抑制PD-1與PD-L1的結合的抗PD-1單株抗體。在一些實施方式中，PD-1中和劑係免疫粘附素(例如，包含與恒定區(例如，免疫球蛋白序列的Fc區)融合的PD-L1或PD-L2的細胞外或PD-1結合部分的免疫粘附素)。

在一些實施方式中，PD-1中和劑係抗PD-L1抗體。在一些實施方式中，PD-1中和劑選自由以下各項組成之群組：YW243.55.S70、MPDL3280A(阿特珠單抗(atezolizumab)，Tecentriq®)、MDX-1105、和德瓦魯單抗(MEDI4736，Imfinzi®)。MDX-1105，也稱為BMS-936559，係WO 2007/005874中描述的抗PD-L1抗體。抗體YW243.55.S70係WO 2010/077634中描述的抗PD-L1。可用於本發明的方法的抗PD-L1抗體的實例及其製備方法也描述於WO 2010/077634 A1和美國專利案號8,217,149中，這些專利藉由引用結合在此。

在一些實施方式中，PD-1中和劑係作為德瓦魯單抗的PD-L1抗體。德瓦魯單抗(MEDI4736，Imfinzi^TM)係針對人類PD-L1的能夠阻斷PD-L1與PD-1和CD80受體兩者的結合的人類單株抗體。與德瓦魯單抗(durvalumab)相關的揭露內容可以在美國專利案號8,779,108和9,493,565中找到，這些專利藉由引用結合在此。德瓦魯單抗分別具有胺基酸序列SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27的重鏈和輕鏈。德瓦魯單抗的重鏈可變區在SEQ ID NO：24中示出，並且德瓦魯單抗的輕鏈可變區在SEQ ID NO：25中示出。

在另一個實施方式中，PD-1中和劑係與德瓦魯單抗競爭結合PD-L1的抗PD-L1抗體(或其抗原結合部分)。在一些實施方式中，抗PD-L1抗體與德瓦魯單抗結合相同的表位。在某些實施方式中，抗PD-L1抗體具有與德瓦魯單抗相同的重鏈和輕鏈CDR。

在一個方面中，PD-1中和劑(例如，衍生自德瓦魯單抗的藥劑)包含(i)SEQ ID NO：24或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的重鏈可變區，和(ii)SEQ ID NO：25或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的輕鏈可變區。在一個方面中，PD-1中和劑(例如，衍生自德瓦魯單抗的藥劑)包含(i)SEQ ID NO：26或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的重鏈，和(ii)SEQ ID NO：27或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個方面中，PD-1中和劑包含衍生自包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的重鏈可變區的H-CDR1、H-CDR2和/或H-CDR3序列。在一個方面中，PD-1中和劑包含衍生自包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的輕鏈可變區的L-CDR1、L-CDR2和/或L-CDR3序列。視情況，CDR根據Kabat確定。

在一個方面中，PD-1中和劑包含：分別具有SEQ ID NO：28-30的胺基酸序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：31-33的胺基酸序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3結構域。

德瓦魯單抗的重鏈可變區：

(SEQ ID NO：24)

德瓦魯單抗的輕鏈可變區

(SEQ ID NO：25)

德瓦魯單抗的重鏈(可變區加底線)

(SEQ ID NO：26)

德瓦魯單抗的輕鏈(可變區加底線)

(SEQ ID NO：27)

德瓦魯單抗，重鏈CDR：

H-CDR1：GFTFSRYWMS(SEQ ID NO：28)

H-CDR2：NIKQDGSEKYYVDSVKG(SEQ ID NO：29)

H-CDR3：EGGWFGELAFDY(SEQ ID NO：30)

德瓦魯單抗，輕鏈CDR：

L-CDR1：RASQRVSSSYLA(SEQ ID NO：31)

L-CDR2：DASSRAT(SEQ ID NO：32)

L-CDR3：QQYGSLPWT(SEQ ID NO：33)

在另一個實施方式中，PD-1中和劑係作為阿特珠單抗的抗PD-L1抗體(MPDL3280A，Tecentriq®，CAS登記號：1422185-06-5)。視情況，抗PD-L1抗體包含具有以下胺基酸序列的重鏈可變區：

(SEQ ID NO：34)

或者

(SEQ ID NO：35)

以及具有以下胺基酸序列的輕鏈可變區：

(SEQ ID NO：36)。

在一個方面中，PD-1中和劑包含(i)SEQ ID NO：37或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的重鏈或重鏈可變區，和(ii)SEQ ID NO：38或者與其具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的胺基酸序列的輕鏈或輕鏈可變區。

(SEQ ID NO：37)

(SEQ ID NO： 38)。

在一些實施方式中，PD-1中和劑係抑制PD-1與PD-L1的結合的抗PD-1抗體。在一個實施方式中，抗PD-1抗體係納武單抗。納武單抗(也稱為「OPDIVO®」；以前稱為5C4、BMS-936558、MDX-1106、或ONO-4538)係完全人類IgG4(S228P)PD-1免疫檢查點抑製劑抗體，該抗體選擇性地阻止與PD-1配位基(PD-L1和PD-L2)的相互作用，從而阻斷抗腫瘤T細胞功能的下調(美國專利案號8,008,449；Wang等人2014 Cancer Immunol Res.[癌症免疫學研究]2(9)：846-56)。在另一個實施方式中，抗PD-1抗體或其片段與納武單抗競爭結合PD-1。在一些實施方式中，抗PD-1抗體與納武單抗結合相同的表位。在某些實施方式中，抗PD-1抗體具有與納武單抗相同的重鏈和輕鏈CDR。

在另一個實施方式中，抗PD-1抗體係帕姆單抗。帕姆單抗(也稱為「KEYTRUIDA®」，蘭伯麗珠單抗(lambrolizumab)和MK-3475)係針對人類細胞表面受體PD-1的人源化單株IgG4抗體。帕姆單抗描述於，例如，美國專利案號8,900,587中)。帕姆單抗已被FDA批准用於治療復發性或難治性黑素瘤和晚期NSCLC。在另一個實施方式中，抗PD-1抗體(或其抗原結合片段)與帕姆單抗競爭結合PD-1。在一些實施方式中，抗PD-1抗體與帕姆單抗結合相同的表位。在某些實施方式中，抗PD-1抗體具有與帕姆單抗相同的重鏈和輕鏈CDR。

NKG2A中和劑或PD-1中和劑(諸如抗體)可以從1mg/ml至500mg/ml的濃度摻入藥物製劑中，其中所述製劑具有從2.0至10.0的pH。NKG2A中和劑和PD-1中和劑可以包含在相同的或單獨的藥物製劑中。該製劑可以進一步包含緩衝系統、一種或多種防腐劑、一種或多種張度劑、一種或多種螯合劑、穩定劑和表面活性劑。在一個實施方式中，藥物製劑係含水製劑，即包含水的製劑。這種製劑典型地是溶液或懸浮液。在另一個實施方式中，藥物製劑係含水溶液。術語「含水製劑」被定義為包含至少50% w/w水的製劑。同樣，術語「含水溶液」被定義為包含至少50% w/w水的溶液，並且術語「含水懸浮液」被定義為包含至少50% w/w水的懸浮液。

在另一個實施方式中，藥物製劑係冷凍乾燥的製劑，醫師或患者在使用之前向其中加入溶劑和/或稀釋劑。

在另一個實施方式中，藥物製劑係準備在沒有任何預先溶解的情況下使用的乾燥製劑(例如，冷凍乾燥或噴霧乾燥的製劑)。

在另一個方面中，藥物製劑包含這種抗體的含水溶液和緩衝液，其中抗體以從1mg/ml或更高的濃度存在，並且其中所述製劑具有從約2.0至約10.0的pH。

在另一個實施方式中，製劑的pH在選自以下列表的範圍內，該列表由以下各項組成：從約2.0至約10.0、約3.0至約9.0、約4.0至約8.5、約5.0至約8.0、和約5.5至約7.5。

在另一個實施方式中，緩衝液選自由以下各項組成之群組：乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、雙甘胺肽、組胺酸、甘胺酸、賴胺酸、精胺酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、和三(羥甲基)-胺基甲烷、二(羥乙基)甘胺酸、三(羥甲基)甲基甘胺酸、蘋果酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、天冬胺酸或其混合物。這些特定緩衝液中的每一個構成本發明的替代性實施方式。

在另一個實施方式中，該製劑進一步包含藥學上可接受的防腐劑。在另一個實施方式中，該製劑進一步包含等滲劑。在另一個實施方式中，該製劑還包含螯合劑。在本發明的另一個實施方式中，該製劑進一步包含穩定劑。在另一個實施方式中，該製劑進一步包含表面活性劑。為方便起見，請參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy[雷明頓：藥學的科學與實踐]，第19版，1995年。

其他成分可能存在於本發明的藥物製劑中。這類附加成分可以包括潤濕劑、乳化劑、抗氧化劑、增量劑、張力調節劑、螯合劑、金屬離子、油質媒介物、蛋白質(例如，人類血清白蛋白、明膠或蛋白質)和兩性離子(例如，胺基酸，諸如甜菜鹼、牛磺酸、精胺酸、甘胺酸、賴胺酸和組胺酸)。當然，這類附加成分不應當對本發明的藥物製劑的總體穩定性產生不利影響。

根據本發明的藥物組成物的給予可以藉由若干種給予途徑，例如靜脈內給予進行。合適的抗體製劑也可以藉由檢查其他已經開發的治療性單株抗體的經驗來確定。

還提供了套組(kit)，例如包括以下的套組：

(i)含有NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體和PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體的藥物組成物，或

(ii)含有PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體的第一藥物組成物，和含有NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體的第二藥物組成物，或

(iii)含有NKG2A中和劑(諸如抗NKG2A抗體)的藥物組成物，和與PD-1中和劑(諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體)一起給予所述NKG2A中和劑的說明書，或

(iv)含有PD-1中和劑(諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體)的藥物組成物，和與NKG2A中和劑(諸如抗NKG2A抗體)一起給予所述PD-1中和劑的說明書。

藥物組成物可以視情況被指定為包含藥學上可接受的載體。NKG2A或PD-1中和劑可以視情況被指定為以適用於本文的方法中的任一種的治療有效量存在。套組視情況還可以包括說明書，例如包括給予方案，以允許操作者(例如，醫師、護士、或患者)向患有癌症(例如，實體瘤，特別是非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤和/或在兩個或更多個微衛星標記中檢測不到微衛星不穩定性的腫瘤)的患者給予包含在這些套組中的組成物。在任何實施方式中，套組視情況可以包括與所述PD-1中和劑同時、分開或依次給予所述NKG2A中和劑的說明書。該套組還可以包括注射器。

視情況，這些套組包括單劑量藥物組成物的多個包裝，每個含有有效量的NKG2A中和劑和/或PD-1中和劑(諸如抗PD-1或PD-L1抗體)，用於根據上文提供的方法進行單次給予。給予一種或多種藥物組成物所必需的器械或裝置也可以包括在套組中。例如，套組可以提供一個或多個預填充的注射器，這些注射器含有一定量的抗NKG2A抗體、抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體。

在一個實施方式中，本發明提供了一種用於在人類患者中治療癌症或腫瘤的套組，其中所述癌症或腫瘤係非MSI-H的和/或非DNA錯配修復缺陷性的，該套組包括：

(a)一定劑量的抗NKG2A抗體，該抗體包含具有SEQ ID NO：4-8中的任一個中所列出序列的重鏈可變區的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域，以及具有SEQ ID NO：9中所列出序列的輕鏈可變區的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域；和/或

(b)一定劑量的抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體，視情況一定劑量的德瓦魯單抗，視情況一定劑量的抗PD-L1抗體，該抗體包含德瓦魯單抗的重鏈和輕鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域，視情況具有SEQ ID NO：24中所列序列的重鏈可變區的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域，以及具有SEQ ID NO：25中所列序列的輕鏈可變區的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域；以及

(c)視情況，用於在本文所述的任何方法中使用所述抗NKG2A抗體和/或所述抗PD-1或PD-L1抗體的說明書。

(a)一定劑量的抗NKG2A抗體，該抗體包含分別具有SEQ ID NO：16-18的序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：19-21的序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域；和/或

(b)一定劑量的抗PD-L1抗體，該抗體包含分別具有SEQ ID NO：28-30的胺基酸序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：31-33的胺基酸序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域；以及

惡性腫瘤的診斷、預後、和治療

描述了可用於癌症的診斷、預後、監測和治療之方法，該癌症特別是結直腸癌，視情況晚期復發性或轉移性結直腸癌，其特徵在於是非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤和/或是微衛星穩定的腫瘤。如本文所使用的，結直腸癌(CRC)係指結腸癌、直腸癌、和結直腸癌(結腸和直腸區域二者的癌症)。

微衛星係遍佈基因組分佈的重複的DNA序列。雖然這些微衛星的長度在人與人之間變化很大，但每個人都具有固定長度的微衛星。這些重複序列很常見，也很正常。人類中最常見的微衛星係CA的二核苷酸重複序列，該重複序列在整個基因組中出現數萬次。然而，在具有DNA修復基因突變的細胞中，這些序列中的一些累積錯誤並變得更長或更短。個體DNA中異常長或短的微衛星的出現被稱為微衛星不穩定性(MSI)。微衛星不穩定性係由受損的DNA錯配修復(MMR)導致的遺傳超突變性的情況。微衛星不穩定性(MSI)的存在代表MMR不能正常運作的表型證據。微衛星不穩定性的缺失被稱為微衛星穩定性(MSS)。

MSI係若干種癌症的關鍵因素，這些癌症包括結直腸癌、子宮內膜癌、卵巢癌和胃癌(Soreide等人(2006)The British Journal of Surgery[英國外科雜誌]93：395-406；Ali-Fehmi等人(2006)International Journal of Gynecological Pathology[國際婦科病理學雜誌]25：223-229；Vauhkonen等人(2006)Clinical Gastroenterology[臨床胃腸病學]20：651-674)。

結直腸癌研究已經證明了MSI發生的兩種機制。第一種係遺傳性非息肉病性結直腸癌(HNPCC)或林奇綜合征，其中DNA錯配修復基因中的遺傳性突變導致微衛星重複序列複製錯誤不被解決。複製錯誤導致移碼突變，該移碼突變使主要腫瘤抑制基因失活或改變，並最終預防癌症。MSI導致結直腸癌的第二種機制係表觀遺傳改變，該改變使基本的DNA錯配修復基因沈默。在兩種情況下，腫瘤抑制基因編碼區內的微衛星插入和缺失導致不受控制的細胞分裂和腫瘤生長。

國家癌症研究所已推薦五種標記來篩選HNPCC腫瘤中的MSI(經常稱為「貝塞斯達(Bethesda)標記」)。MSI存在的這五個標記係：兩個單核苷酸重複序列BAT25和BAT26，以及三個二核苷酸重複序列D5S346、D2S123、和D17S250(Umar等人(2004)Journal of the National Cancer Institute[國家癌症研究所雜誌]96：261-268)。一般來講，五個「貝塞斯達標記」中的兩個中的MSI檢測被認為是MSI的陽性結果或高概率(MSI-高或MSI-H)。用於檢測生物樣品中MSI的標準方法包括使用Promega^TM的微衛星不穩定性測定(MSI分析系統)，該測定包括根據它們的敏感性和特異性選擇的五種單核苷酸標記，這五種標記係：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24和MONO27(Bacher等人(2004年)Disease Markers[疾病標記]20：237-250))。

在大多數情況下，MSI腫瘤中的不穩定性的遺傳基礎係五種人類MMR基因中任何一種或多種的遺傳性生殖系改變：MSH2、MLH1、MSH6、PMS2、和PMS1。

最近發現了另一種MSI，稱為選定的四核苷酸重複序列處升高的微衛星改變(EMAST)。然而，EMAST的獨特之處在於它不是衍生自MMR，並且通常與TP53突變相關聯(Boland等人(2010)Gastroenterology[胃腸病學]138(6)：2073-2087)。

因此，可以藉由評估微衛星標記和/或MMR基因來確定腫瘤中的微衛星不穩定性。

在某些實施方式中，用NKG2A中和劑和PD-1中和劑的組合治療的個體沒有不穩定性(MSS)，並且在MSH2、MLH1、MSH6和PMS2基因或蛋白質(進一步視情況PMS1)中的任一種中都沒有改變(例如，突變、表現缺陷)。

在一些實施方式中，本發明包括一種在個體中治療腫瘤(例如，結直腸腫瘤)之方法，該方法包括：(i)鑒定患有非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤的個體，和(ii)向個體給予有效量的NKG2A中和劑和有效量的PD-1中和劑。視情況，個體患有不具有微衛星不穩定性的腫瘤(腫瘤係MSS穩定的)，並且在MSH2、MLH1、MSH6和PMS2基因或蛋白質中沒有任何改變。

可以在給予任何組成物或使用本文揭露的任何方法之前，在個體中測量腫瘤的DNA錯配修復狀態，視情況是MMR狀態和/或微衛星狀態。

可以獲得並評估來自個體的生物樣品，例如來自活組織檢查的生物樣品。MMR狀態和/或微衛星狀態可以藉由本領域已知的任何方法來確定，參見例如，Umar等人Journal of the National Cancer Institute[國家癌症研究所雜誌]2004；96(4)：261-268，以及Bacher等人Disease Markers[疾病標記]2004年；20：237-250。在一個實施方式中，藉由免疫組織化學分析評估MMR狀態，證明以下蛋白質中的任何一種或多種的表現的存在或不存在：MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2。在一個實施方式中，藉由檢測微衛星標記中的高頻微衛星不穩定性來評估微衛星狀態，這些微衛星標記例如BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO27、D5S346、D2S123、和D17S250。在一個實施方式中，檢測到兩種或更多種微衛星標記(例如BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和/或MONO27)的微衛星不穩定性指示MSI-H狀態，而單個MSI標記的微衛星不穩定性或所測試的MSI標記中的任一種都沒有不穩定性則分別被解釋為微衛星不穩定性-低(MSI-L)和微衛星穩定性(MSS)。

在一個實施方式中，非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤或是MSS的腫瘤不具有微衛星不穩定性，或者在少於兩個或更多個微衛星標記(例如，BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、或MONO27)中檢測到微衛星不穩定性，並且在蛋白質MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2中的任一種或多種上不存在蛋白質表現。

在一些實施方式中，本發明包括一種在個體中治療腫瘤(例如，結直腸腫瘤)之方法，該方法包括：(i)鑒定患有MSS腫瘤的個體，和(ii)向個體給予有效量的NKG2A中和劑，視情況進一步向個體給予有效量的PD-1中和劑。在一些實施方式中，本發明提供了一種治療腫瘤(例如，結直腸腫瘤)之方法，該方法包括：(i)鑒定患有非MSI-高(MSI-H)腫瘤(例如，MSS或MSI-低腫瘤)的腫瘤的個體，和(ii)向個體給予有效量的NKG2A中和劑，視情況進一步向個體給予有效量的PD-1中和劑。

在一個實施方式中，MSI-H腫瘤具有大於至少約30%的不穩定MSI標記。在一個實施方式中，MSI-L腫瘤確實具有不穩定的MSI標記，但所述腫瘤的MSI標記的小於約10%、小於約20%、或小於約30%係不穩定的MSI標記。在一個實施方式中，MSS腫瘤不具有不穩定的MSI標記。在一些實施方式中，當小於約30%、小於約20%或小於約10%的所測試的MSI標記表現出不穩定性時，結直腸癌係MSI-L的。在一些實施方式中，當所測試的MSI標記均未表現出不穩定性時，結直腸癌係MSS的。

在某些實施方式中，本發明涉及一種治療係MSI-L或MSS的癌症的方法。

在某些實施方式中，本發明涉及一種治療癌症之方法，該方法包括1)鑒定腫瘤的微衛星狀態，和2)基於微衛星狀態向受試者給予療法(例如， NKG2A中和劑和PD-1中和劑)。在其他實施方式中，受試者具有MSI-L。在實施方式中，患者係MSI穩定的。

當治療具有非DNA錯配修復缺陷性腫瘤的個體時，可以有利地根據本文所述的治療方案視情況向患有癌症的個體給予中和人類NKG2A多肽的抑制性活性的化合物(例如，抗體)，該個體已經接受手術或正在進行手術以去除癌細胞。中和抗NKG2A抗體，視情況在不存在PD-1中和劑(例如，中和抗PD-1或抗PD-L1抗體)的情況下或視情況與該PD-1中和劑組合，來治療罹患癌症(特別是CRC和mCRC)的受試者。在一個實施方式中，本發明提供了一種抗NKG2A抗體和進一步視情況組合的抗PD-1抗體，以治療患有實體瘤(例如，實體瘤、晚期難治性實體瘤)的受試者。在一個具體實施方式中，抗NKG2A抗體包含SEQ ID NO：4-8中任一個的重鏈可變區和SEQ ID NO：9的輕鏈可變區。在一個實施方式中，中和PD-1的抑制性活性的抗體選自由以下各項組成之群組：帕姆單抗、納武單抗、德瓦魯單抗和MPDL3280A，特別是德瓦魯單抗。

