CN112067684A - 一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 - Google Patents
一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112067684A CN112067684A CN201910503816.9A CN201910503816A CN112067684A CN 112067684 A CN112067684 A CN 112067684A CN 201910503816 A CN201910503816 A CN 201910503816A CN 112067684 A CN112067684 A CN 112067684A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glycopeptide
- mass spectrometry
- solid phase
- acetonitrile
- nano material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 64
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims abstract description 20
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical compound C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims abstract description 27
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 21
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 14
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 10
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 10
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 10
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 10
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 10
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims 1
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 150000003548 thiazolidines Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 108010044715 asialofetuin Proteins 0.000 description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 238000001254 matrix assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrum Methods 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 102100030856 Myoglobin Human genes 0.000 description 4
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 4
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 4
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 102000004641 Fetal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010003471 Fetal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/62—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
Abstract
本发明属于蛋白质分析领域，涉及一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法，包括：利用高碘酸纳将糖肽糖链部分的羟基氧化为醛基，将半胱氨酸修饰的磁性纳米材料置于氧化后的糖肽溶液中，通过磁性纳米材料表面的β‑氨基硫醇基团与氧化后糖肽的醛基之间形成噻唑烷衍生物，将糖肽固定在磁性纳米材料上，清洗除去未共价结合的非糖肽，最后利用去糖链酶将捕获的糖肽从磁性纳米材料上释放下来，并送入质谱分析。本发明方法步骤简单、操作方便，可实现糖肽的超快速、高特异、高灵敏质谱分析。
Description
技术领域
本发明属蛋白质分析技术领域，涉及一种基于噻唑烷化学固相富集并质谱分析糖肽的新方法，具体涉及利用半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集糖肽并质谱分析的新方法。本发明方法能显著缩短糖肽共价富集并质谱分析的时间，并且具有步骤简单、操作方便、温和高效等特点。
背景技术
现有技术公开了蛋白质糖基化是最重要、最为普遍的翻译后修饰之一，它参与了生物体内众多生理病理活动，是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。目前质谱技术已成为糖蛋白质组研究的利器，实践显示，将低丰度糖肽从复杂体系中快速高效分离富集是质谱规模化解析糖蛋白质首要解决的问题。基于共价化学反应的糖肽富集方法因具有高选择性的优点而被广泛采用，然而，这些富集方法仍存在偶联时间过长、反应条件苛刻以及操作步骤繁琐的问题，导致复杂生物样本中糖基化位点鉴定周期长、灵敏度低且存在部分假阳性，等缺陷。基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽的新方法，该方法将有利于实现糖肽的超快速、高特异、高灵敏质谱分析，从而进一步促进糖蛋白质组研究。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的存在的不足与缺陷，提供一种步骤简单、操作方便、可实现糖肽超快速、高特异、高灵敏富集并质谱分析的新方法，具体涉及利用半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集糖肽并质谱分析的新方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
1.对糖肽样品进行氧化；
2.对糖肽样品进行固相富集；
3.将糖肽从固相材料上释放下来送入质谱分析。
具体的，本发明的方法中，采用半胱氨酸修饰的磁性纳米材料为固相，利用材料表面的β-氨基硫醇基团与氧化后糖肽的醛基之间形成噻唑烷衍生物，将糖肽固定在磁性纳米材料上，经外加磁场作用使得磁性纳米材料与溶液分离，最终实现糖肽的富集与质谱分析，其包括步骤：
1.在糖肽样品中加入10毫摩尔高碘酸钠，室温避光条件氧化1小时使糖肽上糖链中的羟基氧化成为醛基，再加入终浓度为20毫摩尔亚硫酸钠混旋10分钟终止氧化反应，最后将上述氧化后肽段冻干；
2.加入含50％乙腈和终浓度为5毫摩尔三(2-羧乙基)膦(TECP)的10毫摩尔乙酸铵缓冲液重溶上述肽段，再加入半胱氨酸修饰的磁性纳米材料，在50摄氏度孵育30分钟；
3.外加磁场，使得磁性纳米材料与溶液分离，并收集下层固相材料；
4.分别用400微升含50％乙腈10毫摩尔乙酸铵溶液、含50％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液和含80％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液顺序清洗材料各3次，每次收集固相材料；
5.用1毫升20毫摩尔碳酸氢铵水溶液重新混匀材料，并加入1微升去糖链酶PNGaseF，在37摄氏度反应过夜；
6.通过外加磁场作用下将磁性纳米材料从溶液中分离出来，将上清液(含有去糖链的糖肽)冻干用水重溶后进行MALDI-TOF MS分析。
本发明与现有技术的基于共价化学的糖肽富集方法相比，具有如下的优点：
1)本发明方法中，将共价偶联时间显著缩短至30分钟，能提高糖肽富集并质谱分析的通量，并且偶联反应条件温和，无需额外添加还原剂和催化剂，能有效避免样品的丢失与破坏。
2)本发明的富集方法具有高选择性：在糖肽与非糖肽摩尔比为1:100的混合物中特异地捕获糖肽，高灵敏度：检测限低至近飞摩尔水平，以及良好的重复性：六次重复富集糖肽质谱峰信噪比的CV<26％。
3)半胱氨酸修饰的磁性纳米材料通过一步修饰商业化氨基磁球即即可制备得到，因此，本发明的富集方法便于在其它实验室推广。
附图说明
图1是本发明富集方法的流程示意图。
图2是浓度为200纳克每微升标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段的MALDI-TOF MS谱图，MALDI-TOF MS谱图纵坐标为质谱峰的相对强度(100％Intensity)，横坐标为质荷比(m/z)；其中，(a)是富集前直接分析，(b)是经半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集后；●为非糖肽段的峰，^为糖肽的峰，@、#、＊为去糖链后的含不同糖基化位点的糖肽峰及其碎片；通过图(a)和图(b)对比可以得出，基于噻唑烷化学的超快速固相富集糖肽切实可行。
图3是标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段和标准非糖蛋白质马心肌红蛋白MYO酶解肽段混合溶液(摩尔比为1:100)的MALDI-TOF MS谱图，MALDI-TOF MS谱图纵坐标为质谱峰的相对强度(100％Intensity)，横坐标为质荷比(m/z)；其中，(a)是富集前直接分析，(b)是经半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集后；●为非糖肽段的峰，^为糖肽的峰，@、#、＊为去糖链后的含不同糖基化位点的糖肽峰及其碎片；通过图(a)和图(b)对比可以得出，基于噻唑烷化学的糖肽富集具有良好的选择性。
图4是初始浓度为20纳克每微升的标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段经半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集后的MALDI-TOF MS谱图，MALDI-TOF MS谱图纵坐标为质谱峰的相对强度(100％Intensity)，横坐标为质荷比(m/z)；#为去糖链后的含不同糖基化位点的糖肽峰及其碎片；从图中显示出，基于噻唑烷化学的糖肽富集具有较好的检测灵敏度(近飞摩尔水平)。
具体实施方式
实施例1基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的糖肽超快速富集可行性考察
配制100微升100纳克每微升的标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段溶液，用10毫摩尔高碘酸钠在室温避光条件氧化1小时后，加入终浓度为20毫摩尔亚硫酸钠混旋10分钟终止氧化反应，将上述氧化后肽段冻干；加入含50％乙腈和终浓度为5毫摩尔三(2-羧乙基)膦(TECP)的10毫摩尔乙酸铵缓冲液重溶上述肽段，再加入半胱氨酸修饰的磁性纳米材料，在50摄氏度孵育30分钟后通过外加磁场作用将磁性纳米材料从溶液中分离出来，弃除上清液；然后取400微升含50％乙腈10毫摩尔乙酸铵溶液、含50％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液和含80％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液顺序清洗材料各3次，每次收集固相材料；最后再用1毫升20毫摩尔碳酸氢铵水溶液重新混匀材料，并加入1微升去糖链酶PNGaseF，在37摄氏度反应过夜后，通过外加磁场作用下将磁性纳米材料从溶液中分离出来，将上清液(含有去糖链的糖肽)冻干用水重溶后进行MALDI-TOF MS分析，谱图如图2所示，结果表明，基于噻唑烷化学的糖肽超快速富集切实可行。
实施例2基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的糖肽富集选择性考察
