CN112189013A - 有机化合物 - Google Patents

Abstract

本公开涉及磷酸二酯酶1(PDE1)抑制剂的组合，其用于治疗某些癌症或肿瘤，例如神经胶质瘤。在另一个实施方案中，本公开涉及PDE1抑制剂和抗肿瘤药的组合，其用于治疗某些癌症或肿瘤，例如神经胶质瘤。

Description

有机化合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年5月25日提交的美国临时申请序列号62/676,638和于2018年6月22日提交的美国临时申请序列号62/688,641的优先权和权益，其内容通过引用整体并入本文作为参考。

发明领域

术领域涉及用于治疗某些癌症和肿瘤、例如中枢神经系统肿瘤的磷酸二酯酶1(PDE1)抑制剂。本领域进一步涉及磷酸二酯酶1(PDE1)抑制剂的施用，其用于治疗某些癌症和肿瘤，例如中枢神经系统的肿瘤或用于治疗特征在于PDE1表达增加的相关病症。

发明背景

胶质母细胞瘤是成人中最常见的恶性脑肿瘤，在西方发达国家，其发生率占所有原发性脑肿瘤的一半以上，发病率为每100,000人中有2到3例。预后几乎普遍较差，中位生存期为6-9个月，且五年生存率不到3％。Brodbelt A等人；(UK)National CancerInformation Network Brain Tumour Group.Glioblastoma in England：2007-2011.Eur.J.Cancer.2015Mar；51(4)：533-42。

胶质母细胞瘤是一种侵袭性肿瘤，其特征是快速生长并侵袭正常大脑。目前的治疗方法的有效性受到以下限制：在手术过程中需要保持正常的大脑功能；肿瘤对放疗的固有抵抗力；以及许多药物无法穿透血脑屏障。在过去的三十年中，成人胶质母细胞瘤患者几乎没有改善，因为连续的靶向药物III期试验未能改善生存率(Touat M等人，Glioblastomatargeted therapy：updated approaches from recent biologicalinsights.Ann.Oncol.2017 Jul 1；28(7)：1457-1472)，且替莫唑胺(一种能够穿越血脑屏障的烷基化化合物)仍然是可用于治疗胶质母细胞瘤的唯一有效化疗药物之一。即使采用最大程度的减瘤手术、放疗和替莫唑胺治疗，中位生存期仅为14.6个月。Stupp R等人，Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma；NEngl J Med.2005 Mar 10；352(10)：987-96。

当前，对于治疗中枢神经系统肿瘤，例如多形性胶质母细胞瘤的有效方式的需求在很大程度上未得到满足。迫切需要改进的治疗组合物和用于治疗此类病症的方法。

已经鉴别了十一个家族的磷酸二酯酶(PDE)，但是仅家族I的PDE，即Ca2+/钙调蛋白-依赖性磷酸二酯酶(CaM-PDE)被Ca2+/钙调蛋白活化并且已经被证明介导钙和环核苷酸(例如cAMP和cGMP)信号传导途径。三种已知的CaM-PDE基因，即PDE1A、PDE1B和PDE1C，均在中枢神经系统组织中有表达。PDE1A在脑、肺和心脏中有表达。PDE1B主要在中枢神经系统中表达，但是其也可以在单核细胞和中性白细胞中被检测到，并且已经证实牵涉这些细胞的炎症应答。PDE1C在嗅上皮、小脑颗粒细胞、纹状体、心脏和血管平滑肌中表达。已经证实PDE1C为人平滑肌中平滑肌增殖的主要调节剂。

环核苷酸磷酸二酯酶通过使这些环核苷酸水解为它们各自的在胞内信号传导途径方面无活性的5’-单磷酸盐(5’AMP和5’GMP)而降低细胞内cAMP和cGMP信号传导。cAMP和cGMP为胞内第二信使且它们在调节大量细胞功能方面起作用。PDE1A和PDE1B优先水解cGMP超过cAMP，而PDE1C显示近似等同的cGMP和cAMP水解。

特别是对于PDE1C，最近的证据表明PDE1C是一种增殖相关基因，因为它仅在增殖的血管平滑肌细胞中表达。(Rybalkin SD等人，Calmodulin-stimulated cyclicnucleotide phosphodiesterase(PDE1C)is induced in human arterial smoothmusclecells of the synthetic，proliferative phenotype.J Clin Invest 1997；100：2611-2621)。此外，在实验性肿瘤模型中，PDE1C和其他PDE亚型的表达已有零星报道，例如黑色素瘤(Watanabe Y等人，Phosphodiesterase 4 regulates the migration of B16-F10Melanoma cells.Exp Ther Med 2012；4：205-210.)、神经母细胞瘤(Jang IS，JuhnnYS.Adaptation of cAMP signaling system in SH-SY5Y neuroblastoma cellsfollowing expression of a constitutively active timulatory G protein alpha，Q227L Gsalpha.Exp Mol Med 2001；33：37-45)和骨肉瘤(

M等人，Cyclicnucleotide phosphodiesterases(PDEs)in human osteoblastic cells；the effect ofPDE inhibition on cAMPaccumulation.Cell Mol Biol Lett 2005；10：305-319)。

过去的研究表明，抑制PDE1(特别是同工型PDE1B)可诱导人白血病细胞凋亡。Jiang X，Paskind M，Weltzien R，Epstein PM.Expression and Regulation of mRNA fordistinct isoforms of mitogen-stimulated and leukemic human lymphocytes.CellBiochem Biophys 1998；28：135-60。研究还表明，来自National Cancer Institute的六种人类胶质母细胞瘤细胞系中有五种显示高PDE1表达(主要是PDE1C)且只有少量PDE4表达。Marko D，Pahlke G，Merz KH，Eisenbrand G.Cyclic 3’，5’-nucleotidephosphodiesterases：potential targets for antitumor therapy.Chem Res Toxicol2000；13：944-8。同样，PDE1C mRNA在人恶性黑色素瘤相关抗原(MAA)细胞中过表达，并且其生长受到非选择性PDE1抑制剂长春西汀抑制。Zhao AZ等人，Recent advances in thestudy of Ca2+/CaM-activated phosphodiesterases：expression and physiologicalfunctions.Adv Second Messenger Phosphoprotein Res 1997；31：237-51。更近的研究表明，与正常人脑相比，PDE1C在20％的胶质母细胞瘤中明显过量表达，而siRNA介导的PDE1C沉默抑制患者来源的胶质母细胞瘤细胞培养物中的增殖(45-50％)和侵袭(40-60％)。Rowther FB等人，Cyclic nucleotide phosphodiesterase-1C(PDE1C)drives cellproliferation，migration and invasion in glioblastoma multiforme cells invitro.Mol Carcinog.2016 Mar；55(3)：268-79。

认为促进肿瘤的细胞增殖、迁移、组织侵袭和炎症是使癌症发展的特征。这些过程中的每一个都是时间依赖性的、可变的和复杂的，其牵涉许多信号转导途径。认为多靶点药物产生比使用单靶点疗法观察到的更大的益处，具有可接受的耐受性，并且对更广泛的肿瘤类型具有活性。适当地认为环核苷酸信号传导的调节是牵涉肿瘤细胞功能的各个方面的多要素途径的组合。在多种癌症病理学中已经描述了cAMP产生的损伤。由于具有高度细胞毒性，因此试图在抗增殖的同时直接调节癌细胞中的环核苷酸的尝试并未产生效果。需要新的、更安全和选择性的策略来调节癌细胞中的cAMP。

发明概述

本发明人在先已经证实，使用本公开的化合物抑制PDE1活性可以在广泛的病理病症中安全恢复cAMP功能，所述病理病症包括神经变性和神经炎症、心力衰竭、肺动脉高压和周围炎症的模型以及患有某些疾病的人。更近来，本发明人已经证实PDE1抑制剂阻碍小胶质细胞和单核细胞的细胞迁移。近期证据表明，PDE1、尤其是PDE1C同工型在实验性肿瘤模型例如黑色素瘤、神经母细胞瘤和骨肉瘤中过表达。此外，在多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞中PDE1C的局灶基因组过表达已经得到证实。PDE1C的基因组增益与在GBM来源的细胞培养物中的表达增加有关，并且对于驱动癌细胞中的细胞增殖、迁移和侵袭至关重要。

许多类型的癌细胞过表达PDE1活性，这可以通过各种生物标记物得到鉴定，例如，增加的RNA表达、DNA拷贝数，PDE1结合(PDE1抑制剂分子的PET或放射性同位素保留)或酶活性。这些癌细胞还表现出低水平的cAMP，其可通过PDE1抑制剂增加。可以单独使用PDE-1抑制剂或与化疗、基因治疗和/或免疫学方法结合使用此类特征。抑制PDE1可引起凋亡性细胞死亡、防止迁移、限制转移并减轻炎症。按照这种方式，PDE1抑制剂与化学治疗剂和免疫学方法起协同作用。

另外，已知许多基因疗法和抗体方法会引起细胞因子释放综合征(CRS)。CRS由受免疫疗法影响的免疫细胞大量、快速地向血液中释放细胞因子引起。在先已显示PDE1会减少炎症细胞因子IL1β、TNFα和Ccl2的表达。参见国际专利公开号WO2018/049147。在这些情况下，PDE1抑制为有用的预防性的，并且可以将PDE1抑制剂与皮质类固醇和抗组胺药一起施用以预防CRS。

不受理论的束缚，认为cAMP(或cGMP)产生受损是由于在各种癌症病理情况中PDE1同工型的过表达引起。选择性PDE1同工型的抑制会提高胞内cAMP(和/或cGMP)的水平，在广泛的肿瘤细胞中诱导细胞凋亡和细胞周期停滞，并调节肿瘤微环境，从而防止细胞迁移、炎症和组织侵袭。因此，特异性针对个体PDE1及其同工型，特别是PDE1c的抑制剂的开发和临床应用可以选择性地恢复正常的胞内信号传导，从而提供具有减少的副作用的抗肿瘤疗法。

本公开涉及PDE1抑制剂在治疗癌症或肿瘤中的用途，包括例如癌、黑色素瘤和星形细胞瘤。在一个优选的实施方案中，PDE1抑制剂是选择性的。先前的研究表明，与健康患者(即未患胶质母细胞瘤的患者)相比，胶质母细胞瘤患者中的PDE1(即PDE1C)明显过表达。siRNA介导的PDE1C沉默已显示可抑制患者来源的胶质母细胞瘤细胞培养物中的增殖和侵袭。不受任何理论的束缚，抑制PDE1(例如PDE1C)可以在某些癌症或肿瘤的治疗干预中有效，例如胶质母细胞瘤。

特别是治疗脑肿瘤需要化合物具有穿越血脑屏障的能力。本公开的化合物是PDE1的强效抑制剂。特别地，本公开的化合物对PDE1A和PDE1C同工型均显示出高选择性，并且能够穿透血脑屏障。

因此，在不同的实施方案中，本公开提供了治疗选自癌症或肿瘤的病症的方法，包含向有此需要的个体施用如本文公开的药学上可接受量的PDE1抑制剂。在一些实施方案中，所述癌症或肿瘤为神经胶质瘤、白血病、黑色素瘤、神经母细胞瘤或骨肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症或肿瘤为星形细胞瘤，例如多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，PDE1抑制剂与抗肿瘤药联合施用。

在不同的实施方案中，本公开提供了抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和/或侵袭的方法，其包含向有此需要的个体施用如本文公开的药学上可接受量的PDE1抑制剂。在一些实施方案中，癌症或肿瘤是神经胶质瘤、白血病、黑色素瘤、神经母细胞瘤或骨肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症或肿瘤为星形细胞瘤，例如多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，PDE1抑制剂与抗肿瘤药联合施用。

在不同的实施方案中，本申请提供了治疗神经胶质瘤的方法，包含对有此需要的个体施用药学上可接受的量的PDE1抑制剂。在一些实施方案中，所述癌症或肿瘤为星形细胞瘤，例如多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，PDE1抑制剂与抗肿瘤药联合施用。

在另一个方面，本公开还包括下文所述的式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂，为游离或盐的形式。在一个优选的实施方案中，PDE1抑制剂为选择性PDE1抑制剂。在另一个实施方案中，本公开还提供了药物组合物，其包含游离或药学上可接受的盐形式的PDE1抑制剂与药学上可接受的载体。

