CN117298012A - 一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物及其应用、日化品 - Google Patents
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Abstract
本申请属于化妆品生产技术领域,公开了一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述酵母发酵组合物通过向发酵原料中加入酵母发酵后,再加入溶菌酶制得;所述酵母为酿酒酵母、清酒酵母和覆膜酵母的至少一种;所述发酵原料由植物粉糖化上清液、磷酸二氢钠、蛋白胨、酵母粉、纯水混合制成,本申请所公开的组合物中含有丰富的核苷酸、氨基酸和小分子蛋白,通过补充细胞所需营养物质、调节细胞状态,能够显著降低一些配方成分对细胞的毒性效果;同时,本申请通过对酵母菌种的筛选以及对发酵原料的进一步优化,进一步提升了酵母发酵组合物降低细胞毒性的能力,此外,本申请还公开了一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物的应用及一种日化品。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品生产技术领域,尤其涉及一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物及其应用、日化品。
背景技术
在化妆品行业中,很多配方成分在改善料液性质,调节成品pH、抑制微生物等方面发挥着重要作用。但在实际应用过程中,很多配方成分也存在一些缺点:在浓度达到一定水平后,其细胞实验结果显示其对细胞产生毒性作用。这种细胞毒性效应在化妆品实际使用过程中表现为红肿刺痛等不良反应,严重影响消费者的使用体验。如何在充分发挥原料效用的同时降低其毒副作用成为亟待解决的问题。
中国专利申请202211124632 .X公开了一种具有多重功效的酵母发酵组合物及其应用,该具有多重功效的酵母发酵组合物为酵母菌发酵产物滤液和酵母菌发酵溶胞产物滤液,其中酵母菌发酵产物滤液和酵母菌发酵溶胞产物滤液所用的酵母选自酿酒酵母、马克斯克鲁维酵母、库德毕赤酵母、东方伊萨酵母、毕赤酵母、威克汉姆酵母、酒香酵母、异常汉逊酵母、丝胞酵母、假丝酵母、清酒酵母、覆膜酵母、红冬孢酵母、长胞洛德酵母中的至少一种;
该方案通过复配不同的酵母菌发酵产物滤液和酵母菌发酵溶胞产物滤液,以利用不同酵母菌内丰富的有效活性成分,使所制备的酵母发酵组合物具有保湿、抗炎修护、抗氧化、控油抗脂、美白等多重功效。通过限定两者的相对含量、限定酵母菌发酵产物滤液和酵母菌发酵溶胞产物滤液的肽分子量分布和含氮量,提高酵母发酵组合物中的有效活性物质如维生素、氨基酸、多肽、矿物质、多糖、黄酮、多酚等的含量,以进一步提升酵母菌发酵组合物的多重功效;
同时观察该方案的实施例及对比例可见,实施例1-3、对比例2、对比例3均采用覆膜酵母制作酵母发酵产物滤液、使用清酒酵母和酿酒酵母配合制作酵母菌发酵溶胞产物滤液,可以看到,尽管选择的酵母相同,但实施例1-3及对比例2、对比例3仍出现了明显的差距,由此,不难看出,在该方案中,必须使用清酒酵母和酿酒酵母配合制作酵母菌发酵溶胞产物滤液才能够实现良好的技术效果,该方案中其他的影响因素包括酵母菌发酵产物滤液、酵母菌发酵溶胞产物滤液的质量比、半乳糖酵母样菌发酵产物的肽分子量分布范围、含氮量等。
中国专利申请202010472222 .9公开了一种可促进皮肤屏障修复护理的保湿敷料及制备方法,其中每1000g敷料包括:辛酸/癸酸甘油三酯90~110g、甘油65~95g、乳木果油8~12g、白油45~55g、戊二醇15~25g、羧甲基葡聚糖15~25g、硬脂酸45~55g、十六十八醇26~38g、透明质酸钠1~4g、鲸蜡硬脂醇聚醚-257~12g、酵母精华10~20g、植物复合发酵滤液5~6g、丙烯酸(酯)类/丙烯酰胺共聚物10~20g和对羟基苯甲酸乙酯0 .5~2g;
该方案利用酵母精华联合羧甲基葡聚糖与透明质酸钠的复配,以可更好地诱发皮肤系统的免疫和皮肤屏障修复的功能,以及结合植物复合发酵液的良好的屏障作用,从而为创面伤口提供稳定的修复屏闭环境,有效减少创面伤口的修复时间和促进皮肤组织的恢复,加速受损细胞的修复,促进恢复皮肤屏障功能,减缓创面疼痛和缩短痛痒时间,另外,该方案通过采用四步法制备乳状保湿敷料,有利于提高酵母精华和植物复合发酵液等有效成分在乳状混合体系下的稳定性,实现敷料的持续滋润、保湿和稳定的效果,为创面伤口提供更加稳定的修复屏闭环境;但是结合该方案的说明书可见,该方案中并未使用清酒酵母,并且该方案中的酵母精华包括酵母细胞壁提取物、酵母溶胞产物、酵母提取物、酵母精华素和酵母发酵产物滤液,可见上述酵母精华内并无具有活性的酵母菌,因此,该方案中的酵母菌并不会分解植物复合发酵滤液。
本方案需要解决的问题:如何制备一种以酵母发酵产物和酵母溶胞产物为基础原料,能够降低细胞毒性的酵母发酵组合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物,该酵母发酵组合物包含酵母发酵产物和酵母发酵溶胞产物,且通过对选用的酵母、发酵原料的选择,进一步提高酵母发酵组合物降低细胞毒性的能力。
为实现上述目的,本申请公开了一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物,所述酵母发酵组合物通过向发酵原料中加入酵母培养液发酵后,再加入溶菌酶制得;
所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液中的至少一种;
所述发酵原料按质量百分比计,由以下组分构成:
植物粉糖化上清液 75~82%;
磷酸二氢钠 0.1~1%;
蛋白胨 1~6%;
酵母粉 0.2~3%;
纯水 余量。
优选地,所述酵母培养液与发酵原料之间的质量比为4~6:100;所述酵母培养液中酵母菌的含量为10%。
更为优选地,所述酵母培养液与发酵原料之间的质量比包括但不限于4:100、5:100、6:100。
优选地,所述酵母发酵组合物通过向发酵原料中加入酵母培养液发酵后,再加入溶菌酶制得;
所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液中的至少一种;
所述发酵原料按质量百分比计,由以下组分构成:
植物粉糖化上清液 78~79.5%;
磷酸二氢钠 0.3~1%;
蛋白胨 3~5%;
酵母粉 1~3%;
纯水 余量。
优选地,所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的组合,且酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的质量比为0.5 ~1.5:0.5 ~1.5:0.5 ~1.5。
更为优选地,所述酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的质量比包括但不限于0.5:0.5:0.5、0.5:0.5:1、0.5:0.5:1.5、0.5:1:0.5、0.5:1:1、0.5:1:1.5、0.5:1.5:0.5、0.5:1.5:1、0.5:1.5:1.5、1:0.5:0.5、1:0.5:1、1:0.5:1.5、1:1:0.5、1:1:1、1:1:1.5、1:1.5:0.5、1:1.5:1、1:1.5:1.5、1.5:0.5:0.5、1.5:0.5:1、1.5:0.5:1.5、1.5:1:0.5、1.5:1:1、1.5:1:1.5、1.5:1.5:0.5、1.5:1.5:1、1.5:1.5:1.5。
优选地,所述植物粉糖化上清液选择小麦粉糖化上清液、大麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液、枸杞粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液中的至少一种。
优选地,向发酵原料中加入酵母并发酵23~25小时,再加入溶菌酶静置3小时,制得降低细胞毒性的酵母发酵组合物。
此外,本申请还公开了如上所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物作为日化品活性成分的用途。
此外,本申请还公开了一种日化品,含有5~100wt%的如上所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物;
更为优选地,所述日化品中含有5~50wt%的如上所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物。
优选地,所述日化品为洁面乳、洗面奶或面膜。
优选地,所述日化品为乳液或膏霜。
本申请至少具有如下有益效果:
酵母菌发酵产物滤液是酵母菌发酵过程中产生的一类物质,主要成分为酵母菌发酵过程中产生的多肽、氨基酸、有机酸等物质,具有保湿、抑制透明质酸酶等作用;
酵母菌发酵溶胞产物滤液是酵母菌溶胞后产生的核苷酸、蛋白质类物质,具有促进成纤维细胞增殖,促进细胞I型胶原蛋白分泌等作用;因此,含有上述两种物质的组合物中含有丰富的核苷酸、氨基酸和小分子蛋白,通过补充细胞所需营养物质、调节细胞状态,能够显著降低一些配方成分对细胞的毒性效果;
同时,本申请通过对酵母菌种的筛选以及对发酵原料的进一步优化,进一步提升了酵母发酵组合物降低细胞毒性的能力。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例,对本发明进行清楚、完整的描述,在本发明的描述中,需要说明的是,实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
植物粉糖化上清液的制备方法:
将5%植物粉加纯化水均质后80℃糊化1h,加α-淀粉酶60℃糖化5h,糖化结束后加蛋白酶水解2h,高速离心后取上清液即得。
酵母发酵产物的制备:
将植物粉糖化水解上清液、磷酸二氢钠混合,于121℃30min湿热灭菌后,再加入蛋白胨2%、酵母粉1%、纯化水17%;随后无菌接入酵母含量为10%的酵母培养液通气发酵,得到酵母发酵产物;
酵母发酵溶胞产物的制备:
向酵母培养液及酵母发酵产物的混合物中加入溶菌酶溶菌3h,高速离心并过0.22um过滤膜即得到酵母菌发酵产物。
实施例1-4
一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其配方如表1所示:
表1:实施例1-4配方表
实施例1中酵母培养液为酿酒酵母培养液,且添加量为发酵原料的4%;
实施例2中酵母培养液为清酒酵母培养液,且添加量为发酵原料的5%;
实施例3中酵母培养液为覆膜酵母培养液,且添加量为发酵原料的5.5%;
实施例4中酵母培养液为酿酒酵母培养液和清酒酵母培养液,且添加量为发酵原料的6%,并且酿酒酵母培养液与清酒酵母培养液的质量比为1:1。
实施例5
与实施例1基本相同,区别在于,所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液,且酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的质量比为1:1:1。
实施例6
与实施例1基本相同,区别在于,使用人参粉糖化上清液代替小麦粉糖化上清液。
实施例7
与实施例1基本相同,区别在于,使用枸杞粉糖化上清液代替小麦粉糖化上清液。
实施例8
与实施例1基本相同,区别在于,使用小麦粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液的混合物代替小麦粉糖化上清液,且小麦粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液的质量比为1:1:1。
实施例9
与实施例8基本相同,区别在于,所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液,且酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的质量比为1:1:1。
对比例1
与实施例1基本相同,区别在于,使用葡萄糖溶液代替小麦粉糖化上清液。
对比例2
与实施例1基本相同,区别在于,使用糯米粉糖化上清液代替小麦粉糖化上清液。
对比例3
与实施例1基本相同,区别在于,发酵原料中不包含酵母粉。
对比例4
与实施例1基本相同,区别在于,使用丝胞酵母培养液代替酿酒酵母培养液。
对比例5
与实施例1基本相同,区别在于,使用长胞洛德酵母培养液代替酿酒酵母培养液。
性能测试
一、酵母发酵产物核苷酸含量测定
对实施例及对比例制得的酵母发酵组合物的核苷酸浓度进行测定,具体方法如下:
(1)样品处理:精密称取500ul待测样品,用1*PBS缓冲液稀释并定容于20.00ml容量瓶中,摇匀即得待测样品。
(2)取适量样品置于石英比色皿中检测,用1*PBS缓冲液作为空白液,分别测定波长为260nm的吸光度,计算样品中核酸及核苷酸类物质浓度。
核酸类物质浓度=(样品A260-空白A260)*稀释倍数*常数(45(ug/ml)-1*cm-1),检测结果如表2所示。
表2:各样品中总的含量检测结果
样品 | 核苷酸浓度 |
实施例1 | 468ppm |
实施例2 | 477ppm |
实施例3 | 465ppm |
实施例4 | 482ppm |
实施例5 | 505ppm |
实施例6 | 461ppm |
实施例7 | 466ppm |
实施例8 | 495ppm |
实施例9 | 550ppm |
对比例1 | 352ppm |
对比例2 | 367ppm |
对比例3 | 361ppm |
对比例4 | 412ppm |
对比例5 | 436ppm |
结果分析:
通过实施例1-5可见,当酵母为酿酒酵母、清酒酵母和覆膜酵母的复配时,样品中的核苷酸浓度较实施例1-4有明显的提升,我们推测,造成此现象的原因是,由于多个菌种的复配,使得菌种的丰富度提高,进而使得菌群对营养物质的接受能力提高,进而提升了菌群的总密度;
通过实施例6-8可见,当使用人参粉糖化上清液、枸杞粉糖化上清液代替小麦粉糖化上清液时,样品的核苷酸浓度并未产生明显变化,而使用小麦粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液的混合物代替小麦粉糖化上清液时,样品的核苷酸浓度明显提升,我们推测,造成此现象的原因是,由于营养成分的丰富程度提升,菌种对营养成分的接受能力提高,进而提升了菌群的密度;
通过实施例8和实施例9可见,当使用复合菌种代替单一菌种时,样品的核苷酸浓度再次出现明显提升,我们推测,造成此现象的原因是,由于营养成分和菌种的丰富度提升,菌群对营养物质的接受能力显著提升,进而使菌群的密度显著提升。
通过实施例1和对比例1-2可见,当更换营养成分后,样品的核苷酸浓度有明显下降,说明实施例1中的菌种对葡萄糖、糯米粉糖化上清液的接受能力远不及小麦粉糖化上清液。
通过实施例1和对比例4-5可见,当更换酵母菌后,样品的核苷酸浓度显著降低,说明实施例1中的营养成分更加易于被本申请所使用的菌种接受。
二、酵母发酵产物MTT细胞毒性实验
对实施例、对比例制得的酵母发酵组合物取样,并对样品施加外界刺激进行MTT细胞毒性测定,具体方法如下:
(1)细胞接种:按照接种密度5*104个/ml接种96孔板,孵化24小时。接种体积为200ul,铺板完成后,摇匀整个板。
(2)给药:待96孔板细胞铺板率达到40%-60%时进行给药。本实验施加的刺激物为:表面活性剂AES、柠檬酸、表面活性剂K12、苯氧乙醇。
(3)呈色:每孔加 MTT 溶液(5 mg/ml 用 PBS 缓冲液 pH=7.4 配制)20 uL。加MTT时一定要避光。继续孵育 4 小时,终止培养,小心弃去孔内培养上清液。
(4)检测:弃去上清液,每孔加 150ul DMSO,振荡 1-2分钟,使结晶物充分融解,490nm处读取OD值。
细胞相对活力%=(实验组OD490-空白OD490)/(对照组OD490-空白OD490)*100,检测结果如表3所示。
表3:细胞毒性实验结果表
结果分析:
通过实施例1-5可见,当酵母为酿酒酵母、清酒酵母和覆膜酵母的复配时,细胞在各种溶液中的活力值均有明显程度的提升,我们推测,造成此现象的原因可能是,由于多个菌种的复配,使得菌种的丰富度提高,进而使得菌群对营养物质的接受能力提高,进而提升了细胞的活力;
通过实施例6-8可见,当使用人参粉糖化上清液、枸杞粉糖化上清液代替小麦粉糖化上清液时,细胞在各溶液中的活力值未出现明显的波动,而当使用小麦粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液的混合物代替小麦粉糖化上清液时,细胞的活力值明显提升,我们推测,造成此现象的原因是,由于营养成分的丰富程度提升,菌种对营养成分的接受能力提高,进而提升了细胞的活力;
通过实施例8和实施例9可见,当使用复合菌种代替单一菌种时,细胞的活力值再次出现明显提升,我们推测,造成此现象的原因是,由于营养成分和菌种的丰富度提升,菌群对营养物质的接受能力显著提升,进而使细胞活力值显著提升;
通过实施例1和对比例1-2可见,当更换营养成分后,细胞活力值出现明显的下降趋势,说明实施例1中的菌种对葡萄糖、糯米粉糖化上清液的接受能力远不及小麦粉糖化上清液。
通过实施例1和对比例4-5可见,当更换酵母菌后,细胞活力值显著降低,说明实施例1中的营养成分更加易于被本申请所使用的菌种接受。
Claims (10)
1.一种降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述酵母发酵组合物通过向发酵原料中加入酵母培养液发酵后,再加入溶菌酶制得;
所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液中的至少一种;
所述发酵原料按质量百分比计,由以下组分构成:
植物粉糖化上清液 75~82%;
磷酸二氢钠 0.1~1%;
蛋白胨 1~6%;
酵母粉 0.2~3%;
纯水 余量。
2.根据权利要求1所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述酵母培养液与发酵原料之间的质量比为4~6:100;所述酵母培养液种酵母菌的含量为10%。
3.根据权利要求1所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述酵母发酵组合物通过向发酵原料中加入酵母培养液发酵后,再加入溶菌酶制得;
所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液和覆膜酵母培养液中的至少一种;
所述发酵原料按质量百分比计,由以下组分构成:
植物粉糖化上清液 78~79.5%;
磷酸二氢钠 0.3~1%;
蛋白胨 3~5%;
酵母粉 1~3%;
纯水 余量。
4.根据权利要求1所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述酵母培养液为酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的组合,且酿酒酵母培养液、清酒酵母培养液、覆膜酵母培养液的质量比为0.5~1.5:0.5~1.5:0.5~1.5。
5.根据权利要求1所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,所述植物粉糖化上清液选择小麦粉糖化上清液、大麦粉糖化上清液、人参粉糖化上清液、枸杞粉糖化上清液、燕麦粉糖化上清液中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物,其特征在于,向发酵原料中加入酵母培养液并发酵23~25小时,再加入溶菌酶静置3小时,制得降低细胞毒性的酵母发酵组合物。
7.如权利要求1~6任一所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物作为日化品活性成分的用途。
8.一种日化品,其特征在于,含有5~100wt%的如权利要求1-6任一所述的降低细胞毒性的酵母发酵组合物。
9.根据权利要求8所述的日化品,其特征在于,所述日化品为乳液或膏霜。
10.根据权利要求9所述的日化品,其特征在于,所述日化品为洁面乳、洗面奶或面膜。
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