配制标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段和标准非糖蛋白质马心肌红蛋白MYO的酶解肽段混合溶液(摩尔比为1:100)，用10毫摩尔高碘酸钠在室温避光条件氧化1小时后，加入终浓度为20毫摩尔亚硫酸钠混旋10分钟终止氧化反应，将上述氧化后肽段冻干；加入含50％乙腈和终浓度为5毫摩尔三(2-羧乙基)膦(TECP)的10毫摩尔乙酸铵缓冲液重溶上述肽段，再加入半胱氨酸修饰的磁性纳米材料，在50摄氏度孵育30分钟后通过外加磁场作用将磁性纳米材料从溶液中分离出来，弃除上清液；然后取400微升含50％乙腈10毫摩尔乙酸铵溶液、含50％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液和含80％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液顺序清洗材料各3次，每次收集固相材料；最后再用1毫升20毫摩尔碳酸氢铵水溶液重新混匀材料，并加入1微升去糖链酶PNGase F，在37摄氏度反应过夜后，通过外加磁场作用下将磁性纳米材料从溶液中分离出来，将上清液(含有去糖链的糖肽)冻干用水重溶后进行MALDI-TOF MS分析，谱图如图3所示，结果表明，基于噻唑烷化学的糖肽富集具有良好的选择性。
实施例3基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的糖肽富集检出限考察
配制100微升20纳克每微升的标准糖蛋白质去唾液酸胎球蛋白ASF酶解肽段溶液，用10毫摩尔高碘酸钠在室温避光条件氧化1小时后，加入终浓度为20毫摩尔亚硫酸钠混旋10分钟终止氧化反应，将上述氧化后肽段冻干；加入含50％乙腈和终浓度为5毫摩尔三(2-羧乙基)膦(TECP)的10毫摩尔乙酸铵缓冲液重溶上述肽段，再加入半胱氨酸修饰的磁性纳米材料，在50摄氏度孵育30分钟后通过外加磁场作用将磁性纳米材料从溶液中分离出来，弃除上清液；然后取400微升含50％乙腈10毫摩尔乙酸铵溶液、含50％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液和含80％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液顺序清洗材料各3次，每次收集固相材料；最后再用1毫升20毫摩尔碳酸氢铵水溶液重新混匀材料，并加入1微升去糖链酶PNGase F，在37摄氏度反应过夜后，通过外加磁场作用下将磁性纳米材料从溶液中分离出来，将上清液(含有去糖链的糖肽)冻干用水重溶后进行MALDI-TOF MS分析，谱图如图4所示，结果表明，基于噻唑烷化学的糖肽富集具有较好的检测灵敏度。
Claims (5)
1.一种基于噻唑烷化学固相富集并质谱分析糖肽的方法，其特征是，利用半胱氨酸修饰的磁性纳米材料富集糖肽，实现糖肽的超快速、高特异、高灵敏质谱分析，其步包括骤：
1)对糖肽样品进行氧化；
2)对糖肽样品进行固相富集；
3)将糖肽从固相材料上释放下来送入质谱分析。
2.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中，肽段重溶溶液为含50％乙腈和终浓度为5毫摩尔三(2-羧乙基)膦(TECP)的10毫摩尔乙酸铵缓冲液。
3.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中，磁性纳米材料表面被半胱氨酸所修饰。
4.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中，半胱氨酸修饰的磁性纳米材料进行样品偶联的温度是50摄氏度，偶联时间是30分钟。
5.按权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(2)中，分别用400微升含50％乙腈10毫摩尔乙酸铵溶液、含50％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液和含80％乙腈与0.1％三氟乙酸水溶液顺序清洗材料各3次。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910503816.9A CN112067684A (zh) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | 一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910503816.9A CN112067684A (zh) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | 一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112067684A true CN112067684A (zh) | 2020-12-11 |
Family
ID=73658081
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910503816.9A Pending CN112067684A (zh) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | 一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112067684A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030162185A1 (en) * | 1999-12-07 | 2003-08-28 | Oleg Melnyk | Products comprising a support to which nucleic acids are fixed and their use as dna chips |
| FR2889700A1 (fr) * | 2005-08-11 | 2007-02-16 | Synthinnove Lab | Marqueurs, leur procede de fabrication et leurs applications |
| CN103364494A (zh) * | 2012-03-31 | 2013-10-23 | 复旦大学 | 一种对血清糖肽组高选择性富集的方法 |
| CN105300783A (zh) * | 2014-07-13 | 2016-02-03 | 复旦大学 | 一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法 |
-
2019
- 2019-06-11 CN CN201910503816.9A patent/CN112067684A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030162185A1 (en) * | 1999-12-07 | 2003-08-28 | Oleg Melnyk | Products comprising a support to which nucleic acids are fixed and their use as dna chips |
| FR2889700A1 (fr) * | 2005-08-11 | 2007-02-16 | Synthinnove Lab | Marqueurs, leur procede de fabrication et leurs applications |
| CN103364494A (zh) * | 2012-03-31 | 2013-10-23 | 复旦大学 | 一种对血清糖肽组高选择性富集的方法 |
| CN105300783A (zh) * | 2014-07-13 | 2016-02-03 | 复旦大学 | 一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FANNY GUILLAUMIE等: ""Immobilization of Pectin Fragments on Solid Supports：Novel Coupling by Thiazolidine Formation"", 《BIOCONJUGATE CHEM.》, vol. 13, no. 2, pages 285 - 294, XP002357091, DOI: 10.1021/bc0155364 * |
| JOHN D. WADE等: ""Use of thiazolidine-mediated ligation for site specific biotinylation of mouse EGF for biosensor immobilisation"", 《LETTERS IN PEPTIDE SCIENCE》, vol. 8, pages 211 - 220 * |
| KIM HYUN-JI等: ""Simple derivatization of aldehydes with d-cysteine and their determination in beverages by liquid chromatography–tandem mass spectrometry"", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》, vol. 702, pages 225 - 232 * |
| 包慧敏等: ""糖蛋白质组学中基于化学反应的富集方法研究进展"", 《色谱》, vol. 34, no. 12, pages 1145 - 1153 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5500067B2 (ja) | 糖鎖標識方法 | |
| CN103364494B (zh) | 一种对血清糖肽组高选择性富集的方法 | |
| CN105300783B (zh) | 一种糖基化肽段固相富集并质谱分析的方法 | |
| CN105467050B (zh) | 一种用于o糖基化肽段及其完整糖链的鉴定方法 | |
| CN103952397A (zh) | 一种使用磁珠从血清或血浆样品中分离游离核酸的方法 | |
| EP2305692A1 (en) | Method for releasing and labelling O-glycans | |
| WO2023093133A1 (zh) | 一种基于固相糖蛋白富集和Tn糖肽酶切的分析方法和应用 | |
| CN111089969B (zh) | 一种n-糖链快速酶解释放和固相富集并质谱分析的方法 | |
| CN112067684A (zh) | 一种基于噻唑烷化学固相富集糖肽并质谱分析的方法 | |
| CN112538514A (zh) | 一种同时富集糖肽和磷酸化肽的方法 | |
| CN110749736A (zh) | 一种基于化学反应简化的O-GalNAc糖基化肽段鉴定方法 | |
| CN111777696B (zh) | 一种特异性可逆富集新生蛋白质的方法 | |
| CN102070701B (zh) | 用金属氧化物富集糖肽及同时富集糖肽和磷酸化肽的方法 | |
| CN111157736A (zh) | 一种基于化学酶促的人血清o糖基化鉴定方法 | |
| Takemori et al. | Bottom-up/cross-linking mass spectrometry via simplified sample processing on anion-exchange solid-phase extraction spin column | |
| CN108007996B (zh) | 一种珍珠活力成分的鉴定 | |
| CN109012611A (zh) | 一种纤维素微球、纤维素微柱及其制备方法和应用 | |
| CN114354778B (zh) | 一种基于固相富集结合O-糖肽酶切分析Tn抗原的方法 | |
| CN110130099B (zh) | 用于选择性捕获和识别糖肽的磁性纳米纤维基两性离子亲水性材料 | |
| CN106568875B (zh) | 一种富集唾液酸化糖肽的材料及其应用 | |
| JP2009132649A (ja) | タンパク質のｃ末端ペプチドを選択的に回収する方法及びそれを用いたタンパク質のｃ末端ペプチドのアミノ酸配列決定法 | |
| CN111111626B (zh) | 两性离子修饰的亲水碳球及其制备和在糖肽富集中的应用 | |
| CN105561957A (zh) | 钛-锆双金属原子水平掺杂的蜂窝状介孔复合材料及其合成方法和应用 | |
| CN110988221A (zh) | 基于唾液特异糖蛋白糖链结构的食管癌筛查、评估的产品及应用 | |
| CN111239407A (zh) | 基于唾液特异糖蛋白糖链结构的肝纤维化筛查、评估的产品及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |