CN112137920A - 一种酵母菌发酵溶胞产物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酵母菌发酵溶胞产物及其制备方法与应用，属于日用化妆品领域。所述酵母菌发酵溶胞产物的提取方法包括酵母的发酵增殖、酵母菌体的获取、酵母浓缩液的制备和酵母菌发酵溶胞产物的获取。本发明公开的酵母菌发酵溶胞产物用于毛发护理组合物中时可显著改善角蛋白纤维，对毛发具有调理作用，可增加毛发光泽和触感、修复损伤毛发。
Description
技术领域
本发明属于日用化妆品技术领域，尤其涉及一种酵母菌发酵溶胞产物及其制备方法与应用。
背景技术
近年来，毛发健康问题受到越来越多人的关注。毛发不仅受到自然界的压力如紫外线、空气污染和灰尘，而且还受到更为严厉的压力如洗发、梳理、干燥器加热以及美容处理如染发和漂白等，导致产生毛发干燥、粗糙、末端分叉增多、断发、脱发以及毛发纤维强度降低等一系列问题。
由于现代生活造成的损害：越来越多的消费者认为，化学药品，雾霾，污染物等正在损害皮肤及毛发。皮肤问题，特别是头皮问题受到的关注度越来越高，人们对空气/环境质量越来越关注，人们正在将污染物与皮肤外观联系起来，同时认为有必要保护皮肤免受污染，也想了解更多关于如何保护自己免受污染的信息。根据调查，37％的巴西人认为环境(污染，天气)对头发的外观有影响，17％有头发的中国消费者担心环境的破坏，9％的美国18-34岁年龄段人在购买护发产品时会寻找抗污染属性；头皮护理的定位正在发生变化，据调查，47％的中国消费者认为，健康的头皮是头发健康的主要原因之一，越来越多的洗发水会有更高级的宣传，如头皮护理，营养或芳香疗法等；因此，头皮护理的创新需求日益增加，比如在西方，品牌方可以更多地强调对头皮的护理，更好地将头皮健康与头发健康联系起来。而在亚洲，消费者对头皮护理产品的认同度更高。
因此，为防止或减轻对毛发的上述损伤，已经从多种益生菌的途径提出了各种尝试。包括香波、染发剂、毛发处理剂等在内的各种用于毛发的美容组合物均是已知的。
CN110494125A公开了含有植物乳杆菌的溶菌液作为活性成分的毛发或头皮用组合物。此组合物可展现增强毛发生长及防止脱发的显著卓越的效果。但是其用到特定的菌株。
CN10836703A公开了一种用于防止掉发或促进生发的组合物，其含有乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分，及一种用于制备衍生自乳酸菌的胞外囊泡的方法。该组合物具有防止并阻止头皮掉发或头发变稀或变少。但是该技术没有公开其对毛发的损伤预防和修复的功能。
“Living Proof ADry Scalp Treatment”具有持久缓解头皮干燥、瘙痒和刺激的作用。其维生素以b3为基础的微生物组复合物已被临床证明具有平衡头皮自然生态系统的活性。“Unwash Overnight Hair Masque”含有微生物组友好的益生元，如发酵乳酸杆菌裂解液，是一种舒缓和消炎成分，可平衡头皮。“Unique Yanbal Bio Fruit OriginalConditioner”含有独特的Yanbal生物水果原生态护发素，具有益生菌酸奶蛋白的滋养、保湿、软化功效，具有非凡的防御力。“OnestaProbiotic Color Care Shampoo”含有益生菌护色洗发水含有芡欧鼠尾草和茴香的提色精华。益生菌乳杆菌保持头皮健康，藜麦和植物蛋白的组合有助于保护和强化受损的头发。“BandiProfessional TrichoEstheticTricho-Extract Seborrhea Prevention”含有大量的植物提取物、维生素和益生菌，能舒缓刺激，恢复头皮平衡，抑制脂溢性脱发。虽然上述产品具有头皮护理的效果，但是对于毛发的护理，特别是受损头发的护理效果未见报道。
WO2010013182A1公开了副干酪乳杆菌益生微生物、其片段和/或其代谢物在制备用于预防和/或治疗头皮皮屑病症的口服组合物中的应用。其中第二微生物包括酵母属，但是其仅公开了口服的效果，没有公开体外对头皮和毛发的效果。
CN103655433A公开了生物发酵洗发水，其含有复合发酵氨基酸全效营养液，其复合发酵氨基酸全效营养液作为洗发水原料，性能温和，去油污能力强，丰富的泡沫可迅速清洁毛发上的污垢，但不过分脱脂，促使头发新陈代谢，洗后头发滑爽、柔顺、有光泽、有弹性、消除头屑。但是也不涉及头皮护理。
CN103751084A公开了海藻糖与有机硒组合物及其在护发素中的应用。所述海藻糖与有机硒组合物是由海藻糖和富硒酵母组成。该护发素可以提高毛发抵御外界刺激的能力及自我保护的能力，在头发受到外界的物理刺激或化学变化后能够更长时间的维持蛋白质不变性，头发受到外界的物理刺激或化学变化后能够更长时间的维持毛发表皮细胞，使头发维持之前的光泽和柔顺。但是富硒酵母获得并不容易。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是世界上最古老的被驯化的微生物真菌之一。中国在公元前9000年将大米、蜂蜜和水果混合制成发酵饮料。美索不达米亚在公元前8000年将大麦和斯佩耳特小麦发酵酿成啤酒。希腊在公元前4500年把葡萄转化成葡萄酒。古埃及在公元前2000年发酵面包。1857年由路易斯巴斯德从发酵的葡萄汁中分离出来。酿酒酵母通常被称为“啤酒酵母”，对头发和指甲的生长和美观是有好处。它能在3到4小时内繁殖，它呼吸、发酵并产生所有生命必需的成分是：糖、蛋白质、脂肪、维生素、生长因子，尤其是大分子。
酵母细胞壁大分子是能改善并赋予酸味或酸味发酵饮料更为圆润的口感，能稳定果汁中的酸和蛋白质，并对人体细胞的作用已被证明是有益的，同时能增强我们的免疫防御力，并治愈我们的组织。但是未见酵母细胞壁大分子物质在改善头皮和头发状况的报道。
谷氨酰胺转胺酶1(TGase1)是角质分化的关键酶，谷氨酰胺转胺酶1基因的表达对促进对皮肤角化膜(cornified envelope)的形成起到决定性作用，能够参与构建表皮层。β-防御素，特别是人类β-防御素-2是一种角化细胞产生的天然免疫蛋白，其具有类似天然抗生素的功效，能够为皮肤提供类似抗生素的保护。但未见酵母细胞壁大分子通过上述机理来调节头发状况。
因此，仍然需要开发一种能够有效修复受损的毛囊，增加受损毛发的厚度，保护和修复毛发，重组毛发屏障，强化毛发尾部，防止毛发尾部损坏和分叉，使毛发更容易打理，并且富有光泽的毛发护理组合物。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种可保护、修复和强化毛发的酵母菌发酵溶胞产物及其制备方法与应用。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，包含如下步骤：
(1)将酵母进行发酵增殖；
(2)待步骤(1)完成后，将增殖的酵母离心分离，取沉淀物即得酵母菌体；
(3)待步骤(2)完成后，将获得的酵母菌体进行溶菌，对溶菌后的酵母菌体进行离心分离，取上清液即得酵母浓缩液；
(4)待步骤(3)完成后，将获得的酵母浓缩液进行超滤，超滤的分子量为100kDa～2000kDa，未通过的过滤物即为酵母菌发酵溶胞产物。
优选地，所述步骤(1)中，酵母的发酵增殖过程为：取酵母，接种于培养基中，在28-30℃下培养2-3天；其中，所述培养基为麦芽汁。
优选地，所述步骤(1)中，酵母与培养基的体积比为1:10-15。
优选地，所述步骤(1)中，酵母选自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
优选地，所述步骤(2)中离心速度为3000-3500rpm，离心时间为25-35分钟。
优选地，所述步骤(3)中将获得的酵母菌体利用溶菌酶进行溶菌；所述离心分离的参数为：离心速度为3000-4000rpm，离心时间为30-35分钟；所述酵母菌体与溶菌酶的质量比为：酵母菌体：溶菌酶＝(99.8-99.95)：(0.05-0.2)。
同时，本发明公开了一种由所述酵母菌发酵溶胞产物制备方法制备的酵母菌发酵溶胞产物以及一种包含所述酵母菌发酵溶胞产物的毛发护理组合物。
优选地，所述毛发护理组合物中包含所述酵母菌发酵溶胞产物和生理学上可接受的载体。
优选地，所述毛发护理组合物中，酵母菌发酵溶胞产物的质量百分数为0.1-10％。
优选地，所述毛发护理组合物中，酵母菌发酵溶胞产物的质量百分数为0.5-5％。
优选地，所述毛发护理组合物中，酵母菌发酵溶胞产物的质量百分数为0.5-2％。
此外，本发明还公开了所述酵母菌发酵溶胞产物在日用化妆品领域的应用。
相比于现有技术，本发明的有益效果为：以本发明公开的酵母菌发酵溶胞产物制备的酵母菌发酵溶胞产物用于毛发护理组合物中时可减少毛发断裂情况，增加受损毛发厚度，提高毛发光泽，并且可使受损头发角质层再生，对毛发具有较好的护理、修复作用；并且制备方法简单，适于工业化生产。
附图说明
图1为实施例1～6与对比例1制备的毛发护理组合物对谷氨酰胺转胺酶1的表达的影响；
图2为实施例1～6与对比例1制备的毛发护理组合物对人类β-防御素-2的生产的影响；
图3为实施例4制备的毛发护理组合物对毛发纤维鞘的影响；
图4为实施例4制备的毛发护理组合物对受损毛发厚度的影响；
图5为实施例8～9对烫发后毛发角质层的影响；
图6为实施例8～9对烫发后毛发光泽的影响；
图7为实施例8对毛发的断裂的影响。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1～6为本发明公开的毛发护理组合物的实施例，对比例1为以有别于本发明的制备方法制备的毛发护理组合物，实施例1～6及对比例1的配方如表1所示。
实施例1～6所述毛发护理组合物中，酵母菌发酵溶胞产物的制备方法如下：
(1)取酿酒酵母，以酿酒酵母：培养基体积比为1:14接种于麦芽琼脂培养基中，于30℃温度培养2天，获得增殖的酵母；
(2)将增殖的酵母离心分离，离心速度为3200rpm，离心时间为30分钟，取沉淀物得酵母菌体；
(3)将获得的酵母菌体与溶菌酶以重量比为99.85：0.15的比例进行溶菌，用离心机以3500rpm对溶菌的酵母菌体进行离心分离，离心时间为30分钟，取上清液得酵母浓缩液；
(4)将步骤(3)获得的酵母浓缩液进行超滤，超滤的分子量为100kDa～2000kDa，未通过的过滤物即为酵母菌发酵溶胞产物。
将由上述制备方法制得的酵母菌发酵溶胞产物与1,2-戊二醇和去离子水以本领域常规方法混合，即可得到所述毛发护理组合物。
对比例1所述毛发护理组合物中，酵母菌发酵溶胞产物的制备方法与本发明的区别在于，步骤(3)中，酵母菌体与溶菌酶的质量比为：酵母菌体：溶菌酶＝98:2。
表1实施例1～6与对比例1中毛发护理组合物的配方(质量百分数)
实施例7为头皮精华，其配方见表2。
表2实施例7配方
实施例8为发用喷雾，其配方见表3。
表3实施例8配方
实施例9为香波，其配方见表4。
表4实施例9配方
性能测试
1、谷氨酰胺转氨酶1(TGK)的表达与人类β-防御素-2(hBD-2)的生产
以空白对照组和实施例1～6孵育正常人表皮角质形成细胞(NHEK)，经过72小时孵育后通过原位荧光染色检测TGK的表达和通过酶联免疫吸附试验检测hBD-2的表达；TGK的表达如图1所示，hBD-2的表达如图2所示。从图1中可以发现，本发明的实施例1～6制备的毛发护理组合物可以促进TGK的表达；从图2中可以发现，本发明制备的毛发护理组合物可以促进hBD-2的生产，表明本发明公开的产品对头皮具有潜在的强化效果。
2、毛发纤维鞘的变化
2名白人女性(法国)志愿者：25-50岁，志愿者A：又细、又干、受损的头发，志愿者B：浓密的头发，水分充足，状况良好。取实施例4制备的毛发护理组合物，使用喷雾，单次使用。然后通过扫描电子显微镜(SEM)观察头发毛鳞片的平滑度，记录头发纤维直径的变化，头发毛鳞片的扫描电镜图如图3所示，头发纤维直径测量结果如图4所示。从图3中可以发现，与空白对照组相比，本发明的酵母菌发酵溶胞产物能够使毛鳞片更为粘着和平滑，可使头发处于良好状态，从图4中可知，使用本发明所述毛发护理组合物后细、干和受损的头发的厚度增加了54％。
3、对热烫造型头发的保护和修复
取女性捐献者20cm长的头发，其中一束不作处理，进行热烫造型，用聚焦显微镜(0.01％金胺O着色)拍摄照片；另取两束头发分别使用实施例8和实施例9进行处理，再进行热烫处理，并拍摄照片。图5左侧空白对照组为不做处理的头发烫发后的图片，右侧为分别使用一次实施例8和实施例9后烫发的图片。从图5中可以发现，与未使用本发明所述毛发组合物的头发相比，使用后的头发毛鳞片更加的紧密和均匀，表明本发明的毛发护理组合物可防止因烫发造成的头发毛鳞片损伤。
取女性捐献者20cm长的头发，不做处理，用分光光度法测定光泽度，然后进行热烫，热烫后测试光泽度；对热烫后的头发分别使用：含有(B测试组)与不含(A空白对照组)本发明毛发组合物的实施例9十次和实施例8一次后，分别测试光泽度。从图6中可以发现，A空白对照组发色(光泽度)在烫过的头发上未作任何处理，没有明显变化，而测试组B在发色(光泽度)上有显著的增加，表明本发明毛发组合物能够增加受损头发的光泽。
4、减少毛发的断裂和提高毛发的梳理性和光泽
测试方法：选择9名白人女性志愿者，24-51岁，每天使用实施例8一次，连续使用4天。在使用产品前，用刷子梳理，并收集断裂头发，选取0-5厘米的发丝，计数为T0。之后每天使用喷雾前，先用刷子梳理，并收集断裂头发，再选取0-5厘米的发丝，计数为T1,T2,T3,T4，取四次计数的算术平均值计为Ta。
图7中结果表明：与空白对照组相比，使用实施例8后的志愿者能使0-5厘米的头发断裂数减少79％。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，但并不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将酵母进行发酵增殖；
(2)待步骤(1)完成后，将增殖的酵母离心分离，取沉淀物即得酵母菌体；
