CN112098646A - 一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒包括CD3 FITC、CD56 FITC、CD45 PerCP‑Cy5.5、CD8 PE、CD19 PE和CD4 PE‑Cyanine7共6种单克隆抗体的混合物，以及红细胞裂解液。本发明的检测方法包括：取试剂盒中的单克隆抗体混合物和100μL的外周血室温避光孵育，加入红细胞裂解液室温避光孵育，再加入PBS溶液室温避光孵育，得到检测样本，将检测样本上流式细胞仪检测，测定各个淋巴细胞亚群的百分比。本发明的提供的试剂盒对淋巴细胞亚群的定量检测能够降低对流式细胞仪机型的要求，并且操作简单，适用范围广。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学检测技术领域，具体涉及一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒及其检测方法。
背景技术
机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标就是检测T、B、NK淋巴细胞的水平。淋巴亚群的测定有助于了解机体免疫状况以及一些疾病的监测，利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过流式细胞仪分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比列。CD45分子在所有白细胞均有表达，因此由CD45+圈出总淋巴细胞，在淋巴细胞中识别出CD3+的T细胞，CD3+CD4+双阳性细胞为真正的辅助/诱导性T细胞；CD8的表达不只限于细胞毒性T细胞，此抗原在部分的NK细胞上也能检测到，因此真正的抑制/细胞毒性T细胞应该是CD3+CD4-CD8+；CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关，比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；NK细胞表面有CD16和CD56等标志，CD3-CD16+和/或CD56+细胞是真正的NK细胞，NK细胞或表达CD16，或表达CD56，但它们不表达CD3，NK细胞介导某些肿瘤和病毒感染细胞的细胞毒性反应；B细胞的表面标志是CD19，CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞，B淋巴细胞为体液免疫的重要指标。
淋巴细胞亚群检测作为流式细胞仪平台上最早推广到临床的检验项目，目前已经被临床广泛接受和认可，同时该检测项目也是目前流式细胞仪平台上唯一一个具有卫生部组织的室间质评项目。目前临床使用的淋巴细胞亚群检测试剂盒多为美国BD公司开发的，该试剂盒包含7种单克隆抗体，分别标记有6种不同的荧光素，这样对流式细胞仪的硬件要求就很高，必须至少配备488nm和640nm两种激光器，具有相对应的6种不同的荧光通道才能完成检测，由于市面上流式细胞仪机型种类丰富，仪器硬件配置高低不均，加上BD公司生产的试剂成本较高，难以满足该项检测技术的普遍应用。
发明内容
本发明的目的是弥补现有技术的不足，提供一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒和检测方法，通过减少单克隆抗体所标记的荧光素种类，检测4种不同的荧光素，即可完成淋巴细胞亚群的检测，利用本发明的试剂盒对淋巴细胞亚群的定量检测能够降低对流式细胞仪机型的要求，配备488nm单激光器，标配有FITC、PE、PerCP和PE-Cy7四种荧光通道的机型即可完成检测，并且操作简单，适用范围广。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，所述试剂盒至少包括第一试剂容器，所述第一试剂容器装有单克隆抗体混合物，所述单克隆抗体混合物为CD3 FITC、CD56 FITC、CD45PerCP-Cy5.5、CD8 PE、CD19 PE和CD4 PE-Cyanine7。
进一步地，所述单克隆抗体混合物中，各单克隆抗体的质量份为：0.2-0.3份CD3FITC、0.5-1.00份CD56 FITC、0.01-0.02份CD45 PerCP-Cy5.5、0.005-0.01份CD8 PE、0.0625-0.125份CD19 PE、0.05-0.075份CD4 PE-Cyanine7。CD45+可以圈出所有的淋巴细胞，在此基础上，CD3+CD4+标记的为辅助/诱导性T细胞，CD3+CD4-CD8+标记的为抑制/细胞毒性T细胞，CD3- CD56+标记的为NK细胞，CD3-CD19+标记的为B细胞，因此本发明单克隆抗体混合物可以标记所有的淋巴细胞。
更进一步地，所述单克隆抗体混合物的含量为20μL。
进一步地，所述试剂盒还包括第二试剂容器，所述第二试剂容器装有红细胞裂解液；所述红细胞裂解液包括：柠檬酸钠二水合物、异丁醇、甲醛、高氯酸钠、氯化镁、氯化钙、甘油和纯化水。所述红细胞裂解液裂解人外周血样本，使样本仅保留白细胞，并维持至少24小时的样本稳定性；且不需要离心洗涤，减少操作步骤，增加检测效率。