在不同的实施方案中，本公开提供了包含下文所述的游离或盐形式的式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂和抗肿瘤药的联合疗法。该联合疗法可以与本文公开的任何方法结合使用。在一些实施方案中，将抗肿瘤药与PDE1抑制剂的施用同时、在其之前或之后施用。

在不同的实施方案中，本公开还提供了药物组合物，其包含使用常规稀释剂或赋形剂和本领域已知技术制备的本公开的化合物。因此，口服剂型可以包括片剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂等。

在不同的实施方案中，本公开还提供了下文所述的游离或盐形式的式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂，其用于治疗选自癌症或肿瘤的病症，抑制肿瘤细胞增殖、迁移和/或侵袭，或治疗神经胶质瘤。

附图简述

图1显示多形性胶质母细胞瘤(GBM)短期细胞培养物中PDE1C的表达。

图2显示与正常人星形胶质细胞有关的新鲜冰冻的GBM活检样本中PDE1C表达的改变。

图3显示siRNA介导的PDE1C耗尽后测试的GBM细胞培养物的细胞增殖。

图4显示细胞通过修饰以特异性靶向PDE1C的细胞和非靶向细胞的聚碳酸酯膜的迁移的比较。

图5显示通过修饰以特异性靶向PDE1C的细胞和非靶向细胞细胞外膜包裹的聚碳酸酯膜的细胞侵袭的比较。

图6显示与三种培养物(IN1472、IN1760和U251MG)中的非靶向细胞相比修饰以特异性靶向PDE1C的细胞在损伤视野内迁移的细胞数量减少。

图7显示Ca2+/钙调蛋白存在和不存在下测定的几种GBM细胞系中的活性。

发明详述

用于本公开方法中的化合物

在一个实施方案中，用于本文所述的治疗和预防方法中的PDE1抑制剂为选择性PDE1抑制剂。

PDE1抑制剂

在一个实施方案中，本发明提供的用于本文所述的治疗和预防方法的PDE1抑制剂为式I的化合物：

其中

(i)R₁为H或C_1-4烷基(例如甲基)；

(ii)R₄为H或C_1-4烷基且R₂和R₃独立地为H或C_1-4烷基

(例如R₂和R₃均为甲基或R₂为H，且R₃为异丙基)、芳基、杂芳基、(任选杂)芳基烷氧基或(任选杂)芳基烷基；或

R₂为H，且R₃和R₄一起形成二、三或四亚甲基桥(优选其中R₃和R₄共同具有顺式构型，例如其中携带R₃和R₄的碳分别具有R和S构型)；

(iii)R₅为取代的杂芳基烷基，例如被卤代烷基取代；

或R₅连接至式I的吡唑并部分上的氮之一

并且为式A的部分

其中X、Y和Z独立地为N或C，且R₈、R₉、R₁₁和R₁₂独立地为H或卤素(例如Cl或F)，且R₁₀为卤素、烷基、环烷基、卤代烷基(例如三氟甲基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如任选被卤素取代的吡啶基(例如吡啶-2-基)、或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基))、二唑基、三唑基、四唑基、芳基羰基(例如苯甲酰基)、烷基磺酰基(例如甲基磺酰基)、杂芳基羰基或烷氧基羰基；条件是当X、Y或Z为氮时，R₈、R₉或R_i0分别不存在；且

(iv)R₆为H、烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、芳基氨基(例如苯基氨基)、杂芳基氨基、N，N-二烷基氨基、N，N-二芳基氨基或N-芳基-N-(芳基烷基)氨基(例如N-苯基-N-(1，1’-联苯-4-基甲基)氨基)；且

(v)n＝0或1；

(vi)当n＝1时，A为-C(R₁₃R₁₄)-，

其中R₁₃和R₁₄独立地为H或C_1-4烷基、芳基、杂芳基、(任选杂)芳基烷氧基或(任选杂)芳基烷基；

该化合物为游离、盐或前药形式，包括其对映体、非对映异构体和外消旋体。

在另一个实施方案中，本发明提供了用于如本文所述方法中的PDE1抑制剂，其为式1a：

其中

(i)R₂和R₅独立地为H或羟基，且R₃和R₄一起形成三或四亚甲基桥[优选带有携带R₃和R₄的碳，其分别具有R和S构型]；或R₂和R₃各自为甲基，且R₄和R₅各自为H；或R₂、R₄和R₅为H，且R₃为异丙基[优选携带R₃的碳具有R构型]；

(ii)R₆为(任选卤素取代的)苯基氨基、(任选卤素取代的)苄基氨基、C_1-4烷基或C_1-4烷基硫；例如，苯基氨基或4-氟苯基氨基；

(iii)R₁₀为C_1-4烷基、甲基羰基、羟基乙基、羧酸、磺酰胺(任选卤素或羟基取代的)苯基、(任选卤素或羟基取代的)吡啶基(例如6-氟吡啶-2-基)或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)；且

X和Y独立地为C或N，

该化合物为游离、药学上可接受的盐或前药形式，包括其对映体、非对映异构体和外消旋体。

在另一个实施方案中，本发明提供了用于本文所述的治疗和预防方法的PDE1抑制剂，其为式II的化合物：

(i)X为C_1-6亚烷基(例如亚甲基、亚乙基或亚丙-2-炔-1-基)；

(ii)Y为单键、亚炔基(例如-C≡C-)、亚芳基(例如亚苯基)或亚杂芳基(例如亚吡啶基)；

(iii)Z为H、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如吡啶基，例如吡啶-2-基)、卤素(例如F、Br、Cl)、卤代C_1-6烷基(例如三氟甲基)、-C(O)-R¹、-N(R²)(R³)或任选地包含至少一个选自N或O的原子的C_3-7环烷基(例如环戊基、环己基、四氢-2H-吡喃-4-基或吗啉基)；

(iv)R¹为C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、-OH或-OC_1-6烷基(例如-OCH₃)；

(v)R²和R³独立地为H或C_1-6烷基；

(vi)R⁴和R⁵独立地为H、C_1-6烷基或任选地被一个或多个卤素取代的芳基(例如苯基)(例如氟苯基，例如4-氟苯基)、被一个或多个羟基取代的芳基(例如苯基)(例如羟基苯基，例如4-羟基苯基或2-羟基苯基)或C_1-6烷氧基；

(vii)其中X、Y和Z独立地和任选地被一个或多个卤素(例如F、Cl或Br)、C_1-6烷基(例如甲基)、卤代C_1-6烷基(例如三氟甲基)取代，例如Z为杂芳基，例如被一个或多个卤素取代的吡啶基(例如6-氟吡啶-2-基、5-氟吡啶-2-基、6-氟吡啶-2-基、3-氟吡啶-2-基、4-氟吡啶-2-基、4，6-二氯吡啶-2-基)、卤代C_1-6烷基(例如5-三氟甲基吡啶-2-基)或C_1-6-烷基(例如5-甲基吡啶-2-基)或Z为芳基，例如苯基，其被一个或多个卤素取代(例如4-氟苯基)，

该化合物为游离、盐或前药的形式。

在另一个实施方案中，本发明提供了用于本文所述的治疗和预防方法的PDE1抑制剂，其为式III：

其中

(i)R1为H或C_1-4烷基(例如甲基或乙基)；

(ii)R₂和R₃独立地为H或C_1-6烷基(例如甲基或乙基)；

(iii)R₄为H或C_1-4烷基(例如甲基或乙基)；

(iv)R₅为芳基(例如苯基)，其任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自-C(＝O)-C_1-6烷基(例如-C(＝O)-CH₃)和C_1-6-羟基烷基(例如1-羟基乙基)；

(v)R₆和R₇独立地为H或芳基(例如苯基)，其任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自C_1-6烷基(例如甲基或乙基)和卤素(例如F或Cl)，例如未取代的苯基或被一个或多个卤素(例如F)取代的苯基或被一个或多个C_1-6烷基和一个或多个卤素取代的苯基或被一个C_1-6烷基和一个卤素取代的苯基，例如4-氟苯基或3，4-二氟苯基或4-氟-3-甲基苯基；且

(vi)n为1、2、3或4，

该化合物为游离或盐的形式。

在另一个实施方案中，本发明提供了用于本文所述的治疗和预防方法的PDE1抑制剂，其为式IV

其为游离或盐的形式，其中(i)R₁为C_1-4烷基(例如甲基或乙基)或-NH(R₂)，其中R₂为苯基，其任选地被卤素(例如氟)取代，例如4-氟苯基；

(ii)X、Y和Z独立地为N或C；

(iii)R₃、R₄和R₅独立地为H或C_1-4烷基(例如甲基)；或R₃为H，且R₄和R₅一起形成三亚甲基桥(优选其中R₄和R₅一起具有顺式构型，例如其中携带R₄和R₅的碳分别具有R和S构型)，

(iv)R₆、R₇和R₈独立地为：

H；

C_1-4烷基(例如甲基)；

被羟基取代的吡啶-2-基；或

-S(O)₂-NH₂；

(v)条件是当X、Y和/或Z为N时，R₆、R₇和/或R₈分别不存在；且当X、Y和Z均为C时，R₆、R₇或R₈的至少一个为-S(O)₂-NH₂或被羟基取代的吡啶-2-基。

在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗和预防炎症或炎症相关疾病或障碍的PDE1抑制剂的施用方法，其中所述抑制剂为下式的化合物：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

在仍然另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗和预防炎症或炎症相关疾病或障碍的PDE1抑制剂的施用方法，其中所述抑制剂为下式的化合物：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

在仍然另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗和预防炎症或炎症相关疾病或障碍的PDE1抑制剂的施用方法，其中所述抑制剂为下式的化合物：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

在仍然另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗和预防炎症或炎症相关疾病或障碍的PDE1抑制剂的施用方法，其中所述抑制剂为下式的化合物：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

在仍然另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗和预防炎症或炎症相关疾病或障碍的PDE1抑制剂的施用方法，其中所述抑制剂为下式的化合物：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

在一个实施方案中，任何前述式(例如式I、Ia、II、III和/或IV)的选择性PDE1抑制剂是抑制磷酸二酯酶介导的(例如PDE1介导的，尤其是PDE1B介导的)cGMP水解的化合物，例如在固定的金属亲和性颗粒试剂PDE分析中，游离或盐形式的优选化合物具有1μM、优选小于500nM、优选小于50nM且优选小于5nM的IC₅₀。

在其他实施方案中，本发明提供了PDE1抑制剂的施用，用于治疗选自癌症或肿瘤的病症；用于抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和/或侵袭；和/或用于治疗神经胶质瘤，其中该抑制剂是根据以下的化合物：

适用于本文所述的方法和治疗中的PDE1抑制剂的另外的实例可以在如下文献中找到：国际公开号WO2006133261A2；美国专利8,273,750；美国专利9,000,001；美国专利9,624,230；国际公开号WO2009075784A1；美国专利8,273,751；美国专利8,829,008；美国专利9,403,836；国际公开号WO2014151409A1；美国专利9,073,936；美国专利9,598,426；美国专利9,556,186；美国公开号2017/0231994A1；国际公开号WO2016022893A1；和美国公开号2017/0226117A1，它们各自通过引用整体并入。

适用于本文所述的方法和治疗中的PDE1抑制剂的另外的实例可以在如下文献中找到：国际公开号WO2018007249A1；美国公开号2018/0000786；国际公开号WO2015118097A1；美国专利9,718,832；国际公开号WO2015091805A1；美国专利9,701,665；美国公开号2015/0175584A1；美国公开号2017/0267664A1；国际公开号WO2016055618A1；美国公开号2017/0298072A1；国际公开号WO2016170064A1；美国公开号2016/0311831A1；国际公开号WO2015150254A1；美国公开号2017/0022186A1；国际公开号WO2016174188A1；美国公开号2016/0318939A1；美国公开号2017/0291903A1；国际公开号WO2018073251A1；国际公开号WO2017178350A1；和美国公开号2017/0291901A1，它们各自通过引用整体并入。在通过引用并入的任何文件的陈述与本公开中的任何陈述矛盾或不相容的任何情况下，本公开的陈述应被理解为是控制性的。

如果上下文中没有另外指定或指明，则本文中的以下术语具有以下含义：

(a)如本文所用，“选择性PDE1抑制剂”是指PDE1抑制剂，其具有对PDE1的抑制作用超过对其他任何PDE同工型的抑制作用至少100倍的选择性。

(b)如本文所用，“烷基”为饱和或不饱和烃部分，优选饱和的，优选具有1-6个碳原子，其可以为直链或支链的，并且可以任选地为单、二或三取代的，例如被卤素(例如氯或氟)、羟基或羧基取代。

(c)如本文所用，“环烷基”为饱和或不饱和的非芳族烃部分，优选为饱和的，优选包含3-9个碳原子，其中至少一些形成非芳族单环或双环或桥连的环状结构，并且可以任选地被卤素(例如氯或氟)、羟基或羧基取代。其中环烷基任选地包含一个或多个选自N和O和/或S的原子，所述环烷基也可以是杂环烷基。

(d)除非另有说明，否则“杂环烷基”为饱和或不饱和的非芳族烃部分，优选为饱和的，优选包含3-9个碳原子，其中至少一些形成非芳族单或双环或桥环结构，其中至少一个碳原子被N、O或S替代，所述杂环烷基可以任选地被卤素，例如氯或氟，羟基或羧基取代。

(e)如本文所用，“芳基”为单环或双环芳族烃，优选为苯基，其任选地被烷基(例如甲基)、卤素(例如氯或氟)、卤代烷基(例如三氟甲基)、羟基、羧基或其他芳基或杂芳基(例如联苯基或吡啶基苯基)取代。

(f)如本文所用，“杂芳基”为芳族部分，其中构成芳环的一个或多个原子为硫或氮而不是碳，例如吡啶基或噻二唑基，其可以任选地被例如烷基、卤素、卤代烷基、羟基或羧基取代。

如本文所述的本公开的化合物，例如PDE1抑制剂可以以游离形式或盐形式存在，例如作为酸加成盐存在。在本说明书中，除非另有说明，否则语言例如“本公开的化合物”应理解为包括任何形式的化合物，例如游离或酸加成盐形式，或其中化合物含有酸性取代基，为碱加成盐形式。本公开的化合物旨在用作药物，因此优选药学上可接受的盐。对于药物用途不适用的盐也可能有用，例如，由此还包括可用于分离或纯化游离的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。

在一些情况中，本公开的化合物可以以前药形式存在。前药形式为在体内转化成本公开的化合物的化合物。例如，当本公开的化合物包含羟基或羧基取代基时，这些取代基可以形成生理上可水解和可接受的酯。如本文所用，“生理上可水解和可接受的酯”是指本公开的化合物的酯，其可在生理条件下水解，得到酸(具有羟基取代基的本公开的化合物的情况)或醇(具有羧基取代基的本公开的化合物的情况)，它们自身在所施用的剂量下在生理上是可耐受的。因此，如果本公开的化合物包含羟基，例如化合物-OH，则这类化合物的酰基酯前药，即化合物-O-C(O)-C1-4烷基可以在体内水解，一方面形成生理上可水解的醇(化合物-OH)，而另一方面形成酸(例如HOC(O)-C1-4烷基)。或者，如果本公开的化合物包含羧酸，例如化合物-C(O)OH，这类化合物的酸性酯前药化合物-C(O)O-C1-4烷基可以水解成化合物-C(O)OH和HO-C1-4烷基。正如可以理解的，该术语由此涵盖常规的药用前药形式。

在另一个实施方案中，本公开还提供了药物组合物，该药物组合物包含PDE1抑制剂和抗肿瘤药，每种形式均为游离或药学上可接受的盐形式，并与药物上可接受的载体混合。如本文所用，术语“组合”包括PDE1抑制剂和抗肿瘤剂的同时、依次或伴随施用。在另一个实施方案中，本公开提供了包含这种化合物的药物组合物。在一些实施方案中，PDE1抑制剂和抗肿瘤药组合使得抗肿瘤药以低于作为单一的单一疗法施用是有效的剂量施用。

使用本公开化合物的方法

在另一个实施方案中，本申请提供了治疗选自癌症或肿瘤的病症的方法(方法1)，包含对有此需要的个体施用药学上可接受量的PDE1抑制剂(即式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂)。

1.1方法1，其中所述癌症或肿瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1表达增加。

1.2上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1C表达增加。

1.3上述方法的任一项，其中所述癌细胞展示出相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如酶测定中测定或癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域例如微管结构域中cAMP低水平反映出的)的一种或多种。

1.4上述方法的任一项，其中所述病症为肿瘤。

1.5上述方法的任一项，其中所述肿瘤选自如下的一种或多种：听神经瘤、星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、神经胶质瘤(例如脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经胶质瘤)、室管膜下瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑瘤、少突神经胶质瘤、垂体瘤、原始神经外胚瘤(PNET)、许旺细胞瘤、腺瘤(例如嗜碱性腺瘤、嗜酸腺瘤、嫌色性腺瘤、甲状旁腺腺瘤、胰岛腺瘤、纤维腺瘤)、纤维瘤(纤维组织细胞瘤)、纤维瘤、血管瘤、脂肪瘤(例如血管脂瘤、髓脂瘤、纤维脂肪瘤、梭形细胞脂肪瘤、蛰伏脂瘤、不典型脂肪瘤)、粘液瘤、骨瘤、白血病前期、横纹肌瘤、乳头状瘤、脂溢性角化病、皮肤附件肿瘤、肝腺瘤、肾脏管状腺瘤、胆管腺瘤、移行细胞乳头状瘤、葡萄胎、神经节瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、C细胞增生、嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、良性肿瘤、化学感受器瘤、副神经节瘤、痣、光化性角化病、宫颈发育不良、化生(例如肺组织变形)、粘膜白斑、血管瘤、淋巴管瘤、癌(例如鳞状细胞癌、表皮样癌、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胆管上皮癌、移行细胞癌、胚胎细胞癌、甲状旁腺肿瘤、甲状腺髓样癌、支气管类癌、燕麦细胞癌、胰岛细胞癌、恶性类癌)、肉瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维肉瘤)、母细胞瘤(例如髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤、脑瘤类型、视网膜母细胞瘤、眼视网膜肿瘤、成骨细胞瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤)、胚细胞瘤、间皮瘤、恶性皮肤附件肿瘤、肾上腺样瘤、精原细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑膜瘤、恶性许旺细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、mercell细胞肿瘤、叶状囊性肉瘤或Wilms瘤。

1.6上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

1.7上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤(例如室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤或混合性神经胶质瘤、例如寡星状细胞瘤)。

1.8方法1.6，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

1.9上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

1.10方法1-1.2的任一项，其中所述病症为癌症。

1.11方法1-1.2或1.10的任一项，其中所述病症为白血病。

1.12方法1.11，其中所述白血病为淋巴细胞白血病或髓性白血病。

1.13上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

1.14方法1.13，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

1.15方法1.13，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

1.16方法1.13，其中在施用PDE1抑制剂之后施用所述抗肿瘤药。

1.17上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂和任选的抗癌药与放疗或化疗一起施用。

1.18上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂和任选的抗癌药与放疗或化疗同时施用。

1.19上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂和任选的抗癌药在放疗或化疗之前施用。

1.20上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之后施用。

1.21上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药和成免疫疗法一起施用。

1.22上述方法的任一项，其中PDE1抑制剂的施用有效地诱导如下癌症或肿瘤细胞中的一种或多种：程序性细胞死亡、迁移抑制、转移抑制和/或炎症减轻。

1.23上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药、免疫疗法、皮质类固醇和/或抗组胺药一起施用。

1.24上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE介导。

1.25上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1介导。

1.26上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1C介导。

1.27上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

1.28上述方法的任一项，其中癌或肿瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，其通过钙/钙调蛋白控制PDE1活性。

本公开还提供了PDE1抑制剂，其用于治疗选自癌症或肿瘤的病症的方法，例如用于任一方法1等。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于治疗选自癌症或肿瘤的病症的方法中的药物中的用途，例如用于任一方法1等的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的任一化合物，其用于任一方法1等。

在另一个实施方案中，本申请提供了抑制癌或肿瘤细胞增殖、迁移和/或侵袭的方法(方法2)，包含对有此需要的个体施用药学上可接受量的PDE1抑制剂(即式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂)。

2.1方法2，其中所述方法用于抑制癌或肿瘤细胞增殖。

2.2上述方法的任一项，其中所述癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1表达增加。

2.3上述方法的任一项，其中所述癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1C表达增加。

2.4上述方法的任一项，其中所述癌细胞展示出相对相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如酶测定中测定或癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域例如微管结构域中cAMP低水平反映出的)的一种或多种。

2.5上述方法的任一项，其中所述病症为肿瘤。

2.6上述方法的任一项，其中所述肿瘤选自如下的一种或多种：听神经瘤、星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、神经胶质瘤(例如脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经胶质瘤)、室管膜下瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑瘤、少突神经胶质瘤、垂体瘤、原始神经外胚瘤(PNET)、许旺细胞瘤、腺瘤(例如嗜碱性腺瘤、嗜酸腺瘤、嫌色性腺瘤、甲状旁腺腺瘤、胰岛腺瘤、纤维腺瘤)、纤维瘤(纤维组织细胞瘤)、纤维瘤、血管瘤、脂肪瘤(例如血管脂瘤、髓脂瘤、纤维脂肪瘤、梭形细胞脂肪瘤、蛰伏脂瘤、不典型脂肪瘤)、粘液瘤、骨瘤、白血病前期、横纹肌瘤、乳头状瘤、脂溢性角化病、皮肤附件肿瘤、肝腺瘤、肾脏管状腺瘤、胆管腺瘤、移行细胞乳头状瘤、葡萄胎、神经节瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、C细胞增生、嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、良性肿瘤、化学感受器瘤、副神经节瘤、痣、光化性角化病、宫颈发育不良、化生(例如肺组织变形)、粘膜白斑、血管瘤、淋巴管瘤、癌(例如鳞状细胞癌、表皮样癌、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胆管上皮癌、移行细胞癌、胚胎细胞癌、甲状旁腺肿瘤、甲状腺髓样癌、支气管类癌、燕麦细胞癌、胰岛细胞癌、恶性类癌)、肉瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维肉瘤)、母细胞瘤(例如髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤、脑瘤类型、视网膜母细胞瘤、眼视网膜肿瘤、成骨细胞瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤)、胚细胞瘤、间皮瘤、恶性皮肤附件肿瘤、肾上腺样瘤、精原细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑膜瘤、恶性许旺细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、mercell细胞肿瘤、叶状囊性肉瘤或Wilms瘤。

2.7上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

2.8上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤(例如室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤或混合性神经胶质瘤、例如寡星状细胞瘤)。

2.9方法2.5，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

2.10上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

2.11方法2-2.3的任一项，其中所述病症为癌症。

2.12方法2-2.3或2.11的任一项，其中所述病症为白血病。

2.13方法2.11，其中所述白血病为淋巴细胞白血病或髓性白血病。

2.14上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

2.15方法2.14，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

2.16方法2.14，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

2.17方法2.14，其中所述抗肿瘤药在施用PDE1抑制剂之后施用。

2.18上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗一起施用。

2.19上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗同时施用。

2.20上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之前施用。

2.21上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之后施用。

2.22上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药和/或免疫疗法一起施用。

2.23上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药、免疫疗法、皮质类固醇和/或抗组胺药一起施用。

2.24上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE介导。

2.25上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1介导。

2.26上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1C介导。

2.27上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

2.28上述方法的任一项，其中癌或肿瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，其通过钙/钙调蛋白改变PDE1活性控制。

2.29上述方法的任一项，还包括评价个体表达的PDE1中钙/钙调蛋白敏感性程度、环核苷酸水平的恢复、PDE1的RNA表达或PDE1基因的突变的步骤。

本公开还提供了PDE1抑制剂，其用于抑制癌或肿瘤细胞的增殖、迁移和/或侵害的方法中，例如用于任一方法2等。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于抑制癌或肿瘤细胞的增殖、迁移和/或侵害的方法的药物中的用途，例如用于任一方法2等中的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的化合物的任一种，该药物组合物用于任一方法2等中。

在另一个实施方案中，本申请提供了治疗神经胶质瘤的方法(方法3)，包含向有此需要的个体施用药学上可接受量的PDE1抑制剂(即式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂)。

3.1方法3，其中所述神经胶质瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，受侵害的神经胶质细胞的PDE1表达增加。

3.2上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，受侵害的神经胶质细胞的PDE1C表达增加。

3.3上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如酶测定中测定或癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域例如微管结构域中cAMP低水平反映出的)的一种或多种。

3.4上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

3.5上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

3.6上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

3.7方法3.6，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

3.8方法3.6，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

3.9方法3.6，其中在施用PDE1抑制剂之后施用所述抗肿瘤药。

3.10上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂和任选的抗癌药与放疗或化疗一起施用。

3.11上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗同时施用。

3.12上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之前施用。

3.13上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之后施用。

3.14上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药和/或免疫疗法一起施用。

3.15上述方法的任一项，其中施用PDE1抑制剂可有效诱导神经胶质瘤中的以下一种或多种：凋亡性细胞死亡、迁移抑制、转移抑制和/或炎症减轻。

3.16上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药、免疫疗法、皮质类固醇和/或抗组胺药一起施用。

3.17上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤由PDE介导。

3.18上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤由PDE1介导。

3.19上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤由PDE1C介导。

3.20上述方法的任一项，其中所述神经胶质瘤的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

3.21上述方法的任一项，其中神经胶质瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，其通过钙/钙调蛋白改变PDE1活性控制。

本公开还提供了PDE1抑制剂，其用于治疗神经胶质瘤的方法中，例如用于任一方法3等中。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于治疗神经胶质瘤的方法的药物中的用途，例如用于任一方法3等中的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的化合物的任一种，该药物组合物用于任一方法4等中。

在另一个实施方案中，本申请提供了治疗患者癌症的方法(方法4)，其中癌细胞表现出相对于相同的组织类型的正常细胞，癌细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种，该方法包含向有需要的个体施用有效量的单独的或与化疗剂、基因治疗剂和/或免疫治疗结合使用的PDE1抑制剂(即式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂)。

4.1方法4，其中该方法用于抑制癌或肿瘤细胞的增殖。

4.2上述方法的任一项，其中癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同的组织类型的正常细胞，癌细胞增加PDE1表达或活性。

4.3上述方法的任一项，其中所述癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同的组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1C表达增加。

4.4上述方法的任一项，其中所述癌细胞表现出相对于相同的组织类型的正常细胞，癌细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种。

4.5上述方法的任一项，其中所述病症为肿瘤。

4.6上述方法的任一项，其中所述肿瘤选自如下的一种或多种：听神经瘤、星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、神经胶质瘤(例如脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经胶质瘤)、室管膜下瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑瘤、少突神经胶质瘤、垂体瘤、原始神经外胚瘤(PNET)、许旺细胞瘤、腺瘤(例如嗜碱性腺瘤、嗜酸腺瘤、嫌色性腺瘤、甲状旁腺腺瘤、胰岛腺瘤、纤维腺瘤)、纤维瘤(纤维组织细胞瘤)、纤维瘤、血管瘤、脂肪瘤(例如血管脂瘤、髓脂瘤、纤维脂肪瘤、梭形细胞脂肪瘤、蛰伏脂瘤、不典型脂肪瘤)、粘液瘤、骨瘤、白血病前期、横纹肌瘤、乳头状瘤、脂溢性角化病、皮肤附件肿瘤、肝腺瘤、肾脏管状腺瘤、胆管腺瘤、移行细胞乳头状瘤、葡萄胎、神经节瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、C细胞增生、嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、良性肿瘤、化学感受器瘤、副神经节瘤、痣、光化性角化病、宫颈发育不良、化生(例如肺组织变形)、粘膜白斑、血管瘤、淋巴管瘤、癌(例如鳞状细胞癌、表皮样癌、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胆管上皮癌、移行细胞癌、胚胎细胞癌、甲状旁腺肿瘤、甲状腺髓样癌、支气管类癌、燕麦细胞癌、胰岛细胞癌、恶性类癌)、肉瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维肉瘤)、母细胞瘤(例如髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤、脑瘤类型、视网膜母细胞瘤、眼视网膜肿瘤、成骨细胞瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤)、胚细胞瘤、间皮瘤、恶性皮肤附件肿瘤、肾上腺样瘤、精原细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑膜瘤、恶性许旺细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、mercell细胞肿瘤、叶状囊性肉瘤或Wilms瘤。

4.7上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

4.8上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤(例如室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤或混合性神经胶质瘤、例如寡星状细胞瘤)。

4.9方法4.8，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

4.10上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

4.11方法4-4.3的任一项，其中所述病症为癌症。

4.12方法4-4.3或4.11的任一项，其中所述病症为白血病。

4.13方法4.12，其中所述白血病为淋巴细胞白血病或髓性白血病。

4.14上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

4.15方法4.14，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

4.16方法4.14，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

4.17方法4.14，其中所述抗肿瘤药在施用PDE1抑制剂之后施用。

4.18上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗一起施用。

4.19上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗同时施用。

4.20上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之前施用。

4.21上述方法的任一项，其中PDE1抑制剂和任选的抗癌药在放疗或化疗之后施用。

4.22上述方法的任一项，其中PDE1抑制剂的施用有效地诱导癌细胞中如下的一种或多种：凋亡性细胞死亡、迁移抑制、转移抑制、和/或炎症减轻。

4.23上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药、免疫疗法、皮质类固醇和/或抗组胺药一起施用。

4.24上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE介导。

4.25上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1介导。

4.26上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1C介导。

4.27上述方法的任一项，其中所述癌症的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

4.28上述方法的任一项，其中癌细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，

这种改变通过钙/钙调蛋白改变对PDE1活性的控制。

本公开还提供了用于治疗患者癌症的方法中的PDE1抑制剂，其中癌细胞具有升高的PDE1活性或表达，例如相对于相同的组织类型的正常细胞，其中所述癌细胞表现出增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种，例如用于任一方法4等中。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于治疗患者癌症的方法的药物中的用途，其中癌细胞具有升高的PDE1活性或表达，例如相对于相同的组织类型的正常细胞，其中所述癌细胞表现出增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种，例如用于任一方法4等的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的化合物的任一种，该药物组合物用于任一方法4等中。

在另一个实施方案中，本申请提供了抑制细胞因子释放综合征的方法(方法5)，包含向有需要的患者施用有效量的PDE1抑制剂，例如其中患者患有癌症，并且正在接受化学疗法、免疫疗法、基因疗法和/或抗体疗法(包括针对癌症抗原的抗体和/或针对免疫检查点靶标的抗体)中的一种或多种，并且该方法任选地进一步包含向所述患者施用皮质类固醇和/或抗组胺药。

5.1方法5，其中所述患者患有癌症。

5.2上述方法的任一项，其中所述癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同的组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1的表达或活性增加。

5.3上述方法的任一项，其中所述癌或肿瘤细胞的特征在于相对于相同的组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1C表达增加。

5.4方法5.1-5.3的任一项，其中相对于相同的组织类型的正常细胞，所述癌细胞表现出增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种。

5.5上述方法的任一项，其中所述患者患有肿瘤。

5.6上述方法的任一项，其中所述患者患有肿瘤，其选自听神经瘤、星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、神经胶质瘤(例如脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经胶质瘤)、室管膜下瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑瘤、少突神经胶质瘤、垂体瘤、原始神经外胚瘤(PNET)、许旺细胞瘤、腺瘤(例如嗜碱性腺瘤、嗜酸腺瘤、嫌色性腺瘤、甲状旁腺腺瘤、胰岛腺瘤、纤维腺瘤)、纤维瘤(纤维组织细胞瘤)、纤维瘤、血管瘤、脂肪瘤(例如血管脂瘤、髓脂瘤、纤维脂肪瘤、梭形细胞脂肪瘤、蛰伏脂瘤、不典型脂肪瘤)、粘液瘤、骨瘤、白血病前期、横纹肌瘤、乳头状瘤、脂溢性角化病、皮肤附件肿瘤、肝腺瘤、肾脏管状腺瘤、胆管腺瘤、移行细胞乳头状瘤、葡萄胎、神经节瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、C细胞增生、嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、良性肿瘤、化学感受器瘤、副神经节瘤、痣、光化性角化病、宫颈发育不良、化生(例如肺组织变形)、粘膜白斑、血管瘤、淋巴管瘤、癌(例如鳞状细胞癌、表皮样癌、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胆管上皮癌、移行细胞癌、胚胎细胞癌、甲状旁腺肿瘤、甲状腺髓样癌、支气管类癌、燕麦细胞癌、胰岛细胞癌、恶性类癌)、肉瘤(，例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维肉瘤)、母细胞瘤(例如髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤、脑瘤类型、视网膜母细胞瘤、眼视网膜肿瘤、成骨细胞瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤)、胚细胞瘤、间皮瘤、恶性皮肤附件肿瘤、肾上腺样瘤、精原细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑膜瘤、恶性许旺细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、mercell细胞肿瘤、叶状囊性肉瘤或Wilms瘤的一种或多种。

5.7上述方法的任一项，其中所述患者患有神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

5.8上述方法的任一项，其中所述患者患有神经胶质瘤(例如室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤或混合性神经胶质瘤、例如寡星状细胞瘤)。

5.9方法5.8，其中所述患者患有星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

5.10上述方法的任一项，其中所述患者患有多形性胶质母细胞瘤。

5.11上述方法的任一项，其中所述患者患有癌症。

5.12上述方法的任一项，其中所述患者患有白血病。

5.13方法5.12，其中所述白血病为淋巴细胞白血病或髓性白血病。

5.14上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

5.15方法5.14，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

5.16方法5.14，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

5.17方法5.14，其中所述抗肿瘤药在施用PDE1抑制剂之后施用。

5.18上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗一起施用。

5.19上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗同时施用。

5.20上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之前施用。

5.21上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之后施用。

5.22上述方法的任一项，其中上述方法，其中PDE1抑制剂的施用有效地诱导癌细胞中如下的一种或多种：凋亡性细胞死亡、迁移抑制、转移抑制、和/或炎症减轻。

5.23上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗肿瘤药、化疗剂、基因治疗剂、免疫疗法、类固醇和/或抗组胺药一起施用。

5.24方法5.1-5.23的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE介导。

5.25方法5.1-5.24的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1介导。

5.26方法5.1-5.25的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1C介导。

5.27方法5.1-5.26的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

5.28方法5.1-5.26的任一项，其中癌或肿瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，这种改变通过钙/钙调蛋白改变对PDE1活性的控制。

本公开还提供了PDE1抑制剂，其用于抑制细胞因子释放综合征的方法中，例如用于任一方法5等中。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于抑制细胞因子释放综合征的方法的药物中的用途，例如用于任一方法5等中的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的化合物的任一种，该药物组合物用于任一方法5等中。

在另一个实施方案中，本申请提供了治疗癌症或肿瘤的方法(方法6)，所述癌症或肿瘤的特征在于组成型活性PDE1，该方法包含向有此需要的患者施用有效量的PDE1抑制剂(即式I、Ia、II、III和/或IV的PDE1抑制剂)。

6.1方法6，其中癌或肿瘤细胞中的PDE1与Ca2+/钙调蛋白介导彼此独立。

6.2方法6或6.1，其中PDE1为PDE1A。

6.3方法6或6.1，其中PDE1为PDE1B。

6.4方法6或6.1，其中PDE1为PDE1C。

6.5上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于，相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1表达增加。

6.6上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于，相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1C表达增加。

6.7上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于：相对于相同组织类型的正常细胞，癌细胞增加PDE1 RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合(例如PET或PDE1抑制剂分子的放射性同位素保留)或PDE1酶活性(例如如在酶促测定中测量的或在癌细胞或癌细胞的亚细胞结构域(例如微管结构域)中以低水平cAMP反映出的)的一种或多种。

6.8上述方法的任一项，其中所述病症为肿瘤。

6.9上述方法的任一项，其中所述肿瘤选自如下的一种或多种：听神经瘤、星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、神经胶质瘤(例如脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经胶质瘤)、室管膜下瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑瘤、少突神经胶质瘤、垂体瘤、原始神经外胚瘤(PNET)、许旺细胞瘤、腺瘤(例如嗜碱性腺瘤、嗜酸腺瘤、嫌色性腺瘤、甲状旁腺腺瘤、胰岛腺瘤、纤维腺瘤)、纤维瘤(纤维组织细胞瘤)、纤维瘤、血管瘤、脂肪瘤(例如血管脂瘤、髓脂瘤、纤维脂肪瘤、梭形细胞脂肪瘤、蛰伏脂瘤、不典型脂肪瘤)、粘液瘤、骨瘤、白血病前期、横纹肌瘤、乳头状瘤、脂溢性角化病、皮肤附件肿瘤、肝腺瘤、肾脏管状腺瘤、胆管腺瘤、移行细胞乳头状瘤、葡萄胎、神经节瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、C细胞增生、嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、良性肿瘤、化学感受器瘤、副神经节瘤、痣、光化性角化病、宫颈发育不良、化生(例如肺组织变形)、粘膜白斑、血管瘤、淋巴管瘤、癌(例如鳞状细胞癌、表皮样癌、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胆管上皮癌、移行细胞癌、胚胎细胞癌、甲状旁腺肿瘤、甲状腺髓样癌、支气管类癌、燕麦细胞癌、胰岛细胞癌、恶性类癌)、肉瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维肉瘤)、母细胞瘤(例如髓母细胞瘤和胶质母细胞瘤、脑瘤类型、视网膜母细胞瘤、眼视网膜肿瘤、成骨细胞瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤)、胚细胞瘤、间皮瘤、恶性皮肤附件肿瘤、肾上腺样瘤、精原细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑膜瘤、恶性许旺细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、mercell细胞肿瘤、叶状囊性肉瘤或Wilms瘤。

6.10上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

6.11上述方法的任一项，其中所述病症为神经胶质瘤(例如室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、脑干神经胶质瘤、视神经胶质瘤或混合性神经胶质瘤、例如寡星状细胞瘤)。

6.12上述方法，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤(例如多形性胶质母细胞瘤)。

6.13上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

6.14上述方法的任一项，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤，其特征在于存在组成型活性PDE1(例如PDE1C)。

6.15方法6-6.7的任一项，其中所述病症为癌症。

6.16方法6-6.7或6.15的任一项，其中所述病症为白血病。

6.17上述方法，其中所述白血病为淋巴细胞白血病或髓性白血病。

6.18上述方法的任一项，还包含向患者施用抗肿瘤药的步骤。

6.19方法6.18，其中将所述抗肿瘤药与PDE1抑制剂同时施用。

6.20方法6.18，其中在施用PDE1抑制剂之前施用所述抗肿瘤药。

6.21方法6.18，其中在施用PDE1抑制剂之后施用所述抗肿瘤药。

6.22上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗一起施用。

6.23上述方法的任一项，其中将所述PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药与放疗或化疗同时施用。

6.24上述方法的任一项，其中PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之前施用。

6.25上述方法的任一项，其中PDE1抑制剂和任选的抗肿瘤药在放疗或化疗之后施用。

6.26上述方法的任一项，其中将PDE1抑制剂与抗癌药、化疗药、基因治疗药和/或免疫疗法一起施用。

6.27上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE介导。

6.28上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1介导。

6.29上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤由PDE1C介导。

6.30上述方法的任一项，其中所述癌症或肿瘤的特征在于钙/钙调蛋白控制缺失。

6.31上述方法的任一项，其中癌细胞或肿瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，其通过钙/钙调蛋白改变对PDE1活性的控制。

本公开还提供了PDE1抑制剂，其用于治疗以组成型活性PDE1为特征的癌症或肿瘤的方法中，例如用于任一方法6等。

本公开还提供了PDE1抑制剂在制备用于治疗以组成性活性PDE1为特征的癌症或肿瘤的方法的药物中的用途，例如用于任一方法6等中的药物。

本发明还提供了药物组合物，其包含PDE1抑制剂，例如式I、Ia、II、III和/或IV的化合物的任一种，该药物组合物用于任一方法6等中。

在一些实施方案中，所述药物组合物与一种或多种抗肿瘤药，例如已知具有治疗或消除各种类型的癌症和/或肿瘤作用的药物联合施用。抗肿瘤药的非限制性实例为Abemaciclib、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、注射用紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、Acalabrutinib、AC-T、Adcetris(BrentuximabVedotin)、ADE、Ado-Trastuzumab Emtansine、亚德里亚霉素(盐酸多柔比星)、AfatinibDimaleate、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥匹坦和盐酸帕洛司琼)、艾达乐(咪喹莫德)、阿地白介素、Alecensa(Alectinib)、Alectinib、阿仑珠单抗、力比泰(培美曲塞二钠)、Aliqopa(Copanlisib Hydrochloride)、注射用爱克兰(盐酸美法仑)、Alkeran Tabets(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛司琼)、Alunbrig(Brigatinib)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基酮戊酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达、帕米膦酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、菊欧文氏菌门冬酰胺酶(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、Atezolizumab、阿瓦斯丁(贝伐珠单抗)、Avelumab、Axicabtagene Ciloleucel、阿昔替尼、阿扎胞苷、Bavencio(Avelumab)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝林司他)、贝林司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(伊珠单抗奥加米星)、贝伐珠单抗、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、兰妥莫单抗、Blincyto(兰妥莫单抗)、硼替佐米、Bosulif(波舒替尼)、波舒替尼、Brentuximab Vedotin、Brigatinib、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(Cabozantinib-S-Malate)、Cabozantinib-S-Malate、CAF、Calquence(Acalabrutinib)、Campath(阿仑珠单抗)、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶-局部)、卡铂、卡铂-泰素、卡非佐米、卡莫司汀(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、Ceritinib、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、Cervarix(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-泼尼松、CHOP、顺铂、克拉立滨、环磷酰胺(环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、Cobimetinib、Cometriq(Cabozantinib-S-Malate)、CopanlisibHydrochloride、COPDAC、COPP、COPP-ABV、更生霉素(放线菌素D)、Cotellic(Cobimetinib)、Crizotinib、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、阿糖胞苷(阿糖胞苷)、环磷酰胺(环磷酰胺)、Dabrafenib、达卡巴嗪、Dacogen(地西他滨)、放线菌素D、达雷木单抗、Darzalex(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸柔红霉素、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷钠、Defitelio(去纤苷钠)、地加瑞克、地尼白介素2、地舒单抗、脂质体阿糖胞苷注射剂(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸右丙亚胺D、Dinutuximab、多西他赛、盐酸多柔比星脂质体(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、Durvalumab、氟尿嘧啶氟尿嘧啶-局部)、Elitek(拉布立酶)、盐酸表柔比星(盐酸表柔比星)、依洛珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、艾曲泊帕环匹罗司乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐胶囊(阿瑞匹坦)、Empliciti(依洛珠单抗)、Enasidenib Mesylate、Enzalutamide、盐酸表柔比星、EPOCH、艾比特思(西妥昔单抗)、甲磺酸艾立布林、Erivedge(Vismodegib)、盐酸厄洛替尼、Erwinaze(菊欧文氏菌门冬酰胺酶(Asparaginase Erwinia chrysanthemi))、氨磷汀(氨磷汀)、凡毕复(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、阿霉素脂质体(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、易维特(盐酸雷洛昔芬)、Evomela(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶注射剂)、5-FU(氟尿嘧啶-局部)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、Faslodex(氟维司群)、FEC、弗隆(来曲唑)、非格司亭、福达华(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶(氟尿嘧啶-局部)、氟尿嘧啶注射剂、氟尿嘧啶-局部、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、Folex PFS(甲氨蝶吟)、氟尿嘧啶、亚叶酸和伊立替康联合用药、氟尿嘧啶、亚叶酸和伊立替康联合用药-贝伐珠单抗、氟尿嘧啶、亚叶酸和伊立替康联合用药-西妥昔单抗、Folfirinox、奥沙利铂、氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸钙方案、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV九价疫苗)、Gazyva(阿托殊单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉姆单抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、Gilotrif(Afatinib Dimaleate)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、卡氮芥糯米纸胶囊剂(卡莫司汀植入物)、卡氮芥糯米纸胶囊剂(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸性瑞林、Halaven(甲磺酸艾立布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、赫赛汀(曲妥珠单抗)、HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、重组和美新(盐酸拓扑替康)、羟基脲(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(Palbociclib)、替伊莫单抗、Ibrutinib、ICE、Iclusig(PonatinibHydrochloride)、依达比星(盐酸依达比星)、盐酸伊达比星、Idelalisib、Idhifa(Enasidenib Mesylate)、异环磷酰胺粉针剂(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、匹服平(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(Ibrutinib)、Imfinzi(Durvalumab)、咪喹莫德、Imlygic(Talimogene Laherparepvec)、Inlyta(阿昔替尼)、伊珠单抗奥加米星、干扰素α-2b、重组白细胞介素-2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α2b)、伊匹木单抗、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地新)、伊沙匹隆、Ixazomib Citrate、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(Ruxolitinib Phosphate)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-Trastuzumab Emtansine)、雷洛昔芬(盐酸雷洛昔芬)、凯望斯(帕利夫明)、Keytruda(Pembrolizumab)、Kisqali(Ribociclib)、Kymriah(Tisagenlecleucel)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(Olaratumab)、来那度胺、Lenvatinib Mesylate、Lenvima(Lenvatinib Mesylate)、来曲唑、亚叶酸钙、留可然(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、克利屈滨(克拉立滨)、氨基酮戊酸(氨基酮戊酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、洛莫司汀、Lonsurf(曲氟尿苷和盐酸Tipiracil)、醋酸亮丙瑞林(醋酸亮丙瑞林)、醋酸亮丙瑞林储库制剂(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-Ped(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕利)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(Trametinib)、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠、美钠针剂(美司钠)、替莫唑胺(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴甲钠曲酮、甲氨蝶呤钠(甲氨蝶呤)、甲氨蝶呤钠-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、氮芥(盐酸氮芥)、丝裂霉素(丝裂霉素C)、马利兰(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、麦罗塔(吉姆单抗奥佐米星)、紫杉醇纳米粒(紫杉醇白蛋白稳定的纳米粒制剂)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、奈昔木单抗、奈拉滨、环磷酰胺注射剂(环磷酰胺)、马来酸奈拉替尼、Nerlynx(马来酸奈拉替尼)、奈妥匹坦和盐酸帕洛司琼、Neulasta(培非司亭)、优保津(非格司亭)、多吉美(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(Ixazomib Citrate)、Niraparib Tosylate Monohydrate、Nivolumab、诺瓦得士(枸橼酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、阿托珠单抗、Odomzo(Sonidegib)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕利、Olaratumab、美琥他辛、培门冬酶注射剂(Pegaspagase)、盐酸昂丹司琼、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(地尼白介素2)、Opdivo(Nivolumab)、OPPA、Osimertinib、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白-稳定的纳米粒制剂、PAD、Palbociclib、帕利夫明、盐酸帕洛司琼、盐酸帕洛司琼和奈妥匹坦、帕米膦酸二钠、帕木单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、伯尔定(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非司亭、培干扰素α-2b、佩乐能(培干扰素α-2b)、Pembrolizumab、培美曲塞二钠、Perjeta(培妥珠单抗)、培妥珠单抗、顺铂(顺铂)、顺铂-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、PonatinibHydrochloride、Portrazza(奈昔木单抗)、普拉曲沙、泼尼松、盐酸丙卡巴肼、阿地白介素(阿地白介素)、Prolia(地舒单抗)、Promacta(盐酸普萘洛尔环匹罗司乙醇胺)、盐酸普萘洛尔、Provenge(Sipuleucel-T)、巯嘌呤(巯嘌吟)、Purixan(巯嘌呤)、二氯化镭223、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)九价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α2b、瑞戈非尼、Relistor(溴甲钠曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、甲氨蝶呤胶囊剂(甲氨蝶呤)、Ribociclib、R-ICE、B细胞单克隆抗体(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人玻璃酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人玻璃酸酶、盐酸罗拉匹坦、罗米地新、罗米司亭、柔红霉素(盐酸柔红霉素)、Rubraca(Rucaparib Camsylate)、Rucaparib Camsylate、Ruxolitinib Phosphate、Rydapt(米哚妥林)、二甲亚砜胸膜内气雾剂(Talc)、司妥昔单抗、Sipuleucel-T、索马杜林储库制剂(醋酸兰瑞肽)、Sonidegib、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(培干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(美琥他辛)、硫鸟嘌呤(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(Dabrafenib)、Tagrisso(Osimertinib)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、枸橼酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸厄洛替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、泰素(紫杉醇)、泰素帝(多西他赛)、Tecentriq(Atezolizumab)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、坦罗莫司、沙利度胺、沙立度胺(沙立度胺)、硫鸟嘌呤、塞替派、Tisagenlecleucel、Tolak(氟尿嘧啶-局部)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(坦罗莫司)、Totect(盐酸右丙亚胺)、TPF、曲贝替定、Trametinib、曲妥珠单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、曲氟尿苷和盐酸Tipiracil、三氧化二砷(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(Dinutuximab)、三乙酸尿苷、VAC、戊柔比星、Valstar(戊柔比星)、凡他尼布、VAMP、Varubi(盐酸罗拉匹坦)、Vectibix(帕木单抗)、VeIP、硫酸长春碱制剂(硫酸长春碱)、万珂(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、Vemurafenib、Venclexta(Venetoclax)、Venetoclax、Verzenio(Abemaciclib)、醋酸亮丙瑞林植入剂(醋酸亮丙瑞林)、阿扎胞苷(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、硫酸长春新碱注射剂(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、Vismodegib、Vistogard(三乙酸尿苷)、Voraxaze(谷卡匹酶)、伏林司他、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体)、亚叶酸钙(甲酰四氢叶酸钙)、Xalkori(Crizotinib)、Xeloda(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地舒单抗)、Xofigo(二氯化镭223)、Xtandi(Enzalutamide)、Yervoy(伊匹木单抗)、Yescarta(AxicabtageneCiloleucel)、Yondelis(曲贝替定)、Zaltrap(Ziv-阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(Niraparib Tosylate Monohydrate)、Zelboraf(Vemurafenib)、泽娃灵(替伊莫单抗)、丙亚胺(盐酸右丙亚胺)、Ziv-阿柏西普、枢复宁(盐酸昂丹司琼)、诺雷得(醋酸性瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏林司他)、择泰(唑来膦酸)、Zydelig(Idelalisib)、Zykadia(Ceritinib)、Zytiga(醋酸阿比特龙)。

如本文所用，术语“抗肿瘤药”应理解为是指可有效预防或抑制癌症或肿瘤的形成或生长的任何化学剂或药物。如本文所讨论的抗肿瘤药可以包括烷化剂、抗代谢物、天然产物、激素和/或抗体。肿瘤或癌症的治疗可以包括限制体内癌细胞或肿瘤细胞的增殖、迁移和/或侵袭或限制与所述癌症或肿瘤相关的症状。如本文所用，抗肿瘤药应理解为涵盖抗癌剂并且还与之同义。

制备本公开化合物的方法

公开的PDE1抑制剂及其药学上可接受的盐可以使用在US 8,273,750、US 2006/0173878、US 8,273,751、US 2010/0273753、US 8,697,710、US 8,664,207、US 8,633,180、US 8,536,159、US 2012/0136013、US 2011/0281832、US 2013/0085123、US 2013/0324565、US 2013/0338124、US 2013/0331363、WO 2012/171016和WO 2013/192556中所述和示例的方法，并且通过与其相似的方法和通过化学领域已知的方法制备。这类方法包括、但不限于以下描述的那些。如果不是可商购的，则可以通过选自化学领域的方法，应用已知化合物的合成相似或类似的技术来制备这些方法的原料。

可以使用如下文献中所述的方法制备各种PDE1抑制剂及其原料：US 2008-0188492 A1、US 2010-0173878 A1、US 2010-0273754 A1、US 2010-0273753 A1、WO 2010/065153、WO 2010/065151、WO 2010/065151、WO 2010/065149、WO 2010/065147、WO 2010/065152、WO 2011/153129、WO 2011/133224、WO 2011/153135、WO 2011/153136、WO 2011/153138。本文引用的全部参考文献通过引用整体并入本文。

在美国临时申请62/833,481中公开了进一步的PDE1抑制剂和相关方法，其通过引用整体并入本文。在国际公开号WO2018/049417中公开了其他相关的PDE1抑制剂和相关方法，其通过引用整体并入本文。

本公开的化合物包括其对映异构体、非对映异构体和外消旋体以及它们的多晶型物、水合物、溶剂化物和配合物。在本公开范围内的一些单独的化合物可以包含双键。本公开中双键的表示意在包括双键的E和Z异构体。另外，在本公开范围内的一些化合物可以包含一个或多个不对称中心。本公开包括任何光学纯的立体异构体以及立体异构体的任何组合的用途。

还预期本公开的化合物包含它们的稳定的和不稳定的同位素。稳定的同位素是非放射性同位素，与相同物种(即元素)的丰富核素相比，其包含一个额外的中子。预期将保留包含此类同位素的化合物的活性，并且此类化合物还将用于测量非同位素类似物的药代动力学。例如，在本公开的化合物上某个位置上的氢原子可以被氘(一种非放射性的稳定的同位素)替代。已知的稳定的同位素的例子包括、但不限于氘、¹³C、¹⁵N、¹⁸O。或者，不稳定的同位素为放射性同位素，与相同种类(即元素)的丰富核素相比，其包含另外的中子，例如¹²³I、¹³¹I、¹²⁵I、¹¹C、¹⁸F，可以替代相应的I、C和F丰富的种类。本公开化合物的有用同位素的另一实例为¹¹C同位素。这些放射性同位素可用于本公开化合物的放射成像和/或药代动力学研究。

熔点未经校正且(dec)表示分解。温度以摄氏度(℃)给出；除非另有说明，否则操作应在室温或环境温度(即18-25℃的温度)下进行。色谱法是指硅胶快速色谱法；薄层色谱法(TLC)在硅胶板上进行。NMR数据以主要诊断质子的δ值表示，相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)，以百万分之一(ppm)给出。使用信号形状的常规缩写。耦合常数(J)以Hz给出。对于质谱(MS)，报道了分子的最低质量主离子，其中同位素分裂产生多个质谱峰。溶剂混合物组成以体积百分比或体积比给出。如果NMR光谱复杂，则仅报告诊断信号。

词语“治疗”应相应地理解为包含疾病症状的治疗或改善以及疾病原因的治疗。

对于治疗方法，词语“有效量”旨在涵盖治疗特定疾病或障碍的治疗有效量。

术语“患者”包括人或非人(即动物)患者。在特定的实施方案中，本公开涵盖人和非人。在另一个实施方案中，本公开涵盖非人。在其他实施方案申，该术语涵盖人。

在本公开中使用的术语“包括”旨在是开放性的，并且不排除另外的、未叙述的要素或方法步骤。

在实施本公开时所采用的剂量当然将根据例如待治疗的特定疾病或病症、使用的特定本公开的化合物、施用方式以及期望的疗法的不同而改变。本公开的化合物可以通过任意适合的途径施用，包括口服、胃肠外、透皮或通过吸入，但优选口服施用。通常，指示令人满意的结果例如指出上文所述用于治疗疾病的结果通过口服施用以约0.01-2.0mg/kg的剂量得到。在较大的哺乳动物、例如人中，两种PDE1抑制剂的口服施用的每日指示剂量将相应地在约0.50-300mg的范围内，便利地一次或分2-4次剂量给药，每日或以持续释放形式施用。因此，用于口服施用的单位剂型可以包含约0.2-150或300mg，例如约0.2或2.0-10、25、50、75、100、150或200mg的本公开化合物及其药学上可接受的稀释剂或载体。

本公开的化合物，特别地用于任一方法1-6等中的用途或施用，可以以根据治疗癌症或肿瘤、例如多形性胶质母细胞瘤所必要的较高剂量施用。预期用于这类方法的PDE1抑制剂的施用可以在约50mg-1000mg/日的范围。例如，对根据任一方法1-6等的病症施用PDE1抑制剂的患者可以施用式I、Ia、II、III或IV的PDE1抑制剂，其用量为50mg-1000mg/日、50mg-900mg/日、50mg-800mg/日、50mg-700mg/日、50mg-600mg/日、50mg-500mg/日、50mg-400mg/日、50mg-350mg/日、50mg-300mg/日、50mg-250mg/日、50mg-200mg/日、50mg-150mg/日或50mg-100mg/日。

本公开的化合物可以通过任何令人满意的途径施用，包括口服、肠胃外(静脉内、肌内或皮下)或经皮给药，但优选口服施用。在某些实施方案中，本公开的化合物，例如以贮库制剂形式，优选通过注射经胃肠外施用。

本公开的化合物和本公开的药物组合物可以与一种或多种其他治疗剂组合使用，尤其是其剂量低于用作单一疗法的各活性剂剂量，以增强联合药物的治疗活性而不会引起通常发生在常规单一疗法中的不良副作用。因此，本公开的化合物可以与其他可用于治疗疾病的药物同时、分别、依次或伴随施用。在另一个实例中，可以通过将本发明化合物与一种或多种游离或盐形式的另外的治疗剂联合施用来减少或最小化副作用，其中(i)第二治疗剂或(ii)本公开的化合物和第二治疗剂的剂量均低于该药物/化合物作为单一疗法施用时的剂量。作为非限制性实例，此类另外的治疗剂可以包括ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、钙通道阻滞剂等。

当涉及治疗用途时，术语“同时”是指通过相同的施用途径同时或大约同时施用两种或多种活性成分。

当涉及治疗用途时，术语“分别”是指通过不同的施用途径同时或大约同时施用两种或多种活性成分。

可以使用常规稀释剂或赋形剂以及盖仑领域已知的技术来制备包含本公开的化合物的药物组合物。因此，口服剂型可以包括片剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂等。

实施例

如下实施例1-4中的数据公布在F.Rowther等人2016，Cyclic nucleotidephosphodiesterase-1C(PDE1C)drives cell proliferation，migration and invasionin Glioblastoma multiforme cells in vitro.Molecular Carcinogenesis.55(3)：268-79中。

对比例1：多形性胶质母细胞瘤组织中PDE1C的表达

如预先在Lewandowicz GM等人，Chemosensitivity in childhood braintumours in vitro：Evidence of differential sensitivity to lomustine(CCNU)andvincristine.Eur J Cancer 2000；36：1955中所述，从成人胶质母细胞瘤多形(GBM)活检组织制备短期细胞培养物。将样品维持在包含10％胎牛血清的378C非-CO₂温育箱中的HamsF10营养混合物[Invitrogen，UK]中。还包括正常人星形胶质细胞(NHA)[Lonza，UK]和已建立的细胞系U251-MG。许可的GBM活检样本取自Brain Tumor NW Research Tissue Bank，Preston，UK。在该部位对GBM组织进行组织学评价，并根据WHO2007分级方案对肿瘤进行分类。正常的人脑对照，包括全脑小脑和胎儿胼胝体也用于测定PDE1C表达。

使用QIAmp DNA Mini Kit[Qiagen，UK]从GBM培养物中提取DNA。使用RNeasy MiniKit[Qiagen，UK]从GBM短期培养物(10⁶个细胞)或约5mg速冻活检组织中提取总RNA。使用NanoDrop ND-2000[Thermo Scientific，UK]对DNA和总RNA进行定量。使用QuantiTectReverse Transcription[Qiagen，UK]从总RNA(500ng)合成cDNA。

使用PDE1C TaqMan拷贝数测定法与FAM报道分子（Hs01364699_cn[LifeTechnologies，UK]，从20ng/孔(96-孔)GBM来源的培养物中进行实时定量PCR。在相同的基因组位置上选择探针的位置，其中aCGH检测到聚焦增益，采用Taqman测定法进行TERT[LifeTechnologies，UK]作为内源性对照(VIC报道分子)，并且将PDE1C拷贝数标准化至其水平。参比DNA得自混合等量的男性和女性基因组DNA[Promega，UK]，并且用作正常对照{包含PDE1C的二倍体拷贝用于本测定。在三次独立实验中一式三份进行QPCR扩增，得到精确的拷贝数数据。

为了进行表达分析，在ABI 7500序列检测系统[Applied Biosystems，UK]上，使用FAM报道分子[Thermo Scientific，UK]，应用Solaris QPCR PDE1C基因表达测定法进行QPCR。使用与低ROX [Thermo Scientific，UK]的1x Solaris qPCR预混料，在20mL反应体积扩增2μL cDNA，并一式三份进行扩增。将PDE1C表达水平标准化为GAPDH，并使用2^ΔΔCT方法测定相对表达。正常脑对照(总脑RNA，人小脑和胼胝体)购自Clontech[France]。

将QPCR分析结果概括在下表1中。

表1：PDE1C拷贝数的QPCR分析

样品	PDE1C拷贝数(QPCR)	PDE1C状态
			IN1461	3.31±0.070	增加
IN1951	2.62±0.210	增加
			IN1528	3.67±0.315	增加
IN1682	3.61±0.025	增加
			IN1752	2.64±0.261	增加
IN1612	3.03±0.178	增加
			U251-MG	2.92±0.060	增加
IN2132	2.91±0.216	增加
			IN1760	3.03±0.036	增加
IN1265	3.75±0.053	增加
			IN2093	3.19±0.259	增加
IN1979	2.66±0.286	增加
			IN1472	4.78±0.077	增加
IN859	3.18±0.080	增加
			IN2045(对照培养物)	2.30±0.136	二倍体
参比DNA	2.00±0.114	二倍体

如上所示，QPCR分析证实短期GBM细胞培养物中PDE1C的增益。使用QPCR分析在短期培养中PDE1C的表达，并且基因组过表达与PDE1C表达之间的相关性是显而易见的(图1)，因为在所有测试的具有基因组过表达的细胞培养物中均存在表达升高(与正常人星形胶质细胞相比)，除外对照培养物IN2045。与对照培养物相比，观察到每种短期培养物中的表达均显著升高，范围在23-360倍(P＜0.0001)。

对比例2：测定PDE1C在GBM增殖中的作用

使用DharmaFECT-1转染试剂在含有血清的培养基中促进siRNA转染，并使用阳性对照Cyclophilin-B siRNA[Thermo Scientific，UK]评价转染效率。将培养物以相同浓度与非靶向siRNA库平行转染。将非靶向siRNA和PDE1C特异性siRNA缩写为siNT和siPD。在开始转染之前，将细胞以40-50％的汇合率接种，并温育48h。在最初的48h温育结束时，将细胞转染并温育4d。在第5天，将细胞用胰蛋白酶消化并重新接种到新鲜的烧瓶中，并使其附着过夜。在第6天(用siNT或siPD)将细胞再转染，并进一步温育4天，然后收集用于进一步的实验。使siNT和siPD细胞生长72h，并如Vichai V，Kirtikara K.Sulforhodamine Bcolorimetric assay for cytotoxicity screening.Nat Protoc 2006；1：1112-1116中所述，使用SRB进行增殖测定。将长春西汀溶于DMSO，并使用从500μM-0.977μM的系列稀释液的剂量范围。

如图3中所示，停止转染后，评价细胞的增殖能力。不论初始PDE1C表达水平如何，除IN2045以外，所有培养物中，与表达PDE1C的细胞相比，PDE1C耗尽使增殖持续降低45-54％(P＜0.05)。在PDE1C耗尽后，还评价了cAMP和cGMP活性。观察到，与siNT细胞相比，在siPD细胞中检测到cAMP和cGMP的活性均增加(P＜0.05)，除外在对照培养物IN2045中。

对比例3：测定PDE1C在GBM细胞迁移和侵袭中的作用

siNT和siPD的迁移和侵袭潜力使用CytoSelect 24-孔细胞迁移和侵袭测定法评价[Cell Biolabs，Inc.，USA]。在无血清培养基中将20,000个siNT或siPD细胞接种到聚碳酸酯膜(8mM)上，并将含血清的培养基用作化学吸引剂。在温育时间结束时，移出迁移的细胞，并使用结晶紫将膜上的非迁移细胞染色，并进行比色定量。对于侵入测定，采用预先包被胞外基质(ECM)蛋白的聚碳酸酯膜[Cell Biolabs，Inc.，USA]。

还使用CytoSelect 24-孔伤口愈合试验[Cell Biolabs，Inc.，USA]按照制造商的说明评价了细胞迁移。迁移％由下式计算：

[(迁移到伤口区域的细胞)/(载玻片上的细胞总数)]x100。

将在siNT的迁移率设定为100％。对于长春西汀，在本测定期间持续进行治疗。

如图4和5中所示例的，与siNT细胞相比时，siPD细胞显示迁移能力(通过聚碳酸酯膜)和侵袭(通过ECM包被的聚碳酸酯膜)均降低。对迁移和侵袭的细胞进行定量，并且与siNT相比，siPD细胞中的迁移和侵袭潜力降低40-60％。在培养物IN1472和IN1760中，细胞迁移和侵袭的减少具有统计学意义(P＜0.05)。有意义地，在每种单独的培养物中，抑制迁移和侵袭的相对程度非常相似。与增殖类似，在siPD IN2045细胞中也没有抑制迁移或侵袭。使用博登室测定法得到的结果在伤口愈合测定中得到证实(图6)，其中与三种培养物中的siNT细胞(IN1472、IN1760和U251MG)相比，在siPD细胞中在伤口区域内迁移的细胞数量明显减少。这些数据表明，PDE1C还在GBM细胞中的迁移和侵袭途径上游中起作用。

对比例4：PDE1C下游效应物的鉴定

为了进行全基因组表达分析，使用MessageAmpTM IIBiotin增强试剂盒[Ambion；Life Technologies，UK]逆转录1mg总RNA，并且与人类基因组U133 Plus 2.0[Affymetrix，UK]杂交。将阵列在GeneChip Fluidics Station 450中洗涤，并使用GeneChip Scanner3000 7G[Affymetrix，UK]进行扫描。阵列一式三份进行以便用于siNT和siPD处理。

使用标准方案对来自siNT和siPD的每个生物学复制品的Affymetrix CEL文件中的原始微阵列数据进行标准化。阵列背景、Q值和平均强度对于所有阵列在可接受范围内。使用GeneSpring GX12(Agilent Technologies，UK)进行统计学比较和数据可视化。首先，鉴定与siNT相比siPD细胞中表达水平变化≥2倍，然后使用1-方式ANOVA(P＜0.05)和Benjamini和Hochberg False Discovery Rate多重校正检验鉴定具有统计学意义的基因。使用MetacoreTM[GeneGo，Thompson Reuters，USA]鉴定受PDE1C耗尽影响的重要生物学、过程网络、基因肿瘤学(GO)过程和疾病标记。使用cBIO癌症基因组学门户网站研究TheCancer Genome Atlas(TCGA)GBM组中PDE1C影响的基因的表达状态，并与患者预后建立相关性。

全基因组表达阵列是在培养物IN1472和IN1760上完成，其中PDE1C耗尽对增殖、侵袭和迁移的影响最为明显(图2C、4B、4D和4F)。基于表达倍数改变≥2倍的差异表达以及siNT与siPD细胞之间的P＜0.05的统计学显著性鉴定出565个转录物(465个基因)。对于IN1760，检测到411个差异表达基因，其中146个为增量调节的，而265个为减量调节的。在IN1472中，siPD细胞中有49个得到增量调节，并且有5个得到减量调节。PDE1C的成功敲除也建立在表达阵列中，因为分别是IN1472和IN1760的PDE1C的敲除3倍和13倍。该分析还确立，由于我们未检测到其他PDE表达的任何改变，因此本研究中使用的PDE1C siRNA库对PDE1C具有高度特异性。

在IN1760-siPD细胞中，表现出减量调节3-13倍的最常见减量调节基因包括IL8、PDE1C、KCTD4、PLD5、CXCL6、IL11、B3GALT2、INHBE、OPCML、ELAVL2和EXT1(补充文件A)。类似地，SPARCL1、APOE、CFI、COMP、FABP3、CLU、FAM107A、PTGDS、CHI3L1、MAN1C1、TDO2和QPRT在IN1760-siPD细胞中显示出4-8倍的上调。相反，在IN1472中，PDE1C是唯一在siPD细胞中显示超过3倍减量调节的基因(补充文件B)。TNFSF15也是唯一在IN1472-siPD细胞中显示＞3倍的基因。四个基因在IN1760-siPD和IN1472-siPD细胞中差异表达，包含APOE(增量调节)、HSD11B1(增量调节)、ST6GALNAC5(减量调节)和PDE1C(减量调节)。

研究表明，PDE1C耗尽可改变牵涉GBM细胞中重要细胞途径的基因。如下表2-4中所示，鉴定了受PDE1C敲除影响的最重要途径中涉及的基因。

表2：涉及细胞基质相互作用、ECM重塑和血小板-内皮-白细胞相互作用的途径。

表3：涉及细胞周期(有丝分裂)和增殖控制基因的途径

表4：牵涉神经胶质瘤-特异性基因的途径

观察到，由于PDE1C耗尽而导致的差异表达基因与TCGA GBM组中的基因表达谱密切相关。在siPD IN1760和IN1472细胞的组合差异基因表达列表中，TCGA组中32％的PDE1C介导的增量调节基因得到减量调节，而TCGA组中的53％的PDE1C介导的减量调节基因得到增量调节。在此TCGA基因列表中，至少一个或多个查询基因即IL8、CXCL2、FOSB、NFE2L3、SUB1、SORBS2、WNT5A和MMP1的增量调节与患者预后较差相关(P＝0.0165)，而PDE1C敲除减量调节其表达。因此，尽管分离中的PDE1C表达与结果无关，但由于PDE1C耗尽而导致其下游效应子表达的改变具有改善生存率的潜力。

实施例1：测定化合物1和2抑制GBM的增殖、侵袭和迁移的能力

如对比例2和3所述，由成人多形性胶质母细胞瘤(GBM)活检组织制备GBM细胞培养物。将化合物1和2施用于培养物以评价其对GBM的增殖、侵袭和迁移的作用。化合物1和2为：

在如上对比例2中所述制备细胞培养物之后，评价用化合物1或化合物2处理的细胞的增殖能力。与除对照外的所有培养物中表达PDE1C的细胞相比，化合物的成功运行将显示出增殖减少。与siNT细胞相比，在siPD细胞中检测到cAMP和cGMP活性的增加，但在对照培养物中除外。

还评价了用化合物1或化合物2处理的细胞迁移和增殖的能力。与对照培养物相比，所述化合物的成功运行将显示出减少的迁移和/或增殖。

实施例2：PDE1抑制剂对不同GBM细胞系的作用

从GBM活检中得到七个不同的细胞系，并在短期沉淀培养物中制备，它们各自分别包含3-4百万个细胞。为了准备用于PDE活性的IMAP测定，将细胞沉淀用TBS(150nM NaCl，50mM Tris-HCl，pH 7.4)洗涤1次。然后将沉淀离心，并除去上清液。在0.15mL裂解缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4，5mM MgCl2，蛋白酶抑制剂混合物)中裂解细胞。将所得溶液超声处理2次，持续30秒，然后在4℃下以15,000rpm离心15分钟。将上清液转移到新容器中并立即冷冻。然后测定细胞的PDE1表达和对如实施例1所定义的化合物1和2的抑制敏感性。将结果概括在下表3中。

表3：在不同细胞群中PDE1的表达以及对化合物1和2的敏感性

如上所示，PDE1C在所有细胞系中均升高，某些细胞系显示PDE1C表达增加多达75倍。在所有测试的细胞系中，化合物1和化合物2均显示相似的功效。

进行进一步的研究以测试化合物1和2对GBM细胞的增殖和存活的影响。在浓度为10μM和20μM的条件下，针对化合物1和2测试了每个细胞群的增殖。每天观察并记录有关细胞群变化的结果，持续8天。在所有情况下，与未处理的样品相比，处理的细胞系增殖速度较慢。在UWLV301、UWLV304、IN1951、U251MG和IN2045中，处理的GBM细胞群到第8天时总体下降。

因此，化合物1和2在减缓或消除GBM细胞系增殖方面均显示出高度有效。

实施例3：GBM细胞系中PDE1活性的分析，包括钙依赖性和相关性

测定实施例2中使用的细胞沉淀，以测量PDE活性的钙依赖性，以此作为估计全长酶与截短酶相比的相对存在的方式。截短的酶缺乏N-端调节结构域，且由此在该测定中被赋予组成型活性。根据实施例2的方案准备本测定。

细胞系的PDE1活性的分析如图7中所示。如所示的，在Ca2+/钙调节蛋白存在和不存在下，UWLV301和UWLV304细胞系均显示出高活性的PDE。这说明这些细胞系中的PDE活性不是钙依赖性的。在这两种细胞系中，使用cAMP作为底物的PDE活性不受Ca²⁺/钙调蛋白缺失的影响。另一方面，一些细胞系，例如IN1528和U251MG在存在Ca²⁺/钙调节蛋白存在下比其不存在下显示出高得多的活性水平。

这启示GBM的进展可以导致脑细胞中的PDE1变成组成型活化的。进行进一步的测试以研究这一点，将其概括在下表4中。如所示的，在不同浓度的Ca²⁺/钙调节蛋白存在和不存在以及钙螯合剂EGTA存在下测试了各种细胞系。这些测试证实了UWLV301和UWLV304细胞系具有组成型活性，即它们保持活性而不受Ca²⁺/钙调蛋白调节。

表4：在不同细胞系中的PDE活性百分比

进行进一步测试，以确认主要与GBM细胞增殖有关的PDE亚型。下表5中概括了化合物1对各种PDE酶家族的抑制常数(Ki)值。

表5：化合物1对PDE的抑制常数值

预先已观察到PDE1C表达的增加与GBM细胞有关。本文的结果表明，化合物1在UWLV301和UWLV304细胞系中抑制PDE活性的IC50与纯化的PDE1C获得的Ki值非常匹配，这支持了这样的理念，即在这些细胞系中检测到的PDE活性归因于PDE1C。

不受理论束缚，认为PDE1C结构改变，导致UWLV301或UWLV304细胞系均无法变为组成型活化的。进一步研究时，UWLV301和UWLV304均未显示可检测的全长PDE1C。在测试过程中，这一点得到证实，因为针对PDE1C N-末端的抗体不再能够在失去钙反应性的那些细胞中检测到PDE1C。另一方面，仍然受Ca2+/钙调蛋白调节的IN1528和U251MG细胞系显示可检测的全长PDE1C。因此，这些测试启示受GBM癌症侵害的细胞可能导致PDE1C失调和结构改变。

基于本公开，提供的实施例的替代组合和变化形式将变得显而易见。不可能为所述的实施方案的所有可能的变化形式提供具体实施例，但是这种组合和变化形式可以是最终提出的权利要求。

Claims (22)

1.治疗选自癌症或肿瘤的病症的方法，包括对有此需要的个体施用药学上可接受的量的PDE1抑制剂。

2.根据权利要求1的方法，其中所述癌症或肿瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1(例如PDE1C)的表达增加。

3.根据上述权利要求任一项的方法，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

4.根据上述权利要求任一项的方法，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

5.抑制肿瘤细胞增殖、迁移和/或侵害的方法，包括对有此需要的个体施用药学上可接受的量的PDE1抑制剂。

6.根据权利要求5的方法，其中所述癌症或肿瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1(例如PDE1C)的表达增加。

7.根据权利要求5-6任一项的方法，其中所述病症为神经胶质瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、白血病或神经母细胞瘤。

8.根据权利要求5-7任一项的方法，其中所述病症为多形性胶质母细胞瘤。

9.治疗神经胶质瘤的方法，包括对有此需要的个体施用药学上可接受的量的PDE1抑制剂。

10.根据权利要求9的方法，其中所述神经胶质瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，受侵害的神经胶质细胞的PDE1(例如PDE1C)的表达增加。

11.根据权利要求9-10任一项的方法，其中所述神经胶质瘤为多形性胶质母细胞瘤。

12.治疗患者癌症的方法，其中所述癌细胞具有升高的PDE1活性或表达，例如其中所述癌细胞展示出相对于相同组织类型的正常细胞，癌细胞增加RNA表达、DNA拷贝数、PDE1结合或PDE1酶活性的一种或多种，该方法包括向所述患者施用有效量的PDE1抑制剂。

13.抑制细胞因子释放综合征的方法，包括向有此需要的患者施用有效量的PDE1抑制剂，例如其中所述患者患有癌症并且接受化疗剂治疗、免疫治疗、基因疗法和/或抗体疗法的一种或多种。

14.根据权利要求13的方法，其中所述患者患有癌症。

15.根据权利要求13-14任一项的方法，其中所述癌症或肿瘤细胞的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1(例如PDE1C)的表达或活性增加。

16.治疗癌症或肿瘤的方法，所述癌症或肿瘤的特征在于组成型活性PDE1，该方法包括对有此需要的患者施用有效量的PDE1抑制剂。

17.根据权利要求16的方法，其中癌或癌细胞中的PDE1已变得独立于Ca2+/钙调蛋白介导。

18.根据权利要求16-17任一项的方法，其中癌或肿瘤细胞中的PDE1酶已经发生结构改变，这种改变通过钙/钙调蛋白改变对PDE1活性的控制。

19.根据权利要求16-18任一项的方法，其中所述癌症或肿瘤的特征在于相对于相同组织类型的正常细胞，癌或肿瘤细胞的PDE1(例如PDE1C)的表达增加。

20.根据上述权利要求任一项的方法，其中PDE1抑制剂为选自如下的化合物：

(A)式I：

其中

(i)R₁为H或C_1-4烷基(例如甲基)；

(ii)R₄为H或C_1-4烷基且R₂和R₃独立地为H或C_1-4烷基(例如R₂和R₃均为甲基或R₂为H，且R₃为异丙基)、芳基、杂芳基、(任选杂)芳基烷氧基或(任选杂)芳基烷基；或

R₂为H，且R₃和R₄一起形成二、三或四亚甲基桥(优选其中R₃和R₄共同具有顺式构型，例如其中携带R₃和R₄的碳分别具有R和S构型)；

(iii)R₅为取代的杂芳基烷基，例如被卤代烷基取代；

或R₅连接至式I的吡唑并部分上的氮之一

并且为式A的部分

其中X、Y和Z独立地为N或C，且R₈、R₉、R₁₁和R₁₂独立地为H或卤素(例如Cl或F)，且R₁₀为卤素、烷基、环烷基、卤代烷基(例如三氟甲基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如任选被卤素取代的吡啶基(例如吡啶-2-基)、或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基))、二唑基、三唑基、四唑基、芳基羰基(例如苯甲酰基)、烷基磺酰基(例如甲基磺酰基)、杂芳基羰基或烷氧基羰基；条件是当X、Y或Z为氮时，R₈、R₉或R₁₀分别不存在；且

(iv)R₆为H、烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、芳基氨基(例如苯基氨基)、杂芳基氨基、N，N-二烷基氨基、N，N-二芳基氨基或N-芳基-N-(芳基烷基)氨基(例如N-苯基-N-(1，1’-联苯-4-基甲基)氨基)；且

(v)n＝0或1；

(vi)当n＝1时，A为-C(R₁₃R₁₄)-，

其中R₁₃和R₁₄独立地为H或C_1-4烷基、芳基、杂芳基、(任选杂)芳基烷氧基或(任选杂)芳基烷基；

该化合物为游离、盐或前药形式，包括其对映体、非对映异构体和外消旋体；

(B)式II：

(i)X为C_1-6亚烷基(例如亚甲基、亚乙基或亚丙-2-炔-1-基)；

(ii)Y为单键、亚炔基(例如一C≡C-.)、亚芳基(例如亚苯基)或亚杂芳基(例如亚吡啶基)；

(iii)Z为H、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如吡啶基，例如吡啶-2-基)、卤素(例如F、Br、Cl)、卤代C1-₆烷基(例如三氟甲基)、-C(O)-R¹、-N(R²)(R³)或任选地包含至少一个选自N或O的原子的C₃-₇环烷基(例如环戊基、环己基、四氢-2H-吡喃-4-基或吗啉基)；

(iv)R¹为C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、-OH或-OC_1-6烷基(例如-OCH₃)；(v)R²和R³独立地为H或C_1-6烷基；

(vi)R⁴和R⁵独立地为H、C_1-6烷基或任选地被一个或多个卤素取代的芳基(例如苯基)(例如氟苯基，例如4-氟苯基)、被一个或多个羟基取代的芳基(例如苯基)(例如羟基苯基，例如4-羟基苯基或2-羟基苯基)或C_1-6烷氧基；

(vii)其中X、Y和Z独立地和任选地被一个或多个卤素(例如F、Cl或Br)、

C_1-6烷基(例如甲基)、卤代C_1-6烷基(例如三氟甲基)取代，例如Z为杂芳基，例如被一个或多个卤素取代的吡啶基(例如6-氟吡啶-2-基、5-氟吡啶-2-基、6-氟吡啶-2-基、3-氟吡啶-2-基、4-氟吡啶-2-基、4，6-二氯吡啶-2-基)、卤代C_1-6烷基(例如5-三氟甲基吡啶-2-基)或C_1-6-烷基(例如5-甲基吡啶-2-基)或Z为芳基，例如苯基，其被一个或多个卤素取代(例如4-氟苯基)，

该化合物为游离、盐或前药的形式；

(C)式III：

其中

(i)R1为H或C_1-4烷基(例如甲基或乙基)；

(ii)R₂和R₃独立地为H或C_1-6烷基(例如甲基或乙基)；

(iii)R₄为H或C_1-4烷基(例如甲基或乙基)；

(iv)R₅为芳基(例如苯基)，其任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自-C(＝O)-C_1-6烷基(例如-C(＝O)-CH3)和C_1-6-羟基烷基(例如1-羟基乙基)；

(v)R₆和R₇独立地为H或芳基(例如苯基)，其任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自C_1-6烷基(例如甲基或乙基)和卤素(例如F或Cl)，例如未取代的苯基或被一个或多个卤素(例如F)取代的苯基或被一个或多个C_1-6烷基和一个或多个卤素取代的苯基或被一个C_1-6烷基和一个卤素取代的苯基，例如4-氟苯基或3，4-二氟苯基或4-氟-3-甲基苯基；且

(vi)n为1、2、3或4，

该化合物为游离或盐的形式；

(D)式IV

其为游离或盐的形式，其中

(vi)R₁为C_1-4烷基(例如甲基或乙基)或-NH(R₂)，其中R₂为苯基，其任选地被卤素(例如氟)取代，例如4-氟苯基；

(vii)X、Y和Z独立地为N或C；

(viii)R₃、R₄和R₅独立地为H或C_1-4烷基(例如甲基)；或R₃为H，且R₄和R₅一起形成三亚甲基桥(优选其中R₄和R₅一起具有顺式构型，例如其中携带R₄和R₅的碳分别具有R和S构型)，

(ix)R₆、R₇和R₈独立地为：

H；

C_1-4烷基(例如甲基)；

被羟基取代的吡啶-2-基；或

-S(O)₂-NH₂；

条件是当X、Y和/或Z为N时，R₆、R₇和/或R₈分别不存在；且当X、Y和Z均为C时，R₆、R₇或R₈的至少一个为-S(O)₂-NH₂或被羟基取代的吡啶-2-基，

该化合物为游离或盐的形式；和

(E)式1a：

其中

(iv)R₂和R₅独立地为H或羟基，且R₃和R₄一起形成三或四亚甲基桥[优选带有携带R₃和R₄的碳，其分别具有R和S构型]；或R₂和R₃各自为甲基，且R₄和R₅各自为H；或R₂、R₄和R₅为H，且R₃为异丙基[优选携带R₃的碳具有R构型]；

(v)R₆为(任选卤素取代的)苯基氨基、(任选卤素取代的)苄基氨基、C_1-4烷基或C_1-4烷基硫；例如，苯基氨基或4-氟苯基氨基；

(vi)R₁₀为C_1-4烷基、甲基羰基、羟基乙基、羧酸、磺酰胺(任选卤素或羟基取代的)苯基、(任选卤素或羟基取代的)吡啶基(例如6-氟吡啶-2-基)或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)；且

X和Y独立地为C或N，

该化合物为游离、药学上可接受的盐或前药形式，包括其对映体、非对映异构体和外消旋体。

21.根据上述权利要求任一项的方法，其中PDE1选自如下的任一种：

其为游离或药学上可接受的盐形式。

22.根据上述权利要求任一项的方法，其中将PDE1抑制剂与抗肿瘤药联合施用。

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