CN112126686B - 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用 - Google Patents

一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112126686B
CN112126686B CN202011145188.0A CN202011145188A CN112126686B CN 112126686 B CN112126686 B CN 112126686B CN 202011145188 A CN202011145188 A CN 202011145188A CN 112126686 B CN112126686 B CN 112126686B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mir
renal fibrosis
cells
fibrosis
expression
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011145188.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112126686A (zh
Inventor
崔健
姜薇
赵帆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Renbo Technology Co ltd
Original Assignee
Hebei Renbo Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Renbo Technology Co ltd filed Critical Hebei Renbo Technology Co ltd
Priority to CN202011145188.0A priority Critical patent/CN112126686B/zh
Publication of CN112126686A publication Critical patent/CN112126686A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112126686B publication Critical patent/CN112126686B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明公开了一种肾纤维化早期筛查分子标志物，所述分子标志物为miR‑219a‑2‑3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。进一步，本发明提供了将miR‑219a‑2‑3p用于制备肾纤维化的早期筛查试剂盒，可用于诊断miR‑219a‑2‑3p相关的肾纤维化，从而为有针对性地治疗该疾病提供依据。本发明提供了将miR‑219a‑2‑3p用于制备预防和/或治疗肾纤维化的药物组合物，其中所述miR‑219a‑2‑3p或其模拟物可以促进E‑cadherin表达，抑制Vimentin表达，有利于缓解和/或治疗肾纤维化。

Description

一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用。
背景技术
慢性肾脏疾病是严重威胁人类健康的常见疾病。肾纤维化(renal fibrosis,RF)是慢性肾病的主要病理特征之一，它是肾脏的功能由健康到损伤，再到损坏，直至功能丧失的渐进过程。肾纤维化的主要特征在于肾小管和肾小管周围毛细血管之间的区域病理性纤维状基质的沉积。在病理条件下，肾小管上皮细胞可分化成间充质细胞和活化的成纤维细胞，最终形成肌成纤维细胞，该过程被称为上皮间质转化(Epithelial–MesenchymalTransition，EMT)。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍，以及免疫反应等多种致病因素刺激，其固有细胞受损，发展到后期出现大量胶原沉积和积聚，造成肾实质逐渐硬化，形成瘢痕，直至肾脏完全丧失脏器功能。
肾纤维化发生机制较为复杂，与多种因素有关，其中主要与细胞外基质细胞产生细胞的增殖和活化、血管活性物质、细胞因子以及细胞外基质转换失衡有关，肾间质纤维化几乎是所有原发或继发肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径。肾纤维化的程度与患者预后密切相关。随着临床上肾功能的进行性下降，从病理上将肾纤维化分成炎症反应期、纤维化形成期和瘢痕形成期。其中，炎症反应期和纤维化形成期是可逆期，如能在可逆期尽早对肾功能受损的患者做出诊断和干预，这对于减缓和逆转慢性肾病的进程，改善肾脏功能，指导临床治疗，提高肾病患者的生活质量具有重要意义。
miRNA(microRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的非编码小分子 RNA，涉及多种生物学过程，包括对发育时机、凋亡、脂肪代谢和造血细胞分化等的调节，通过影响其靶基因的稳定性或抑制其翻译转录水平来调控细胞的分化、增殖和凋亡。miRNA广泛表达于人体各个组织和器官，在机体的病理生理过程中发挥着广泛的作用；同时，miRNA有显著的组织特异性，不同的组织器官中miRNA的表达强度是截然不同的。
研究表明，miRNA在细胞中表达失调会导致肾脏纤维化在内的多种疾病的发生，miRNA在各种原因所致肾间质纤维化进程中有明确的特异性表达，为肾纤维化机制的研究提供了良好的前景和平台，也为肾纤维化治疗的靶点提供新的思路。一些miRNA在肾纤维化患者肾脏和尿液中异常表达，提示miRNA与肾纤维化的发生、发展有关。因此，寻找与肾纤维化发生、发展有关的miRNA，可以为临床上诊断和治疗肾纤维化提供有效的手段。
发明内容
为了寻找与肾纤维化发生、发展有关的miRNA，本发明目的在于提供一种肾纤维化早期筛查分子标志物—miR-219a-2-3p及其应用。
为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
本发明首先提供一种肾纤维化早期筛查分子标志物，所述分子标志物为 miR-219a-2-3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。
在一些实施方式中，所述miR-219a-2-3p在肾纤维化细胞中表达下调。
进一步地，本发明提供了所述的分子标志物在制备肾纤维化早期筛查试剂盒中的应用。
在一些实施方式中，所述试剂盒包含检测miR-219a-2-3p基因表达水平的试剂，以及如何使用所述试剂盒的说明。
在一些实施方式中，所述试剂包括用于检测miR-219a-2-3p的引物对或探针。
在一些实施方式中，所述检测miR-219a-2-3p的引物的核苷酸序列分别为SEQ IDNO:2所示的反转录引物，以及SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的cDNA扩增引物对。
更进一步地，本发明提供了所述的分子标志物在制备预防和/或治疗肾纤维化药物组合物中的应用。
在一些实施方式中，所述药物组合物包含miR-219a-2-3p或其模拟物以及药物可接受的辅料。
在一些实施方式中，所述miR-219a-2-3p能促进E-cadherin的表达，降低Vimentin的表达，从而抑制引起肾纤维化的EMT途径发生。
E-cadherin(E钙粘蛋白)是细胞黏附分子钙黏蛋白家族中重要成员，其在维持细胞间黏附性、细胞极性及细胞间信息传递方面发挥重要作用。其表达降低或缺失是EMT最显著的特征。
Vimentin(波形蛋白)作为中间丝蛋白家族的主要成员，几乎表达于所有正常的间质细胞中，对维持细胞完整性和抵御外界应急的损伤起了重要的作用。是EMT显著标志物。
更进一步地，本发明提供了miR-219a-2-3p在筛选预防或治疗肾纤维化的候选药物中的应用，所述候选药物能上调细胞或组织中miR-219a-2-3p表达水平。
在一些实施方式中，所述候选药物包括miR-219a-2-3p模拟物和/或化合物。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明利用miR-219a-2-3p分子标志物检测肾纤维化不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。本发明还公开将miR-219a-2-3p用于制备检测肾纤维化的早期筛查试剂盒，可用于诊断miR-219a-2-3p相关的肾纤维化，从而为有针对性地治疗该疾病提供依据。本发明将miR-219a-2-3p用于制备预防和/或治疗肾纤维化的药物组合物，其中所述miR-219a-2-3p或其模拟物可以促进 E-cadherin，抑制Vimentin的表达，有利于缓解和/或治疗肾纤维化。
附图说明
图1为相比正常对照HK-2细胞，在由TGF(转化生长因子)-β诱导的 EMT(上皮细胞间充质转化)细胞模型中，肾纤维化HK-2细胞的miR-219a-2-3p的相对表达量显著降低；
图2A为通过HE和masson染色观察，未经UOO处理的对照(Ctrl)组小鼠的肾组织细胞具有典型的鹅卵石样形态特征，胞间衔接紧密；经UOO处理小鼠单侧肾组织细胞显示出梭形的形态，细胞间间隙明显，细胞较为瘦缩，类似成纤维细胞的形态；图2B为相比对照大鼠，在肾纤维化模型大鼠组织中，miR-219a-2-3p的相对表达量显著降低；
图3为转染miR-219a-2-3p mimic的HK-2细胞中，E-cadherin表达相比对照(Ctrl)细胞明显增加，Vimentin表达相比对照(Ctrl)细胞明显降低，而与肾纤维化不相关的微管蛋白tubulin的表达则没有发生明显变化。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
本发明的发明人在对肾纤维化的相关研究中发现miR-219a-2-3p在肾纤维化的细胞模型或动物模型中含量显著降低。进一步，发明人通过 miR-219a-2-3p模拟物(mimic)转染肾纤维化HK-2细胞中，发现 miR-219a-2-3p mimic可以促进E-cadherin表达，抑制Vimentin表达，进而有利于缓解和/或治疗肾纤维化对象或患者的肾纤维化。证实了 miR-219a-2-3p是与肾纤维化显著相关的标志物。
在本发明中，术语“miR-219a-2-3p”是指包含SEQ ID NO:1所示序列(AGAAUUGUGGCUGGACAUCUGU)或其同源序列的miRNA，例如本领域中已知各种来源如人、鼠、兔等的miR-219a-2-3p。
本发明的“miR-219a-2-3p”还包含上述天然存在的miR-219a-2-3p序列经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，或经过生物学化学修饰后仍具有 miR-219a-2-3p生物活性的miR-219a-2-3p衍生物。
本发明的“miR-219a-2-3p”还包含人工合成的以及可以通过购买市售商品方式获得的具有miR-219a-2-3p生物学活性的miR-219a-2-3p模拟物。
此外，本发明所述的miR-219a-2-3p也可以为前体形式，miR-219a-2-3p 前体是指在被施用对象的细胞内或体内可以被加工成为miR-219a-2-3p的前体。获得天然存在的miR-219a-2-3p前体的方法为本领域技术人员所公知。
本领域技术人员公知，miR-219a-2-3p的初始转录产物经过一系列的加工后，形成成熟的miR-219a-2-3p。miR-219a-2-3p前体只有在加工为成熟的 miR-219a-2-3p后才具有相应的生物学功能。
实施例1miR-219a-2-3p在EMT细胞模型的肾纤维化细胞中相对表达下调
上皮间质转化(EMT)是指上皮细胞间充质转化，是肾纤维化过程的一部分。诱导EMT细胞模型：采用人肾小管上皮细胞系HK-2细胞，在HK-2 细胞培养液中加入TGF(转化生长因子)-β至终浓度为10ng/mL，培养72h后收取细胞，拍照观察并检测miR-219a-2-3p。
具体操作如下：
1.miRNA提取
分别收集未发生肾纤维化的对照(Ctrl)组HK-2细胞和诱导的EMT细胞模型的肾纤维化(EMT)细胞。使用Tiangen公司的miRNA提取试剂盒，每 50mg细胞样本中加入1ml裂解液，振荡器振荡混匀30秒。室温放置5min 后，12,000rpm离心10min，取上清，加入200μl氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置5min后，12,000rpm离心15min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中，缓慢加入转移液体积1/3体积的无水乙醇混匀，一起转入吸附柱，室温放置 2min,12,000rpm离心30秒，保留流出液。缓慢加入流出液体积2/3体积的无水乙醇，混匀，一起转入吸附柱，室温放置2min后12,000rpm离心30秒，离心后保留吸附柱。向吸附柱中加入500μl去蛋白液，室温12,000rpm离心30sec，弃废液。500μl漂洗液，室温12,000rpm离心30秒。将吸附柱放入 2ml收集管中，室温12,000rpm离心1min，去除残余液体。再将吸附柱转入一个新的1.5ml离心管中，加15-30μl无RNA酶的水，室温12,000rpm离心 2min。
2.逆转录
将10pg-1μg的RNA模板与2μl 10倍缓冲液、2μl dATP(10mM)、0.5μl 引物、0.5μl核糖核酸酶抑制剂和无核糖核酸酶水混合，体积最后为20μl， 37℃孵育1h。然后反应管中加入1μl 0.5μg/μl特异性反转录引物 (miR-219a-2-3p的反转录引物如SEQ ID NO:2所示)，70℃孵育5min后立刻冰上孵育至少2min，打断RNA和引物的二级结构。最后，将上述20μl反应混合物与4μl 5倍缓冲液、1μl dNTP(10mM)，0.5μl M-MLV逆转录酶，0.5μl 核糖核酸酶抑制剂，10μl polyA反应混合液和4μl无核糖核酸酶水混合，42℃孵育1h。
反转录引物：
5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACA CAGAT-3’，SEQ ID NO:2；
3.Q-PCR
采用25μl反应体系，每个样本设置3个平行管，所有扩增反应均重复三次以上以保证结果的可靠性。按照常规步骤操作，其中miR-219a-2-3p的 cDNA扩增引物对序列分别如SEQ ID NO:3(正向引物5’-AGAATTGTGGC TGGAC-3’)和SEQ ID NO:4(反向引物5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’)所示。配制以下反应体系：SYBR Green聚合酶链式反应体系12.5μl，正向引物 (5μM/l)1μl，反向引物(5μM/l)1μl，模板cDNA 2μl，无酶水8.5μl。各项操作均于冰上进行。扩增程序为：95℃10min，(95℃20s，60℃55s)40个循环。以SYBR Green作为荧光标记物，在荧光实时定量PCR仪上进行PCR反应。通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。
结果如图1所示，在发生肾纤维化(EMT)的细胞中，miR-219a-2-3p的相对表达量显著低于其在对照(Ctrl)细胞系中的相对表达量(*p<0.05)，在EMT 中的相对表达量约为对照中的25％。这表明miR-219a-2-3p可作为肾纤维化发生过程的标记物。
实施例2miR-219a-2-3p在单侧输尿管结扎(UUO)动物模型的肾纤维化细胞系中相对表达下调
通过单侧输尿管结扎(UUO)构建肾纤维化动物模型，并通过HE(苏木精-伊红)染色和masson染色来验证该肾纤维化模型。然后，检测 miR-219a-2-3p的含量。
如图2A所示，通过HE和masson染色观察到，未进行单侧输尿管结扎 (UUO)的对照(Ctrl)组大鼠的肾组织细胞具有典型的鹅卵石样形态特征，胞间衔接紧密；经UUO处理大鼠的单侧肾组织细胞显示出梭形的形态，细胞间间隙明显，细胞较为瘦缩，类似成纤维细胞的形态。证明UUO处理成功构建了肾纤维化的动物模型。
分别收集未发生肾纤维化的对照(Ctrl)组大鼠肾组织细胞和经UUO处理大鼠单侧的肾组织细胞。参照实施例1方法分别提取miRNA并进行逆转录，用Q-PCR检测miR-219a-2-3p的相对表达量(按照常规步骤操作，其中 miR-219a-2-3p的反转录引物如SEQ ID NO:2所示，cDNA扩增引物对分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示)。结果如图2B所示，在发生肾纤维化的UUO处理大鼠单侧肾组织细胞(UUO)中，miR-219a-2-3p的相对表达量显著低于其在未经处理的对照(Ctrl)组大鼠的肾组织细胞中的相对表达量 (*p<0.05)，在UUO处理大鼠单侧肾组织细胞中miR-219a-2-3p的相对表达量约为对照组中的15％。这表明miR-219a-2-3p可作为肾纤维化发生过程的标记物。
实施例3肾纤维化细胞中转染miR-219a-2-3p模拟物后，检测上皮间质转化(EMT)标志物
用转染试剂lipofectamine 3000将miR-219a-2-3p模拟物(mimics)(购买自广州锐博生物科技有限公司)转染人肾小管上皮细胞系HK-2细胞，48 小时后分别收集对照(Ctrl)组HK-2细胞和转染该模拟物后的HK-2细胞。参照实施例1分别提取miRNA并进行逆转录，用Q-PCR检测miR-219a-2-3p 的相对表达量(按照常规步骤操作，其中miR-219a-2-3p的反转录引物如SEQ ID NO:2所示，cDNA扩增引物对分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示)。结果用miR-219a-2-3p mimics转染HK-2细胞后，所述细胞中miR-219a-2-3p 的表达量显著性上升，证明该模拟物能够模拟miR-219a-2-3p的表达。
进一步使用免疫印迹方法检测各组细胞中上皮间质转化(EMT)标志物 E-cadherin和Vimentin的表达情况。免疫印迹按照常规步骤操作(E-cadherin 抗体的生产商：abcam公司，产品批号：ab15148；Vimentin抗体的生产商： abcam公司，产品批号：ab92547；Tubulin抗体的生产商：abcam公司，产品批号：ab18207；二抗为羊抗兔或羊抗鼠，生产商：中山金桥公司)。结果如图3所示，在施用miR-219a-2-3p mimic的HK-2细胞中，与对照细胞(Ctrl) 相比，E-cadherin蛋白的表达明显增加，Vimentin蛋白表达明显降低，而与肾纤维化不相关的微管蛋白tubulin的表达则没有发生明显变化。
本实验说明了miR-219a-2-3p模拟物可以促进E-cadherin蛋白表达，抑制Vimentin蛋白的表达，进而有利于缓解和/或治疗肾纤维化对象或患者的肾纤维化。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 河北仁博科技有限公司
<120> 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用
<130> P200276
<141> 2020-10-23
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> miR-219a-2-3p
<400> 1
agaauugugg cuggacaucu gu 22
<210> 2
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 2
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacacagat 50
<210> 3
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 3
agaattgtgg ctggac 16
<210> 4
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 4
gtgcagggtc cgaggt 16

Claims (3)

1.检测肾组织miR-219a-2-3p基因表达水平的试剂在制备肾纤维化早期筛查试剂盒中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括用于检测miR-219a-2-3p的引物或探针，所述试剂盒包括如何使用所述试剂盒的说明。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测miR-219a-2-3p的引物包含核苷酸序列分别为SEQ ID NO:2所示的反转录引物，以及SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的cDNA扩增引物对。
CN202011145188.0A 2020-10-23 2020-10-23 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用 Active CN112126686B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011145188.0A CN112126686B (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011145188.0A CN112126686B (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112126686A CN112126686A (zh) 2020-12-25
CN112126686B true CN112126686B (zh) 2023-09-29

Family

ID=73852807

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011145188.0A Active CN112126686B (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112126686B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114214324A (zh) * 2021-11-23 2022-03-22 中国辐射防护研究院 miR-219a-2-3p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途
CN114107296A (zh) * 2021-11-23 2022-03-01 中国辐射防护研究院 miR-1287-5p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006069584A2 (en) * 2004-12-29 2006-07-06 Exiqon A/S NOVEL OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND PROBE SEQUENCES USEFUL FOR DETECTION AND ANALYSIS OF microRNAs AND THEIR TARGET mRNAs
EP2305810A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-06 Technische Universität München miRNAs in the treatment of fibrosis
CN103805696A (zh) * 2013-12-12 2014-05-21 焦志军 一种诊断类风湿关节炎的microRNA分子标志物及其检测试剂盒
KR20140124930A (ko) * 2013-04-16 2014-10-28 경북대학교 산학협력단 신장섬유화증 진단 또는 치료용 조성물
CN107236799A (zh) * 2017-06-15 2017-10-10 昆明医科大学第六附属医院 一种肾纤维化miRNA标记物
CN109234381A (zh) * 2018-10-22 2019-01-18 云南省玉溪市人民医院 miR-2682-5p作为肾纤维化标志物的应用
CN110734972A (zh) * 2019-11-28 2020-01-31 河北仁博科技有限公司 miR-181c-3p作为肾纤维化标志物的应用
CN111183235A (zh) * 2017-10-03 2020-05-19 基因序列有限公司 使用微rna基因表达来对黑素瘤进行诊断、分期和监测的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020092688A (ja) * 2018-12-12 2020-06-18 国立大学法人東海国立大学機構 マイクロｒｎａを含む体液抽出物

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006069584A2 (en) * 2004-12-29 2006-07-06 Exiqon A/S NOVEL OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND PROBE SEQUENCES USEFUL FOR DETECTION AND ANALYSIS OF microRNAs AND THEIR TARGET mRNAs
EP2305810A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-06 Technische Universität München miRNAs in the treatment of fibrosis
KR20140124930A (ko) * 2013-04-16 2014-10-28 경북대학교 산학협력단 신장섬유화증 진단 또는 치료용 조성물
CN103805696A (zh) * 2013-12-12 2014-05-21 焦志军 一种诊断类风湿关节炎的microRNA分子标志物及其检测试剂盒
CN107236799A (zh) * 2017-06-15 2017-10-10 昆明医科大学第六附属医院 一种肾纤维化miRNA标记物
CN111183235A (zh) * 2017-10-03 2020-05-19 基因序列有限公司 使用微rna基因表达来对黑素瘤进行诊断、分期和监测的方法
CN109234381A (zh) * 2018-10-22 2019-01-18 云南省玉溪市人民医院 miR-2682-5p作为肾纤维化标志物的应用
CN110734972A (zh) * 2019-11-28 2020-01-31 河北仁博科技有限公司 miR-181c-3p作为肾纤维化标志物的应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Analysis of differential expression profile of miRNA in peripheral blood of patients with lung cancer;Qingfang He et al.;《J Clin Lab Anal》;第33卷(第9期);第1-10页 *
Fibrosis: Targeting EMT to reverse renal fibrosis;Susan J Allison;《Nat Rev Nephrol》;第11卷(第10期);第565页 *
MicroRNA-34a Promotes Renal Fibrosis by Downregulation of Klotho in Tubular Epithelial Cells;Yong Liu et al.;《Mol Ther》;第27卷(第5期);第1051-1065页 *
miR-219-3p regulates the occurrence of hepatic fibrosis by targeting Smad2;Weihua Yin et al.;《Exp Ther Med》;第17卷(第6期);第4635-4642页 *
miR-219a-5p inhibits breast cancer cell migration and epithelial-mesenchymal transition by targeting myocardin-related transcription factor A;Chunyu Zhuang et al.;《Acta BiochimBiophys Sin (Shanghai)》;第49卷(第12期);第1112-1121页 *
狼疮性肾炎中医证型及血浆外泌体microRNA表达谱的生物信息研究;张绍杰;《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》(第02期);E056-136 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112126686A (zh) 2020-12-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112126686B (zh) 一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用
US20190153446A1 (en) Mir-149-3p and method for treating metabolic disease using the same
CN110201172B (zh) Yy1表达抑制剂在制备治疗乳腺癌药物中的应用
CN110734972B (zh) miR-181c-3p作为肾纤维化标志物的应用
CN109234381B (zh) miR-2682-5p作为肾纤维化标志物的应用
Liu et al. MicroRNA expression profiles of epicardial adipose tissue-derived exosomes in patients with coronary atherosclerosis
CN109097358B (zh) 一种lncRNA在预防或治疗高血压中的应用
CN112266954B (zh) miR-125b-2-3p在肾纤维化中的应用
CN112263587B (zh) miR-3065-5p在制备预防和/或治疗肾纤维化的药物中的应用
CN111118143B (zh) 检测及靶向rp11-754b17.1的试剂及其在关节炎中的应用
CN112746101B (zh) 一种骨质疏松诊断标志物及促进骨质疏松骨再生的核酸药物
CN111154863B (zh) lncRNA在制备诊断和/或治疗骨关节炎的产品中的应用
CN109266747B (zh) 与i型神经纤维瘤合并脊柱畸形病相关gpr56及其应用
CN112941176A (zh) 肿瘤乳酸微环境相关非编码小rna分子谱及其应用
CN111118139B (zh) 一种骨质疏松的分子靶标及其应用
CN114432334B (zh) lnc-BIHAA1在制备预防和/或治疗肝纤维化药物中的应用
CN114272257B (zh) miR-204-5p mimics或miR-204-3p mimics在制备治疗动脉粥样硬化的药物中的应用
CN111500701B (zh) 非编码rna作为诊治骨关节炎的分子标志物的用途
CN111254200B (zh) Gal3st3基因的新用途
CN107653319B (zh) 胶质瘤诊断标志物circ8:61680968|61684188及应用
CN107937531B (zh) 胶质瘤诊断标志物circ7:73686636|73687095及应用
Li et al. Sox2ot/miR-9/Cthrc1 Promote Proliferation and Migration of Schwann Cells Following Nerve Injury
Kirat et al. FNDC5 gene expression in the smooth muscles of dromedary camels (Camelus dromedarius)
CN107937534B (zh) 胶质瘤诊断标志物circ1:29154696|29154910及应用
CN113186276A (zh) 一种用于冠心病的标志物及其治疗药物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant