CN112175986A - 黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用 - Google Patents

黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明首次公开了6‑磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用。特别是CsPmR1对侵染瓜类的瓜类疫霉(Phytophthora melonis)具有抗病功能。过量表达CsPmR1基因能够使黄瓜、南瓜子叶对疫病的抗性较对照明显增强，而在黄瓜子叶中瞬时沉默CsPmR1基因则使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显减弱。CsPmR1基因对黄瓜、南瓜等瓜类抗疫病起着非常重要的作用，具有广泛的应用前景。

Description

黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用
技术领域
本发明涉及植物分子生物学与植物遗传工程领域，更具体地，涉及黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用。
背景技术
瓜类疫病是一种世界性卵菌病害，病原菌为瓜类疫霉(Phytophthora melonis)，引起黄瓜、南瓜、冬瓜、苦瓜等瓜类叶、茎、果变褐致死或死苗。该病在我国种植瓜类地区具有发生，在北方以夏秋露地栽培及春季保护地瓜类发生较重；南方则以春季及夏秋高温多湿的季节发生较重。瓜类整个生长期及各个部位均可受害，幼苗被害生长点及嫩茎基部呈水渍状缢缩，萎蔫死亡。成株期茎被害，基部和节部呈水渍状、黑褐色病斑，逐渐软化缢缩，叶片下垂、植株萎蔫、死亡；叶片多在近叶缘处出现暗绿色、边缘不清晰的大型病斑；瓜果在受害处呈现水渍状、近圆形的凹陷斑，迅速腐烂，表面长出白色或灰白色稀疏霉层。一旦发病，化学药剂控制不理想，造成经济损失。控制该病害的最根本途径是培育抗疫病瓜类新品种，要培育高抗疫病瓜类新品种，就需要挖掘瓜类疫病抗性基因并进行应用。
黄瓜CsPmR1基因所编码的蛋白是6-磷酸葡萄糖酸内酯酶，该酶能够催化6-磷酸葡萄糖酸内酯水解成6-磷酸葡萄糖酸。以往关于6-磷酸葡萄糖酸内酯酶参与植物抗病性的研究目前未见报道，仅有1篇关于6-磷酸葡萄糖酸内酯酶参与小麦抗寒的报道。
发明内容
本发明第一个方面的目的，在于提供黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第二个方面的目的，在于提供编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第三个方面的目的，在于提供含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第四个方面的目的，在于提供含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第五个方面的目的，在于提供靶向上调黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第六个方面的目的，在于提供一种增强瓜类植物疫病抗性的试剂或组合物。
本发明第七个方面的目的，在于提供一种防治瓜类植物疫霉菌疫病的药物。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个方面，提供编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
根据本发明第二个方面所述的应用，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明的第三个方面，含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第四个方面，提供含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第五个方面，提供靶向上调黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用。
根据本发明第一至第六个方面任一项所述的应用，所述抗瓜类疫病为疫霉菌引发的疾病，优选为瓜类疫霉菌引发的疾病。
本发明的第六个方面，提供一种增强瓜类植物疫病抗性的试剂或组合物，、所述试剂或组合物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂或组合物。
具体地，Ⅰ中包括SEQ IDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且能提供瓜类抗疫病的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。
本发明的第七个方面，提供一种防治瓜类植物疫霉菌疫病的药物，所述药物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂或组合物。
具体地，Ⅰ中包括SEQ IDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且能提供瓜类抗疫病的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。
根据本发明的地七个方面所述的药物，所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料。
本发明的有益效果是：
本发明首次发现黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1对侵染瓜类的瓜类疫霉(Phytophthora melonis)具有抗病功能。本研究克隆的黄瓜CsPmR1基因能够显著提高瓜类对疫病的抗性，对于将来改良瓜类作物品种抗病性，有效控制瓜类疫病具有重要的意义。过量表达CsPmR1基因的黄瓜子叶、南瓜子叶对疫病的抗性显著增强，而沉默CsPmR1基因的黄瓜子叶对疫病的抗性明显减弱。CsPmR1基因对黄瓜、南瓜等瓜类抗疫病起着非常重要的作用，可以应用在瓜类作物育种抗病性改良方面，有望提高瓜类作物对疫病的抗性，从而达到增产减药的目的，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1 pGWB5载体图谱。
图2 pK7GWIW载体图谱。
图3用注射器向黄瓜子叶中注射农杆菌打孔。
图4黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1蛋白表达量的检测。
图5黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1基因疫病抗性功能鉴定(黄瓜子叶)。A：结果对比图；B：结果统计图。
图6黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1基因疫病抗性功能鉴定(南瓜子叶)。A：结果对比图；B：结果统计图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例结合附图详细说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
实施例1黄瓜CsPS1基因过表达载体的构建
黄瓜CsPmR1基因所编码的蛋白是6-磷酸葡萄糖酸内酯酶，该酶能够催化6-磷酸葡萄糖酸内酯水解成6-磷酸葡萄糖酸。将黄瓜CsPmR1基因CDS全长构建到pGWB5(其图谱如附图1所示)上，得到过量表达载体；将黄瓜基因CDS非保守区段约200bp长度的片段及其互补片段构建到pK7GWIW(其图谱如附图2所示)上，得到基因沉默载体上。
黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列为(240aa)：
MAQTEKRVFDSEEDLAVSLAKYIAHLSDQFAKNKGLFTVVLSGGSLIECLRKLVEPPYVDSIDWSIWHIFWLDESAVPKTHVDSNYKLAYDGFLSKVPIPLGNVYAIDDTLSAEGAAEEYEARLKHLVNSKVIDISAKSGFPKFDLNLLGMGPDAHVASLFPGHPLLKENKKWVTFIKDSPKPPPERITLTFPVINSSDYIALVVPGDAQADAVSIALGGGNPPTADETLPVQRVALKVF(SEQ ID NO.1)。
黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1基因CDS(720bp)序列为：
ATGGCACAAACGGAGAAGAGGGTGTTTGATTCTGAGGAAGATTTGGCTGTTTCTCTCGCCAAATACATAGCCCATTTATCCGATCAATTTGCCAAGAACAAGGGTCTTTTCACCGTGGTTCTCTCTGGTGGATCACTCATTGAATGCTTAAGGAAATTGGTAGAACCACCCTATGTTGATTCCATTGACTGGTCCATATGGCACATATTTTGGCTCGATGAGAGTGCTGTACCCAAAACTCATGTTGACAGCAACTACAAACTCGCTTATGATGGTTTTCTCTCTAAGGTTCCAATTCCCCTTGGTAACGTGTATGCCATTGATGATACTCTATCAGCTGAGGGTGCAGCTGAAGAATATGAAGCACGTTTGAAGCATTTGGTAAATAGCAAGGTGATCGATATCTCAGCGAAAAGCGGGTTCCCGAAATTTGATCTGAATCTTCTTGGAATGGGACCAGATGCGCATGTGGCTTCTTTATTCCCAGGGCATCCCCTTCTGAAAGAGAATAAGAAATGGGTTACCTTCATCAAGGATTCTCCGAAACCACCTCCAGAGAGAATCACTTTAACCTTTCCAGTTATCAACTCGTCGGACTACATTGCTCTTGTGGTGCCTGGTGATGCTCAAGCAGATGCTGTGTCTATTGCATTAGGAGGTGGAAATCCTCCCACTGCCGACGAAACTTTACCTGTTCAAAGGGTTGCTCTGAAGGTCTTC(SEQ ID NO.2)。
黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1全长基因序列为：
ATGGCACAAACGGAGAAGAGGGTGTTTGATTCTGAGGAAGATTTGGCTGTTTCTCTCGCCAAATACATAGCCCATTTATCCGATCAATTTGCCAAGAACAAGGGTCTTTTCACCGTGGTTCTCTCTGGTGGATCACTCATTGAATGCTTAAGGAAATTGGTAGAACCACCCTATGTTGATTCCATTGACTGGTCCATATGGCACATATTTTGGCTCGATGAGAGTGCTGTACCCAAAACTCATGTTGACAGCAACTACAAACTCGCTTATGATGGTTTTCTCTCTAAGGTTCCAATTCCCCTTGGTAACGTGTATGCCATTGATGATACTCTATCAGCTGAGGGTGCAGCTGAAGAATATGAAGCACGTTTGAAGCATTTGGTAAATAGCAAGGTGATCGATATCTCAGCGAAAAGCGGGTTCCCGAAATTTGATCTGAATCTTCTTGGAATGGGACCAGATGCGCATGTGGCTTCTTTATTCCCAGGGCATCCCCTTCTGAAAGAGAATAAGAAATGGGTTACCTTCATCAAGGATTCTCCGAAACCACCTCCAGAGAGAATCACTTTAACCTTTCCAGTTATCAACTCGTCGGACTACATTGCTCTTGTGGTGCCTGGTGATGCTCAAGCAGATGCTGTGTCTATTGCATTAGGAGGTGGAAATCCTCCCACTGCCGACGAAACTTTACCTGTTCAAAGGGTTGCTCTGAAGGTCTTCTGACTTGGTTCTTGGACAAGGATGCTGCTTCCAAGCTTTAATGCAAAAAAGAGATATGTCCATCACCTTTTATCTAATTTAATTTAAACTGATCTTAGGTATCTCCCTCATCCATGGCGAGATGTGCTCACCCTATGCATTTGAATAAGAGTTTCTGTACCAGATTATGTTCACTTATGAGTAGAAGTAAACGAATTTAGTTTGATGTAGGACATCATCTCGAAATAGAAAGTAGTGCATGATAGAAGTCTTATATTTTCTATCATGATCACATCTTCTTTAGAATGTCCTTTCAAGTCCATAGAAAAGTGTATTTGGGGGCTTATTCGGAATGATATTCCGAGTGTTTTGAAAATGTTTAAGTGGAAAAAAAAGTTTTCAGCACAACTATTTTCGCACTTGAATTGCCATTATTAGTTCATAATCCTTCCTCTTTTTTTCTTTTAATGTAGAGAAGAAGTGCATGGACATGTTCAGTGTTGAAATGATGGAATGAGTTGGGTGTGACAAAGACATTGTTAGATATGCAAATTAAATTTATAGTTGTTTTTG(SEQ IDNO.3)。
黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1基因CDS非保守区段200bp长度的片段如下所示：
ATTTGATCTGAATCTTCTTGGAATGGGACCAGATGCGCATGTGGCTTCTTTATTCCCAGGGCATCCCCTTCTGAAAGAGAATAAGAAATGGGTTACCTTCATCAAGGATTCTCCGAAACCACCTCCAGAGAGAATCACTTTAACCTTTCCAGTTATCAACTCGTCGGACTACATTGCTCTTGTGGTGCCTGGTGATGCTC(SEQ ID NO.4)。
实施例2构建瞬时过量表达/基因沉默的黄瓜子叶模型
(1)将实施例1中过量表达载体和沉默载体分别转化农杆菌GV3101，在相应抗性的培养基上倒置培养48-72h。
(2)挑取单克隆加入到4mL含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌24-36h。
(3)按1:100比例加入新鲜含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌到OD600值约3.0。
(4)3000rpm离心5分钟收集菌体，用悬浮液(10mM MES,10mM MgCl2)重悬菌体，并调整OD600值到0.4左右，加入200mM乙酰丁香酮。
(5)室温静置3-5h。
(6)用注射器针头在黄瓜子叶主叶脉两侧各扎一个针孔(具体操作见图3)。
(7)用1mL注射器吸取静置过后的菌液，注射器对准背面的针孔，正面用手堵住，注射进菌液。
(8)注射后的黄瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天。
通过Western Blot检测CsPmR1基因瞬时过量表达、沉默及野生型对照的黄瓜离体子叶中检测CsPmR1蛋白的表达量。
具体步骤如下：
(1)将收集的黄瓜子叶液氮速冻后研磨加入蛋白提取液(50mM Tris-HCl pH 7.5,150mM NaCl,0.1％Triton X-100,0.2％NP-40,1mM PMSF,1╳plant protease inhibitorcocktail)混匀置于冰上30分钟。
(2)4℃14000rpm离心10min，收集上清液80uL加入20uL蛋白上样缓冲液均匀混合后沸水浴10分钟。
(3)取20uL样品在SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离。
(4)将电泳后的蛋白样品转到PVDF膜上，用5％PBST牛奶孵育封膜。
(5)在封闭液中加入一抗(CsPmR1单克隆抗体)孵育2小时，用PBST洗膜，每次5min，洗4次。
(6)随后加入二抗，孵育30min，用PBST洗膜，每次5min，洗4次，
(7)对膜进行扫描显色，结果见附图4。
结果表明CsPmR1基因瞬时过量表达的黄瓜子叶中CsPmR1蛋白表达量显著高于野生型对照，而CsPmR1基因沉默的黄瓜子叶中CsPmR1蛋白表达量明显小于野生型对照。说明CsPmR1瞬时过量表达的黄瓜子叶模型以及CsPmR1基因沉默的黄瓜子叶模型均构建成功。
实施例3黄瓜子叶抗病实验
对实施例2中构建成功的CsPmR1瞬时过量表达的黄瓜子叶模型、CsPmR1基因沉默的黄瓜子叶模型以及野生型的黄瓜子叶，将注射后的黄瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天后将黄瓜子叶离体，并接种瓜类疫霉菌后将黄瓜子叶于28℃培养皿中，黑暗培养24h。
依据不同处理的黄瓜离体子叶病斑大小来判断目的基因对疫病的抗性功能，结果如附图5所示。
结果显示在黄瓜子叶中瞬时过量表达CsPmR1基因能够使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显增强，而在黄瓜子叶中瞬时沉默CsPmR1基因则使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显减弱。对每个处理的50个叶片病斑面积统计取均数(利用photoshop的像素数代替面积)，随后，利用过量表达、沉默、对照的叶面积进行显著性分析和比较。结果显示，过量表达CsPS1基因叶片的病斑面积较对照显著减小，而沉默CsPmR1基因基因叶片的病斑面积显著增大(图5)。
实施例4南瓜子叶抗病实验
采用与实施例2中方法相同的操作步骤，同样构建了CsPS1瞬时过量表达以及CsPS1基因沉默的南瓜子叶。将注射后的南瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天后将南瓜子叶离体，并接种疫霉菌后将黄瓜子叶于28℃培养皿中，黑暗培养24h。
依据不同处理的黄瓜离体子叶病斑大小来判断目的基因对疫病的抗性功能，对每个处理的50个叶片病斑面积统计取均数(利用photoshop的像素数代替面积)，随后，利用过量表达、对照的叶面积进行显著性分析和比较，结果如附图6所示。结果显示：瞬时过量表达CsPmR1基因叶片的病斑面积较对照显著减小，抗病性明显增强。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省农业科学院蔬菜研究所
<120> 黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 240
<212> PRT
<213> 黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1
<400> 1
Met Ala Gln Thr Glu Lys Arg Val Phe Asp Ser Glu Glu Asp Leu Ala
1 5 10 15
Val Ser Leu Ala Lys Tyr Ile Ala His Leu Ser Asp Gln Phe Ala Lys
20 25 30
Asn Lys Gly Leu Phe Thr Val Val Leu Ser Gly Gly Ser Leu Ile Glu
35 40 45
Cys Leu Arg Lys Leu Val Glu Pro Pro Tyr Val Asp Ser Ile Asp Trp
50 55 60
Ser Ile Trp His Ile Phe Trp Leu Asp Glu Ser Ala Val Pro Lys Thr
65 70 75 80
His Val Asp Ser Asn Tyr Lys Leu Ala Tyr Asp Gly Phe Leu Ser Lys
85 90 95
Val Pro Ile Pro Leu Gly Asn Val Tyr Ala Ile Asp Asp Thr Leu Ser
100 105 110
Ala Glu Gly Ala Ala Glu Glu Tyr Glu Ala Arg Leu Lys His Leu Val
115 120 125
Asn Ser Lys Val Ile Asp Ile Ser Ala Lys Ser Gly Phe Pro Lys Phe
130 135 140
Asp Leu Asn Leu Leu Gly Met Gly Pro Asp Ala His Val Ala Ser Leu
145 150 155 160
Phe Pro Gly His Pro Leu Leu Lys Glu Asn Lys Lys Trp Val Thr Phe
165 170 175
Ile Lys Asp Ser Pro Lys Pro Pro Pro Glu Arg Ile Thr Leu Thr Phe
180 185 190
Pro Val Ile Asn Ser Ser Asp Tyr Ile Ala Leu Val Val Pro Gly Asp
195 200 205
Ala Gln Ala Asp Ala Val Ser Ile Ala Leu Gly Gly Gly Asn Pro Pro
210 215 220
Thr Ala Asp Glu Thr Leu Pro Val Gln Arg Val Ala Leu Lys Val Phe
225 230 235 240
<210> 2
<211> 720
<212> DNA
<213> 黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1基因CDS
<400> 2
atggcacaaa cggagaagag ggtgtttgat tctgaggaag atttggctgt ttctctcgcc 60
aaatacatag cccatttatc cgatcaattt gccaagaaca agggtctttt caccgtggtt 120
ctctctggtg gatcactcat tgaatgctta aggaaattgg tagaaccacc ctatgttgat 180
tccattgact ggtccatatg gcacatattt tggctcgatg agagtgctgt acccaaaact 240
catgttgaca gcaactacaa actcgcttat gatggttttc tctctaaggt tccaattccc 300
cttggtaacg tgtatgccat tgatgatact ctatcagctg agggtgcagc tgaagaatat 360
gaagcacgtt tgaagcattt ggtaaatagc aaggtgatcg atatctcagc gaaaagcggg 420
ttcccgaaat ttgatctgaa tcttcttgga atgggaccag atgcgcatgt ggcttcttta 480
ttcccagggc atccccttct gaaagagaat aagaaatggg ttaccttcat caaggattct 540
ccgaaaccac ctccagagag aatcacttta acctttccag ttatcaactc gtcggactac 600
attgctcttg tggtgcctgg tgatgctcaa gcagatgctg tgtctattgc attaggaggt 660
ggaaatcctc ccactgccga cgaaacttta cctgttcaaa gggttgctct gaaggtcttc 720
<210> 3
<211> 1272
<212> DNA
<213> 黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1全长基因序列
<400> 3
atggcacaaa cggagaagag ggtgtttgat tctgaggaag atttggctgt ttctctcgcc 60
aaatacatag cccatttatc cgatcaattt gccaagaaca agggtctttt caccgtggtt 120
ctctctggtg gatcactcat tgaatgctta aggaaattgg tagaaccacc ctatgttgat 180
tccattgact ggtccatatg gcacatattt tggctcgatg agagtgctgt acccaaaact 240
catgttgaca gcaactacaa actcgcttat gatggttttc tctctaaggt tccaattccc 300
cttggtaacg tgtatgccat tgatgatact ctatcagctg agggtgcagc tgaagaatat 360
gaagcacgtt tgaagcattt ggtaaatagc aaggtgatcg atatctcagc gaaaagcggg 420
ttcccgaaat ttgatctgaa tcttcttgga atgggaccag atgcgcatgt ggcttcttta 480
ttcccagggc atccccttct gaaagagaat aagaaatggg ttaccttcat caaggattct 540
ccgaaaccac ctccagagag aatcacttta acctttccag ttatcaactc gtcggactac 600
attgctcttg tggtgcctgg tgatgctcaa gcagatgctg tgtctattgc attaggaggt 660
ggaaatcctc ccactgccga cgaaacttta cctgttcaaa gggttgctct gaaggtcttc 720
tgacttggtt cttggacaag gatgctgctt ccaagcttta atgcaaaaaa gagatatgtc 780
catcaccttt tatctaattt aatttaaact gatcttaggt atctccctca tccatggcga 840
gatgtgctca ccctatgcat ttgaataaga gtttctgtac cagattatgt tcacttatga 900
gtagaagtaa acgaatttag tttgatgtag gacatcatct cgaaatagaa agtagtgcat 960
gatagaagtc ttatattttc tatcatgatc acatcttctt tagaatgtcc tttcaagtcc 1020
atagaaaagt gtatttgggg gcttattcgg aatgatattc cgagtgtttt gaaaatgttt 1080
aagtggaaaa aaaagttttc agcacaacta ttttcgcact tgaattgcca ttattagttc 1140
ataatccttc ctcttttttt cttttaatgt agagaagaag tgcatggaca tgttcagtgt 1200
tgaaatgatg gaatgagttg ggtgtgacaa agacattgtt agatatgcaa attaaattta 1260
tagttgtttt tg 1272
<210> 4
<211> 200
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
atttgatctg aatcttcttg gaatgggacc agatgcgcat gtggcttctt tattcccagg 60
gcatcccctt ctgaaagaga ataagaaatg ggttaccttc atcaaggatt ctccgaaacc 120
acctccagag agaatcactt taacctttcc agttatcaac tcgtcggact acattgctct 180
tgtggtgcct ggtgatgctc 200

Claims (10)

1.黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1在抗瓜类疫病中的应用，所述6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用，所述6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.含有编码黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
6.靶向上调黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用。
7.根据权利要求1至6任一项所述的应用，其特征在于，所述抗瓜类疫病为疫霉菌引发的疾病，优选为瓜类疫霉菌引发的疾病。
8.一种增强瓜类植物疫病抗性的试剂或组合物，其特征在于，所述试剂或组合物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂或组合物。
9.一种防治瓜类植物疫霉菌疫病的药物，其特征在于，所述药物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1的表达量或增强黄瓜6-磷酸葡萄糖酸内酯酶CsPmR1活性的试剂或组合物。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料。
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