CN112056562A - 多形拟杆菌及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提出了多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗食物中原肌球蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105。该多形拟杆菌可调控Th1/Th2及Th17/Treg细胞亚群失衡，从而可缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应，缓解食物过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染且副作用少。

Description

多形拟杆菌及其用途

技术领域

本发明涉及微生物学领域，具体涉及一种多形拟杆菌及其用途。

背景技术

水产品营养丰富，口味鲜美，深受人们的喜爱，是全球食物消费的重要组成部分，中国已多年居水产养殖和消费总量第一大国的地位，并且，其水产养殖及消费总量呈持续增长的趋势。然而，虾蟹等甲壳类食品作为八大食物过敏原之一，经常会引起人类严重的食物过敏反应，对人们的生命健康造成了巨大威胁。其中，原肌球蛋白(Tropomyosin，TM) 广泛存在于甲壳类动物中，是甲壳类食品主要过敏原。其具有高热稳定性，序列保守性高，且种间能够发生明显交叉反应。其过敏患者可能会出现红肿、鼻炎、哮喘等过敏性症状，严重时还会伴有虚脱、休克，甚至危及生命，严重影响身体健康和生活质量。

目前缓解和控制食物中原肌球蛋白引起过敏普遍采用的方法有针对食品的去除过敏原和临床的治疗用抗过敏药。食品去除过敏原方法均可以显著降低过敏原的免疫活性，但其不能从根本上缓解或控制甲壳类食品过敏，并且易使甲壳类食品失去原有的结构和感官性状。临床的治疗用药主要是特异性免疫治疗诱导机体对过敏原耐受，当宿主再次接触过敏原可引发不同程度的过敏反应。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

针对小鼠的研究表明，血浆中抗原特异性IgG1和IgG2a水平的提高，可抑制过敏原特异性IgE合成并可减轻Th2介导的过敏症状；Treg具有抗炎和维持自身免疫耐受作用；Th17 通过分泌细胞因子(IL-17A、IL-23)等发挥致炎效应并具有很强的促炎症作用。在过敏状态下，树突状细胞(DC)活化后分泌IL-6与TGF-β共同促进初始细胞分化为Th17细胞诱导前炎症反应而抑制细胞Treg的活性。另一方面，辅助性T细胞Th1和Th2亚群平衡介导了过敏反应强度。Th1细胞主要分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α等介导细胞免疫和迟发性超敏反应；而Th2细胞主要分泌IL-5、IL-13和IL-4等因子，在速发型超敏反应中起重要作用。 Th1和Th2分泌的细胞因子均可促进本亚型而抑制另一亚型的生长和分化。因此Th1/Th2、 Th17/Treg平衡在维持机体自身免疫稳态中发挥重要作用，一旦此平衡被打破，将可能引起异常的免疫应答，如食物过敏、过敏性哮喘、HIV等。研究甲壳类水产品的过敏机制可知，虾蟹等甲壳类水产品中的原肌球蛋白能够引起易感人群体内Th1/Th2、Th17/Treg平衡紊乱，从而导致食物过敏的发生。而在本申请中，该多形拟杆菌开展功能验证实验后惊喜地发现，多形拟杆菌具有调控Th1/Th2及Th17/Treg细胞亚群失衡的作用，从而可缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应。

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了多形拟杆菌(Bacttroidesthetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗食物中原肌球蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：Bacttroides thetaiotaomicron WF-1198-1-2，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学。根据本发明的多形拟杆菌能够显著降低原肌球蛋白引起的过敏反应指标特异性抗体IgE、 IgG2a、IgG1和血清中组胺的含量，同时能够增加Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-α)、 Treg细胞(TGF-β)以及降低Th2型细胞因子(IL-5、IL-13、IL-4)和Th17型细胞因子(IL-6、 IL-17A)的表达，实现了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡，缓解了过敏反应。因此，该多形拟杆菌可用于缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓食物中原肌球蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解食物过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。

另外，根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述多形拟杆菌具有调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡的作用。

根据本发明的实施例，所述多形拟杆菌摄入方式为每天1×10⁸～1×10¹¹cfu/只小鼠。

根据本发明的实施例，步骤(2)中，均质采用二段均质，第一段均质压力为 18MPa-25MPa，第二段均质压力8MPa-12MPa。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种组合物。根据本发明的实施例，所述组合物包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：Bacttroides thetaiotaomicronWF-1198-1-2。根据本发明的多形拟杆菌可用于缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓食物中原肌球蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解食物过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。

