CN112121044B - 氨来占诺用于制备抗肝炎病毒药物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了氨来占诺用于制备抗肝炎病毒药物的用途。具体地，本发明提供了氨来占诺用于制备抗病毒药物的新用途，特别是用于制备抗肝炎病毒的用途。氨来占诺作为抗肝炎病毒药物，既可以单独使用也可以与其它抗肝炎病毒药物联用，具有显著的疗效以及良好的商业前景。

Description

氨来占诺用于制备抗肝炎病毒药物的用途
技术领域
本发明涉及医药领域，具体地涉及氨来占诺用于制备抗肝炎病毒药物的用途。
背景技术
肝炎病毒感染往往引起病毒性肝炎，相关的病原体主要包括甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)等，其中前四种感染范围较广，危害较大。针对肝炎病毒感染的治疗药物多样，作用的方式主要是抑制病毒复制的逆转录过程中病毒编码的DNA聚合酶，或者破坏病毒粒子组装过程中病毒编码的RNA的稳定性、或者通过作用于宿主的干扰素受体间接抑制病毒复制。
以乙型肝炎病毒为例，临床常用的药物以DNA聚合酶抑制剂居多，目前上市的DNA聚合酶抑制剂主要是核苷或核苷酸类似物，例如：拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦和替诺福韦等，这些核苷或核苷酸类似物通过抑制病毒聚合酶来抑制病毒DNA合成，从而达到抗病毒的效果。拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦等长期服用，具有导致乙肝病毒变异的可能。而且DNA聚合酶抑制剂并不能直接抑制乙肝表面抗原(HBsAg)的表达。
高HBsAg水平在慢性乙肝病毒感染病人中会诱导T细胞耗竭，采用基于HBsAg为基础的疫苗并不能产生HBsAg抗体[参考文献1]。针对这些药物的缺陷和乙肝感染的特点在临床治疗当中，往往在血清HBsAg水平阴性的情况下给予病人注射疫苗，并提高获得HBsAg抗体的可能。因此，降低HBsAg水平成为治疗慢性乙肝病毒感染的有效途径。部分正在进行临床试验的药物，其针对的靶点包括病毒的HBcAg和病毒的RNA，或者通过特异性抗体中和病毒的表面抗原(HBsAg)，这些药物的最终效果未知。比如，目前Arrowhead制药公司在使用以在研药物JNJ-3989为代表的RNA干扰(RNAi)技术，最高可降低99％的HBsAg，但是RNAi技术需要较好的药物传递系统，和严格的储存技术，且无法口服，成本较高。
干扰素在乙肝治疗中也较为常用，它是通过免疫系统实施间接的抗乙肝感染作用，靶点是干扰素受体，包括短效干扰素和长效干扰素。如派罗欣就是一种用于治疗乙型和丙型肝炎的长效干扰素。干扰素副作用明显，会引起高烧等，且通常需要注射给药，病人依从性较差，同时也无法在高HBsAg病人中直接有效降低其水平。另外，对于伴随肝纤维化的乙肝感染者，通常不推荐使用干扰素治疗。
发明内容
本发明提供了氨来占诺用于制备抗病毒药物的新用途。
在一些方案中，所述抗病毒药物为预防和/或治疗肝炎病毒感染的药物或者是预防和/或治疗由于肝炎病毒感染所导致的疾病的药物。
在一些优选方案中，所述病毒为DNA病毒或RNA病毒，较优地，为乙肝病毒。
在另一些优选方案中，所述由于肝炎病毒感染所导致的疾病为急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌或其它医学上的近义界定疾病。
在一些方案中，氨来占诺存在的形式，包括药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前体药物，只要所述的药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前体药物也具有类似的抗肝炎病毒作用。
同时本发明提供了一种药物组合物，包含氨来占诺和另外一种或多种抗病毒活性物质以及药学上可接受的载体。
在一些方案中，所述药物组合物，由氨来占诺和另外一种或多种抗病毒活性物质以及药学上可接受的载体构成。
在一些优选方案中，所述另外一种或多种抗病毒活性物质为转录或逆转录抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、衣壳组装调节剂、壳蛋白抑制剂、病毒mRNA抑制剂，或它们的组合。
优选地，所述另外一种或多种抗病毒活性物质为核苷或核苷酸类似物，较优地，为拉米夫定、齐多夫定、司坦夫定、替诺福韦、恩替卡韦、阿巴卡韦、扎西他滨、恩曲他滨、地丹诺辛、奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦、依曲韦林、利匹韦林中的一种或多种，更优地，为拉米夫定、替诺福韦或恩替卡韦的中的一种或多种。
本发明还提供了所述药物组合物用于制备预防和/或治疗病毒感染的药物或者是预防和/或治疗由于病毒感染所导致疾病的药物的用途。
优选地，所述病毒为DNA病毒或RNA病毒，较优地，为乙肝病毒。
在一些方案中，所述由于病毒感染所导致的疾病为急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌或其它医学上的近义界定疾病。
在另一些优选方案中，所述抗病毒药物为口服制剂或注射制剂；较优地，所述的口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。
本发明还提供了一种预防和/或治疗病毒感染或者是预防和/或治疗由于病毒感染所导致的疾病的方法，具体为对受试者施用所述药物组合物。
优选地，所述病毒为DNA病毒或RNA病毒，较优地，为乙肝病毒。
所述由于肝炎病毒感染所导致的疾病为急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌或其它医学上的近义界定疾病。
优选地，所述方法的施用方式为口服。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明：
图1显示了氨来占诺在细胞模型中抑制乙肝病毒基因组DNA复制。
图2显示了氨来占诺在细胞模型中降低乙肝病毒表面抗原水平。
图3显示了氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒表面抗原水平。
图4显示了氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒核心抗原水平。
图5显示了氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒DNA复制。
图6显示了氨来占诺与临床使用的核苷酸类似物药物联用，在细胞模型中降低乙肝病毒表面抗原水平。
图7显示了氨来占诺在静脉高压小鼠模型中抑制乙肝病毒的量效关系。
图8显示了氨来占诺在静脉高压小鼠模型中抑制A亚型乙肝病毒的效果及量效关系。
图9显示了氨来占诺对小鼠天然免疫的影响。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现老药氨来占诺用于制备抗病毒药物的新用途。在此基础上，发明人完成了本发明。
术语说明
本发明的方法与技术通常依据本领域已知的传统方法进行，除非另有说明。与本文中描述的生物学、药理学、及医学与医药化学相关的命名法，及实验方法与技术是本领域已知且常用的。化学合成法、化学分析法、医药制法、调配法与传送法，及检测或测试法均采用标准技术。
除非另有说明，否则本文中所使用的科学与技术术语应具有那些本领域普通技术人员通常理解的含义。
氨来占诺及其抗病毒作用
氨来占诺(英文名Amlexanox，简写作AMLE)，临床用于治疗口腔溃疡、支气管哮喘等，该药未有抗肝脏病毒感染的报道。氨来占诺最初由日本武田制药开发，作用机制未明。其在开发初期是以口服片剂的形式用于治疗支气管哮喘，并被收入日本药典，后被开发出抗口腔溃疡的功能，并在欧美国家被广泛的应用于临床。在我国，氨来占诺被批准以糊剂的形式用于治疗复发性口腔溃疡。在2013年，氨来占诺被发现具有抑制TBK1/IKKε的作用，其用于治疗胃溃疡、肥胖、非酒精性脂肪肝等临床试验正在进行中[参考文献2]。氨来占诺的抗肝脏病毒作用未见报道。
氨来占诺的结构式如式I所示：
Figure BDA0002106914760000041
在本发明中，术语“氨来占诺”包括式I化合物及其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指上述式I化合物与无机酸、有机酸、碱金属或碱土金属等反应生成的盐。这些盐包括但不限于：(1)与如下无机酸形成的盐：如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸；(2)与如下有机酸形成的盐，如乙酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、葡萄糖酸、安息香酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、草酸、丁二酸、酒石酸、马来酸、或精氨酸；(3)其它的盐，包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，铵盐或水溶性的胺盐(如N-甲基葡糖胺盐)、低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐(比如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐)。
术语“前体药物”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成本发明通式所包含的化合物，以及化合物所组成的盐或溶液。化合物的前体包括但不局限于所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙缩醛等形式。
术语“治疗有效剂量”是指药物的任何如下所述的量，当单独使用或与另一种治疗剂组合使用该量的药物时，可促进疾病消退，疾病消退表现为疾病症状的严重度降低、无疾病症状期的频率和持续时间增加、或者防止由患病导致的障碍或失能。本发明药物的“治疗有效剂量”也包括“预防有效剂量”，“预防有效剂量”是药物的任何如下所述的量，当将该量的药物单独施用或者与另一种治疗剂组合施用于具有发生疾病的风险或者遭受疾病复发的受试者时，可抑制疾病的发生或复发。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
在本发明中，如对本领域所属技术人员显而易见地，有效的体内给药剂量及具体的给药方式会根据所治疗的哺乳动物种类、体重和年龄，所使用的具体化合物及使用这些化合物的具体目的而变化。本领域所属技术人员根据常规的药理学方法可确定有效剂量水平(即达到所需效果所必需的剂量水平)。通常，产物的人体临床应用从较低的剂量水平开始，随后不断提高剂量水平直到达到所需的效果。可选择地，可通过现有的药理学方法采用可接受的体外研究来建立本方法鉴定的组合物的有用剂量和给药途径。
本发明具有如下主要有益效果：
(a)氨来占诺具有显著的抗病毒作用；
(b)氨来占诺具有优良的安全性。
(c)氨来占诺既可以单独使用也可以与其它相关抗病毒药物联用，效果优于现有抗肝炎病毒药物，具有良好的商业前景。
下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1氨来占诺在细胞模型中抑制乙肝病毒基因组DNA复制。
生长状态良好的肝细胞HepG2细胞以106细胞/孔接种于6孔板，过夜后，使用lipofectamine 2000每孔转染2μg线性HBV病毒基因组DNA(基因型B)，建立病毒感染细胞模型。转染后16-24小时，分别加入终浓度为10μM的氨来占诺、拉米夫定、恩替卡韦或替诺福韦。对照组加入等体积DMSO(1/1000，v/v)。96小时后，细胞被分为两组，一组抽提基因组DNA，另一组利用HIRT萃取法抽提游离DNA，并利用DNA外切酶(NEB)移除线性DNA。环状HBVDNA和基因组GAPDH被定量PCR检测。环状HBV DNA最高值被定义为100％(n＝5)。
从图1中的对比可以看出，氨来占诺在细胞模型中抑制乙肝病毒基因组DNA复制，效果与现有临床药物相当。
实施例2氨来占诺在细胞模型中降低乙肝病毒表面抗原水平，其效果优于现有临床药物。
生长状态良好的肝细胞HepG2细胞以106细胞/孔接种于6孔板，过夜后，使用lipofectamine 2000每孔转染2μg线性HBV病毒基因组DNA(基因型B)，建立病毒感染细胞模型。转染后16-24小时，分别加入终浓度为10μM的氨来占诺、拉米夫定、恩替卡韦或替诺福韦。对照组加入等体积DMSO(1/1000，v/v)。转染后48小时，每孔细胞传代于一个6cm培养板。转染后96小时，培养基上清中的乙肝表面抗原(HBsAg)水平被ELISA法检测定量。
从图2中对比可以看出，氨来占诺在细胞模型中降低乙肝病毒表面抗原水平，其效果优于现有临床药物。
实施例3氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒表面抗原水平。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入乙肝病毒基因组DNA(基因型B)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组，每组5只。第二天起，口服灌胃给药氨来占诺(AMLE，50mg/kg/天)、或拉米夫定(530mg/kg/天)、或者等体积等浓度助溶剂环糊精(对照)。感染后第9天，割尾取血约100μl/只，分离血清，并利用ELISA法检测外周血中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的浓度。
从图3中对比结果可以看出，氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒表面抗原水平，其效果优于拉米夫定。
实施例4氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒核心抗原水平，其效果与拉米夫定相当。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入乙肝病毒基因组DNA(基因型B)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组，每组5只。第二天起，口服灌胃给药氨来占诺(AMLE，50mg/kg/天)、或拉米夫定(530mg/kg/天)、或者等体积等浓度助溶剂环糊精(对照)。感染后第9天，割尾取血约100μl/只，分离血清，并利用ELISA法检测外周血中乙肝病毒核心抗原(HBeAg)的浓度。
从图4中对比结果可以看出，氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒核心抗原水平，其效果与拉米夫定相当。
实施例5氨来占诺在静脉高压小鼠模型中降低乙肝病毒DNA复制。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入乙肝病毒基因组DNA(基因型B)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组，每组5只。第二天起，口服灌胃给药氨来占诺(AMLE，50mg/kg/天)、拉米夫定(530mg/kg/天)、恩替卡韦(0.03mg/kg/天)或替诺福韦(530mg/kg/天)、或等体积等浓度助溶剂环糊精(对照)。感染后第11天，处死小鼠，分离小鼠肝脏，DpnI移除外源DNA，荧光定量PCR法检测小鼠肝脏中HBV基因组DNA(n＝5)。
从图5中可见，在动物模型中，AMLE可显著抑制病毒DNA的载量，其效果不低于临床使用的核苷酸类似药物拉米夫定和恩替卡韦等。
实施例6氨来占诺可与临床使用的核苷酸类似物药物联用，在细胞模型中降低乙肝病毒表面抗原水平。
生长状态良好的肝细胞HepG2细胞106细胞/孔接种于6孔板，过夜后，使用lipofectamine 2000每孔转染2μg线性HBV病毒基因组DNA(基因型B)。转染后16-24小时，分别加入如图所示终浓度为10μM的化合物(“+”代表含有某种药物或活性物质)。对照组加入等体积DMSO(1/1000，v/v)。转染后48小时，每孔细胞传代于一个6cm培养板。转染后96小时，培养基中的HBV表面抗原(HBsAg)被ELISA法检测。
从图6中可见，在细胞模型中，氨来占诺与拉米夫定或替诺福韦联用，效果优于AMLE单用，显著优于拉米夫定或替诺福韦单用。
实施例7氨来占诺在静脉高压小鼠模型中抑制乙肝病毒的量效关系。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入乙肝病毒基因组DNA(基因型B)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组，每组5只。第二天起，口服灌胃给药氨来占诺，每天给药剂量如图7中所示，或等体积等浓度助溶剂环糊精(对照)。感染后第9天，割尾取血约100μl/只，分离血清，并利用ELISA法检测外周血中HBV表面抗原(HBsAg)的浓度。
从图7中对比可以看出，随着氨来占诺浓度增加，其在静脉高压小鼠模型中抑制乙肝病毒的能力增强，这种量效关系在10mg/kg的剂量以下最为明显。
实施例8氨来占诺在静脉高压小鼠模型中抑制A亚型乙肝病毒的效果及量效关系。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入病毒基因组DNA(基因型A)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组。注射后第二天起，根据化合物药时曲线，口服灌胃给药拉米夫定(3TC，530mg/kg/天，1次/天)、替诺福韦(TD，530mg/kg/天，1次/天)，或指定浓度氨来占诺(4、8、16mg/kg/次，2次/天)或等体积等浓度助溶剂环糊精(NC)。感染后第9天，割尾取血约100μl/只，分离血清，并利用ELISA法检测外周血中HBV核心抗原(HBeAg)的浓度。
从图8中对比可以看出，随着氨来占诺浓度增加，其在静脉高压小鼠模型中抑制乙肝病毒的能力增强，这种量效关系在10mg/kg的剂量以下最为明显。
实施例9氨来占诺对小鼠天然免疫的影响。
野生型小鼠(C57/B6)在短时间内通过尾静脉注射迅速推入病毒基因组DNA(基因型A)10μg/只，利用静脉高压模型建立病毒感染，并随机分组。第二天起，根据化合物药时曲线，口服灌胃给药拉米夫定(3TC，530mg/kg/天，1次/天)、替诺福韦(TD，530mg/kg/天，1次/天),或指定浓度氨来占诺(4、8、16mg/kg/次，2次/天)或等体积等浓度助溶剂环糊精(NC)。感染后第9天，割尾取血约100μl/只，分离血清，并利用ELISA法检测小鼠外周血中I型干扰素IFN-α的浓度。
从图9可以看出，氨来占诺对HBV病毒感染引起的天然免疫应答，尤其是I型干扰素的诱导，没有明显影响。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
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Claims (6)

1.氨来占诺作为唯一活性成分在制备抗病毒药物中的用途，其特征在于，所述抗病毒药物为治疗乙肝病毒感染的药物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抗病毒药物用于降低HBsAg水平。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗病毒药物为口服制剂或注射制剂。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。
5. 一种药物组合物在制备用于治疗乙肝病毒感染的抗病毒药物中的用途，其特征在于，所述药物组合物包含：
1) 治疗有效剂量的氨来占诺，以及
2) 治疗有效剂量的拉米夫定和/或替诺福韦；以及
3) 药学上可接受的载体。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的抗病毒药物用于降低HBsAg水平。
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