KR20220018552A - 항 간염 바이러스 의약품 제조를 위한 암렉사녹스의 용도 - Google Patents

항 간염 바이러스 의약품 제조를 위한 암렉사녹스의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항간염 바이러스 약물을 제조하기 위한 암렉사녹스의 용도를 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 항바이러스 약물의 제조, 특히 항간염 바이러스의 제조를 위한 암렉사녹스의 새로운 용도를 제공한다. 암렉사녹스는 항 간염 바이러스 치료제로서 단독으로 사용하거나 다른 항간염 바이러스 치료제와 병용할 수 있으며 상당한 치료 효과와 좋은 상업적 전망을 가지고 있다.

Description

항 간염 바이러스 의약품 제조를 위한 암렉사녹스의 용도
본 발명은 의약 분야, 특히 항간염 바이러스 약물을 제조하기 위한 암렉사녹스의 용도에 관한 것이다.
간염 바이러스 감염은 종종 바이러스성 간염을 유발하고 관련 병원체는 주로 A형 간염 바이러스(HAV), B형 간염 바이러스(HBV), C형 간염 바이러스(HCV), D형 간염 바이러스(HDV), E형 간염 바이러스(HEV) 및 G형 간염 바이러스(HGV)들인데 그 중 처음 4개는 감염 범위가 넓고 위해성이 더 크다. 간염 바이러스 감염에 대한 치료제는 다양하며 작용방식은 주로 바이러스 복제의 역전사 과정에서 바이러스가 코딩하는 DNA 중합효소를 억제하거나 바이러스 입자의 조립과정에서 바이러스가 코딩하는 RNA의 안정성을 파괴하며 또는 숙주에 작용하는 인터페론 수용체를 통해 간접적으로 바이러스의 복제를 억제하기도 한다.
B형 간염 바이러스를 예로 들면, DNA 중합효소 억제제가 임상에서 가장 일반적으로 사용되는 약물이며 현재 시판되고 있는 DNA 중합효소 억제제는 주로 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체인 바 이를테면: 라미부딘, 엔테카비르, 아데포비어, 테노포비르 등 이러한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오티드 유사체는 바이러스 중합효소를 억제하여 바이러스 DNA 합성을 억제하여 항바이러스 효과를 나타낸다. 라미부딘, 아데포비어, 엔테카비르 등을 장기간 복용하면 B형 간염 바이러스가 변이될 가능성이 있다. 더군다나 DNA 중합효소 억제제는 B형 간염 표면 항원(HBsAg)의 발현을 직접적으로 억제할 수 없다.
높은 HBsAg 수치는 만성 B형 간염 바이러스 감염 환자에서 T 세포 고갈을 유발할 수 있으며 HBsAg 기반 백신은 HBsAg 항체를 생성할 수 없다. 이들 약물의 결핍과 B형 간염 감염의 특성을 고려하여 임상 치료에서 혈청 HBsAg 수치가 음성일 때 환자에게 백신을 투여하여고 HBsAg 항체 획득 가능성을 개선한다. 따라서 HBsAg 수치를 낮추는 것은 만성 B형 간염 바이러스 감염을 치료하는 효과적인 방법이다. 임상시험 중인 일부 약물은 표적을 바이러스 HBcAg와 바이러스 RNA에 두며 혹은 특이성 항체를 통해 바이러스 표면항원(HBsAg)을 중화시키는데 약물로 궁극적인 효과는 알려져 있지 않다. 예를 들어 Arrowhead 제약회사는 현재 HBsAg를 최대 99%까지 감소시킬 수 있는 연구 약물 JNJ-3989로 대표되는 RNA 간섭(RNAi) 기술을 사용하고 있지만 RNAi 기술은 더 나은 약물 전달 시스템과 엄격한 보관 기술이 필요하며 내복할 수없어 원가가 높다.
인터페론은 B형 간염 치료에도 흔히 사용되며 면역계를 통해 간접적인 항 B형 간염 감염 효과를 구현하며, 표적은 인터페론 수용체인 바 알파 인터페론(IFN-α)과 베타 인터페론(IFN-β) 을 포함하고 있다. 예를 들어 파라흔은 B형 및 C형 간염 치료에 사용되는 알파 인터페론이다. 인터페론은 명백한 부작용이 있고 고열 등을 유발할 수 있고 일반적으로 주사로 약을 주입하며 환자 의존성이 낮고 HBsAg가 높은 환자들에 효과적으로 작용할 수 없다. 또한 간섬유화를 동반한 B형 간염 환자의 경우 인터페론 치료를 일반적으로 권장하지 않는다.
본 발명의 첫 번째 측면으로 항바이러스 약물의 제조를 위한 암렉사녹스의 새로운 용도가 제공된다.
일부 방안 중 서술된 항바이러스 약물은 간염 바이러스 감염을 예방 및/또는 치료하기 위한 약물 또는 간염 바이러스 감염에 의해 유발되는 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 약물이다.
일부 이상적인 방안에서 서술한 바이러스는 DNA 바이러스 / RNA 바이러스 및 B형 간염 바이러스이다.
일부 이상적인 방안 중 간염 바이러스 감염에 의해 야기되는 질병은 급성 간염, 만성 간염, 간경변, 간섬유증, 간암, 간 손상 및/기타 의학적으로 정의된 질병 등이다.
일부 방안에서 암렉사녹스의 형태는 약학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매 화합물 또는 프로드러그를 포함하는데 약학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매 화합물 및 프로드러그 역시도 항 간염 바이러스 효과를 지니고 있다.
본 발명의 두번째 제측면에서 암렉사녹스 및 또 다른 하나 이상의 항바이러스 활성 물질, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 의약 조성물이 제공된다.
일부 방안 중 서술된 의약 조성물은 암렉사녹스 및 또 다른 하나 이상의 항바이러스 활성 물질 및 약학적으로 허용되는 담체로 구성된다.
기술한 이상적인 다른 하나 이상의 항바이러스 활성 물질은 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 유사체이고 라미부딘, 지도부딘, 스티부딘, 테노포비르, 엔테카비르, 아바카비르, 잘시타빈, 엠트리시타빈, 디다노신, 네비라핀, 델라비르딘, 에파비렌즈, 에트라비린, 리파비린 중 하나 이상이며 라미부딘, 테노포비르 또는 엔테카비르 중 하나 혹은 그 이상이다.
본 발명의 세번째 측면에서 바이러스 감염의 예방/치료용 약물 또는 바이러스 감염에 의한 질병의 예방/치료용 약물의 제조를 위한 의약 조성물의 용도를 제공한다.
