JP7455749B2 - 頭頸部癌の処置 - Google Patents

Description

本発明は、癌、特に頭頸部癌の処置のためのＮＫＧ２Ａ標的剤の使用に関する。本発明は、癌の処置のためにＮＫＧ２Ａ標的剤と共に使用するのに有利な併用レジメンも提供する。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性は、活性化シグナル及び阻害性シグナルの両方を含む複雑な機構によって制御される。ＨＬＡクラスＩ欠損標的細胞のＮＫ細胞媒介性の認識及び死滅において重要な役割を果たすいくつかの別個のＮＫ特異的受容体が同定されている。天然細胞毒性受容体（ＮＣＲ）は、活性化受容体タンパク質の種類及びこれらを発現する遺伝子（ＮＫ細胞において特異的に発現される）を指す。ＮＣＲの例としては、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４及びＮＫｐ４６が挙げられる（例えば、Ｌａｎｉｅｒ（２００１）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２３－２７を参照されたい）。ＮＫ細胞による標的細胞溶解に関与する別の重要な活性化受容体は、ＮＫＧ２Ｄである。ＮＫＧ２Ｄは、ＭＩＣＡ／Ｂ及びＵＬＢＰタンパク質ファミリーの主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ関連抗原を認識する。後者は、ストレス関連タンパク質であり、ＮＫ細胞が腫瘍細胞を認識して、それらを排除することを可能にする腫瘍特異的抗原として作用することができる。

ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）及びＴ細胞（α／β及びγ／δ）のサブセットにおいて見出される阻害性受容体である。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ－リガンドＨＬＡ－Ｅを発現する細胞に対する上記のリンパ球のサイトカイン放出及び細胞毒性反応を制限する（例えば、国際公開第９９／２８７４８号パンフレットを参照されたい）。ＨＬＡ－Ｅは、特定の腫瘍細胞（Ｄｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６；１７７：３１００－７）及び活性化内皮細胞（Ｃｏｕｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００７；１０９：２８０６－１４）によって可溶性形態で分泌されることも見出されている。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を阻害する抗体は、ウイルス感染細胞に対するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性ＮＫ細胞応答の応答など、ＨＬＡ－Ｅ陽性標的細胞に対するリンパ球のサイトカイン放出及び細胞溶解活性を増大し得る。従って、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを阻害するが、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現細胞の死滅を誘発しない治療抗体（すなわち非枯渇抗体）は、癌患者における腫瘍成長の制御を誘導し得る。

ＮＫＧ２Ａに対する種々の抗体は、当技術分野において記載されている。国際公開第２００８／００９５４５号パンフレットにはヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体Ｚ２７０が記載されており、国際公開第２００９／０９２８０５号パンフレットにはヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体Ｚ１９９が記載されている。Ｖａｎｃｅ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９９；１９０：１８０１－１２）は、ラット抗マウスＮＫＧ２抗体２０Ｄ５（現在、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５０５１８，ＵＳＡにより市販されている）について言及しており、米国特許出願公開第２００３００９５９６５号明細書には、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ及びＮＫＧ２Ｅに結合すると主張されるマウス抗体３Ｓ９が記載されている。

頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）は、年間約６００，０００件の発生率及び約５０％の死亡率を有する。ＨＮＳＣＣの主要な危険因子は、喫煙、アルコール消費及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）による感染である。その疫学及び病態形成の知識の向上にもかかわらず、多くのタイプのＨＮＳＣＣの生存率は、過去４０年間にわたってほとんど改善されていない。ＨＮＳＣＣ患者の５年間の全生存率は、わずか約５０％である。タバコ、アルコール消費及びウイルス性因子は、ＨＮＳＣＣの発生の主要な危険因子である。これらの危険因子は、遺伝的感受性と共に、癌発生の多段階プロセスにおいて複数の遺伝的及びエピジェネティックな変化の蓄積をもたらし、ＨＮＳＣＣのこのような分子的発癌の理解は、ＨＮＳＣＣを処置するための標的剤の開発に使用されている。

ＨＮＳＣＣの処置としての免疫療法の考えは、数十年間にわたり存在しており、ＨＮＳＣＣを処置する試みは、腫瘍特異的抗原のターゲティングを含んでいる。様々な固形癌に対してこのような免疫刺激性治療戦略を用いて改善がなされているが、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）患者に対するこれらの戦略の使用は、遅れている。ＨＮＳＣＣの免疫療法アプローチは、ＨＮＳＣＣにより誘導されて免疫刺激の取り組みの有効性を潜在的に低下させる深刻な免疫抑制によって特に複雑化される。ＨＬＡクラスＩの発現低下など、ＨＮＳＣＣが抗腫瘍免疫応答を逃れる機構の概説は、Ｄｕｒａｙ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ７０１６５７；２０１０：１－１５に提供されている。

ＨＮＳＣＣの標準治療法としては、転移性ＨＮＳＣＣの処置のためのセツキシマブとの併用を含め、シスプラチンベースの化学療法がある。切除不可能な非転移性ＨＮＳＣＣの処置の場合、処置は、シスプラチンベースの化学療法及びセツキシマブと放射線療法との併用を含む。ｃ２２５抗体（セツキシマブ、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））は、ＥＧＦ媒介性腫瘍細胞増殖をインビトロで阻害することが実証された抗ＥＧＦＲ抗体であり、これは、頭頸部癌の処置のために２０１１年にＦＤＡによって承認されている。セツキシマブは、ＥＧＦ受容体経路の発癌性シグナル伝達を遮断することにより、且つＦｃγ受容体媒介抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することにより作用すると考えられる。しかしながら、ＨＮＳＣＣの場合、ＡＤＣＣは、誘導される強い免疫抑制により影響を受ける可能性がある。同時に、Ｖａｎｔｏｕｒｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．６：２３１ｒａ４９（２０１４）は、ＥＧＦ受容体経路の発癌性シグナル伝達の遮断により、ＮＫ細胞及びＴ細胞のサブセット上の活性化受容体ＮＫＧ２Ｄにより認識されるＭＩＣＡ／Ｂ及びＵＬＢＰタンパク質ファミリーの主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ関連抗原の腫瘍細胞の転写後調節が起こることを報告している。特に、ＮＫＧ２Ｄの天然リガンドであるこれらのストレス関連抗原の腫瘍細胞による発現は、臨床的ＥＧＦＲ阻害剤により低減され、従ってＮＫ及びＴ細胞に対する腫瘍細胞の可視性が低減する可能性がある。

しかし、様々な処置を受ける多くのＨＮＳＣＣ患者は、現在のところ承認された治療法にもかかわらず進行するため、免疫治療薬による処置から最も多くの利益を受け得る患者集団を見出すことが当技術分野で求められている。

本発明は、中でも、セツキシマブと組み合わせて抗ＮＫＧ２Ａ抗体を用いる阻害性受容体ＮＫＧ２Ａの遮断が、癌、特に頭頸部癌、とりわけＨＮＳＣＣを有する患者、例えば事前にプラチナ製剤療法を受けており、且つその癌が進行している（例えば、非応答、再発又はそれ以外に進行した）患者に臨床的奏効をもたらすという所見に由来する。さらに、セツキシマブと組み合わせた抗ＮＫＧ２Ａ抗体の併用は、セツキシマブによる事前の処置中又はその後に癌が進行した患者でも臨床的奏効をもたらした。一部の実施形態では、患者は、事前のセツキシマブ及び／若しくは化学療法薬（例えば、プラチナ製剤療法）又はセツキシマブ及び放射線療法で処置されていることができる。一実施形態では、本明細書に開示される併用療法は、不治の切除不可能な及び／又は転移性ＨＮＳＣＣを有する患者集団の処置に使用するうえで特に有用であり得るが、任意選択的に、さらに、患者は、事前のプラチナ製剤療法、放射線療法及び／又はセツキシマブを受けている。

従って、一態様では、セツキシマブと組み合わせた抗ＮＫＧ２Ａ抗体の中和は、切除不可能な（例えば、不治であり、切除不可能な）及び／又は転移性）頭頸部癌、とりわけＨＮＳＣＣを有し、その癌がセツキシマブに対して耐性とみなされた個体の集団において癌の有意な改善をもたらし得る。この併用処置は、頭頸部癌、とりわけＨＮＳＣＣを有し、その癌がセツキシマブによる処置にもかかわらず進行した個体の相当な集団に機会を提供し得る。特に、併用処置は、さらなる進行を防ぐうえでとりわけ転移性癌（例えば、非転移性癌を有する個体の）を遅らせるか又は予防するために有益であり得る。

本明細書には、頭頸部癌を有する個体の頭頸部癌を処置する方法が提供される。一実施形態では、癌は、切除不可能（手術により完全に除去することができない頭頸部癌）である。一実施形態では、切除不可能及び／又は転移性頭頸部癌を有する個体において、腫瘍負荷を低減（例えば、ベースライン直径和と比較して標的細胞病変の直径和を減少）する方法が提供される。

一実施形態では、この方法は、個体の頭頸部癌を処置することを含み、この方法は、セツキシマブと組み合わせて、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する薬剤の治療的に活性な量を個体に投与することを含む。一実施形態では、個体は、セツキシマブによる事前の処置過程中又はその後に進行した癌を有する（セツキシマブによる事前の処置過程は、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する化合物を含まないが、他の処置、とりわけ放射線療法及び／又は化学療法と組み合わせて投与され得る）。一実施形態では、セツキシマブによる事前の治療過程（任意選択的に化学療法薬又は放射線療法と併用された）に加えて、個体は、化学療法薬によるさらに別の事前の治療過程を受けており；例えば、個体は、プラチナ製剤を用いた第１の事前の治療過程後、セツキシマブによる第２の事前の治療過程を受けている。一実施形態では、癌は、切除不可能（例えば、不治であり、切除不可能）及び／又は転移性頭頸部癌である。

一実施形態では、切除不可能であり、任意選択的に非転移性の頭頸部癌、とりわけＨＮＳＣＣを有する個体の頭頸部癌を処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）治療的に活性な量の、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの活性を中和する薬剤、（ｂ）治療的に活性な量のセツキシマブを個体に投与することを含む。一実施形態では、個体は、化学療法薬（例えば、プラチナ製剤療法）、放射線療法及び／又はセツキシマブによる事前の処置（例えば、こうした化学療法薬、放射線療法及び／又はセツキシマブの投与を含む事前の処置過程）を受けており、その頭頸部癌は、そうした事前の処置中又はその後に進行している。一実施形態では、個体は、こうした化学療法薬、放射線療法及び／又はセツキシマブによる処置に応答しなかったか又は十分に応答しなかった頭頸部癌を有する。一実施形態では、個体は、こうした化学療法薬、放射線療法及び／又はセツキシマブによる処置後に再発した頭頸部癌を有する。一例において、個体は、化学療法薬（例えば、プラチナ製剤療法薬）、放射線療法及び／又はセツキシマブの投与を含む事前の処置過程を受けたことがあり、且つ処置過程の終了後、例えば処置過程の終了から３年以内に癌の進行又は再発を経験している。一実施形態では、個体は、放射線療法と併用されたセツキシマブを受けたことがある。一実施形態では、個体は、セツキシマブ療法後又はそれと併用して、プラチナ製剤療法を受けている。別の実施形態では、個体は、セツキシマブによる事前の処置を受けている。

一実施形態では、頭頸部癌を有する個体であって、セツキシマブによる事前の処置（例えば、セツキシマブの投与を含む事前の処置過程）を受けており、且つその癌が進行している個体の頭頸部癌を処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）治療的に活性な量の、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの活性を中和する薬剤、（ｂ）治療的に活性な量のセツキシマブを個体に投与することを含む。一実施形態では、頭頸部癌を有する個体は、セツキシマブの投与を含む事前の処置過程を受けており、且つこうした処置に応答しなかったか又は十分に応答しなかった。一実施形態では、個体は、セツキシマブの投与を含む事前の処置過程を受けており、且つセツキシマブを含む前記処置過程中又はその後に癌の進行又は再発を経験している。一例では、個体は、セツキシマブの投与を含む事前の処置過程を受けており、且つセツキシマブを含む前記事前の処置過程の終了後、例えば前記事前の処置過程の終了から３年以内に癌の進行又は再発を経験している。セツキシマブを含む事前の処置過程は、例えば、放射線療法と組み合わせてセツキシマブを含み得る。一実施形態では、セツキシマブを含む事前の処置過程は、放射線及び／又は化学療法薬、例えばプラチナ製剤と組み合わせてセツキシマブを含んだ。

一実施形態では、個体のＨＮＳＣＣの進行を処置又は予防する方法が提供され、これは、（ｉ）セツキシマブによる処置に対して耐性である（例えば、セツキシマブ、任意選択的に放射線療法及び／又は化学療法と組み合わせたセツキシマブによる処置にもかかわらず進行した）ＨＮＳＣＣを有する個体を同定することと、（ｉｉ）セツキシマブと組み合わせて、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤の有効量を個体に投与することとを含む。一実施形態では、ステップ（ｉ）の個体は、切除不可能な非転移性頭頸部癌を有する。一実施形態では、ステップ（ｉ）の個体は、切除不可能な転移性頭頸部癌を有する。