在本发明的第三方面，本发明提出了一种药物。根据本发明的实施例，所述药物包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：Bacttroides thetaiotaomicron WF-1198-1-2。根据本发明的多形拟杆菌可用于缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓食物中原肌球蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解食物过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。

根据本发明的实施例，还包括药学上可接受的辅剂，所述辅剂包括稳定剂、湿润剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂的至少之一。

根据本发明的实施例，所述药物呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、溶液剂、悬浮剂、冻干制剂的至少一种。进而，根据本发明实施例的药物方便给药，适于保持多形拟杆菌的最佳活性。

根据本发明的实施例，所述药物的给药剂量不受特别限制，实际应用中，可以根据给药对象的健康状况灵活选择。根据本发明的一些实施例，将所述药物以每天1×10⁸～1×10¹¹ cfu/只小鼠的剂量对致敏小鼠进行干预，被干预小鼠的炎症得到明显缓解。

在本发明的第四方面，本发明提出了一种食品。根据本发明的实施例，所述食品包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：Bacttroides thetaiotaomicron WF-1198-1-2。根据本发明实施例的食品可缓解食物过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。

需要说明的是，本申请所述的食品应做广义的理解，任何可咀嚼、吞咽或能为机体提供能量的物质均可视为食品。

根据本发明的实施例，所述食品进一步包括：食品学上可接受的添加剂。进而所述食品的口感更佳。

另外，需要说明的是，本发明的多形拟杆菌可以与通常的食品中所使用的食品材料配合食用。例如，谷类及薯类：谷类包括米、面、杂粮，薯类包括马铃薯、红薯等；动物性食物，包括肉、禽、鱼、奶、蛋类等。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为根据本发明实施例1的多形拟杆菌在光学显微镜下的结构图；

图2为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠体重增长率的影响；

图3为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠过敏症状的影响；

图4为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgE的影响；

图5为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG2a的影响；

图6为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG1的影响；

图7为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中组胺的影响；

图8为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠体重增长率的影响；

图9为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠过敏症状的影响；

图10为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgE的影响；

图11为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG2a的影响；

图12为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG1的影响；

图13为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中组胺的影响；

图14为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-5的影响；

图15为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TNF-α的影响；

图16为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-2的影响；

图17为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-6的影响；

图18为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TGF-β的影响；

图19为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IFN-γmRNA表达量的影响；

图20为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-4mRNA表达量的影响；

图21为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-13mRNA表达量的影响；

图22为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-17A mRNA表达量的影响；

图23为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-5的影响；

图24为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TNF-α的影响；

图25为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-2的影响；

图26为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-6的影响；

图27为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TGF-β的影响；

图28为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IFN-γmRNA表达量的影响；

图29为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-4mRNA表达量的影响；

图30为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-13mRNA表达量的影响；

图31为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-17A mRNA表达量的影响；

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1菌株的分离与鉴定

一、菌株的分离

(1)采集身体健康的健康人群粪便样品(以浙江工商大学部分学生为对象，针对学生的身体健康情况、生活饮食习惯、饮食卫生情况等进行问卷，采集身体健康，1年以上不服用药物的健康学生的粪便样品)，用无菌EP管保存新鲜粪便，4℃冷藏，在4小时之内运送至实验室，完成样品处理和培养。以无菌玻璃棒将粪便样品捣碎，震荡均匀，用无菌生理盐水按十倍稀释法将样品稀释，取10^-3-10^-8稀释度溶液倒入已经凝固的选择性GAM(Gifuanaerobic medium)肉汤培养基上，涂布均匀，放入厌氧培养箱中，37℃厌氧培养48小时。

(2)将步骤(1)获得的菌种进行初筛，根据菌落形状、革兰氏染色以及显微镜观察得到初步的多形拟杆菌菌种。

(3)将步骤(2)获得菌种进行生理生化验证以及16S rDNA序列分析，得到多形拟杆菌，命名为多形拟杆菌WF-1198-1-2。

其中，生理生化特性：严格厌氧生长，进行耐氧实验、糖发酵试验、胆汁试验、七叶灵试验以及基质试验。结果见表1。

表1生化鉴定结果

注：质控试验对照，结果：“+”表示阴性、“-”表示阴性、“+-”表示多数菌株阴性，少数菌株阳性。

其中，本例16S rDNA扩增的引物序列为：

27F AGAGTTTGATCMTGGCTCAG(SEQ ID NO:1)。

1492R GGTTACCTTGTTACGACTT(SEQ ID NO:2)。

表2PCR反应体系

Green Taq Mix	25ul
		ddH<sub>2</sub>O	19ul
27F	2ul
		1492R	2ul
DNA	2ul

PCR反应条件为：95℃预变性3min，然后进入30-35个循环：95℃15sec、60℃15sec、72℃60sec/kb、循环结束后，72℃延伸5min。

测序结果显示，WF-1198-1-2的菌株其16S rDNA测序结果为SEQ ID NO:3所示序列。

CAAAAATGCTCGGCTTACCATGCAGTCGAGGGGCAGCATTTCAGTTTGCTTGCAA ACTGGAGATGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACACGTATCCAACCTGCCGATAACTC GGGGATAGCCTTTCGAAAGAAAGATTAATACCCGATGGTATAATCAGACCGCATGGTCT TGTTATTAAAGAATTTCGGTTATCGATGGGGATGCGTTCCATTAGGCAGTTGGTGAGGT AACGGCTCACCAAACCTTCGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTG GAACTGAGACACGGTCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTCAAT GGGCGCAGGCCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGAAGGATGACTGCCCTATGGGTTGTAA ACTTCTTTTATATGGGAATAAAGTTTTCCACGTGTGGAATTTTGTATGTACCATATGAAT AAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATC CGGATTTATTGGGTTTAAAGGGAGCGTAGGTGGACAGTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTT GCGGCTCAACCGTAAAATTGCAGTTGATACTGGCTGTCTTGAGTACAGTAGAGGTGGG CGGAATTCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCTTAGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAA GGCAGCTCACTGGACTGCAACTGACACTGATGCTCGAAAGTGTGGGTATCAAACAGG ATTAGATACCCTGGTAGTCCACACAGTAAACGATGAATACTCGCTGTTTGCGATATACA GTAAGCGGCCAAGCGAAAGCATTAAGTATTCCACCTGGGGAGTACGCCGGCACGGTG AAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGAACATGTGGTTTAATTCGA TGATACGCGAGGAACCTTACGCCGGGCTTAAATTGCATTTGATA。

其中，光学显微镜下观察革兰氏染色后的多形拟杆菌，结果显示，多形拟杆菌呈杆状、两端钝圆而浓染，形态一致，具体光学显微镜照片参见附图1。

将多形拟杆菌转接到优化的CDC厌氧血琼脂培养基进行培养，以备后续使用。鉴于上述形态特征和16S rDNA序列同源性分析结果，将上述步骤分离筛选得到的菌株鉴定为多形拟杆菌。该多形拟杆菌已于2020年4月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址中国.武汉.武汉大学.)，保藏登记号为CCTCC M2020105。

实施例2

多形拟杆菌(WF-1198-1-2)缓解原肌球蛋白致敏的BALB/c小鼠

(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型的建立：15只6周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，随机分成三组分别为空白组、致敏组、治疗组。小鼠预养一周，第七天进行口服灌胃原肌球蛋白(TM)致敏，其中对照组(PBS)、致敏组TM(200μg)、治疗组TM(200μg)+多形拟杆菌菌悬液(1×10⁸cfu/只小鼠每天)，连续两周每周三次。之后灌胃对应致敏剂量6倍的TM进行激发，每周1次，连续2周，从第7天开始对多形拟杆菌治疗组开始灌服，试验四周。25℃饲养，自由饮水，每周称一次体重，最后一次激发后禁食，第二天断颈处死。

(2)小鼠每周体重变化：在小鼠饲养期间，每周同一天称取小鼠体重，观察小鼠体重变化。并计算每组小鼠每周体重增长率，计算公式：

结果如图2所示，TM致敏后，小鼠体重下降，但多形拟杆菌干预后小鼠体重回升。

(3)小鼠腹泻及过敏症状评分评定小鼠过敏症状：每周观察小鼠过敏及腹泻情况，参照以下评分系统进行打分。

表3小鼠腹泻及过敏症状评分表

结果如图3所示，与PBS组相比，TM致敏组产生明显的过敏症状，但多形拟杆菌干预后小鼠过敏症状减轻。

(4)小鼠血清中特异性IgE、IgG2a、IgG1测定：利用酶联免疫吸附法(ELISA法) 试剂盒进行测定，按照说明书的方法进行操作，在波长490nm处测定各孔的吸光度(OD值)。

结果如图4-图6所示，与PBS组相比，TM致敏组的IgE、IgG2a、IgG1都有所提升，但多形拟杆菌干预后IgE和IgG2a的含量都有所下降，IgG1含量几乎无变化。

(5)小鼠血清中组胺的测定：血清中组胺的测定采用小鼠组胺ELISA试剂盒(购于Thermo Fisher Scientific)，按照其说明书进行测定，在450nm处测定各孔的吸光度OD值。

结果如图7所示，与PBS组相比，TM致敏组的组胺有所提升，但多形拟杆菌干预后组胺含量有所下降。

实施例3

多形拟杆菌(WF-1198-1-2)缓解原肌球蛋白致敏的BALB/c小鼠

(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规原肌球蛋白(简称TM)致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×10¹¹cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。试验四周，最后一次激发后禁食，第二天断颈处死。

(2)小鼠每周体重变化：在小鼠饲养期间，每周同一天称取小鼠体重，观察小鼠体重变化。并计算每组小鼠每周体重增长率，计算公式：

结果如图8所示，TM致敏后，小鼠体重下降，但多形拟杆菌干预后小鼠体重回升。

(3)小鼠腹泻及过敏症状评分评定小鼠过敏症状：每周观察小鼠过敏及腹泻情况，参照评分系统进行打分。

结果如图9所示，与PBS组相比，TM致敏组产生明显的过敏症状，但多形拟杆菌干预后小鼠过敏症状减轻。

(4)小鼠血清中特异性IgE、IgG2a、IgG1测定：利用酶联免疫吸附法(ELISA法) 试剂盒进行测定，按照说明书的方法进行操作，在波长490nm处测定各孔的吸光度(OD值)。

结果如图10-图12所示，与PBS组相比，TM致敏组的IgE、IgG2a、IgG1都有所提升，但多形拟杆菌干预后IgE和IgG2a的含量都有所下降，IgG1含量几乎无变化。

(5)小鼠血清中组胺的测定：血清中组胺的测定采用小鼠组胺ELISA试剂盒，按照其说明书进行测定，在450nm处测定各孔的吸光度OD值。

结果如图13所示，与PBS组相比，TM致敏组的组胺有所提升，但多形拟杆菌干预后组胺含量有所下降。

实施例4

多形拟杆菌调控Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡：

(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规TM致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×10⁸cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。第四周灌胃结束后观察12h，进行眼眶取血处死，血液凝固后离心取上清，分装冻存于-20℃。

(2)小鼠血清中细胞因子IL-5、TNF-α、IL-6、IL-2、TGF-β分泌量的测定；选用Bio-Plex 检测试剂盒(购于Thermo Fisher Scientific)，按照说明书来检测血清及脾脏中IL-5、TNF-α、 IL-6、IL-2、TGF-β细胞因子的相对含量。

结果如图14-图18所示，与PBS组相比，TM致敏组的IL-5、IL-6含量都有所上升，TNF-α、IL-2及TGF-β含量有所下降，但多形拟杆菌干预后IL-5、IL-6含量都有所下降， TNF-α、IL-2及TGF-β含量有所上升。

(3)小鼠肠道内IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-13mRNA表达量的测定:取肠道组织于研钵中用液氮研磨成并用TRizol提取RNA。利用

II qRT Super进行反转录得到cDNA。实时荧光定量PCR按照SYBR Green I kit进行配制。利用HPRT作为mRNA表达量的内参基因进行q-PCR检测。引物设计如下：

表4实时荧光定量PCR上下游引物序列

表5q-PCR反应体系为：

表6q-PCR反应条件为：

结果如图19-图22所示，与PBS组相比，TM致敏组的IL-4、IL-13及IL-17A含量都有所上升，IFN-γ含量有所下降，但多形拟杆菌干预后IL-4、IL-13及IL-17A都有所下降，IFN-γ含量有所上升。

实施例5

多形拟杆菌调控Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡：

(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规TM致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×10¹¹cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。第四周灌胃结束后观察12h，进行眼眶取血处死，血液凝固后离心取上清，分装冻存于-20℃。

(2)小鼠血清中细胞因子IL-5、TNF-α、IL-6、IL-2、TGF-β分泌量的测定；选用Bio-Plex 检测试剂盒，按照说明书来检测血清及脾脏中IL-5、TNF-α、IL-6、IL-2、TGF-β细胞因子的相对含量。

结果如图23-图27所示，与PBS组相比，TM致敏组的IL-5、IL-6含量都有所上升，TNF-α、IL-2及TGF-β含量有所下降，但多形拟杆菌干预后IL-5、IL-6含量都有所下降， TNF-α、IL-2及TGF-β含量有所上升。

(3)小鼠肠道内IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-13mRNA表达量的测定:取肠道组织于研钵中用液氮研磨成并用TRizol提取RNA。利用

II qRT Super进行反转录得到cDNA。实时荧光定量PCR按照SYBR Green I kit进行配制。利用HPRT作为mRNA表达量的内参基因进行q-PCR检测。

结果如图28-图31所示，与PBS组相比，TM致敏组的IL-4、IL-13及IL-17A含量都有所上升，IFN-γ含量有所下降，但多形拟杆菌干预后IL-4、IL-13及IL-17A都有所下降，IFN-γ含量有所上升。

综上，本发明的多形拟杆菌能够显著降低原肌球蛋白引起的过敏反应指标特异性抗体 IgE、IgG2a、IgG1和血清中组胺的含量，同时能够增加Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-α)、 Treg细胞(TGF-β)以及降低Th2型细胞因子(IL-5、IL-13、IL-4)和Th17型细胞因子(IL-6、IL-17A)的表达，实现了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡，缓解了过敏反应。因此，该多形拟杆菌可用于缓解食物中原肌球蛋白引起的过敏反应。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

序列表

<110> 浙江工商大学

<120> 多形拟杆菌及其用途

<130> 2019

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

agagtttgat cmtggctcag 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ggttaccttg ttacgactt 19

<210> 3

<211> 968

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

caaaaatgct cggcttacca tgcagtcgag gggcagcatt tcagtttgct tgcaaactgg 60

agatggcgac cggcgcacgg gtgagtaaca cgtatccaac ctgccgataa ctcggggata 120

gcctttcgaa agaaagatta atacccgatg gtataatcag accgcatggt cttgttatta 180

aagaatttcg gttatcgatg gggatgcgtt ccattaggca gttggtgagg taacggctca 240

ccaaaccttc gatggatagg ggttctgaga ggaaggtccc ccacattgga actgagacac 300

ggtccaaact cctacgggag gcagcagtga ggaatattgg tcaatgggcg caggcctgaa 360

ccagccaagt agcgtgaagg atgactgccc tatgggttgt aaacttcttt tatatgggaa 420

taaagttttc cacgtgtgga attttgtatg taccatatga ataaggatcg gctaactccg 480

tgccagcagc cgcggtaata cggaggatcc gagcgttatc cggatttatt gggtttaaag 540

ggagcgtagg tggacagtta agtcagttgt gaaagtttgc ggctcaaccg taaaattgca 600

gttgatactg gctgtcttga gtacagtaga ggtgggcgga attcgtggtg tagcggtgaa 660

atgcttagat atcacgaaga actccgattg cgaaggcagc tcactggact gcaactgaca 720

ctgatgctcg aaagtgtggg tatcaaacag gattagatac cctggtagtc cacacagtaa 780

acgatgaata ctcgctgttt gcgatataca gtaagcggcc aagcgaaagc attaagtatt 840

ccacctgggg agtacgccgg cacggtgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag 900

cggagaacat gtggtttaat tcgatgatac gcgaggaacc ttacgccggg cttaaattgc 960

atttgata 968

Claims (9)

1.多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗食物中原肌球蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多形拟杆菌具有调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡的作用。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多形拟杆菌摄入方式为每天1×10⁸～1×10¹¹cfu/只小鼠。

4.一种组合物，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。

5.一种药物，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。

6.如权利要求5所述的一种药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅剂，所述辅剂包括稳定剂、湿润剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂的至少之一。

7.如权利要求5所述的一种药物，其特征在于，所述药物呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、溶液剂、悬浮剂、冻干制剂的至少一种。

8.一种食品，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。

9.如权利要求8所述的一种食品，其特征在于，还包括食品学上可接受的添加剂。

Images