如本文所使用的，輔助給予或組合給予(共給予)包括化合物以相同劑型或不同劑型的同時給予或化合物的分開給予(例如，依次給予)。因此，NKG2A中和劑可以與PD-1中和劑組合使用。例如，抗NKG2A抗體和抗PD-1或抗PD-L1抗體可以在單一製劑中同時給予。替代性地，可以配製NKG2A中和劑和PD-1中和劑以分開給予，並且同時給予或依次給予。

視情況，儘管進行手術和/或用治療劑(例如，化學治療劑或放射療法)治療(例如，在此期間或之後)，個體還是可能患有耐藥、無反應、復發和/或進展的癌症。在本文的任何實施方式中，治療反應可以根據熟知的規範來定義和/或評估，例如根據實體瘤的反應評估規範(RECIST)，諸如版本1.1，參見Eisenhauer等人(2009)Eur.J.Cancer[歐洲癌症雜誌]45：228-247，或者免疫相關的反應規範(irRC)，參見Wolchock等人(2009)Clinical Cancer Research[臨床癌症研究]15：7412-7420。

在另一個實施方式中，本揭露提供了一種用於在患有非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤的個體中治療或預防CRC之方法，該方法包括：

a)鑒定患有非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤的個體，視情況獲得包含來自個體的腫瘤細胞的生物樣品並確定腫瘤是否是DNA錯配修復缺陷性的，

b)在來自個體的樣品中檢測表現PD-L1的細胞(例如，腫瘤細胞、腫瘤浸潤性免疫細胞、腫瘤浸潤性巨噬細胞)，並且

c)一旦確定表現PD-L1的細胞包含在樣品中，就向個體給予中和NKG2A的抑制性活性的藥劑與中和PD-1的抑制性活性的藥劑的組合。PD-L1參考水平的特徵可以在於任何合適的常規使用的參考水平。例如，如果1%或更多、視情況5%或更多、視情況10%或更多、視情況50%或更多的腫瘤細胞或來自腫瘤組織樣品的細胞表現PD-L1(例如，使用基於免疫組織化學的測定)。此類測定的實例包括來自丹麥達克A/S(Dako Denmark A/S)的pharmDx的PD-L1 IHC 22C3測定。在此測定中，使用腫瘤比例評分(TPS)，即針對PD-L1染色的腫瘤細胞的百分比(0%至100%)，測量PD-L1表現水平。視情況，參考水平係非高PD-L1表現的水平，視情況其中少於50%的腫瘤細胞表現PD-L1(例如，患者具有小於50%的TPS)。

本文所述的治療方案和方法可以與在從個體獲得的生物樣品(例如，包含癌細胞、癌組織或癌旁組織的生物樣品)中檢測細胞上的HLA-E表現的先前步驟一起使用或不一起使用。在一個實施方式中，用本文揭露的方法治療的癌症係特徵在於高水平HLA-E的癌症。然而，應當理解，患有癌症的患者可以用NKG2A中和劑與評估HLA-E在腫瘤細胞表面上的表現的先前檢測步驟一起或不一起進行治療。有利地，治療方法可以包括在來自個體的腫瘤的(例如，腫瘤細胞上的)生物樣品中檢測HLA-E核酸或多肽的步驟。確定生物樣品表現HLA-E(例如，與參考相比的突出表現；高水平表現HLA-E、用抗HLA-E抗體高強度染色)指示個體患有癌症，該癌症可能會從用抑制NKG2A的藥劑的治療中獲得強大的益處。在一個實施方式中，該方法包括在生物樣品中確定HLA-E核酸或多肽的表現水平，並將該水平與對應於健康個體的參考水平(例如，值、弱細胞表面染色等)進行比較。確定生物樣品以與參考水平相比增加的水平表現HLA-E核酸或多肽可以指示個體患有可以用抑制NKG2A的藥劑治療的癌症。

確定個體是否患有表現HLA-E多肽的癌細胞可以，例如，包括從個體獲得包含癌細胞的生物樣品(例如，藉由進行活組織檢查)，使所述細胞與結合HLA-E多肽的抗體接觸，並檢測細胞是否在其表面上表現HLA-E。視情況，確定個體是否患有表現HLA-E的癌細胞包括進行免疫組織化學測定。視情況，確定個體是否患有表現HLA-E的癌細胞包括進行流動式細胞測量術測定。

在治療方法中，當NKG2A中和劑與抗PD-1或抗PD-L1抗體組合給予時，NKG2A中和劑和抗PD-1或抗PD-L1抗體可以分開、一起或依次給予，或以混合物形式給予。在一些實施方式中，在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之前給予NKG2A中和劑。例如，可以在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之前大約0至30天給予NKG2A中和劑。在一些實施方式中，在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之前從約30分鐘至約2週、從約30分鐘至約1週、從約1小時至約2小時、從約2小時至約4小時、從約4小時至約6小時、從約6小時至約8小時、從約8小時至1天、或從約1至5天給予抗體NKG2A中和劑。在一些實施方式中，在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體的同時給予NKG2A中和劑。在一些實施方式中，在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之後給予NKG2A中和劑。例如，可以在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之後大約0至30天給予NKG2A中和劑。在一些實施方式中，在給予抗PD-1或抗PD-L1抗體之後從約30分鐘至約2週、從約 30分鐘至約1週、從約1小時至約2小時、從約2小時至約4小時、從約4小時至約6小時、從約6小時至約8小時、從約8小時至1天、或從約1至5天給予NKG2A中和劑。

用抗NKG2A抗體治療人類的示例性治療方案包括，例如，向患者給予有效量的抑制NKG2A的抗體，其中該方法包括至少一個給予週期，其中以1-10mg/kg體重的劑量給予至少一個劑量的抗NKG2A抗體。在一個實施方式中，給予週期在2週與8週之間。

用抗NKG2A抗體治療人類的示例性治療方案包括，例如，向患者給予有效量的抑制NKG2A的抗體和中和人類PD-1的抑制性活性的抗體中的每一種，其中該方法包括至少一個給予週期，其中以0.1-10mg/kg體重或1-10mg/kg體重的劑量給予至少一個劑量的抗NKG2A抗體，並且以1-20mg/kg體重的劑量給予至少一個劑量的抗PD-1或抗PD-L1抗體。在一個實施方式中，給予週期在2週與8週之間。

在一個實施方式中，該方法包括至少一個給予週期，其中該週期為八週或更短的時間段，其中對於至少一個週期中的每一個，以1-10mg/kg體重的劑量給予兩個、三個或四個劑量的抗NKG2A抗體。在一個實施方式中，每個週期進一步包括以1-20mg/kg體重的劑量給予兩個、三個或四個劑量的抗PD-1或抗PD-L1抗體。

可以有利地給予抗NKG2A抗體，該給予量在循環中實現係基本上完全(例如，90%、95%)受體飽和所需的濃度的至少10倍、20倍或30倍高的濃度(例如，如藉由滴定表現NKG2A的細胞上的抗NKG2A抗體所評估的，例如在PBMC中)，或者視情況，該給予量在血管外組織(例如，腫瘤組織或環境)中實現係基本上完全受體飽和所需的濃度的至少10倍、20倍或30倍高的濃度(例如，如藉由在表現NKG2A的細胞上滴定抗NKG2A抗體所評估，例如在PBMC中)。

可以使用表現NKG2A的NK細胞對表現HLA-E的靶細胞的細胞毒活性的合適測定來評估NKG2A+ NK細胞反應。實例包括基於NK細胞活化的標記(例如，CD107或CD137表現)的測定。有利地，可以給予一定量的抗NKG2A抗體，以便實現和/或維持至少10μg/ml的連續(最小)組織濃度。例如，為了在組織中實現/維持10μg/ml而實現和/或維持的血液濃度可以在100-110μg/ml、100-120μg/ml、100-130μg/ml、100-140μg/ml、100-150μg/ml、100-200μg/ml、100-250μg/ml或100-300μg/ml之間。

具有約10μg/ml的針對NKG2A+ NK細胞反應的EC₁₀₀的用於本文的實例中的抗NKG2A抗體(諸如humZ270(莫納利珠單抗))的示例性治療方案包括至少一個給予週期，其中以約10mg/kg體重、視情況2-10mg/kg體重、視情況4-10mg/kg體重、視情況6-10mg/kg體重、視情況2-6mg/kg體重、視情況2-8mg/kg體重、或視情況2-4mg/kg體重的劑量給予至少一個劑量的抗NKG2A抗體。視情況，給予至少2、3、4、5、6、7或8個劑量的抗NKG2A抗體。在一個實施方式中，給予週期在2週與8週之間。在一個實施方式中，給予週期為8週。在一個實施方式中，給予週期為8週，並且包括每兩週給予一個劑量的抗NKG2A抗體(即，總共四個劑量)。

在本文的實施方式中的任一個的一個方面中，抗NKG2A抗體約每兩週給予一次。

用於與抗NKG2A抗體一起使用的示例性治療方案包括例如，每月兩次以一定量向患者給予抗NKG2A抗體，該量有效地在抗NKG2A抗體的至少兩次連續給予之間維持至少40μg/ml的抗NKG2A抗體的連續血液濃度，抗NKG2A抗體在2-10mg/kg體重之間、視情況2-6mg/kg體重、視情況2-4mg/kg 體重、視情況約4mg/kg體重。可以視情況給予這些劑量，以便在整個治療週期中提供至少40μg/ml的抗NKG2A抗體的連續血液濃度。實現40μg/ml的抗NKG2A抗體的血液濃度預期提供約4μg/ml的組織(例如，血管外組織、腫瘤環境)濃度，進而對應於抗體(諸如人源化Z270(莫納利珠單抗))的EC₅₀。

用於與抗NKG2A抗體一起使用的示例性治療方案包括例如，向患者給予有效量的抗NKG2A抗體，其中該抗體每月2次給予並且有效地在抗NKG2A抗體的至少兩次連續給予之間維持至少100μg/ml的抗NKG2A抗體的連續血液濃度的量在4-10mg/kg體重之間、視情況4-6mg/kg體重、視情況4-8mg/kg體重、視情況約4mg/kg體重、視情況約6mg/kg體重、視情況約8mg/kg體重、或視情況約10mg/kg體重。可以視情況給予這些劑量，以便在整個治療週期中提供至少100μg/ml的抗NKG2A抗體的連續血液濃度。實現100μg/ml的抗NKG2A抗體的血液濃度預期提供約10μg/ml的組織(例如，血管外、腫瘤環境)濃度，進而對應於抗體(諸如人源化Z270)的EC₁₀₀。

在某些實施方式中，抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)的劑量(例如，每個劑量)以0.1、0.3、1、3、4、6、8或10mg/kg給予。在某些實施方式中，抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)的劑量(例如，每個劑量)以7.5mg、22.5mg、75mg、225mg或750mg的固定劑量給予，視情況每兩週給予。在某些實施方式中，抗PD-1抗體的劑量(例如，每個劑量)以1-20mg/kg、視情況以10mg/kg給予。在某些實施方式中，抗PD-L1抗體(例如，德瓦魯單抗)的劑量(例如，每個劑量)以10、15、20或25mg/kg、視情況以750mg總劑量、視情況以1500mg總劑量給予，視情況每4週給予。在某些實施方式中，組合療法允許抗PD-1或PD-L1抗體以較低劑量給予。

在一個實施方式中，抗NKG2A抗體和抗PD-1或抗PD-L1抗體以下列劑量給予：

(a)0.1-10mg/kg抗NKG2A抗體和(i)1-10mg/kg抗PD-1抗體或(ii)1-20mg/kg抗PD-L1抗體；

(b)1-10mg/kg抗NKG2A抗體和(i)1-10mg/kg抗PD-1抗體或(ii)1-20mg/kg抗PD-L1抗體；

(c)225mg抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)和750mg/kg抗PD-L1抗體(例如，德瓦魯單抗)；

(d)750mg抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)和750mg/kg抗PD-L1抗體(例如，德瓦魯單抗)；

(e)225mg抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)和1500mg/kg抗PD-L1抗體(例如，德瓦魯單抗)；或者

(f)750mg抗NKG2A抗體(例如，莫納利珠單抗)和1500mg/kg抗PD-L1抗體(例如，德瓦魯單抗)。

在本文的實施方式中的任一個的一個方面中，抗NKG2A抗體約每兩週給予一次，視情況每四週給予一次。在本文的實施方式中的任一個的一個方面中，抗PD-1或抗PD-L1抗體約每四週給予一次。

在一個實施方式中，抗PD-1或抗PD-L1抗體和/或抗NKG2A抗體藉由靜脈內給予。在一個實施方式中，每四週給予抗PD-1或抗PD-L1抗體，並且每兩週給予抗NKG2A抗體，其中每隔四週，抗PD-1或抗PD-L1抗體和NKG2A抗體在同一天給予，進一步視情況藉由靜脈內給予。

在一個實施方式中，提供了一種用於評估個體是否適合用抑制NKG2A的藥劑(和進一步視情況中和人類PD-1的抑制性活性的藥劑)治療之方法，該方法包括在來自個體的生物樣品中評估腫瘤DNA錯配修復狀態。確定個體患有非DNA錯配修復缺陷性的腫瘤指示患者患有可以用抑制NKG2A的藥劑治療的癌症，該藥劑進一步視情況與中和人類PD-1的抑制性活性的藥劑組合。在一個實施方式中，該方法用於評估個體是否適合用根據本文揭露的給予方案給予的抑制NKG2A的藥劑和中和人類PD-1的抑制性活性的藥劑治療。

在另一個方面中，提供了一種降低癌症進展風險、降低CRC(視情況mCRC)中另外的癌症的風險和/或提供用於在人類個體中減少癌症進展的治療方案之方法，該方法包括以根據本揭露的劑量和頻率向患者給予一定量的NKG2A中和劑和PD-1中和劑。在另一個方面中，提供了一種在個體(諸如人類患者)中促進癌症(特別是結直腸癌)緩解之方法，該方法包括以根據本揭露的劑量和頻率向個體給予包含NKG2A中和劑和PD-1中和劑的藥物組成物，以便在個體中促進癌症緩解。在另一個方面中，提供了一種在個體(諸如人類患者)中預防癌症(特別是結直腸癌)復發之方法，該個體的癌症在先前的抗癌治療之後處於緩解期，該方法包括以根據本揭露的劑量和頻率向個體給予包含NKG2A中和劑和PD-1中和劑的組成物，以便在個體中促進癌症緩解。在另一個方面中，提供了一種在被診斷患有癌症(特別是結直腸癌)的人類患者中增加相關時間段內存活的可能性之方法，該方法包括向患者給予包含NKG2A中和劑和PD-1中和劑的藥物組成物。在另一個方面中，提供了一種改善癌症患者的生活品質之方法，該方法包括以有效改善患者的生活品質的量向患者給予包含NKG2A中和劑和PD-1中和劑的藥物組成物。在另一個方面中，本文所述的方法可以用於顯著減少人體中的癌細胞數量，這樣使得例如癌細胞的總數減少。在相關意義上，提供了一種用於在哺乳動物(諸如人類癌症患者)中殺傷(例如，直接或間接導致死亡)癌細胞(特別是結直腸癌細胞)的方法。在本文所述的方法的再其他實施方式中，所述個體患有非MSI-高(MSI-H)的和/或非DNA錯配修復(MMR)缺陷性的腫瘤。

NKG2A中和劑與PD-1中和劑的組合可以在與一種或多種另外的治療劑或療法組合給予(共給予)中來給予。

實例

實例1：劑量發現係德瓦魯單抗與莫納利珠單抗組合的1期多中心開放標籤單臂劑量遞增和劑量擴展研究

進行德瓦魯單抗與莫納利珠單抗組合的1期多中心開放標籤單臂劑量遞增和劑量擴展研究(參見WHO Drug Information[世界衛生組織藥物資訊]第30卷，第1期，2016；也稱為IPH2201；具有SEQ ID NO：11的重鏈和SEQ ID NO：15的輕鏈的抗體)以在患有選定的晚期實體瘤的成年受試者中評估安全性、耐受性、PK、免疫原性、藥效學、和抗腫瘤活性。該研究由2個部分組成：劑量遞增和劑量擴展。

受試者經由2次單獨的靜脈內輸注接受德瓦魯單抗和莫納利珠單抗。受試者接受德瓦魯單抗和莫納利珠單抗，直到出現不可接受的毒性、確認進行性疾病(PD)的記錄或受試者出於另一種原因退出的記錄。

入選規範包括：

1.受試者必須具有晚期復發性或轉移性癌症的組織學記錄。

2.受試者必須在復發性/轉移性環境中已接受至少一系列標準全身療法並且已有所進展或者至少一系列標準全身療法難以治癒，具有選定的晚期實體瘤。

3.受試者必須至少有一個可由RECIST v1.1測量的病灶

排除規範如下：」

1.用免疫療法藥劑預先治療。在與醫學監測者討論後，可以允許使用抗腫瘤疫苗進行預先治療。

2.之前參與包括單獨或組合使用德瓦魯單抗的臨床研究，其中該研究具有登記意圖並且主要終點的分析尚未完成

3.在第一劑量的德瓦魯單抗和莫納利珠單抗之前的4週內接受任何常規的或研究性的抗癌療法

4.用於癌症治療的任何同步化學療法、免疫療法、生物或激素療法。針對非癌症相關的病狀同步使用激素係可接受的。在DLT評估期之後，藉由事先諮詢並與醫學監測者達成一致，可接受出於緩和意圖的孤立性病灶的局部治療。

5.在第一劑量之前的14天內正在使用或先前使用免疫抑制藥物。

順序組中的受試者接受德瓦魯單抗(1500mg/4週(Q4W))與4個計畫劑量水平(22.5、75、225、或750mg/2週(Q2W))中的1個下的莫納利珠單抗的組合。

在使用遞增的莫納利珠單抗加德瓦魯單抗治療的15名患者中，沒有導致停藥的治療相關的不良事件(TRAE)，沒有3/4等級的TRAE，沒有DLT，也沒有死亡；未達到MTD。在12名患者(80%)中觀察到任何等級的TRAE；最常見的是腹瀉(n=4)。40名擴展患者的安全性與遞增相似：19名患者(48%)有任何等級的TRAE，1名患者有3/4等級的TRAE(敗血症)。兩種組合藥物的PK顯示沒有相互作用。莫納利珠單抗PK在最高劑量水平接近線性，因此被選擇用於擴展。

在試驗的劑量遞增部分結束時，未達到最大耐受劑量(MTD)，並且劑量遞增委員會(DEC)認為第4組給藥莫納利珠單抗(750mg Q2W)和德瓦魯單抗(1500mg Q4W)係安全的。然後將這些劑量用於目前正在進行的研究的劑量擴展部分。如果在第一劑量水平遇到不可接受的毒性，將使用德瓦魯單抗1500mg Q4W和莫納利珠單抗7.5mg Q2W的劑量的劑量遞減組。

實例2：用莫納利珠單抗和德瓦魯單抗治療的MSS結直腸癌患者在I期臨床研究的CRC劑量擴展部分中的反應

1期研究的劑量擴展部分旨在將患者招募到對應於用現有療法不能充分治療的癌症的四個組中。這些組中的一個包括復發性或轉移性MSS-CRC受試者。在MSS-CRC組中，所有受試者需要在篩選期間進行記錄的突變測試並從疾病評估中確認腫瘤位置以用於登記，並且CRC癌症必須沒有缺陷性DNA錯配修復(微衛星不穩定性)，如藉由測試所記錄的。

缺陷性DNA錯配修復由以下任一種定義：(i)高頻微衛星不穩定性，其中在2個或更多個微衛星標記(BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、或MONO-27)組中檢測到變化，或(ii)免疫組織化學分析表明缺少以下蛋白質中的任何一種或多種的蛋白質表現：MLH1、MSH2、MSH6、或PMS2。

受試者組接受德瓦魯單抗(1500mg/4週(Q4W))與750mg/2週(Q2W)的莫納利珠單抗的組合。

結果顯示，在MSS-CRC擴展組中(58%的患者接受過至少3個系列的先前療法，n=37可評估療效)，存在3例確認的部分反應(PR)(包括一名其反應從部分反應改善到未確認的完全反應的患者)和11例穩定疾病(SD)，包括3名持續療法>200天的腫瘤減少的患者。16週的疾病控制率(DCR)為24%。

在MSS-CRC擴展組中，腫瘤大小相對於基線和治療持續時間的百分比變化在圖1中表示。

上述CRC中莫納利珠單抗和德瓦魯單抗的I期臨床研究的劑量擴展部分的更新顯示了隨後的結果。

受試者組接受德瓦魯單抗(1500mg/4周(Q4W))與750mg/2週(Q2W)的莫納利珠單抗的組合。

結果顯示，在MSS-CRC擴展群組中(60%的患者接受過至少3個系列的先前治療，n=39可評估療效)，其中有1例確診完全響應，2例確診部分響應(PR)和11例穩定疾病(SD)(表1和2)。

^a藉由Kaplan-Meier方法評估的中值響應時間、和響應的中值持續時間和疾病控制的中值持續時間。

響應可評估的群體包括進行至少一次基線後疾病評估或在第一次基線後疾病評估之前由於死亡或疾病進展而中斷的所治療群體中的患者。

16週的疾病控制率(DCR)為31%，並且在24周為18%(表3)。

在類似的群體中與Lonsurf/TAS-102中值OS為5.7個月(Mayer等人，NEJM 2015 https：//www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1414325)或與regorafenib報告的中值OS為6.4個月(Grothey等人，Lancet 2013 https：//www.sciencedirect.com/science/article/pii/S014067361261900X？via%3Dihub)相比更有利，目前為止獲得的中值OS是令人鼓舞的，為10.6個月。

與圖1相比，在更長的時間段內，在圖2中表示此MSS-CRC擴展組中，腫瘤大小相對於基線和治療持續時間的百分比變化。

總之，這種首次在人體內組合的莫納利珠單抗加德瓦魯單抗的劑量遞增已經完成，從而證明了可控的毒性特徵。數據指示，莫納利珠單抗加德瓦魯單抗的組合可以為MSS-CRC患者帶來改善的益處，這些MSS-CRC患者係歷史上對PD-1/PD-L1阻斷無反應的人群。

在此引用的所有參考文獻，包括出版物、專利申請和專利均藉由引用以其全部內容結合在此，並且其程度如同每個參考文獻被單獨且具體地指示藉由引用併入並且在本文完整地闡述(到法律允許的最大程度)，不考慮本文其他地方任何單獨提供的特定文件的結合。

除非另外說明，否則本文提供的所有精確值均代表對應的近似值(例如，關於特定因數或測量值提供的所有精確示例性值均可以被視為還提供對應的近似測量值，在適當的情況下由「約」修飾)。當「約」與數位結合使用時，可以將這指定為包括對應於指定數位的+/-10%的值。

除非另外說明或明確與上下文相矛盾，否則關於一個或多個要素使用諸如「包含」、「具有」、「包括」或、「含有」等術語，本發明的任何方面或實施方式的在本文的描述旨在提供對「由該特定的一個或多個要素組成」、「實質上由該特定的一個或多個要素組成」或「基本上包含該特定的一個或多個要素」的本發明的類似方面或實施方式的支持(例如，除非另外說明或明確與上下文相矛盾，否則在本文描述為包含特定要素的組成物應當理解為還描述由該要素組成的組成物)。

本文提供的任何和所有實例或示例性語言(例如，「諸如」)的使用僅旨在更好地說明本發明，而不對本發明的範圍做出限制，除非另外要求。說明書中的語言不應當被解釋為指示任何未要求保護的要素係實踐本發明所必需的。

<110> 英商梅迪繆思有限公司(MedImmune Ltd) 法商天賜製藥公司(Innate Pharma)

<120> 癌症之治療

<130> NKG2A-114-WO-PCT

<150> US 62/671,521

<151> 2018-05-15

<160> 38

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 288

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 290

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH6

<400> 4

<210> 5

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH1

<400> 5

<210> 6

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH5

<400> 6

<210> 7

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH7

<400> 7

<210> 8

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH8

<400> 8

<210> 9

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈可變區

<400> 9

<210> 10

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH6重鏈

<400> 10

<210> 11

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH1重鏈

<400> 11

<210> 12

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH5重鏈

<400> 12

<210> 13

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH7重鏈

<400> 13

<210> 14

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH8重鏈

<400> 14

<210> 15

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈

<400> 15

<210> 16

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR1

<400> 16

<210> 17

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR2

<400> 17

<210> 18

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR3

<400> 18

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR1

<400> 19

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR2

<400> 20

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR3

<400> 21

<210> 22

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈可變區

<400> 22

<210> 23

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈可變區

<400> 23

<210> 24

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦魯單抗的重鏈可變區

<400> 24

<210> 25

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦魯單抗的輕鏈可變區

<400> 25

<210> 26

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦魯單抗的重鏈

<400> 26

<210> 27

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦魯單抗的輕鏈

<400> 27

<210> 28

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR1

<400> 28

<210> 29

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR2

<400> 29

<210> 30

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H-CDR3

<400> 30

<210> 31

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR1

<400> 31

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR2

<400> 32

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L-CDR3

<400> 33

<210> 34

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈可變區

<400> 34

<210> 35

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈可變區

<400> 35

<210> 36

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈可變區

<400> 36

<210> 37

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈

<400> 37

<210> 38

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 輕鏈

<400> 38

Claims

一種在對其有需要的個體中治療癌症和/或引發抗腫瘤免疫反應之方法，其中，所述個體患有非MSI-高(MSI-H)的和/或非DNA錯配修復(MMR)缺陷性的腫瘤，該方法包括向所述個體給予治療有效量的NKG2A中和劑和治療有效量的PD-1中和劑。
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，所述個體患有在兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有微衛星不穩定性的腫瘤，視情況其中所述個體患有在選自以下群組之兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有改變的腫瘤，該群組由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。
如申請專利範圍第1至2項中任一項所述之方法，其中，所述個體患有不具有DNA錯配修復(MMR)蛋白表現改變的腫瘤，視情況其中所述個體患有不具有選自MSH2、MLH1、MSH6和PMS2的至少一種MMR蛋白表現降低或缺失的腫瘤。
如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之方法，其中，所述個體患有微衛星穩定(MSS)的腫瘤。
如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之方法，其中，所述個體患有選自以下群組之癌症，該群組由以下各項組成：結直腸癌、結腸癌和直腸癌。
如申請專利範圍第1至5項中任一項所述之方法，其中，所述個體患有結直腸癌，視情況晚期復發性或轉移性結直腸癌。
如申請專利範圍第1至6項中任一項所述之方法，其中，所述個體患有MSS-結直腸癌(MSS-CRC)。
如申請專利範圍第1至7項中任一項所述之方法，其中，所述方法包括：

a)確定所述個體是否患有非MSI-H的和/或DNA錯配修復缺陷性的腫瘤，視情況確定所述個體是否患有在兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有微衛星不穩定性的腫瘤的準備步驟，視情況其中所述個體患有在選自以下群組之兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有改變的腫瘤，該群組由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27；和/或

b)確定所述個體是否患有不具有DNA錯配修復(MMR)蛋白表現改變的腫瘤，視情況所述個體是否患有不具有選自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一種MMR蛋白表現降低或缺失的腫瘤的準備步驟。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑係結合人類NKG2A蛋白的抗體，視情況是人源化或人類抗NKG2A抗體。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑係抑制NKG2A與HLA-E結合的抗體。
如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑包含分別具有SEQ ID NO：16-18的序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：19-21的序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域。
如申請專利範圍第1至11項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑係莫納利珠單抗。
如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之方法，其中，所述PD-1中和劑係抗體。
如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之方法，其中，所述PD-1中和劑係結合人類PD-1多肽的抗體，視情況所述PD-1中和劑係人類抗PD-1抗體。
如申請專利範圍第1至13項中任一項所述之方法，其中，所述PD-1中和劑係結合人類PD-L1多肽的抗體，視情況所述PD-1中和劑係人類抗PD-L1抗體。
如申請專利範圍第1-13和15項中任一項所述之方法，其中，所述PD-1中和劑包含分別具有SEQ ID NO：28-30的胺基酸序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：31-33的胺基酸序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域。
如申請專利範圍第1-13和15-16項中任一項所述之方法，其中，所述PD-1中和劑係德瓦魯單抗。
如申請專利範圍第1-13和15-17項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑係莫納利珠單抗並且所述PD-1中和劑係德瓦魯單抗。
如申請專利範圍第1至18項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑和所述PD-1中和劑同時、分開、或依次給予。
如申請專利範圍第1至19項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑和所述PD-1中和劑配製用於分開給予並且同時或依次給予。
如申請專利範圍第1至20項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑以從0.1至10mg/kg範圍內的劑量給予並且所述PD-1中和劑以從1至20mg/kg範圍內的劑量給予，視情況，所述NKG2A中和劑以10mg/kg的劑量給予並且所述PD-1中和劑以20mg/kg的劑量給予，視情況，所述NKG2A中和劑係每2週以750mg的固定劑量給予的莫納利珠單抗並且所述PD-1中和劑係每4週以1500mg/kg的固定劑量給予的德瓦魯單抗。
一種用於增加對MSS-CRC患者的腫瘤的抗腫瘤活性的套組，該套組包括：

(i)含有NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體和PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體的藥物組成物，或

(ii)含有PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體的第一藥物組成物，和含有NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體的第二藥物組成物，或

(iii)含有NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體的藥物組成物，和與PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體一起給予所述NKG2A中和劑的說明書，或

(iv)含有PD-1中和劑諸如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體的藥物組成物，和與NKG2A中和劑諸如抗NKG2A抗體一起給予所述PD-1中和劑的說明書，

適用於在對其有需要的患者中治療MSS-CRC。
如申請專利範圍第22項所述之套組，其中，所述套組進一步包括用於治療MSS-CRC的說明書。
如申請專利範圍第22至23項中任一項所述之方法，其中，所述NKG2A中和劑係莫納利珠單抗並且所述PD-1中和劑係德瓦魯單抗。
一種NKG2A中和劑，該NKG2A中和劑用於治療患有癌症的人類個體，其中，所述個體患有非MSI-H的和/或非DNA錯配修復(MMR)缺陷性的腫瘤，其中所述NKG2A中和劑與PD-1中和劑組合給予。
一種PD-1中和劑，該PD-1中和劑用於治療患有癌症的人類個體，其中，所述個體患有非MSI-H的和/或非DNA錯配修復(MMR)缺陷性的腫瘤，其中所述PD-1中和劑與NKG2A中和劑組合給予。
如申請專利範圍第25或26項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體患有在兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有微衛星不穩定性的腫瘤，視情況其中所述個體患有在選自以下群組之兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有改變的腫瘤，該群組由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27。
如申請專利範圍第25至27項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體患有不具有DNA錯配修復(MMR)蛋白表現改變的腫瘤，視情況其中所述個體患有不具有選自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一種MMR蛋白表現降低或缺失的腫瘤。
如申請專利範圍第25至28項中任一項所述的用於使用的藥劑，其中，所述個體患有微衛星穩定(MSS)的腫瘤。
如申請專利範圍第25至29項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體患有選自以下群組之癌症，該群組由以下各項組成：結直腸癌、結腸癌和直腸癌。
如申請專利範圍第25至30項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體患有結直腸癌，視情況晚期復發性或轉移性結直腸癌。
如申請專利範圍第25至31項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體患有MSS-結直腸癌(MSS-CRC)。
如申請專利範圍第25至32項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述個體已經歷確定以下的準備步驟：

a)所述個體是否患有非MSI-H的和/或DNA錯配修復缺陷性的腫瘤，視情況確定所述個體是否患有在兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有微衛星不穩定性的腫瘤，視情況其中所述個體患有在選自以下群組之兩個或更多個微衛星標記中檢測不具有改變的腫瘤，該群組由以下各項組成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、和MONO27；和/或

b)所述個體是否患有不具有DNA錯配修復(MMR)蛋白表現改變的腫瘤，視情況所述個體是否患有不具有選自MSH2、MLH1、MSH6、和PMS2的至少一種MMR蛋白表現降低或缺失的腫瘤。
如申請專利範圍第25至33項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑係結合人源化或人類NKG2A蛋白的抗體，視情況係人類或人源化抗NKG2A抗體。
如申請專利範圍第25至33項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑係抑制NKG2A與HLA-E結合的抗體。
如申請專利範圍第25至34項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑包含分別具有SEQ ID NO：16-18的序列的重鏈H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及分別具有SEQ ID NO：19-21的序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3結構域。
如申請專利範圍第25至34和36項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑係莫納利珠單抗。
如申請專利範圍第25至37項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述PD-1中和劑係抗體。
如申請專利範圍第25至38項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述PD-1中和劑係結合人類PD-1多肽的抗體，視情況所述PD-1中和劑係人類抗PD-1抗體。
如申請專利範圍第25至39項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述PD-1中和劑係結合人類PD-L1多肽的抗體，視情況所述PD-1中和劑係人類抗PD-L1抗體。
如申請專利範圍第25和39項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述PD-1中和劑包含具有SEQ ID NO：28-30的胺基酸序列的重鏈H- CDR1、H-CDR2和H-CDR3結構域以及具有SEQ ID NO：31-33的胺基酸序列的輕鏈L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3結構域。
如申請專利範圍第25至39和41項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述PD-1中和劑係德瓦魯單抗。
如申請專利範圍第25至39和41-42項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑係莫納利珠單抗並且所述PD-1中和劑係德瓦魯單抗。
如申請專利範圍第25至43項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑和所述PD-1中和劑同時、分開、或依次給予。
如申請專利範圍第25至44項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑和所述PD-1中和劑配製用於分開給予並且同時或依次給予。
如申請專利範圍第25至45項中任一項所述之用於使用的藥劑，其中，所述NKG2A中和劑以從0.1至10mg/kg範圍內的劑量給予並且所述PD-1中和劑以從1至20mg/kg範圍內的劑量給予，視情況，所述NKG2A中和劑係每2週以750mg的固定劑量給予的莫納利珠單抗並且所述PD-1中和劑係每4週以1500mg的固定劑量給予的德瓦魯單抗。