기술된 이상적인 바이러스는 DNA 바이러스/ RNA 바이러스 및 B형 간염 바이러스이다.
일부 방안에서 언급한데 의하면 바이러스 감염으로 인한 질병으로는 급성 간염, 만성 간염, 간경변, 간섬유증, 간암 및 기타 의학적으로 정의된 질병 등이 있다.
다른 이상적인 방안 중 항바이러스제는 내복 제형 또는 주사 제형이고 가장 좋게는 서술 된 내복 제형이 정제, 캡슐제, 과립제 또는 드링크제이다.
본 발명품의 네 번째 방면에서는 바이러스 감염이나 바이러스 감염으로 인한 질병을 예방하거나 치료하는 방법을 제공하는데, 구체적으로 피험자에게 암렉시녹사를 투여하거나 이와 같은 약물 조합물을 투여한다(두 번째 방면에서 설명한 바와 같다).
가장 이상적인 바이러스는 DNA 바이러스/ RNA 바이러스, 및 B형 간염 바이러스이다.
가장 이상적인 시험 대상은 사람이다.
간염 바이러스 감염으로 인한 질병은 급성 간염, 만성 간염, 간경변, 간암, 간 손상 및 유사한 의미의 기타 의학적으로 정의된 질병이다.
가장 이상적인 투여 방법은 내복이다.
가장 이상적인 투여량은 1~500 mg/일이며 50~500 mg/일도 바람직하며 최적으로는 50~200mg/일이다.
가장 이상적인 방법은 하루에 한 번 또는 여러 번(예: 하루에 1, 2, 3, 또는 4회), 또는 여러 날에 한 번(예: 1, 2 또는 3일에 한 번) 투여하는 것이다.
가장 이상적인 방법은 1일 1회 또는 여러차례(예를 들어 1일 2회, 3회 또는 4회) 투여되고, 1일 총 투여량은 1~500 mg/일, 바람직하게는 50~500 mg/일 가장 좋기는 50~200mg/일이다.
본 발명의 다섯 번째 분야에서는 바이러스 감염을 억제하는 체외 비 치료 성 방법을 제공했는데 절차로는: 이미 바이러스에 형질 감염된 세포(이를테면 16~24시간 동안 바이러스로 형질 감염된 세포)에 암렉사녹스를 주입하여 바이러스의 감염을 억제한다.
가장 이상적인 바이러스는 상기 정의된 바와 같다.
가장 이상적으로는 24~144시간 동안 배양한다.
본 발명의 범위 내에서 본 발명의 상기 언급된 기술적 특징 및 다음에 구체적으로 기술된 기술적 특징(실시예와 같은)은 서로 결합되어 새로운 또는 이상적인 형태를 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 지면상의 제한으로 일일히 나열하지 않는다.
도 1은 세포 모델에서 암렉사녹스가 B형 간염 바이러스 게놈 DNA 복제를 억제한다는 것을 보여준다.
도 2는 암렉사녹스가 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시키는 것을 보여준다.
도 3은 암렉사녹스가 정맥성 고혈압인 마우스 모델의 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시키는 것을 보여준다.
도 4는 암렉사녹스가 정맥성 고혈압인 마우스 모델의 B형 간염 바이러스 핵심 항원의 수치를 감소시키는 것을 보여준다.
도 5는 암렉사녹스가 정맥 고혈압의 마우스 모델의 B형 간염 바이러스 DNA 복제를 감소시키는 것을 보여준다.
도 6은 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시키기 위해 암렉사녹스와 임상적에서 사용되는 뉴클레오티드 유사체 약물의 조합을 보여준다.
도 7은 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 억제에 있어 암렉사녹스와의 용량 반응 관계를 보여준다.
도 8은 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 A형 B형 간염 바이러스 억제에 있어서 암렉사녹스의 억제 효과 및 용량 반응 관계를 나타낸다.
도 9는 마우스의 선천성 면역에 대한 암렉사녹스의 효과를 나타낸다.
도 10, 11 및 12는 암렉사녹스가 HepAD38 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 복제를 억제함을 보여준다.
도 13은 암렉사녹스가 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시킴을 보여준다.
도 14는 암렉사녹스가 세포 모델(HepAD38 세포)에서 B형 간염 바이러스 핵심 항원의 수준을 감소시킴을 보여준다.
도 15는 정맥성 고혈압 마우스 모델의 B형 간염 바이러스 억제시킴에 있어 암렉시녹사의 용량 반응 관계 관계를 나타낸다.
도 16은 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 암렉사녹스가 간 손상 정도를 감소시킴을 보여준다.
도 17은 3TC/ETV-저항성 HBV에 대한 암렉사녹스의 억제 효과를 나타낸다.
도 18은 암렉사녹스가 유전자전환 마우스 모델에서 B형 간염 표면 항원을 감소시킨다는 것을 보여준다.
도 19는 암렉사녹스가 마우스의 면역 세포 수를 억제하지 않음을 보여준다.
광범위하고 심도 있는 연구 끝에 발명가들은 항 바이러스 약물의 제조를 위한 오래된 약물인 암렉사녹스의 새로운 용도를 예기치 않게 최초로 발견했다. 이 기초상에서 발명가는 본 발명을 완성하였다.
전문용어 설명
본 발명의 방법 및 기술은 달리 명시되지 않는 한 일반적으로 해당 분야에 보편적으로 알려진 전통적인 방법에 따라 수행된다. 본 문장에 기재된 생물학, 약리학, 의약 및 의약화학과 관련된 명명법 및 실험 방법과 기술은 해당 업계에 널리 알려지고 보편적으로 사용되는 방법이어야 한다. 화학 합성법, 화학 분석법, 약품 제조법, 혼합법 및 전달법, 검출 또는 시험법 모두 표준 기술을 채택하고 있다.
달리 명시되지 않는 한 이 글에서 사용하는 과학 및 기술 용어는 그 분야의 일반 기술자들이 일반적으로 이해하는 함의를 가져야 한다.
암렉사녹스와 항바이러스 효과
암렉사녹스(영문명 Amlexanox，간단히 AMLE)，임상에서는 구강 궤양, 기관지 천식 등의 치료에 사용되며 이약에 대해서는 아직 항 간장 바이러스 감염 관련 기사는 없다. 암렉사녹스는 원래 일본 다케다 약품공업에서 개발했으며 작용 메커니즘은 알려져 있지 않았다. 개발 초기에는 기관지 천식 치료제로 경구용 정제 형태로 사용되어 일본 약전에 등재되었으며, 이후 구강궤양을 치료하는 용도로 유럽국가들에 의해 임상에서 광범위하게 사용되었다. 우리 나라에서는 암렉사녹스가 재발성 구강 궤양 치료용 습포제로 사용되었다. 2013년 암렉사녹스는 TBK1/IKKε 억제 효과가 있는 것으로 밝혀져 위궤양, 비만, 비알코올성 지방간 치료에 대한 임상 시험이 진행 중이다. 암렉사녹스의 항간바이러스 효과에 대한 보고는 아직 없다.
암렉사녹스의 구조식은 화학식 I로 표시된다.：
Figure pct00001
(I)
본문에서 사용한대로 전문용어 "본 발명의 화합물"은 화학식 I로 표시되는 화합물을 의미한다. 이 용어는 또한 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
본 발명에서 "암렉사녹스"라는 용어는 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
본 명세서에서, "약학적으로 허용되는 염"이라는 용어는 상기 화학식 I의 화합물과 무기산, 유기산, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 등의 반응에 의해 형성되는 염을 의미한다. 이러한 염에는 아래와 같은 것들이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.： (1) 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산과 같은 무기산으로 형성된 염; (2) 아세트산, 젖산, 구연산, 숙신산, 푸마르산, 글루콘산, 안식향산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 옥살산, 호박산, 주석산, 말레산, 또는 아르기닌 등과 같은 유기산으로 형성된 염 (3) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속(예: 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘)과 형성된 염, 암모늄염 또는 수용성 아민염(예: N-메틸글루카민염), 저급 알칸올암모늄염 및 기타 약제학적염을 포함한 기타 수용가능한 아민염(메탈아민염, 에틸아민염, 포스포노메틸염, 도이티드 디메틸아민 염화물, 이티드 디메틸아민 염화물, 디에틸아민염화물, 트리에틸아민 하이드로클로라이드, 메틸 삼차 부틸 에테르, 나프틸에틸렌디아민이염산염, 모노에탄올아민, 2-아미노-2-메틸프로판올트리하이드록시벤조산). 모르폴린, 피페라진 및 라이신에 의해 형성된 아민염).
"프로드러그"라는 전문 용어는 적절한 방법으로 복용하였을 때 그 화합물의 프로그체가 환자의 체내에서 대사 또는 화학반응을 일으켜 본 발명의 일반식에 포함되는 화합물 및 염 또는 화합물로 구성된 염 혹은 용액으로 변환하는 것을 말한다. 카르복실산염, 탄산염, 인산염, 질산염, 황산염, 술폰 에스테르, 술폭시드 에스테르, 아미노 화합물, 카르밤산염, 아조기의 질소 화합물, 포스포르아미드, 글루코시드, 에테르, 아세탈 및 기타 형태가 포함된다.
"치료 유효량"이라는 전문 용어는 약물이 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용될 때, 아래에 기술된 바와 같은 약물의 임의의 양을 의미하는데 질병의 감퇴를 촉진할 수 있으며 질병 감퇴는 증상의 엄증도 감소, 무증상 기간의 빈도 및 지속 기간 증가 및 환자로 인해 야기되는 장애 혹은 능력상실을 방지한다. 본 발명의 약물의 "치료 유효량"에는 "예방 유효량"도 포함되며, "예방 유효량"은 약물의 양이 단독 또는 병용 투여되는 경우에 아래에 기술된 양으로 복용할 경우 질병 발생의 리스크 혹은 질병 재발에 고통받고 있는 피험자의 질병을 억제하고 재발을 방지하는 작용을 한다.
본문에서 사용한것처럼 구체적으로 인용된 값과 관련하여 사용될 때, 용어 "대략"은 그 값이 인용된 값으로부터 1% 이하만큼 변할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 본문에서 사용된 표현 "대략 100"은 99와 101 사이의 모든 값(예를 들어, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, "포함하는" 또는 "포함하는(포함)"이라는 용어는 개방형, 반폐쇄형 및 폐쇄형일 수 있다. 즉, 용어는 "실질적으로 구성되는" 또는 "구성되는"도 포함한다.
본문에서 해당 영역에 소속된 기술인원이 인정하는 효과적인 생체내 투여량 및 특정 투여 방식은 치료할 포유동물의 유형, 체중 및 연령, 사용되는 특정 화합물 및 특정 용도와 구체적인 목적에 따라 달라질것이다. 해당 영역의 기술인원은 통상적인 약리학적 방법에 따라 유효 용량 수준(즉, 원하는 효과를 달성하는 데 필요한 용량 수준)을 결정할 수 있다. 일반적으로 제품의 인체 임상 적용은 낮은 투여량 수준에서 시작하여 원하는 효과가 달성될 때까지 계속해서 투여량을 증가시킨다. 현존하고 있는 방법에 의해 확인된 조성물의 유용한 투여량 및 투여 경로를 확립하기 위해 기존의 약리학적 방법에 의해 허용되는 시험관내 연구를 사용할 수 있다.
의약 조성물 및 투여 방법
암렉사녹스와 같은 본 발명의 화합물은 우수한 항바이러스 능력을 갖고 있기 때문에 본 발명의 화합물 및 다양한 정형, 약학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기염, 수화물 또는 용매화물 및 이를 함유하는 본 발명의 화합물은 주요 활성 성분의 의약 조성물로써 간염 바이러스 감염 및/또는 간염 바이러스 감염으로 인한 질병의 치료, 예방 및 완화에 사용될 수 있다. 선행 기술에 따르면, 본 발명의 화합물은 급성 간염, 만성 간염, 간경변, 간암, 간 손상, 또는 유사한 의미의 의학적으로 정의된 다른 질병을 치료하는 데 사용할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 안전하고 유효한 양의 본 발명의 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염 및 약리학적으로 허용되는 부형약 또는 담체를 함유한다. 그중 "안전하고 유효한 양"은：심각한 부작용을 일으키지 않고 상태를 크게 개선하기에 충분한 화합물의 양을 뜻한다. 일반적으로 의약 조성물은 본 발명의 화합물/작용제 1-2000mg, 바람직하게는 10-500mg(더 바람직하게는 25-200mg, 예컨대 25-100 또는 50-200mg 포함) 본발명의 화합물/작용제를 함유한다. 바람직하게는 "1회 용량"은 하나의 캡슐 또는 알약이다. 본 발명의 화합물은 또한 하나 이상의 다른 항바이러스 활성 물질(예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 물질)을 포함할 수 있다.
"약학적으로 허용되는 담체"는：사람이 사용하기에 적합하고 순도가 충분하고 독성이 충분히 낮은 하나 이상의 호환 가능한 고체 또는 액체 충전제 또는 겔 물질을 의미한다.여기서 "상용성"은 조성물의 성분이 화합물의 효능을 현저히 감소시키지 않으면서 본 발명의 화합물 및 이들 사이에서 블렌딩될 수 있음을 의미한다. 약학적으로 허용되는 담체의 예에는 셀룰로오스 및 그 파생물 (예: 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 나트륨 에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 등), 젤라틴, 활석, 고체 윤활제(스테아르산, 스테아르산마그네슘 등), 황산칼슘, 식물성 기름(대두유, 참기름, 땅콩유, 올리브유 등), 폴리올(예: 프로필렌 글리콜, 글리세린, 만니톨, 소르비톨 등), 유화제(예: 트윈®), 습윤제(예: 라우릴황산나트륨), 착색제, 향미제, 안정제, 항산화제, 방부제, LRW 등이 있다.
본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 않으며, 대표적인 투여 방식은 아래와 같다：경구, 종양내, 직장, 비경구(정맥내, 근육내 또는 피하) 및 국소 투여가 포함된다. 1) 경구투여용 고형제제는 캡슐제, 정제, 환제, 산제 및 과립제를 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 화합물은 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘과 같은 하나 이상의 통상적인 불활성 부형약(또는 담체)과 혼합되거나 다음 성분과 혼합된다: (a) 전분, 유당, 자당, 포도당, 만니톨 및 규산과 같은 충전제 또는 상용화제 (b) 히드록시메틸 셀룰로오스, 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 수크로스 및 아라비아 고무와 같은 결합제; (c) 글리세린과 같은 보습제 (d) 한천, 탄산칼슘, 감자 전분 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 복합 규산염 및 탄산나트륨과 같은 붕해제; (e) 파라핀과 같은 진정제 (f) 4차 아민 화합물과 같은 흡수 촉진제 (g) 세틸 알코올 및 글리세릴 모노스테아레이트와 같은 보습제 (h) 흡착제, 예를 들어 카올린 및 (i) 윤활제, 예를 들어 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 또는 이들의 혼합물. 캡슐, 정제 및 알약에서 제형은 완충제를 함유할 수도 있다. 정제, 설탕 알약, 캡슐, 알약 및 환제와 같은 고체 투여 형태는 코팅 및 캡슐 재료 예를 들어 장용 코팅 및 당업계에 공지된 기타 물질로 제조할 수 있다.이들은 불투명제를 함유할 수 있으며 활성 화합물 또는 이러한 조성물의 화합물의 방출은 소화관의 특정 부분에서 지연되어 방출될 수 있다. 사용할 수 있는 포매 구성 요소의 예로는 고분자 물질 및 왁스다. 필요한 경우, 활성 화합물은 또한 상기 언급된 부형제 중 하나 이상과 함께 마이크로캡슐로 형성될 수 있다. 2) 경구 투여용 액체 투여 형태에는 약학적으로 허용되는 에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 또는 팅크가 포함된다. 활성 화합물액체 외에 액체제형으로는 해당 영역세서 자주 사용되는 희석제가 사용되는데 이를테면 물 혹은 기타 용해제, 게면활성제, 유화제가 있는바 예를들면 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부탄디올, 디메틸포름아미드 및 오일, 특히 면실유, 땅콩유, 옥수수 배아유, 올리브유, 피마자유 및 참기름 또는 이들 물질의 혼합물 등이 있다.이러한 불활성 희석제에 외에도 조성물은 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향미제 및 향수와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 활성 화합물에 외에도 현탁액에는 현탁제가 포함되는데 이를테면 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메톡사이드 및 한천, 또는 이들 물질의 혼합물 등이 있다. 3) 비경구 주사용 조성물은 생리학적으로 허용되는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 및 멸균 주사액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 분말을 포함할 수 있다. 적합한 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 부형약으로는 물, 에탄올, 폴리올 및 이들의 적절한 혼합물을 포함한다. 국소 투여를 위한 본 발명의 화합물의 투여 형태는 연고, 분말, 패치, 스프레이 및 흡입제를 포함한다. 활성 성분은 생리학적으로 허용되는 담체 및 필요한 경우 필요되는 보존제, 완충제 또는 추진제와 멸균 조건에서 혼합된다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 약학적으로 허용가능한 화합물과 조합하여 투여될 수 있다.
의약 조성물을 사용할 때 안전하고 유효한 양은 치료를 필요로 하는 본 발명의 화합물은 필요로 하는 포유동물(예: 인간)에 적용되며 여기서 투여되는 투여량은 약제학적으로 고려되는 유효량을 사용하는데 체중 60kg의 사람의 경우, 1일 용량은 일반적으로 1~2000mg, 바람직하게는 20~500mg(더 바람직하게는 50 내지 200mg)이다. 물론, 특정 투여량은 투여 경로, 환자의 건강 상태 등과 같은 인자도 고려해야 하며, 이는 숙련된 의사의 기술 범위 내에서 고려해야 한다.
본 발명은 다음과 같은 주요 유익한 효과를 갖는다：
(a) 암렉사녹스는 상당한 항바이러스 효과가 있다.
(b) 암렉사녹스는 안전성이 뛰어나다.
(c) 암렉사녹스는 단독으로 사용하거나 다른 관련 항바이러스제와 병용할 수 있으며 기존 항간염 바이러스 치료제보다 효과가 우수하고 상업적 전망도 좋다.
본 발명은 구체적인 실시방법과 결합하여 진일보로 설명될 것이다. 이 실시방법 사례는 단지 본 발명을 예시하기 위해 사용된 것이며 본 발명의 범위를 제한하지 않는다는 것을 이해해야 한다. 다음 실시예에서 특정 조건을 나타내지 않은 실험 방법은 일반적으로 기존 조건 또는 제조업체에서 권장하는 조건을 따른다. 달리 명시되지 않는 한 백분율 및 건수는 중량으로 계산된다.
실시예 1 암렉사녹스는 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 게놈 DNA 복제를 억제한다.
성장 상태가 좋은 HepG2 간 세포를 6공 마이크로 플레이트에 106 세포/구멍에 접종하고 밤을 지샌 후 2μg의 HBV 바이러스 게놈DNA(유전자형B)를 구멍당 lipofectamine 2000으로 트렌스펙션하여 바이러스 감염 세포 모델을 구축하였다. 트렌스펙션 후 16-24시간 후에 암렉사녹스, 라미부딘, 엔테카비르, 테노포비르를 최종 농도 10μM로 추가한다. 대조군은 동일한 부피의 DMSO(1/1000, v/v)로 추가되었다. 96시간 후 세포를 두 그룹으로 나누어 한 그룹은 게놈 DNA를 추출하고 다른 그룹은 HIRT 추출법으로 유리 DNA를 추출한 후 핵산외부가수분해효소(NEB)를 이용하여 선형 DNA를 제거하였다. 원형 HBV DNA 및 게놈 GAPDH는 정량적 PCR에 의해 검출되었다. 원형 HBV DNA의 가장 높은 값은 100%로 정의된다(n=5).
