CN112043829A - 使用hedgehog途径抑制剂对增殖性病症的治疗和预后监测 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种使用Hedgehog途径（HhP）抑制剂治疗增殖性病症，如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌及其他癌症的方法；以及基于生物标记及其他预测功效的标准监测接受这种治疗的受试者的方法。

Description

使用HEDGEHOG途径抑制剂对增殖性病症的治疗和预后监测

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年6月6日提交的美国临时申请61/831,823和2013年4月17日提交的美国临时申请61/813,122的权利，且本申请是2014年2月5日提交的美国申请14/173,588的继续申请，所述申请要求2013年6月6日提交的美国临时申请61/831,823和2013年4月17日提交的美国临时申请61/813,122的权利，上述申请案的全文以引证的方式并入本文中，包括任何图、表格或附图。

背景技术

Hedgehog(Hh)分子信号传递途径(HhP)抑制剂近年来已成为很有前途的一类新的潜在的用于癌症治疗的治疗剂。药物开发方面的大量工作已使靶向此途径的不同成员的大量小分子得以识别，包括Smoothened(Smo)、Sonic Hedgehog蛋白(Shh)以及神经胶质瘤相关的致癌基因同源体I、II和III(Gli1、Gli2和Gli3)。Smo抑制剂已进入人体临床试验，并且已在Hh途径中具有确定基因突变的患者中进行了成功的概念证明研究。事实上，第一个Smo抑制剂在2012年初被美国FDA批准用于晚期基底细胞癌患者的治疗(来自罗氏/基因泰克公司(Roche/Genentech)以ERIVEDGE^TM为商标销售的维莫德吉(vismodegib))，确认了使用药物来调节此途径的商业有效性。

(HhP)的激活已在各种器官的癌症发展中有所涉及，所述器官包括脑、肺、乳腺、前列腺以及皮肤。基底细胞癌，最常见的恶性癌肿瘤，与Hedgehog信号传递最紧密关联。已在患有这种疾病的患者中发现修复(Patched)功能缺失突变和Smo激活突变(Sahebjam等，"The Utility of Hedgehog Signaling Pathway Inhibition for Cancer,"TheOncologist,2012；17:1090-1099)。

作为抗真菌剂，伊曲康唑(itraconazole)与其他唑类抗真菌剂的作用机理相同，抑制麦角甾醇的真菌介导合成。然而，已发现伊曲康唑具有抗癌特性。伊曲康唑在鼠科动物前列腺癌异种移植模型中抑制血管生成和Hh信号传递，并且延迟肿瘤生长。伊曲康唑表现为通过阻止通常由Hh刺激所引起的Smo纤毛累积，以不同于药物维莫德吉的方式作用于Hh途径重要组成部分Smo，且具有短得多的半衰期，这也许是它比维莫德吉副作用少的原因。

前列腺癌发病率在发达国家比在世界其他地方的高，预后较差。前列腺癌是世界上第九大最常见的癌症，但在美国男性中是头号非皮肤癌类癌症。前列腺癌影响了一大部分美国男性，有时导致死亡。对于接受前列腺癌治疗的患者，疾病结果最重要的临床预后指标是阶段、治疗前前列腺特异性抗原(PSA)水平以及格里森(Gleason)评分。一般而言，前列腺癌的等级和阶段越高，预后越差。还可以使用列线图来计算个别患者的估计风险。一些(但不是所有)前列腺癌表现为Hh分子途径上调(美国公开专利申请20120083419，Altaba等“Method and Compositions for Inhibiting Tumorigenesis”，所述专利申请公开的全文以引证的方式并入本文中)。

有利的是尽可能早的获得被证明具有识别和区别很可能响应与不太可能响应HhP抑制剂治疗的癌症患者的能力的预后工具或生物标记，以便可向那些对HhP抑制剂有效的患者提供HhP抑制剂治疗，并可向那些对HhP抑制剂无效或比其他可利用治疗的有效性低的患者提供替代性治疗方式。

发明简述

本发明涉及利用Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗增殖性病症，如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌及其他癌症的方法，以及基于生物标记及其他预测功效的标准监测接受这种治疗的受试者的方法。

本发明的一些方面涉及基于治疗后前列腺特异性抗原来预测利用HhP抑制剂治疗的前列腺癌治疗的结果以及确定HhP抑制剂治疗的功效的方法。不同于大多数前列腺癌药物，这些药物靶向雄激素以便降低睾酮水平，伊曲康唑的作用与雄激素无关。

进行非比较性、随机II期研究，评价两种剂量的口服伊曲康唑对患有转移性前列腺癌的男性的抗肿瘤功效。基于图1-3中描述的分析，将治疗后PSA增加标识为对伊曲康唑治疗响应者的标记物。就PSA无进展存活(PPFS)和无进展存活(PFS)而言，本发明人将在用伊曲康唑治疗后4周时显示出PSA增加小于25％的患者鉴定为对高剂量伊曲康唑治疗最好的响应者。能够在4周时达到HhP抑制剂(例如伊曲康唑)的血浆水平大于1,000ng/ml的患者，连同上述PSA增加小于25％的患者，是一个目标患者亚群，所述患者可经预先选择用HhP抑制剂治疗，该治疗作为对前列腺癌患者使用这些药剂的临床试验的改进策略(图1)。回顾性分析显示基于高剂量伊曲康唑，15个高风险患者(PSA倍增时间小于6个月)中的14个表明在4周时PSA增加小于25％，其意味着无进展存活显著改善(图2)。基于在4周时PSA变化的K-M分析显示于图3中。令人惊讶的是，观察到这种效果延续超过4周的时间点。

已知PSA水平是雄激素活性的函数。当雄激素活性增加时(如由于补充的睾酮治疗引起的)，PSA升高。当雄激素活性减少时(如由于雄激素剥夺治疗、抗雄激素等引起)，PSA降低。因为伊曲康唑对雄激素合成、血浆水平或受体活性没有影响，所以未预期伊曲康唑会对PSA有任何显著影响。此外，由于伊曲康唑是HhP的抑制剂，且没有显著细胞毒性(不像化学治疗)，因此没有理由预期会对PSA有任何显著影响，因为伊曲康唑不杀死癌细胞(且因此排除他们对PSA水平的贡献)。Dendreon的

癌症疫苗是抗前列腺癌药剂的例子，其对PSA或PFS没有影响，但提供改善的总体存活率。相反，在伊曲康唑情况下，本发明者出乎意料地发现，PSA的上升小于或等于25％减少与显著PFS和PSA-PFS有关。此外，由于对于接受根治性前列腺切除术且无复发或转移性疾病的放射性影像学证据但有PSA升高的男性，HhP上调不易测量，因此在临床医师不能确信PSA与HhP的上调有关的情况下，使用PSA的上升小于或等于25％能提供测定对HhP抑制剂的灵敏度的方法。因此，除非HhP上调，否则似乎HhP抑制剂不是治疗剂，意味着PSA细胞中HhP的正常活性将不会使它对HhP抑制剂治疗敏感。

令人惊讶的是，本发明者发现对患癌人类显示临床益处所需的伊曲康唑的血浆浓度显著大于用于抗真菌功效的典型水平。Shi W.等报道称，抗真菌效力是通过与HhP的抑制无关的结构测定的(Shi W.等，“Itraconazole Side Chain Analogues:Structure-Activity Relationship Studies for Inhibition of Endothelial CellProliferation,Vascular Endothelial Cell Growth Factor Receptor 2(VEGFR2)Glycosylation,and Hedgehog Signaling”，J.Med.Chem.,2011,54:7363-7374，所述文献全文以引证的方式并入本文中)；因此，使用升高剂量的HhP抑制剂，如伊曲康唑，治疗癌症患者全身性真菌感染不支持或建议治疗癌症所需的剂量在高剂量抗真菌治疗的范围内。

此外，由于以下这些考虑因素，对增殖病症(如癌症)达到一定效果的最低波谷水平的测定，并非从Shi W.等人的体外研究预测到：(i)伊曲康唑具有多种抗癌特性，包括抗血管生成、mTOR(雷帕霉素(rapamycin)的哺乳动物靶标)抑制以及抗Hedgehog；因此，例如HhP或抗血管生成作用的体外研究不足以预测剂量或血浆水平；(ii)在给药许多天后，足以达到稳定状态，伊曲康唑的组织浓度已知是血浆水平的多倍；以及(iii)不像抗真菌作用，伊曲康唑的主要代谢物(羟基伊曲康唑)不等效于HhP抑制剂，但它似乎显著影响对不可能预测的癌症有效的活体内血浆水平的推断。

本发明的一个方面涉及一种用于治疗受试者的增殖性病症的方法，所述病症如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌和其他癌症，包括向受试者口服给予包含Hedgehog途径(HhP)抑制剂的组合物，其中以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000ng/mL的有效量口服给予组合物。可选地，治疗方法包括监测受试者的增殖性病症以确定是否存在对HhP抑制剂治疗的临床响应。

本发明的另一方面涉及一种预测用Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗受试者的前列腺癌的治疗结果的方法，包括比较HhP抑制剂治疗后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平，其中样本中的PSA水平与PSA的参考水平相比用来预测以HhP抑制剂治疗的结果。

本发明的另一方面涉及一种测定Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗人类受试者的前列腺癌的功效的方法，包括测量HhP抑制剂治疗开始之后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)水平，其中测量的PSA水平与HhP抑制剂治疗开始时第一参考PSA水平相比来指示功效，且其中测量的PSA水平与第二参考PSA水平相比来指示缺乏功效。

本发明的另一方面涉及一种用于治疗受试者的前列腺癌的方法，包括向受试者给予Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗；以及实施本发明的方法(即，用HhP抑制剂治疗的前列腺癌的治疗结果的预测方法，或测定HhP抑制剂治疗的功效的方法)。

附图说明

图1：在4周时PSA增加作为对伊曲康唑治疗的响应者的筛选工具。数据反映基于PSA响应对前列腺癌患者成功给予伊曲康唑治疗指示的参数分析。就PSA无进展存活(PPFS)和无进展存活(PFS)而言，本发明者将在用伊曲康唑治疗后4周时显示出PSA增加小于25％的患者标识为对高剂量伊曲康唑治疗最好的响应者。能够在4周时达到伊曲康唑的血浆水平大于1,000ng/ml的患者，连同上述PSA增加小于25％的患者，是一个目标患者亚群，所述患者可经预先选择用伊曲康唑治疗，该治疗作为对前列腺癌患者的伊曲康唑的临床试验的改进策略。

图2：在此回顾性分析中，基于高剂量伊曲康唑，15个高风险患者(PSA倍增时间小于6个月)中的14个表明在4周时PSA增加小于25％，其意味着无进展存活显著改善。

图3：基于在4周时PSA变化的K-M分析。高剂量群中的PFS(放射性影像学)。

发明详述

本发明的一个方面涉及一种用于治疗受试者的增殖性病症的方法，包括向受试者口服给予包含Hedgehog途径(HhP)抑制剂的组合物，其中以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000ng/mL的有效量口服给予组合物。

在一些实施例中，以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少1,000ng/mL的有效量给予组合物。在一些实施例中，以使HhP抑制剂的血浆波谷水平在用HhP抑制剂治疗开始约4周之后达到至少约1,000ng/mL的有效量给予组合物。在一些实施例中，以使HhP抑制剂的血浆波谷水平在治疗开始约2周之后达到至少约1,000ng/mL并且在整个治疗期间使HhP抑制剂的血浆波谷水平维持在至少约1,000ng/mL的有效量给予组合物。

HhP的任何抑制剂均可使用。在一些实施例中，HhP抑制剂靶向HhP途径的Smoothened(Smo)蛋白，例如通过与Smo结合而作用于它。在一些实施例中，HhP抑制剂是环杷明(cyclopamine)竞争性的。在一些实施例中，HhP抑制剂包括伊曲康唑，或其医药学上可接受的盐、前药或活性代谢物。在一些实施例中，相对于伊曲康唑，HhP抑制剂是伊曲康唑的纯化立体异构体(非外消旋混合物)，或伊曲康唑类似物，其中第二丁基侧链已被一或多个部分替换。在一些实施例中，HhP抑制剂是环杷明竞争性的。在一些实施例中，HhP抑制剂是非环杷明竞争性的。在一些实施例中，HhP抑制剂是环杷明竞争性的且增殖病症是前列腺癌、基底细胞癌或肺癌。

HhP抑制剂可被配制用于所需递送路径。此外，可通过使用具有较大生物利用率的调配物来增强达到的HhP抑制剂所需水平。例如，HhP抑制剂可以组合物的形式来给予，如伊曲康唑或其医药学上可接受的盐、前药或活性代谢物的

调配物。在一些实施例中，HhP抑制剂，如伊曲康唑或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

调配物形式以每日100mg至600mg范围内的剂量给予。在一些实施例中，将150mgHhP抑制剂，如伊曲康唑或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

调配物形式每日两次或两次以上给予。在一些实施例中，将200mg HhP抑制剂，如伊曲康唑或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

调配物形式每日两次或两次以上给予。

在一些实施例中，HhP抑制剂治疗包括每天两次口服给予50mg伊曲康唑或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体，或活性代谢物的胶囊、片剂或悬浮粉剂(液体悬浮液)或液体溶液。在一些实施例中，

调配物是Suba-CAP调配物。

可选地，治疗方法还包括一或多次测量受试者的HhP抑制剂或其代谢物的血浆水平。在一些实施例中，在用HhP抑制剂治疗开始之后约4周进行一或多次测量。

在一些实施例中，所述方法包括在约4周至约12周的一段时间内一或多次测量HhP抑制剂或其代谢物的血浆水平。可选地，所述方法还包括如果HhP抑制剂的血浆波谷水平没有维持在至少约1,000ng/mL，则增加HhP抑制剂的后续剂量。可选地，所述方法还可包括如果在大约4周时血浆波谷水平为至少1,000ng/mL且受试者经受一或多种副作用，则减少HhP抑制剂的后续剂量。

可以利用各种给药方案。在一些实施例中，每日至少一次给予HhP抑制剂。在一些实施例中，每日至少两次给予HhP抑制剂。在一些实施例中，用HhP抑制剂治疗的持续时间在约4周至约24周范围内。在一些实施例中，HhP抑制剂的血浆波谷水平只要达到至少约1,000ng/mL，则在整个治疗期间都维持这一水平。

在一些实施例中，所述增殖性病症是癌症，如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌或其他癌。

在一些实施例中，所述增殖性病症是前列腺癌，且所述方法还包括比较给予HhP抑制剂后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平，其中样本中的PSA水平与PSA的参考水平相比较用来预测用HhP抑制剂治疗的结果。在一些实施例中，相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％指示有功效，且PSA水平增加约25％或25％以上指示缺乏功效。在一些实施例中，受试者在HhP抑制剂治疗之后约4周时PSA水平相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平增加小于约25％。

在一些实施例中，在HhP抑制剂治疗开始之后4到12周内从受试者获得样本。

在一些实施例中，所述方法还包括在所述给药之后从受试者获得样本。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效，则维持HhP抑制剂治疗。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则停止用HhP抑制剂治疗。可选地，所述方法还包括对前列腺癌给予除HhP抑制剂以外的一种治疗。在一些实施例中，所述治疗包括选自放射治疗、激素治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、冷冻手术、高强度聚焦超声以及质子束放射治疗的一或多种治疗。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则增加HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效但受试者经受一或多种副作用，则减少HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，所测量的PSA水平是总PSA水平(游离(非结合的)PSA和结合的PSA)。在一些实施例中，所测量的PSA水平是PSA倍增时间。

在前列腺癌情况下，在一些实施例中，使用以下方法来测量PSA蛋白水平：如放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、多肽微阵列、表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳(rod-gel electrophoresis)，或平板凝胶电泳(slab-gel electrophoresis)。

在一些实施例中，使用以下方法来测量PSA的DNA或mRNA水平：诸如Northern印迹、Southern印迹、核酸微阵列、聚合酶链反应(PCR)、实时PCR(RT-PCR)、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)，或转录介导的扩增(TMA)。

在前列腺癌的情况下，在一些实施例中，测量了PSA的活性水平。

可选地，在前列腺癌的情况下，治疗方法还包括监测受试者的PSA水平，包括比较多个样本的PSA水平与PSA参考水平，其中所述样本是在HhP抑制剂治疗之后随时间从受试者获得的。

在一些实施例中，治疗方法还包括从受试者获得样本。在一些实施例中，所述样本是血清样本。

治疗方法可包括监测受试者的增殖性病症以确定是否存在对HhP抑制剂治疗的临床响应。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中增殖性病症对治疗缺乏临床响应指示HhP抑制剂的血浆波谷水平应进一步增加超过约1,000ng/mL，且其中临床响应的发生和HhP抑制剂的血浆波谷水平实质上高于约1,000ng/mL指示可减少HhP抑制剂的一或多个后续剂量。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后增殖性病症对治疗缺乏临床响应，指示需要增加HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。可选地，所述方法还包括后续给予受试者增加的HhP抑制剂的剂量和/或频率。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后发生增殖性病症对治疗的临床响应，指示需要减少HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。可选地，所述方法还包括后续给予受试者减少的HhP抑制剂的剂量和/或频率。

在一些实施例中，监测包括对从受试者获得的样本目测检查、触诊、成像、测定与增殖性病症相关的一种或多种生物标记的存在、水平或活性，或两种或更多种上述方式的组合。在一些实施例中，所述监测包括监测以下参数的至少一个：肿瘤大小、肿瘤大小的变化率、Hedgehog水平或信号传递、新肿瘤的出现、新肿瘤的出现率、增殖性病症的症状变化、与增殖性病症相关的新症状的出现、生活品质(例如与增殖性病症相关的疼痛程度)，或两种或更多种上述参数的组合。

如上所述，本发明人发现对癌症患者显示临床益处所需的伊曲康唑的血浆浓度显著高于用于抗真菌活性的典型水平。尤其是，在治疗4周之后具有临床显著效果所需的最低血浆波谷水平是至少1,000ng/ml。通过使用具有较大生物利用率的调配物，如Suba-CAP来增加达到这些伊曲康唑水平。然而，这种高剂量对如高血压、外周水肿和低钾血症之类的特有的副作用，似乎是由于盐皮质激素的产生增加。与这些高剂量的伊曲康唑相关的这些副作用可通过提供选择性盐皮质激素拮抗剂，如依普利酮，而有效管理。因此，在一些实施例中，所述方法还包括给予依普利酮或其他盐皮质激素抑制剂。在一些实施例中，受试者遭受选自高血压、外周水肿和低钾血症的副作用，且其中给予治疗所述副作用有效量的盐皮质激素抑制剂。

在一些实施例中，受试者患有真菌感染。在其他实施例中，受试者未患有真菌感染。

在一些实施例中，受试者患有选自芽生菌病、组织胞浆菌病、念珠菌病和曲菌病的真菌感染。在其他实施例中，受试者未患有选自芽生菌病、组织胞浆菌病、念珠菌病和曲菌病的真菌感染。

在一些实施例中，受试者先前并未接受过为治疗增殖性病症而进行的化学治疗。

在一些实施例中，在治疗持续期间不给予受试者类固醇。

在一些实施例中，在治疗持续期间不给予受试者与CYP3A4有相互作用的药剂。

本发明还涉及基于治疗后前列腺特异性抗原来预测利用Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗的前列腺癌治疗的结果以及确定HhP抑制剂治疗的功效的方法。

本发明的一个方面涉及一种预测利用Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗受试者的前列腺癌的治疗结果的方法，包括比较HhP抑制剂治疗后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平(预定水平)，其中样本的PSA水平与PSA的参考水平相比用来预测用HhP抑制剂治疗的结果。在一些实施例中，参考水平是在HhP抑制剂治疗开始时受试者体内的PSA水平。在一些实施例中，所述方法包括监测受试者的PSA水平，包括比较多个样本的PSA水平与PSA参考水平，其中所述样本是在HhP抑制剂治疗之后随时间从受试者获得的。

本发明的另一方面涉及一种测定Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗人类受试者的前列腺癌的功效的方法，包括测量HhP抑制剂治疗开始之后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)水平，其中测量的PSA水平与HhP抑制剂治疗开始时第一参考PSA水平(第一预定水平)相比较来指示功效，且其中测量的PSA水平与第二参考PSA水平(第二预定水平)相比较来指示缺乏功效。在一些实施例中，所述方法包括监测受试者的PSA水平，包括在HhP抑制剂治疗之后测量不同时间从受试者获得的多个样本的PSA水平(例如在HhP治疗开始之后4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周或更久的一或多个时间点)。在一些实施例中，在HhP抑制剂治疗开始之后在大约3至5周和/或在大约11至13周时获得样本。在一些实施例中，在HhP抑制剂治疗开始之后在大约4周和/或在大约12周时获得样本。

在本发明方法的一些实施例中，相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％指示有功效，且PSA水平增加约25％或25％以上指示缺乏功效。

在本发明方法的一些实施例中，HhP抑制剂包括伊曲康唑，或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物。例如，HhP抑制剂可包含伊曲康唑的

调配物或由该调配物组成(梅恩医药国际有限公司(Mayne Pharma International Pty Ltd.)，如，SUBACAP^TM制剂)(参见例如美国公开专利申请20030225104(Hayes等，"PharmaceuticalCompositions for Poorly Soluble Drugs"，授权为美国专利6,881,745)，所述制剂是一种固体分散体，其中伊曲康唑与酸性分子结合并且所述制剂可以改善吸收。在一些实施例中，将诸如

制剂的HhP抑制剂以每天100mg至600mg范围内的剂量给予受试者。

在一些实施例中，将HhP抑制剂经静脉内或局部地(例如，通过直接注射)给药至前列腺癌病变或肿瘤。在一些实施例中，将HhP抑制剂以如胶囊、片剂、悬浮粉剂(液体悬浮液)或液体溶液形式经口服给药。在一些实施例中，将HhP抑制剂(以如胶囊、片剂、悬浮粉剂(液体悬浮液)或液体溶液形式)以每剂量包含约25mg至约100mg或由约25mg至约100mg组成每天两次经口服给药。在一些实施例中，将HhP抑制剂(例如以胶囊、片剂、悬浮粉剂(液体悬浮液)或液体溶液形式)以每剂量包含50mg或由50mg组成每天两次经口服给予。

在本发明方法的一些实施例中，在HhP抑制剂治疗开始之后4到6周内从受试者获得样本。

在本发明方法的一些实施例中，所述方法还包括将HhP抑制剂给予受试者，以及在所述给药之后从受试者获得样本。

在本发明方法的一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效，则维持HhP抑制剂治疗。

在本发明方法的一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则停止HhP抑制剂治疗。停止HhP抑制剂治疗可包括观察性等待或主动监视。可选地，所述方法还包括对前列腺癌给予除HhP抑制剂以外的一种或多种治疗。前列腺癌治疗的例子包括但不限于放射治疗、激素治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术(外科切除/移除癌组织，例如开放性或腹腔镜前列腺切除术)、冷冻手术、高强度聚焦超声，以及质子束放射治疗。

应了解，HhP抑制剂治疗有功效或缺乏功效的指示可以特异于所给予的剂量和/或给药频率。以这种方式，本发明提供一种确定适用于给予受试者用于治疗前列腺癌的HhP抑制剂的剂量的方法。这包括基于在剂量水平和/或给药频率变化之后获得的样本中测量的PSA水平与参考PSA水平的比较，进行如本文所述的预测前列腺癌的治疗结果或确定HhP抑制剂治疗功效以及确定HhP抑制剂的有效剂量的方法。

例如，有可能给予一定剂量水平和/或一定给药频率的HhP抑制剂且未观察到PSA响应，但给予不同(较大)剂量水平和/或给药频率的HhP抑制剂且观察到PSA响应。因此，剂量水平和/或给药频率可影响HhP抑制剂是否起作用。因此，如果基于HhP抑制剂在一种剂量和/或一种频率下的PSA水平表明缺乏功效，在停止针对前列腺癌的HhP治疗和/或给予替代性(非HhP抑制剂)治疗之前，可能需要调节(例如，增加)HhP抑制剂的剂量和/或频率且，任选地，获得一或多个后续样本并测量所述样本中的PSA水平以及比较该测量水平与参考水平，以对不同剂量和/或频率下的有功效/无功效作出判断，或作出另一预后判断。因此，在本发明方法的一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则增加HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。这可以重复一次或多次直到基于PSA的测量水平相对于参考水平(例如，在剂量滴定中使用参考PSA水平作为指导)表明给药方案有功效。可选地，在该过程中的任何时刻，可停止HhP抑制剂并可选地将替代性(非HhP抑制剂)治疗给予受试者。

或者，如果受试者在一种剂量水平和/或频率下达到被指示为有功效的PSA水平，但受试者经受一种或多种副作用，则随后可减少剂量水平和/或给药频率。随后可获得一个或多个样本，测量PSA水平，并与参考水平相比以确保测量的PSA水平在减少的剂量和/或频率下仍然指示有功效。再次，PSA水平可用作后续优化HhP抑制剂的给药剂量的生物标记或指导。因此，在本发明方法的一些实施例中，所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效但受试者经受一种或多种副作用，则减少HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。这可以重复一次或多次直到基于PSA水平在不降低给药方案的功效的情况下副作用减少或消除。可选地，在该过程中的任何时刻，可停止HhP抑制剂并可选地将替代性(非HhP抑制剂)治疗给予受试者。如果在不损害功效的情况下副作用是不可控的，那么此方式是可取的。

如上所述，本发明的一方面是一种确定适用于给予受试者用于治疗前列腺癌的HhP抑制剂剂量的方法，包括测量HhP抑制剂给药之后从受试者获得的样本中的PSA水平(如在HhP抑制剂治疗开始之后约4周和/或约12周)；以及基于测量的PSA水平与PSA的参考水平的比较确定HhP抑制剂的有效剂量的方法(例如相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％)。例如，如果受试者不响应，可将50mg的HhP抑制剂逐渐给予受试者以通过增加剂量(增加后续剂量的量和/或频率)来产生功效，或如果这样毒性太大的话则减少剂量(降低量和/或频率)。在唑类抗真菌药物的

制剂的情况下，如SUBACAP^TM制剂，可向上或向下滴定剂量以使剂量在以下范围内：通常每天分两次给予100mg至600mg剂量的SUBA制剂。所述范围的高端可以用于如获得第一天或第二天的快速波谷水平，然后可减少剂量(量和/或频率)，或对于一些前列腺癌而言，可确定需要更有效的剂量。

在本发明方法的一些实施例中，所述PSA水平是总PSA水平(游离(非结合的)PSA和结合的PSA)。在本发明方法的一些实施例中，PSA水平是PSA倍增时间。

在本发明方法中，所确定的PSA水平可表示PSA蛋白的量，编码PSA的核酸(DNA或mRNA)的量或PSA活性的量。在一些实施例中，通过以下方法来测量PSA蛋白水平：放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、多肽微阵列、表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳，或平板凝胶电泳。在一些实施例中，使用以下方法来测量PSA的mRNA水平：Northern印迹、Western印迹、核酸微阵列、聚合酶链反应(PCR)、实时PCR(RT-PCR)、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)，或转录介导的扩增(TMA)。

从受试者获得的样本可以是含有PSA蛋白或核酸的任何样本。可在测量PSA生物标记之前或之后处理样本。在本发明方法的一些实施例中，所述样本是血清样本。

本发明的方法还可包括从受试者获得样本，诸如通过抽取血液或组织活检。

本发明的方法还可包括在开始HhP治疗之前确定受试者患有前列腺癌(例如，基于一种或多种生物标记、迹象、症状、活检等等)。

在一些实施例中，在用HhP抑制剂开始治疗之前，使受试者接受用非HhP抑制剂针对前列腺癌的治疗。如，HhP抑制剂可作为第二线、第三线或第四线治疗给药。

存在其他可帮助预测前列腺癌治疗结果的工具，如外科手术或放射治疗后的病理分期和复发。大多数结合阶段、等级和PSA水平，且有的还增添了活检针阳性数目或百分比、年龄和/或其他信息。除预后前列腺癌的方法之外，或作为该方法的替代方法，本发明的方法还可使用如D’Amico分类法、Partin表格、Kattan列线图以及UCSF的前列腺癌风险评估(CAPRA)得分。

本发明的另一方面涉及一种用于治疗受试者的前列腺癌的方法，包括向受试者给予Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗；以及进行本发明的方法(即，预测用HhP抑制剂治疗的前列腺癌的治疗结果的方法，或测定HhP抑制剂治疗的功效的方法)。

患者选择

可选地，基于Hh水平或信号传递可选择有治疗(或进一步治疗)增殖性病症诸如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌或其他癌症需要的受试者作为尤其适用于以HhP抑制剂治疗的个体，所述Hh水平或信号传递可通过测量表示HhP信号本身或HhP信号的调节剂(诱导剂或抑制剂)的生物HhP标记(HhP生物标记)直接或间接评估。如果生物标记是HhP信号的抑制剂，且抑制剂水平低于正常，则可假定HhP信号升高到高于正常。同样，如果生物标记是HhP信号的抑制剂，且抑制剂水平高于正常，则可假定HhP信号降低到低于正常。如果生物标记是HhP信号的诱导剂，且诱导剂水平低于正常，则可假定HhP信号降低到低于正常。同样，如果生物标记是HhP信号的诱导剂，且生物标记的水平高于正常，则可假定HhP信号升高到高于正常。可选地，上述假设的准确性可通过直接测量HhP信号传递或测量其他额外的HhP生物标记来证实。

Hh水平或信号传递可通过测量HhP蛋白或编码HhP蛋白的核酸来评估，如激活所述途径的HhP配体和/或HhP的上游或下游组成部分(如Hedgehog的受体、激活剂或抑制剂)。哺乳动物的HhP配体包括Sonic hedgehog(SHH)、desert hedgehog(DHH)和Indian hedgehog(DHH)。HhP的激活导致神经胶质瘤相关的致癌基因同源体(Gli)转录因子的核移位，并且也可对这些转录因子的水平评估(例如，Gli1、Gli2、Gli3或上述两种或两种以上的组合)。

上述任何生物标记可在从受试者获得的样本中检测，所述样本如血液、尿液、循环肿瘤细胞、肿瘤活检或骨髓活检。这些生物标记还可通过全身给予生物标记抗体的标记形式，随后用适当成像模式成像检测。可将样本中的测量水平与参考水平相比，如代表生物标记的组成型表达的正常水平或HhP信号传递的正常水平，或先前从受试者获得的样本中所测量的水平(例如，在治疗方案的较早时间或在受试者出现增殖性病症之前从受试者获得的样本)。如果HhP生物标记相对于参考水平是上调的(升高)，那么可选择受试者用于以HhP抑制剂治疗，所述HhP抑制剂如伊曲康唑，或其医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，且可进行将HhP抑制剂给予受试者。此外，如下文所述，随后可通过以下过程来监测增殖性病症的临床响应：从受试者获得另一样本，测量生物标记，并比较所测量的水平与先前获得的样本中所测量的水平。可获得多个样本，且在治疗过程中测定和比较测量结果以便随时间监测增殖性病症以及对治疗的临床响应。

监测增殖性病症

因为每个增殖性病症可能不会立即对用HhP抑制剂的每个给药方案响应，即使在至少约1,000ng/mL的治疗范围内，也可期望监测受试者的增殖性病症对HhP抑制剂治疗有或没有响应。至少约1,000ng/mL的血浆波谷水平确保HhP抑制剂的实证试验更可能是有效的，但可能需要更高水平才有效，并且对于一些受试者而言无论什么剂量，HhP抑制剂都无效，也许是因为HhP没有上调或存在阻断上调而使HhP抑制剂无效的突变。

因此，在一些实施例中，所述方法还包括监测增殖性病症对HhP抑制剂治疗有或没有响应。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中增殖性病症对治疗缺乏临床响应指示HhP抑制剂的血浆波谷水平应进一步增加超过约1,000ng/mL，且其中临床响应的发生和HhP抑制剂的血浆波谷水平实质上高于约1,000ng/mL指示可将HhP抑制剂的一或多个后续剂量减少。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后增殖性病症对治疗缺乏临床响应，指示需要增加HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。在一些实施例中，所述方法还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后发生增殖性病症对治疗的临床响应，指示需要减少HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。

在一些实施例中，监测包括对从受试者获得的样本目测检查、触诊、成像、测定与增殖性病症相关的一种或多种生物标记的存在、水平或活性或两种或更多上述方式的组合，在治疗的一个或多个不同时间间隔下监测以确定所述治疗是否有效地治疗了受试者的增殖性病症(对受试者产生临床响应或有助于临床响应)。对于如基底细胞或恶性黑色素瘤的皮肤癌可用肉眼进行目测检查。可将通过结肠镜检查的目测检查用于结肠直肠癌及癌前期的增殖病症如息肉。支气管镜检查可用于肺癌。食管镜检查可用于食管癌和癌前期(例如巴雷斯特食道症(Barret's esophagus))。胃镜检查可用于胃癌。膀胱镜检查可用于膀胱癌和癌前期增殖性病症。腹腔镜检查可用于卵巢癌和子宫内膜异位症。可测定生物标记，如PSA、PCA2抗原和Gli(Gli1、Gli2、Gli3或两个或三个Gli的组合)。例如，样本中Gli相对于参考水平(如基线)的表达水平降低指示对HhP抑制剂治疗的阳性临床反应(有功效)，且Gli相对于参考水平(如基线)的表达水平增加指示对HhP抑制剂治疗的阴性临床响应或缺乏临床响应(缺乏功效)。其他肿瘤标记物的例子提供如下。

可采用的成像模式的实例包括计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)、超声、X射线和核医学扫描。可对淋巴结进行触诊，对前列腺癌进行经直肠数字检查，对卵巢癌进行盆腔检查，对肝癌(原发性或转移性)进行腹部触诊。

在一些实施例中，所述监测包括监测以下参数的至少一个：肿瘤大小、肿瘤大小的变化率、Hedgehog水平或信号传递、新肿瘤的出现、新肿瘤的出现率、增殖性病症的症状变化、与增殖性病症相关的新症状的出现、生活品质(例如与增殖性病症相关的疼痛程度)，或两种或更多上述参数的组合。

如上文所述，治疗增殖性病症的方法可包括在给予HhP抑制剂之后监测受试者的增殖性病症，其中增殖性病症对治疗缺乏临床响应指示HhP抑制剂的血浆波谷水平应进一步增加超过约1,000ng/mL，且其中临床响应的发生和HhP抑制剂的血浆波谷水平实质上高于约1,000ng/mL指示可将HhP抑制剂的一个或多个后续剂量减少。

在一些实施例中，治疗方法还包括监测受试者的增殖性病症的临床响应。在一些实施例中，临床响应是肿瘤响应且实体肿瘤中响应评价标准(Response EvaluationCriteria In Solid Tumors，RECIST)可用于定义在治疗期间癌症患者的肿瘤改善(显示“临床响应”)、保持不变(“稳定”)或恶化(“进展”)。在一些实施例中，肿瘤尺寸减小指示改善或临床响应，而肿瘤大小增加或无变化则指示缺乏临床响应。肿瘤部位将取决于癌症的类型。在基底细胞癌中，肿瘤位于皮肤中。在一段时间后(例如在给予HhP抑制剂约4周之后)对治疗发生临床响应表明HhP抑制剂剂量、HhP抑制剂给药频率以及目前选择给予的HhP抑制剂都令人满意，且可在没有任何治疗副作用的情况下进行治疗。如果观察到任何副作用，则可降低HhP抑制剂剂量和/或给药频率。在给予HhP抑制剂约4周之后增殖性病症对治疗缺乏临床响应，可指示需要更改治疗方案，所述更改通过增加HhP抑制剂的剂量，或增加HhP抑制剂的给药频率，或在目前所给予的HhP抑制剂给药之前、给药期间或给药之后给予额外的HhP抑制剂，或两种或两种以上上述方式的组合来进行。在一些实施例中，给予一或多种额外的HhP抑制剂且所述额外的HhP抑制剂在它抑制HhP的作用机理上不同于目前给予的HhP抑制剂(例如伊曲康唑，或伊曲康唑的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以及维莫德吉，或维莫德吉的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物)。可获得多个样本，且在治疗过程中确定和比较测量结果以便随时间监测增殖性病症。

监测可包括对从受试者获得的样本目测检查、触诊、成像、测定与增殖性病症相关的一个或多个生物标记的存在、水平或活性和/或临床响应，或两种或更多上述方式的组合。生物标记的实例包括Gli1、Gli2、Gli3、PSA，以及HhP抑制剂或它的代谢物的血浆水平。

在一些实施例中，监测包括监测以下参数的至少一个：肿瘤大小、肿瘤大小的变化率、Hedgehog水平或信号传递、新肿瘤的出现、新肿瘤的出现率、增殖性病症的症状变化、与增殖性病症相关的新症状的出现、生活品质(例如与增殖性病症相关的疼痛程度)，或两种或更多上述参数的组合。治疗之后，肿瘤大小减小、肿瘤生长率降低、或Hedgehog水平或信号传递减少、或没有新肿瘤出现、或新发肿瘤率减少、或增殖性病症症状改善、或没有增殖性病症的新症状出现、或生活品质改善可表明临床响应，即，所选的HhP抑制剂和治疗给药方案是令人满意的，且不需要改变(不过如果存在不良反应，可减少给药剂量和/或频率)。同样，治疗之后，肿瘤大小增大、或肿瘤生长率增加或肿瘤大小无变化、或Hedgehog水平或信号传递增加、或出现新肿瘤、或新发肿瘤率增加、或增殖性病症症状恶化、或出现增殖性病症的新症状、或生活品质下降可表明对治疗缺乏临床响应，且可表明需要通过增加HhP抑制剂剂量来修改治疗方案(假定如果出现任何不良反应，都是可控制的)，或增加HhP抑制剂的给药频率(仍然假定如果出现任何不良反应，都是可控制的)，或给予在给予其他HhP抑制剂之前、期间或之后给予额外的HhP抑制剂，或两种或更多上述方法的组合。如上文所述，如果给予一种或多种额外的HhP抑制剂，可期望所述额外的HhP抑制剂在它抑制HhP的作用机理上不同于目前给予的HhP抑制剂(例如伊曲康唑，或伊曲康唑的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以及维莫德吉，或维莫德吉的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物)。可获得多个样本，且在治疗过程中确定和比较测量结果以便随时间监测增殖病症。

可基于Hh水平或信号传递进行受试者对HhP抑制治疗的临床响应的评估，可直接评估或通过测量代表HhP信号本身或HhP信号调节剂(诱导剂或抑制剂)的生物标记(HhP生物标记)间接评估。如果生物标记是HhP信号的抑制剂，且抑制剂水平低于正常值，则可假定HhP信号升高到高于正常值。同样，如果生物标记是HhP信号的抑制剂，且抑制剂水平高于正常值，则可假定HhP信号降低到低于正常值。如果生物标记是HhP信号的诱导剂，且诱导剂水平低于正常值，则可假定HhP信号降低到低于正常值。同样，如果生物标记是HhP信号的诱导剂，且生物标记的水平高于正常值，则可假定HhP信号升高到高于正常值。可选地，上述假设的准确性可通过直接测量HhP信号传递或测量其他额外的HhP生物标记来证实。

Hh水平或信号传递可通过测量表示HhP活性的生物标记(如Hh蛋白)来监测，或分析编码HhP蛋白的核酸，如激活所述途径的HhP配体和/或HhP的上游或下游组成部分(例如Hedgehog的受体、激活剂或抑制剂)。哺乳动物的HhP配体包括音刺猬因子(Sonic hedgehog(SHH))、沙漠刺猬因子(desert hedgehog(DHH))和印度刺猬因子(Indian hedgehog(DHH))。也可对Gli转录因子的水平评估(例如，Gli1、Gli2、Gli3或上述两种或两种以上的组合)。

上述任何生物标记可在从受试者获得的样本中检测，所述样本诸如血液、尿液、循环肿瘤细胞、肿瘤活检或骨髓活检。这些生物标记还可通过以生物标记的抗体的标记形式全身给药，随后用适当显像模式成像检测。如果测量表示HhP活性的生物标记，且当与那个生物标记的参考水平(在较早时间如在HhP抑制剂治疗开始之前，从受试者获得的样本中测量的正常对照或水平)相比时，在用HhP抑制剂治疗之后HhP信号传递增加或保持相同，可指示对治疗缺乏临床响应且需要更改治疗方案，所述更改通过增加HhP抑制剂的剂量，或增加HhP抑制剂的给药频率，或在目前给予的HhP抑制剂给药之前、给药期间或给药之后给予额外的HhP抑制剂，或两种或两种以上上述方式的组合来进行。如上文所述，如果给予一种或多种额外的HhP抑制剂，可期望所述额外的HhP抑制剂在它抑制HhP的作用机理上不同于第一种HhP抑制剂(例如伊曲康唑，或伊曲康唑的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以及维莫德吉，或维莫德吉的医药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物)。如果测量表示HhP活性的生物标记(例如在给予HhP抑制剂之后约4周)，且当与那个生物标记的参考水平(在较早时间如在HhP抑制剂治疗开始之前从受试者获得的样本中测量的正常对照或水平)相比时，HhP信号传递的相对减少指示HhP抑制剂剂量、HhP抑制剂给药频率以及目前选择给予的HhP抑制剂都令人满意，且可在没有任何治疗副作用的情况下进行治疗。如果观察到任何副作用，则可降低HhP抑制剂剂量和/或给药频率。可获得多个样本，且在治疗过程中确定和比较测量结果以便随时间监测增殖性病症。例如，如果增殖性病症是基底细胞癌，监测可包括在HhP抑制剂给予之后一个或多个时间点(例如在给予HhP抑制剂之后约4周)时所取得的皮肤组织或肿瘤样本中测量Gli1，以及比较所测量的Gli1水平与参考水平(在较早时间如在HhP抑制剂治疗开始之前从受试者获得的样本中测量的正常对照或水平)。如果在用HhP抑制剂治疗之后Gli1增加或保持相同，表示对所述治疗缺乏临床响应且可指示需要如上文所述更改治疗方案，所述更改通过增加HhP抑制剂的剂量，或增加HhP抑制剂的给药频率，或在其他HhP抑制剂给药之前、给药期间或给药之后给予额外的HhP抑制剂，或两种或两种以上上述方式的组合来进行。可获得多个样本，且在治疗过程中确定和比较测量结果以便随时间监测增殖性病症。

生物标记检测

本发明的方法可包括在将HhP抑制剂给予受试者之前、给予期间和/或给予之后测定从受试者获得的样本中一种或多种生物标记的存在、水平或活性。在一些实施例中，生物标记与增殖性病症有关。例如，如果增殖性病症是癌症，那么生物标记可以是肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原。在一些实施例中，生物标记与临床响应或缺乏临床响应相关，如HhP信号传递程度。这类生物标记的例子包括Gli1、Gli2、Gli3、HhP配体(诸如音刺猬因子(Sonichedgehog(SHH))、沙漠刺猬因子(desert hedgehog(DHH))或印度刺猬因子(Indianhedgehog(DHH))、HhP的上游或下游组成部分(诸如受体、激活剂或抑制剂)、PSA以及所给予的HhP抑制剂或它的代谢物的血浆水平。

可选地，可确定生物标记水平是否随后相对于参考生物标记水平增加、减少，或保持原样(例如在特性和/或范围方面)。

评估可由用HhP抑制剂初始治疗后一个或多个时间点受试者生物标记水平进行。优选地，在受试者用HhP抑制剂初始治疗之前、治疗期间或治疗之后立即对受试者的生物标记水平进行评估(如确立对照或基线以便随后评估或治疗后评估)。这可用作生物标记参考水平。例如，可在用HhP抑制剂治疗之前但在用一或多种其他疗法(如化学疗法、免疫疗法和/或外科)治疗之后从受试者获得的样本进行生物标记水平的评估。

在本发明方法中，可通过在初始治疗后在均匀时间间隔(例如每天、每周、每月或每年)或不均匀时间间隔时进行多次评估来监测受试者的生物标记水平。对受试者的生物标记水平的监测可持续一段预先确定的时间，持续基于治疗结果确定的时间或无限期。优选地，从用HhP抑制剂初始治疗之前的一段时间开始监测受试者的生物标记水平，并向后持续一段时间(例如持续至少5年的一段时期)，或在受试者的整个生命中无限期进行。

通常，每个评估将涉及从受试者获得适当的生物样本。适当的生物样本可取决于受试者的生物标记进行评估的特别方面(例如，取决于特别测定)。例如，在一些实施例中，生物样本将是选自全血、血清、外周血单核细胞(PBMC)，以及组织(例如肿瘤)的一种或多种样本。在适于获得关于生物标记在所关注的时间时的信息的时间点进行对样本的评估。例如，样本可从给予HhP抑制剂之前的时间从受试者获取，且额外的样本可在给药之后周期性地从受试者获取以确定所观察的生物标记水平的性质和范围。

生物标记的存在或水平可通过使用已知技术测量生物标记核酸(DNA或mRNA)或蛋白的水平来测定。例如，可使用免疫学监测方法(即免疫测定)来测定生物标记的水平，如竞争性或免疫计量测定。测定可以是例如：放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、Northern印迹、Southern印迹、多肽微阵列或核酸微阵列。生物标记的水平可使用以下方法测定：表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳，或平板凝胶电泳。生物标记的水平可使用以下方法测定：RT-PCR、PCR、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)、转录介导的扩增(TMA)，或计算机化检测矩阵。

测定标准化可包括控制一般变量的特定参数，如测定条件、测定的灵敏性和特异性、所涉及的任何体外扩增步骤、阳性和阴性对照、用于确定来自受试者样本的阳性和阴性测试结果的边界值，并且本领域中的普通技术人员可确定和选择用于测试结果的任何统计分析方法。

将确定样本生物标记水平的生物标记的参考水平与可能是如在一个较早时间点(在给予HhP抑制剂之前或之后)从受试者获得的样本的水平相比较，或生物标记参考水平可能是正常水平或来自适当受试者人群的统计计算水平，代表与阳性(所希望的)临床结果一致的水平(即，HhP抑制剂对受试者表现出一定程度的功效)或与阳性临床结果不一致(即，HhP抑制剂对受试者没表现出功效)。参考水平可以是单个值(例如边界值)、范围等。例如，参考水平可以是一个范围以便如果受试者的生物标记水平未达到参考水平或属于该范围，则受试者的生物标记水平被认为是可接受的且无需采取措施。反之，如果受试者的生物标记水平达到或超过参考水平或不属于可接受的范围，则此可表明应采取一些行动，如停止或中止用HhP抑制剂治疗，或减少给予的HhP抑制剂的量，且可选地给予替代治疗，即除HhP抑制剂之外的治疗。

对于前列腺癌，可确定或测定的生物标记的例子包括血清中的前列腺特异性抗原(PSA)和尿液中的PCA2抗原。对于多种增殖性病症，包括癌症，可确定或测定的生物标记的另一例子包括全血、血清、血浆、尿液、脑脊髓液和组织中的Gli(参见例如美国专利公开第20120083419号，Altaba A.等，"Methods and Compositions for InhibitingTumorigenesis"，其内容全文以引证的方式并入本文中)。可在网址www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/detection/tumor-markers中找到与癌症相关(即与癌症一致或相互关联)的生物标记的其他例子，包括非小细胞肺癌和间变性大细胞淋巴瘤的肿瘤中ALK基因重排，肝癌和生殖细胞肿瘤的血液中的甲胎蛋白(AFP)，多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病和一些淋巴瘤的血液、尿液或脑脊髓液中的β-2-微球蛋白(B2M)，绒毛膜癌和睾丸癌的尿液或血液中的β-人绒毛膜促性腺激素(β-hcG)，慢性髓样白血病的血液和/或骨髓中的BCR-ABL融合基因，皮肤黑色素瘤和结肠直肠癌的肿瘤中的BRAF突变V600E，乳腺癌的血液中的CA15-3/CA27.29，胰腺癌、胆囊癌、胆管癌和胃癌的血液中的CA19-9，卵巢癌的血液中的CA-125，甲状腺髓样癌的血液中的降血钙素，结肠直肠癌和乳腺癌的血液中的癌胚抗原(CEA)，非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)的血液中的CD20，神经内分泌肿瘤的血液中的嗜铬粒蛋白A(CgA)，膀胱癌的尿液中的染色体3、7、17和9p21，肺癌的血液中的细胞角蛋白片段21-1，非小细胞肺癌的肿瘤中的CGFR突变分析，乳腺癌的肿瘤中的雌激素受体(ER)/孕激素受体(PR)，膀胱癌的尿液中的纤维蛋白/纤维蛋白原，卵巢癌的血液中的HE4，乳腺癌、胃癌和食管癌的肿瘤中的HER2/neu，多发性骨髓瘤和沃尔丹斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)的血液和尿液中的免疫球蛋白，胃肠道基质肿瘤和粘膜黑色素瘤的肿瘤中的KIT，结肠直肠癌和非小细胞肺癌的肿瘤中的KRAS突变分析，生殖细胞肿瘤的血液中的乳酸脱氢酶，膀胱癌的尿液中的核基质蛋白22，甲状腺癌的肿瘤中的甲状腺球蛋白，乳腺癌的肿瘤中的尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)，卵巢癌的血液中的5-蛋白标记(卵巢)，乳腺癌的肿瘤中的21-基因标记(OncotypeDX)，以及70-基因标记(Mammaprint)(cancer.gov/cancertopics/factsheet/detection/tumor-markers)。

在一些实施例中，生物标记包括PSA。PSA，也被称为γ-精浆蛋白(seminoprotein)或激肽释放酶-3(KLK3)，是一种人类中通过KLK3基因编码的糖蛋白酶。PSA是激肽释放酶相关的肽酶家族的成员。在本发明方法中，可通过评估编码PSA、PSA多肽(PSA基因产物)的核酸(例如DNA或mRNA)的量或PSA的活性对样本中的PSA水平直接进行测定或测量。可使用的PSA测量方法的实例包括但不限于以下文献中所描述的：Blase A.B.等，"Five PSAMethods Compared by Assaying Samples with Defined PSA Ratios,"ClinicalChemistry,1997年5月,43(5):843-845；Gelmini S.等，"Real-time RT-PCT For TheMeasurement of Prostate-Specific Antigen mRNA Expression in BenignHyperplasia and Adenocarcinoma of Prostate,"Clin.Chem.Lab.Med.,2003年3月,41(3):261-265；和Kalfazade N.等，"Quantification of PSA mRNA Levels in PeripheralBlood of Patients with Localized Prostate Adenocarcinoma Before,During andAfter Radical Prostatectomy by Quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR),"Int.Urol,Nephrol,2009,电子版2008年6月27日，41(2):273-279，所述文献的全文各自以引证的方式并入本文中。

根据本发明，PSA水平可通过测量样本中总PSA(tPSA；样本中所有PSA的测量)、游离PSA(fPSA；游离的非结合的PSA蛋白的量)，或复合的PSA(cPSA；与其他蛋白复合或结合的PSA的量)来确定。可选地，PSA水平的测定还包括确定PSA速度或PSA倍增时间。PSA速度是受试者的PSA水平随时间的变化率，通常表示为ng/mL每年。PSA倍增时间是受试者的PSA水平加倍的一段时间。Pro-PSA是指若干不同的PSA的非活性前体。优选地，确定PSA的成熟、活性形式、前导肽的缺乏。然而，可将pro-PSA作为成熟形式的替代或补充来测量(Masood A.K.等，"Evolving Role of Pro-PSA as a New Serum Marker for the Early Detection ofProstate Cancer",Rev.Urol,2002,4(4):198-200)。

本发明方法可包括在向受试者给予HhP抑制剂之前、给药期间和/或给药之后评估从受试者获得的样本中的PSA水平以确定PSA水平是否相对于参考PSA水平升高、降低或保持不变(例如，在特性和/或程度上)。

评估可由用HhP抑制剂初始治疗以后一个或多个受试者的PSA水平进行。优选地，在受试者用HhP抑制剂初始治疗之前、治疗期间或治疗刚刚结束后对受试者的PSA水平进行评估(例如确立对照或基线以便随后评估或治疗后评估)。这可用作PSA参考水平。例如，可在用HhP抑制剂治疗之前但在用一种或多种其他疗法(诸如化学疗法、免疫疗法和/或外科)治疗之后从受试者获得的样本进行PSA水平的评估。

在本发明方法中，可通过在初始治疗后在均匀时间间隔(例如每天、每周、每月或每年)或不均匀时间间隔时进行多次评估来监测受试者的PSA水平。对受试者的PSA水平的监测可持续一段预先确定的时间，持续基于治疗结果确定的时间或无限期。优选地，从用HhP抑制剂初始治疗之前的一段时间开始监测受试者的PSA水平，并向后持续一段时间(例如持续至少5年的一段时间)，或在受试者的整个生命中无限期进行。

通常，每个评估将涉及从受试者获得适当的生物样本。适当的生物样本可能取决于受试者的PSA的特定方面进行评估(例如，取决于特别测定)。例如，在一些实施例中，生物样本将是选自全血、血清、外周血单核细胞(PBMC)，以及组织(例如肿瘤)的一种或多种样本。在适于获得关于PSA在所关注的时间时的信息的时间点时进行对样本的评估。例如，样本可在给予HhP抑制剂之前的时间从受试者获取，且额外的样本可在给药之后周期性地从受试者获取以确定所观察的PSA水平的性质和范围。

PSA的水平可通过使用已知技术测量PSA核酸(DNA或mRNA)或蛋白的水平来测定。例如，可使用免疫学监测方法(即免疫测定)来测定PSA的水平，诸如竞争性或免疫计量测定。测定可以是例如：放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、Northern印迹、Southern印迹、多肽微阵列或核酸微阵列。PSA的水平可使用以下方法测定：表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳，或平板凝胶电泳。PSA的水平可使用以下方法测定：RT-PCR、PCR、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)、转录介导的扩增(TMA)，或计算机化检测矩阵。

测定标准化可包括控制一般变量的特定参数，如测定条件、测定的灵敏性和特异性、所涉及的任何体外扩增步骤、阳性和阴性对照、用于确定来自受试者样本的阳性和阴性测试结果的边界值，并且本领域中的普通技术人员可确定和选择用于测试结果的任何统计分析方法。

将确定样本PSA水平的PSA的参考水平与可能例如是在一个较早时间点(在给予HhP抑制剂之前或之后)从受试者获得的样本的水平相比较，或PSA参考水平可能是正常水平或来自适当受试者人群的统计计算水平，代表与阳性(所希望的)临床结果一致的水平(即，HhP抑制剂对受试者表现出一定程度的功效)或与阳性临床结果不一致(即，HhP抑制剂不表现出对受试者的功效)。参考水平可以是单个值(例如边界值)、范围等等。例如，参考水平可以是一个范围以便如果受试者的PSA水平未达到参考水平或属于该范围，则受试者的PSA水平被认为是可接受的且无需采取措施。反之，如果受试者的PSA水平达到或超过参考水平或不属于可接受的范围，则此可表明应采取一些措施，如停止或中止用HhP抑制剂治疗，或减少给予的HhP抑制剂的量，且可选地给予替代治疗，即除HhP抑制剂之外的治疗。

本发明方法可进一步包括监测受试者的步骤，如，以下一种或多种参数的变化(例如，增加或减少)：肿瘤大小；Hedgehog水平或信号传递；基质激活；一种或多种癌症标记的水平；新病变的出现率；新疾病相关症状的出现；软组织肿块大小如降低或稳定；生活品质，如，疾病相关的疼痛程度；或与临床结果有关的任何其他参数。可在一个或多个下列时期监测受试者：在治疗开始之前；在治疗期间；或在已给予治疗的一种或多种要素(element)之后。可使用监测来评价进一步治疗的必要性：用相同HhP抑制剂、单独或与相同治疗剂组合，或用额外药剂的额外治疗。一般而言，如上所述的一种或多种参数减小指示受试者状况改善，不过对于血清血红蛋白水平，增加可能与受试者状况改善有关。

本发明方法还还包括分析来自受试者的核酸或蛋白的步骤，例如分析受试者的基因型。在一个实施例中，分析Hedgehog蛋白，或编码Hedgehog配体和/或Hedgehog信号传递的上游或下游组成部分(如Hedgehog的受体、激活剂或抑制剂)的核酸。在血液、尿液、循环肿瘤细胞、肿瘤活检或骨髓活检中可检测到升高的Hedgehog配体。通过以Hedgehog配体的抗体的标记形式全身给药，随后成像也可检测到升高的Hedgehog配体。在根据本发明的另外PSA测定中，可使用分析如来评价替代性治疗的适合性或在替代性治疗之间选择如特定剂量、给药方式、给药时间、包含辅助治疗，例如与第二药剂联合给药，或通常测定受试者的可能的药物响应表型或基因型。可在治疗的任何阶段分析核酸或蛋白，但优选地，在给予HhP抑制剂和/或治疗剂之前分析，从而确定HhP抑制剂的适当剂量和治疗方案(例如每次治疗的量或治疗频率)以使受试者得到预防或治疗性处理。

在某些实施例中，本发明方法还包括在将HhP抑制剂给予受试者之前或之后检测受试者的升高的Hedgehog配体。在血液、尿液、循环肿瘤细胞、肿瘤活检或骨髓活检中可检测到升高的Hedgehog配体。通过以Hedgehog配体的抗体的标记形式全身给药，随后成像也可检测到升高的Hedgehog配体。检测升高的Hedgehog配体的步骤可包括在给予另一种癌症治疗之前测量患者的Hedgehog配体，在给予另一种癌症治疗之后测量患者的Hedgehog配体，且确定在给予另一种化学治疗之后Hedgehog配体的量是否大于给予另一种化学治疗之前Hedgehog配体的量。另一种癌症治疗可以是如治疗剂或放射治疗。

Hedgehog途径信号传递抑制剂

当Hh配体结合并抑制跨膜受体Patched1(Ptch1)时，Hh途径激活开始时，允许信号转导物Smoothened(Smo)激活Gli转录因子并扩增Hh靶基因表达。到目前为止，所有的核事件归因于在Gli转录因子中的Hh出现，其中Gli1主要用作激活剂，Gli3主要用作阻遏剂，且Gli2具有阻遏和激活两种功能。

任何HhP抑制剂可用于本发明作为单药治疗或与一种或多种其他HhP抑制剂的联合方案和/或与一种或多种其他治疗剂或预防剂或如化学治疗剂、放射治疗、外科手术、免疫治疗的治疗联合。可使用HhP抑制剂和生物测定和活体内模型来识别和鉴定以下文献中所述的HhP的不同成员的抑制剂：Peukert S.和Miller-Moslin K.,"Small-MoleculeInhibitors of the Hedgehog Signaling Pathway as Cancer Therapeutics",ChemMedChem,2010,5(4):500-512；Sahebjam等，"The Utility of Hedgehog SignalingPathway Inhibition for Cancer",The Oncologist,2012,17:1090-1099；Liu H.等，"Clinical Implications of Hedgehog Signaling Pathway Inhibitors,"Chin.J.Cancer,2011,30(1):13-26；Atwood Scott X.等，"Hedgehog Pathway Inhibitionand the Race Against Tumor Evolution,"J.Cell Biol,199(2):193-197；以及美国公开号20090203713，Beachy P.A.等，"Hedgehog Pathway Antagonists to Treat Disease,"每篇文献的内容全文以引证的方式并入本文中。

旨在识别Hh信号传递途径的抑制剂的药物发现工作促进开发许多用于查询Hh途径活性的生物测定系统，包括基于细胞的测定、组织测定和至少一个活体内测定，且已使用结合测定来证实途径中的特异性蛋白是靶标。此外，已建立各种癌症类型的动物疾病模型，包括成神经管细胞瘤、基底细胞癌(BCC)、乳腺癌、淋巴瘤、慢性髓样白血病(CML)，以及胰腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌(SCLC)。已使用这些模型来评价各种小分子HhP抑制剂对肿瘤生长和进展的影响。

迄今已证明，Smoothened受体(Smo)是途径中的最“可成药(druggable)”的目标，由自然存在和完全合成的小分子Smo抑制剂的结构多样化排列所报道。正在努力确定途径中额外的可成药节点，且有希望的初步结果已证实靶向Sonic Hedgehog蛋白(Shh)和下游目标Gli1的小分子抑制剂。

靶向HhP的最常见方式是调节Smo。Smo是一种由HhP的Smo基因编码的G蛋白偶联受体蛋白。Smo是致畸剂环杷明的分子靶标。Smo的拮抗剂和兴奋剂已显示影响下游的途径调节。临床上最先进的Smo靶向剂是环杷明竞争性的。伊曲康唑(Sporanox)还显示通过与环杷明和维莫德吉不同的机理靶向Smo。在突变存在下，伊曲康唑抑制Smo对维莫德吉及其他环杷明竞争性拮抗剂(如IPI-926和LDE-225)给予抗性。Ptch和Gli3(5E1)抗体也是一种调节途径的方法。已使用下游效应物和强转录激活剂siRNA Gli1来抑制细胞生长和促进细胞凋亡。三氧化二砷(Trisenox)也已显示出通过干扰Gli作用和转录来抑制Hedgehog信号传递。

本文所使用的术语“Hedgehog抑制剂”、“Hedgehog途径抑制剂”、“HhP抑制剂”、或在大多数情况下“抑制剂”，是指能够阻断或减少细胞对Hedgehog信号传递途径响应的药剂，例如在活性Hedgehog信号传递途径的细胞中，且更具体地说，直接或间接抑制细胞对分泌生长因子的Hedgehog家族的反应。Hedgehog抑制剂可通过若干路线拮抗Hedgehog途径的活性，包括但不限于，通过干扰Ptch对Smo施加的抑制作用；通过激活Smo而不影响Ptc；通过直接与Smo结合来影响Smo功能；和/或通过激活途径中Smo的下游。例示性的Hedgehog抑制剂可包括但不限于甾体生物碱，如环杷明和蒜藜芦碱。在一些实施例中，HhP抑制剂通过以下方式拮抗HhP活性：通过结合至途径的组成部分(效应分子)(例如Hedgehog受体，如Ptch或Smo，或信号传递介质，如Gli1、Gli2或Gli3)，干扰途径的一个组成部分对途径的另一组成部分施加的抑制作用；通过激活途径的一个组成部分而不影响另一组成部分；通过激活途径中Smo下游的组成部分；或通过减少或消除途径中的组成部分。在一些实施例中，HhP抑制剂通过以下方式拮抗HhP活性：结合至Smo，干扰Ptch对Smo施加的抑制作用；通过激活Smo而不影响Ptch；通过激活途径中Smo的下游；或通过减少或消除Smo的表达。在一些实施例中，HhP抑制剂是环杷明竞争性的。在一些实施例中，HhP抑制剂是环杷明竞争性的且增殖性病症是肺癌、基底细胞癌、前列腺癌或其他癌症。HhP抑制剂可以是能够阻断或减少对HhP的细胞反应的任何类别的药剂或治疗且可以是，如，多肽(如蛋白、肽、免疫球蛋白(抗体或抗体片段))、核酸(如反义分子、核酶，或干扰RNA，如siRNA或shRNA)，或小分子。HhP抑制剂在给予受试者时可以是具有活性的，和/或在活体内代谢过程或其他机理中为具有活性的(例如，作为一或多种活性代谢物)。

本文中使用的术语“HhP抑制剂”和它的语法上的变体是指能够阻断或减少细胞对Hedgehog信号途径的响应的试剂，例如在具有活性Hedgehog信号途径的细胞中，且更具体地说，直接或间接抑制细胞对Hedgehog家族的分泌的生长因子的响应，本发明包括使用HhP抑制剂来治疗增殖性病症(例如癌症)，无论在治疗所讨论的增殖性病症时所述特定试剂的主要作用机理是否通过上述HhP抑制或通过一些其他作用机理，如抑制血管生成。例如，伊曲康唑是一种HhP抑制剂且抑制血管生成。根据本发明在治疗一些癌症时，HhP抑制剂可通过完全与它的HhP抑制特性无关的机理起作用。因此，识别试剂作为HhP抑制剂并不限于它所使用的上下文，而是根据其抑制HhP的能力。

本发明使用的适当Hedgehog抑制剂包括例如以下文献中所描述和公开的：美国专利7,230,004、美国公开专利申请2008/0293754、美国公开专利申请2008/0287420、美国公开专利申请2008/0293755以及美国公开专利申请2008/0019961，所述文献的全部公开内容以引证的方式并入本文中。

其他适当的Hedgehog抑制剂的实例还包括以下公开中所描述的：美国公开专利申请US 2002/0006931、US 2007/0021493和US 2007/0060546，以及国际公开申请WO 2001/19800、WO 2001/26644、WO 2001/27135、WO 2001/49279、WO 2001/74344、WO 2003/011219、WO 2003/088970、WO 2004/020599、WO 2005/013800、WO 2005/033288、WO 2005/032343、WO2005/042700、WO 2006/028958、WO 2006/050351、WO 2006/078283、WO2007/054623、WO2007/059157、WO 2007/120827、WO 2007/131201、WO 2008/070357、WO 2008/110611、WO2008/112913和WO 2008/131354。

HhP抑制剂的其他实例包括但不限于GDC-0449(也称为RG3616或维莫德吉)，如以下文献中所述，如，Von Hoff D.等，N.Engl.J.Med.2009；361(12):1164-72；Robarge K.D.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.,2009；19(19):5576-81；Yauch,R.L.等，Science,2009,326:572-574；Rudin,C.等，New England J of Medicine,2009,361-366；BMS-833923(也称为XL139)，如以下文献中所述，如Siu L.等，J.Clin.Oncol.2010；28:15s(增刊；摘要2501)；和国家卫生临床试验识别研究所(National Institute of Health Clinical TrialIdentifier)NCT006701891；LDE-225，如在以下文献中所述：Pan S.等，ACSMed.Chem.Lett.,2010；1(3):130-134；LEQ-506，如在以下文献中所述：国家卫生临床试验识别研究所(National Institute of Health Clinical Trial Identifier)NCT01106508；PF-04449913，如在以下文献中所述：国家卫生临床试验识别研究所(National Institute of Health Clinical Trial Identifier)NCT00953758；美国公开专利申请2010/0286114中公开的Hedgehog途径拮抗剂；SMOi2-17，如在美国公开专利申请2010/0093625中所述；SANT-1和SANT-2，如在以下文献中所述：Rominger C.M.等，J.Pharmacol.Exp.Ther.,2009；329(3):995-1005；1-哌嗪基-4-芳基酞嗪类或其类似物，在以下文献中所述：Lucas B.S.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.,2010；20(12):3618-22。

本发明中有用的HhP抑制剂可含有碱性官能团，如氨基或烷基氨基，且因此可与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的、无机和有机酸加成盐。这些盐可以在给予媒剂或剂型制造过程中现场制备，或通过用适当有机或无机酸分别处理呈游离碱形式的化合物来分离，并在后续提纯过程中分离形成的盐来制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐，以及月桂基磺酸盐等等(参见如Berge等，"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.,1977,66:1-19)。

药学上可接受的盐包括但不限于化合物的常规无毒盐或季铵盐，例如来自无毒的有机或无机酸。所述常规的无毒盐包括但不限于那些从无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等形成的盐；和从有机酸，如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酸基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乙二磺酸、草酸、异硫羰酸等制备的盐。

在其他情况下，HhP抑制剂可含有一种或多种酸性官能团，并因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指相对无毒的，本发明化合物的无机碱和有机碱的加成盐。这些盐同样可以在给予媒剂或剂型制造过程中现场制备，或通过用适合的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、用氨或用药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺分别处理游离酸形式的化合物来制备。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等等。用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等等。

如果给予另一种治疗剂，HhP抑制剂和所述治疗剂可以作为单独的组合物(例如药物组合物)给予，或分别但经由相同路径(例如，经口服或静脉内)给予，或以相同组合物给予，例如，药物组合物。

在一个实施例中，在检测增殖性病症之前给予HhP抑制剂。在另一个实施例中，在检测增殖性病症之后给予HhP抑制剂。在一个实施例中，所述增殖性病症是癌症(前列腺癌、基底细胞癌、肺癌，或其他癌症)，并且在检测癌症之前给予HhP抑制剂。在另一个实施例中，所述增殖性病症是癌症(前列腺癌、基底细胞癌、肺癌，或其他癌症)，并且在检测癌症之后给予HhP抑制剂。

一些HhP抑制剂可包括一个或多个不对称中心，且因此可以各种异构形式存在，即立体异构体(对映体、非对映体、顺式－反式异构体、E/Z异构体等)。因此，HhP抑制剂可以是个别对映体、非对映体或其他几何异构体形式，或可以是立体异构体的混合物形式。对映体、非对映体及其他几何异构体可通过本领域技术人员已知的任何方法从混合物(包括外消旋混合物)分离，所述方法包括手性高压液相色谱法(HPLC)和手性盐的形成和结晶，或通过不对称合成制备；参见如Jacques,等，Enantiomers,Racemates and Resolutions(WileyInterscience,New York,1981)；Wilen,S.H.,等，Tetrahedron,1977,33:2725；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；Wilen,S.H.Tablesof Resolving Agents and Optical Resolutions 268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of NotreDame Press,Notre Dame,Ind.1972)。

Hedgehog途径抑制剂在本文中通过伊曲康唑例示，包括其药学上可接受的盐、前药、异构体，及代谢物。伊曲康唑的异构体包括它的立体异构体中的每一种(Castro-PuyanaM.等，"Separation and Quantitation of the Four Stereoismers of Itraconazole inPharmaceutical Formulations by Electrokinetic Chromatography",Electrophoresis,2006,27(4):887-895；Kunze K.L.等，"Stereochemical Aspects ofItraconazole Metabolism In Vitro and In Vivo,"Drug Metab.Dispos.,2006,Epub2006年1月13日,34(4):583-590，以及如以下文献中所修饰："Correction to"Stereochemical Aspects of Itraconazole Metabolism In Vitro and In Vivo,"DrugMetab.Dispos.,2012,40(12):2381)；Chong C.R.等，"Inhibition of Angiogenesis bythe Antifungal Drug Itraconazole,"ACS Chemical Biology,2007,2(4):263-270；KimJ.等，"Itraconazole,a Commonly Used Antifungal that Inhibits Hedgehog PathwayActivity and Cancer Growth,"Cancer Cell,2010,17(4):388-399)；专利公开号WO/2008/124132,Liu J.等，标题为"Chirally Pure Isomers of Itraconazole andInhibitors of Lanosterol 14A-Demethylase For Use as AngiogenesisInhibitors")。在一些实施例中，HhP抑制剂包括选自(2R,4S,2'R)、(2R,4S,2'S)、(2S,4R,2S'R)或(2S,4R2'S)的伊曲康唑的立体异构体。在一些实施例中，相对于伊曲康唑，HhP抑制剂包括伊曲康唑类似物，其中第二丁基侧链已被一或多个部分替换。如，伊曲康唑类似物可以是其中原来的第二丁基侧链被C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基或C₂-C₈炔基替换的类似物，所述取代基为直链、分支链或环状的，且在任何位置未被取代或被C₁-C₈烷氧基、C₆-C₁₀芳基、N₃、OH、Cl、Br、I、F、C₆-C₁₀芳基氧基、C₁-C₈烷基羧基、芳基羧基取代一次或多次，其中任何取代基还可被任何上述基团取代。

在一些实施例中，HhP抑制剂是含有唑类抗真菌药物的组合物，如美国公开专利申请20030225104(Hayes等，作为美国专利6,881,745被授权的“PharmaceuticalCompositions for Poorly Soluble Drugs”，所述专利的全文以引证的方式并入本文中)中所述。在一些实施例中，在以空腹状态给药以后，组合物活体内提供至少约100ng/mL(例如150至250ng/mL)的平均C_MAX。在一些实施例中，HhP抑制剂是一种组合物，其包括唑类抗真菌药物，如伊曲康唑，和至少一种具有一或多个酸性官能团的聚合物。在一些实施例中，HhP抑制剂是一种组合物，其包括唑类抗真菌药物，如伊曲康唑，和至少一种具有一或多个酸性官能团的聚合物，其中所述组合物活体内提供至少100ng/mL(例如150至250ng/mL)的平均C_MAX。在一些实施例中，HhP抑制剂是一种组合物，其包括约100mg的唑类抗真菌药物，如伊曲康唑，和可选地至少一种具有酸性官能团的聚合物。

在一些实施例中，HhP抑制剂是伊曲康唑的SUBACAP^TM制剂。SUBACAP^TM制剂是一种固体分散体，其中伊曲康唑与酸性分子缔合，且所述制剂在pH 5.5-7处具有极好吸收。伊曲康唑在肠内释放；因此，饱腹或空腹状态不影响吸收，也对胃酸缺乏患者或依赖质子泵抑制剂药物以控制高酸的患者没有限制。

在一些实施例中，HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式以每日100mg至600mg范围内的剂量给予。在一些实施例中，将150mg HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式每日两次或两次以上给予。在一些实施例中，将200mg HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式每日两次或两次以上给予。

治疗方法

本发明的一个方面涉及一种用于治疗受试者的增殖性病症的方法，包括向受试者给予包含Hedgehog途径(HhP)抑制剂的组合物，其中以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000ng/mL的有效量给予(优选口服)组合物。

预测前列腺癌治疗的结果的方法以及确定HhP抑制剂治疗功效的方法还可包括给予HhP抑制剂治疗。因此，本发明的另一方面涉及一种用于治疗受试者的前列腺癌的方法，包括向受试者给予Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗；以及进行本发明的方法(即，预测用HhP抑制剂治疗的前列腺癌的治疗结果的方法，或确定HhP抑制剂治疗的功效的方法)。

在治疗增殖性病症(例如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌或其他癌症)时，可通过有效递送至所需组织的任何途径给予一种或多种HhP抑制剂(以及含有它们的组合物)，例如通过口服、非经肠(例如静脉内)、肌内、舌下、经颊、经直肠、鼻内、支气管内、肺内、腹膜内、局部、经皮以及皮下等途径给药。HhP抑制剂可经配制用于最有效的给药途径。例如，可将HhP抑制剂经口服或局部(例如通过直接注射)给予所需部位，如癌前病变或肿瘤(例如前列腺癌病变或前列腺肿瘤或其他癌症肿瘤)。单一剂量中所给予的量可取决于被治疗的受试者、受试者的体重、给予的方式和开处方的医师的判断。然而，一般而言，给予组合物的给药和剂量以及持续时间接近达到期望结果所必需的量。

所选择的HhP抑制剂剂量水平将取决于多种因素，包括，例如，使用的特定化合物的活性、给药途径、给药时间、所使用的特定化合物的排泄率或代谢率、吸收速率和程度、治疗持续时间、其他药物、与所使用的特定化合物共同使用的化合物和/或材料、正在接受治疗的患者的年龄、性别、体重、病况、总体健康状况和以前的病史，以及医药领域技术人员众所周知的类似因素。

一般而言，HhP抑制剂的适当的日剂量是有效产生治疗效果的最低剂量的抑制剂的量。这样的有效剂量一般取决于上述因素。一般而言，当用于指示效果时，用于受试者的HhP抑制剂的口服、静脉内以及皮下剂量将在以下范围内变动：每日约0.0001mg至约1,000mg、或每日约0.001mg至约1,000mg、或每日约0.01mg至约1,000mg，或每日约0.1mg至约1,000mg、或每日约0.0001mg至约600mg、或每日约0.001mg至约600mg、或每日约0.01mg至约600mg、或每日约0.1mg至约600mg、或每日约200mg至600mg。本领域的普通技术人员根据给药途径和期望剂量可以很容易确定最佳的药物制剂。(参见如，Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版(1990),Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，其全部公开内容在此以引证的方式并入本文中。

接受治疗的受试者是任何需要的动物，包括灵长类动物，特别是人类、马、牛、猪、羊、家禽、犬、猫、小鼠和大鼠。受试者可以是任何性别的，不过有些增殖性病症是性别特异性的(例如前列腺癌、卵巢癌)。

HhP抑制剂可以每日、隔日、一周三次、一周两次、每周或双周给予。给药时间表可包括“药物假日”，即药物可以给予两周、停一周，或给药三周、停一周，或给药四周、停一周，等等，或连续给药，没有药物假日。可以经口服、静脉内、腹膜内、局部、经皮、肌内、皮下、鼻内、舌下或通过任何其他途径给予HhP抑制剂。

单次或多次HhP抑制剂给药可根据治疗医生所选择的剂量水平和模式进行，可选地基于从受试者获得的样本中相对于参考标记水平(例如，参考PSA水平)所确定的生物标记水平(例如前列腺癌的PSA水平)。

在一些实施例中，在给予HhP抑制剂之前、给药期间或给药之后，HhP抑制剂与一种或多种其他治疗一起给予。HhP抑制剂和非HhP抑制剂的治疗剂可在相同制剂或不同制剂内给予。如果以不同制剂给予，HhP抑制剂和治疗剂可通过相同途径或通过不同途径给予。

视所希望的给药模式而定，本文中描述的方法中使用的抑制剂和治疗剂可为固体、半固体或液体剂量形式，例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉剂、液体、悬浮液、洗液、乳膏剂、凝胶剂等等，优选地以适用于精确剂量单一给药的单位剂量形式。各剂量可包括与药学上可接受的载剂组合的本文中描述的方法中使用的有效量的化合物，此外，可包括其他医学试剂、医药剂、载剂、佐剂、稀释剂等等。

可通过如将本文描述的方法中使用的化合物和可选医药佐剂溶解或分散于赋形剂中从而形成溶液或悬浮液来制备液体型药学上可给予的组合物，所述赋形剂如水、盐水、葡萄糖水、甘油、乙醇等。对于固体组合物，常规无毒固体载剂包括如医药级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。若需要，被给予的医药组合物也可含有少量无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等等，例如乙酸钠、单月桂酸山梨聚糖酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油酸盐等。制备这些药剂形式的实际方法是公知的，或对本领域技术人员是显而易见的(参见如，Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版(1990),Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，其全部公开内容在此以引证的方式并入本文中。

包含HhP抑制剂的制剂可装入单剂量或多剂量容器(包装)中，例如密封安瓿和小瓶，且可贮存在冷冻干燥(冻干)条件下，在使用前，只需要无菌液载体的条件，例如注射用水。可使用的包装类型的实例包括但不限于多剂量包装(也称为可重新盖紧的包装)，如瓶子、气溶胶包装和管子，以及单剂量包装(也称为不可重新盖紧的包装)，如安瓿、泡罩包装、预装注射器、小瓶、药囊以及各种包装形式的成形/吹入-填充-密封(FFS、BFS)。在一个实施例中，伊曲康唑以

制剂(例如SUBACAP^TM制剂)形式存在于泡罩包装中。即时用的(Extemporaneous)注射溶液和悬浮液可以由无菌粉剂、颗粒剂和片剂等等制备。应理解，除所述成分尤其是上述成分外，本发明的制剂可包括本领域关于所述制剂类型中常规的其他药剂。

视情况可使用医药或兽医职业中已知的标准技术来鉴别需要使用本发明的方法和组合物治疗的患者。在一些实施例中，待治疗的增殖性病症的特征在于Hh水平上调(升高)和/或HhP信号传递高于基本水平(或所述正常细胞类型的正常水平)的病症。如上所述，可选地，基于Hh水平或信号传递可选择需要治疗(或进一步治疗)增殖性病症诸如前列腺癌、基底细胞癌、肺癌或其他癌症的受试者作为尤其适用于用HhP抑制剂治疗的个体，所述Hh水平或信号传递可通过测量表示HhP信号本身或HhP信号的调节剂(诱导剂或抑制剂)的生物标记(HhP生物标记)直接或间接评估。

癌症是可使用本发明方法治疗和监测的增殖性病症的例子。本文中可互换使用的术语“癌症”和“恶性肿瘤”是指或描述通常以无规则细胞生长为特征的哺乳动物的生理病况。本发明的方法和组合物可用于早期、中期或晚期疾病，以及急性或慢性病。癌症可以是抗药的或药物敏感的。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。更特别地，这些癌症的例子包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠道癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、腹膜癌、肝癌、如肝细胞癌(hepaticcarcinoma)、膀胱癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌，和甲状腺癌。在一些实施例中，所述癌症是血液的恶性肿瘤(例如多发性骨髓瘤或白血病)。在一些实施例中，所述癌症是非血液的恶性肿瘤。

癌症的其他非限制例子是基底细胞癌、胆道癌；骨癌；脑和CNS癌；绒毛膜癌；结缔组织癌；食管癌；眼癌；头颈癌；胃癌；上皮内肿瘤；喉癌症；淋巴瘤，包括霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤；黑色素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(例如唇、舌、口和咽)；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；子宫癌；泌尿系统癌症，以及其他癌瘤和肉瘤。可能使用本发明方法和组合物治疗的癌症类型的例子还列在表1中。

表1、癌症类型的实例

在一些实施例中，使用本发明的方法治疗和/或监测的增殖性病症是前列腺癌。在一些实施例中，前列腺癌是前列腺癌前期。在一些实施例中，前列腺癌是转移性的。在一些实施例中，前列腺癌是非转移性的。在一些实施例中，前列腺癌是一种显示出HhP成员或配体表达升高的癌症(即，一种HhP相关的癌症)。在一些实施例中，所述前列腺癌是阉割抗性的。在一些实施例中，所述前列腺癌是非阉割抗性的。在一些实施例中，所述前列腺癌是转移性、阉割抗性前列腺癌。在一些实施例中，所述前列腺癌是非转移性、阉割抗性前列腺癌。

在一些实施例中，使用本发明的方法治疗和/或监测的增殖性病症是皮肤癌，如黑色素瘤，或非黑色素瘤，如基底细胞癌(BCC)。因此，在一些实施例中，使用本发明的方法治疗和/或监测的增殖性病症是BCC，这是一种非黑素细胞皮肤癌(即上皮细胞瘤)并且是最常见形式的皮肤癌。在一些实施例中，所述BCC是选自结节性BCC、囊性BCC、瘢痕性BCC、浸润性BCC、小结节性BCC、浅表性BCC、色素性BCC、雅各比溃疡(Jacobi ulcer)、平克斯(Pinkus)纤维上皮瘤、息肉样基底细胞癌、孔样BCC，或异常BCC。在一些实施例中，BCC是散发性BCC。在一些实施例中，BCC是遗传性BCC。在一些实施例中，受试者患有等于或大于4mm的BCC肿瘤。

在一些实施例中，增殖性病症是肺癌(I期、II期、IIIa期、IIIb期，或IV期)。在一些实施例中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)，如鳞状细胞癌、非鳞状细胞癌、大细胞癌，和腺癌。在一些实施例中，肺癌是小细胞肺癌(SCLC)。在一些实施例中，肺癌是非鳞状细胞肺癌。在一些实施例中，肺癌是间皮瘤(例如恶性胸膜间皮瘤)。在一些实施例中，肺癌是晚期转移性NSCLC。

可选地，在肺癌治疗之前和/或之后进行一种或多种测试，如骨扫描、胸部X光检查、全血细胞计数(CDC)、CT扫描、肝功能检查、磁共振成像(MRI)、正电子发射断层扫描(PET)、痰检和胸腔穿刺术。可选地，可在肺癌治疗之前和/或之后获得活检(例如，支气管镜下活检、CT-扫描引导针吸活检、食管内镜超声活检、纵隔镜活检、开胸肺活检、胸膜活检和视频辅助胸腔镜检查)。

在一些实施例中，待治疗的增殖性病症是前列腺癌，例如非转移性阉割抗性前列腺癌或其他前列腺癌。在一些实施例中，通过给予HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日100mg至600mg范围内的剂量来治疗前列腺癌。在一些实施例中，将200mg HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日两次或两次以上给予的方式来治疗前列腺癌。优选地，将HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式经口服给药。

在一些实施例中，受治疗的前列腺癌受试者已接受雄激素剥夺治疗、与HhP抑制剂治疗同时接受雄激素剥夺治疗，或两种方式均有。雄激素剥夺治疗的目标是减少身体内的雄激素水平或阻止雄激素进入前列腺癌细胞。可使用的雄激素剥夺疗法的治疗/药剂的例子包括但不限于睾丸切除术(外科手术阉割)、黄体生成素释放激素(LHRH)类似物(例如，亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、曲普瑞林(triptorelin)或组胺瑞林(histrelin))、黄体生成素释放激素(LHRH)拮抗剂(例如，地加瑞克(degarelix)和阿比特龙(abiraterone))、抗雄激素(氟他胺(flutamide)，比卡鲁胺(bicalutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和恩杂鲁胺(enzalutamide))，以及其他雄激素抑制药物(例如，酮康唑)。

在一些实施例中，待治疗的增殖性病症是基底细胞癌(BCC)。在一些实施例中，通过给予HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日100mg至600mg范围内的剂量来治疗BCC。在一些实施例中，将150mg HhP抑制剂，诸如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日两次或两次以上给予的方式来治疗BCC。优选地，将HhP抑制剂，诸如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式经口服给予。在一些实施例中，待治疗BCC的受试者患有等于或大于4mm的肿瘤。

在一些实施例中，待治疗的增殖性病症是肺癌，如晚期转移性非鳞状非小细胞肺癌或其他肺癌。在一些实施例中，通过给予HhP抑制剂，诸如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日100mg至600mg范围内的剂量来治疗肺癌。在一些实施例中，将200mg HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以每日两次或两次以上给予的方式来治疗肺癌。优选地，将HhP抑制剂，如伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以

制剂形式经口服给予。可选地，该方法还包括给予抗叶酸剂，如培美曲塞(pemetrexed)，有或无基于铂的药剂，如联合治疗方法中描述的顺铂。例如，但不限于，可静脉内给予300mg/m²-700mg/m²抗叶酸剂和25mg/m²-125mg/m²基于铂的药剂。在一些实施例中，静脉内给予500mg/m²培美曲塞和75mg/m²顺铂。

已表明HhP抑制剂(例如伊曲康唑)能够延缓或抑制肿瘤细胞生长。使用本发明的方法，所述HhP抑制剂可在肿瘤部位局部给药(例如通过直接注射)或从远离所述部位处给药(例如全身给药)。如本文中所用，术语“肿瘤”是指所有肿瘤性细胞生长和增殖，不论是恶性的还是良性的，以及所有癌前和癌的细胞和组织。例如，特定癌症可以实体团块肿瘤或非实体肿瘤为特征。若存在实体肿瘤团块，则可能是原发性肿瘤团块。原发性肿瘤团块是指由于组织中正常细胞的转化引起的组织中癌细胞的生长物。在大多数情况下，原发性肿瘤团块是通过囊肿的存在而鉴定，它可通过目视或触诊法，或通过该组织形状、质地或重量的不规则而发现。然而，一些原发性肿瘤是不可触及的，只能通过医学成像技术，如X射线(乳房造影术)或磁共振成像(MRI)，或通过针吸术进行检测。后面的这些技术在早期检测中更为常见。通常使用组织内癌细胞的分子和表型分析来确认癌症是否为组织内生性的，或病变是否归因于从另外部位的转移。

组合治疗

根据本发明的方法，HhP抑制剂可单独用于受试者，或与如HhP抑制剂或不同的药剂的一种或多种其他药剂联合给药。在一些实施例中，额外的药剂是一种或多种抗癌剂。抗癌剂包括但不限于表2列出的化学治疗剂。

联合给药可同时进行(在相同或单独的制剂中)或在给予一或多种HhP抑制剂之前和/或之后连续给予额外药剂。此外，可将HhP抑制剂给予受试者作为辅助治疗。例如，可将一种或多种HhP抑制剂连同一或多种化学治疗剂给予患者。

因此，HhP抑制剂无论是分别给药，或作为药物组合物给药，可包括各种其他组分作为添加剂。在相关环境中可使用的可接受的组分或助剂的例子包括抗氧化剂、自由基净化剂、肽、生长因子、抗生素、抑菌剂、免疫抑制剂、抗凝剂、缓冲剂、抗炎剂、抗血管生成、退热剂、缓释剂(time-release binder)、麻醉剂、类固醇以及皮质类固醇。这些组分可提供额外的治疗益处，能影响HhP抑制剂的治疗作用或可阻止由于给予这些药剂而引起的任何潜在的副作用。所述HhP抑制剂还可与治疗剂结合。

在一些实施例中，将在相同或不同制剂中的两种或两种以上HhP抑制剂同时或依次给予受试者。无论是以相似或不同的方式，HhP抑制剂可对HhP的相同成员起作用，或对所述途径的不同成员起作用。例如，可希望给予在途径中的不同点或通过不同机理抑制HhP途径的HhP抑制剂。例如，虽然伊曲康唑和维莫德吉都靶向Smo，但它们在结合和作用于受体的方式上不同，通过不同作用机理抑制HhP。维莫德吉用作Smo受体的环杷明竞争性拮抗剂，使转录因子Gli1和Gli2保持非活性，其抑制了肿瘤介导的基因在HhP内的表达。相比之下，伊曲康唑通过在与目前正在开发的环杷明仿制物不同的部位靶向Smo来抑制HhP的活化。Smo蛋白一般可通过它转运至初级纤毛和/或改变它的构型来激活。维莫德吉通过确保蛋白构型不变化而对Smo有效地起作用，而伊曲康唑通过阻止它转运来起作用。这些区别由这两种药物起增效剂作用的能力得以支持。因此，在一些实施例中，给予一种或多种额外的HhP抑制剂，且所述额外的HhP抑制剂在它抑制HhP的作用机理上不同于第一种HhP抑制剂(例如伊曲康唑，或伊曲康唑的药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物，以及维莫德吉，或维莫德吉的药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物)。

可在同一制剂中或作为单独制剂在如受试者活体外或活体内联合给予靶细胞的额外的药剂，包括那些修改给定生物响应的药剂，如免疫调节剂。额外的药剂可以是例如小分子、多肽(蛋白、肽或抗体或抗体片段)或核酸(编码多肽或抑制核酸，如反义寡核苷酸或干扰RNA)。例如，可给予蛋白，如肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(如α-干扰素和β-干扰素)、神经生长因子(NGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)以及组织纤溶酶原激活物。可给予生物响应修饰物，如淋巴因子、白介素(如白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)和白介素-6(IL-6))、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，或其他生长因子。在一个实施例中，本发明的方法和组合物包含一种或多种抗癌剂，如细胞毒性剂、化学治疗剂、抗信号传递剂，和抗血管生成剂。

本文中使用的术语“抗癌剂”是指抑制癌细胞功能、抑制它们形成和/或引起它们在活体外或活体内破坏的物质或治疗(例如放射治疗)。实例包括但不限于细胞毒性剂(例如5-氟尿嘧啶，紫杉醇(TAXOL))、化学治疗剂和抗信号传递药剂(例如PI3K抑制剂LY)。在一个实施例中，在给予HhP抑制剂之前、给药期间或给药之后给予的抗癌剂是一种不同的HhP抑制剂。抗癌剂包括但不限于表2列出的化学治疗剂。

本文中使用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致活体外和/或活体内细胞破坏的物质。术语旨在包括放射性同位素(例如At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²和Lu的放射性同位素)，化学治疗剂，毒素，如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，和抗体，包括其片段和/或变体。

本文中使用的术语“化学治疗剂”是一种对治疗癌症有用的化合物，例如紫杉烷类(taxanes)，如紫杉醇(TAXOL,BRISTOL-MYERS SQUIBB Oncology,Princeton,N.J.)和紫杉萜(doxetaxel)(TAXOTERE,Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)、苯丁酸氮芥、长春新碱、长春花碱；抗雌激素剂，包括他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、考昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那斯酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(FARESTON,GTx,Memphis,TN)；以及抗雄激素剂，如氟他胺(flutamide)、尼鲁他胺(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林和戈舍瑞林，等等。可连同HhP抑制剂一起使用的化学治疗剂的实例列于表2中。在一些实施例中，化学治疗剂是一或多种蒽环霉素(anthracycline)。蒽环霉素是一类同时还是抗生素的化学治疗药物。蒽环霉素能通过以下方式通过破坏DNA的结构并终止其功能来阻止细胞分裂：(1)插入到DNA小沟槽中的碱基对中；以及(2)引起DNA中的核糖自由基损伤。蒽环霉素经常被用于白血病治疗中。蒽环霉素的例子包括柔红霉素(daunorubicin)(司比定(CERUBIDINE))、多柔比星(doxorubicin)(阿霉素(ADRIAMYCIN)，RUBEX)、表柔比星(epirubicin)(ELLENCE，PHARMORUBICIN)，以及伊达比星(idarubicin)(依达霉素(IDAMYCIN))。

表2、化学治疗剂的例子

在一些实施例中，将抗叶酸剂(例如基于嘧啶的抗叶酸剂)，如培美曲塞，在给予HhP抑制剂之前、给药期间或给药之后给予受试者。培美曲塞是一种合成的基于嘧啶的抗叶酸剂。培美曲塞也被称为LY231514和(2S)-2-{[4-[2-(2-氨基-4-氧-1,7-二氢吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰]氨基}戊二酸，商品名为N-[4-2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰]-1-谷氨酸二钠盐(CAS号：150399-23-8)。培美曲塞结合并抑制胸苷酸合成酶(TS)，其催化2'-脱氧尿苷-5'-单磷酸盐(dUMP)甲基化成为2'-脱氧胸苷-5'-单磷酸盐(dTMP)，一种DNA合成中的基本前驱物。

在一些实施例中，在给予HhP抑制剂之前、给药期间或给药之后将基于铂的药剂(铂的配位络合物)给予受试者。作为一类，基于铂的药剂被认为是通过引起DNA交联成单加成物、链间交联、链内交联，或DNA蛋白交联起作用，从而抑制DNA修复。在一些实施例中，基于铂的药剂是卡铂(cisplatin)、顺铂或奥沙利铂(oxaliplatin)、赛特铂(satraplatin)、吡铂(picoplatin)、奈达铂(nedaplatin)和三铂(triplatin)。

肺癌治疗方案中加入HhP抑制剂，包括抗叶酸剂，如培美曲塞，可显著地增加受试者的存活时间(参见Rudin等，"Phase 2 Study of Pemetrexed and Itraconazole asSecond-Line Therapy for Metastatic Nonsquamous Non-Small-Cell Lung Cancer,"J.Thorac.Oncol.,2013,8(5):619-623，所述文献全文以引证的方式并入本文中)。在本发明方法的一些实施例中，待治疗的增殖性病症是非鳞状NSCLC，且每日两次或两次以上经口服给予受试者伊曲康唑的

制剂(例如每日100mg至600mg的

制剂)或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物。可选地，在有或没有基于铂的药剂，如顺铂的情况下，还通过任何适当途径给予受试者抗叶酸剂，如培美曲塞。例如，但不限于，可静脉内给予300mg/m²-700mg/m²抗叶酸剂和25mg/m²-125mg/m²基于铂的药剂。在一些实施例中，静脉内给予500mg/m²培美曲塞和75mg/m²顺铂。

除非另有陈述，本发明的实践是采用分子生物学、微生物学、重组DNA技术、电生理学和药物学的常规技术，它们都已为本领域技术人员所掌握。这些技术在如下文献中充分解释(参见如Sambrook,Fritsch&Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二版(1989)；DNA Cloning,第I和第II卷(D.N.Glover编，1985)；Perbal,B.,A PracticalGuide to Molecular Cloning(1984)；该系列Methods In Enzymology(S.Colowick和N.Kaplan Eds.,Academic Press,Inc.)；Transcription and Translation(Hames等编，1984)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller等编，(1987)ColdSpring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,纽约州)；Scopes,ProteinPurification:Principles and Practice(第2版，Springer-Verlag)；以及PCR:APractical Approach(McPherson等编，(1991)IRL Press))，每篇文献的内容整体以引证的方式并入本文中。

实验对照被认为是根据科学方法设计的实验中的基础。在科学实验中使用实验对照以防止除正研究的因素以外的其他因素影响结果，这是此项技术中的常规程序。

本文中提到或引用的所有专利、专利申请、临时申请和公开文献，不论在上文还是下文中，包括所有图和表，在与本说明书明确教导的内容保持一致的程度上，均全文以引证的方式并入本文。

具体实施方式

实施例1.一种用于治疗受试者的增殖性病症的方法，包括向所述受试者给予包含Hedgehog途径(HhP)抑制剂的组合物，其中以使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000ng/mL的有效量给予所述组合物。

实施例2.根据实施例1的方法，其中所述HhP抑制剂包含伊曲康唑，或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物。

实施例3.根据实施例2的方法，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂；且其中以每日100mg至600mg伊曲康唑范围内的剂量口服给予所述

制剂。

实施例4.根据实施例2的方法，其中所述HhP抑制剂治疗包括每天两次给予50mg伊曲康唑，或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体，或活性代谢物的胶囊或粉剂。

实施例5.根据实施例3的方法，其中所述

制剂是Suba-CAP制剂。

实施例6.根据任何前述实施例的方法，其中以使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少1,000ng/mL的有效量给予所述组合物。

实施例7.根据任何前述实施例的方法，其中以使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平在用所述HhP抑制剂治疗开始约4周之后达到至少约1,000ng/mL的有效量给予所述组合物。

实施例8.根据任何前述实施例的方法，其中以使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平在治疗开始之后约2周内达到至少约1,000ng/mL并且在整个治疗期间使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平维持在至少约1,000ng/mL的有效量给予所述组合物。

实施例9.根据任何前述实施例的方法，还包括一或多次测量受试者的HhP抑制剂或其代谢物的血浆水平。

实施例10.根据实施例9的方法，其中所述测量是在用所述HhP抑制剂治疗开始之后约4周进行一或多次。

实施例11.根据任何前述实施例的方法，还包括在约4周至约12周的一段时间内一次或多次测量所述HhP抑制剂或其代谢物的血浆水平。

实施例12.根据实施例11的方法，还包括如果HhP抑制剂的血浆波谷水平没有维持在至少约1,000ng/mL，则增加HhP抑制剂的后续剂量。

实施例13.根据实施例11的方法，还包括如果在大约4周时血浆波谷水平为至少1,000ng/mL且患者经受一种或多种副作用，则减少HhP抑制剂的后续剂量。

实施例14.根据任何前述实施例的方法，其中每日至少一次给予所述HhP抑制剂。

实施例15.根据任何前述实施例的方法，其中每日至少两次给予所述HhP抑制剂。

实施例16.根据任何前述实施例的方法，其中所述增殖性病症是癌症。

实施例17.根据实施例16的方法，其中所述癌症是肺癌。

实施例18.根据实施例16的方法，其中所述癌症是基底细胞癌(BCC)。

实施例19.根据实施例16的方法，其中所述癌症是前列腺癌。

实施例20.根据实施例16的方法，其中所述癌症是前列腺癌，且所述方法还包括比较给予HhP抑制剂后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平，且其中样本中的PSA水平与PSA的参考水平相比用来预测用HhP抑制剂治疗的结果。

实施例21.根据实施例20的方法，其中相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％指示有功效，且PSA水平增加约25％或25％以上指示缺乏功效。

实施例22.根据实施例20或21的方法，其中在HhP抑制剂治疗开始之后4到12周内从受试者获得样本。

实施例23.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括在所述给药之后从受试者获得样本。

实施例24.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效，则维持HhP抑制剂治疗。

实施例25.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则停止用HhP抑制剂治疗。

实施例26.根据实施例25的方法，还包括对前列腺癌给予除HhP抑制剂以外的治疗。

实施例27.根据实施例25的方法，其中所述治疗包括一或多种来自放射治疗、激素治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、冷冻手术、高强度聚焦超声以及质子束放射治疗的治疗。

实施例28.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则增加HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。

实施例29.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效但受试者经受一种或多种副作用，则减少HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药量频率。

实施例30.根据实施例20或21的方法，其中所述PSA水平是总PSA水平(游离(非结合的)PSA和结合的PSA)。

实施例31.根据实施例20或21的方法，其中所述PSA水平是PSA倍增时间。

实施例32.根据实施例20或21的方法，其中测量PSA蛋白水平。

实施例33.根据实施例32的方法，其中通过以下方式来测量PSA蛋白水平：放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、多肽微阵列、表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳，或平板凝胶电泳。

实施例34.根据实施例20或21的方法，其中测量PSA的DNA或mRNA水平。

实施例35.根据实施例34的方法，其中通过以下方式测量PSA的mRNA水平：Northern印迹、Southern印迹、核酸微阵列、聚合酶链反应(PCR)、实时PCR(RT-PCR)、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)，或转录介导的扩增(TMA)。

实施例36.根据实施例20或21的方法，其中测量PSA活性水平。

实施例37.根据实施例20或21的方法，其中所述样本是血清样本。

实施例38.根据实施例20至37中任一项的方法，其中所述方法还包括从受试者获得样本。

实施例39.根据任何前述实施例的方法，还包括监测受试者的增殖性病症，其中增殖性病症对治疗缺乏临床响应指示HhP抑制剂的血浆波谷水平应进一步增加超过约1,000ng/mL，且其中临床响应的发生和HhP抑制剂的血浆波谷水平实质上高于约1,000ng/mL指示可将HhP抑制剂的一个或多个后续剂量减少。

实施例40.根据任何前述实施例的方法，还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后增殖性病症对治疗缺乏临床响应，指示需要增加HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。

实施例41.根据任何前述实施例的方法，还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后出现增殖性病症对治疗的临床响应，指示需要减少HhP抑制剂的剂量和/或给药频率。

实施例42.根据实施例39-41中任一项的方法，其中所述监测包括对从受试者获得的样本目测检查、触诊、成像、测定与增殖性病症相关的一种或多种生物标记的存在、水平或活性，或两种或两种以上上述方式的组合。

实施例43.根据实施例42的方法，其中所述一种或多种生物标记包括Gli1、Gli2、Gli3或上述两种或两种以上的组合。

实施例44.根据实施例39-43中任一项的方法，其中所述监测包括监测以下参数的至少一个：肿瘤大小、肿瘤大小的变化率、Hedgehog水平或信号传递、新肿瘤的出现、新肿瘤的出现率、增殖性病症的症状变化、与增殖性病症相关的新症状的出现、生活品质(例如与增殖性病症相关的疼痛程度)，或两种或两种以上上述参数的组合。

实施例45.根据实施例20或21的方法，其中所述方法还包括监测受试者的PSA水平，包括比较多个样本的PSA水平与PSA参考水平，其中所述样本是在HhP抑制剂治疗之后随时间从受试者获得的。

实施例46.根据任何前述实施例的方法，还包括向受试者给予依普利酮或其他盐皮质激素抑制剂，或培美曲塞(pemetrexed)或其他抗叶酸剂，或顺铂或其他基于铂的化学治疗剂，或两种或两种以上上述药剂的组合。

实施例47.根据实施例46的方法，其中所述受试者遭受选自高血压、外周水肿和低钾血症的副作用，且其中给予治疗所述副作用有效量的盐皮质激素抑制剂。

实施例48.根据任何前述实施例的方法，其中相对于伊曲康唑，HhP抑制剂是伊曲康唑的纯化立体异构体(非外消旋混合物)，或伊曲康唑类似物，其中第二丁基侧链已被一个或多个部分替换。

实施例49.根据任何前述实施例的方法，其中受试者患有真菌感染。

实施例50.根据实施例1至48中任一项的方法，其中受试者未患有真菌感染(fungal invention)。

实施例51.根据实施例1至49中任一项的方法，其中受试者患有选自芽生菌病、组织胞浆菌病、念珠菌病和曲霉菌的真菌感染。

实施例52.根据实施例1至48中任一项的方法，其中受试者未患有选自芽生菌病、组织胞浆菌病、念珠菌病和曲霉菌病的真菌感染。

实施例53.根据任何前述实施例的方法，其中受试者先前并未接受过为治疗增殖性病症而进行的化学治疗。

实施例54.根据任何前述实施例的方法，其中在治疗持续期间不给予受试者类固醇。

实施例55.根据任何前述实施例的方法，其中在治疗持续期间不给予受试者与CYP3A4有相互作用的药剂。

实施例56.根据任何前述实施例的方法，其中用HhP抑制剂治疗的持续时间在约4周至约24周范围内。

实施例57.根据任何前述实施例的方法，其中所述HhP抑制剂靶向HhP途径的Smoothened蛋白。

实施例58.根据任何前述实施例的方法，其中所述HhP抑制剂是环杷明竞争性的。

实施例59.根据任何前述实施例的方法，其中所述HhP抑制剂是环杷明竞争性的且所述增殖性病症包括前列腺癌。

实施例60.根据实施例59的方法，其中所述增殖性病症是前列腺癌，且所述方法还包括比较给予HhP抑制剂后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平，且其中样本中的PSA水平与PSA的参考水平相比用来预测用HhP抑制剂治疗的结果。

实施例61.根据实施例60的方法，其中相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％指示有功效，且PSA水平增加约25％或25％以上指示缺乏功效。

实施例62.一种预测用Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗受试者的前列腺癌的治疗结果的方法，包括比较HhP抑制剂治疗后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)的水平与PSA的参考水平，其中样本中的PSA水平与PSA的参考水平相比用来预测用HhP抑制剂治疗的结果。

实施例63.根据实施例62的方法，其中所述参考水平是在HhP抑制剂治疗开始时受试者体内的PSA水平。

实施例64.一种确定Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗人类受试者的前列腺癌的功效的方法，包括测量HhP抑制剂治疗开始之后从受试者获得的样本中前列腺特异性抗原(PSA)水平，其中测量的PSA水平与HhP抑制剂治疗开始时第一参考PSA水平相比来指示功效，且其中测量的PSA水平与第二参考PSA水平相比来指示缺乏功效。

实施例65.根据实施例62至64中任一项的方法，其中相对于HhP抑制剂治疗开始时的PSA水平，PSA水平增加小于约25％指示有功效，且PSA水平增加约25％或25％以上指示缺乏功效。

实施例66.根据实施例62至64中任一项的方法，其中以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000ng/mL的有效量口服给予HhP抑制剂。

实施例67.根据实施例62至64中任一项的方法，其中以使HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少1,000ng/mL的有效量口服给予HhP抑制剂。

实施例68.根据实施例62至64中任一项的方法，其中HhP抑制剂治疗包括以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予HhP抑制剂。

实施例69.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述HhP抑制剂靶向HhP途径的Smoothened蛋白。

实施例70.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述HhP抑制剂是环杷明竞争性的。

实施例71.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述HhP抑制剂包含伊曲康唑，或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物。

实施例72.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述HhP抑制剂包括伊曲康唑的

制剂(例如SUBACAP^TM制剂)。

实施例73.根据实施例62至64中任一项的方法，其中HhP抑制剂包括伊曲康唑的

制剂，且其中HhP抑制剂治疗包括以每日100mg至600mg范围内的剂量给予

制剂或伊曲康唑。

实施例74.根据实施例71-73中任一项的方法，其中HhP抑制剂治疗包括每天两次给予50mg的HhP抑制剂的胶囊或粉剂。

实施例75.根据任何前述实施例的方法，其中所述HhP抑制剂治疗包括经静脉内或局部地(例如，通过直接注射)在前列腺癌病变或肿瘤部位处给予HhP抑制剂。

实施例76.根据实施例62至64中任一项的方法，其中在HhP抑制剂治疗开始之后4到12周内从受试者获得样本。

实施例77.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括将HhP抑制剂给予受试者，以及在所述给予之后从受试者获得样本。

实施例78.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效，则维持HhP抑制剂治疗。

实施例79.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则停止HhP抑制剂治疗。

实施例80.根据实施例79的方法，还包括对前列腺癌给予除HhP抑制剂以外的治疗。

实施例81.根据实施例80的方法，其中所述治疗包括一种或多种来自放射治疗、激素治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、冷冻手术、高强度聚焦超声以及质子束放射治疗的治疗。

实施例82.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示缺乏功效，则增加HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。

实施例83.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括如果测量的PSA水平指示有功效但受试者经受一种或多种副作用，则减少HhP抑制剂的剂量和/或HhP抑制剂的给药频率。

实施例84.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述PSA水平是总PSA水平(游离(非结合的)PSA和结合的PSA)。

实施例85.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述PSA水平是PSA倍增时间。

实施例86.根据实施例62至64中任一项的方法，其中测量PSA蛋白水平。

实施例87.根据实施例86的方法，其中通过以下方式来测量PSA蛋白水平：放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定(IRMA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、斑点印迹、狭缝印迹、酶联免疫吸附剂斑点(ELISPOT)测定、Western印迹、多肽微阵列、表面等离子体共振、荧光共振能量传递、生物发光共振能量传递、荧光猝灭荧光、荧光偏振、质谱分析法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法/质谱分析法(HPLC/MS)、高效液相色谱法/质谱分析法/质谱分析法(HPLC/MS/MS)、毛细管电泳、棒状凝胶电泳，或平板凝胶电泳。

实施例88.根据实施例62至64中任一项的方法，其中测量PSA的DNA或mRNA水平。

实施例89.根据实施例88的方法，其中通过以下方式测量PSA的mRNA水平：Northern印迹、Southern印迹、核酸微阵列、聚合酶链反应(PCR)、实时PCR(RT-PCR)、基于核酸序列的扩增测定(NASBA)，或转录介导的扩增(TMA)。

实施例90.根据实施例62至64中任一项的方法，其中测量PSA活性水平。

实施例91.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述样本是血清样本。

实施例92.根据实施例62至64中任一项的方法，其中所述方法还包括从受试者获得样本。

实施例93.根据实施例62的方法，其中所述方法包括监测受试者的PSA水平，包括比较多个样本的PSA水平与PSA参考水平，其中所述样本是在HhP抑制剂治疗之后随时间从受试者获得的。

实施例94.根据实施例64的方法，其中所述方法包括监测受试者的PSA水平，包括测量在HhP抑制剂治疗之后随时间从受试者获得的多个样本的PSA水平。

实施例95.一种用于治疗受试者的前列腺癌的方法，包括向受试者给予Hedgehog途径(HhP)抑制剂治疗；以及进行实施例62至94中任一项的方法。

实施例96.一种确定适用于给予受试者用于治疗前列腺癌的HhP抑制剂的剂量的方法，包括测量从受试者获得的样本的PSA水平；以及基于所测量的PSA水平与PSA参考水平的比较来确定HhP抑制剂的有效剂量。

实施例97.根据实施例95或96的方法，其中所述HhP抑制剂是环杷明竞争性的。

实施例98.根据任何前述实施例的方法，其中所述增殖性病症是前列腺癌，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂，且其中以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予所述

制剂。

实施例99.根据实施例18的方法，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂，且其中以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予所述

制剂。

实施例100.根据实施例17的方法，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂，其中以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予所述

制剂，且其中所述方法还包括向受试者给予抗叶酸剂和基于铂的化学治疗剂。

实施例101.根据实施例1的方法，还包括监测受试者的增殖性病症，其中在所述给药约4周之后增殖性病症对治疗缺乏临床响应，指示需要增加HhP抑制剂的剂量，或增加HhP抑制剂的给药频率，或给予额外的HhP抑制剂，该额外的HhP抑制剂通过与先前给予的HhP抑制剂不同的机理抑制HhP，或两种或两种以上上述方式的组合。

实施例102.根据实施例1、62、64、95或96的方法，其中所述HhP抑制剂是环杷明竞争性的。

实施例103.根据实施例1、62、64、95或96的方法，其中所述HhP抑制剂是非环杷明竞争性的。

实施例104.根据实施例1的方法，还包括在所述给药之前选择用于治疗的受试者，其中所述选择包括：

测量从受试者获得的样本的生物标记，其中所述生物标记直接或间接代表HhP信号传递，以及

比较测量的生物标记水平与参考水平以确定HhP信号传递有或没有升高，其中HhP信号传递升高表明受试者应予治疗。

实施例105.根据实施例104的方法，其中所述生物标记是HhP配体或神经胶质瘤相关的致癌基因同源体(Gli)转录因子(例如音刺猬因子(Sonic hedgehog(SHH))、沙漠刺猬因子(desert hedgehog(DHH))、印度刺猬因子(Indian hedgehog(DHH))、Gli1、Gli2、Gli3或上述两种或两种以上的组合)。

实施例106.根据实施例1的方法，还包括监测受试者的增殖性病症，其中所述监测包括：

测量所述给药后从受试者获得的样本的生物标记，其中所述生物标记直接或间接代表HhP信号传递，以及

比较测量的生物标记水平与参考水平来确定HhP信号传递在所述比较之后是否增加、减少或不变，其中HhP信号传递增加或不变表明需要更改治疗，所述更改通过增加HhP抑制剂的剂量，或增加HhP抑制剂的给药频率，或在目前给予的HhP抑制剂给药之前、给药期间或给药之后给予额外的HhP抑制剂，或两种或两种以上上述方式的组合来进行；且其中HhP信号传递减少表明HhP抑制剂剂量、HhP抑制剂给药频率以及目前选择给予的HhP抑制剂都令人满意，并且可以继续进行。

实施例107.根据实施例106的方法，其中所述额外的HhP抑制剂和目前给予的HhP抑制剂通过不同的作用机理抑制HhP。

实施例108.根据实施例107的方法，其中所述生物标记是HhP配体或神经胶质瘤相关的致癌基因同源体(Gli)转录因子(例如音刺猬因子(Sonic hedgehog(SHH))、沙漠刺猬因子(desert hedgehog(DHH))、印度刺猬因子(Indian hedgehog(DHH))、Gli1、Gli2、Gli3或上述两种或两种以上的组合)。

实施例109.根据实施例1的方法，其中所述增殖性病症是基底细胞癌，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂，且其中以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予所述

制剂。

实施例110.根据实施例1的方法，其中所述增殖性病症是肺癌，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的

制剂，其中以每日100mg至600mg范围内的剂量口服给予所述

制剂，且其中所述方法还包括向受试者给予抗叶酸剂和基于铂的化学治疗剂。

定义

为了使本公开内容更容易理解，首先定义某些术语。额外的定义在整个详细描述中阐述。

本文中使用的术语“血浆波谷水平”是指血浆中的药剂(例如HhP抑制剂)在下一剂量之前的瞬时浓度，或所述药剂在两个剂量之间的最低浓度。

本文中使用的术语“增殖性病症(proliferation disorder)”、“细胞增殖性病症(proliferative disorder)”、“增殖性病症”、“细胞增殖性病症”、“以不良细胞增殖为特征的病况”，以及其语法上的变化是指任何病理性或非病理性生理病况，其以至少一个细胞的异常的或不良的增殖为特征，包括但不限于以不良的或不需要的或异常的细胞增殖为特征的病况、以不良的或不需要的或异常的细胞存活率为特征的病况，以及以有缺陷的或异常的细胞凋亡为特征的病况。术语“细胞增殖”以及其语法上的变化理解为包括由于细胞分裂造成的细胞数目增加，以及由于细胞生长(例如通过有丝分裂后子代细胞的生长)造成的细胞总质量增加。增殖性病症的例子是癌症，例如，不良的或不需要的或异常的增殖和癌细胞的存活，如与以下疾病相关的细胞：前列腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤、肉瘤、白血病，或在本文中别处公开的其他肿瘤性病症，以及本领域技术人员已知的病症。增殖性病症包括癌前或恶化前的病况(例如在侵入式癌症之前在形态上可识别的病变)上皮内瘤样病变(例如前列腺IEN和子宫颈IEN)、非典型腺瘤样增生、结肠直肠息肉、基底细胞痣综合征、光化性角化病、巴雷特食管(Barrett's esophagus)、萎缩性胃炎，以及子宫颈非典型增生。非癌增殖性病症的例子包括平滑肌细胞增殖、系统性硬化、肝硬化、成人呼吸窘迫综合征、特发性心肌病、红斑狼疮、视网膜病(例如糖尿病性视网膜病或其他视网膜病)、心脏增生、生殖系统相关的病症，如良性前列腺肥大和卵巢囊肿、肺纤维化、子宫内膜异位、纤维瘤病、错构瘤(harmatomas)、淋巴管瘤病(lymphangiomatosis)、结节病和硬纤维瘤。非癌增殖性病症还包括皮肤中的细胞过度增殖，如牛皮癣，和它的变化临床形式、莱特尔氏综合征、毛发红糠疹、角质化病症的过度增殖变体(例如光化性角化病、老年角化病)、硬皮病、皮脂溢角化病、表皮内痣、常见疣、良性上皮组织肿瘤，等等。

本文中可互换使用的术语“癌症”和“恶性肿瘤”是指或描述通常以无规则细胞生长为特征的哺乳动物的生理病况。所述术语包括发育异常、原位癌(CIS)以及癌。所述癌症可以是转移性的或非转移性的。

本文中使用的术语“前列腺癌”是指前列腺的癌症或癌前期，包括腺癌和小细胞癌。所述术语包括前列腺上皮内瘤样病变(PIN)和前列腺原位癌。通常，前列腺癌是一种显示出Hedgehog途径成员或配体表达升高的癌症(即，一种Hedgehog途径相关的癌症)。前列腺癌可以是转移性的或非转移性的。前列腺癌可以是阉割抗性的或非阉割抗性的。在一些实施例中，所述前列腺癌是转移性、阉割抗性前列腺癌。在一些实施例中，所述前列腺癌是非转移性、阉割抗性前列腺癌。

本文中使用的术语“Gli”是指Gli1、Gli2或Gli3蛋白中的任一种，或两种或两种以上上述蛋白的组合，“gli”是指编码Gli蛋白的核酸，且gli1、gli2和gli3是编码Gli1、Gli2和Gli3蛋白的基因。

本文中使用的冠词“一(a)”是指一种或超过一种(例如至少一种)所述冠词的语法宾语。例如，“一种HhP抑制剂(an HhP inhibitor)”包括一个或多个HhP抑制剂，“一种样本(a sample)”包括一个或多个样本，等等。

本文中所用的术语“或(or)”意思为术语“和/或(and/or)”,并可与其互换使用，除非上下文中另外明确指出。

本文中使用的术语“约(about)”和“大约(approximately)”一般意指考虑到测量的性质和精度而定的测量数量的可接受的误差程度。例示性误差程度在给定值或值的范围的20个百分比(％)以内，通常10％以内，且更通常在5％以内。

本文中使用的术语“患者(patient)”、“受试者(subject)”和“个体(individual)”可互换使用且用来包括人类男性和非人类动物种类的雄性。例如，受试者可以是人类或动物模型。

除非另有说明，本文中使用的术语“治疗(treat、treating、treatment)”是指当受试者患癌(作为治疗)或受试者患癌之前(作为预防)所采取的行动，所述行动降低所述癌症的严重程度、延缓或减慢所述癌症的进展或预防所述癌症。因此用HhP抑制剂治疗可预防或控制癌症。

除非另有说明，本文中使用的术语“预防(prevent、preventing、prevention)”是指在受试者开始罹患癌症再生之前所采取的行动，和/或抑制或降低所述癌症严重程度或延缓它的发病所采取的行动。

除非另有说明，本文中使用的术语“控制(manage、managing、management)”包括预防已罹患癌症的受试者的癌症复发，和/或延长罹患仍在缓解的癌症的受试者的时间。所述术语包括调节癌症的阈值(threshold)、发展和/或持续时间，或改变患者对癌症的响应方式。

除非另有说明，本文中使用的化合物(例如HhP抑制剂)的“治疗有效量(theraputically effective amount)”是对治疗或控制增殖性病症(例如癌症)足以提供治疗益处的量，或延缓或最小化与该增殖性病症相关的一种或多种症状。化合物的治疗有效量意指单独或与其他治疗剂共用在治疗或控制增殖性病症时提供治疗益处的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可包括改善整个治疗、降低或避免增殖病症的症状或原因，或增强另一治疗剂的治疗功效的量。

除非另有说明，本文中使用的化合物(例如HhP抑制剂)的“预防有效量(prophylactically effective amount)”是足以预防增殖性病症(例如癌症)再生或与该增殖性病症相关的一种或多种症状再现或预防它复发的量。化合物的预防有效量意指单独或与其他治疗剂共用在预防增殖性病症时提供预防益处的化合物的量。术语“预防有效量”可包括改善整个预防或增强另一预防剂的预防功效的量。

如本文中所用的术语“功效(efficacy)”在HhP抑制治疗背景下是指具有以下治疗能力(如单药治疗或在与另一种HhP抑制剂或其他不是HhP抑制剂的药剂联合治疗)：减轻增殖性病症(例如癌症)的一种或多种症状、减小疾病范围、稳定(即不恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进程、改善或缓和疾病状态、缓和(不论部分还是完全)、不论可检测的还是不可检测的肿瘤退化、抑制肿瘤生长、抑制瘤转移、减少癌细胞数目、抑制癌细胞浸润进入周围器官、增加无进展存活率、改善无进展存活、改善疾病进展的时间(TTP)、改善响应率(RR)、延长总体存活率(OS)、延长下一次治疗的时间(TNTT)，或延长从第一次进展到下一次治疗的时间、或上述两种或两种以上组合。

如本文中所用的术语“抗癌剂(anticancer agent)”、“常规抗癌剂(conventionalanticancer agent)”或“癌症治疗药物(cancer therapeutic drug)”是指在治疗癌症(例如在哺乳动物中)时所使用的任何治疗剂(例如，化学治疗的化合物和/或分子治疗的化合物)、放射治疗，或外科手术。HhP抑制剂可与诸如抗癌剂的治疗剂一起给予。

如本文中所用的术语“药物(drug)”和“化学治疗剂(chemotherapeutic agent)”是指药理学上活性分子，其用于诊断、治疗或预防生理系统(例如受试者，或活体内、活体外，或体外细胞、组织，和器官)中的疾病或病理学病况。药物通过改变活的有机体、组织、细胞或已给予药物的活体外系统的生理机能来起作用。这意味着术语“药物”和“化学治疗剂”包括抗过度增殖和抗肿瘤化合物以及其他生物治疗化合物。

如本文中所用的术语“溶剂化物(solvate)”是指具有与化合物缔合的化学计量或非化学计量的量的溶剂的HhP抑制剂。所述溶剂可以是水(即水合物)，并且抑制剂的每个分子均可与一个或多个水分子缔合(例如一水合物、二水合物、三水合物等)。所述溶剂还可以是醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等)、二醇(例如丙二醇)、醚(例如二乙醚)、酯(例如乙酸乙酯)，或任何其他适合的溶剂。Hedgehog抑制剂还可作为混合溶剂化物(即与两种或两种以上不同溶剂缔合)存在。

Claims (9)

1. 一种用于治疗受试者的增殖性病症的组合物，所述组合物包含Hedgehog途径（HhP）抑制剂，其中以使所述HhP抑制剂的血浆波谷水平达到至少约1,000 ng/mL的有效量给予所述组合物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述HhP抑制剂包括伊曲康唑，或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物。

3. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物包含伊曲康唑或其药学上可接受的盐、前药、立体异构体或活性代谢物的SUBA®制剂；且其中以每日100 mg至600 mg伊曲康唑范围内的剂量口服给予所述SUBA®制剂。

4. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述HhP抑制剂治疗包括每天两次给予50 mg伊曲康唑或医药学上可接受的盐、前药、立体异构体，或活性代谢物的胶囊或粉剂。

5.根据权利要求3所述的组合物，其中所述SUBA®制剂是Suba-CAP制剂。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述增殖性病症是癌症。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述癌症是肺癌。

8.根据权利要求6所述的组合物，其中所述癌症是基底细胞癌。

9.根据权利要求6所述的组合物，其中所述癌症是前列腺癌。

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