CN112198234A - 一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法 - Google Patents
一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及化学领域,尤其为一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,包括如下步骤:S1,制备对照品溶液;S2,制备供试品溶液;S3,高效液相色谱质谱联用仪检测;S4,定性检测;S5,定量检测:按上述方法,于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定,重复6次,测定其对应浓度的峰面积,进行线性回归,得到回归方程,从而得到相关系数和线性范围,确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。本发明中的方法可对痰热清注射液和熊胆粉提取物的熊去氧胆酸、3α‑羟基‑7‑氧代‑5β‑胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α‑羟基‑3‑氧代‑5β‑胆烷酸4种成分进行定性分析,该方法操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高。
Description
技术领域
本发明属于化学领域,涉及一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法。
背景技术
痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五味药材经提取、精制而成,具有清热、解毒、化痰等功效,在治疗上呼吸道感染,急性支气管炎,肺炎,肺结核并发肺部感染,肺癌晚期合并肺部感染,重症哮喘合并感染等方面疗效显著。
其中的原料熊胆粉提取物现行企业标准中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量测定采用高效液相蒸发光散射检测器,原色谱图中出现平头峰,重现性较差、精密度较低,因此需要一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法对上述问题做出改善。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,包括如下步骤:
S1,制备对照品溶液:取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代 -5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释成混合溶液,摇匀,即得;
S2,制备供试品溶液:提供不同批次的熊胆粉提取物,加甲醇稀释,摇匀,即得;
S3,高效液相色谱质谱联用仪检测:分别精密吸取供试品和对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,记录55分钟内的图谱,并设定好图谱测定的色谱条件:色谱柱、柱温、紫外检测波长、流速和进样量,质谱条件:采集模式和扫描范围,离子源参数:离子源温度、毛细管电压、鞘气、辅助气和分辨率;
S4,定性检测:按上述方法,以精确分子量检索,并经HPLC比对保留时间,确认熊胆粉提取物和痰热清注射液中含有熊去氧胆酸、 3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β -胆烷酸4种成分;
S5,定量检测:按上述方法,于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定,重复6次,测定其对应浓度的峰面积,进行线性回归,得到回归方程,从而得到相关系数和线性范围,确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。
优选的,所述S1,混合溶液每1ml中成分为:熊去氧胆酸 5.0-9.0mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.01-0.05mg、鹅去氧胆酸0.5-1.5mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.5-1.5mg。
优选的,所述S3,图谱测定的色谱条件为:色谱柱Pheomenex Luna C18、柱温为25-35℃、紫外检测波长为200-300nm、流速 0.8-1.2ml/min和进样量为1-3μl,质谱条件:采集模式:负模式和扫描范围m/z:70~1050,离子源参数:离子源温度300-350℃、毛细管电压3000-3500V、鞘气为25-50arb、辅助气为5-15arb和分辨率 70000。
优选的,所述S3,图谱测定的色谱条件中流动相是以下S1至S4 中的任意一种:
S1,流动相A乙腈-流动相B体积百分浓度0.1%甲酸水溶液;
S2,流动相A乙腈–流动相B体积百分浓度0.1%磷酸水溶液;
S3,流动相A甲醇–流动相B体积百分浓度0.2%醋酸水溶液;
S4,流动相A甲醇-流动相B水溶。
优选的,所述S3,图谱测定的色谱条件中洗脱方式采用梯度洗脱,梯度洗脱的流程是以下S1至S3中的任意一种:
S1,0~2min,体积百分浓度5-10%流动相B,2~3min,体积百分浓度10-25%流动相B,3~25min,体积百分浓度15%–45%流动相B,25~55min,体积百分浓度35-45%流动相B;
S2,0~3min,体积百分浓度3-9%流动相B,3~7min,体积百分浓度5-15%流动相B,7~27min,体积百分浓度10-20%流动相B, 27~55min,体积百分浓度12%–35%流动相B;
S3,0~4min,体积百分浓度10-20%流动相B,4~9min,体积百分浓度15-22%流动相B,9~30min,体积百分浓度20%-60%流动相B,30~55min,体积百分浓度20-45%流动相B。
优选的,所述S3,紫外检测波长为203、260、280nm中的一种。
优选的,所述S5,相关系数和线性范围见如下所述:
用线性方程对样品进行定量,样品中的4种物质的响应值应在仪器检测的线性范围内:熊去氧胆酸:y=17.63873x+8.00996和r= 1.0000、线性范围5.912~236.48μg;
3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸:y=231.52119x+0.467904,r= 1.0000和线性范围0.03292~1.3168μg;
鹅去氧胆酸:y=19.51059x-2.86504,r=0.9999和线性范围0.962302~38.49208μg;
7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸:y=82.74753x+3.44850,r= 0.9999和线性范围0.1036~4.144μg。
与现有技术相比,本发明提出了一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,具有以下有益效果:
1、本发明由于痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五味药材经提取、精制而成,具有清热、解毒、化痰等功效,在治疗上呼吸道感染,急性支气管炎,肺炎,肺结核并发肺部感染,肺癌晚期合并肺部感染,重症哮喘合并感染等方面疗效显著,其中的原料熊胆粉提取物现行企业标准中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量测定采用高效液相蒸发光散射检测器,原色谱图中出现平头峰,故改为紫外检测器,紫外检测器检测时的信息量比以ELSD检测时的信息量多且不出现平头峰,该方法可对痰热清注射液和熊胆粉提取物的熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基 -3-氧代-5β-胆烷酸4种成分进行定性分析,该方法操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高。
附图说明
图1为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物总离子流图;
图2为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物MRM图;
图3为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物中7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸的分子量图;
图4为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物中3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸的分子量图;
图5为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物中鹅去氧胆酸的分子量图;
图6为本发明一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的熊胆粉提取物中熊去氧胆酸的分子量图;
图7为本发明对照品溶液色谱图;
图8为本发明供试品溶液色谱图;
图9为本发明对照品溶液色谱图;
图10为本发明供试品溶液色谱图;
图11为本发明空白样品溶液色谱图(缺熊胆粉);
图12为本发明熊去氧胆酸含量测定的标准曲线图;
图13为本发明3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸含量测定的标准曲线图;
图14为本发明鹅去氧胆酸含量测定的标准曲线图;
图15为本发明7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸含量测定的标准曲线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
请参照图1-15,一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,包括如下步骤:
S1,制备对照品溶液:取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代 -5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释成混合溶液,摇匀,即得;
S2,制备供试品溶液:提供不同批次的熊胆粉提取物,加甲醇稀释,摇匀,即得;
S3,高效液相色谱质谱联用仪检测:分别精密吸取供试品和对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,记录55分钟内的图谱,并设定好图谱测定的色谱条件:色谱柱、柱温、紫外检测波长、流速和进样量,质谱条件:采集模式和扫描范围,离子源参数:离子源温度、毛细管电压、鞘气、辅助气和分辨率;
S4,定性检测:按上述方法,以精确分子量检索,并经HPLC比对保留时间,确认熊胆粉提取物和痰热清注射液中含有熊去氧胆酸、 3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β -胆烷酸4种成分;
S5,定量检测:按上述方法,于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定,重复6次,测定其对应浓度的峰面积,进行线性回归,得到回归方程,从而得到相关系数和线性范围,确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。
所述S1,混合溶液每1ml中成分为:熊去氧胆酸5.0-9.0mg、3 α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.01-0.05mg、鹅去氧胆酸0.5-1.5mg 和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.5-1.5mg。
所述S3,图谱测定的色谱条件为:色谱柱Pheomenex Luna C18、柱温为25-35℃、紫外检测波长为200-300nm、流速0.8-1.2ml/min 和进样量为1-3μl,质谱条件:采集模式:负模式和扫描范围m/z: 70~1050,离子源参数:离子源温度300-350℃、毛细管电压 3000-3500V、鞘气为25-50arb、辅助气为5-15arb和分辨率70000。
所述S3,图谱测定的色谱条件中流动相是以下S1至S4中的任意一种:
S1,流动相A乙腈-流动相B体积百分浓度0.1%甲酸水溶液;
S2,流动相A乙腈–流动相B体积百分浓度0.1%磷酸水溶液;
S3,流动相A甲醇–流动相B体积百分浓度0.2%醋酸水溶液;
S4,流动相A甲醇-流动相B水溶。
所述S3,图谱测定的色谱条件中洗脱方式采用梯度洗脱,梯度洗脱的流程是以下S1至S3中的任意一种:
S1,0~2min,体积百分浓度5-10%流动相B,2~3min,体积百分浓度10-25%流动相B,3~25min,体积百分浓度15%–45%流动相B,25~55min,体积百分浓度35-45%流动相B;
S2,0~3min,体积百分浓度3-9%流动相B,3~7min,体积百分浓度5-15%流动相B,7~27min,体积百分浓度10-20%流动相B, 27~55min,体积百分浓度12%–35%流动相B;
S3,0~4min,体积百分浓度10-20%流动相B,4~9min,体积百分浓度15-22%流动相B,9~30min,体积百分浓度20%-60%流动相B,30~55min,体积百分浓度20-45%流动相B。
所述S3,紫外检测波长为203、260、280nm中的一种。
所述S5,相关系数和线性范围见如下所述:
用线性方程对样品进行定量,样品中的4种物质的响应值应在仪器检测的线性范围内:熊去氧胆酸:y=17.63873x+8.00996和r= 1.0000、线性范围5.912~236.48μg;
3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸:y=231.52119x+0.467904,r= 1.0000和线性范围0.03292~1.3168μg;
鹅去氧胆酸:y=19.51059x-2.86504,r=0.9999和线性范围0.962302~38.49208μg;
7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸:y=82.74753x+3.44850,r= 0.9999和线性范围0.1036~4.144μg。
具体实施方式:
实施例1
1.选取仪器:Waters Acquity高效液相色谱仪,Thermo Q-Exactive质谱仪;
2.设定色谱条件:色谱柱:Pheomenex Luna C18(5μm,0.46 ×25cm);流动相:以乙腈为流动相A,水为流动相B,按表2进行梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0ml/min;进样量:1μl;
3.设定梯度洗脱条件:0~2min,体积百分浓度10%流动相B,2~ 3min,体积百分浓度10-20%流动相B,3~25min,体积百分浓度20%–40%流动相B,25~55min,体积百分浓度40-42%流动相B;
4.设定质谱条件:采集模式:负模式;扫描范围m/z:70~1050。离子源参数:离子源温度325℃;毛细管电压3500V;鞘气为40arb,辅助气为10arb;分辨率70000;
5.按上述方法,以精确分子量检索,并经HPLC比对保留时间,确认熊胆粉提取物和痰热清注射液中含有熊去氧胆酸、3α-羟基-7- 氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸4种成分,熊胆粉提取物的总离子流图、质谱图及精确分子量图见图1~图6;
6.取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释成每1ml中含熊去氧胆酸6.0mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.03mg、鹅去氧胆酸1.0mg和7α-羟基-3- 氧代-5β-胆烷酸0.1mg的混合溶液,摇匀,即得;
7.精密吸取混合对照品溶液1μl、2μl、5μl、10μl、20μl、 40μl注入液相色谱仪,记录峰面积,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,进行回归分析,结果见表1~4。
表1熊去氧胆酸含量测定的线性关系考察
结果表明,熊去氧胆酸在5.912~236.48μg范围内线性关系良好;
表2 3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸含量测定的线性关系考察
结果表明,3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸在0.03292~1.3168μ g范围内线性关系良好;
表3鹅去氧胆酸含量测定的线性关系考察
结果表明,鹅去氧胆酸在0.962302~38.49208μg范围内线性关系良好;
表4 7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸含量测定的线性关系考察
结果表明,7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸在0.1036~4.144μg 范围内线性关系良好。
实施例2
熊胆粉提取物中4种成分含量测定
1.选取仪器与试药:Agilent 1260高效液相色谱仪,熊去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品来自中国药品生物制品检定院,3α- 羟基-7-氧代-5β-胆烷酸(TRC,1-ALB-5-1),7α-羟基-3-氧代-5 β-胆烷酸(UHN,4185-00-6),乙腈、甲醇为色谱纯,熊胆粉提取物,其余试剂均为分析纯;
2.设定条件:色谱柱:Pheomenex luna omega C18(5μm,0.46 ×25cm),流动相:以乙腈为流动相A和0.1%磷酸为流动相B,柱温: 30℃,流速:1.0ml/min,进样量:10μl,以203nm作为紫外吸收检测波长;
3.设定梯度洗脱条件:0~10min,体积百分浓度90-45%流动相B, 10~35min,体积百分浓度45%流动相B;
4.取样品,按初步拟订的方法平行制备供试品溶液,进样分析,结果供试品色谱中,具与熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β- 胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品保留时间一致的色谱峰,且无其它杂质干扰,如下图7、图8:
熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸和7α -羟基-3-氧代-5β-胆烷酸的含量测定色谱图。
5.按照拟订的方法,对收集的43批熊胆粉提取物样品进行了含量测定,结果见表5:
表5样品测定结果
实施例3
痰热清注射液中4种熊胆粉相关成分含量测定,色谱条件如实施例2中相同
1.取空白样品(缺熊胆粉)和样品,按初步拟订的方法平行制备空白样品溶液及供试品溶液,进样分析,结果供试品色谱中,具与熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品保留时间一致的色谱峰,且无其它成分干扰,空白样品(缺熊胆粉)在熊去氧胆酸对照品、 3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品保留时间处无色谱峰,对样品测定无干扰,如下图9、10、11;
熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α -羟基-3-氧代-5β-胆烷酸的含量测定色谱图
2.取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释成每1ml中含熊去氧胆酸4.0mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.02mg、鹅去氧胆酸0.6mg和7α-羟基-3- 氧代-5β-胆烷酸0.06mg的混合溶液,摇匀,即得;
3.精密吸取混合对照品溶液1μl、2μl、5μl、10μl、15μl、 20μl注入液相色谱仪,记录峰面积,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线见图12~图15,进行回归分析,结果见表6~表9。
表6熊去氧胆酸含量测定的线性关系考察
结果表明,熊去氧胆酸在3.65792~73.1584μg范围内线性关系良好。
表7 3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸含量测定的线性关系考察
结果表明,3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸在0.03595~0.719μg 范围内线性关系良好。
表8鹅去氧胆酸含量测定的线性关系考察
结果表明,鹅去氧胆酸在1.01787~20.3574μg范围内线性关系良好。结果表明,3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸在0.0666~1.332μ g范围内线性关系良好。
表9 7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸含量测定的线性关系考察
结果表明,7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸在0.0574~1.148μg 范围内线性关系良好。
按照拟订的方法,对收集的33批痰热清注射液样品进行了含量测定,结果见表10。
表10样品测定结果
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (7)
1.一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1,制备对照品溶液:取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释成混合溶液,摇匀,即得;
S2,制备供试品溶液:提供不同批次的熊胆粉提取物,加甲醇稀释,摇匀,即得;
S3,高效液相色谱质谱联用仪检测:分别精密吸取供试品和对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,记录55分钟内的图谱,并设定好图谱测定的色谱条件:色谱柱、柱温、紫外检测波长、流速和进样量,质谱条件:采集模式和扫描范围,离子源参数:离子源温度、毛细管电压、鞘气、辅助气和分辨率;
S4,定性检测:按上述方法,以精确分子量检索,并经HPLC比对保留时间,确认熊胆粉提取物和痰热清注射液中含有熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸4种成分;
S5,定量检测:按上述方法,于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定,重复6次,测定其对应浓度的峰面积,进行线性回归,得到回归方程,从而得到相关系数和线性范围,确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。
2.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S1,混合溶液每1ml中成分为:熊去氧胆酸5.0-9.0mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.01-0.05mg、鹅去氧胆酸0.5-1.5mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.5-1.5mg。
3.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S3,图谱测定的色谱条件为:色谱柱Pheomenex Luna C18、柱温为25-35℃、紫外检测波长为200-300nm、流速0.8-1.2ml/min和进样量为1-3μl,质谱条件:采集模式:负模式和扫描范围m/z:70~1050,离子源参数:离子源温度300-350℃、毛细管电压3000-3500V、鞘气为25-50arb、辅助气为5-15arb和分辨率70000。
4.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S3,图谱测定的色谱条件中流动相是以下S1至S4中的任意一种:
S1,流动相A乙腈-流动相B体积百分浓度0.1%甲酸水溶液;
S2,流动相A乙腈–流动相B体积百分浓度0.1%磷酸水溶液;
S3,流动相A甲醇–流动相B体积百分浓度0.2%醋酸水溶液;
S4,流动相A甲醇-流动相B水溶。
5.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S3,图谱测定的色谱条件中洗脱方式采用梯度洗脱,梯度洗脱的流程是以下S1至S3中的任意一种:
S1,0~2min,体积百分浓度5-10%流动相B,2~3min,体积百分浓度10-25%流动相B,3~25min,体积百分浓度15%–45%流动相B,25~55min,体积百分浓度35-45%流动相B;
S2,0~3min,体积百分浓度3-9%流动相B,3~7min,体积百分浓度5-15%流动相B,7~27min,体积百分浓度10-20%流动相B,27~55min,体积百分浓度12%–35%流动相B;
S3,0~4min,体积百分浓度10-20%流动相B,4~9min,体积百分浓度15-22%流动相B,9~30min,体积百分浓度20%-60%流动相B,30~55min,体积百分浓度20-45%流动相B。
6.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S3,紫外检测波长为203、260、280nm中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法,其特征在于,所述S5,相关系数和线性范围见如下所述:
用线性方程对样品进行定量,样品中的4种物质的响应值应在仪器检测的线性范围内:熊去氧胆酸:y=17.63873x+8.00996和r=1.0000、线性范围5.912~236.48μg;
3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸:y=231.52119x+0.467904,r=1.0000和线性范围0.03292~1.3168μg;
鹅去氧胆酸:y=19.51059x-2.86504,r=0.9999和线性范围0.962302~38.49208μg;
7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸:y=82.74753x+3.44850,r=0.9999和线性范围0.1036~4.144μg。
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