进一步地，所述红细胞裂解液各物质的质量占比为：柠檬酸钠二水合物1.029%-1.911%、异丁醇0.518-0.962%、甲醛3.066%-5.694%、高氯酸钠1.288%-2.392%、氯化镁0.0336%-0.0624%、氯化钙0.0385%-0.0715%、甘油8.75%-16.25%，余量为纯化水。
更进一步地，所述红细胞裂解液的含量为500μL。
进一步地，所述试剂盒还包括第三试剂容器，所述第三试剂容器装有PBS溶液，所述PBS溶液的含量为500μL。
一种定量检测淋巴细胞亚群的检测方法，包括以下步骤：
①在检测容器的底部加入单克隆抗体混合物；
②向所述检测容器中加入100μL充分混匀的EDTA抗凝人外周血样本，将所述单克隆抗体混合物和所述样本混匀，得到第一过程混合物，在室温避光环境下静置孵育15-20分钟；
③ 再向所述检测容器中加入红细胞裂解液，将所述第一过程混合物与所述红细胞裂解液混匀，得到第二过程混合物，在室温避光环境下静置孵育10-15分钟；
④ 最后向所述检测容器中加入PBS溶液，将所述第二过程混合物与所述PBS溶液混匀，在室温避光环境下静置孵育5-10分钟，得到检测样本，将所述检测样本上流式细胞仪进行检测。
进一步地，所述混匀采用涡旋震荡方式。
综上所述，本申请上述各个实施例可以具有如下一个或多个优点或有益效果：
1. 本发明使用了6种单克隆抗体，但是抗体所标记的荧光素只有FITC、PE、PerCP-Cy5.5和PE-Cy7这4种，使用配备488nm单激光器的流式细胞仪即可完成检测，大大提高了适用范围。
2. 本发明的红细胞裂解液不仅能够保证红细胞的有效破碎，同时降低细胞的自发荧光，而且检测样本制备过程中无需离心，操作简单，提高了检测效率，缩短了整个检测时间。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为淋巴细胞的流式图；
图2为T淋巴细胞群、NK细胞群和B细胞群的流式图；
图3为诱导T细胞群和抑制T细胞群的流式图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另作定义，本公开所使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内有一般技能的人士所理解的通常意义。
【实施例1】
一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，包括以下成分：单克隆抗体混合物20μL，红细胞裂解液500μL。
其中，单克隆抗体混合物各成分含量如下：
① CD3 FITC，0.24μg；
② CD56 FITC，0.6μg；
③ CD45 PerCP-Cy5.5，0.0192μg；
④ CD8 PE，0.006μg；
⑤ CD19 PE，0.075μg；
⑥ CD4 PE-Cyanine7，0.075μg。
红细胞裂解液，各成分的质量占比如下：
① 柠檬酸钠二水合物浓度1.764%；
② 异丁醇浓度0.888%；
③ 甲醛浓度5.256%；
④ 高氯酸钠浓度2.208%；
⑤ 氯化镁浓度0.0576%；
⑥ 氯化钙浓度0.066%；
⑦ 甘油浓度15%；
余量为纯化水。
【实施例2】
一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，包括以下成分：单克隆抗体混合物20μL，红细胞裂解液500μL，PBS溶液500μL。
其中，单克隆抗体混合物各成分含量如下：
①CD3 FITC，0.21μg；
②CD56 FITC，0.8μg；
③CD45 PerCP-Cy5.5，0.015μg；
④CD8 PE，0.008μg；
⑤CD19 PE，0.1μg；
⑥CD4 PE-Cyanine7，0.05μg。
红细胞裂解液，各成分含量如下：
①柠檬酸钠二水合物浓度1.258%；
②异丁醇浓度0.518%；
③甲醛浓度3.556%；
④高氯酸钠浓度1.512%；
⑤氯化镁浓度0.0362%；
⑥氯化钙浓度0.0418%；
⑦甘油浓度10%；
余量为纯化水。
【实施例3】
使用实施例1的试剂盒，以某公司的淋巴细胞亚群检测试剂盒作为对照试剂盒，同时对20例临床样本进行检测。本实施例采用两种流式细胞仪，分别为NovoCyteD2060R和DxFLEX。每一次测试的操作步骤如下：取20μL单克隆抗体混合物和100μL外周血室温避光孵育15分钟，加入500μL红细胞裂解液室温避光孵育10分钟，加入500μL的PBS溶液室温避光孵育5分钟，即可上机检测。重复上述步骤，得到80组检测数据，如表1所示。对检测结果做线性回归分析，比较两个试剂盒在不同设备下测试结果的一致性，结果如表2所示。
表1 实施例3检测得到的数据
表2 对表1进行线性回归分析的结果
结果表明，实施例1的试剂盒与对照试剂盒相比，两种机型各细胞亚群的R2最小值为0.9597，大于0.95，表示两种试剂盒检测结果保持一致。
【实施例4】
采用实施例1提供的试剂盒，检测1例临床样本，检测采用的流式细胞仪为NovoCyteD2060R。具体操作步骤如下：取20μL单克隆抗体混合物和100μL外周血室温避光孵育15分钟，加入500μL红细胞裂解液室温避光孵育10分钟，加入500μL的PBS溶液室温避光孵育5分钟，即可上机检测。检测结果如表3所示，各淋巴细胞亚群的分布及阳性细胞百分比参见图1-3。其中图1为CD45vs SSC图，用于圈出淋巴细胞；图2为CD3/CD56 vs CD8/CD19 图，用于圈出CD3+的T淋巴细胞群、CD3-CD56+的NK细胞群和CD3-CD19+的B细胞群；图3为CD4 vsCD8/CD19，以CD3+设门，圈出CD3+CD4+诱导T细胞群和CD3+CD8+抑制T细胞群。将检测样本在2~8℃的环境下放置24小时后，上机检测，检测结果与染色后立即检测的进行比较，评估检测样本的染色后稳定性。
表3 实施例4的检测结果
检测结果表明，染色后立即检测与检测样本在2~8℃放置24小时后重复检测，前后两次各淋巴细胞亚群的百分比相对偏差最大值为5.82%，符合稳定性判断标准关于“染色后稳定性”的要求，因此建议检验样本染色标记后在24小时内完成检测。
【实施例5】
本实施例采用了实施例1的试剂盒检测已知靶值的质控品（IMMUNO-TROLTM CELLS货号：6607077 批号：7587198供应商：贝克曼库尔特），检测使用的流式细胞仪为NovoCyteD2060R。操作步骤如下：本方法的操作步骤为取20μL单克隆抗体混合物和100μL质控品室温避光孵育15分钟，加入500μL红细胞裂解液室温避光孵育10分钟，加入500μL的PBS溶液室温避光孵育5分钟，即可上机检测，检测结果应在质控品的靶值范围内，如表4所示。
表4 实施例5的检测结果
检测结果表明，本实施例的检测结果均在质控品的靶值范围内。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括第一试剂容器，所述第一试剂容器装有单克隆抗体混合物，所述单克隆抗体混合物为CD3 FITC、CD56FITC、CD45 PerCP-Cy5.5、CD8 PE、CD19 PE和CD4 PE-Cyanine7。
2.根据权利要求1所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体混合物中各单克隆抗体的质量份为：0.2-0.3份CD3 FITC、0.5-1.00份CD56 FITC、0.01-0.02份CD45 PerCP-Cy5.5、0.005-0.01份CD8 PE、0.0625-0.125份CD19 PE、0.05-0.075份CD4 PE-Cyanine7。
3.根据权利要求1所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体混合物的含量为20μL。
4.根据权利要求1所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二试剂容器，所述第二试剂容器装有红细胞裂解液；所述红细胞裂解液包括：柠檬酸钠二水合物、异丁醇、甲醛、高氯酸钠、氯化镁、氯化钙、甘油和纯化水。
5.根据权利要求4所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述红细胞裂解液中各物质的质量占比为：柠檬酸钠二水合物1.029%-1.911%、异丁醇0.518-0.962%、甲醛3.066%-5.694%、高氯酸钠1.288%-2.392%、氯化镁0.0336%-0.0624%、氯化钙0.0385%-0.0715%、甘油8.75%-16.25%，余量为纯化水。
6.根据权利要求4所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述红细胞裂解液的含量为500μL。
7.根据权利要求1所述的一种定量检测淋巴细胞亚群的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第三试剂容器，所述第三试剂容器装有PBS溶液，所述PBS溶液的含量为500μL。
8.一种定量检测淋巴细胞亚群的检测方法，其特征在于，该检测方法利用如权利要求1-7中任一项所述的试剂盒，包括以下步骤：
①在检测容器的底部加入单克隆抗体混合物；
②向所述检测容器中加入100μL充分混匀的EDTA抗凝人外周血样本，将所述单克隆抗体混合物和所述样本混匀，得到第一过程混合物，在室温避光环境下静置孵育15-20分钟；
③ 再向所述检测容器中加入红细胞裂解液，将所述第一过程混合物与所述红细胞裂解液混匀，得到第二过程混合物，在室温避光环境下静置孵育10-15分钟；
④ 最后向所述检测容器中加入PBS溶液，将所述第二过程混合物与所述PBS溶液混匀，在室温避光环境下静置孵育5-10分钟，得到检测样本，将所述检测样本上流式细胞仪进行检测。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述混匀采用涡旋震荡方式。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN112684188A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-04-20 | 四川扬克斯特科技有限公司 | 用于犬类伴侣动物tb淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒及方法 |
| CN113866409A (zh) * | 2021-09-30 | 2021-12-31 | 广州中科蓝华生物科技有限公司 | 一种同时检测多种细胞亚群及功能变化的试剂盒及其应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103604919A (zh) * | 2013-11-05 | 2014-02-26 | 复旦大学附属华山医院 | 一种检测人外周血中t淋巴细胞活化期标记物的方法 |
| CN104360050A (zh) * | 2014-09-22 | 2015-02-18 | 重庆医科大学附属儿童医院 | 一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒 |
| CN104458539A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-03-25 | 重庆医科大学附属儿童医院 | 一种非诊断目的检测淋巴细胞增殖情况的方法及其试剂盒 |
| CN108375675A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-08-07 | 李小峰 | 外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测方法 |
| CN109355286A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-02-19 | 长春市志昂生物科技有限公司 | 一种免前处理自动化提取大体积全血dna的方法 |
| CN110023736A (zh) * | 2016-10-17 | 2019-07-16 | 圣拉斐尔医院有限责任公司 | 用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体 |
| CN110487706A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-22 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 |
-
2020
- 2020-11-23 CN CN202011317074.XA patent/CN112098646B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103604919A (zh) * | 2013-11-05 | 2014-02-26 | 复旦大学附属华山医院 | 一种检测人外周血中t淋巴细胞活化期标记物的方法 |
| CN104360050A (zh) * | 2014-09-22 | 2015-02-18 | 重庆医科大学附属儿童医院 | 一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒 |
| CN104458539A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-03-25 | 重庆医科大学附属儿童医院 | 一种非诊断目的检测淋巴细胞增殖情况的方法及其试剂盒 |
| CN110023736A (zh) * | 2016-10-17 | 2019-07-16 | 圣拉斐尔医院有限责任公司 | 用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体 |
| CN108375675A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-08-07 | 李小峰 | 外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测方法 |
| CN109355286A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-02-19 | 长春市志昂生物科技有限公司 | 一种免前处理自动化提取大体积全血dna的方法 |
| CN110487706A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-11-22 | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112684188A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-04-20 | 四川扬克斯特科技有限公司 | 用于犬类伴侣动物tb淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒及方法 |
| CN113866409A (zh) * | 2021-09-30 | 2021-12-31 | 广州中科蓝华生物科技有限公司 | 一种同时检测多种细胞亚群及功能变化的试剂盒及其应用 |
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