CN113332192B - 一种日本紫珠果发酵物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及发用产品技术领域，具体涉及一种日本紫珠果发酵物及其制备方法和应用。本发明提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其以日本紫珠果为原料，包括将所述日本紫珠果经酶解处理、微生物发酵和发酵后熟化处理的步骤，所述酶解使用的酶包括纤维素酶，所述微生物发酵使用的发酵菌剂包括类植物乳杆菌和酵母。本发明提供的日本紫珠果发酵物中富含对于头发、头皮具有滋养、修复、抗氧化作用的有效成分，能够发挥优异的促进头发生长、抗氧化和修复损伤发丝的作用，在头发洗护用品中具有较高的应用价值，对于解决头皮和头发健康问题具有重要意义。

Description

一种日本紫珠果发酵物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及发用产品技术领域，具体涉及一种日本紫珠果发酵物及其制备方法和应用。

背景技术

在日常生活中，头发和头皮会受到各种各样的损伤。烫发、染发时使用化学制剂直接损伤毛小皮，破坏发丝结构，刺激头皮，造成头皮损伤，间接伤害毛囊。日常洗发护发过程中，不当的洗护方式，也会造成发丝结构的改变。外界环境中的不利因素也无时无刻不在对头发和皮肤进行刺激。同时，随着年龄的增长，皮肤老化，细胞活性减弱，自由基累积，新陈代谢减缓，这些生理变化同样使得头发变得毛躁，没有光泽。因此，如果头发和头皮不加以保养，任其长期处于亚健康状态，脱发、头屑、分叉、发丝易断等问题便会随之而来。

目前，修复头发结构损伤的产品主要为护发素和发膜，而大多数护发产品采用化学试剂且错综复杂，一些合成副产物残留，存在一定的刺激性和副作用，以及其中的游离电子会引起发丝结构的不稳定。目前已有开发使用的添加草本提取物的发用产品，以期代替代化学添加成分，但是传统炮制工艺和使用方法等可能会破坏原料中的有效成分，使得草本提取物很难达到预期的功效。

发明内容

本发明的目的是提供一种日本紫珠果发酵物，该发酵物具有修复发丝损伤、滋养头皮的功能。本发明还提供该发酵物的制备方法。

日本紫珠(Callicarpa japonica Thunb.)是马鞭草科紫珠属植物，日本紫珠果提取物是一种化妆品原料，通常被用于面部皮肤的护理。由于头皮和头发的结构与面部等皮肤存在较大差异，其营养代谢、功效成分也存在较大的特殊性，很多面部护肤物质在用于头皮和头发时，其吸收和作用效果经常受到限制。本发明在研发过程中曾尝试将其它品种的紫珠果以及化妆品中普遍使用的日本紫珠提取物用于头皮和头发，发现其对于头皮和头发的滋养和修复效果十分有限，进而尝试开发日本紫珠果头皮和头发功效成分的其他制备方法。本发明在研发时尝试了很多种提取方法的优化，但对于头皮和头发的滋养和修复效果仍未得到显著提升，在不断尝试中发现，先将日本紫珠果经纤维素酶酶解处理，再进行微生物发酵处理，再经后熟化处理得到的发酵物中，对头皮和头发具有滋养、修复功效的成分的种类及含量明显提高，尤其是其中黄酮类、萜类以及有机酸类物质的含量显著提高，进而有效提高其头皮和头发的滋养和修复功能。生物发酵过程主要通过增强活性分子的释放、降解活性大分子、促进活性分子的转化、丰富活性分子的种类来增加产物的功效以及增强作用效果。本发明运用微生物发酵步骤，采用类植物乳杆菌和酵母复合发酵对于日本紫珠果中有效成分的释放和对于头发和头皮有益的代谢产物的积累具有较好的促进作用。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，该方法以日本紫珠果为原料，包括将所述日本紫珠果经酶解处理、微生物发酵和发酵后熟化处理的步骤，所述酶解处理使用的酶包括纤维素酶，所述微生物发酵使用的发酵菌剂包括类植物乳杆菌和酵母。

本发明发现在自然状态下，类植物乳杆菌和酵母降解纤维素的过程极为缓慢，如果直接将日本紫珠果作为底物用于发酵，不仅其中的纤维素利用率有限，而且植物来源的糖类会在发酵过程中严重损失，而许多糖类化合物具有消炎、抗氧化、清除自由基等功效。在微生物发酵处理前，采用纤维素酶对日本紫珠果进行预处理、降解植物细胞壁，能够释放更多的可被乳酸菌和酵母利用的可溶性糖类，提高发酵效率并且为发酵菌株提供更多的碳源使得发酵过程快速进行。

此外，本发明还发现，在上述微生物发酵过程结束后，发酵液的物质体系仍处于不稳定的状态，一定的熟化处理能够显著提高发酵物的功效成分含量及其对头发和头皮的滋养、修复功能。

优选地，所述类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)为类植物乳杆菌GUFHSL-70，保藏编号为CCTCC M 2016002。所述酵母(Saccharomyces)为活性干酵母。

本发明所提及的类植物乳杆菌GUFHSL-70，命名为Lactobacillus paraplantarumGUFHSL-70，该菌株纯培养物已经于2016年01月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学，保藏号为：CCTCC M 2016002。本发明所提及的类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)已在中国专利公布号CN105695363A中公开。

本发明所使用的活性干酵母优选为安琪耐高糖高活性干酵母(Saccharomycescerevisiae)。

本发明对发酵菌株进行了大量的筛选并发现，采用类植物乳杆菌GUFHSL-70和酵母进行复合发酵，能够显著提高发酵物中对于头发和头皮具有滋养、修复功效的成分的含量，尤其是二氢杨梅素和阿魏酸的含量。

优选地，所述发酵为先在30-37℃、湿度45-55％条件下发酵64-80h；经放气搅拌后，再继续发酵40-50h。

优选地，发酵过程中，类植物乳杆菌与所述酵母的接种量之比为(0.1-5.0)：(0.1-2.0)。

进一步优选地，所述类植物乳杆菌的接种量为10⁷-10¹²cfu/g日本紫珠果，所述酵母的接种量为10⁹-10¹⁵cfu/g日本紫珠果。

以上所述的类植物乳杆菌可采用如下方法制备：将类植物乳杆菌GUFHSL-70接种于MRS液体培养基中培养，此时种子液活性为10⁸-10¹²CFU/mL。酵母可采用如下方法制备：将安琪耐高糖高活性干酵母粉接种于PDA液体培养基中，于26℃培养得到酵母种子液，然后再将种子液接种于PDA液体培养基中，于26℃培养得到二代酵母种子液，此时酵母种子液活性为10¹⁰-10¹⁵CFU/mL。

在所述微生物发酵处理后，将发酵得到的发酵液过滤，得到发酵上清液(澄清的滤液)，对灭菌后的发酵上清液进行发酵后熟化处理。

可选地，将发酵上清液进行灭菌处理后再过滤，将得到的滤液进行发酵后熟化处理。

对于发酵后熟化处理，优选为在26℃-37℃、无空气流动环境条件下自然熟化36h-72h。

经上述后熟化处理后，日本紫珠果发酵物的头皮和头发功效性成分的含量显著提升，且发酵物具有较高的稳定性。

进一步优选地，将所述后熟化处理得到的熟化产物经过滤得到所述发酵物。

对于酶解过程，优选地，所述酶解中，纤维素酶的用量为10-50U/g日本紫珠果。

所述酶解处理为在30-40℃条件下处理5-8h。

上述酶解处理能够更充分地释放日本紫珠果中可被类植物乳杆菌和酵母发酵利用的底物，能够与微生物发酵步骤更好地配合作用，促进发酵的有效进行。

在所述酶解前，优选先将所述日本紫珠果粉碎至60-120目。

进一步优选地，将粉碎后的日本紫珠果与10-100倍质量的水混合后再进行所述酶解处理。

进一步优选地，在所述酶解处理后，将酶解物与吐温-80混合后，经灭菌处理后再进行所述微生物发酵，吐温-80的添加量为0.3-0.7g/100g发酵体系。

作为本发明的优选方案，所述日本紫珠果发酵物的制备方法包括如下步骤：

(1)将日本紫珠果粉碎至60-120目后加入到10～100倍质量的纯化水中，然后按10-50U/g紫珠果的用量加入纤维素酶，在32-38℃保温条件下处理5-7h后，得到紫珠果预处理物；

(2)将所述预处理物与吐温-80混合均匀得到混合物1；

(3)将混合物1于高温高压灭菌；

(4)在灭菌后的混合物1中接种类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液和酵母种子液，于36-37℃、湿度48-52％条件下发酵70-74h；然后放气搅拌5-15min，密封后继续发酵45-50h；

(5)将发酵得到的发酵液过滤，得到澄清的滤液，进行灭菌处理后再过滤，得到的滤液为混合物2；

(6)将混合物2置于26℃-37℃、无空气流动的环境条件下自然熟化36h-72h，然后再进行过滤，得到的滤液即为所述日本紫珠果发酵物。

上述步骤(3)和步骤(5)中，所述灭菌为在115-126℃，高温高压灭菌15-20min。

采用本发明所述的制备方法处理日本紫珠果后日本紫珠果的组织纤维和细胞壁被分解成水溶性糖类，释放细胞内部的物质，糖类为微生物生物代谢提供必要能量和生命活动必要的物质基础，并以此为底物经微生物分解或者合成新的代谢物于发酵液中，这些代谢物具有更好的亲和性，成为有利于头发和头皮吸收的有效成分，其中部分有效成分是日本紫珠果和日本紫珠果提取物中不含有或者含量极微的成分。另外，类植物乳杆菌和酵母经发酵还产生了丰富的菌体胞外代谢产物和菌体溶胞物(DNA、RNA、线粒体、肽聚糖、磷壁酸、氨基酸尤其是酵母中的胱氨酸等活性成分)，这些成分也可发挥滋养头皮和头发的功能。本发明经实验证实，采用上述制备方法得到的日本紫珠果发酵物具有促进头发生长、修复发丝结构和减少头皮自由基的作用。

本发明通过对日本紫珠果的发酵物的成分进行测定，并通过与现有文献进行对比(吴中含,陈靖靖,徐凡,王红刚.紫珠属植物研究进展[J].广东药科大学学报,2018,34(06):808-813；吴爱芝,袁欢,林朝展,王涛,祝晨蔯.紫珠属植物苯乙醇苷类成分研究进展及生物合成初探[J].广州中医药大学学报,2018,35(03):570-574；张珊珊,张丽,陈怀远,李宏焘,林凤祥,杜雨芊,罗永明.江西省药用紫珠属植物化学成分研究进展[J].中南药学,2016,14(09):976-982；Toru Yamasaki,Chikako Masuoka,Toshihiro Nohara,MasateruOno.A new phenylethanoid glycoside from the fruits of Callicarpa japonicaThunb.var.luxurians Rehd.[J].Journal of Natural Medicines,2007,61(3)；高秀丽,王鹏娇,彭安堂,刘祉莉,刘安发.高效液相色谱法测定紫珠果中齐墩果酸和熊果酸[J].贵阳医学院学报,2010,35(04):352-354+357；王健,贾凌云,何立华.紫珠属植物的研究进展[J].中国医药导报,2009,6(05):9-10；颜冬兰,刘珊珊,宁云山.紫珠属植物化学、药理及临床应用进展[J].中成药,2008(09):1361-1363.)，发现日本紫珠果发酵液中产生了不同于紫珠果提取物的新成分，其中以二氢杨梅素、阿魏酸为检出较高的成分。

本发明还提供由上述制备方法制备得到的日本紫珠果发酵物。

优选地，所述发酵物中，二氢杨梅素的含量≥5mg/L，阿魏酸的含量≥3mg/L。

本发明还提供所述日本紫珠果发酵物在制备头皮、头发洗护产品中的应用。

优选地，所述头皮、头发洗护产品具有滋养头发、促进头发生长、头皮和头发抗氧化或修复受损发丝的作用。

本发明还提供一种用于头发的产品，其包括所述日本紫珠果发酵物。

本发明所述的产品优选为洗发产品或护发产品，包括但不限于洗发水、生发水、染发剂、护发素、发型处理剂、发乳、毛发营养化妆水。

优选地，所述日本紫珠果发酵物在所述产品中的质量百分含量为1.0％-15.0％。

所述洗发产品、护发产品中还包含本领域允许的洗发产品、护发产品的基质。

本发明的有益效果在于：本发明提供的日本紫珠果发酵物中富含对于头发、头皮具有滋养、修复、抗氧化作用的有效成分，能够发挥优异的促进头发生长、抗炎、抗氧化和修复损伤发丝的作用。在头发洗护用品中具有较高的应用价值，对于解决头皮和头发健康问题具有重要意义。

附图及说明

图1为本发明实验例1中实施例1的发酵物中的黄酮苷类化合物的核磁共振氢谱(¹H NMR)检测结果图。

图2为本发明实验例1中实施例1的发酵物中黄酮类化合物核磁共振碳谱(¹³C NMR)检测结果图。

图3为本发明实验例1中实施例1的发酵物中有机酸类化合物核磁共振氢谱(¹HNMR)检测结果图。

图4为本发明实验例1中实施例1的发酵物中有机酸类化合物核磁共振碳谱(¹³CNMR)检测结果图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例中，类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液和酵母种子液的制备方法如下：将类植物乳杆菌GUFHSL-70接种于MRS液体培养基中培养48h，此时种子液活性为10⁹CFU/mL。将安琪耐高糖高活性干酵母粉(购自安琪酵母股份有限公司)接种于PDA液体培养基中，26℃培养48h后得到酵母菌种子液，取1mL种子液接种于PDA液体培养基中，26℃培养48h得到二代酵母种子液，此时酵母菌种子液活性为10¹⁰cFu/mL。

实施例1

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其步骤如下：

(1)日本紫珠果预处理：取日本紫珠果1.0g，洗净后进行粉碎机粉碎至60目，然后将粉碎后的紫珠果加入100倍质量的纯化水，混合均匀后加入25U的纤维素酶，在37℃条件下保温6h后得到日本紫珠果预处理物；

(2)将日本紫珠果预处理物与吐温-80混合均匀得到混合物1，吐温-80的添加量为0.5g/100g发酵体系；

(3)将混合物1于126℃、15min高温高压灭菌；

(4)在灭菌后的混合物1中接种类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液和酵母(saccharomyces cerevisiae)种子液，接种量均为1mL/L混合物1，于37℃、湿度50％条件下发酵72h；然后放气搅拌10min，密封后继续发酵48h；

(5)将发酵得到的发酵物过滤，得到澄清的滤液，进行灭菌(126℃，15min)处理后再过滤，得到的滤液为混合物2；。

(6)将得到的混合物2于密闭空间26℃条件下自然熟化72h，然后再过滤，得到滤液即为日本紫珠果发酵物。

实施例2

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(1)中日本紫珠果的用量调整为0.1g。

实施例3

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(1)中日本紫珠果的用量调整为5.0g。

实施例4

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(4)中类植物乳杆菌GUFHSL-70的接种量调整为50.0mL/L混合物1。

实施例5

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(4)中酵母的接种量调整为20mL/L混合物1。

实施例6

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(6)中熟化的条件为密闭空间37℃条件下自然熟化72h。

实施例7

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(6)中熟化的条件为密闭空间26℃条件下自然熟化36h。

实施例8

本实施例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(6)中熟化的条件为密闭空间26℃条件下自然熟化48h。

对比例1

本对比例提供一种紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中使用的紫珠果为广东紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun)。

对比例2

本对比例提供一种紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(4)中的类植物乳杆菌替换为市售299V^TM植物乳杆菌固体饮料(品牌：仁和)经活化培养后得到的植物乳杆菌种子液。

对比例3

本对比例提供一种紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，去除步骤(4)中的酵母种子液，仅采用类植物乳杆菌GUFHSL-70进行发酵。

对比例4

本对比例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，去除步骤(6)。

对比例5

本对比例提供一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，将步骤(6)中熟化的条件为密闭空间40℃条件下自然熟化72h。

以下通过实验例来说明本发明的技术效果。

实验例1日本紫珠果发酵物中活性成分的检测

对各实施例制备的日本紫珠果发酵物中的活性成分进行检测，具体如下：

先对发酵物经硅胶柱、ODS、Sephadex LH-20柱色谱和半制备液相进行分离纯化，得到多种单一化合物，对不同的化合物进行核磁共振检测检测，得到单体的具体种类。其中，实施例1的发酵物中黄酮苷类化合物的核磁共振氢谱(¹H NMR)检测结果如图1所示，黄酮类化合物的核磁共振碳谱(¹³C NMR)检测结果如图2所示，经比对，该发酵物中含有大量的二氢杨梅素，含量为7.55mg/L。实施例1的发酵物中有机酸类化合物核磁共振氢谱(¹H NMR)检测结果如图3所示，有机酸类化合物核磁共振碳谱(¹³C NMR)检测结果如图4所示，经比对，该发酵物中含有大量的阿魏酸，含量为4.16mg/L。

实验例2日本紫珠果发酵物的滋养头皮、促进毛发生长作用检测

选取大小及生理指标处在同一水平的小鼠，先饲养一周，熟悉环境。受试样品分别为各实施例和对比例中的紫珠果发酵物，以及各组的无菌水空白对照组。

实验步骤：

小鼠背部脱毛，注意不要刮伤背部皮肤。实验侧涂抹各实施例、对比例制备的样品，对照侧涂抹无菌水。每天涂抹两次，每次用量为10mL，连续涂抹24天。实验最后一天处死小鼠，取小鼠脱毛区皮肤，制成石蜡切片，观察测定切片中毛发生长数量及真皮层厚度。

1、首次实验对实施例1、2、3、4、5这五组实验组和一组空白对照组进行测试。一共选取36只小鼠，每组6只。

生长率的计算公式如下：生长率＝(实验组-对照组)/对照组；

实验结果如表1和表2所示。

表1毛囊内头发生长数量检测结果(

n＝6，单位：根)

项目

空白对照组

实施例1

实施例2

实施例3

实施例4

实施例5

实验组

16.8±3.1

23.0±2.2

20.4±2.0

24.0±2.2

23.6±2.7

21.2±2.0

对照组

16.0±2.0

15.0±2.0

15.0±2.0

16.0±3.3

15.5±2.5

14.3±3.3

生长率

5.0％

53.3％

36.0％

50.0％

51.6％

48.3％

P值

≥0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

从表1中结果可知，与对照组相比，各实施例的日本紫珠果发酵物均具有明显的生发作用，其中，实施例1、3、4的效果更优。

表2真皮层厚度(

n＝6，单位：μm)

项目

空白对照组

实施例1

实施例2

实施例3

实施例4

实施例5

实验组

388.2±34.0

484.1±34.7

445.0±39.2

463.1±35.2

479.9±28.6

464.2±27.6

对照组

386.7±32.7

398.4±32.7

404.5±44.3

385.3±40.2

397.3±23.7

387.5±20.7

生长率

0.4％

21.5％

10.0％

20.2％

20.8％

19.8％

P值

≥0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

≤0.05

由表2的结果可知，各实施例的真皮层生长率均显著高于对照组，说明各实施例的日本紫珠果发酵物能够促进真皮层生长，其中，实施例1、3、4的效果更优。

2、根据上述1中的实验结果进一步对熟化条件的影响进行分析，以实施例1、6、7、8为实验组，一组空白组，选取30只小鼠，每组6只。实验结果如表3和表4所示。

表3毛囊内头发生长数量检测结果(

n＝6，单位：根)

从表3的结果可知，实施例1的发酵物的促进头发生长的效果显著高于其他实施例组。

表4真皮层厚度(

n＝6，单位：μm)

项目	空白对照组	实施例1	实施例6	实施例7	实施例8
						实验组	387.3±31.3	460.4±34.0	434.2±34.0	442.1±35.3	447.8±37.0
对照组	385.4±29.8	379.9±30.3	390.5±31.2	389.5±28.2	392.1±22.0
						生长率	0.5％	21.2％	11.2％	13.5％	14.2％
P值	≥0.05	≤0.05	≤0.05	≤0.05	≤0.05

从表4的结果可以看出，各实施例实验组的真皮层的生长率均比空白对照组提高，差异显著，其中实施例1的真皮层的生长率明显高于其他实验组。

3、根据以上1、2的实验结果，进一步以实施例1和各对比例得到的发酵物样品为实验组，以无菌水为空白对照组进行实验，选取42只小鼠，每组6只，实验结果如表5和表6所示。

表5毛囊内头发生长数量检测结果(

n＝6，单位：根)

表6真皮层厚度(

n＝6，单位：μm)

从表5和表6的实验结果可知，实施例1的发酵物的头发生长率和真皮层生长率均显著高于各对比例。

实验例3日本紫珠果发酵物清除自由基效果分析

实验方法：以实施例1-8、对比例1-5得到的发酵物样品为实验组，并且设置空白组，空白组的样品为纯化水。

实验步骤：取0.2mL实验组发酵物样品，加入4mL醋酸缓冲溶液，3.8mL乙醇和2mLDPPH，混合均匀后室温避光放置30min，测定517nm处的吸光度M。取0.2mL实验组样品，加入4mL醋酸缓冲溶液，3.8mL乙醇，2mL蒸馏水，混合均匀后室温避光放置30min，测定517nm处的吸光度M₁。取4mL醋酸缓冲溶液，4mL乙醇和2mLDPPH，混合均匀后室温避光放置30min，测定517nm处的吸光度M₀。

自由基的清除率＝[M₀-(M-M₁)]/M₀×100％。

实验结果如表7所示。

表7各组样品多DPPH自由基的清除率(

n＝3)

注：“*”表示同一项目与空白组相比P≤0.05，差异显著。

以上结果显示，各实施例的发酵物样品对DPPH自由基的清除作用显著高于各对比例，其中，实施例1的发酵物对自由基的清除效果最强，达到了90.22％。

实验例4日本紫珠果发酵物修复发丝损伤作用分析

选取主诉有染烫经历，头发毛躁的人群39个。分为实验组、对照组，每组3人。其中实验组，以实施例1-8、对比例1-5制备的发酵液为样品，对照组则以纯净水为样品，每日涂抹在发丝上，涂抹的用量为10mL。连续使用2周。观察样品使用前后头发光泽、韧性、发丝在显微镜下发丝毛鳞片的状态。

光泽度评分标准：非常顺滑有光泽(5分)、可见的光泽度较顺滑(4分)、光泽度不明显但在灯光下有光泽(3分)、部分区域有光泽(2分)、整体无光泽(1分)、毛躁无光泽(0分)；

韧性：拉扯不易断，有明显的伸缩性(3分)、不易断，拉扯伸缩性不好(2分)、不易断，但是伸缩性不好(1分)、易断，没有伸缩性(0分)。

毛小皮状态：发丝外表面平整(5分)、发丝外表面平整可见较少裂隙(4分)、表面平整，裂隙较多(3分)；表面粗糙，裂隙较大较多(2分)；表面粗糙，可见明显断裂面(1分)；表面非常粗糙，暴露内部毛皮质(0分)。

结果如表8所示。

表8发丝状态评分(

n＝3)

注：“*”表示同一项目与空白组对比P≤0.01，差异极显著。

从表8的实验结果可知，各实施例的所有项目评分均明显高于各对比例，实施例的发酵物在修护发丝上具有明显的优势。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (12)

1.一种日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，以日本紫珠果为原料，包括将所述日本紫珠果经酶解处理、微生物发酵和发酵后熟化处理的步骤，

所述酶解处理使用的酶包括纤维素酶，

所述微生物发酵使用的发酵菌剂包括类植物乳杆菌和酵母，所述类植物乳杆菌为类植物乳杆菌GUFHSL-70，保藏编号为CCTCC M2016002，所述酵母为活性干酵母；

所述发酵后熟化处理为将微生物发酵得到发酵液经过滤得到发酵上清液，将灭菌后的发酵上清液进行发酵后熟化处理，所述发酵后熟化处理为在26℃-37℃、无空气流动环境条件下自然熟化36h-72h。

2.根据权利要求1所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，所述发酵为先在30-37℃、湿度45-55％条件下发酵64-80h；经放气搅拌后，再继续发酵40-50h。

3.根据权利要求2所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，所述类植物乳杆菌与所述酵母的接种量之比为(0.1-5.0)：(0.1-2.0)。

4.根据权利要求3所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，所述类植物乳杆菌的接种量为10⁷-10¹²cfu/g日本紫珠果，所述酵母的接种量为10⁹-10¹⁵cfu/g日本紫珠果。

5.根据权利要求1～4任一项所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，将所述后熟化处理得到的熟化产物经过滤得到所述发酵物。

6.根据权利要求1～4任一项所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，所述酶解处理中，纤维素酶的用量为10-50U/g日本紫珠果。

7.根据权利要求6所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，所述酶解处理为在30-40℃条件下处理5-8h。

8.根据权利要求1～4、7任一项所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，在所述酶解前先将所述日本紫珠果粉碎至60-120目。

9.根据权利要求8所述的日本紫珠果发酵物的制备方法，其特征在于，将粉碎后的日本紫珠果与10-100倍质量的水混合后再进行所述酶解处理。

10.权利要求1～9任一项所述的制备方法制备得到的日本紫珠果发酵物。

11.权利要求10所述的日本紫珠果发酵物在制备用于头发的产品中的应用。

12.一种用于头发的产品，其特征在于，其包括权利要求10所述的日本紫珠果发酵物。

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