CN112169717A - 一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用，所述方法包括步骤：将氯化血红素溶液与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂混合，反应使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液；向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂，混合使所述丙烯类单体与氯化血红素大单体发生自由基聚合反应，制得所述微胶囊化氯化血红素。本发明通过在分子层次上对所述氯化血红素进行凝胶化接枝和包覆，制得亲水性的微胶囊化氯化血红素，所述微胶囊化氯化血红素在酸性或者中性溶液中不发生聚集，从而可增加氯化血红素与双氧水的接触概率，进而保持其高度的活性和稳定性。

Description

一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及过氧化物模拟酶领域，特别涉及一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用。
背景技术
氯化血红素是天然血红素的体外纯化形式，既可以从动物血液中分离、提纯出来，也可以通过原卟啉IX与铁(II)络合形成。氯化血红素(Hemin)是血红素的氯化物，仍然具有较好的催化氧化活性，且环境适应性更好，被认为是一种具有应用潜力的过氧化物模拟酶。例如，Hemin以过氧化氢(H2O2)为作用底物，使其转化为羟基自由基(·OH)，·OH具有较强的氧化能力，能够进一步氧化染料或酚类衍生物等，达到去除废水中有机物污染物的目的。
Hemin催化体系对反应条件有着苛刻的要求。例如，Hemin在酸性或者中性溶液中容易聚集形成二聚体，催化活性急剧衰减；而且Hemin分子很小，难以回收再利用。
因此，现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的不足，提供一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用，旨在解决现有氯化血红素容易聚集形成无活性的二聚体以及稳定性较差的问题。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，包括步骤：
将氯化血红素溶液与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂混合，反应使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液；
向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂，混合使所述丙烯类单体与氯化血红素大单体发生自由基聚合反应，制得所述微胶囊化氯化血红素。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述含有双键及伯胺的修饰剂为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐、丙烯酰胺类单体或丙烯酸酯类单体中的一种。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述活化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，所述第一稳定剂为N-羟基丁二酰亚胺或N-羟基硫代琥珀酰亚胺。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述氯化血红素与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂之间的摩尔比为1:1～10:1～10:1～10。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述丙烯类单体为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐、丙烯酰胺、羧酸甜菜碱丙烯酰胺或丙烯酸中的一种。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述引发剂为过硫酸盐、偶氮二异丁腈、过氧化二酰铵或双氧水；所述交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺；所述第二稳定剂为四甲基乙二胺。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，所述丙烯类单体与交联剂的质量比为10:0.5～5。
所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其中，向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂之前，还包括步骤：
按照氯化血红素与牛血清蛋白摩尔比为100:1～10的比例，向所述氯化血红素大单体溶液中加入牛血清蛋白并混合，备用。
一种微胶囊化氯化血红素，其中，采用本发明任一所述的制备方法制得。
一种微胶囊化氯化血红素的应用，其中，将本发明任一制备方法制得的微胶囊化氯化血红素用作过氧化物模拟酶。
有益效果：与现有技术相比，本发明提出了一种微胶囊化氯化血红素的制备方法，利用生物医用高分子，在分子层次、纳米尺度上对Hemin进行微胶囊化包裹，其胶囊外壳在纳米尺度范围内，使Hemin在弱酸或中性水溶液中也能很好的溶解与分散，阻止聚集体的形成，提高Hemin的稳定性，可满足长期存放的要求。
附图说明
图1为本发明提供的一种微胶囊化氯化血红素的制备方法较佳实施例的流程图。
图2为本发明氯化血红素的羧基活化过程化学反应示意图。
图3为本发明交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺的两个氨基与偶氮染料的磺酸基之间形成两个氢键相互作用的示意图。
图4为合成产物Hemin微胶囊化的粒径分布图；其中，纵坐标为强度(Intensity)，％；横坐标为流体力学半径(radius)，nm。
图5为本发明中微胶囊化氯化血红素的APMA末端的伯胺与Hemin中的铁原子形成配位结构的示意图。
图6为合成产物Hemin微胶囊化活性检测效果图，图中为Hemin以及Hemin微胶囊化对染料的降解率，横坐标为样品名称，纵坐标为降解率％。
图7为合成产物Hemin微胶囊化活性检测效果图，图中为Hemin以及Hemin微胶囊化对邻苯二酚的降解率，横坐标为反应时间，纵坐标为降解率％。
具体实施方式
本发明提供一种微胶囊化氯化血红素及其制备方法与应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本技术领域技术人员可以理解，除非特意声明，这里使用的单数形式“一”、“一个”、“所述”和“该”也可包括复数形式。应该进一步理解的是，本发明的说明书中使用的措辞“包括”是指存在所述特征、整数、步骤、操作、元件和/或组件，但是并不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元件、组件和/或它们的组。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
下面结合附图，通过对实施例的描述，对发明内容作进一步说明。
请参阅图1，图1为本发明提供的一种微胶囊化氯化血红素的制备方法较佳实施例的流程图，如图所示，其包括步骤：
S10、将氯化血红素溶液与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂混合，反应使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液；
S20、向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂，混合使所述丙烯类单体与氯化血红素大单体发生自由基聚合反应，制得所述微胶囊化氯化血红素。
按照本实施例提供的方法对氯化血红素进行化学修饰制得的微胶囊化氯化血红素可以大大提高氯化血红素的稳定性，并保持其单体的形式从而保持其较高的活性。具体来讲，由于氯化血红素比较疏水，其在酸性或者中性溶液中容易聚集，从而形成无活性的二聚体；而本实施例在不影响氯化血红素溶解性的前提下，首先通过在氯化血红素分子的羧基上引入双键，并进一步与亲水的丙烯类单体进行聚合，制备微胶囊化的氯化血红素，提高氯化血红素的稳定性；本实施例通过在分子层次上对所述氯化血红素进行凝胶化接枝和包覆，制得亲水性的微胶囊化氯化血红素，所述微胶囊化氯化血红素在酸性或者中性溶液中不发生聚集，从而可增加氯化血红素与双氧水的接触概率，进而保持其高度的活性和稳定性。
在一些实施方式中，由于氯化血红素的水溶性较差，因此本实施例将所述氯化血红素溶解在0.01mol/L～0.1mol/L的氢氧化钠溶液中，得到所述氯化血红素溶液。
在一些实施方式中，所述含有双键及伯胺的修饰剂为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐(AMPA)、丙烯酰胺类单体或丙烯酸酯类单体中的一种，但不限于此；所述活化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)，但不限于此；所述第一稳定剂为N-羟基丁二酰亚胺或N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)，但不限于此。
在一些具体的实施方式中，将氯化血红素溶解在0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成2mg/mL的氯化血红素溶液；接着按照氯化血红素与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂之间的摩尔比为1:1～10:1～10:1～10的比例，将氯化血红素溶液与EDC、Sulfo-NHS和APMA加入到微量反应瓶中，室温反应1h，使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液。在本实施例中，如图2中的反应式所示，所述EDC作为活化剂可先取代所述氯化血红素中羧基上的氢，所述Sulfo-NHS作为第一稳定剂再替换掉所述活化剂与所述氯化血红素中羧基中的单键氧原子结合，使得氯化血红素中的羧基活化，从而可与所述APMA的氨基发生缩合反应，进而使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得所述氯化血红素大单体溶液。
在一些实施方式中，按照氯化血红素与牛血清蛋白摩尔比为100:1-10的比例，向所述氯化血红素大单体溶液中加入牛血清蛋白并混合，所述牛血清蛋白作为成核剂，可使得所述氯化血红素大单体形成均匀的颗粒。
在一些实施方式中，所述丙烯类单体为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐、丙烯酰胺、羧酸甜菜碱丙烯酰胺或丙烯酸中的一种，但不限于此；所述引发剂为过硫酸盐(APS)、偶氮二异丁腈、过氧化二酰铵或双氧水，但不限于此；所述交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)，但不限于此；所述第二稳定剂为四甲基乙二胺(TEMED)，但不限于此。
在一些具体的实施方式中，先将丙烯酸、丙烯酰胺或羧酸甜菜碱丙烯酰胺中的一种和N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶于磷酸缓冲溶液中，得到第一溶液；将引发剂过硫酸铵溶于水得到第二溶液；将所述第一溶液、第二溶液以及第二稳定剂四甲基乙二胺加入到所述氯化血红素大单体溶液中，搅拌反应至少2h，使得所述丙烯酸、丙烯酰胺或羧酸甜菜碱丙烯酰胺中的一种与氯化血红素大单体发生自由基聚合反应，制得所述微胶囊化氯化血红素。
在一些具体的实施方式中，为确保丙烯类单体与所述氯化血红素大单体充分地发生自由基聚合反应，从而生成微胶囊化的氯化血红素，所述丙烯类单体与所述氯化血红素大单体的质量比为20:1。
在一些实施方式中，本实施通过在氯化血红素大单体与丙烯类单体发生自由基聚合反应的过程中，加入了所述N,N'-亚甲基双丙烯酰胺作为交联剂，所述交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰(MBA)的化学结构式如下所示：
Figure BDA0002710656420000041
含有两个双键的MBA可与单体进行自由基共聚反应，并在微观尺度形成高分子凝胶网络；除此之外，本实施例通过计算机模拟研究发现，如图3所示，所述交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺的两个氨基能够与偶氮染料的磺酸基之间形成两个强烈的氢键相互作用，从而起到了在凝胶内部富集染料的功效，增加了羟基自由基攻击染料的概率，能够在在自由基粹灭之前把染料氧化去除，提高了微胶囊化氯化血红素对于偶氮染料的催化效率。因此，通过本实施例制备的微胶囊化氯化血红素可用于降解工业废水，尤其是含有磺酸基的偶氮染料的废水。
在一些具体的实施方式中，所述丙烯类单体与交联剂的质量比为10:0.5～5。
在一些实施方式中，还提供一种微胶囊化氯化血红素，其中，采用本发明任一所述的制备方法制得。
本发明通过在氯化血红素分子的羧基上引入双键，并进一步与亲水的丙烯类单体进行聚合，制备微胶囊化的氯化血红素，提高氯化血红素的稳定性；本实施例通过在分子层次上对所述氯化血红素进行凝胶化接枝和包覆，制得亲水性的微胶囊化氯化血红素，所述微胶囊化氯化血红素在弱酸或中性水溶液中不发生聚集，增加氯化血红素与双氧水的接触概率，进而保持其高度的活性和稳定性。
在一些实施方式中，还提供一种微胶囊化氯化血红素的应用，其中，将本发明任一制备方法制得的微胶囊化氯化血红素用作过氧化物模拟酶。
下面通过具体实施例对本发明一种微胶囊化氯化血红素的制备方法及其性能做进一步的解释说明：
实施例1
Hemin羧基接枝双键，羧酸甜菜碱丙烯酰胺(CBAA)单体微胶囊化。
(1)将Hemin溶解在0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成2mg/mL。
(2)Hemin与EDC、Sulfo-NHS、APMA的摩尔比分别按照1:5.3、1:0.53、1:10的量加入微量反应瓶中，将体系的pH维持在8～9之间；采用去离子水配制成浓度为20～200mM的EDC/Sulfo-NHS对Hemin的羧基活化，羧基活化后的Hemin与APMA发生在室温反应1h，使Hemin的表面上接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液。
(3)CBAA单体与MBA交联剂的比例为5:1，将单体、交联剂、引发剂和稳定剂加入到(2)中，混合均匀，反应2～5h，整个过程需要脱氧，制成微胶囊化的Hemin，即CBAA-Hemin溶液。
(4)上述步骤(2)的体积为3.15mL，EDC/Sulfo-NHS为200μL，APMA为300μL，单体100mg和交联剂20mg配成1mL，引发剂8mg/mL、1.35mL，稳定剂75μL，依次加入。
对初始Hemin以及本实施例制得的微胶囊化Hemin的粒径进行测量，结果如图4所示，在中性溶液条件下，所述Hemin强烈聚集，形成较大粒径的聚集体，所述微胶囊化Hemin分散均匀，其粒径较小，说明微胶囊化Hemin在中性溶液条件下的分散性较佳。
从图中可以看出，微胶囊化的Hemin的粒径大于初始Hemin的粒径。
实施例2
Hemin羧基接枝双键，丙烯酰胺(AAm)单体微胶囊化。
(1)将Hemin溶解在0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成2mg/mL。
(2)Hemin与EDC、Sulfo-NHS、APMA的摩尔比分别按照1:5.3、1:0.53、1:10的量加入微量反应瓶中，将体系的pH维持在8；采用去离子水配制成浓度为100mM的EDC/Sulfo-NHS对Hemin的羧基活化，羧基活化后的Hemin与APMA发生在室温反应1h，使Hemin的表面上接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液。
(3)AAm单体与MBA交联剂的比例为10:1，将单体、交联剂、引发剂和稳定剂加入到(2)中，混合均匀，反应4h，整个过程需要脱氧，制成微胶囊化的Hemin，即AAm-Hemin溶液。
(4)上述步骤(2)的体积为3.15mL，EDC/Sulfo-NHS为200μL，APMA为300μL，单体100mg和交联剂20mg配成1mL，引发剂8mg/mL、1.35mL，稳定剂75μL，依次加入。
实施例3
Hemin羧基接枝双键，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐(APMA)单体微胶囊化。
(1)将Hemin溶解在0.1mol/L的氢氧化钠溶液中配制成2mg/mL。
(2)Hemin与EDC、Sulfo-NHS、APMA的摩尔比分别按照1:5.3、1:0.53、1:10的量加入微量反应瓶中，将体系的pH维持在9之间；采用去离子水配制成浓度为200mM的EDC/Sulfo-NHS对Hemin的羧基活化，羧基活化后的Hemin与APMA发生在室温反应1h，使Hemin的表面上接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液。
(3)APMA单体与MBA交联剂的比例为5:1，将单体、交联剂、引发剂和稳定剂加入到(2)中，混合均匀，反应2h，整个过程需要脱氧，制成微胶囊化的Hemin，即APMA-Hemin溶液。
在本实施例中，所述APMA可以与Hemin羧基反应，使得Hemin丙烯酰化，过量的AMPA还可作为共聚单体，参与自由基聚合反应，成为纳米凝胶的一部分。本实施例中，如图5所示，所述APMA末端的伯胺可以与Hemin中的铁原子形成配位，类似于辣根过氧化物酶中活性位点铁原子与组氨酸形成的配位形式，这种仿生效应也能够明显提升Hemin的催化氧化效果。
(4)上述步骤(2)的体积为3.15mL，EDC/Sulfo-NHS为200μL，APMA为300μL，单体100mg和交联剂20mg配成1mL，引发剂8mg/mL、1.35mL，稳定剂75μL，依次加入。
实施例4
Hemin活性测定：靛蓝胭脂红法自氧化法(610nm)
(1)溶液配制
①Na2HPO4溶液(0.2mol/L)：71.6g Na2HPO4-12H2O(磷酸氢二钠，十二水，M.W.358.1)+1000mL蒸馏水。
②NaH2PO4溶液(0.2mol/L)：取31.2g NaH2PO4-2H2O(磷酸二氢钠，二水，M.W.156)+1000mL蒸馏水。
③PB缓冲液(0.1mol/L，pH7.4)：取19mL,0.2mol/L的Na2HPO4溶液和81mL,0.2mol/L的NaH2PO4，加100mL的蒸馏水稀释到200mL，即可。
④0.3％的H2O2溶液：取100μL买回来的商用H2O2溶液，加9.9mL超纯水稀释到10mL，即可。用棕色瓶保存在冰箱。
⑤150mmol/L靛蓝胭脂红溶液(溶于0.1mol/L的PBS)，称取7mg的靛蓝胭脂红染料，溶于10mL,0.1mol/L的PBS中，即得150mmol/L靛蓝胭脂红溶液(当天有效)。
(2)测试液
靛蓝胭脂红溶液：取4500μL PBS缓冲液加入到微量反应瓶中，再加500μL靛蓝胭脂红溶液，迅速混合后，立即取200μL于96孔板，在610nm处测终点动力学，每隔1min读数一次A值(610nm)，至10min时为止。(空白参比：PBS缓冲液)。
ΔA＝A610 nm,10min–A610 nm,1min。由于ΔA值反映了生成·OH的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0降解率＝(ΔA0-ΔA样)/ΔA0*100。
(3)样品溶液：取xμL实施例1-3制得的微胶囊化Hemin样品溶液以及初始Hemin样品溶液(包括初始Hemin溶液，APMA-Hemin溶液，CBAA-Hemin溶液以及AAm-Hemin溶液)分别加入到微量反应瓶中，再加(4121-x)μL PBS缓冲液，再加500μL靛蓝胭脂红溶液，379μL,0.3％的H2O2，在磁力搅拌器，600r/min下迅速混合，取200μL于96孔板，在610nm处测终点动力学，每隔1min读数一次A值(610nm)，至10min时为止，测得结果如图6所示。从图6中可以看出，初始Hemin对染料的降解率为8.2％，APMA-Hemin对染料的降解率为81.4％，CBAA-Hemin对染料的降解率为79.6％，AAm-Hemin对染料的降解率为79.55，说明通过在分子层次上对所述氯化血红素进行微胶囊化处理，制得亲水性的微胶囊化氯化血红素，所述微胶囊化氯化血红素在酸性或者中性溶液中不发生聚集，从而可增加氯化血红素与双氧水的接触概率，进而保持其高度的活性和稳定性。
(4)注意事项
由于靛蓝胭脂红自氧化反应对pH值较敏感，在碱性条件下由蓝色变为淡黄色；靛蓝胭脂红在自然状态下也会自己降解，因此，实验过程中，要严格控制pH，靛蓝胭脂红溶液要当天配置。缓冲液宜多，反应体系为5-10mL，这样数据才比较稳定。
实施例5
Hemin活性测定方法：邻苯二酚法自氧化法(505nm)
(1)溶液配制
①4mmol/L邻苯二酚溶液(溶于超纯水中)，称取8.8mg的邻苯二酚，溶于20mL的超纯水中，即得4mmol/L邻苯二酚溶液。(一个星期内有效)。
②0.3％的H2O2溶液：取100μL买回来的商用H2O2溶液，加9.9mL超纯水稀释到10mL，即可。用棕色瓶保存在冰箱。
③0.125mol/L碳酸氢钠溶液：准确称取525mg碳酸氢钠，定容到50mL容量瓶中，即可。
④铁氰化钾溶液：称取137.3mg铁氰化钾溶解于0.125mol/L的碳酸氢钠溶液中，并定容于10ml棕色瓶中，放置冰箱待用。
⑤4-氨基替比林溶液：称取21.2mg的4-氨基替比林溶解于0.125mol/L的碳酸氢钠溶液，并定容于10ml棕色瓶中，放置冰箱待用。
(2)测试液
邻苯二酚溶液：取2.5mL,4mmoL/L邻苯二酚溶液加入到微量反应瓶中，再加入2.5mL超纯水，在磁力搅拌器，600r/min下迅速混合，反应15、30、60、75min后，取100μL于96孔板，然后加入50μL的4-氨基安替比林溶液，再加入50μL的铁氰化钾溶液，静置10分钟后放入到酶标仪中检测波长505nm处得到的吸光值OD505的吸收。(空白参比：超纯水)。
ΔA＝A505 nm,15min–A505 nm,30min–A505 nm,60min–A505 nm,75min–A505nm。