도 1의 비교로부터 암렉사녹스가 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 게놈 DNA 복제를 억제함을 알 수 있으며, 그 효과는 기존 임상 약물과 대등하다.
실시예 2 암렉사녹스는 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 낮추고 그 효과는 기존 임상 약물보다 우수하다.
성장 상태가 좋은 HepG2 간 세포를 6공 마이크로 플레이트에 106 세포/구멍에 접종하고 밤을 지샌 후 2μg의 HBV 바이러스 게놈DNA(유전자형B)를 구멍당 lipofectamine 2000으로 트렌스펙션하여 바이러스 감염 세포 모델을 구축하였다. 트렌스펙션 후 16-24시간 후에 암렉사녹스, 라미부딘, 엔테카비르, 테노포비르를 최종 농도 10μM로 추가한다. 대조군은 동일한 부피의 DMSO(1/1000, v/v)로 추가되었다. 트렌스펙션 48시간 후, 각 구멍의 세포를 6 cm 배양 플레이트에서 번식시켰다. 트렌스펙션 96시간 후, 배지 상청액에서 B형 간염 표면 항원(HBsAg)의 수준을 검출하고 ELISA로 정량화하였다.
암렉사녹스는 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시키고 그 효과는 기존 임상 약물보다 우수함을 도 2의 비교에서 알 수 있다.
실시예 3 암렉사녹스는 정맥 고혈압의 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시킨다.
야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 꼬리 정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(게놈 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모형을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 5마리씩 조를 나눴다. 둘째 날부터 암렉사녹스(AMLE, 50mg/kg/day) 또는 라미부딘(530mg/kg/day) 또는 같은 부피와 농도의 용해제 사이클로덱스트린(대조군)을 경구 투여한다. 감염 9일째에 꼬리에서 약 100㎕의 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 후 말초혈액 내 B형 간염 바이러스 표면항원(HBsAg)의 농도를 ELISA로 검출하였으며, OD 값은 450 nm는 마이크로플레이트 판독기에서 측정되었다.
도 3의 비교 결과로부터 암렉사녹스가 정맥 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시킬 수있으며 그 효과가 라미부딘보다 우수함을 알 수 있다.
실시예 4 암렉사녹스는 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 핵심 항원의 수준을 감소시키며 그 효과는 라미부딘과 동등하다. 야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 꼬리 정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(게놈 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모형을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 5마리씩 조를 나눴다. 둘째 날부터 암렉사녹스(AMLE, 50mg/kg/day) 또는 라미부딘(530mg/kg/day) 또는 같은 부피와 농도의 용해제 사이클로덱스트린(대조군)을 경구 투여한다. 감염 9일째에 꼬리에서 약 100㎕의 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 후 말초혈액 내 B형 간염 바이러스 표면항원(HBsAg)의 농도를 ELISA로 검출하였으며, OD 값은 450 nm는 마이크로플레이트 판독기에서 측정되었다.
도 4의 비교 결과로부터 암렉사녹스가 정맥 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원의 수준을 감소시킬 수있으며 그 효과가 라미부딘과 상당함을 알 수 있다.
실시예 5 암렉사녹스는 정맥 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 DNA 복제를 감소시킨다.
야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 미정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(유전자형 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모델을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 5마리씩 조를 나눴다. 다음 날부터 암렉사녹스(AMLE·50mg/kg/일), 라미부딘(530mg/kg/일), 엔테카비르(0.03mg/kg/일) 또는 테노포비르(530mg/kg/일) 또는 동일한 부피의 용해제 사이클로덱스트린(대조군)을 경구 투여한다. 감염 11일째에 마우스를 죽여 간을 분리하고 DpnI로 외래 DNA를 제거하고 정량 실시간 PCR로 마우스 간의 HBV 게놈 DNA를 검출하였다(n=5).
도 5에서 볼 수 있듯이 동물 모델에서 AMLE는 바이러스 DNA 부하를 효과적으로 억제할 수 있으며 그 효과는 임상적으로 사용되는 뉴클레오티드 유사 약물인 라미부딘과 엔테카비르와 비슷하다.
실시예 6 암렉사녹스는 세포 모델의 B형 간염 바이러스 표면 항원 수준을 감소시키기 위해 임상적으로 사용되는 뉴클레오티드 유사 약물과 결합될 수 있다.
성장 상태가 좋은 HepG2 간 세포를 6공 마이크로 플레이트에 106 106세포/구멍에 접종하고 밤을 지샌 후 2μg의 HBV 바이러스 게놈DNA(유전자형B)를 구멍당 lipofectamine 2000으로 트렌스펙션하여 바이러스 감염 세포 모델을 구축하였다. 트렌스펙션 16-24시간 후 도면과 같이 최종 농도가 10μM인 화합물을 추가한다("+"는 특정 약물 또는 활성 물질을 나타냄). 대조군은 동일한 부피의 DMSO(1/1000, v/v)로 추가되었다. 트렌스펙션 48시간 후, 각 구멍의 세포를 6 cm 배양 플레이트에 번식시켰다. 트렌스펙션 96시간 후, 배양 배지에서 HBV 표면 항원(HBsAg)이 ELISA에 의해 검출되었다.
도 6에서 세포 모델에서 암렉사녹스와 라미부딘 또는 테노포비르를 함께 사용하는 것이 AMLE를 단독으로 사용하는 것보다 더 효과적이며 라미부딘 또는 테노포비르를 단독으로 사용하는 것보다 더욱 효과적임을 알 수 있다.
실시예 7 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스 억제에 있어서 암렉사녹스의 용량 반응 관계
야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 미정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(유전자형 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모델을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 5마리씩 조를 나눴다. 둘째날부터 암렉사녹스를 경구 복용시켰는데 매일 투입되는 량은 도 7과 같으며 혹은 같은 부피와 같은 농도의 용해제 사이클로덱스트린(대조군) (대조군)을 투입했다. 감염 9일째에 꼬리에서 약 100㎕의 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 후 ELISA로 말초혈액 내 HBV 표면항원(HBsAg) 농도를 검출하였다.
도 7의 비교에서 암렉사녹스의 농도가 증가함에 따라 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스를 억제하는 능력이 향상됨을 알 수 있으며, 이러한 용량-효과 관계는 10mg 용량 미만에서 가장 명백하고 /kg 10-50mg/kg의 용량에서 상당한 효과가 있는것으로 나타났다.
실시예 8 정맥 고혈압 마우스 모델에서 A형 B형 간염 바이러스 억제에 대한 암렉사녹스의 억제 효과 및 용량 반응 관계
야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 미정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(유전자형 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모델을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 5마리씩 조를 나눴다. 주사 후 다음날부터 화합물의 시간곡선에 따라 라미부딘(3TC, 530 mg/kg/일, 1회/일), 테노포비르(TD, 530 mg/kg/일, 1회/일) 또는 지정된 농도의 아미라자놀(4, 8, 16 mg/kg/ 시간, 2회/일) 또는 동일한 부피 및 농도의 용해제 사이클로덱스트린(NC)등을 경구 복용한다.감염 9일째에 꼬리에서 약 100㎕의 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 후 말초혈액 내 HBV core 항원(HBeAg) 농도를 ELISA로 검출하였다.
도 8의 비교에서 암렉사녹스의 농도가 증가함에 따라 정맥 고혈압 마우스 모델에서 B형 간염 바이러스를 억제하는 능력이 향상되었음을 알 수 있는데 이러한 용량 반응 관계는 4~8mg/kg의 량에서 가장 확연히 드러났고 16mg/kg였을 때도 여전히 효과적이였다.
실시예 9 생쥐의 타고난 면역에 대한 암렉사녹스의 효과
야생 마우스(C57/B6)에 짧은 시간내 미정맥 주사를 통해 B형 간염 바이러스 게놈 DNA(유전자형 B) 10μg/마리씩 빠르게 주입하고 정맥 고압 모델을 이용해 바이러스 감염을 만들어 무작위로 조를 나눴다. 두번째 날부터 화합물의 시간곡선에 따라 라미부딘(3TC, 530 mg/kg/일, 1회/일), 테노포비르(TD, 530 mg/kg/일, 1회/일) 또는 특정 농도의 암렉사녹스(4, 8, 16 mg/kg/시간, 2회/일) 또는 동일한 부피와 농도의 용해제 사이클로덱스트린(NC)을 경구 투입시켰다. 감염 9일째에 꼬리에서 약 100μl의 혈액을 채취하여 혈청을 분리하고 ELISA로 마우스의 말초혈액 내 I형 인터페론 IFN-α의 농도를 검출하였다. 도 9에서 나타난 바와 같이 암렉사녹스는 HBV 바이러스 감염, 특히 I형 인터페론 유도에 의한 자연 면역 반응에 선명한 영향을 미치지 않음을 알 수 있다.
실시예 10 HepAD38 세포 모델에서 B형 간염 바이러스에 대한 암렉사녹스의 효과
2x105의 성장 상태가 양호하며 안정적으로 표달 가능한 HBV의HepAD38세포종을 콜라겐으로 처리 된 6 마이크로 플레이트에 담고 대응 농도의 테스트물을 추가한다: 엔테카비르(ETV)의 최종 농도는 1μM이고 암렉사녹스(AML)의 최종 농도는 각각 20μM, 10μM 및 5μM이다.두 세트의 대조군이 동시에 설정되었는데 하나는 용해제만 사용(DMF)하고 다른 하나는 항생제만 사용(테트라사이클린)했다. 모든 그룹에는 3개의 더블 포어가 있다. 시험물질을 첨가한 후 96시간 및 144시간 후, 세포 배양 상청액 500㎕를 사용하여 상청액의 DNA를 추출하고, 상청액 내 HBV DNA의 양을 qPCR로 검출하였다. 144시간 후, 세포를 수집하고 용해 완충액 A(50mM Tris-HCl, pH 7.4, 1mM EDTA 및 1% NP-40)에 용해시키고, 용해물의 상청액 및 침전물을 수집하고 그 속에서 DNA를 추출하며 정량 실시간으로 정량한다. 세포 용해물의 침전물에서 DNA를 추출하고 엑소뉴클레아제(NEB)에 의해 선형 DNA를 제거하여 원형 DNA(cccDNA)만 확인되었다(도 10). 세포 용해물의 상청액에 있는 바이러스 DNA는 핵심 입자 DNA(core particle DNA)로 정의된다(도 11). 세포 배양 상층액의 바이러스 DNA 정량은 도 12를 참조.
결과는 도 10, 11 및 12에서 알수 있는 바 암렉사녹스는 HepAD38 세포 모델에서 B형 간염 바이러스의 복제를 효과적으로 억제하였다.
실시예 11 세포 모델에서 B형 간염 바이러스의 표면 항원 및 핵심 항원에 대한 암렉사녹스의 효과
2x105의 성장 상태가 양호하며 안정적으로 표달 가능한 HBV의HepAD38세포종을 콜라겐으로 처리된 6 마이크로 플레이트에 담고 대응 농도의 테스트물을 추가한다: 각각 20μM, 10μM 및 5μM이다. 두 세트의 대조군이 동시에 설정되었는데 하나는 용해제만 사용(DMF)하고 다른 하나는 항생제만 사용(테트라사이클린)했다. 모든 그룹에는 3개의 더블 포어가 있다. 시험물질을 첨가한 후 24시간, 48시간, 96시간, 144시간에 각기 500㎕의 배양물의 상청액을 추출하여 ELISA가 HBV표면항원(HBsAg)의 농도를 검측하는데 사용된다.(도 13)
2x105의 성장 상태가 양호하며 안정적으로 표달 가능한 HBV의HepAD38세포종을 콜라겐으로 처리된 6 마이크로 플레이트에 담고 대응 농도의 테스트물을 추가한다: 엔테카비르(ETV)의 최종 농도는 1μM이고 암렉사녹스(AML)의 최종 농도는 각각 16μM, 10μM, 8μM, 5μM, 4μM, 2.5μM 및 2μM이다. 모든 실험은 3개의 더블 포어로 설정된다. 시험물질을 첨가한 후 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 144시간에 배양액에 상청액 500㎕를 추출하여 HBV 핵심 항원(HBeAg)의 농도를 ELISA로 검출한다. (도 14)
그 결과는 도 13 및 14에 나타나는데 암렉사녹스가 HepAD38 세포 모델에서 B형 간염 바이러스 표면 항원 및 핵심 항원의 수준을 유의하게 감소시킬 수 있음을 알 수 있다.
실시예 12 정맥성 고혈압 마우스 모델에서 암렉사녹스의 효과
6주 된 수컷 C57 마우스에 꼬리 정맥 주사를 통해 짧은 시간에 바이러스 게놈 DNA(유전자형 A) 10㎍/마우스를 주입하고 정맥 고혈압 모델을 사용하여 바이러스 감염을 확인하뒤 무작위로 팀을 짰다. 주사 후 2일째부터 화합물 시간 곡선에 따라 엔테카비르(ETV, 0.03mg/kg/일, 1회/일) 또는 특정 농도의 암렉사녹스(성인 기준 25, 50, 100, 150, 200mg/일, 1회/일) 혹은 동일한 부피와 농도의 용매제(모델)을 경구 투입한다. 동시에 공백대조를 만들어 감염되지 않은 마우스의 경구 투여약을 모형 그룹과 동일하게 투여 한다. 그룹 및 각 그룹 동물의 약 공급량은 아래 표와 같다.
Figure pct00002
*여기서 복용량은 성인 복용량으로 환산한 값임을 나타내면 변환 방법은 다음과 같다: 성인 체중이 60kg이라고 가정하면 성인 복용량/일 = 마우스 복용량/kg/일 * 60kg/9.1, 예를 들어 성인의 경우 25mg/day는 마우스의 3.8mg/kg/일에 해당한다.
투여 첫 1일, 3일 및 7일째에 각 마우스의 꼬리정맥에서 적당량의 혈액을 채취하고 9일째에 마우스를 죽인 후 나머지 말초혈액을 채취한다. 모든 혈액 샘플을 원심분리하여 혈청을 수집하고 두개로 나눈다. 하나는 ELISA로 HBV 표면 항원(HBsAg) 농도를 검출하는 용도로 쓰이고, 다른 하나는 알라닌 아미노 전이 효소 키트(비색법)(남경건성생물공정연구소)로 알라닌아미노 전이 (ALT) 효소의 활성을 확인하는 것이다.
결과는 도 15 및 16에 나와 있다. 도 15에서 7일 동안 암렉사녹스를 지속적으로 투여한 후 50 mg/day 이상의 용량은 마우스의 표면 항원(HBsAg) 수준을 효과적으로 감소켰고 HBV 활성을 억제하였다. 도 16을 통해 암렉사녹스가 알라닌 아미노 전이 효소의 활성을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 알 수 있는데 이는 암렉사녹스가 간 손상 수준을 효과적으로 감소시키고 정맥 고혈압 및 HBV로 인한 간 손상 복구에 효과가 있음을 나타낸다.
실시예 13
6주 된 수컷 C57 마우스에 꼬리 정맥 주사를 통해 짧은 시간에 바이러스 게놈 DNA(유전자형 A) 10㎍/마우스를 주입하고 정맥 고혈압 모델을 사용하여 바이러스 감염을 확인하뒤 무작위로 팀을 짰다. 주사 후 두번째 날 부터 화합물 시간 곡선에 따라 엔테카비르(ETV, 0.03 mg/kg/일, 1회/일), 라미부딘(3TC, 530 mg/kg/일, 1회/일), 테노포비르(TDF, 530 mg/kg/일, 1 시간/일) 또는 암렉사녹스(성인 용량 150mg/일, 1회/일) 또는 동일한 부피와 농도의 용제를 경구 투입한다.(모델) 동시에 공백대조를 만들어 감염되지 않은 마우스의 경구 투여약을 모형 그룹과 동일하게 투여 한다. 그룹 및 각 그룹 동물의 약 공급량은 아래 표와 같다:
Figure pct00003
*여기서 복용량은 성인 복용량으로 환산한 값임을 나타낸다. 변환 방법은 다음과 같다: 성인의 체중이 60kg이라고 가정했을 때, 성인 약물의 복용량/일 = 마우스에 사용된 약물의 복용량/kg/일 * 60kg/9.1이다. 성인의 경우 150mg/day는 마우스의 경우 22.8mg/kg/day와 동일하다.
투여 5일 및 7일째에 각 군 마우스에 적당량의 꼬리 정맥혈을 투여하고 마우스를 죽인 후 9일째에 나머지 말초혈액을 채취한다. 모든 혈액 샘플을 원심분리하여 혈청을 수집하였고 HBV 표면 항원(HBsAg)의 농도를 ELISA로 검출하였다. 구체적인 방법은 ELISA 키트의 설명서를 참조한다.
결과는 도 17에 나타낸 것과 같다. 150 mg/일씩 5일 동안 연속 암렉사녹스를 투여한 후 혈중 HBsAg 수치가 현저히 감소했음을 알 수 있는데 이는 150 mg/일 씩 투여한 암렉사녹스가 우수한 항 B형 간염 활성을 나타냄을 나타낸다.
실시예 14 유전자전환 마우스 모델에서 암렉사녹스의 역할
생후 6주된 수컷 C57BL/6-HBV 유전자전환 마우스(북경위통달생물기술유한공사제공) 10마리를 무작위로 2군(대조군 5마리, 투여군 5마리)으로 나누었다. 각 그룹 동물의 복용량은 다음과 같다.
Figure pct00004
투여 경로: 경구투여, 투여를 위해 1mL 멸균 주사기를 사용한다.
투여 빈도: 시험 제품을 35일 동안 1일 1회 물과 함게 투여한다.
투여용량: 10mL/kg, 투여 전 각 동물들의 가장 최근 체중에 따라 각 동물의 투여량을 결정한다.
투여 7일, 14일, 21일, 35일째에 각 마우스군의 꼬리정맥에서 적당량의 혈액을 채취한뒤 혈청을 분리하여 PBS로 5000배 희석한 후 HBV 표면항원(HBsAg) 의 농도를 ELISA 키트로 검출했다. 마이크로플레이트 측정기에서 450 nm의 OD 값을 측정한다.
억제율은 다음 공식에 따라 계산된다.
억제율=[(OD450 세포조절구멍-OD450 약 투여 구멍)/OD450 세포조절구멍]×100%
HBV 유전자전환 마우스 모델을 사용하여 암렉사녹스의 효능을 평가하였으며, HBV 표면 항원 HBsAg의 검출 결과는 도 18에 나타났다. 48 mg/kg의 농도에서 암렉사녹스는 유전자전환 마우스 내 HBsAg 수준을 억제할 수 있다.
실시예 15 쥐의 면역 세포에 대한 암렉사녹스의 효과
6주 된 수컷 C57 마우스에 꼬리 정맥 주사를 통해 짧은 시간에 바이러스 게놈 DNA(유전자형 A) 10㎍/마우스를 주입하고 정맥 고혈압 모델을 사용하여 바이러스 감염을 확인한뒤 무작위로 팀을 짰다. 주사 후 두번째 날 부터 화합물 시간 곡선에 따라 라미부딘(3TC, 530 mg/kg/일, 1회/일), 테노포비르(TDF, 530 mg/kg/일, 1회/일), 엔테카비르(ETV, 0.03 mg/kg) /일, 1회/일 ), 또는 지정된 농도의 암렉사녹스(4, 8, 16 mg/kg/회, 2회/일) 또는 동일한 부피와 농도의 용해제를 경구 투여한다.(모델) 동시에 공백대조를 만들어 감염되지 않은 마우스의 경구 투여약을 모형 그룹과 동일하게 투여 한다. 그룹 및 각 그룹 동물의 약 공급량은 아래 표와 같다:
Figure pct00005
9일째에 마우스를 희생시켜 채혈한 뒤 유세포 염색을 진행한다. 모든 세포를 PBS 중 항-FcγRIII/II(BD Biosciences에서 구매)로 30분 동안 처리하였다. CD3e-FITC(BD Biosciences에서 구입). CD4-PE, CD8a-APC-Vio770 및 CD34-FITC(GE).CD19-APC, CD11b-PE-Cyanine7 및 CD117-efflor 450(eBioscience에서 구입). 염색 후, 샘플을 500 μL PBS에 현탁시키고 BD AriaⅢ 유세포분석기로 분석하였다.
도 19에서 보여지는 것처럼 암렉사녹스는 B 세포와 T 세포 모두에 대한 억제 효과가 있으며 억제 효과는 용량 의존적이며, 라미부딘도 면역 세포에 일정한 억제 효과가 있다. 농도가 증가되면 면역세포의 억제가 증가하며 HBV에 대한 억제효과는 오히려 증가하는데 이는 암렉사녹스가 면역계를 통해 항-HBV 효과를 발휘하지 못한다는 것을 의미한다.
실시예 16 세포독성 시험
MTT 방법을 사용하여 HepG2, HCT-116, Hela, A549, MCF7, MKN45, THP-1, Huh7 및 293 세포에서 암렉사녹스의 독성을 테스트했다. 대수 성장기의 다양한 세포를 96-마이크로 플레이트에 6,000개/공으로 주입하고 24시간 후 배양한 후 다양한 농도의 암렉사녹스를 첨가하였는 바(최종 농도는100、50、25、12.5、6.25、3.125M)，양성 대조군 독소루비신(최종 농도 1M), 공백 대조군에 동일한 부피의 배양액을 추가하고 용해제 대조군 DMSO 투여량은 시험군 0.1%에서 사용된 최대 투여량을 기준으로 하며 각 농도에는 4개의 더블 포오가 존재한다. 약물 작용 72시간 후, 5mg/mL MTT 20L를 세포에 첨가하고 37℃에서 4시간 동안 배양하며 100L 삼중 용액(10% SDS, 5% 이소부탄올, 12mM 염산)을 첨가한 후 96공 세포배양 플레이트를 37±1℃, 5% CO2 인큐베이터에 밤새 놓고 마이크로 플레이트 측정기로 570nm에서 OD 값을 측정하였다.
종양 세포 성장의 억제율은 다음 공식에 따라 계산된다.
억제율=[(OD570 세포조절구멍-OD570 약 투여 구멍)/OD570 세포조절구멍]×100%
시험 결과는 표 1과 같다.
표 1
Figure pct00006
본 발명의 화합물은 50M 미만의 농도에서 시험한 9종의 세포에서 명백한 세포독성을 나타내지 않았다. 100M의 농도에서 MKN45, HCT-116, MCF7 및 Huh7 세포에서 일정한 세포독성을 나타냈지만 다른 5가지 유형의 세포에서는 명백한 세포독성을 나타내지 않았다.
본 발명에서 언급된 모든 문헌은 매개 문헌이 단독으로 인용되어 참고하는 것처럼 신청 중에서 인용되어 참고되었다. 또한, 본 발명이 속하는 기술 분야의 기술인원이라면 상술한 본 발명에 관련 된 내용을 읽은 후 본 발명에 다양한 변경 또는 수정을 가할 수 있음을 이해해야 하는 바 이것들은 모두 등가 형태는 또한 본 출원의 첨부된 청구범위에 의해 정의된 범위에 속한다.

Claims (11)

  1. 항바이러스 약물을 제조하기 위한 암렉사녹스의 용도.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항바이러스 약물이 간염 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료에 사용되거나, 간염 바이러스 감염에 의한 질병의 예방 및/또는 치료에 사용되는, 암렉사녹스의 용도.
  3. 제2항에 있어서, 상기 간염 바이러스가 B형 간염 바이러스인, 암렉사녹스의 용도.
  4. 제2항에 있어서, 상기 간염 바이러스 감염에 의한 질병이 급성 간염, 만성 간염, 간경화, 간섬유화 또는 간암인, 암렉사녹스의 용도.
  5. 제2항에 있어서, 상기 간염 바이러스 감염에 의한 질병이 간 손상인, 암렉사녹스의 용도.
  6. 1) 암렉사녹스의 치료 유효량, 및
    2) 다른 하나 이상의 항바이러스 활성 물질의 치료 유효량, 및
    3) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 의약 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항바이러스 활성 물질이 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체인, 의약 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체가 라미부딘, 지도부딘, 스탠부딘, 테노포비르, 엔테카비르, 아바카비르, 잘시타빈, 엠트리시타빈, 디다노신, 네비라핀, 델라비르딘, 에파비렌즈, 에트라비린 및 릴피버린 중 하나 이상인, 의약 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체가 라미부딘, 테노포비르 또는 엔테카비르 중 하나 이상인, 의약 조성물.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 의약 조성물이 간염 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료용 약제, 또는 간염 바이러스 감염에 의한 질병의 예방 및/또는 치료용 약제의 제조에 사용되는, 의약 조성물의 용도.
  11. 제10항에 있어서, 상기 간염 바이러스가 B형 간염 바이러스인, 의약 조성물의 용도.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1913141A2 (en) * 2005-06-03 2008-04-23 The CBR Institute for Biomedical Research, Inc. Sirna microbicides for preventing and treating viral diseases
JP2010083871A (ja) * 2008-09-02 2010-04-15 Daiichi Sankyo Healthcare Co Ltd 抗アデノウイルス剤を含有する医薬組成物
EP2991647B1 (en) * 2013-05-02 2019-04-24 The Regents Of The University Of Michigan Deuterated amlexanox with improved metabolic stability
US10370664B2 (en) * 2013-11-07 2019-08-06 University Of Southern California Use of IKK epsilon inhibitors to activate NFAT and T cell response
US11420922B2 (en) * 2015-06-11 2022-08-23 Saint Louis University Hydroxylated tropolone inhibitors of nucleotidyl transferases in herpesvirus and Hepatitis B and uses therefor

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