別の実施形態では、ＨＮＳＣＣ、任意選択的に切除不可能な頭頸部癌、任意選択的に非転移性頭頸部癌、任意選択的に転移性頭頸部癌を有する個体（又は例えば固体の集団）が、セツキシマブと組み合わせて、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置から特定の利益を受け、それに対して応答性であり、且つ／又はそれに適している可能性があるかどうかを決定する方法が提供され、この方法は、個体が、セツキシマブ（例えば、単剤療法としてのセツキシマブ、放射線療法と併用されたセツキシマブ及び／又は化学療法と併用されたセツキシマブ）に対して耐性の頭頸部癌を有するかどうかを決定することを含み、個体が、セツキシマブに対して耐性の頭頸部癌を有するという決定は、個体が、セツキシマブと組み合わせて、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤による処置から特定の利益を受け、それに対して応答性であり、且つ／又はそれに適している可能性があることを示す。任意選択的に、この方法は、こうした処置から特定の利益を受け、それに対して応答性であり、且つ／又はそれに適していると決定された個体に、セツキシマブと組み合わせて、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤を投与するステップをさらに含む。

本明細書には、疾患、例えばセツキシマブ耐性癌の処置に使用するための組成物も提供される。一部の実施形態では、そのＨＮＳＣＣ癌がセツキシマブ（例えば、セツキシマブ単独又は化学療法若しくは放射線療法などの別の薬剤との併用）による処置（例えば、事前の処置）に対して耐性である個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤及び／又はセツキシマブが提供される。一実施形態では、セツキシマブによる事前の処置を受けた個体における癌の処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供される。一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤をセツキシマブと組み合わせて投与する。一実施形態では、セツキシマブによる事前の処置を受けたヒト個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供され、この処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を個体に投与することを含む。一実施形態では、癌又は癌腫は、ＨＮＳＣＣである。一実施形態では、切除不可能であり、任意選択的に非転移性の癌腫を有するヒト個体における癌の処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供され、この処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を個体に投与することを含む。一実施形態では、癌又は癌腫は、ＨＮＳＣＣである。一実施形態では、事前の処置（例えば、セツキシマブによる第１の処置過程）を受けた個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するためのセツキシマブが提供され、前記処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブ（例えば、セツキシマブによる第２の処置過程）の各々の有効量を個体に投与することを含む。

本明細書に記載の任意の実施形態では、個体は、セツキシマブによる処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有するとして特徴付けられる。任意選択的に、個体は、放射線療法と併用されたセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する。

本明細書に記載の任意の実施形態では、セツキシマブによる処置に対して耐性の頭頸部癌は、セツキシマブを含む事前の処置過程中又はその後に進行又は再発した癌である。一例では、セツキシマブによる処置に対して耐性の癌は、セツキシマブを含む事前の処置過程の終了後、例えば３年以内に進行又は再発した癌である。例えば、癌は、セツキシマブを含む事前の処置過程の終了から２年以内又は１２ヶ月、６ヶ月、４ヶ月若しくは３ヶ月以内に進行したものであり得る。任意選択的に、再発した癌は、新たな原発癌ではないが、元のＨＮＳＣＣの再発を示す癌である。任意選択的に、再発した癌は、同じ領域及び／又は側性（例えば、右若しくは左側）の癌である。セツキシマブを含んだ事前の処置過程は、例えば、放射線療法と併用してセツキシマブを含んだものであり得る。セツキシマブを含んだ事前の処置過程は、例えば、プラチナ製剤療法などの化学療法と併用してセツキシマブを含んだものであり得る。

本明細書に記載の実施形態のいずれかの一態様では、本発明の処置は、腫瘍負荷の低減、任意選択的に例えばベースライン直径和と比較した標的細胞病変の直径和の減少をもたらす。一実施形態では、この処置は、癌の進行を遅らせる。一実施形態では、処置は、癌の転移を遅らせるか又は予防する。一実施形態では、癌増殖の収縮又は遅延による処置は、患者の症状又はウェルビーイングを改善する。

本明細書に記載の任意の実施形態では、個体は、事前のプラチナ製剤療法を受けたとして特徴付けることができる（且つ場合によりそうした療法にもかかわらず進行した癌を有し得る）。プラチナ製剤療法は、例えば、プラチナ製剤及びさらにパクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン又は５ＦＵ（５－フルオロウラシル）を含むレジメンにおいて、例えばシスプラチン又はカルボプラチンを含む処置レジメンの投与を含み得る。

一実施形態では、個体のＨＮＳＣＣを処置する方法が提供され、これは、
（ａ）個体にセツキシマブを投与する（例えば、セツキシマブを含む治療サイクル又は過程、任意選択的にセツキシマブと放射線療法とを含むか、又はセツキシマブと化学療法とを含む治療過程を投与する）こと；及び
（ｂ）ステップ（ａ）において、個体の癌がセツキシマブに対して（例えば、ステップ（ａ）の治療過程に対して）耐性であり、任意選択的に、患者が、進行し、他の器官に広がるか又は非応答性である癌を有する）場合、治療的に活性な量のセツキシマブと組み合わせて、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの活性を中和する薬剤の治療的に活性な量を個体に投与すること
を含む。

一実施形態では、個体は、非転移性ＨＮＳＣＣを有する。

一実施形態では、個体は、事前のプラチナ製剤療法を受けたことがある（且つ例えばそうした療法にもかかわらず進行している）。

一実施形態では、ステップ（ａ）のセツキシマブ処置は、放射線療法及び／又は化学療法との併用処置を含む。

本明細書に記載の任意の態様の一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する薬剤は、ＮＫＧ２Ａを結合することができる抗体である。一態様では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する薬剤は、非細胞除去抗体（例えば、Ｆｃドメインのない抗体又は１つ若しくは複数のＦｃγ受容体との結合が最小であるか若しくは結合がないＦｃドメインを有する抗体）である。

一実施形態では、癌は、中咽頭腫瘍、喉頭腫瘍、口腔腫瘍、鼻咽頭腫瘍又は下咽頭腫瘍である。一実施形態では、ＨＮＳＣＣは、口腔ＳＣＣ（ＯＣＳＣＣ）である。ＯＣＳＣＣは、唇、舌の前方２／３、口腔底、頬側粘膜、歯肉、硬口蓋及び臼後三角の扁平上皮癌を含む。

一実施形態では、ＨＮＳＣＣは、非転移性癌である。

一実施形態では、個体は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性である（例えば、ヒトパピローマウイルスの存在によって特徴付けられ、高い癌リスクに関連するＨＰＶ遺伝子型に陽性、ＨＰＶ１６遺伝子型に陽性及び／又はＰ１６^ＩＮＫａ発現に陽性である）。

一実施形態では、個体は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陰性である（例えば、ヒトパピローマウイルスの非存在によって特徴付けられ、高い癌リスクに関連するＨＰＶ遺伝子型の非存在、ＨＰＶ１６遺伝子型に陰性及び／又はＰ１６^ＩＮＫａ発現に陰性である）。

一実施形態では、個人は、腫瘍環境中（例えば、腫瘍組織内及び／又は腫瘍隣接組織内）のリンパ球の存在によって特徴付けられる頭頸部癌を有する。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒト患者（インビボ）においてヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和をもたらす量で投与され、任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、少なくとも２週間、任意選択的に少なくとも４週間にわたり、末梢血ＮＫ及びＴリンパ球上のＮＫＧ２Ａポリペプチドの飽和をもたらす用量で投与される。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ、任意選択的に約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、１００～１０００ｍｇの範囲、任意選択的に２００～１２００ｍｇの範囲、例えば７５０ｍｇの固定用量で投与される。

任意選択的に、抗ＮＫＧＡ剤による処置前に癌のＨＬＡ－Ｅ状態を評価することができる。一実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ＋ ＨＮＳＣＣを有する患者を同定するためのＨＬＡ－Ｅ検出ステップを組み合わせる方法が提供され；これらの患者は、その後、ＮＫＧ２Ａポリペプチドの阻害活性を中和する薬剤によって処置することができる。

一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの活性を中和する薬剤は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体であり、これは、ヒト患者において（インビボで）ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和をもたらす有効量で投与され、任意選択的に、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、末梢血ＮＫ及びＴリンパ球におけるＮＫＧ２Ａの中和を少なくとも２週間、任意選択的に少なくとも４週間にわたってもたらす用量で投与される。一態様において、併用薬は、特定の臨床投薬レジメンに従って、特に特定の用量で且つ特定の投与スケジュールに従って（例えば、本明細書に提供される用量及び／又は具体的な投与スケジュールに従って）投与される（又はそうした投与を目的とする）。

一実施形態では、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドの活性を中和する薬剤は、そのリガンドであるＨＬＡ－Ｅの結合を遮断することによってＮＫＧ２Ａの阻害活性を低減する抗体である。すなわち、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害する。配列番号２～６のいずれか１つの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有する抗体は、このような抗体の一例である。一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、そのリガンドＨＬＡ－Ｅの結合を遮断することなくＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる。すなわち、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、非競合的なアンタゴニストであり、ＨＬＡ－ＥによるＮＫＧ２Ａの結合を妨害しない。それぞれ配列番号１６及び１７の重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体は、このような抗体の一例である。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、１つ又は複数の活性化ＮＫＧ２受容体に対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。例えば、一実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。付加的又は代替的な実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｅに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。付加的又は代替的な実施形態では、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに対して、ＮＫＧ２Ｈに対するよりも著しく高い親和性で結合する抗体である。配列番号２～６のいずれか１つの重鎖及び配列番号７の軽鎖をそれぞれ有する抗体は、実質的にＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ又はＮＫＧ２Ｈに結合することなくＮＫＧ２Ａに結合する。

付加的又は代替的な実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、配列番号２～６のいずれか１つの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有する抗体並びに／又はそれぞれ配列番号１６及び１７の重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体と競合する。薬剤は、例えば、ヒト又はヒト化抗ＮＫＧ２Ａ抗体であり得る。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２～６のいずれか１つの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有するヒト化抗体である。改善された特性（例えば、より低い免疫原性、改善された抗原結合性又は他の機能特性など）及び／又は改善された物理化学的特性（例えば、より良好な安定性など）を有するこのようなヒト化抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）におけるアミノ酸置換のための例示的な相補性決定領域（ＣＤＲ）残基若しくは配列及び／又は部位が提供される。

他の実施形態では、医薬組成物及びキット並びにこれらを使用する方法が提供される。

これらの態様は、本明細書で提供される本発明の説明においてより詳細に記載されており、付加的な態様、特徴及び利点は、本明細書で提供される本発明の説明から明らかになるであろう。

定義
「含む」が使用される場合、これは、任意選択的に、「から本質的になる」又は「からなる」によって置き換えることができる。

ＮＫＧ２Ａ（ＯＭＩＭ１６１５５５、その開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループのメンバーである（Ｈｏｕｃｈｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１０１７－１０２０）。ＮＫＧ２Ａは、２５ｋｂに及ぶ７つのエクソンによってコードされ、いくらかの差別的スプライシングを示す。ＣＤ９４と一緒に、ＮＫＧ２Ａは、ＮＫ細胞、α／βＴ細胞、γ／δＴ細胞及びＮＫＴ細胞のサブセットの表面において見出されるヘテロ二量体の阻害性受容体ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを形成する。阻害性ＫＩＲ受容体と同様に、それは、その細胞質ドメインにＩＴＩＭを有する。本明細書で使用される場合、「ＮＫＧ２Ａ」は、ＮＫＧ２Ａ遺伝子又はコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体又はアイソフォームを指す。野生型、全長ＮＫＧ２Ａと１つ又は複数の生物学的特性又は機能を共有し、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えるヌクレオチド又はアミノ酸同一性を共有するあらゆる核酸又はタンパク質配列も包含される。ヒトＮＫＧ２Ａは、以下の配列：
の２３３のアミノ酸を３つのドメインに含み、細胞質ドメインが残基１～７０を含み、膜貫通領域が残基７１～９３を含み、細胞外領域が残基９４～２３３を含む。

ＮＫＧ２Ｃ（ＯＭＩＭ６０２８９１、その開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）及びＮＫＧ２Ｅ（ＯＭＩＭ６０２８９２、その開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）は、転写物のＮＫＧ２グループの２つの他のメンバーである（Ｇｉｌｅｎｋｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４８：１６３－１７３）。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ受容体は、ＮＫ細胞及びＴ細胞などのリンパ球のサブセットの表面において見出される活性化受容体である。

ＨＬＡ－Ｅ（ＯＭＩＭ１４３０１０、その開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）は、細胞表面で発現され、例えば他のＭＨＣクラスＩ分子のシグナル配列に由来する断片などのペプチドの結合によって制御される非古典的なＭＨＣ分子である。ＨＬＡ－Ｅの可溶性型も同定されている。そのＴ細胞受容体結合特性に加えて、ＨＬＡ－Ｅは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｂ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃに特異的に結合することにより、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びＴ細胞（α／β及びγ／δ）のサブセットに結合する（例えば、その開示全体が参照によって本明細書中に援用されるＢｒａｕｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９１：７９５－７９９を参照されたい）。ＨＬＡ－Ｅの表面発現は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ、Ｔ又はＮＫＴ細胞クローンによる溶解から標的細胞を保護する。本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ－Ｅ」は、ＨＬＡ－Ｅ遺伝子又はコード化タンパク質の任意の変異体、誘導体又はアイソフォームを指す。野生型、全長ＨＬＡ－Ｅと１つ又は複数の生物学的特性又は機能を共有し、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えるヌクレオチド又はアミノ酸同一性を共有するあらゆる核酸又はタンパク質配列も包含される。

本開示との関連において、「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、細胞表面においてＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するリンパ球系（例えば、ＮＫ－、ＮＫＴ－及びＴ細胞）の細胞を指し、これは、例えば、ＣＤ９４及びＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ又は及びＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープを特異的に認識する抗体を用いるフローサイトメトリーによって検出することができる。「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球」は、リンパ球由来の不死細胞株（例えば、ＮＫＬ、ＮＫ－９２）も含む。

本開示との関連において、「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を低下させる」、「ＮＫＧ２Ａを中和する」又は「ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する」は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａが細胞内プロセスに悪影響を与えるその能力において阻害され、サイトカイン放出及び細胞毒性応答などのリンパ球応答をもたらすプロセスを指す。これは、例えば、ＮＫ－又はＴ細胞ベースの細胞毒性アッセイにおいて測定することができ、このアッセイでは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球によるＨＬＡ－Ｅ陽性細胞の死滅を刺激する治療用化合物の能力が測定される。一実施形態では、抗体調製物は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性の少なくとも１０％の増強、好ましくはリンパ球細胞毒性の少なくとも４０％又は５０％の増強又はより好ましくはＮＫ細胞毒性の少なくとも７０％の増強を引き起し、記載される細胞毒性アッセイが参照される。抗ＮＫＧ２Ａ抗体がＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡのＨＬＡ－Ｅとの相互作用を低減又は遮断すれば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ制限リンパ球の細胞毒性が増大され得る。これは、例えば、例えばＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞及びＨＬＡ－Ｅを発現する標的細胞を用いて、標準的な４時間インビトロ細胞毒性アッセイにおいて評価することができる。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ－Ｅを認識して、リンパ球媒介性の細胞溶解を防止する阻害性シグナル伝達の開始及び伝播をもたらすため、このようなＮＫ細胞は、ＨＬＡ－Ｅを発現する標的を効率的に死滅させない。このようなインビトロ細胞毒性アッセイは、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）に記載されるように、当技術分野において周知の標準的な方法によって実行することができる。抗体がリンパ球を刺激してＰ８１５、Ｋ５６２細胞又は適切な腫瘍細胞などの標的細胞を死滅させる能力を評価するためのクロム放出及び／又は他のパラメータは、Ｓｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９－１１３６；Ｖｉｔａｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８７：２０６５－２０７２；Ｐｅｓｓｉｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８８：９５３－９６０；Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．２００１；８：１１３１－１１３５；Ｐｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９９；１９０：１５０５－１５１６（これらのそれぞれの開示全体は、参照によって本明細書中に援用される）にも開示されている。標的細胞は、ＮＫ細胞の添加前に^５１Ｃｒによって標識化され、次に死滅の結果としての細胞から培地への^５１Ｃｒの放出に比例するように死滅が推定される。ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡがＨＬＡ－Ｅへ結合することを防止する抗体を添加すると、結果的にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａによる阻害性シグナル伝達の開始及び伝播が防止される。従って、このような薬剤の添加の結果、リンパ球媒介性の標的細胞の死滅が増大される。このステップは、これにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに誘導される負のシグナル伝達を、例えばリガンド結合の遮断によって防止する薬剤を同定する。特定の^５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現ＮＫエフェクター細胞は、ＨＬＡ－Ｅ陰性ＬＣＬ７２１．２２１標的細胞を死滅させることができるが、ＨＬＡ－Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３対照細胞についてあまり死滅させない。対照的に、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを欠いているＹＴＳエフェクター細胞は、両方の細胞株を効率的に死滅させる。従って、ＮＫエフェクター細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ－Ｅ誘導性阻害性シグナル伝達のために、ＨＬＡ－Ｅ^＋ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３細胞をあまり効率的に死滅させない。このような^５１Ｃｒ放出細胞毒性アッセイにおいて、ＮＫ細胞が、本発明に従う遮断性の抗ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ抗体と共にプレインキュベートされる場合、ＨＬＡ－Ｅ発現ＬＣＬ７２１．２２１－Ｃｗ３細胞は、抗体濃度に依存した方式でより効率的に死滅される。抗ＮＫＧ２Ａ抗体の阻害活性（すなわち細胞毒性増強能）は、いくつかの他の方法のいずれかにおいて、例えば、例えばＳｉｖｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９－１１３６（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）に記載されるような、細胞内遊離カルシウムに対するその効果によって評価することもできる。ＮＫ細胞の細胞毒性の活性化は、例えば、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ－γ産生）又は細胞毒性マーカー（例えば、ＣＤ１０７又はＣＤ１３７動員）の増大を測定することによって評価することができる。例示的なプロトコルでは、ＰＢＭＣからのＩＦＮ－ｙの産生は、培養下で４日後に細胞表面及び細胞質内染色並びにフローサイトメトリーによる分析によって評価される。簡単に言うと、ブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）が培養の最後の４時間に５μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。次に、細胞は、透過処理（ＩｎｔｒａＰｒｅｐ（商標）；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）及びＰＥ－抗ＩＦＮ－ｙ又はＰＥ－ＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）による染色前に抗ＣＤ３及び抗ＣＤ５６ｍＡｂと共にインキュベートされる。ポリクローナル活性化ＮＫ細胞からのＧＭ－ＣＳＦ及びＩＦＮ－ｙの産生は、ＥＬＩＳＡ（ＧＭ－ＣＳＦ：ＤｕｏＳｅｔ Ｅｌｉｓａ，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ、ＩＦＮ－ｙ：ＯｐｔＥｌＡ ｓｅｔ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて上清において測定される。

本明細書全体において、「ＨＮＳＣＣの処置」又は同様のものがＮＫＧ２Ａ中和剤（例えば、抗体）と関連して言及される場合には常に以下のことが意味される：（ａ）ＨＮＳＣＣを処置する方法であり、前記方法は、ＮＫＧ２Ａ中和剤（好ましくは薬学的に許容可能な担体材料中）を、ＨＮＳＣＣの処置を可能にする用量（治療的に有効な量）、好ましくは本明細書で指定される用量（量）において、このような処置を必要としている個人、哺乳類、特にヒトに投与する（少なくとも１つの処置のために）ステップを含む；（ｂ）ＨＮＳＣＣの処置のためのＮＫＧ２Ａ中和剤の使用又は前記処置（特にヒトにおける）で使用するためのＮＫＧ２Ａ中和剤；（ｃ）ＨＮＳＣＣの処置のための医薬品を製造するためのＮＫＧ２Ａ中和剤の使用、（ｄ）ＮＫＧ２Ａ中和剤を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、ＨＮＳＣＣの処置のための医薬品を製造するためのＮＫＧ２Ａ中和剤を使用する方法又はＨＮＳＣＣの処置のために適切な有効用量のＮＫＧ２Ａ中和剤を含む医薬品；又は（ｅ）本出願が提出された国において特許が認められる主題に従う（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）の任意の組み合わせ。

「生検」という用語は、本明細書で使用される場合、診断の確立などの検査の目的で組織を除去することと定義される。生検のタイプの例としては、例えば、シリンジに取り付けられた針を介した吸引の適用によるもの；組織の断片の機器による除去によるもの；内視鏡を介する適切な機器を用いた除去によるもの；外科的切除、例えば病変全体の外科的切除によるものなどが挙げられる。

「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリクローナル及びモノクローナル抗体を指す。重鎖内の定常ドメインのタイプに応じて、抗体は、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの１つに割り当てられる。これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのサブクラス又はアイソタイプにさらに分類される。例示的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のペアのポリペプチド鎖で構成され、各ペアは、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０又はそれを超えるアミノ酸の可変領域を画定する。可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」及び「ミュー」と呼ばれる。免疫グロブリンの種々のクラスのサブユニット構造及び三次元配置は、周知である。ＩｇＧは、生理学的状況下で最も一般的な抗体であり、研究室環境で最も容易に作製されるため、本明細書で使用される抗体の例示的な種類である。任意選択的に、抗体は、モノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化、キメラ、ヒト又は別の方法でヒトに適した抗体である。「抗体」は、抗体のいずれかの任意の断片又は誘導体も含む。

「特異的に結合する」という用語は、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ又は単離した標的細胞の表面に存在する天然タンパク質のいずれかを用いて評価されるとき、抗体が、好ましくは、競合的結合アッセイにおいて結合パートナー、例えばＮＫＧ２Ａに結合できることを意味する。特異的な結合を決定するための競合的結合アッセイ及び他の方法は、当技術分野において周知である。例えば、結合は、放射標識、質量分析などの物理的方法又は例えば細胞蛍光測定分析（例えば、ＦＡＣＳｃａｎ）を用いて検出される直接若しくは間接的な蛍光標識によって検出することができる。対照の非特異的な薬剤で見られる量を超える結合は、その薬剤が標的に結合することを示す。ＮＫＧ２Ａに特異的に結合する薬剤は、単独のＮＫＧ２Ａ又はＣＤ９４との二量体としてのＮＫＧ２Ａに結合し得る。

抗体が特定のモノクローナル抗体「と競合する」と言われる場合、それは、組換え分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ）又は表面発現分子（例えば、ＮＫＧ２Ａ）のいずれかを用いる結合アッセイにおいて、抗体がモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいて、配列番号２のいずれかの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有する抗体の、ＮＫＧ２Ａポリペプチド又はＮＫＧ２Ａ発現細胞への結合を低減すると、抗体は、このような抗体とそれぞれ「競合する」と言われる。

「親和性」という用語は、本明細書で使用される場合、エピトープに対する抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］（式中、［Ａｂ－Ａｇ］は、抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は、非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は、非結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄによって与えられる。親和性定数Ｋ_ａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）において見出すことができ、これらの参考文献は、参照によって本明細書中に完全に援用される。ｍＡｂの親和性を測定するための当技術分野において周知の１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置を用いた分析によるものなど）の使用である。

本明細書に関連して、「決定基」は、ポリペプチド上の相互作用又は結合の部位を指定する。

「エピトープ」という用語は、抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上の区域又は領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、特異的抗原結合抗体又はペプチドにより効果的に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基とを含み得る。それは、例えば、抗体又は受容体と結合し得る複雑な抗原分子上の最も単純な形態又は最小の構造領域である。エピトープは、直線的又は立体構造的／構造的であり得る。「直線的エピトープ」という用語は、アミノ酸の直鎖配列（一次構造）上で連続するアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。「立体構造的又は構造的エピトープ」という用語は、全てが連続しているわけではなく、従って分子の折り畳み（二次、三次及び／又は四次構造）により互いに近接されるアミノ酸の直鎖配列の分離部を表すアミノ酸残基で構成されるエピトープとして定義される。立体構造的エピトープは、三次元構造に依存する。「立体構造的」という用語は、従って、「構造的」と互換的に使用されることが多い。

「薬剤」という用語は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生物学的巨大分子又は生物学的材料から作製される抽出物を示すために使用される。「治療薬」という用語は、生物活性を有する薬剤を指す。

本明細書での目的のために、「ヒト化」又は「ヒト」抗体は、１つ又は複数のヒト免疫グロブリンの定常及び可変フレームワーク領域が動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合された抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を保持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。このような抗体は、抗原負荷に応答して特異的ヒト抗体を産生するように「操作された」トランスジェニックマウス又は他の動物から得ることができる（例えば、その教示全体が参照によって本明細書中に援用されるＧｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎ ６：５７９を参照されたい）。完全ヒト抗体は、遺伝子又は染色体トランスフェクション法及びファージディスプレイ技術によって構築することもでき、これらは、全て当技術分野において知られている（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３を参照されたい）。ヒト抗体は、インビトロの活性化Ｂ細胞により生成することもできる（例えば、参照によってその全体が援用される米国特許第５，５６７，６１０号明細書及び米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）。

「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なる若しくは改変されたクラス、エフェクター機能及び／若しくは種の定常領域又はキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域又はその一部が改変、置換又は交換された抗体分子であるか、又は（ｂ）可変領域又はその一部が、異なる又は改変された抗原特異性を有する可変領域によって改変、置換又は交換された抗体分子である。

「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」及び「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣ末端断片、例えばヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０～約ａａ４５０又は他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体のα、δ、ε及びμ）におけるその対応物の配列又はその天然に存在するアロタイプを指す。他に規定されない限り、本開示の全体を通して免疫グロブリンに対して一般的に容認されたＫａｂａｔのアミノ酸番号付けが使用される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。

「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」という用語は、材料がその天然の状態で見出される際に通常付随される成分を実質的又は本質的に含まない材料を指す。純度及び均質性は、通常、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィなどの分析化学技術を用いて決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は、実質的に精製される。

「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。この用語は、１つ又は複数のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマーと、天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーとに適用される。

「組換え」という用語は、例えば、細胞、核酸、タンパク質又はベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質又はベクターが、異種核酸若しくはタンパク質の導入又は天然核酸若しくはタンパク質の改変によって修飾されていること又細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。従って、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態において見出されない遺伝子を発現するか、又は改変されていなければ異常発現されるか、低発現されるか若しくは全く発現されない天然遺伝子を発現する。

本明細書に関連して、ポリペプチド又はエピトープに「結合する」抗体という用語は、特異性及び／又は親和性により前記決定基に結合する抗体を示す。

「同一性」又は「同一性の」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基の鎖間のマッチの数によって決定されるようなポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデル又はコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）により対処されるギャップアライメント（存在する場合）による２つ以上の配列の小さい方の間での同一のマッチのパーセントを測る。関連ポリペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に計算することができる。このような方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。

同一性を決定する方法は、試験される配列間の最大マッチを与えるように設計される。同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記載される。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータプログラム方法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他の供給源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記）から公的に入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用され得る。

ＮＫＧ２Ａ中和剤の作製
阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、例えば、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分又はその天然リガンドＨＬＡ－Ｅに結合して、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ陽性リンパ球の表面で発現されるヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の阻害活性を低下させる薬剤（例えば、タンパク質）を含み得る。一実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合する。すなわち、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ－Ｅとの間の相互作用を遮断する。一実施形態では、薬剤（例えば、抗体）は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合して、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとそのリガンドＨＬＡ－Ｅとの間の相互作用を遮断する。別の実施形態では、阻害性受容体ＮＫＧ２Ａを中和する薬剤は、ヒトＨＬＡ－Ｅポリペプチドと結合して、ヒトＨＬＡ－Ｅタンパク質とヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａタンパク質との間の相互作用を阻害するタンパク質（例えば、抗体）である。別の実施形態では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａへの結合において、ＨＬＡ－Ｅと競合しない。すなわち、薬剤は、ＮＫＧ２Ａに結合し、且つＨＬＡ－Ｅと同時にＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに結合することができる。抗体は、ＣＤ９４及びＮＫＧ２Ａ上の複合エピトープ又は及びＮＫＧ２Ａ単独上のエピトープに結合し得る。一実施形態では、抗体は、ＨＬＡ－Ｅ結合部位と少なくとも部分的に重複するＮＫＧ２Ａ上のエピトープに結合する。

１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体及びキメラ抗体から選択される抗体である。１つの態様では、薬剤は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体に由来する定常ドメインを含む。１つの態様では、薬剤は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。１つの態様では、薬剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマ又はラクダＩｇ）、Ｖ_ＨＨ断片、単一ドメインＦＶ及び単鎖抗体断片から選択される抗体断片である。１つの態様では、薬剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、カッパボディ、ＩｇＮＡＲ；及び多特異性抗体から選択される合成又は半合成抗体由来の分子である。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、Ｆｃγ受容体、例えばヒトＣＤ１６、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ及びＣＤ６４の１つ又は複数（又は全て）に対する実質的な特異的結合を呈示しない。このような抗体は、Ｆｃ受容体に結合しないことが知られている種々の重鎖の定常領域を含み得る。１つのこのような例は、ＩｇＧ４定常領域である。ＩｇＧ４、代わりにＦａｂ若しくはＦ（ａｂ’）２断片などの定常領域を含まない抗体断片を使用して、Ｆｃ受容体結合を回避することができる。Ｆｃ受容体結合は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて抗体のＦｃ受容体タンパク質への結合を試験することを含む、当技術分野において知られている方法に従って評価することができる。Ｆｃ受容体への結合を最小限又は除去するようにＦｃ部分が修飾された任意のヒト抗体タイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）を使用することもできる（例えば、参照によってその開示が本明細書中に援用される国際公開第０３１０１４８５号パンフレットを参照されたい）。Ｆｃ受容体結合を評価するためのアッセイ、例えば細胞ベースのアッセイなどは、当技術分野において周知であり、例えば国際公開第０３１０１４８５号パンフレットに記載されている。

従って、本開示は、ＮＫＧ２Ａに結合する抗体又は他の薬剤に関する。１つの態様では、抗体は、ヒトＮＫＧ２Ｃ及び／又はＮＫＧ２Ｅに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａに結合する。

本開示の１つの態様では、薬剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達を妨害することにより、例えばＮＫＧ２ＡによるＨＬＡ－Ｅの結合を妨害すること、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の立体構造変化を防止又は誘導すること及び／又はＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の二量体化及び／又はクラスター化に影響することにより、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ発現リンパ球のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ媒介性の阻害を低減する。

本開示の１つの態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃに対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００又は１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。本開示の別の態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ及び／又はＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。さらに好ましい態様では、薬剤は、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ及び／又はＮＫＧ２Ｈ分子に対するよりも少なくとも１５０、２００、３００、４００又は１０，０００倍低いＫＤでＮＫＧ２Ａの細胞外部分に結合する。これは、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されるか又は生物系で産生される）の細胞外部分に結合する薬剤の能力が測定され、同じアッセイにおいて同様に生成されたＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及び／又は他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体に対する薬剤の結合と比較される。代わりに、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを天然に発現するか又は過剰発現（例えば、一過性又は安定したトランスフェクション後）する細胞への薬剤の結合が測定され、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及び／又は他のＣＤ９４／ＮＫＧ２変異体を発現する細胞の結合と比較され得る。抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、任意選択的に、ＣＤ９４と一緒に阻害性受容体を形成するＮＫＧ２Ａスプライス変異体であるＮＫＧ２Ｂと結合し得る。一実施形態では、親和性は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）の実施例８に示されるようにＢｉａｃｏｒｅによって共有結合で固定化されたＮＫＧ２Ａ－ＣＤ９４－Ｆｃ融合タンパク質への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。

抗体は、例えば、ＮＫＧ２Ａ発現細胞への結合（高親和性）について、０．５～１０ｎｇ／ｍｌ、任意選択的に１～５ｎｇ／ｍｌ、任意選択的に１～１０ｎｇ／ｍｌ、任意選択的に１～２０ｎｇ／ｍｌ、例えば約４ｎｇ／ｍｌのＥＣ_５０を有することができる。ＮＫＧ２Ａ発現細胞は、例えば、ヒトＰＢＭＣ中のＮＫＧ２Ａ発現細胞であり得る。一実施形態では、ＮＫＧ２Ａ発現細胞は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを発現するように作製された細胞、例えば米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって援用される）の実施例１３に示されるような、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを安定して過剰発現するＢａ／Ｆ３細胞である。一実施形態では、抗体は、ヒトＮＫＧ２Ａポリペプチドに対して１０^－９Ｍ未満、任意選択的に１０^－１０Ｍ未満又は任意選択的に１０^－１１Ｍ未満、任意選択的に１０^－１０Ｍ～１０^－１２Ｍ、任意選択的に１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を有し、任意選択的に、結合親和性は、二価である。親和性は、例えば、米国特許第７，９３２，０５５号明細書（その開示は、参照によって援用される）に記載されるような単鎖ＮＫＧ２Ａ－ＣＤ９４－ｍＦｃ構築物への結合について評価することができる。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、以下の表に示される抗体のそれぞれのＶＨ及びＶＬ領域を含むヒト又はヒト化抗体であり得る。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、例えばＶＨ１＿１８、ＶＨ５＿ａ、ＶＨ５＿５１、ＶＨ１＿ｆ及びＶＨ１＿４６から選択されるヒトアクセプター配列からのＶＨヒトアクセプターフレームワークと、ＪＨ６ Ｊ－セグメント又は当技術分野で知られている他のヒト生殖系ＶＨフレームワーク配列とを含むヒト又はヒト化抗体であり得る。ＶＬ領域ヒトアクセプター配列は、例えば、ＶＫＩ＿Ｏ２／ＪＫ４であり得る。

一実施形態では、抗体は、抗体Ｚ２７０に基づくヒト化抗体又は抗体断片である。種々のヒト化Ｚ２７０ＶＨ鎖は、配列番号２～６（可変領域ドメインアミノ酸に下線）で示される。ヒト化Ｚ２７０ＶＨ軽鎖は、配列番号７に示される。ｈｕｍＺ２７０抗体は、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）にも開示される。ｈｕｍＺ２７０ＶＨ６（配列番号３）は、ＶＨ５＿５１に基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１（配列番号２）は、ＶＨ１＿１８に基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ５（配列番号４）は、ＶＨ５＿ａに基づき、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ７（配列番号５）は、ＶＨ１＿ｆに基づき、且つｈｕｍＺ２７０ＶＨ８（配列番号６）は、ＶＨ１＿４６に基づいており、これらは、全てＪＨ６ Ｊ－セグメントを有する。これらの抗体は、それぞれＮＫＧ２Ａへの高親和性結合を保持しており、ヒト化構築物のそれぞれのＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２の６つのＣ末端アミノ酸残基がヒトアクセプターフレームワークと同一であるため、抗体に対する宿主免疫応答の可能性が低い。アライメントプログラムＶｅｃｔｏｒＮＴＩを用いて、ｈｕｍＺ２７０ＶＨ１とｈｕｍＺ２７０ＶＨ５、－６、－７及び－８との間の以下の配列同一性を得た：７８，２％（ＶＨ１対ＶＨ５）、７９，０％（ＶＨ１対ＶＨ６）、８８，７％（ＶＨ１対ＶＨ７）及び９６，０％（ＶＨ１対ＶＨ８）。

１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号２～６のいずれか又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号７又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを含む。１つの態様では、薬剤は、（ｉ）配列番号２～６のいずれかのアミノ酸配列又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。配列番号２～６のいずれかの配列を含む重鎖と、配列番号７の配列を含む軽鎖とを有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和するが、実質的に活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧＥ又はＮＫＧ２Ｈに結合しない。さらに、この抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合についてＨＬＡ－Ｅと競合する。１つの態様では、薬剤は、配列番号２～６のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３配列を含む。本発明の１つの態様では、薬剤は、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖に由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含む。

重鎖（可変領域に下線）
ＶＨ１：

ＶＨ６：

ＶＨ５：

ＶＨ７：

ＶＨ８：

軽鎖

１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２～６のいずれかの残基３１～３５（アミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号８））に対応するＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号２～６のいずれかの残基５０～６０（アミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹ（配列番号９））（任意選択的に、ヒト由来の６つの末端アミノ酸を含む場合には残基５０～６６、すなわちＶＨ６重鎖の配列ＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号１０）、ＶＨ１重鎖の配列ＲＩＤＰＹＤＳＥＴＨＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号１１）など）に対応するＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号２～６のいずれかの残基９９～１１４（Ｋａｂａｔに従うと９５～１０２）（アミノ酸配列ＧＧＹＤＦＤＶＧＴＬＹＷＦＦＤＶ（配列番号１２））に対応するＣＤＲ－Ｈ３とを含む抗体又は抗体断片である。一実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２～６のいずれかの残基５０～６６に対応する。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。

１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号７の残基２４～３４（アミノ酸配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１３））に対応するＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号７の残基５０～５６（アミノ酸配列ＮＡＫＴＬＡＥ（配列番号１４））に対応するＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号７の残基８９～９７（アミノ酸配列ＱＨＨＹＧＴＰＲＴ（配列番号１５））に対応するＣＤＲ－Ｌ３とを含む抗体又は抗体断片である。任意選択的に、ＣＤＲは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を含み得る。

１つの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２～６のいずれかの残基３１～３５に対応するＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号２～６のいずれかの残基５０～６０（任意選択的に、５０～６６）に対応するＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号２～６のいずれかの残基９９～１１４（Ｋａｂａｔに従うと９５～１０２）に対応するＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号７の残基２４～３４に対応するＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号７の残基５０～５６に対応するＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号７の残基８９～９７に対応するＣＤＲ－Ｌ３とを含む抗体又は抗体断片である。

１つの態様では、薬剤は、上記の抗体のいずれかが結合するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａエピトープに対して産生された完全ヒト抗体である。

上記の抗体を使用可能であるが、他の抗体も作製され得ることが理解されるであろう。例えば、ＮＫＧ２Ａ、好ましくは（しかし、排他的ではない）ヒトＮＫＧ２Ａの任意の断片又はＮＫＧ２Ａ断片の任意の組み合わせを免疫原として使用して、抗体を産生させることができ、抗体は、本明細書に記載されるようにＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞においてそのようにできる限り、ＮＫＧ２Ａポリペプチド内の任意の位置のエピトープを認識することができる。最も好ましくは、エピトープは、配列番号２～６のいずれかの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有する抗体によって特異的に認識されるエピトープである。

一態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２～６のいずれかの重鎖と配列番号７の軽鎖とを有する抗体、例えばモナリズマブと実質的に同じエピトープに結合する。配列番号２～６のいずれかの重鎖と配列番号７の軽鎖とを有する抗体は、以下のアミノ酸置換：Ｋ１９９Ａ／Ｄ２０２Ａ／Ｖ２１３Ｓ／Ｒ２１５Ａ／Ｋ２１７Ａ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＬ６５２３４．１を参照されたい）を有するＮＫＧ２Ａ突然変異体への結合の喪失を有する。一実施形態では、本開示に従って使用される抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２～６のいずれかの重鎖と配列番号７の軽鎖とを有する抗体、例えばモナリズマブが結合するエピトープと少なくとも部分的に重複するか、又はその中の少なくとも１つの残基を含むＮＫＧ２Ａのエピトープに結合する。抗体が結合する残基は、ＮＫＧ２Ａポリペプチドの表面上において、例えば細胞の表面で発現されるＮＫＧ２Ａポリペプチド中に存在するものとして記述することができる。抗体が結合するＮＫＧ２Ａ上のアミノ酸残基は、例えば、Ｋ１９９、Ｄ２０２、Ｖ２１３、Ｒ２１５及びＫ２１７（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＬ６５２３４．１又は配列番号１のＮＫＧ２Ａアミノ酸配列を参照されたい）からなる残基の群から選択することができる。

ＮＫＧ２Ａ突然変異体でトランスフェクトした細胞に対する抗ＮＫＧ２Ａ抗体の結合を測定し、これを、抗ＮＫＧ２Ａ抗体が野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチド（配列番号１）に結合する能力と比較することができる。抗ＮＫＧ２Ａ抗体と、突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチド（例えば、置換Ｋ１９９Ａ／Ｄ２０２Ａ／Ｖ２１３Ｓ／Ｒ２１５Ａ／Ｋ２１７Ａを有する突然変異型ＮＫＧ２Ａ）との結合の低減は、結合親和性（例えば、特定の突然変異体を発現する細胞のＦＡＣＳ試験などの公知の方法若しくは突然変異型ポリペプチドとの結合のＢｉａｃｏｒｅ試験により測定される）の低減及び／又は抗ＮＫＧ２Ａ抗体の全結合能力（例えば、ポリペプチド濃度に対する抗ＮＫＧ２Ａ抗体濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少によって立証される通り）に低減があることを意味する。結合の有意な低減は、突然変異残基が抗ＮＫＧ２Ａ抗体との結合に直接関与するか、又は抗ＮＫＧ２Ａ抗体がＮＫＧ２Ａに結合していれば、結合タンパク質に接近していることを示す。

一部の実施形態では、結合の有意な低減とは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドとの結合親和性及び／又は能力が、その抗体と野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチドとの結合と比較して４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超若しくは９５％超だけ低減されることを意味する。特定の実施形態では、結合は、検出限界を下回る。一部の実施形態では、結合の有意な低減は、突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドに対する抗ＮＫＧ２Ａ抗体の結合が、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチドとの間で観察される結合の５０％未満（例えば、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％又は１０％未満）であるときに立証される。

一部の実施形態では、突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドに対する有意に低い結合を呈示する抗ＮＫＧ２Ａ抗体が提供され、突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドでは、配列番号２～６のいずれかの重鎖と配列番号７の軽鎖とを有する抗体、例えばモナリズマブが結合するアミノ酸残基を含むセグメント中の残基が、野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチド（例えば、配列番号１のポリペプチド）への結合と比較して異なるアミノ酸で置換されている。一実施形態では、突然変異体は、配列番号１の野生型ＮＫＧ２Ａを参照して置換Ｋ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｖ２１３Ｓ、Ｒ２１５Ａ及びＫ２１７Ａを有する。

１つの態様では、薬剤は、配列番号１６のアミノ酸配列をするＶＨに由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３配列を含む。本開示の１つの態様では、薬剤は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列を含む。１つの態様では、薬剤は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨに由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３配列と、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬに由来するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３配列とを含む。配列番号１６の重鎖及び配列番号１７の軽鎖を有する抗体は、ＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和し、活性化受容体ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧＥ又はＮＫＧ２Ｈにも結合する。抗体は、細胞表面のＮＫＧ２Ａへの結合に対してＨＬＡ－Ｅと競合しない（すなわちＮＫＧ２Ａの非競合的アンタゴニストである）。

１つの態様では、薬剤は、可変重（ＶＨ）ドメイン（配列番号１６）のアミノ酸残基３１～３５、５０～６０、６２、６４、６６及び９９～１０８と、可変軽（ＶＬ）ドメイン（配列番号１７）のアミノ酸残基２４～３３、４９～５５及び８８～９６とを含み、任意選択的に、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるアミノ酸置換を有する。

１つの態様では、薬剤は、上記の抗体のいずれかが結合するＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａエピトープに対して産生された完全ヒト抗体である。

上記の抗体を使用可能であるが、抗体がＮＫＧ２Ａの阻害活性の中和を引き起す限り、他の抗体もＮＫＧ２Ａポリペプチドの任意の部分を認識して、それに対して産生され得ることが理解されるであろう。例えば、ＮＫＧ２Ａ、好ましくは（しかし、排他的ではない）ヒトＮＫＧ２Ａの任意の断片又はＮＫＧ２Ａ断片の任意の組み合わせを免疫原として使用して、抗体を産生させることができ、抗体は、本明細書に記載されるようにＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞においてそのようにできる限り、ＮＫＧ２Ａポリペプチド内の任意の位置のエピトープを認識することができる。一実施形態では、エピトープは、配列番号２～６のいずれかの重鎖及び配列番号７の軽鎖を有する抗体によって特異的に認識されるエピトープである。

１つの態様では、薬剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分への結合において、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）に開示されるｈｕｍＺ２７０抗体と競合する。１つの態様では、薬剤は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体の細胞外部分への結合において、米国特許第８，７９６，４２７号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）に開示されるヒト化Ｚ１９９抗体と競合する。競合的結合は、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ実験において測定することができ、ｈｕｍＺ２７０で飽和された固定化ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体（例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２発現細胞から精製されるか又は生物系で産生される）の細胞外部分に結合するための薬剤の能力が測定される。代わりに、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体を天然に発現するか又は過剰発現（例えば、一過性又は安定したトランスフェクション後）する細胞（これは、飽和用量のＺ２７０と共にインキュベートされている）への薬剤の結合が測定される。一実施形態では、競合的結合は、例えば、米国特許第８，２０６，７０９号明細書（その開示は、参照によって本明細書中に援用される）の実施例１５に示されるようにフローサイトメトリーによってＢａ／Ｆ３－ＣＤ９４－ＮＫＧ２Ａ細胞への結合を評価することにより、米国特許第８，２０６，７０９号明細書に開示される方法を用いて測定することができる。

抗ＮＫＧ２Ａ剤（例えば、抗体など）は、１ｍｇ／ｍｌ～５００ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤中に取り込むことができ、前記製剤は、２．０～１０．０のｐＨを有する。製剤は、緩衝系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤をさらに含み得る。一実施形態では、医薬製剤は、水性製剤、すなわち水を含む製剤である。このような製剤は、通常、溶液又は懸濁液である。さらなる実施形態では、医薬製剤は、水溶液である。「水性製剤」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む製剤であると定義される。同様に、「水溶液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液であると定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液であると定義される。

別の実施形態では、医薬製剤は、凍結乾燥製剤であり、使用前に医師又は患者によって溶媒及び／又は希釈剤が添加される。

別の実施形態では、医薬製剤は、事前に溶解することなく直ちに使用可能な乾燥製剤（例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥）である。

さらなる態様では、医薬製剤は、このような抗体及び緩衝剤の水溶液を含み、抗体は、１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、前記製剤は、約２．０～約１０．０のｐＨを有する。

別の実施形態では、製剤のｐＨは、約２．０～約１０．０、約３．０～約９．０、約４．０～約８．５、約５．０～約８．０及び約５．５～約７．５からなるリストから選択される範囲内である。

さらなる実施形態では、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム及びトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はこれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝剤のそれぞれは、代替実施形態を構成する。

さらなる実施形態では、製剤は、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、等張剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、キレート剤も含む。さらなる実施形態では、製剤は、安定剤をさらに含む。さらなる実施形態では、製剤は、界面活性剤をさらに含む。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５が参照される。

ペプチド医薬製剤中に他の成分が存在することも可能である。このような付加的な成分には、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、浸透圧調整剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン及びヒスチジンなどのアミノ酸）が含まれ得る。このような付加的な成分は、当然ながら、医薬製剤の全体的な安定性に悪影響を与えてはならない。

抗体を含有する医薬組成物は、いくつかの部位、例えば局所部位（例えば、皮膚及び粘膜部位）、吸収を迂回する部位（例えば、動脈内、静脈内、心臓内の投与）及び吸収を伴う部位（例えば、皮膚内、皮膚下、筋肉内又は腹部内の投与）において、このような処置を必要としている患者に投与され得る。医薬組成物の投与は、このような処置を必要としている患者に対して、いくつかの投与経路、例えば皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、舌側、舌下、頬側、口内、経口、胃及び腸内、経鼻、肺（例えば、細気管支及び肺胞又はその全体を通して）、上皮性、真皮、経皮、膣内、直腸、眼球（例えば、結膜を通して）、尿管及び非経口によるものであり得る。

適切な抗体製剤は、他の既に開発された治療用モノクローナル抗体による経験を検討することにより決定することもできる。Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）及びＣａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）並びに同様の製剤などの臨床的状況において効果があることが示されているいくつかのモノクローナル抗体は、本開示の抗体と共に使用され得る。例えば、モノクローナル抗体は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０及び注射用滅菌水中でのＩＶ投与のために処方された１００ｍｇ（１０ｍＬ）又は５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの単回使用バイアル中、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給することができる。ｐＨは、６．５に調整される。別の実施形態では、抗体は、約２０ｍＭのクエン酸Ｎａ、約１５０ｍＭのＮａＣｌを含む約６．０のｐＨの製剤において供給される。

ＨＮＳＣＣの処置
癌腫、特にＨＮＳＣＣ、とりわけセツキシマブ耐性である切除不可能な癌腫又はＨＮＳＣＣの処置に有用な方法が記載される。セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））は、ＨＮＳＣＣについて２０１１年に規制当局（アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ））の承認を受けた抗ＥＧＦＲ抗体である。

セツキシマブ耐性癌腫は、セツキシマブによる事前の処置（及び任意選択的に放射線療法又は他の処置）にもかかわらず進行している（例えば、応答しない、再発した、他の器官に広がった）可能性がある。一部の実施形態では、癌が進行した個体は、単剤としてのセツキシマブによる事前の処置を受けていることができる。一部の実施形態では、癌が進行した個体は、化学療法薬（例えば、プラチナ製剤療法）と併用されたセツキシマブ又は放射線療法と併用されたセツキシマブによる事前の処置を受けていることができる。一部の実施形態では、セツキシマブによる事前の治療過程（任意選択的に放射線療法、化学療法及び／又は他の薬剤と組み合わせて）に加えて、個体は、プラチナ製剤化学療法薬によるさらに別の事前の治療過程を受けており、プラチナ製剤によるさらに別の事前の治療過程は、セツキシマブによる治療過程前に投与される。

一実施形態では、癌腫は、ＨＮＳＣＣである。ＨＮＳＣＣは、頭部又は頸部領域に発生する扁平細胞又は類基底腫瘍であり、鼻腔、鼻咽頭、副鼻腔、唇、口及び口腔、唾液腺、咽頭、下咽頭又は喉頭の腫瘍を含む。本明細書に開示される処置は、例えば、中咽頭腫瘍、喉頭腫瘍、口腔腫瘍及び下咽頭腫瘍の処置において特に有用であり得る。このような腫瘍は、医師、腫瘍内科医、組織病理学者及び耳鼻咽喉科医並びに頭頸部外科医などの腫瘍学の分野における実践者によって日常的に特定されている。任意選択的に、ＨＮＳＣＣは、非転移性ＨＮＳＣＣである。

本明細書に記載する任意の実施形態では、文脈から別の解釈が示されない限り、頭頸部癌（例えば、ＨＮＳＣＣ）は、任意選択的に、局部再発性、遠隔転移性であるとして記述され、且つ／又は不治と考えられ得る（及びそれらの組み合わせ、例えば局部再発性、局部再発性且つ遠隔転移性、局部再発性且つ非遠隔転移性であり、任意選択的にさらに上記症例のいずれかにおいて不治と考えられる。

一例示的態様では、切除不可能なＨＮＳＣＣ癌を有し、その疾患又は癌が、セツキシマブ単独又は化学療法若しくは放射線と併用されたセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行している哺乳動物宿主（例えば、ヒト患者）におけるＨＮＳＣＣの進行を停止、逆転又は抑制する方法が提供され、この方法は、宿主におけるＨＮＳＣＣの進行を検出可能に抑制するのに十分な量で抗ＮＫＧ２Ａ剤（例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体）、抗ＮＫＧ２Ａ抗体組成物又は関連組成物（例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体をコードする核酸）を患者に投与することを含む。

別の態様では、切除不可能な非転移性癌を有する哺乳動物宿主（例えば、ヒト患者）におけるＨＮＳＣＣの転移性癌への進行を予防する方法が提供され、任意選択的に、さらに、癌は、セツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行しており、この方法は、抗ＮＫＧ２Ａ剤を患者に投与することを含む。

本明細書に記載する任意の実施形態では、セツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行した疾患、癌又はＨＮＳＣＣは、セツキシマブ耐性の疾患、癌又はＨＮＳＣＣと呼ぶことができる。セツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行した癌又はＨＮＳＣＣを有する個体は、セツキシマブ耐性の（又は疾患、癌若しくはＨＮＳＣＣを有する）個体と呼ぶことができる。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ剤は、セツキシマブと組み合わせて投与される。耐性であるか又は例えば進行した癌は、任意選択的に、セツキシマブ処置に対して耐性であり、且つ例えば新しい原発腫瘍ではない腫瘍として特徴付けることができる。セツキシマブ耐性腫瘍は、例えば、同じ領域において且つセツキシマブ処置過程中又はセツキシマブ処置終了から限定的な期間（例えば、１、２又は３年以下、例えば３、４、６、９ヶ月）で出現し得る。

一実施形態では、疾患、例えばセツキシマブ耐性癌の処置に使用するための組成物が提供される。一部の実施形態では、そのＨＮＳＣＣ癌がセツキシマブによる（セツキシマブ単独又は化学療法若しくは放射線療法などの別の薬剤との併用）処置（例えば、事前の処置）に対して耐性である個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤及び／又はセツキシマブが提供される。一実施形態では、セツキシマブによる事前の処置を受けたヒト個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤が提供され、この処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を個体に投与することを含む。一実施形態では、癌又は癌腫は、ＨＮＳＣＣである。

一実施形態では、事前の処置（例えば、セツキシマブによる第１の処置過程）を受けた個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するためのセツキシマブが提供され、前記処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブ（例えば、セツキシマブによる第２の処置過程）の各々の有効量を個体に投与することを含む。従って、セツキシマブによる第１の事前の処置過程を受けたことがあり、その疾患がそうしたセツキシマブによる第１の処置過程中又はその後に進行した個体をセツキシマブによる第２の処置過程で処置することができ、この処置過程では、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体と組み合わせてセツキシマブを使用する。従って、セツキシマブによる第１の事前の処置過程を受けた個体は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブ（セツキシマブによる第２の処置過程）の各々の有効量で処置することができる。

一態様では、セツキシマブ及び／又はＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤の使用は、腫瘍負荷の低減をもたらすこと、任意選択的にベースライン直径和と比較した標的細胞病変の直径和の減少をもたらすことを目的とする。一実施形態では、セツキシマブ及び／又はＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤の使用は、癌の進行を遅らせることを目的とする。一実施形態では、セツキシマブ及び／又はＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤の使用は、癌の転移を遅らせるか又は予防することを目的とする。

個体を処置するのに好適な処置プロトコルは、例えば、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体の有効量を個体に投与することを含み、この方法は、少なくとも１つの投与サイクルを含み、このサイクルにおいて、少なくとも１用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一実施形態では、投与サイクルは、２週間～８週間である。

一実施形態では、方法は、少なくとも１つの投与サイクルを含み、このサイクルは、８週間以下の期間であり、少なくとも１つのサイクルの各々にわたり、２、３又は４用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

一実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａは、少なくとも１週間、２週間、３週間又は４週間にわたり、リンパ球上のＮＫＧ２Ａ受容体を飽和させるのに有効な量で投与される。特定の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の用量（例えば、各用量）は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇで投与される。

本明細書に記載される実施形態のいずれかの一態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間又は４週間に１回投与される。

個体への抗ＮＫＧ２Ａ抗体の送達（直接投与又は例えば抗ＮＫＧ２Ａ抗体コード化核酸配列を含むポックスウイルス遺伝子導入ベクターからなど、そこでの核酸からの発現のいずれかによる）及び本明細書に記載される他の方法の実施は、癌進行（特にＨＮＳＣＣ進行）の任意の好適な態様を低減、処置、予防又はそうでなければ改善するために使用することができる。本明細書に開示される方法は、腫瘍増殖、腫瘍細胞の数及びそれに関連する任意のパラメータ又は症状（例えば、バイオマーカー）の低減及び／又は改善に特に有用であり得る。本明細書に開示される方法は、腫瘍再発の予防、無増悪生存期間の増加、転移の予防に特に有用であり得る。こうした癌進行の態様を独立に且つ総合的に低減、予防又はそうでなければ改善する方法は、有利な特徴である。

別の態様では、癌進行のリスクを低減し、開始を経た細胞集団におけるさらなる癌進行のリスクを低減し、且つ／又はヒト患者における癌進行を抑制するための治療レジメンを付与する方法が提供される。別の態様では、ＨＮＳＣＣと診断されたヒト患者の関連期間にわたる生存確率を高める方法が提供される。別の態様では、ＨＮＳＣＣ患者のクオリティオブライフを改善する方法が提供され、これは、そのクオリティオブライフを改善するのに有効な量で組成物を患者に投与することを含む。別の態様では、本明細書に記載の方法は、腫瘍サイズ又は腫瘍負荷を有意に低減するために適用することができる。さらに別の態様では、本明細書に記載の方法は、脊椎動物宿主のＨＮＳＣＣ細胞の数を有意に減少させるために、例えばＨＮＳＣＣ細胞の総数が減少するように適用することができる。関連する意味において、脊椎動物、例えばヒト癌患者のＨＮＳＣＣ細胞を殺傷する（例えば、その細胞死を直接又は間接的に引き起こす）方法が提供される。

一般に、癌進行及び応答は、標準的な腫瘍効果基準慣例、例えばＥｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ＥＡ，ｅｔ ａｌ，Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１），Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００９：４５：２２８－２４７（その開示内容は、参照により本明細書中に援用される）により詳述されている通りの“Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ”（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１に従って研究者により決定することができる。

本明細書に開示される通り、セツキシマブと組み合わせてＮＫＧ２Ａ中和剤（例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体）を使用して個体を処置することができる。その結果、事前のセツキシマブ過程（事前のセツキシマブ過程は、ＮＫＧ２Ａ中和剤による併用処置を含まない）中又はその後にＨＮＳＣＣが進行したら、個体（例えば、切除不可能であり、任意選択的に非転移性の癌を有する）をＮＫＧ２Ａ中和剤とセツキシマブとの組み合わせで処置することができる。事前のセツキシマブ過程は、１つ又は複数の別の薬剤又は療法、特に放射線療法及び／又は化学療法を含み得る。

いくつかの症例では、事前のセツキシマブ過程（単剤として又は任意選択的に放射線療法及び／若しくは化学療法との併用のいずれか）前に、個体は、プラチナ製剤化学療法薬を用いたより早期の事前の処置過程を受けていることができ；例えば、個体は、プラチナ製剤による処置過程後、事前のセツキシマブ過程による処置を受けている。この状況において、個体は、プラチナ製剤による処置にもかかわらず癌の進行を経験し、それに続いてセツキシマブによる処置（事前のセツキシマブ過程）を受けた可能性があり、この場合、任意選択的に、セツキシマブは、放射線療法及び／又は化学療法薬と併用して投与される。その後、個体が事前のセツキシマブ過程による処置にもかかわらず癌の進行を経験した場合、個体は、ＮＫＧ２Ａ中和剤とセツキシマブとの併用によって処置することができる。

ＮＫＧ２Ａ中和剤とセツキシマブとの併用投与は、同じ若しくは異なる剤形の化合物の同時投与又は化合物の個別投与（例えば、連続投与）を含む。従って、ＮＫＧ２Ａ中和剤とセツキシマブとは、個別投与のために製剤化されるものとして記述することができ、これらは、同時に又は順次投与することができる。処置は、任意選択的に１つ又は複数のさらに別の薬剤の投与と組み合わせることができる。一実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤による処置過程は、ＮＫＧ２Ａ中和剤とセツキシマブとを含み、他の治療（例えば、抗癌）薬を含まない。別の実施形態では、ＮＫＧ２Ａ中和剤による処置過程は、ＮＫＧ２Ａ中和剤、セツキシマブ及び１つ又は複数の別の治療（例えば、抗癌）薬を含む。

本明細書で使用される通り、抗ＮＫＧ２Ａ剤とセツキシマブとの補助的又は併用投与は、同じ若しくは異なる剤形の化合物の同時投与又は化合物の個別投与（例えば、連続投与）を含む。従って、抗ＮＫＧ２Ａとセツキシマブとは、単一製剤で同時投与することができる。代わりに、抗ＮＫＧ２Ａとセツキシマブとは、個別投与のために製剤化することもでき、これらは、同時に又は順次投与する。

これらの処置方法において、抗ＮＫＧ２Ａ抗体とセツキシマブとは、個別に、一緒に若しくは順次又はカクテルにおいて投与することができる。一部の実施形態では、セツキシマブは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の投与前に投与する。例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与の約０～３０日前に投与することができる。一部の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与の約３０分～約２週間前、約３０分～約１週間前、約１時間～約２時間前、約２時間～約４時間前、約４時間～約６時間前、約６時間～約８時間前、約８時間～１日前又は約１日～５日前に投与される。一部の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与と同時に投与される。一部の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与後に投与される。例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与から約０～３０日後に投与することができる。一部の実施形態では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、セツキシマブの投与から約３０分～約２週間後、約３０分～約１週間後、約１時間～約２時間後、約２時間～約４時間後、約４時間～約６時間後、約６時間～約８時間後、約８時間～１日後又は約１日～５日後に投与される。

ＨＮＳＣＣを有するヒトを処置するための好適な処置プロトコルは、例えば、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する抗体及びセツキシマブの各々の有効量を患者に投与することを含み、この方法は、少なくとも１用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量において（例えば、２週間毎に）、且つ少なくとも１用量、任意選択的に少なくとも２用量のセツキシマブが投与される少なくとも１つの投与サイクルを含み、任意選択的に、セツキシマブは、２５０ｍｇ／ｍ^２の用量で毎週投与され、任意選択的に、セツキシマブは、初期用量としての４００ｍｇ／ｍ^２の用量に続いて２５０ｍｇ／ｍ^２の少なくとも１用量が毎週投与される。本明細書に記載される任意の実施形態では、各用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、固定用量、例えば１００～１０００ｍｇ、任意選択的に２００～１２００ｍｇ、例えば７５０ｍｇの固定用量で投与することができる。

一実施形態では、方法は、少なくとも１つの投与期間（例えば、投与サイクル）を含み、サイクル又は期間は、８週間（以下）であり、少なくとも１つの期間の各々にわたり、２、３又は４用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量（例えば、１００～１０００ｍｇ、任意選択的に２００～１２００ｍｇ、例えば７５０ｍｇの固定用量）で投与される。一部の実施形態では、各サイクルは、２５０ｍｇ／ｍ^２の用量で２、３、４、５、６、７又は８用量のセツキシマブの投与をさらに含む。任意選択的に、サイクルは、セツキシマブの負荷投与を含み；すなわち、サイクルにおける最初の用量は、４００ｍｇ／ｍ^２の用量で１回の初期用量のセツキシマブの後、２５０ｍｇ／ｍ^２の用量での後続用量のセツキシマブの投与を含む。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、有利には、実質的に完全（例えば、９０％、９５％）受容体飽和に必要な濃度（例えば、ＰＢＭＣ中のＮＫＧ２Ａ発現細胞上の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を滴定することにより評価される）より少なくとも１０、２０若しくは３０倍高い循環中濃度を達成する量又は任意選択的に実質的に完全な受容体飽和に必要な濃度（例えば、ＰＢＭＣ中のＮＫＧ２Ａ発現細胞上の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を滴定することにより評価される）より少なくとも１０、２０若しくは３０倍高い血管外組織（例えば、腫瘍組織若しくは環境）中濃度を達成する量で投与することができる。

ＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答は、ＨＬＡ－Ｅ発現標的細胞に対するＮＫＧ２Ａ発現ＮＫ細胞の細胞障害活性の好適なアッセイを用いて評価することができる。いくつかの例として、ＮＫ細胞活性のマーカーに基づくアッセイ、例えばＣＤ１０７又はＣＤ１３７発現が挙げられる。有利には、少なくとも１０μｇ／ｍｌの連続（最小）組織濃度を達成及び／又は維持するような量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を投与することができる。例えば、組織中１０μｇ／ｍｌを達成／維持するために達成及び／又は維持すべき血中濃度は、１００～１１０μｇ／ｍｌ、１００～１２０μｇ／ｍｌ、１００～１３０μｇ／ｍｌ、１００～１４０μｇ／ｍｌ、１００～１５０μｇ／ｍｌ、１００～２００μｇ／ｍｌ、１００～２５０μｇ／ｍｌ又は１００～３００μｇ／ｍｌであり得る。

１～１０μｇ／ｍｌのＮＫＧ２Ａ＋ ＮＫ細胞応答のＥＣ_１００を有する、本明細書の実施例で使用されるｈｕｍＺ２７０（例えば、モナリズマブ）などの抗ＮＫＧ２Ａ抗体のための例示的な処置プロトコルは、少なくとも１用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が約１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に２～１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に４～１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に６～１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に２～８ｍｇ／ｋｇ体重又は任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ体重の用量、任意選択的に１００～１０００ｍｇ、任意選択的に２００～１２００ｍｇ、例えば７５０ｍｇの固定用量で投与される少なくとも１つの投与サイクルを含む。任意選択的に、少なくとも２、３、４、５、６、７又は８用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体が投与される。一実施形態では、投与サイクルは、２週間～８週間である。一実施形態では、投与サイクルは、８週間である。一実施形態では、投与サイクルは、８週間であり、これは、１用量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を２週間毎に（すなわち合計４用量）投与することを含む。

本明細書に記載のいずれかの一態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約２週間に１回投与される。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共に使用される例示的処置プロトコルは、例えば、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に月２回投与することを含み、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続した投与間で少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量は、２～１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に２～６ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に２～４ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ体重又は任意選択的に１００～１０００ｍｇ、任意選択的に２００～１２００ｍｇ、例えば７５０ｍｇの固定用量である。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して、少なくとも４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度をもたらすように投与することができる。４０μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成すると、約４μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外組織、腫瘍環境）中濃度をもたらすと予測され、ヒト化Ｚ２７０（例えば、モナリズマブ）などの抗体について少なくともＥＣ_５０を付与する。

抗ＮＫＧ２Ａ抗体で使用される例示的処置プロトコルは、例えば、有効量の抗ＮＫＧ２Ａ抗体を患者に投与することを含み、抗体は、月２回投与され、抗ＮＫＧ２Ａ抗体の少なくとも２回の連続した投与間で少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度を維持するのに有効な量は、４～１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に４～６ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に４～８ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に約４ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に約６ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に約８ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択的に約１０ｍｇ／ｋｇ体重又は任意選択的に１００～１０００ｍｇ、任意選択的に２００～１２００ｍｇ、例えば７５０ｍｇの固定用量である。これらの用量は、任意選択的に、処置サイクル全体を通して、少なくとも１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の連続血中濃度をもたらすように投与することができる。１００μｇ／ｍｌの抗ＮＫＧ２Ａ抗体の血中濃度を達成すると、約１０μｇ／ｍｌの組織（例えば、血管外組織、腫瘍環境）中濃度をもたらすと予測され、従ってヒト化Ｚ２７０などの抗体について少なくともＥＣ_１００を付与する。

セツキシマブによる事前の処置時又はその後に進行したか又は十分応答することができなかった頭頸部癌を有する患者は、腫瘍細胞の表面でのＨＬＡ－Ｅの発現を評価する事前の検出ステップと共に又はそれなしで、ＮＫＧ２Ａ中和剤で処置することができる。従って、任意選択的に、処置方法は、個体からの腫瘍の生体サンプル中（例えば、腫瘍細胞上）のＨＬＡ－Ｅ核酸又はポリペプチドを検出するステップを含み得る。生体サンプルがＨＬＡ－Ｅを発現する（例えば、いずれの場合も任意選択的に基準と比較して検出可能なレベルでＨＬＡ－Ｅを発現する、少なくとも所定のレベルでＨＬＡ－Ｅを発現する、顕著にＨＬＡ－Ｅを発現する、高レベルにおいて又は抗ＨＬＡ－Ｅ抗体による高染色強度でＨＬＡ－Ｅを発現する）という決定を用いて、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する薬剤による処置から特に強い利益を受ける可能性がある頭頸部癌を有する者として患者を明示することができる。一実施形態では、方法は、生体サンプル中のＨＬＡ－Ｅ核酸又はポリペプチドの発現レベルを決定することと、にＮＫＧ２Ａの活性を阻害し、中和する薬剤による処置から利益を受ける個体に対応する基準レベル（例えば、値、強い細胞表面染色など）とそのレベルを比較することとを含む。生体サンプルが、基準レベルに対応し、且つ／又は基準レベルに対して増加したレベルでＨＬＡ－Ｅ核酸又はポリペプチドを発現という決定は、その個体が、ＮＫＧ２Ａの活性を阻害し、中和する薬剤による処置から特に強い利益を受ける可能性がある頭頸部癌を有することを示している。任意選択的に、生体サンプル中のＨＬＡ－Ｅポリペプチドを検出することは、悪性ＨＮＳＣＣ細胞の表面上に発現されたＨＬＡ－Ｅポリペプチドを検出することを含む。一実施形態では、生体サンプルがＨＬＡ－Ｅ核酸又はポリペプチドを顕著に発現するという決定は、個体が、ＮＫＧ２Ａの活性を中和する薬剤による処置から特に強い利益を受ける可能性がある頭頸部癌を有することを示している。「顕著に発現される」は、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに関連する場合、所与の患者から採取された相当な数の腫瘍細胞においてＨＬＡ－Ｅポリペプチドが発現されることを意味する。「顕著に発現される」という用語の定義は、正確な割合の値によって制約されないが、いくつかの例では、「顕著に発現される」と言われる受容体は、患者から採取されたＨＮＳＣＣ細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又はそれを超えて存在するであろう。

個人が、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドを発現する頭頸部癌細胞を有するかどうかの決定は、例えば、頭頸部癌細胞を含む個人からの生体サンプルを入手（例えば、生検の実施により）し、前記細胞を、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させ、且つ細胞がその表面上でＨＬＡ－Ｅを発現するかどうかを検出することを含み得る。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ－Ｅを発現する頭頸部癌細胞を有するかどうかの決定は、免疫組織化学アッセイを実行することを含む。任意選択的に、個人が、ＨＬＡ－Ｅを発現する頭頸部癌細胞を有するかどうかの決定は、フローサイトメトリーアッセイを実行することを含む。

さらに、頭頸部癌、特にＨＮＳＣＣを有する患者は、患者（又は患者の腫瘍）がＨＰＶ陽性であるかどうかを評価するための事前の検出ステップの有無にかかわらず、抗ＮＫＧ２Ａ剤を用いて処置することができる。一部の実施形態では、本発明の方法で処置される個体は、ＨＰＶ陽性である。一部の実施形態では、本発明の方法で処置される個体は、ＨＰＶ陰性である。

実施例１ － セツキシマブ耐性患者におけるセツキシマブと組み合わせたモナリズマブの反復注射によるＨＮＳＣＣの応答処置の症例
頭頸部のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（＋）及びＨＰＶ（－）扁平上皮癌を有する患者にＩＰＨ２２０１及びセツキシマブの第１ｂ／２相臨床試験を実施した。プラチナ製剤療法後のＨＮＳＣＣにおいて承認されているが、セツキシマブは、その状況では活性が限定的である（１２％奏効率）。本臨床試験は、セツキシマブと組み合わせてモナリズマブを用いたＨＮＳＣＣの処置の有効性を評価した。モナリズマブ（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１，２０１６を参照されたい）は、ＩＰＨ２２０１とも呼ばれ、配列番号２に示される重鎖アミノ酸配列と、配列番号７に示される軽鎖アミノ酸配列とを有する中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体である。

参加基準は、以下の通りであった：
年齢≧１８歳
１．鼻咽頭（ＷＨＯ １型）、中咽頭、下咽頭、喉頭（声門上、声門、声門下）又は口腔の組織学的若しくは細胞学的に確認されたＨＰＶ（＋）若しくはＨＰＶ（－）扁平上皮癌。
２．イメージング（ＣＴスキャン、ＭＲＩ、Ｘ線）及び／又は理学的検査により立証された再発性及び転移性疾患。第ＩＩ相では、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ［ＲＥＣＩＳＴ］１．１により測定可能な疾患が許可される。第Ｉｂ相では、測定可能な疾患の有無にかかわらず、患者は、適格である。
３．プラチナ製剤化学療法後の進行。
４．第Ｉｂ相についてのみ：事前に処置を受け、且つ治癒を目的とするさらなる治療を受けられない患者。この部は、過去の選択処置の数にかかわらず、事前に処置を受けた患者も受けられる。
第ＩＩ相についてのみ：再発性及び／又は転移性疾患のために最大２つの事前の全身レジメンを受け、治癒を目的とするさらなる治療を受けられない患者。
５．一次処置（局部進行性疾患）のために投与され、事前のセツキシマブ処置の終了後少なくとも４ヶ月間進行性疾患がない場合を除いて、セツキシマブによる事前の処置を受けていない。
６．事前の手術からの回復並びに事前の放射線療法及び任意の全身療法によるグレード１以下の有害事象（脱毛症を除く）からの回復。
７． ０～１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステイタス。
８．余命≧３ヶ月。
９．脳転移の処置を受けた患者は、治療終了（放射線及び／又は手術を含む）から＞４週間であり、治験登録時点で臨床的に安定しており、且つ試験登録時点でコルチコステロイド療法を受けていなければ適格である。
１０．以下のように定義される十分な血液、免疫、肝臓及び腎臓機能
・ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ、
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３、
・血小板≧１００，０００／ｍｍ３、
・総ビリルビン≦１．５×試験施設正常値上限（ＵＮＬ）、
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×試験施設ＵＮＬ、
・血清クレアチニン≦１．５×試験施設ＵＮＬ又は推定（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式）若しくは実測クレアチニンクリアランス≧５０ｍＬ／分。
１１．妊娠可能な女性について、試験処置開始前の７２時間以内に血清妊娠テストが陰性である。妊娠可能な女性及び全ての男性は、モナリズマブ投与の期間中及びモナリズマブの最後の投与から最大５ヶ月にわたって適切な避妊（ホルモン又はバリア式避妊法；自制）を実施することに治験登録前に同意しなければならない。
１２．書面による同意説明文書を理解する能力。
１３．あらゆるプロトコル固有の手順に先立ち署名されたインフォームドコンセント。

除外基準は、以下の通りであった：
１．第ＩＩ相についてのみ：再発性及び／又は転移性疾患のための全身レジメンを事前に３回以上受けた患者（治験の第Ｉｂ相の部では制限なし）。
２．第ＩＩ相についてのみ：セツキシマブ又は上皮成長因子受容体の別の阻害剤を受けた患者は、セツキシマブが一次処置アプローチの一環として投与され、且つ事前のセツキシマブ処置の終了から少なくとも４ヶ月間進行性疾患がない場合を除いて、治験の第ＩＩ相から除外する。
３．セツキシマブに類似する化学又は生物学的組成の化合物に起因するアレルギー反応歴。
４．既知の未処置且つコントロール不良の脳転移を有する患者は、除外される。しかし、患者に神経兆候又は症状がなければ、適格性のための脳イメージング試験は必要ない。
５．同時発生の重篤なコントロール不良の医学的障害。
６．自己免疫疾患であって、
１．現時点で又は以前に全身免疫抑制又は免疫調節療法（全身経路により投与されるコルチコステロイドを含む）を必要とし、且つ／又は
２．いずれかの組織に不可逆的損傷を引き起こす相当の可能性を有し、且つ／又は
３．治験登録の３ヶ月未満前に診断されており、且つ／又は
４．臨床的に不安定であり、且つ／又は
５．進行して重篤な合併症を引き起こす相当のリスクを有する、自己免疫疾患。
７．下記のいずれかを含む心臓状態の異常：
１．不安定狭心症、
２．処置を必要とするが、その処置で安定化しない不整脈、
３． ＱＴｃ＞４５０ｍｓ（Ｍ）又は４７０ｍｓ（Ｆ）（バゼット（Ｂａｚｅｔｔ）補正式－ＱＴ間隔／√（ＲＲ間隔）、式中、ＲＲ間隔＝６０／ＨＲ）。
８．以下のいずれかを含む心不全の病歴：
１．過去６ヶ月以内の心筋梗塞、
２．報告されているうっ血性心不全（ニューヨーク心臓協会（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）の機能分類ＩＩＩ～ＩＶ）の病歴。
９．既知の間質性肺疾患。
１０．妊娠している女性は、この治験から除外される；授乳は、中断しなければならない。
１１．他の活性浸潤性悪性腫瘍（処置された基底若しくは扁平上皮癌又は子宮頸上皮内癌を除く）。
１２．治験登録前１４日以内の他の治験薬による処置。
１３．登録前３０日以内のステロイド又は他の免疫抑制剤による全身処置。ヒドロコルチゾン又は均等物による生理学的代替は、許容される。
１４．現時点の活性感染症。
１５． ＨＩＶの血清学検査が陽性である。
１６．陽性ＨＢｓ Ａｇ又は陽性ＨＢＶウイルス血症、陽性ＨＣＶ血症。
１７．医学的追跡及び試験プロトコルに関するコンプライアンスが可能ではない心理学的、家族的、社会学的又は地理的条件。

本治験は、用量漸増部を含んだが、患者は、３＋３設計を用いて固定用量のセツキシマブ（４００ｍｇ／ｍ２の負荷用量、次に毎週２５０ｍｇ／ｍ２）と組み合わせて、０．４、１、２、４又は１０ｍｇ／ｋｇの漸増用量レベルのモナリズマブを２週間毎に受けた。コホート拡大部は、最高試験用量１０ｍｇ／ｋｇのモナリズマブを使用し、最初の１１人の患者の後に無益性解析を含んだ。ＲＥＣＩＳＴに従って奏効率を評価し、８週間毎に評価した。癌進行又は許容不可能な毒性に到るまで患者を処置した。本治験は、さらに多くの患者を登録させ、奏効期間、無増悪生存及び全生存期間を評価するために依然として進行中である。

初期の部分奏功の中で、腓骨フリーフラップ再建と共に右後外側下顎骨切除を含む外科切除、その後の補助的放射線による処置を受けた右下歯槽堤の扁平上皮癌、ステージＴ４ａＮ２ｂＭ０／ＩＶＡの病歴を有する患者が観察された。その患者は、口腔の再発性扁平上皮癌（新しい原発癌ではない）、ｐ１６－陰性を有し、これは、切除不可能であった。患者は、以前に３サイクルのシスプラチン－タキソテレ－５－ＦＵ（ＴＰＦ）誘導（シスプラチンをカルボプラチンで代用）、続いて毎週のセツキシマブを含む同時化学放射線療法による処置を受けていた。セツキシマブの終了から約４ヶ月後、患者のＰＥＴ／ＣＴは、再発性癌を示した。患者は、セツキシマブ及び根治的放射線療法過程の終了から４ヶ月を少し超えた時点で再発が認められ、３年以内に再発性口腔癌が出現し（従って新しい原発癌とみなされなかった）、それは、同じ領域、この症例では全て右側に位置したことから、セツキシマブに対して耐性とみなされた。この患者には、ＩＰＨ２２０１及びセツキシマブの第Ｉｂ／２相治験が推奨された。プロトコルに従うモナリズマブ及びセツキシマブによる処置は、客観的奏効（ＰＲ）をもたらし、最良奏効は、ベースライン（処置前）と比較して、処置を受けた標的病変の５０％減少であった。病変の尺度は、長径和又はリンパ節の場合には短軸である。

初期部分奏功の中には、中咽頭、右側性、ステージＴｘＮ２ｂＭ０／ＩＶＡの扁平上皮癌を有する患者も観察された。この患者の事前の処置過程は、疾患早期における化学療法（シスプラチン／ドセタキセル／５ＦＵ）、それに続く放射線療法を含んだ。進行性疾患に際して、患者は、再発性／転移性疾患のために、初期部位及びリンパ節の手術、続いて化学療法（シスプラチン／カルボプラチン／５ＦＵ）、その後、セツキシマブによる処置を受けた。患者は、セツキシマブ処置に際して進行性疾患（最良奏効として）を示し、その後、患者は、パクリタキセル及びカルボプラチンによる処置を受けた。疾患進行時、患者は、ＩＰＨ２２０１及びセツキシマブの第Ｉｂ／２相治験に参加した。プロトコルに従うモナリズマブ及びセツキシマブによる処置は、奏効（ＰＲ）をもたらした。

セツキシマブと組み合わせた中和抗ＮＫＧ２Ａ抗体が、セツキシマブに対して耐性とみなされたＨＮＳＣＣ患者に有意な改善をもたらすことができるという知見は、切除不可能な癌を有し、且つその癌が、セツキシマブ、特に放射線療法と組み合わせた処置にもかかわらず進行するＨＮＳＣＣ患者の相当な集団に特定の機会を提供する。この処置は、さらなる進行を防ぐうえでとりわけ転移性癌を遅らせるか又は予防するために有益であり得る。

本明細書において援用される刊行物、特許出願及び特許を含む全ての参考文献は、参照によってその全体が本明細書に援用され、且つ本明細書中の他の箇所で行われる任意の別個に提供される特定の文献の援用に関係なく、各参考文献が参照によって援用されると個々に且つ具体的に示され、その全体が本明細書中で説明された場合と同じ程度まで（法律で許容される最大範囲まで）援用される。

「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という用語並びに同様の指示対象の使用は、本発明の説明に関連して、本明細書において他に記載されない限り又は文脈により明らかに否定されない限り、単数及び複数の両方を包含すると解釈されるべきである。

他に規定されない限り、本明細書において提供される全ての正確な値は、対応する概略値を代表する（例えば、特定の因子又は測定に関して提供される全ての正確な例示的な値は、必要に応じて「約」によって修飾される対応する概略測定値も提供すると考えることができる）。数に関連して「約」が使用される場合、これは、規定される数の＋／－１０％に対応する値を含むと規定され得る。

１つ又は複数の要素に関して「含む」、「有する」、「包含する」又は「含有する」などの用語を用いて本発明の任意の態様又は実施形態を本明細書中で記載することは、他に規定されない限り又は文脈により明らかに否定されない限り、その１つ又は複数の特定の要素「からなる」、「から本質的になる」又は「を実質的に含む」、本発明の同様の態様又は実施形態に対する支持を提供することが意図される（例えば、本明細書において特定の要素を含むと記載される組成物は、他に規定されない限り又は文脈により明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物も記載すると理解されるべきである）。

本明細書において提供されるいずれか及び全ての例又は例示的な言葉（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することのみが意図され、他で主張されない限り、本発明の範囲に限定を課さない。本明細書中の言葉は、特許請求されていない任意の要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されてはならない。

本出願は、以下を提供する。
１． セツキシマブによる事前の処置を受けた個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤。
２． 前記個体は、セツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する、上記１に記載の使用のための薬剤。
３． 前記個体は、放射線療法又は化学療法と併用されたセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する、上記１又は２に記載の使用のための薬剤。
４． 前記個体は、単剤としてのセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する、上記１～３のいずれかに記載の使用のための薬剤。
５． 前記個体は、切除不可能なＨＮＳＣＣを有する、上記１～４のいずれかに記載の使用のための薬剤。
６． セツキシマブと組み合わせて投与される、上記１～５のいずれかに記載の使用のための薬剤。
７． セツキシマブによる事前の処置を受けた個体におけるＨＮＳＣＣの処置に使用するためのセツキシマブであって、前記処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を前記個体に投与することを含む、セツキシマブ。
８． 前記個体は、切除不可能なＨＮＳＣＣを有する、上記７に記載の使用のための薬剤。
９． 切除不可能であり、任意選択的に非転移性のＨＮＳＣＣを有するヒト個体における癌の処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤であって、任意選択的に、前記ＨＮＳＣＣは、セツキシマブ耐性であり、前記処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を前記個体に投与することを含む、薬剤。
１０． 前記個体は、セツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する、上記１～９のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１１． 前記個体は、放射線療法と併用されたセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有する、上記１～１０のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１２． 個体におけるＨＮＳＣＣの前記処置は、
ａ）個体が、セツキシマブ（単剤として又は放射線療法及び／若しくは化学療法薬との組み合わせにおいて）に対して耐性であるＨＮＳＣＣを有するかどうかを決定すること、及び
ｂ）前記個体が、セツキシマブに対して耐性であるＨＮＳＣＣを有すると決定されると、（ｉ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及び（ｉｉ）セツキシマブを前記個体に投与すること
を含む、上記１～１１のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１３． 個体におけるＨＮＳＣＣの前記処置は、
ａ）ＨＬＡ－Ｅポリペプチドが、ＨＮＳＣＣを有する前記個体からの悪性細胞によって発現されるかどうかを決定すること、及び
ｂ）悪性細胞がＨＬＡ－Ｅポリペプチドを発現すると決定されると、（ｉ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する薬剤、任意選択的に抗体、及びｉｉ）セツキシマブを前記個体に投与すること
を含む、上記１～１２のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１４． ＨＬＡ－Ｅポリペプチドが悪性細胞によって発現されるかどうかを決定することは、ＨＮＳＣＣ細胞を含む生体サンプルを前記個体から取得すること、前記細胞を、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させること及びＨＬＡ－Ｅを発現する細胞を検出することを含む、上記１３に記載の使用のための薬剤。
１５． ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記薬剤は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体である、上記１～１４のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１６． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチド（配列番号１）と比較して、置換Ｋ１９９Ａ／Ｄ２０２Ａ／Ｖ２１３Ｓ／Ｒ２１５Ａ／Ｋ２１７Ａ（配列番号１を参照して）を有する突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドへの結合の低減によって特徴付けられる、上記１５に記載の使用のための薬剤。
１７． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、上記１５又は１６に記載の使用のための薬剤。
１８． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＦｃγ受容体への結合を低減するアミノ酸修飾を含むＦｃ操作された定常領域を含む、上記１５～１７のいずれかに記載の使用のための薬剤。
１９． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ヒトＮＫＧ２Ａへの結合について、配列番号２及び７をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖を有する抗体と競合する、上記１５～１８のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２０． 前記ＮＫＧ２Ａ抗体は、配列番号２に示される配列を有する重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメインと、配列番号７に示される配列を有する軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメインとを含む、上記１５～１９のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２１． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、治療的に有効な量の前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体を含む薬学的に許容可能な組成物として投与される、上記１５～２０のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２２． 前記組成物は、いかなる他の薬学的活性剤も含まない、上記２１に記載の使用のための薬剤。
２３． 前記抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、約１週間に１回～約１ケ月に１回の投薬頻度で数回投与される、上記１～２２のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２４． セツキシマブは、毎週投与される、上記１～２３のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２５． 前記処置は、少なくとも１つの投与サイクルを含み、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記薬剤は、２週間毎に投与され、且つセツキシマブは、毎週投与される、上記１～２４のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２６． 前記処置は、２週間の少なくとも１つの期間を含み、前記少なくとも１つの期間の各々にわたり、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、且つセツキシマブは、４００ｍｇ／ｍ²の初期用量及びそれに続いて２５０ｍｇ／ｍ²で毎週投与される、上記１～２５のいずれかに記載の使用のための薬剤。
２７． 前記処置は、２週間の少なくとも１つの期間を含み、前記少なくとも１つの期間の各々にわたり、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、１００～１０００ｍｇ、任意選択的に７５０ｍｇの固定用量で投与され、且つセツキシマブは、４００ｍｇ／ｍ²の初期用量及びそれに続いて２５０ｍｇ／ｍ²で毎週投与される、上記１～２６のいずれかに記載の使用のための薬剤。

Claims (14)

1. 切除不可能なＨＮＳＣＣを有するヒト個体における癌の処置に使用するための、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体を含む医薬組成物であって、前記処置は、（ａ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体、及び（ｂ）セツキシマブの各々の有効量を前記個体に投与することを含み、前記個体は、放射線療法と併用されたセツキシマブによる事前の処置にもかかわらず進行したＨＮＳＣＣ癌を有し、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、配列番号２に示される配列を有する重鎖と、配列番号７に示される配列を有する軽鎖とを含む、医薬組成物。
2. 個体におけるＨＮＳＣＣの前記処置は、
   ａ）個体が、セツキシマブに対して耐性であるＨＮＳＣＣを有するかどうかを決定すること、及び
   ｂ）前記個体が、セツキシマブに対して耐性であるＨＮＳＣＣを有すると決定されると、（ｉ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体、及び（ｉｉ）セツキシマブを前記個体に投与すること
   を含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
3. 個体におけるＨＮＳＣＣの前記処置は、
   ａ）ＨＬＡ－Ｅポリペプチドが、ＨＮＳＣＣを有する前記個体からの悪性細胞によって発現されるかどうかを決定すること、及び
   ｂ）悪性細胞がＨＬＡ－Ｅポリペプチドを発現すると決定されると、（ｉ）ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する抗体、及びｉｉ）セツキシマブを前記個体に投与すること
   を含む、請求項１又は２に記載の使用のための医薬組成物。
4. ＨＬＡ－Ｅポリペプチドが悪性細胞によって発現されるかどうかを決定することは、ＨＮＳＣＣ細胞を含む生体サンプルを前記個体から取得すること、前記細胞を、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドに結合する抗体と接触させること及びＨＬＡ－Ｅを発現する細胞を検出することを含む、請求項３に記載の使用のための医薬組成物。
5. ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、野生型ＮＫＧ２Ａポリペプチド（配列番号１）と比較して、置換Ｋ１９９Ａ／Ｄ２０２Ａ／Ｖ２１３Ｓ／Ｒ２１５Ａ／Ｋ２１７Ａ（配列番号１を参照して）を有する突然変異型ＮＫＧ２Ａポリペプチドへの結合の低減によって特徴付けられる、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
6. ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
7. ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、ヒトＦｃγ受容体への結合を低減するアミノ酸修飾を含むＦｃ操作された定常領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
8. ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、ヒトＮＫＧ２Ａへの結合について、配列番号２及び７をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖を有する抗体と競合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
9. 前記組成物は、いかなる他の薬学的活性剤も含まない、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
10. ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、約１週間に１回～約１ケ月に１回の投薬頻度で数回投与される、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
11. セツキシマブは、毎週投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
12. 前記処置は、少なくとも１つの投与サイクルを含み、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、２週間毎に投与され、且つセツキシマブは、毎週投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
13. 前記処置は、２週間の少なくとも１つの期間を含み、前記少なくとも１つの期間の各々にわたり、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、且つセツキシマブは、４００ｍｇ／ｍ^２の初期用量及びそれに続いて２５０ｍｇ／ｍ^２で毎週投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
14. 前記処置は、２週間の少なくとも１つの期間を含み、前記少なくとも１つの期間の各々にわたり、ヒトＮＫＧ２Ａの阻害活性を中和する前記抗体は、１００～１０００ｍｇ、任意選択的に７５０ｍｇの固定用量で投与され、且つセツキシマブは、４００ｍｇ／ｍ^２の初期用量及びそれに続いて２５０ｍｇ／ｍ^２で毎週投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。