CN112137911B - 含有n-酰基二肽衍生物和乙醇酸的局部用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明题为“含有N‑酰基二肽衍生物和乙醇酸的局部用组合物”。本发明提供了包含N‑酰基二肽衍生物和乙醇酸的组合的局部用组合物。该组合物提供N‑酰基二肽衍生物向皮肤中的增强的渗透。

Description

含有N-酰基二肽衍生物和乙醇酸的局部用组合物

技术领域

本发明提供了包含N-酰基二肽衍生物和乙醇酸的组合的局部用组合物。该组合物提供了二肽衍生物向皮肤中的增强的渗透。

背景技术

美国专利9,067,969公开了多种N-酰基二肽衍生物，它们治疗范围从癌症和免疫障碍到皮肤系统的病症和障碍的疾病和障碍。专利‘969公开了含有缬氨酸(Val)和丙氨酸(Ala)的N-酰基二肽衍生物的子集，其作为用于处理老化相关的皮肤变化等等的优选化合物。专利‘969公开了用于此的多种施用途径，包括局部施用途径。公开了局部用组合物诸如溶液、凝胶、洗剂、霜膏、乳液等，并且此类组合物中N-酰基二肽衍生物的量按总组合物的重量或体积计可在0.001％至99.9％的范围内。专利人还公开了这些组合物可含有其它美容剂或药剂，包括羟基酸诸如乙醇酸，以及数百种其它药剂。

虽然专利‘969的二肽衍生物包含碱性基团，诸如通过酰化改性的氨基基团，使得它们本质上不再是两性的，并因此更易于渗透皮肤，但是仍期望改善它们的皮肤渗透特性。

申请人现已发现用于增加含有Val和Ala的N-酰基二肽衍生物向皮肤中的渗透的改善的组合物和方法。具体地讲，申请人已发现，当与特定量的乙醇酸组合时，这些化合物的渗透惊人地增加。因此，提供了使用式R₁-Val-Ala-R₂的N-酰基二肽衍生物和乙醇酸的组合的新组合物和方法。

发明内容

本发明提供了包含N-酰基二肽衍生物的局部用组合物，该N-酰基二肽衍生物具有下式：

R₁-Val-Ala-R₂

或其异构体或盐，其中Val为缬氨酸，Ala为丙氨酸，R₁为具有至多19个碳原子的酰基基团；R₂为OR₃、NHR₄或NHNHR₅；R₃为H、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；并且R₄和R₅各自独立地为H、OH、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团，以及乙醇酸，其中组合物包含至多约10重量％的乙醇酸。

本发明还提供了一种处理皮肤老化迹象的方法，该方法包括向需要处理至少一种皮肤老化迹象的皮肤局部施用包含N-酰基二肽衍生物的局部用组合物，该N-酰基二肽衍生物具有下式：

R₁-Val-Ala-R₂

或其异构体或盐，其中Val为缬氨酸，Ala为丙氨酸，R₁为具有至多19个碳原子的酰基基团；R₂为OR₃、NHR₄或NHNHR₅；R₃为H、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；并且R₄和R₅各自独立地为H、OH、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团，以及乙醇酸，其中组合物包含至多约10重量％的乙醇酸。

本发明还提供了增加N-酰基二肽衍生物向皮肤中的渗透的方法，该N-酰基二肽衍生物具有下式：

R₁-Val-Ala-R₂

或其异构体或盐，其中Val为缬氨酸，Ala为丙氨酸，R₁为具有至多19个碳原子的酰基基团；R₂为OR₃、NHR₄或NHNHR₅；R₃为H、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；并且R₄和R₅各自独立地为H、OH、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团，该方法包括向皮肤局部施用在包含乙醇酸的局部用组合物中的N-酰基二肽衍生物，其中乙醇酸的量占组合物的至多约10重量％。

具体实施方式

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。将本文提及的所有出版物、专利申请、专利以及其它参考文献以引用方式并入本文。

如本文所用，“局部地施用”意指例如用手或涂敷器(诸如擦拭物、滚筒或喷雾器)直接涂抹在或铺展在外层皮肤、头皮或毛发上。

如本文所用，“美容上可接受的”意指该术语描述的成分适于与组织(例如，皮肤或毛发)接触使用而不会引起不适当的毒性、不相容性、不稳定性、剌激性、变应性应答等。

如本文所用，“美容上可接受的活性剂”是对皮肤或毛发具有美容或治疗效果的化合物(合成的或天然的)。

本发明的组合物适用于处理皮肤老化迹象。如本文所用，“皮肤老化迹象”包括存在包括细纹和皱纹在内的纹路、弹性损失、皮肤不均、斑疤、皮肤厚度减小以及胶原、糖胺聚糖、蛋白聚糖、弹性蛋白或糖蛋白(包括纤连蛋白)的异常或减弱合成。在一个实施方案中，老化迹象选自存在纹路、细纹、皱纹、弹性损失以及胶原、糖胺聚糖、蛋白聚糖、弹性蛋白或糖蛋白(包括纤连蛋白)的异常或减弱合成。

如本文所用，“治疗(treatment/treating)”意指改善、预防或逆转病症、疾病或障碍，或它们的至少一种可识别的症状。在一个实施方案中，“治疗(treatment/treating)”是指改善、预防或逆转与所治疗的病症、疾病或障碍相关的至少一个可测量的身体参数，这不一定是在所治疗的受试者中或由所治疗的受试者可辨识的。在另一个实施方案中，“治疗(treatment/treating)”是指抑制或减缓病症、疾病或障碍的进展，可以是身体上的(例如稳定可辨识的症状)，也可以是生理上的(例如稳定身体参数)，或者两者兼有。在另一个实施方案中，“治疗(treatment/treating)”是指延缓病症、疾病或障碍的发作。

在某些实施方案中，本发明的组合物作为预防措施施用。如本文所用，“预防(prevention/preventing)”是指降低患上给定病症、疾病或障碍的风险。

更广泛地讲，本发明的组合物还可用于治疗或预防美容的、皮肤病学的或其他病症和障碍，包括但不限于与皮肤、指/趾甲和毛发相关的感染、皮肤或黏膜皮肤组织的失衡或紊乱；口腔、阴道和肛门粘膜；角化障碍；炎症；与内在和外在老化相关联的变化，以及可能与皮肤系统相关或可能与皮肤系统无关的其他变化。表现形式包括但不限于油性皮肤；痤疮；红斑痤疮；老年斑；瑕疵皮肤；疹斑；脂肪团；皮肤病；皮炎；皮肤、指/趾甲和毛发感染；头皮屑；皮肤、指/趾甲和毛发的干燥或松弛；干燥症；炎症或湿疹；弹性组织变性；疱疹；角化过度；皮肤色素沉着过度；鱼鳞病；角化病；雀斑；黑斑；斑点皮肤；假性毛囊炎；光老化和光损伤；瘙痒症；牛皮癣；皮纹；妊娠纹；皮肤、指/趾甲板和毛发变薄；疣；皱纹；口腔或齿龈疾病；刺激、发炎、发红、不健康、受损或异常粘膜、皮肤、毛发、指/趾甲、鼻孔、耳道、肛门或阴道病症；真皮组分的分解、缺陷合成或修复；胶原、糖胺聚糖、蛋白聚糖和弹性蛋白的异常或减弱合成，以及此类组分在表皮中的水平降低；不均匀的肤色；皮肤、指/趾甲和毛发表面不均匀和粗糙；皮肤、指/趾甲和毛发的回弹力、弹性和可卷曲性损失或减少；松弛；缺乏皮肤、指/趾甲和毛发润滑和光泽；指/趾甲和毛发脆性和分叉；皮肤泛黄；反应性、刺激或毛细管扩张的皮肤；以及暗沉且看起来较老的皮肤、指/趾甲和毛发。此外，本发明的组合物可用于皮肤、指/趾甲和毛发的一般护理；改善皮肤肌理和毛孔、发亮和红润；使皮肤柔软、光滑、清新、均衡、明显干净、均匀肤色且更加亮白；增加皮肤填充度和丰满度；以及用于皮肤漂白和增亮以及伤口愈合；减少或防止腋下、裆部、手掌或身体的其它部分出汗或有汗液。

如本文所用，术语“受试者”意指将向或已经向其施用本发明的组合物的任何动物，优选哺乳动物，最优选人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于奶牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猴子以及人。在一个优选的实施方案中，受试者是人。

如本文所用，“皱纹”包括微细纹、微皱纹或粗皱纹。皱纹的示例包括但不限于眼部周围的细纹(例如“鱼尾纹”)、前额和颊皱纹、眉心纹和嘴部周围的笑纹。

如本文所用，“弹性损失”包括皮肤或组织的弹性或结构完整性的损失，包括但不限于松垂、松弛和松散的组织。弹性或组织结构完整性的损失可由多种因素所致，包括但不限于疾病、衰老、激素变化、机械创伤、环境损害，或者是向组织施用产品诸如美容品或药物的结果。

如本文所用，“皮肤不均”意指与弥漫状或斑驳状色素沉着有关的皮肤状况，该色素沉着可分类为色素沉着过度，诸如发炎后色素沉着过度。

如本文所用，“斑疤”意指与发红或红斑相关的皮肤状况。

如本文所用，“美容品”是指能保留、恢复、给予、刺激或增强体美外观或似乎能增进美貌或年轻的美化物质或制品，尤其是涉及组织或皮肤的外观时。

如本文所用，“美容上有效量”意指足以处理或预防一种或多种皮肤老化迹象、但充分低以避免严重副作用的量。化合物或组合物的美容上有效量将会随以下因素而变：所治疗的具体病症、最终用户的年龄和身体状况、所治疗/预防的病症的严重程度、治疗的持续时间、其它治疗的性质、所采用的具体化合物或产品/组合物、所采用的具体美容上可接受的载体等等。

除非另外指明，否则百分比或浓度是指重量百分比或重量浓度(即％(重量/重量))。除非另外阐明，否则所有范围均包括端值，例如，“4至9”包括端值4和9。

N-酰基二肽衍生物

组合物包含一种或多种N-酰基二肽衍生物，该N-酰基二肽衍生物具有下式：

R₁-Val-Ala-R₂

或其异构体或盐，其中Val为缬氨酸，Ala为丙氨酸，R₁为具有至多19个碳原子的酰基基团；R₂为OR₃、NHR₄或NHNHR₅；R₃为H、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；并且R₄或R₅各自独立地为H、OH、具有至多19个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团；可使用前述的混合物。

在一个实施方案中，二肽衍生物选自由以下组成的组：N-Ac-Val-Ala-NH₂、N-Ac-Val-Ala-OH、N-Ac-Val-Ala-NHOH、N-Pr-Val-Ala-NH₂和N-Pr-Val-Ala-OH，其中Ac为乙酰基并且Pr为丙酰基。

在另一个实施方案中，二肽衍生物为N-Ac-Val-Ala-NH₂，其中Ac为乙酰基(N-乙酰基-L-缬氨酸-L-丙氨酰胺)。

N-酰基二肽衍生物可通过本领域已知的常规合成方法制备。

基于组合物的总重量计，组合物中N-酰基二肽衍生物的量可例如在约0.001重量％至约90重量％的范围内。在一个实施方案中，基于组合物的总重量计，组合物中N-酰基二肽衍生物的量为约0.01重量％至约2重量％。在另一个实施方案中，基于组合物的总重量计，组合物中N-酰基二肽衍生物的量为约0.1重量％至约1重量％。在另一个实施方案中，基于组合物的总重量计，组合物中N-酰基二肽衍生物的量为约0.5重量％。

在一个实施方案中，二肽衍生物为N-Ac-Val-Ala-NH₂，并且基于组合物的总重量计，组合物含有约0.1重量％至约1重量％、优选约0.5重量％的N-Ac-Val-Ala-NH₂。

乙醇酸

组合物还含有乙醇酸。基于组合物的总重量计，组合物中乙醇酸的量为约10重量％或更少。

在一个实施方案中，基于组合物的总重量计，组合物含有约1重量％至约8重量％的乙醇酸。

在另一个实施方案中，基于组合物的总重量计，组合物含有约1重量％至约4重量％的乙醇酸。

乙醇酸可从多种来源商购获得，例如购自DuPont的GLYPURE(70重量％的乙醇酸水溶液)。

其它美容上可接受的活性剂

组合物可含有一种或多种其它美容上可接受的活性剂。

美容上可接受的活性剂包括例如抗痤疮剂、光泽控制剂、抗微生物剂、抗炎剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光防护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、增能剂、抗汗剂、收敛剂、除臭剂、紧致剂、抗硬剂以及用于毛发和/或皮肤调理的试剂。

基于组合物的总重量计，组合物中其它美容上的活性剂的量可在组合物的约0.001重量％至约20重量％的范围内，例如组合物的约0.005重量％至约10重量％的范围内，诸如组合物的约0.01重量％至约5重量％的范围内。

美容上可接受的活性剂可选自例如其它α羟基酸，多羟基酸，其它二肽，三肽，过氧化苯甲酰，D-泛醇类胡萝卜素，类视色素诸如视黄醇和棕榈酸视黄酯，神经酰胺，多不饱和脂肪酸，必需脂肪酸，酶诸如漆酶，酶抑制剂，矿物质，激素诸如雌激素，类固醇如氢化可的松、2-二甲基氨乙醇，铜盐诸如氯化铜，多肽诸如六胜肽和三胜肽、含铜的那些，辅酶Q10，氨基酸诸如脯氨酸，维生素，乳糖醛酸，乙酰辅酶A，烟酸，核黄素，硫胺，核糖，电子转运蛋白诸如NADH和FADH2，天然提取物诸如来自芦荟、野甘菊、燕麦片、莳萝、黑莓、毛泡桐、阿斯彭柠檬的那些，间苯二酚诸如4-己基间苯二酚，姜黄素，糖胺诸如N-乙酰基葡糖胺，以及它们的衍生物和混合物。

维生素的示例包括但不限于维生素A、维生素B类(诸如，维生素B3、维生素B5和维生素B12)、维生素C、维生素K和不同形式的维生素E(像α、β、γ和Δ生育酚或它们的混合物)以及它们的衍生物。

其它羟基酸的示例包括但不限于乳酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸和酒石酸。

抗氧化剂的示例包括但不限于水溶性抗氧化剂，诸如巯基化合物及其衍生物(例如，焦亚硫酸钠和N-酰基-半胱氨酸)、硫辛酸和二氢硫辛酸、白藜芦醇、乳铁蛋白以及抗坏血酸和抗坏血酸衍生物(例如，抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明的组合物中的油溶性抗氧化剂包括但不限于丁基化羟基甲苯、类视色素(例如，视黄醇和棕榈酸视黄酯)、生育酚类(例如，醋酸生育酚酯)、生育三烯酚类和泛醌。含有适用于本发明的组合物中的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：含有类黄酮和异黄酮类以及它们的衍生物(例如染料木黄酮和木质素异黄酮(diadzein))的提取物、含有白藜芦醇的提取物等等。此类天然提取物的示例包括葡萄籽、绿茶、松树皮和蜂胶。

局部用组合物

可将本发明的组合物局部施用于皮肤或毛发。因此，该组合物还可包含美容上可接受的局部用载体。该载体可占组合物的约25重量％至约99.99重量％(例如占组合物的约80重量％至约99重量％)。在本发明的优选实施方案中，美容上可接受的局部用载体包括水。

在一个实施方案中，载体包含二月桂酸甘油酯、硬脂基聚氧乙烯醚10和甘油中的一种或多种。

可将组合物制成多种产品类型，包括(但不限于)洗剂、霜剂、凝胶、棒状物、喷剂、膏剂、清洁液体洗剂和固体皂、洗发剂和护发剂、发胶、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃须霜、擦拭物、贴片、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤面膜、膜和化妆品，如粉底和睫毛膏。这些产品类型可含有多种美容上可接受的局部用载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液(诸如微乳液和纳米乳液)、凝胶、固体和脂质体。下面是此类载体的非限制性示例。其它载体可由本领域的普通技术人员进行配制。

可用于本发明的组合物可被配制为溶液。溶液通常包含水性溶剂或有机溶剂(例如，约50％至约99.99％或约90％至约99％的美容上可接受的水性溶剂或有机溶剂)。合适的有机溶剂的示例包括：丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油、1,2,4-丁三醇、山梨醇酯、1,2,6-己三醇、乙醇以及它们的混合物。

可用于本主题发明的组合物可配制为包含润肤剂的溶液。此类组合物优选含有约2％至约50％的一种或多种润肤剂。如本文所用，“润肤剂”是指用于诸如通过预防水经表皮从皮肤流失来预防或缓解干燥的物质。润肤剂的示例包括但不限于在Pepe、Wenninger和McEwen编著的《国际化妆品成分字典及手册》(International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook)第2930-2936页(美国化妆品及香料协会，Washington,D.C.，第9版，2002)(在下文中，“ICI手册”)中列出的那些。特别合适的润肤剂的示例包括植物油、矿物油、脂肪酸酯等。

可由此类溶液制备洗剂。洗剂通常含有约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的一种或多种润肤剂和约25％至约90％(例如，约60％至约80％)的水。

可由溶液配制的另一类产品为霜膏。霜膏通常含有约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的一种或多种润肤剂和约25％至约85％(例如，约50％至约75％)的水。

本发明的组合物可包含水，或者另选地为无水的或为不包含水而是包含有机溶剂和/或有机硅溶剂、油、脂质和蜡的膏剂。膏剂可含有动物油或植物油或半固体烃类的简单底料。膏剂可含有约2％至约10％的一种或多种润肤剂和约0.1％至约2％的一种或多种增稠剂。增稠剂的示例包括但不限于ICI手册第2979-2984页中列出的那些。

组合物可被配制为乳液。如果局部用载体是乳液，则约1％至约10％(例如约2％至约5％)的该局部用载体含有一种或多种乳化剂。乳化剂可为非离子的、阴离子的或阳离子的。乳化剂的示例包括但不限于ICI手册第2962-2971页中列出的那些。

洗剂和霜膏可被配制为乳液。通常此类洗剂含有0.5％至约5％的一种或多种乳化剂。此类霜膏通常含有约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的一种或多种润肤剂；约20％至约80％(例如，30％至约70％)的水；以及约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的一种或多种乳化剂。

水包油型和油包水型的单乳液皮肤护理制剂诸如洗剂和霜膏是美容领域中熟知的并且可用于本主题发明。多相乳液组合物，诸如水包油包水型或油包水包油型，也可用于本主题发明。一般来讲，此类单乳液或多相乳液含有水、润肤剂和乳化剂作为主要成分。

本发明的组合物也可被配制为凝胶(例如，水性凝胶、醇凝胶、醇/水凝胶或油凝胶，使用合适的胶凝剂)。用于水性凝胶和/或醇凝胶的合适胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。适用于油(诸如矿物油)的胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常含有约0.1重量％和5重量％之间的此类胶凝剂。

本发明的组合物也可被配制成固体制剂(例如，蜡基棒、条皂组合物、粉末或含有粉末的擦拭物)。

除了上述组分外，该组合物还可含有多种其它油溶性物质和/或水溶性物质，这些物质通常用于组合物中，按本领域既定的水平用于皮肤和毛发上。

该组合物中还可存在多种其它物质，如本领域已知的。这些包括湿润剂、pH调节剂、螯合剂(如，EDTA)、芳香剂、染料和防腐剂(如，对羟基苯甲酸脂)。

含有本发明的此类组合物的组合物和制剂以及产品可使用本领域的普通技术人员熟知的方法来制备。

在一个实施方案中，局部用组合物包含含有至少两种相的乳液，这些相选自水相、油相和非离子脂质相。

水相含有水。

水相还可含有结构化剂，诸如卡波姆或其他增稠剂，例如黄原胶、卡拉胶、聚丙烯酸酯-13；聚异丁烯；聚山梨酸酯20；聚丙烯酸酯-13/聚异丁烯/聚山梨酸酯-20共混物、硬脂基二甲基苄基铵锂蒙脱石等，包括它们的混合物。

优选地，组合物包含增稠剂，并且增稠剂为丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物。

油相含有至少一种美容上可接受的油。

如本文所用，术语“油”意指疏水性材料，其可有助于平衡分子间力以形成胶束聚集体或限制胶束聚集体的尺寸。油还用作润肤剂成分，以有益于产品的铺展性、皮肤感觉以及疏水性活性成分(诸如但不限于，维生素D、E、K和A)和防晒剂过滤器的递送。

可用于组合物的油包括基于组合物的总重量计，约20％至50％范围内的多种烃基油、有机硅、脂肪酸衍生物、甘油酯、植物油、植物油衍生物、烷基酯、蜡酯、蜂蜡衍生物、甾醇和磷脂以及它们的组合。

合适的烃油包括凡士林、矿物油、微晶蜡、鲨烯以及它们的组合。

硅油包括聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、苯基聚二甲基硅氧烷和环状聚硅氧烷以及它们的组合。在25℃下粘度为约0.5至约100,000厘沲的硅油也可用于组合物。

甘油酯包括蓖麻油、向日葵籽油、椰子油以及衍生物、植物油以及衍生物、棕榈油、霍霍巴油、牛油树脂、羊毛脂以及它们的组合。

烷基酯油包括但不限于脂肪酸的异丙基酯和长链脂肪酸的酯。更优选地，下列烷基酯是可用的：棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、棕榈酸异己酯、油酸癸酯、异壬酸异壬酯以及它们的组合。

非离子脂质相包含一种或多种非离子脂质，诸如具有含有约3至约50个碳原子、并且优选约10至约18个碳原子的脂肪酸链的甘油单酯；具有含有约5个碳原子至约25个碳原子、并且优选约10个碳原子至约18个碳原子的脂肪酸链的甘油二酯；烷氧基化醇；烷氧基化烷基苯酚；烷氧基化酸；烷氧基化酰胺；烷氧基化糖衍生物；天然油或蜡的烷氧基化衍生物；聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物；具有含有约10个碳原子至约18个碳原子的脂肪酸链的聚氧乙烯醚脂肪酸；类固醇；醇的脂肪酸酯，其中脂肪酸为具有约10个碳原子至约20个碳原子的直链或支链，并且醇为具有1至10个碳原子的直链或支链；以及它们的混合物，其中烷氧基化脂质用环氧乙烷或环氧丙烷烷氧基化，其中环氧乙烷是优选的。

合适的甘油单酯的示例包括但不限于癸酸甘油酯、辛酸甘油酯、椰油酸甘油酯、芥酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、异硬脂酸甘油酯、羊毛脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、对氨基苯甲酸甘油酯、棕榈酸甘油酯、蓖麻油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、巯基乙酸甘油酯以及它们的混合物，其中月桂酸甘油酯和肉豆蔻酸甘油酯是优选的。

合适的甘油二酯的示例包括但不限于二月桂酸甘油酯、二油酸甘油酯、二肉豆蔻酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、glyceryl sesuioleate、硬脂酸乳酸甘油酯以及它们的混合物，其中二月桂酸甘油酯和二肉豆蔻酸甘油酯是优选的。

合适的聚氧乙烯脂肪醚的示例包括但不限于聚氧乙烯鲸蜡基/硬脂基醚、聚氧乙烯胆固醇醚、聚氧乙烯月桂酸酯或二月桂酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯或二硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂基或硬脂基醚以及它们的混合物，其中聚氧乙烯头部基团的范围为约2至约100个基团。优选的聚氧乙烯脂肪醚包括具有约3至约10个氧乙烯单元的聚氧乙烯硬脂基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、和聚氧乙烯月桂基醚。

合适的类固醇的示例包括但不限于胆固醇、β谷固醇、红没药醇以及它们的混合物。

合适的醇的脂肪酸酯的示例包括肉豆蔻酸异丙酯、正丁酸脂肪酸异丙酯、正己酸异丙酯、正癸酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯。

可用作本发明组合物中的非离子脂质的示例性烷氧基化醇具有下式所示的结构：

R₅--(OCH₂CH₂)y—OH

其中R₅为具有约6至约22个碳原子的支链或非支链烷基基团，并且y介于约4和约100之间，并且优选介于约10和约100之间。优选的烷氧基化醇是其中R₅为月桂基基团并且y的平均值为23的物质，该物质被称为“月桂基聚氧乙烯醚23”，并且可以商品名“BRIJ 35.”购自ICI Americas,Inc.(Wilmington,Del.)。

另一种示例性烷氧基化醇为羊毛脂醇的乙氧基化衍生物。羊毛脂醇为由羊毛脂水解获得的有机醇的混合物。羊毛脂醇的乙氧基化衍生物的示例为羊毛脂醇聚醚10，该羊毛脂醇聚醚10为羊毛脂醇的聚乙二醇醚，平均乙氧基化值为10。

另一种示例性烷氧基化醇为聚氧丙烯-聚氧乙烯烷基醚，例如PPG-12-丁醇聚醚16。这种材料可以商品名“UCON Fluid 50-HB-660.”购自Amerchol Corp.(Edison,N.J.)。

另一类非离子脂质包括烷氧基化烷基苯酚，例如壬苯醇醚14，并且其可以商品名“MAKON 14”购自Stepan Company(Northfield,Ill)。

另一类非离子脂质为烷氧基化酸，烷氧基化酸为酸(最通常为脂肪酸)与聚亚烷基二醇的酯，例如PEG-8月桂酸酯。

另一类非离子脂质包括烷氧基化酰胺，例如PEG-6椰油酰胺。

另一类非离子脂质包括烷氧基化糖衍生物，例如聚山梨醇酯20，聚山梨醇酯20为山梨醇和山梨醇酐的月桂酸酯的混合物，主要由单酯构成，与约20摩尔环氧乙烷缩合。该材料可以商品名“TWEEN 20”购自ICI Americas(Wilmington,Del.)。

可用于本发明组合物中的烷氧基化糖衍生物的另一个示例是PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯，PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯为甲基葡萄糖和硬脂酸的倍半酯的聚乙二醇醚，含有平均20摩尔环氧乙烷，并且可以商品名“GLUCAMATE SSE-20”购自AmercholCorp.(Edison,N.J.)。

另一类非离子脂质包括天然油和蜡的烷氧基化衍生物。此类材料的示例包括PEG-40羊毛脂、PEG-40蓖麻油和PEG-40氢化蓖麻油。

另一类非离子脂质包括聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，例如泊洛沙姆101和泊洛沙姆182。

优选的非离子脂质包括聚氧乙烯脂肪醚、甘油二酯以及它们的混合物。更优选的非离子脂质包括聚氧乙烯硬脂基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚和聚氧乙烯月桂基醚、二月桂酸甘油酯、二肉豆蔻酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯以及它们的混合物，由此每个醚具有约5至约10个氧乙烯单元。

在一个实施方案中，其中，皮肤刺激的减少是一个值得关注的问题，优选使用在亲水性头部基团部分上具有更多量碳原子的非离子脂质，或者另选地，使用在疏水性脂肪酸链部分上具有更多量碳原子的非离子脂质。前者可通过如下来实现：使例如聚氧乙烯10硬脂基醚的头部基团上的碳原子的量从约10个碳原子增加到约15至约20个碳原子。后者可通过如下来实现：使例如甘油二酯的12碳脂肪酸尾部上的碳原子的量从约14个碳原子增加到约16个碳原子。

基于组合物的总重量计，本发明的组合物包含约1％至约10％，并且优选约3％至约7％的非离子脂质。

在一个优选的实施方案中，非离子脂质相包含水、二月桂酸甘油酯、硬脂基聚氧乙烯醚10和甘油。

pH

在一个实施方案中，局部用组合物具有低pH。例如，pH可小于约4或小于约3.3。然而，组合物不需要具有低pH。

局部用组合物可包含缓冲剂，诸如乳酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、葡糖酸、或葡糖酸内酯。优选地，缓冲剂为乳酸。

通常，组合物含有约3重量％至约12重量％、或约4重量％至约8重量％的缓冲剂。

处理皮肤的方法

根据本发明，皮肤老化迹象可通过将局部用组合物局部施用至需要处理至少一种皮肤老化迹象的皮肤来处理，该局部用组合物包含如本文所述的N-酰基二肽衍生物和至多约10重量％的乙醇酸。

同样根据本发明，N-酰基二肽衍生物向皮肤中的渗透可通过在还包含至多约10重量％乙醇酸的组合物中局部施用它而增加。

在一个实施方案中，与不含有乙醇酸或含有大于10重量％乙醇酸但其它方面相同的组合物相比，包含N-酰基二肽衍生物和至多占组合物的约10重量％的量的乙醇酸的根据本发明的组合物提供至少约两倍、优选约三倍的或至多七倍的N-酰基二肽衍生物向皮肤中的累积递送增加。

以下非限制性实施例将进一步说明本发明。采用以下皮肤渗透方法和高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)方法。

皮肤渗透方法

根据经济合作与发展组织(OECD)概述的指导，执行体外皮肤渗透实验。

将人尸体刃厚皮肤样本剥至300μm的标称厚度，并且在-80℃下储存于RoswellPark Memorial Institute(RPMI)-1640溶液中，用苯唑西林钠和庆大霉素保存。在每次皮肤渗透研究中，使用从一个供体获得的一整包(约1/4平方英尺)皮肤，以适应每次约50-60个皮肤样品的研究。当准备使用时，将皮肤快速解冻并在去离子水中冲洗，然后切割成约2.25cm²小片，将其安装在静态竖直玻璃Franz扩散池中。非封闭的供体隔室由低玻璃顶盖构成，该顶盖在0.79cm²的暴露表面积上方延伸12mm。受体隔室含有4.5mL的具有0.02％叠氮化钠的达尔伯克氏磷酸盐缓冲(pH 7.4)盐水，以提供延迟微生物生长的生理上相容的流体。将每个Franz扩散池置于设定在人体温度(37℃)下的Pierce Reacti-Therm^TM加热和搅拌模块(Rockford，IL)的铝狭槽中，以获得与体内条件相当的32℃的皮肤表面温度。用磁力搅拌棒以大约400rpm搅拌受体溶液，以确保贮存器内容物的均质性。

在开始皮肤渗透测量之前，使用氚化水(3H₂O)筛选程序进行皮肤完整性测试，以确保完整的屏障功能。将皮肤样品在Franz扩散池中平衡2小时以确保角质层的部分水合以模拟体内皮肤条件，而不是在解冻后立即对完全水合的皮肤进行皮肤渗透测试，这将增加皮肤渗透性。将150μL剂量的3H₂O溶液(0.4μCi/mL)加入到每个供体隔室中，随后在5分钟接触时间后使用棉签从皮肤表面移除。在给药后30分钟收集受体隔室内容物，并且立即用维持在37℃下的新鲜受体溶液重新填充。将受体样品与10mL Ultima Gold XR液体闪烁混合物混合并通过Beckman LS6500液体闪烁计数器计数1分钟。30分钟暴露持续时间后3H₂O渗透大于2.0μL/cm²的皮肤样品不能用于皮肤渗透研究，而是用作未处理的对照物以提供空白基质用于分析定量或用于评估测试二肽衍生物从皮肤样品中的提取效率。根据3H₂O渗透性将通过皮肤完整性测试的皮肤样品排序，并且基于随机完全区组设计将每个样品分配到处理组以考虑皮肤渗透性的固有可变性，从而能够对二肽衍生物皮肤渗透进行更稳健的处理效果比较。将Franz扩散池洗涤几次以移除残余的3H，平衡过夜，并且在早晨用含有0.1％油基聚氧乙烯醚20的受体溶液洗涤，该受体溶液用于皮肤渗透研究的其余部分用作保持沉降条件的溶解度增强剂。

在即将使用前，并且如果需要，在整个给药方案中，将半固体测试制剂涡旋以充分混合内容物。在给药之前，通过用棉签轻轻擦拭皮肤来干燥皮肤样品表面，然后向皮肤样品给药指定的处理。每种处理测试最少4个平行测定。对于所有测试制剂，用正位移移液管将5μl的测试制剂沉积到皮肤上。使用用测试制剂预润湿的玻璃搅拌棒将制剂均匀铺展在暴露组织(0.79cm₂)的整个表面区域上。小心确保粘性剂量保留在皮肤表面上，而不是沿着供体室的壁。通过重量分析来考虑在铺展程序期间添加/移除的测试制剂的量。根据在给药后48小时完成末端受体隔室取样、皮肤表面清洗、胶带剥离和表皮/真皮皮肤分级分离所需的时间来间隔给药，以使得所有样品能够具有均匀的收集时间。

在给药后6小时、24小时和48小时之后收集整个受体流体内容物，并且在6小时和24小时收集之后用新鲜受体溶液补充受体隔室。在48小时暴露持续时间和最终受体隔室取样后，通过用由5％油基聚氧乙烯醚20的DI水溶液组成的稀释且温和的表面活性剂溶液洗涤，移除未吸收的制剂。用正位移移液管将洗涤溶液的300μL等分试样施加到皮肤表面，用玻璃搅拌棒搅拌30秒以模拟体内洗涤程序，然后使用塑料移液管从供体隔室转移到1.5Eppendorf管中。然后用DI水的500μL等分试样冲洗皮肤两次，用玻璃搅拌棒将该等分试样在皮肤表面上搅拌30秒，并且收集在与表面活性剂洗涤液相同的管中。移除供体室，并用1.5mL 2:1的甲醇:水提取溶剂冲洗，以收集48小时后未被吸收的残余测试制品浓度，并将该体积吸移到单独的1.5Eppendorf管中。使皮肤表面风干大约30分钟，然后用胶带剥离顶层角质层，以移除可能未被充分移除的皮肤表面洗涤液的潜在未吸收的剂量，或模拟48小时后通过脱屑将在体内移除的量。为了实现这一点，将皮肤样本放置在玻璃板上，将D100D-Squame胶带放置在0.79cm²的处理过的表面区域上，并且用D-Squame盘施用装置根据制造商的说明施加均匀的压力15秒。用镊子移除胶带，并置于装有供体室冲洗液的Eppendorf管中，使粘性侧向内，同时确保胶带条充分浸没在提取溶剂中。然后使用镊子小心地从真皮上剥离表皮，并且将分离的皮肤样品置于单独的2mL短小瓶中。将1.5mL 2:1的甲醇:水提取溶剂添加到含有表皮和真皮皮肤样品的每个小瓶中。通过将样品在轨道式震荡器上在室温下以150rpm摇动24小时来提取皮肤表面洗涤液、胶带条和皮肤样品中的二肽衍生物浓度。随后通过含有0.45μm膜的注射器式过滤器过滤样品，并收集在2mL HPLC小瓶中用于分析定量。

对于质量平衡计算，通过将5μL剂量吸移到含有2mL提取溶剂(2:1甲醇:水)的1打兰外壳小瓶中来测量每种制剂中的总分析物含量(每种制剂3个平行测定)。将样品在室温下在轨道式震荡器上以150rpm摇动48小时，然后通过含有0.45μm膜的注射器式过滤器过滤，并收集在2mL HPLC小瓶中用于分析定量。

高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)方法

高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)用于分析使用皮肤渗透方法收集的胶带条(T)、表皮(E)、真皮(D)、洗涤液(W)和受体(R)中N-乙酰基-L-缬氨酸-L-丙氨酰胺的量。

将2-乙酰胺基-N-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-甲基丁酰胺(Aurora Fine ChemicalsLLC，纯度>95％，批号A06.430.527_4)用作内标(IS)。使用Agilent HPLC/MSD系统，系统ID#：SK_1519。所用的流动相为A：0.1％甲酸(FA)(Sigma，试剂级(>95％)，批号#：SHBJ2924)的水溶液(EMD，HPLC级，批号#：57256)，和B：0.1％FA(Sigma)和2mM甲酸铵(Fluka，HPLC级，批号#：BCBQ4532V)的甲醇溶液(EMD，HPLC级，批号#：25777)。柱为得自Agilent的ZorbaxEclipse XDB-C18柱(3.5μm,150×4.6mm ID，S/N:USWA016962)，并且在40℃下使用。如表X所示使用二元梯度洗脱。检测器使用表Y中概述的参数编程

表X

时间(min)	流速(mL/min)	流动相A(％)	流动相B(％)
				0.0	0.8	90.0	10.0
0.5	0.8	90.0	10.0
				8.0	0.8	10.0	90.0
9.0	0.8	10.0	90.0
				9.1	0.8	90.0	10.0
14.0	0.8	90.0	10.0

表Y

如下制备N-乙酰基-L-缬氨酸-L-丙氨酰胺的标准原液(1.0mg/mL)。将大约50g N-乙酰基-L-缬氨酸-L-丙氨酰胺参照标准物置于50mL容量瓶中，并加入30mL MeOH。将混合物超声处理2分钟，用MeOH稀释至刻度，并充分混合。将标准原液在稀释剂(MeOH:水2:1，v/v)中连续稀释以制备最终浓度为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、2.0μg/mL和5.0μg/mL的工作标准物(W-STD)以及最终浓度为0.3μg/mL、1.0μg/mL和4.0μg/mL的工作质量控制标准物(W-QC)。在MeOH中制备内标原液(1.0mg/mL)，然后在稀释剂中稀释以制备浓度为100ng/mL的工作内标溶液(W-IS)。

如下制备校准标准物。将180μL稀释剂加入2.0mL HPLC小瓶中。接下来，添加20μl的W-STD溶液或稀释剂(用于空白)，然后添加800μl的100ng/mL的内标工作溶液或稀释剂(用于双重空白)并涡旋1分钟。如下制备质量控制(QC)样品。将180μL表皮或真皮或洗涤液或受体空白基质加入2.0mL HPLC小瓶中，并加入20μL W-QC溶液。将800μL的100ng/mL的内标工作溶液加入HPLC小瓶中并涡旋1分钟。

如下制备测试样品。将200μL样品加入2.0ml HPLC小瓶中。加入800μL的100ng/mL的内标工作溶液并涡旋1分钟。根据需要，用MeOH:H2O(2:1，v/v)稀释样品溶液。使用上述条件对校准标准物、QC样品和测试样品进行HPLC-MS分析。

实施例1

使用皮肤渗透方法和HPLC-MS方法，测试含有N-Ac-Val-Ala-NH₂的一系列测试组合物对人皮肤样品的渗透。组合物含有表1、2和3中所示的成分。成分的量以基于组合物总重量的重量百分比报道。组合物A-G为对比物。组合物1是根据本发明的。

N-Ac-Val-Ala-NH₂获自Nanjing Pharmatechs Co.,Ltd.。它是粉末。

乙醇酸为70重量％的水溶液(GLYPURE，可从DuPont商购获得)的形式

表1

表2

表3

结果示于表4中。

表4

上述结果示出，含有N-乙酰基缬氨酰丙氨酰胺和乙醇酸的组合的组合物1提供了所有测试的组合物中N-乙酰基缬氨酰丙氨酰胺的最大皮肤渗透。与所有其它组合物相比，组合物1将显著更大(P<0.01)累积量的二肽衍生物递送到皮肤中，并且组合物1提供了所有组合物的最高总生物可利用量，其中生物可利用量显著(P<0.05)高于除组合物E之外的所有组合物。例如，与组合物B所提供的相比，组合物1将约七倍的总生物可利用量的二肽衍生物递送到皮肤中。

可注意到，与组合物B相比，组合物E将四倍的总生物可利用量的二肽衍生物递送到皮肤中，这表明制剂中存在二月桂酸甘油酯、硬脂基聚氧乙烯醚10和甘油中的一种或多种也增加了二肽衍生物向皮肤中的递送。

相比之下，单独增加N-乙酰基缬氨酰丙氨酰胺的剂量不增加其皮肤渗透。

实施例2

使用皮肤渗透方法和HPLC-MS方法，测试含有0.5重量％的N-Ac-Val-Ala-NH₂和0重量％、1重量％、4重量％、8重量％或11重量％的乙醇酸的一系列测试组合物对人皮肤样品的渗透。组合物含有表5中所示的成分。成分的量以基于组合物总重量的重量百分比报道。组合物H-L为对比物。组合物2-4是根据本发明的。

如实施例1中所述获得N-Ac-Val-Ala-NH₂和乙醇酸。

表5

结果示于表6中。

表6

这些结果示出，分别含有1％、4％和8％乙醇酸的组合物2、3和4将最多的二肽衍生物递送到皮肤中。与相同基础配方含有0％乙醇酸的组合物H相比，这些组合物各自将显著(P<0.05)更多的累积量的二肽衍生物递送到皮肤中，从而在皮肤中提供显著更高的二肽衍生物的生物可利用浓度。例如，与组合物H所提供的相比，组合物2-4将约三倍的总生物可利用量的二肽衍生物递送到皮肤中。

令人惊奇的是，与1％、4％和8％乙醇酸组合物相比，将乙醇酸浓度增加至11重量％(组合物I)降低了二肽衍生物向皮肤中的递送，并且与1％和4％乙醇酸组合物相比，显著(P<0.05)降低了二肽衍生物向皮肤中的递送。例如，与组合物2-3所提供的相比，组合物I将低约二至三倍的总生物可利用量的二肽衍生物递送到皮肤中。

此外，与分别含有4重量％葡糖酸内酯和扁桃酸的组合物K和组合物L相比，含有4重量％乙醇酸的组合物3在皮肤中提供两倍生物可利用量的二肽衍生物。

最后，仅将基础配方(组合物H)中的pH调节至3.8(含有乙醇酸的组合物的pH)不影响向皮肤递送的二肽衍生物的水平，如组合物J的结果所示。

Claims (11)

1. 一种用于促进N-酰基二肽衍生物皮肤渗透的包含N-酰基二肽衍生物和乙醇酸的局部用组合物，其中组合物包含：

0.01至2重量%的N-酰基二肽衍生物；和

1至8重量%的乙醇酸，

其中，所述N-酰基二肽衍生物选自：N-Ac-Val-Ala-NH₂、N-Ac-Val-Ala-OH、N-Ac-Val-Ala-NHOH、N-Pr-Val-Ala-NH₂和N-Pr-Val-Ala-OH，其中Ac为乙酰基并且Pr为丙酰基。

2.根据权利要求1所述的局部用组合物，其中，所述N-酰基二肽衍生物为N-Ac-Val-Ala-NH₂，其中Ac为乙酰基。

3.根据权利要求1所述的局部用组合物，所述局部用组合物还包含美容上可接受的局部用载体。

4.根据权利要求3所述的局部用组合物，其中，所述载体包含二月桂酸甘油酯、硬脂基聚氧乙烯醚10和甘油中的一种或多种。

5. 一种局部用组合物在制备用于处理皮肤老化迹象的药物中的应用，所述应用包括向需要处理至少一种皮肤老化迹象的皮肤局部施用局部用组合物，所述局部用组合物包含：

0.01至2重量%的N-酰基二肽衍生物；和

1重量%至8重量%的乙醇酸，

其中，所述N-酰基二肽衍生物选自：N-Ac-Val-Ala-NH₂、N-Ac-Val-Ala-OH、N-Ac-Val-Ala-NHOH、N-Pr-Val-Ala-NH₂和N-Pr-Val-Ala-OH，其中Ac为乙酰基并且Pr为丙酰基。

6.根据权利要求5所述的应用，其中，所述皮肤老化迹象选自由以下组成的组：纹路、弹性损失、皮肤不均、斑疤、皮肤厚度减小、以及胶原、糖胺聚糖、蛋白聚糖或弹性蛋白的异常或减弱合成。

7.根据权利要求5所述的应用，其中，所述皮肤老化迹象是细纹。

8.根据权利要求5所述的应用，其中，所述皮肤老化迹象是皱纹。

9.根据权利要求5所述的应用，其中，所述N-酰基二肽衍生物为N-Ac-Val-Ala-NH₂，其中Ac为乙酰基。

10. 一种局部用组合物在制备用于增加N-酰基二肽衍生物向皮肤中的渗透的药物中的应用，所述N-酰基二肽衍生物选自：N-Ac-Val-Ala-NH₂、N-Ac-Val-Ala-OH、N-Ac-Val-Ala-NHOH、N-Pr-Val-Ala-NH₂和N-Pr-Val-Ala-OH，其中Ac为乙酰基并且Pr为丙酰基，所述应用包括向皮肤局部施用局部用组合物，所述局部用组合物包含：

0.01至2重量%的N-酰基二肽衍生物；和

1重量%至8重量%的乙醇酸。

11.根据权利要求10所述的应用，其中，所述N-酰基二肽衍生物为N-Ac-Val-Ala-NH₂，其中Ac为乙酰基。