CN112198253B - 一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法 - Google Patents

一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法：包括制备不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉；采用HPLC法对冻干粉进行检测，通过多批次姜厚朴标准汤剂HPLC色谱图生产对照特征图谱,得到9个色谱峰的相对保留时间；将生产实际中任意一批姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按相同液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图比较分析，确定待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。本发明整体控制，可操作性强，同时为制定姜厚朴配方颗粒工艺标准、质量标准提供科学、合理依据。

Description

一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法
技术领域
本发明涉及中药质量控制领域，具体而言，涉及一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法。
背景技术
中药配方颗粒的所有药学研究均须与其标准汤剂进行对比，以保证与标准汤剂质量一致性，因此，标准汤剂的质量标准研究对评判后期配方颗粒工艺标准与质量标准尤为重要。
姜厚朴作为常用的大宗中药品种，具有燥湿消痰，下气除满功效，临床用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳等方面。现有技术已对厚朴药材、饮片、配方颗粒进行了较全面的研究，但诸类研究均停留在实验室阶段，尚未涉及到能在大生产中推广应用的应用型研究。本发明需要解决的问题是，通过多批次合格药材和饮片制备姜厚朴标准汤剂冻干粉，建立姜厚朴标准汤剂对照特征图谱，将生产实际中任意一批姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按相同液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图比较分析，通过分析结果综合判断待检测的姜厚朴配方颗粒的质量，阐述姜厚朴配方颗粒制备过程中的量质传递规律，为制定姜厚朴配方颗粒工艺标准、质量标准提供科学、合理依据。
发明内容
本发明的目的是基于姜厚朴标准汤剂建立其HPLC对照特征图谱，将生产实际中任意一批姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按相同液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图比较分析，通过分析结果综合判断待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，由以下步骤组成：
1)采集多批次厚朴药材，加工炮制成合格批次姜厚朴饮片，制备不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉；
2)将步骤1)中不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉制备成供试品，采用HPLC对供试品进行检测，通过多批次姜厚朴标准汤剂HPLC色谱图生产对照特征图谱，得到9个色谱峰的相对保留时间；
3)将实际生产中任意一批姜厚朴待测品按照步骤2)中的液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图谱进行比较分析；
4)根据步骤3)中的分析结果判断待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。
优选地，步骤1)中所述姜厚朴标准汤剂冻干粉制备方法为：称取姜厚朴饮片100g，置于煎药壶内，加入1200mL纯水，武火煮沸后，文火再煎煮20min，提取液经200目纱布过滤后，药渣再加纯水1100mL，武火煮沸后，文火煎煮15min，合并两次滤液，经旋转蒸发仪浓缩至料液比为1：1，-40℃～-50℃的温度下进行低温冷冻干燥，粉碎即得。
优选地，步骤2)中所述姜厚朴标准汤剂HPLC特征图谱色谱条件为：
所述HPLC含紫外检测器，紫外检测器的检测波长为210-250nm，优选为220nm；
所述HPLC的色谱柱为C18色谱柱；
所述HPLC的流动相由乙腈、0.1％磷酸溶液组成，流动相中乙腈、0.1％磷酸溶液的体积比分别为：0-16min，乙腈12-14％；16-24min，乙腈14-17％，24-40min，乙腈17-30％，40-50min，乙腈30％-75％，50-60min，乙腈75％-83％，流速均为1.2ml/min；
所述HPLC的柱温为30-40℃；
所述HPLC的理论板数按厚朴酚峰计算≥3800。
优选地，步骤3)中的姜厚朴待测品为姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体和配方颗粒成品。
优选地，所述HPLC特征图谱的9个特征峰中，其中1号峰为紫丁香苷，2号峰为厚朴碱，5号峰为木兰花碱，8号峰为和厚朴酚，9号峰为厚朴酚，以4号峰为对照峰，各特征峰的相对保留时间为：
1号峰：相对保留时间为0.637；
2号峰：相对保留时间为0.714；
3号峰：相对保留时间为0.905；
4号峰：相对保留时间为1.000；
5号峰：相对保留时间为1.196
6号峰：相对保留时间为1.717；
7号峰：相对保留时间为3.837；
8号峰：相对保留时间为4.414；
9号峰：相对保留时间为4.537；
各特征峰的相对保留时间应在5％范围内。
优选地，步骤3)中取任一批次姜厚朴药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品特征图谱与标准汤剂对照特征图谱相似度不小于0.8。
本发明将生产实际中任意一批姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按相同液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图比较分析，确定待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。根据本发明确定各峰相对保留时间为峰1:0.637，峰2:0.714，峰3:0.905，峰4:1.000，峰5:1.191，峰6:1.717，峰7:3.837，峰8:4.414，峰9：4.537，均在规定值的±5％之内，RSD<1％,特征图谱相似度不小于0.8.本发明所述方法可用于姜厚朴配方颗粒实际生产全过程整体控制，可操作性强，同时为制定姜厚朴配方颗粒工艺标准、质量标准提供科学、合理依据。
附图说明
图1为实施例1中19批姜厚朴标准汤剂冻干粉的HPLC特征图谱；
图2为实施例1中姜厚朴标准汤剂对照特征图谱；
图3为实施例2中某一批姜厚朴配方颗粒动态生成过程中不同工序下样品特征图谱；
图4为实施例3中不同姜厚朴配方颗粒特征图谱图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明技术方案做进一步解释说明。
一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，由以下步骤组成：
1)采集多批次厚朴道地产区药材,加工炮制成合格批次姜厚朴饮片,制备不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉。
2)将步骤1)中不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉制备供试品，采用HPLC对供试品进行检测，通过多批次姜厚朴标准汤剂HPLC色谱图生产对照特征图谱,得到9个色谱峰的相对保留时间。
3)将生产实际中任意一批姜厚朴从药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按步骤2)中液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图比较分析。
4)根据步骤3)中分析结果判断待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。
本发明所述姜厚朴标准汤剂冻干粉制备方法为：称取姜厚朴饮片100g，置于煎药壶内，加入1200mL纯水，武火煮沸后，文火再煎煮20min，提取液经200目纱布过滤后，药渣再加纯水1100mL，武火煮沸后，文火煎煮15min，合并两次滤液，经旋转蒸发仪浓缩至料液比约为1：1，低温冷冻干燥，粉碎即得。
本发明所述姜厚朴标准汤剂HPLC特征图谱色谱条件为：
所述HPLC含紫外检测器，紫外检测器的检测波长为210-250nm；优选地，所述紫外检测器的检测波长为220nm。
所述HPLC的色谱柱为C18色谱柱；
所述HPLC的流动相由乙腈、0.1％磷酸溶液组成，流动相中乙腈、0.1％磷酸溶液的体积比分别为：0-16min，乙腈12-14％；16-24min，乙腈14-17％，24-40min，乙腈17-30％，40-50min，乙腈30％-75％，50-60min，乙腈75％-83％，流速均为1.2ml/min
所述HPLC的柱温为30-40℃；
所述HPLC的理论板数按厚朴酚峰计算≥3800。
所述混合对照品溶液的制备方法为：分别精密称取紫丁香苷对照品5.50mg(纯度94.9％)、厚朴碱对照品2.52mg(纯度98.27％)、木兰花碱对照品4.20mg(纯度99％)、木兰脂素对照品7.93mg(纯度98.3％)、厚朴酚对照品11.49(纯度98.8％)、和厚朴酚对照品3.03mg(纯度99.3％)，分别加甲醇，超声溶解，定容至10mL，制成各自的对照品溶液，再各分别1ml，加甲醇制成1mL含紫丁香苷0.087mg、厚朴碱0.041mg、木兰花碱0.069mg、木兰脂素0.130mg、厚朴酚0.189mg、和厚朴酚0.050mg的混合对照品溶液。
所述供试品溶液的制备方法为：取本品粉末(过二号筛)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
所述测定方法为：分别精密吸取混合对照品溶液1μl、供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
本发明所述HPLC特征图谱的9个特征峰中，其中1号峰为紫丁香苷，2号峰为厚朴碱，5号峰为木兰花碱，8号峰为和厚朴酚，9号峰为厚朴酚，以4号峰为对照峰，各特征峰的相对保留时间为：
1号峰：相对保留时间为0.637；
2号峰：相对保留时间为0.714；
3号峰：相对保留时间为0.905；
4号峰：相对保留时间为1.000；
5号峰：相对保留时间为1.196
6号峰：相对保留时间为1.717；
7号峰：相对保留时间为3.837；
8号峰：相对保留时间为4.414；
9号峰：相对保留时间为4.537；
各特征峰的相对保留时间应在5％范围内。
本发明所述的一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，要求取任一批次姜厚朴药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品特征图谱与标准汤剂对照特征图谱相似度不小于0.8。
实施例1姜厚朴标准汤剂对照特征图谱的构建
本实施例包括以下步骤：
1)、采集湖北、四川、重庆等厚朴主要道地产地的厚朴药材29批，筛除不合格批次，将合格批次药材炮制成合格的姜厚朴饮片19批(见表1)参照说明书正文中标准汤剂制备、供试品制备、对照品溶液的制备以及样品测定方法获得19批次姜厚朴标准汤剂HPLC色谱图。
表1 不同批次姜厚朴药材产地信息
序号 批号 产地
1 HP-01 湖北省恩施市新塘镇
2 HP-02 湖北省恩施市双河镇
3 HP-04 湖北省宣恩县椿木营
4 HP-05 湖北省宣恩县椒园镇
5 HP-06 湖北省鹤峰县北佳乡
6 HP-07 湖北省鹤峰县中营镇
7 HP-08 湖北省建始县龙平镇
8 HP-09 四川省平武县龙安镇
9 HP-10 四川都江堰市青城山镇香花村
10 HP-14 四川彭州市通济镇青家坪村
11 HP-16 四川彭州市通济镇白水河村
12 HP-17 四川彭州市通济镇羊叉村
13 HP-19 四川都江堰市蒲阳镇同义村
14 HP-21 四川省达州市宣汉县樊哙镇
15 HP-22 四川省达州市宣汉县龙泉乡
16 HP-24 重庆市武隆县龙洞镇黄精村
17 HP-25 重庆市武隆县火炉镇云丰村
18 HP-27 重庆市武隆县仙女镇白果核桃村
19 HP-29 重庆市武隆县仙女镇阳光村
2)将19批供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012.130723版本)，以中位数法建立19批姜厚朴标准汤剂HPLC特征图谱(见图1)，并生成由9个共有峰构成的对照特征图谱(见图2)。
如图2所示，1号峰为紫丁香苷，2号峰为厚朴碱，5号峰为木兰花碱，8号峰为和厚朴酚，9号峰为厚朴酚。
3)计算19批姜厚朴标准汤剂与标准对照特征图谱相似度，根据结果可知，各批次特征图谱之间相似度均不小于0.8，见表2。
表2 相似度值
批号 相似度 批号 相似度
HP-01 1 HP-16 0.867
HP-02 0.886 HP-17 0.897
HP-04 0.948 HP-19 0.897
HP-05 0.93 HP-21 0.938
HP-06 0.948 HP-22 0.93
HP-07 0.963 HP-24 0.871
HP-08 0.996 HP-25 0.844
HP-09 0.902 HP-27 0.95
HP-10 0.944 HP-29 0.966
HP-14 0.888 对照特征图谱 0.951
4)以峰4为对照峰，分别计算19批次姜厚朴标准汤剂各特征峰相对保留时间，并计算平均值，得到的结果见下表3.
表3 各特征图谱相对保留时间
Figure BDA0002709329440000071
Figure BDA0002709329440000081
由表3可知，其相对保留时间平均值为峰1：0.637，峰2：0.714，峰3：0.905，峰4：1.000，峰5：1.191，峰6：1.717，峰7：3.837，峰8：4.414，峰9：4.537，均在规定值的±5％之内，RSD＜1％。
实施例2姜厚朴配方颗粒各工序特征图谱相似度对比
任意取动态生产中一批姜厚朴，分别取其药材、饮片、提取液、浓缩液及标准煎液冻干粉进行特征图谱分析，测定特征图谱，并计算各样品特征图谱与标准煎液对照特征图谱的相似度，结果见表4，图3。图3中，S1：药材，S2：饮片，S3：提取液，S4：浓缩液，S5：中间体，S6：配方颗粒成品，S7：标准汤剂冻干粉，R：对照图谱。
表4 姜厚朴配方颗粒不同工序相似度计算结果
Figure BDA0002709329440000082
由以上结果可知，姜厚朴药材、饮片、提取液、浓缩液、标准煎液冻干粉的色谱图的相应位置均有相同的9个色谱峰，表明药材到标准煎液主要化学成分的一致性；各特征图谱相似度均在0.8以上，符合要求。
实施例3不同厂家姜厚朴配方颗粒特征图谱相似度对比
对市场上不同厂家的姜厚朴配方颗粒按说明书正文所述方法进行上样测定，将测定色谱图与对照特征图谱进行相似度对比分析。结果表明，待测厂家的姜厚朴配方颗粒特征图谱相似度均不小于0.8，说明采用该方法适用于所有市场上姜厚朴配方颗粒的检测应用，详见表5、图4。图4中，S1-S6分别对应的A-F公司。
表5：不同厂家家厚朴配方颗粒成品特征图谱相似度
A公司 B公司 C公司 D公司 E公司 F公司 对照图谱
A公司 1 0.998 0.959 0.865 0.95 0.951 1
B公司 0.998 1 0.958 0.856 0.841 0.942 0.935
C公司 0.959 0.958 1 0.898 0.881 0.876 0.897
D公司 0.865 0.856 0.898 1 0.999 0.998 0.936
E公司 0.95 0.841 0.881 0.999 1 0.999 0.927
F公司 0.951 0.942 0.876 0.998 0.999 1 0.927
对照图谱 0.94 0.935 0.897 0.936 0.927 0.927 1
以上介绍仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，其特征在于，由以下步骤组成：
1）采集多批次厚朴药材，加工炮制成合格批次姜厚朴饮片，制备不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉；
2）将步骤1)中不同批次姜厚朴标准汤剂冻干粉制备成供试品，采用HPLC对供试品进行检测，通过多批次姜厚朴标准汤剂HPLC色谱图生成 对照特征图谱，得到9个色谱峰的相对保留时间；
姜厚朴标准汤剂HPLC特征图谱色谱条件为：
所述HPLC含紫外检测器，紫外检测器的检测波长为210-250nm；
所述HPLC的色谱柱为C18色谱柱；
所述HPLC的流动相由乙腈、0.1%磷酸溶液组成，流动相中乙腈、0.1%磷酸溶液的体积比分别为：0-16min，乙腈12-14%；16-24min，乙腈14-17%，24-40min，乙腈17-30%，40-50min，乙腈30%-75%，50-60min，乙腈75%-83%，流速均为1.2ml/min；
所述HPLC的柱温为30-40℃；
所述HPLC的理论板数按厚朴酚峰计算≥3800；
所述HPLC特征图谱的9个特征峰中，其中1号峰为紫丁香苷，2号峰为厚朴碱，5号峰为木兰花碱，8号峰为和厚朴酚，9号峰为厚朴酚，以4号峰为对照峰，各特征峰的相对保留时间为：
1号峰：相对保留时间为0.637；
2号峰：相对保留时间为0.714；
3号峰：相对保留时间为0.905；
4号峰：相对保留时间为1.000；
5号峰：相对保留时间为1.196
6号峰：相对保留时间为1.717；
7号峰：相对保留时间为3.837；
8号峰：相对保留时间为4.414；
9号峰：相对保留时间为4.537；
各特征峰的相对保留时间应在5%范围内；
3）将实际生产中取任一批次姜厚朴药材、饮片、提取液、浓缩液、中间体、配方颗粒成品按照步骤2）中的液相条件检测，将得到的色谱图与对照特征图谱进行比较分析，特征图谱与标准汤剂对照特征图谱相似度不小于0.8；
4）根据步骤3）中的分析结果判断待检测的姜厚朴配方颗粒的质量。
2.根据权利要求1所述的一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，其特征在于，步骤1）中所述姜厚朴标准汤剂冻干粉制备方法为：称取姜厚朴饮片100g，置于煎药壶内，加入1200mL纯水，武火煮沸后，文火再煎煮20min，提取液经200目纱布过滤后，药渣再加纯水1100mL，武火煮沸后，文火煎煮15min，合并两次滤液，经旋转蒸发仪浓缩至料液比为1：1，-40℃～-50℃的温度下进行低温冷冻干燥，粉碎即得。
3.根据权利要求1所述的一种姜厚朴配方颗粒质量控制方法，其特征在于，所述HPLC含紫外检测器，紫外检测器的检测波长为220nm。
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