由于ΔA值反映了生成·OH的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0；降解率＝(ΔA0-ΔA样)/ΔA0*100。
(3)样品溶液：取2.5mL邻苯二酚溶液加入到微量反应瓶中，再加252.5μL,0.3％的H2O2和579.6μL,862.65μmol/L的AAm-Hemin溶液。在磁力搅拌器，600r/min下迅速混合，取100μL于96孔板，然后加入50μL的4-氨基安替比林溶液，再加入50μL的铁氰化钾溶液，静置10分钟后放入到酶标仪中检测波长505nm处得到的吸光值OD505的吸收。结果如图7所示，初始Hemin对邻苯二酚的降解率2％左右，而AAm-Hemin溶液对邻苯二酚的降解率为45％左右。这说明通过在分子层次上对所述氯化血红素进行微胶囊化处理，制得亲水性的微胶囊化氯化血红素，所述微胶囊化氯化血红素在酸性或者中性溶液中不发生聚集，从而可增加氯化血红素与双氧水的接触概率，进而保持其高度的活性和稳定性。
(4)注意事项
在96孔板中刚加入4-氨基安替比林溶液和铁氰化钾溶液时，由于体积小，混合显色需要一定的时间，刚开始显色还不太稳定，在OD505nm处会有一定的波动，放置于5-10分钟显色已稳定，在OD505nm处的值波动不明显，因此在实验过程中，要控制加入4-氨基安替比林溶液和铁氰化钾溶液后反应的时间为5-10分钟较好，这样数据才比较稳定。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，包括步骤：
将氯化血红素溶液与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂混合，反应使得所述氯化血红素表面接枝含有双键的大单体，制得氯化血红素大单体溶液；
向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂，混合使所述丙烯类单体与氯化血红素大单体发生自由基聚合反应，制得所述微胶囊化氯化血红素。
2.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述含有双键及伯胺的修饰剂为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐、丙烯酰胺类单体或丙烯酸酯类单体中的一种。
3.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述活化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，所述第一稳定剂为N-羟基丁二酰亚胺或N-羟基硫代琥珀酰亚胺。
4.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述氯化血红素与活化剂、第一稳定剂以及含有双键及伯胺的修饰剂之间的摩尔比为1:1～10:1～10:1～10。
5.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述丙烯类单体为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐、丙烯酰胺、羧酸甜菜碱丙烯酰胺或丙烯酸中的一种。
6.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述引发剂为过硫酸盐、偶氮二异丁腈、过氧化二酰铵或双氧水；所述交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺；所述第二稳定剂为四甲基乙二胺。
7.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，所述丙烯类单体与交联剂的质量比为10:0.5～5。
8.根据权利要求1所述微胶囊化氯化血红素的制备方法，其特征在于，向所述氯化血红素大单体溶液中加入丙烯类单体、引发剂、交联剂以及第二稳定剂之前，还包括步骤：
按照氯化血红素与牛血清蛋白摩尔比为100:1～10的比例，向所述氯化血红素大单体溶液中加入牛血清蛋白并混合，备用。
9.一种微胶囊化氯化血红素，其特征在于，采用权利要求1-9任一所述的制备方法制得。
10.一种微胶囊化氯化血红素的应用，其特征在于，将权利要求1-9任一制备方法制得的微胶囊化氯化血红素用作过氧化物模拟酶。
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