(3)待步骤(2)完成后，将获得的酵母菌体进行溶菌，对溶菌后的酵母菌体进行离心分离，取上清液即得酵母浓缩液；
(4)待步骤(3)完成后，将获得的酵母浓缩液进行超滤，超滤的分子量为100kDa～2000kDa，未通过的过滤物即为酵母菌发酵溶胞产物。
2.如权利要求1所述的酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，酵母的发酵增殖过程为：取酵母，接种于培养基中，在28-30℃下培养2-3天；其中，所述培养基为麦芽汁。
3.如权利要求2所述的酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，所述酵母与培养基的体积比为1:10-15。
4.如权利要求1所述的酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，酵母选自酿酒酵母。
5.如权利要求1所述的酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，离心速度为3000-3500rpm，离心时间为25-35分钟。
6.如权利要求1所述的酵母菌发酵溶胞产物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将获得的酵母菌体以溶菌酶进行溶菌；所述离心分离的参数为：离心速度为3000-4000rpm，离心时间为30-35分钟；所述酵母菌体与溶菌酶的质量比为：酵母菌体：溶菌酶＝(99.8-99.95)：(0.05-0.2)。
7.一种由权利要求1～6任一项所述制备方法制备得到的酵母菌发酵溶胞产物。
8.一种毛发护理组合物，其特征在于，包含如权利要求7所述的酵母菌发酵溶胞产物和生理学上可接受的载体。
9.如权利要求8所述的毛发护理组合物，其特征在于，所述酵母菌发酵溶胞产物在所述毛发护理组合物中的质量百分数为0.1-10％。
10.一种如权利要求7所述酵母菌发酵溶胞产物在日用化妆品领域的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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Effective date of registration: 20210521 Address after: 510000 room 3904, No.10 Huaxia Road, Tianhe District, Guangzhou City, Guangdong Province (office only) Applicant after: Xianting (Guangzhou) technology R & D Co.,Ltd. Address before: Room 2509, 2512, 2513, South Tower, 371-375 Huanshi East Road, Yuexiu District, Guangzhou, Guangdong 510000 Applicant before: Xianting (Guangzhou) Trading Co.,Ltd. |
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| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 510000 rooms 1201, 1205 and 1206, building 3, No. 18, Shenzhou Road, Huangpu District, Guangzhou, Guangdong Province (self-made No. C1) Applicant after: Xianting (Guangzhou) technology R & D Co.,Ltd. Address before: 510000 room 3904, No.10 Huaxia Road, Tianhe District, Guangzhou City, Guangdong Province (office only) Applicant before: Xianting (Guangzhou) technology R & D Co.,Ltd. |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201229 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |