CN112034156A - 包虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在包虫病鉴别诊断中的应用 - Google Patents
包虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在包虫病鉴别诊断中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了重组蛋白在棘球绦虫包虫病鉴别诊断中的应用。本发明所要保护的一个技术方案是重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断抗原中的应用。所述重组蛋白为重组蛋白rEmSPNxj或重组蛋白rEgSPNxj，所述重组蛋白rEmSPNxj的氨基酸序列是序列表中序列4的蛋白质或氨基酸序列是序列4的第8‑342位的蛋白质。实验证明使用制备的重组蛋白rEmSPNxj作为包虫病抗原对泡型包虫病患者的诊断敏感性为92.5％,分别比常用诊断包虫病的抗原EM18和NAgB的敏感性高出4％和13.5％；诊断的特异性为100％。重组蛋白rEmSPNxj可应用于制备泡型包虫病的诊断抗原。
Description
技术领域
本发明涉及医学生物技术领域，具体涉及包虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在包虫病鉴别诊断中的应用。
背景技术
包虫病(Echinococcosis)是由棘球绦虫幼虫寄生于人及某些动物体内所致的一种严重的人畜共患寄生虫疾病。95％以上的包虫病例为细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus,E.g)感染所致的囊型包虫病(Cystic Echinococcosis,CE)，另外一种危害很严重的是由多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，E.m)感染所致泡型包虫病(Alveolar Echinococcosis，AE)是其幼虫寄生于人体所致的一种致死性寄生虫病，呈世界性分布。AE危害严重，几乎原发于肝脏，有“虫癌”之称，未经治疗的AE病人10年病死率高达95％。
丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor，Serpin)是蛋白酶抑制剂超家族中的一类蛋白酶，是一类分子质量在40～50kD的蛋白酶抑制剂，它广泛存在于多细胞动物和植物界中。在植物、动物、病毒和微生物中已经发现了几百种Serpin，所有的Serpin都一个共同的保守结构—螺旋状反应位点(RSL)，目标蛋白酶通过裂解RSL内部P1和P1′残基的肽键，使RSL裂解。Serpin参与到许多基本的生理学反应中，如血液凝固、(血)纤维蛋白溶解作用、炎症、信号级联放大、免疫应答、肿瘤抑制和荷尔蒙的传导。多房棘球绦虫(E.m)中分离到Serpin基因是扁形动物门中第一个发现的丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族，其氨基酸序列没有N末端的糖基化位点。目前针对于棘球绦虫分泌Serpin的研究还相对较少,尤其在对两型包虫病的诊断方面没有研究。
发明内容
本发明要解决的技术问题为如何有效的对棘球绦虫泡型包虫病或/和囊型包虫病进行诊断。
为了解决上述技术问题，本发明首先提供了重组蛋白的下述任一种应用：
P1、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断抗原中的应用；
P2、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂中的应用；
P3、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂盒中的应用；
P4、所述重组蛋白在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试剂盒中的应用；
P5、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试纸中的应用；
P6、所述重组蛋白在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试纸中的应用；
P7、所述重组蛋白在制备抗泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体中的应用；
所述重组蛋白为重组蛋白rEmSPNxj或重组蛋白rEgSPNxj；
所述重组蛋白rEgSPNxj是如A1)、A2)A3)或A4)的蛋白质：
A1)氨基酸序列是序列表中序列3的蛋白质，
A2)氨基酸序列是序列表中序列3的第8-355位的蛋白质，
A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质，
A4)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由A1)或A2)衍生的或与A1)或A2)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质。
所述重组蛋白rEmSPNxj是如下B1)、B2)、B3)或B4)的蛋白质：
B1)氨基酸序列是序列表中序列4的蛋白质，
B2)氨基酸序列是序列表中序列4的第8-342位的蛋白质，
B3)在B1)或B2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白，
B4)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由B1)或B2)衍生的或与B1)或B2)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质；
上述A2)的蛋白质来自于细粒棘球绦虫的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Echinococcusgranulosus serine protease inhibitor from Xinjiang，EgSPNxj)，上述A1)的蛋白质名称为his-EgSPNxj或rEgSPNxj，是在A2)的蛋白质的氨基末端融合编码组氨酸标签的6个氨基酸残基得到的融合蛋白。
上述B2)的蛋白质来自于多房棘球绦虫的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Echinococcusmultilocularis serine protease inhibitor from Xinjiang，EmSPNxj)，上述B1)的蛋白质名称为his-EmSPNxj或rEmSPNxj，是在B2)的蛋白质的氨基末端融合编码组氨酸标签的6个氨基酸残基得到的融合蛋白。
上述rEmSPNxj蛋白由342氨基酸残基组成，预测蛋白分子量约37.9kD；上述rEgSPNxj蛋白由355个氨基酸残基组成，预测蛋白分子量约39.3kD。
上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
上述蛋白质中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。
上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
上述蛋白质中，所述80％以上的同一性可为至少81％、82％、85％、86％、88％、90％、91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了与上述重组蛋白相关的生物材料的下述任一种应用：
Q1、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断抗原中的应用；
Q2、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂中的应用；
Q3、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂盒中的应用；
Q4、所述生物材料在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试剂盒中的应用；
Q5、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试纸中的应用；
Q6、所述生物材料在制备检测泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体的试纸中的应用；
Q7、所述生物材料在制备抗泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体中的应用；
所述生物材料为下述任一种：
H1)编码上述重组蛋白rEmSPNxj或重组蛋白rEgSPNxj的核酸分子；
H2)含有H1)所述核酸分子的表达盒；
H3)含有H1)所述核酸分子的重组载体或含有H2)所述表达盒的重组载体；
H4)含有H1)所述核酸分子的重组微生物、含有H2)所述表达盒的重组微生物、或含有H3)所述重组载体的重组微生物；
H5)含有H1)所述核酸分子的重组细胞系或含有H2)所述表达盒的重组细胞系；
H6)含有H1)所述核酸分子的转基因动物组织或含有H2)所述表达盒的转基因动物组织；
H7)含有H1)所述核酸分子的宿主细胞或含有H2)所述表达盒的宿主细胞。
上述生物材料中，H1)所述编码重组蛋白rEgSPNxj的核酸分子为如下H-a1)、H-a2)或H-a3)所示的所述蛋白质的编码基因：
H-a1)编码链的编码序列是序列表中序列1的第22-1068位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
H-a2)核苷酸是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；
H-a3)与H-a2)限定的cDNA或DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白质的cDNA分子或DNA分子。
H1)所述编码重组蛋白rEmSPNxj的核酸分子为如下H-b1)、H-b2)或H-b3)所示的所述蛋白质的编码基因：
H-b1)编码链的编码序列是序列表中序列2的第22-1029位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
H-b2)核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；
H-b3)与H-b2)限定的cDNA或DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白质的cDNA分子或DNA分子；
上述生物材料中，H2)所述的含有核酸分子的表达盒，是指能够在宿主细胞中表达上文所述蛋白质的DNA。所述表达盒还可包括表达上述任意一种蛋白的核酸分子所必需的所有调控序列的单链或双链核酸分子。所述调控序列在其相容条件下能指导编码序列在合适的宿主细胞中表达上述任一种蛋白质。所述调控序列包括，但不限于，前导序列、多聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号序列和转录终止子。最低限度，调控序列要包括启动子以及转录和翻译的终止信号。为了导入载体的特定限制性酶位点以便将调控序列与编码蛋白质的核酸序列的编码区进行连接，可以提供带接头的调控序列。调控序列可以是合适的启动子序列，即可被表达核酸序列的宿主细胞识别的核酸序列。启动子序列含有介导蛋白质表达的转录调控序列。启动子可以是在所选宿主细胞中有转录活性的任何核酸序列，包括突变的、截短的和杂合的启动子，可以得自编码与宿主细胞同源或异源的胞外或胞内蛋白质的基因。调控序列还可以是合适的转录终止序列，即能被宿主细胞识别从而终止转录的一段序列。终止序列可操作连接在编码蛋白质的核酸序列的3’末端。在所选宿主细胞中可发挥功能的任何终止子都可以用于本发明。调控序列还可以是合适的前导序列，即对宿主细胞的翻译十分重要的mRNA非翻译区。前导序列可操作连接于编码蛋白质的核酸序列的5’末端。在所选宿主细胞中可发挥功能的任何前导序列均可用于本发明。调控序列还可以是信号肽编码区，该区编码一段连在蛋白质氨基端的氨基酸序列，能引导编码蛋白质进入细胞分泌途径。能引导表达后的蛋白质进入所用宿主细胞的分泌途径的信号肽编码区都可以用于本发明。添加能根据宿主细胞的生长情况来调节蛋白质表达的调控序列可能也是需要的。调控系统的例子是那些能对化学或物理刺激物(包括在有调控化合物的情况下)作出反应，从而开放或关闭基因表达的系统。调控序列的其他例子是那些能使基因扩增的调控序列。在这些例子中，应将编码蛋白质的核酸序列与调控序列可操作连接在一起。
本发明还涉及包含本发明编码上述任一种蛋白质的核酸分子、启动子和转录及翻译终止信号的重组表达载体。制备表达载体时，可使编码上述任一种蛋白的核酸分子位于载体中以便与适当的表达调控序列可操作连接。重组表达载体可以是任何便于进行重组DNA操作并表达核酸序列的载体(例如质粒或病毒)。载体的选择通常取决于载体与它将要导入的宿主细胞的相容性。载体可以是线性或闭环质粒。载体可以是自主复制型载体(即存在于染色体外的完整结构，可独立于染色体进行复制)，例如质粒、染色体外元件、微小染色体或人工染色体。载体可包含保证自我复制的任何机制。或者，载体是一个当导入宿主细胞时，将整合到基因组中并与所整合到的染色体一起复制的载体。此外，可应用单个载体或质粒，或总体包含将导入宿主细胞基因组的全部DNA的两个或多个载体或质粒，或转座子。所述载体含有1或多个便于选择转化细胞的选择标记。选择标记是这样一个基因，其产物赋予对杀生物剂或病毒的抗性、对重金属的抗性，或赋予营养缺陷体原养型等。细菌选择标记的例子如枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的dal基因，或者抗生素如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素的抗性标记。载体包含能使载体稳定整合到宿主细胞基因组中，或保证载体在细胞中独立于细胞基因组而进行自主复制的元件。就进行自主复制的情况而言，载体还可以包含复制起点，使载体能在目标宿主细胞中自主地复制。复制起点可以带有使其在宿主细胞中成为温度敏感型的突变(参见例如，fEhrlich,1978，美国国家科学院学报75：1433)。可以向宿主细胞插入1个以上拷贝的本发明编码上述任一种蛋白质的核酸分子以提高该基因产物的产量。该核酸分子的拷贝数增加可以通过将该核酸分子的至少1个附加拷贝插入宿主细胞基因组中，或者与该核酸分子一起插入一个可扩增的选择标记，通过在有合适选择试剂存在下培养细胞，挑选出含有扩增拷贝的选择性标记基因、从而含有附加拷贝核酸分子的细胞。用于连接上述各元件来构建本发明所述重组表达载体的操作是本领域技术人员所熟知的(参见例如Sambrook等，分子克隆实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)。
术语“可操作连接”在文中定义为这样一种构象，其中调控序列位于相对DNA序列之编码序列的适当位置，以使调控序列指导蛋白质的表达。
本发明还涉及一种含有编码上述任一种蛋白质的核酸分子的重组细胞。重组细胞可以是原核细胞或者真核细胞，例如细菌(如大肠杆菌细胞)或酵母细胞。
上述重组蛋白和上述生物材料也属于本发明的保护范围。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了制备上述重组蛋白的方法，所述重组蛋白rEmSPNxj按照包括如下步骤的方法制备：将所述重组蛋白rEmSPNxj的编码基因导入受体大肠杆菌，得到表达所述重组蛋白rEmSPNxj的重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌，表达得到所述重组蛋白rEmSPNxj；所述重组蛋白rEgSPNxj按照包括如下步骤的方法制备：将所述重组蛋白rEgSPNxj的编码基因导入受体大肠杆菌，得到表达所述重组蛋白rEgSPNxj的重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌，表达得到所述重组蛋白rEgSPNxj。
上述方法中，所述重组蛋白rEgSPNxj的编码基因为如下a1)、a2)或a3)所示的基因：
a1)编码链的编码序列是序列1所示的DNA分子；
a2)编码链的编码序列是序列1的第22-1068位所示的DNA分子；
a3)与a1)或a2)限定的DNA分子具有80％以上的同一性且编码所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEgSPNxj。
所述重组蛋白rEmSPNxj的编码基因为如下b1)、b2)或b3)所示的基因：
b1)编码链的编码序列是序列2所示的DNA分子；
b2)编码链的编码序列是序列2的第22-1029位所示的DNA分子；
b3)与b1)或b2)限定的DNA分子具有80％以上的同一性且编码所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEmSPNxj；
上述方法中，表达所述重组蛋白rEgSPNxj的重组大肠杆菌为将pET-30a-EgSPNxj导入大肠杆菌BL21(DE3)得到的表达氨基酸序列是序列3的所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEgSPNxj的重组微生物，所述pET-30a-EgSPNxj为将载体pET-30a(+)的NdeI和HindIII识别位点间的小片段替换为序列1第4-1068位所示的DNA片段得到的重组载体。
表达所述重组蛋白rEmSPNxj的重组大肠杆菌为将pET-30a-EmSPNxj导入大肠杆菌BL21(DE3)得到的表达氨基酸序列是序列4的所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEmSPNxj的重组微生物；所述pET-30a-EmSPNxj为将载体pET-30a(+)的NdeI和Hind III识别位点间的小片段替换为序列2第4-1029位所示的DNA片段得到的重组载体。
含有上述重组蛋白和/或上述生物材料的下述任意一种产品也属于本发明的保护范围：
D1、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断抗原产品；
D2、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试剂；
D3、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试剂盒；
D4、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试纸；
D5、泡型包虫病或/和囊型包虫病的抗体；
D6、预防和/或治疗泡型包虫病或/和囊型包虫病的疫苗或药品。
上述产品中，所述泡型包虫病或/和囊型包虫病为下述任一种：
E1)、哺乳动物泡型包虫病或/和囊型包虫病，
E2)、灵长目泡型包虫病或/和囊型包虫病，
E3)、人泡型包虫病或/和囊型包虫病。
本发明的实施例中使用制备的棘球绦虫Serpin重组蛋白rEmSPNxj作为包虫病抗原对泡型包虫病AE患者的诊断的敏感性为92.5％,分别比常用诊断两型包虫病的抗原EM18和棘球绦虫天然抗原B(NAgB)的敏感性高出4％和13.5％；对肝脏性疾病对照(CK-L)和健康人群对照(CK-H)的检测阳性率均为0％，表明rEmSPNxj重组蛋白诊断的特异性为100％。因此本发明所制备的rEmSPNxj重组蛋白可特异性的作为泡型包虫病的诊断抗原，能够识别病人血清，敏感性为92.5％，特异性为100％，优于目前诊断泡型包虫病的常用抗原EM18和NAgB。
附图说明
图1为EgSPNxj、EmSPNxj基因的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳鉴定。M:marker显示的标准分子质量条带分布，1为EgSPNxj基因的目的条带分布，2为EmSPNxj基因的目的条带分布。
图2为EgSPNxj、EmSPNxj在棘球绦虫不同发育阶段的基因水平表达。P+(Protoscolex，PSC)代表棘球绦虫幼虫，GL(Germinal layer,GL)代表棘球绦虫包囊生发层，AW(Adult worm，AW)代表棘球绦虫成虫。
图3为重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj免疫印迹实验(Western Blotting)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验。A中SDS-PAGE中泳道1为BSA(2ug)，泳道2为rEgSPNxj(1ug)，M1为SDS-PAGE Marker；A中Western Blotting中M2为Western Blotting Marker，泳道2为rEgSPNxj(1ug)；B中SDS-PAGE中泳道1为BSA(1.5ug)，泳道2为rEmSPNxj，M1为SDS-PAGEMarker；B中Western blot中M2为Western Blotting Marker，泳道2为rEmSPNxj(1ug)。
图4为多克隆抗体与重组抗原的识别。M：Marker，1：rEgSPNxj(50ng)，2：rEmSPNxj(50ng)。
图5为EgSPNxj、EmSPNxj在棘球绦虫不同发育阶段的蛋白水平表达。a中1代表EgPSC(细粒棘球绦虫原头蚴)，2代表EgGL(细粒棘球绦虫包囊生发层)，3代表EgAW(细粒棘球绦虫成虫)；b中1代表EmPSC(多房棘球绦虫原头蚴)，2代表EmGL(多房棘球绦虫包囊生发层)，β-actin为内参蛋白；c中纵坐标为EgSPNxj、EmSPNxj在棘球绦虫不同发育阶段中蛋白的相对表达量，EgPSC代表细粒棘球绦虫原头蚴，EmPSC代表多房棘球绦虫原头蚴，EgGL代表细粒棘球绦虫包囊生发层，EmGL代表多房棘球绦虫包囊生发层,EgAW代表细粒棘球绦虫成虫。
图6为EgSPNxj、EmSPNxj抗原与不同病人血清的识别。a代表AE病人血清，b代表CE病人血清，c代表为肝病病人血清，d代表健康人血清；1代表重组蛋白rEmSPNxj，2代表重组蛋白rEgSPNxj。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的病羊的羊肝和感染了包虫的沙鼠分别来源于屠宰场和本实验室保种沙鼠(Wu,C.,et al.Genetic variation of mitochondrial genes amongEchinococcus multilocularis isolates collected in western China.ParasitVectors,2017.10(1):p.265.)其中病羊的羊肝感染有细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus,E.g)；沙鼠感染多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，E.m)。
试验所得数据用Excel软件处理,并用GraphPad Prism软件中的单因素方差分析程序对数据进行方差分析和多重比较。
实施例1、EgSPNxj、EmSPNxj目的基因的扩增及测序鉴定
一、EgSPNxj基因和EmSPNxj基因的扩增及鉴定1.根据GenBank发表的预测而得Eg-SerpinA基因EgSPNxj(EGR_03125)基因和Em-SerpinB基因EmSPNxj(EmuJ_001193100.1)基因序列设计扩增全长基因的上下游引物，由上海生工公司合成。引物序列见表1。
表1引物序列设计
2.cDNA的获取
从病羊肝脏获得原头蚴(Protoscoleces，PSC)沉淀约100μL，命名为EgPSC，从保种沙鼠体内获得原头蚴(Protoscoleces，PSC)沉淀约100μL，命名为EmPSC，分别于冻存管中置于液氮中。经过高压处理的无菌研钵中不断加入液氮使其冷却，将上述标本放入研钵中快速研磨，整个过程防止组织解冻变软，可适当补充液氮；将研磨充分的EgPSC和EmPSC放到新的无RNA酶的1.5m LEP管中，加入1mL Trizol，剧烈震动后室温静置10min，加入200μL氯仿，充分震荡混匀，室温放置10min，13500g(rcf)4℃离心15min；小心吸取上层水相液体400μL于新的无RNA酶1.5mL EP管中，加入等体积的异丙醇，上下轻轻颠倒混匀，室温放置15min，13500g(rcf)4℃离心10min；轻轻吸掉上清，沉淀中加入1mL 75％酒精，轻轻吹洗沉淀，13500g(rcf)4℃离心10min；沉淀在生物安全柜中自然晾干至半透明状，分别加入30～50μLRNase Free dH2O溶解得到EgPSC和EmPSC的总RNA；充分溶解的RNA使用核酸蛋白定量仪检测浓度。
反转录：根据Takara反转录试剂盒说明书操作如下：
1)去除基因组DNA，反应体系如表2和反应程序如下，得到去除基因组DNA的RNA；
表2去除基因组DNA的反应体系
2)反转录反应，反应体系如表3和反应程序如下，得到cDNA；
表3反转录的反应体系
反应总体积：20μL，短暂离心混匀后37℃15min，85℃5s后终止反应，得到EgPSC和EmPSC的cDNA。样本-20℃保存备用。
3.目的基因的扩增及测序鉴定
以EgPSC和EmPSC的cDNA为模板分别分别使用表1中的两对引物F1和R1、F2和R2扩增目的基因棘球绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因EgSPNxj和EmSPNxj。反应体系20μL：2×Power Taq PCR MasterMix 10μL，上下游引物各0.4μL(10μM)，cDNA 2μL，RNase Free dH2O7.2μL。反应条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸1min，共30个循环，72℃总延伸7min。PCR产物取5μL，DL2000作为DNA分子质量标记，使用0.5×电泳缓冲液，1％琼脂糖凝胶电泳，电压90V，电泳25min，凝胶成像仪观察结果并拍照，结果如图1所示。条带1为EgSPNxj,条带2为EmSPNxj。其余产物送上海生工公司测序。测序结果表明EgSPNxj的PCR产物含有编码链的编码序列是序列表中序列5的EgSPNxj(EgSPNxj基因)；EmSPNxj的PCR产物含有编码链的编码序列是序列表中序列6的EmSPNxj(EmSPNxj基因)。
实施例2qRT-PCR法检测基因表达
为了检测EgSPNxj、EmSPNxj基因在棘球绦虫不同发育阶段的基因的表达水平，分别选择病羊肝脏获得原头蚴EgPSC和保种沙鼠体内获得原头蚴EmPSC的不同发育阶段的样品提取RNA，并反转录成cDNA，cDNA的获得方法同实施例1。所述不同发育阶段包括棘球绦虫幼虫阶段P+，棘球绦虫包囊生发层阶段GL，棘球绦虫成虫阶段AW。
1.根据基因序列设计qRT-PCR扩增引物，以eif3作为内参基因(表4)
表4 qRT-PCR引物
2.分别以获得的Eg和Em不同发育阶段的cDNA为模板，根据QuantiNovaTM
Green PCR Kit说明书进行qRT-PCR，反应体系为20μL(表5)：
表5 qRT-PCR反应体系
3.每个样本设置三个重复，结果采用2-ΔΔCt的方法计算目的基因的相对表达量。
结果如图2所示，图2中a为EgSPNxj在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达情况，在AW阶段表达量相对量较高。b为EmSPNxj在多房棘球绦虫不同发育阶段的表达情况，在PSC(P+)阶段高表达。表明包虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在棘球绦虫的发育过程中有着重要的作用。
实施例3EgSPNxj和EmSPNxj重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj的表达与纯化
1.pET30a-EgSPNxj、pET30a-EmSPNxj的构建根据实施例1测序得到的EgSPNxj、EmSPNxj基因编码序列及蛋白表达序列分析和pET30a(+)原核表达载体上的多克隆位点，设计并合成特异性引物用于扩增EgSPNxj、EmSPNxj目的基因片段，为了便于定向克隆，在上、下游引物的5’端分别引入了一个酶切位点NdeI/HindIII，引物序列为(单划线标注出代表酶切位点)：
EgSPNxj
F6:5’-CATATGCATCACCATCATCATCACGAAACAAGGGAGGAATTGG-3’
R6:5’-AAGCTTCTACTTGGATTCGGGATGAACAACATGACCCATG-3’
EmSPNxj
F7:5’-CATATGCATCACCATCATCATCACGAAACAAGGGAGGAATTGG-3’
R7:5’-AAGCTTCTACTTGGATTCGGGATGAACAACATGACCCATG-3’
EgSPNxj和EmSPNxj基因的PCR扩增产物和pET30a(+)均使用NdeI和HindIII酶切处理：
表6酶切体系
EgSPNxj基因的PCR扩增产物与pET30a(+)经NdeI和HindIII双酶切后，经过切胶回收纯化后，16℃条件下连接过夜；EmSPNxj基因的PCR扩增产物与pET30a(+)经NdeI和HindIII双酶切后，经过切胶回收纯化后，16℃条件下连接过夜。反应体系：
表7连接体系
50℃水浴25min，放置2～3min使温度降低，进行转化及菌液涂布实验。
将连接产物转化到E.coli TOP10克隆菌株中并涂布于含有50μg/mL卡那霉素的LB平板上，37℃温育过夜。随机挑选平板中单克隆菌落，提取质粒，进行PCR和双酶切鉴定并测序。
测序结果表明EgSPNxj基因与载体pET-30a(+)的连接产物是用序列表中序列表1的第4-1068位所示的DNA片段替换pET-30a(+)的NdeI和HindIII识别位点间的片段(小片段)，保持pET-30a(+)的其它序列不变得到的重组表达载体，命名为pET30a-EgSPNxj。pET30a-EgSPNxj是含有His标签的his-EgSPNxj基因，his-EgSPNxj基因的核苷酸序列是序列表中序列1，编码序列3示的蛋白质his-EgSPNxj，简称rEgSPNxj。
EmSPNxj基因与载体pET-30a(+)的连接产物是用序列表中序列表2的第4-1029位所示的DNA片段替换pET-30a(+)的NdeI和HindIII识别位点间的片段(小片段)，保持pET-30a(+)的其它序列不变得到的重组表达载体，命名为pET30a-EmSPNxj。pET30a-EmSPNxj是含有His标签的his-EmSPNxj基因，his-EmSPNxj基因的核苷酸序列是序列表中序列2，编码序列4所示的蛋白质his-EmSPNxj，简称rEmSPNxj。
2.rEgSPNxj、rEmSPNxj蛋白的纯化
将构建好的原核表达质粒pET30a-EgSPNxj和pET30a-EmSPNxj分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)(Sigma)感受态细胞中，冰浴30min。将上述混合物置于42℃水浴箱中90s后迅速取出冰浴2min，整个过程中勿摇动。加入1mL液体培养基，37℃，200rpm，恒温摇床孵育1h。取400μL培养物均匀涂布到含50μg/mL的卡那霉素LB平板上，之后倒置于37℃培养箱过夜。将含有pET30a-EgSPNxj的重组大肠杆菌命名为BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj，BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj能表达序列表中序列3所示的蛋白质his-EgSPNxj，即rEgSPNxj蛋白。将含有pET30a-EmSPNxj的重组大肠杆菌命名为BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj，BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj能表达序列表中序列4所示的蛋白质his-EmSPNxj，即rEmSPNxj蛋白。
从转化的平板中(分别为培养BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj和BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj的平板)挑选单克隆，接种到4mL含50μg/mL的硫酸卡那霉素LB培养基中，待培养至OD600为0.6-0.8，向试管培养液中加入终浓度0.2mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)，之后分别置于15℃诱导16h进行诱导表达，分别得到BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj诱导表达的菌液和BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj诱导表达的菌液。
之后将上述诱导表达的菌液于4℃、3500g(rcf-离心力)离心10min，收集菌体。其中rEgSPNxj蛋白为包涵体表达，rEmSPNxj为可溶性表达。从BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj诱导表达的菌液中得到含有蛋白质his-EgSPNxj即rEgSPNxj的包涵体，从BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj诱导表达的菌液中得到含有蛋白质his-EmSPNxj即rEmSPNxj的上清液。包涵体通过亲和层析纯化rEgSPNxj：BL21(DE3)/pET30a-EgSPNxj诱导表达的菌体采用20mM PB(pH7.2)，300mM NaCl，20mM Imidazole含1％Triton X-100，1mM DTT，1mM PMSF高压裂解和超声裂解，超声结束后，4℃，38500g(rcf)离心20min，收集沉淀。该沉淀为蛋白质rEgSPNxj的包涵体。包涵体采用20mM PB(pH 7.2)，300mM NaCl含1％Triton X-100，2mM EDTA，5mM DTT洗涤后，以20mM PB(pH 7.2)，300mM NaCl，8M Urea，20mM Imidazole缓冲液溶解包涵体，同时平衡Ni-IDA柱，最后用不同浓度咪唑的平衡缓冲液洗脱目标蛋白rEgSPNxj。
上清中亲和层析纯化rEmSPNxj(整个纯化过程在低温下操作)：BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj诱导表达的菌体收集上清液，结果从BL21(DE3)/pET30a-EmSPNxj诱导表达的菌液中得到含蛋白质rEmSPNxj上清液。采用20mM PB(pH 7.2)，300mM NaCl，20mMImidazole含1％Triton X-100，1mM DTT，1mM PMSF高压裂解和超声裂解，超声结束后，4℃，38500g(rcf)离心20min，收集上清液，该上清液中含蛋白质rEmSPNxj。同时以20mM PB(pH7.2)，300mM NaCl，20mM Imidazole缓冲液平衡Ni-IDA亲和层析柱，之后用不同浓度咪唑的平衡缓冲液从上清液中洗脱目标蛋白rEmSPNxj。
经Ni-IDA亲和层析纯化分析，收集纯度相对较高的目标蛋白，将其加入到处理后的透析袋中，4℃环境下，透析到缓冲液[1×PBS(pH7.4)，4mM GSH，0.4mM GSSG，0.4M L-Arginine，1M Urea]中复性。复性后目标蛋白最终透析于储存液1×PBS(pH7.4)溶液约6～8h，得到含rEgSPNxj的液体和含rEmSPNxj的液体。透析复性结束后，上清用0.22μm滤器过滤后分装，分别得到纯化后的大小为39.3kD的目的蛋白rEgSPNxj和大小为37.9kD的目的蛋白rEmSPNxj。
rEgSPNxj和rEmSPNxj蛋白的定量：使用Bradford方法检测蛋白浓度，先配制1mg/ml牛血清白蛋白(BSA)母液，再向母液中加入磷酸缓冲液(PBS)配制一组浓度分别为1.0mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml的BSA溶液各100ul，将配置好不同浓度蛋白标准溶液30ul加到1mlBradford工作液中，轻轻颠倒混匀，静止5min。将适量体积的样品用PBS稀释到30ul,加入1mlBradford工作液,轻轻颠倒混匀，静止5min。将反应好的溶液取300ul加入到96孔板的样品孔中，使用酶标仪测定A595nm吸光度，根据标曲计算得出rEgSPNxj的浓度2.28mg/ml及rEmSPNxj的浓度3.54mg/ml的浓度,用PBS稀释定量为1mg/ml的工作浓度。
实施例4rEgSPNxj、rEmSPNxj重组蛋白免疫动物制备多克隆抗体
1.选取BALB/c雌性小鼠10只，体重18-20克/只，随机分组(每组5只)。
分别将150μg重组蛋白(实施例2中得到的含rEgSPNxj的液体150ul和实施例2中得到的含rEmSPNxj的液体150ul混匀后获得包含150μg rEgSPNxj包含150μg rEmSPNxj的液体150ul)和等量150ul的弗氏佐剂混合吸入离心管内，利用搅拌器与研磨杵，使佐剂和抗原溶液充分混合在一起，形成油包水的乳剂，整个过程冰上操作。免疫时先用75％酒精对小鼠腹部消毒，然后用无菌注射器进行注射。每只小鼠每次注射0.1ml，即每只小鼠的每次的免疫剂量均为25μg rEgSPNxj和25μg rEmSPNxj；免疫途径为前三次为腹部皮下多点注射，第四次为腹腔注射。首次时用重组蛋白加等量弗氏完全佐剂(FCA)的混合乳化剂进行腹腔皮下免疫。隔一周后进行二次免疫。在第2次、第3次和第4次免疫时用重组蛋白加等量弗氏不完全佐剂(ICA)增强免疫。在首次免疫前尾尖采血10μl全血溶到90μl PBS中作为阴性对照。末次免疫后尾部静脉采血检测血清特异性抗体水平。将血液在4℃冰箱静置过夜，3000g(rcf)离心10min，分离血清，-20℃保存。
2.ELISA检测血清抗体效价
将抗原(rEgSPNxj、rEmSPNxj)用包被液配制抗原浓度为0.5μg/mL，加入ELISA板的孔里，每孔100μL，放入湿盒中4℃冰箱过夜。弃掉抗原，用PBS洗3次，5min/次，350μL/孔。按照300μL/孔封闭液进行封闭，37℃孵育2h后PBST洗3次，5min/次，350μL/孔。将步骤1中得到的鼠抗血清(鼠抗rEgSPNxj血清及鼠抗rEmSPNxj血清)和阴性小鼠血清用PBST进行倍比稀释(1:1×104～1:128×104)，100μL/孔，37℃孵育2h。弃掉一抗后，PBST洗板3次。将二抗(山羊抗鼠IgG goat anti mouse IgG HRP，A90-116P，BLTHYL)用PBST按1:5000稀释，100μL/孔，37℃孵育1h。弃掉二抗，PBST洗板3次。用已配好的底物显色液进行显色，100μL/孔，37℃孵育15～30min。用酶标仪在OD405 nm波长下进行读值。
免疫后小鼠血清效价达到免疫前血清效价的2倍即可认为达到了最高效价。我们将随机分组的5只小鼠随机用耳标打孔器标记其名称分别为左上、左下、右上、右下、无。结果如表8所示，重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj蛋白免疫后的小鼠血清效价在稀释32万倍以后仍然可达到最高效价的指标，因此可以认为我们获得了重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj的高免血清。
表8 rEgSPNxj、rEmSPNxj蛋白免疫小鼠后检测血清效价
因此，通过以上试验表明：rEgSPNxj、rEmSPNxj免疫小鼠后可得到高免血清。
实施例5重组蛋白质量鉴定、抗rEgSPNxj、rEmSPNxj抗体与不同来源抗原的识别
1.重组蛋白抗原的质量鉴定
准备纯化的重组蛋白溶液各7.5ul,分别含有重组蛋白rEgSPNxj、rEmSPNxj各50ng，与1.5ug BSA溶液，同时进行SDS-PAGE电泳，BSA作为阴性对照。完成SDS-PAGE电泳后，取出凝胶、滤纸、NC膜及海绵垫放在含有20％甲醇的1×转膜缓冲液里浸泡20min。按照从阳极到阴极的顺序依次放入海绵垫-滤纸-NC膜-凝胶-滤纸-海绵垫，各层均排尽气泡，然后盖上转膜夹的负极板。把组装好的转膜夹装入转膜电泳槽中，加入1×转膜缓冲液，80V恒压电转2h。为防止转膜过程中温度过高，在转膜槽中加入冰袋，并将转膜槽放在冰中以保持低温。将已转膜完成的NC膜放入含5％脱脂奶粉的PBST溶液中室温摇床封闭2h；PBST洗3次，每次5min；分别加入实施例3中得到的rEgSPNxj和rEmSPNxj的鼠抗体(1:600稀释)，其中BSA阴性对照中加入1.5ug。4℃摇床孵育过夜，PBST洗3次，每次5min；洗膜后加入羊抗鼠辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG(A90-116P，BLTHYL))(1:5000稀释)，室温摇床孵育2h。PBST洗3次，每次5min，最后使用过氧化物酶底物显色法显色，加ddH2O终止反应。以此检测原核表达蛋白是否具有免疫活性。结果如图3中A和B所示，图3中A中的SDS-PAGE电泳结果及WesternBlotting显示，在第2泳道rEgSPNxj蛋白纯度大于95％，且抗EgSPNxj抗体与重组蛋白rEgSPNxj结合(条带显色)，而第1泳道中为对照BSA相对分子量为66.4KDa(条带无反应),表明重组蛋白rEgSPNxj构建表达正确，重组蛋白rEgSPNxj具有免疫活性；图3中B中的SDS-PAGE电泳及Western Blotting结果显示，在第2泳道rEmSPNxj蛋白纯度大于95％，且抗EmSPNxj抗体与重组蛋白rEgSPNxj结合(条带显色),而第1泳道中对照BSA条带无反应，表明重组蛋白rEmSPNxj构建表达正确，重组蛋白rEmSPNxj具有免疫活性。
2.多克隆重组抗体对棘球绦虫不同发育阶段自然抗原的反应性
2.1多克隆抗体与重组抗原的识别
实施例3中得到的鼠抗rEgSPNxj和鼠抗rEmSPNxj血清，分别与重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj的识别结果如图4所示。图4中1代表rEgSPNxj，2代表rEmSPNxj通过WesternBlotting实验发现，抗rEgSPNxj血清能够有效识别重组蛋白rEgSPNxj；抗rEmSPNxj血清能够有效识别重组蛋白rEmSPNxj。且反应条带单一，显示反应特异性，
2.2多克隆抗体与棘球绦虫不同发育阶段自然抗原的反应
使用RIPA裂解液(Solarbio公司,R0020)参照试剂说明书提取囊型包虫和泡型包虫两种包虫不同阶段的蛋白。实施例4中得到的鼠抗rEgSPNxj血清(图5中EgSPNxj所示)、鼠抗rEmSPNxj1血清(图5中EmSPNxj所示)(1:600稀释)和正常鼠血清(图5中normal所示)(1:600稀释)作为一抗，实施例4中的山羊抗鼠(带有辣根过氧化物酶(HRP)标记)(1:5000稀释)作为二抗进行Western blotting,利用组成性表达蛋白β-actin作为与多克隆抗体结合的内参。实验方法同重组蛋白抗原性鉴定。
结果如图5所示。图5中a中条带1为EgPSC，条带2为EgGL(细粒棘球绦虫包囊生发层)，条带3为EgAW(细粒棘球绦虫成虫)。b中条带1为EmPSC,条带2为EmGL(多房棘球绦虫包囊生发层)。两种包虫不同阶段的蛋白分别与抗rEgSPNxj血清(图5中EgSPNxj所示)、抗rEmSPNxj血清(图5中EmSPNxj所示)和正常鼠血清(图5中normal所示)结合产生条带的情况结果表明，两型包虫EgPSC和EmPSC阶段的蛋白均可与实施例4中得到的鼠抗rEgSPNxj血清和鼠抗rEmSPNxj1血清结合产生条带，而两型包虫不同阶段的蛋白与正常鼠血清均不能结合产生条带，此外，EgAW阶段的棘球绦虫蛋白也可与实施例4中得到的鼠抗rEgSPNxj血清和鼠抗rEmSPNxj1血清结合产生条带。以上结果说明EgSPNxj、EmSPNxj均在两型包虫病中PSC阶段高表达，实施例4中得到的多克隆抗体能有效检测两种包虫不同阶段EgSPNxj和EmSPNxj蛋白的表达情况。c为使用灰度扫描后进行统计学分析后说明EgSPNxj、EmSPNxj均在两型包虫病中PSC阶段高表达且具有统计学意义。
因此，通过以上试验表明：实施例4中使用重组蛋白rEgSPNxj、rEmSPNxj制备的多克隆抗体可以识别棘球绦虫不同发育阶段的自然抗原。
实施例6rEgSPNxj、rEmSPNxj抗原与不同病人血清的识别
分别取AE病人、CE病人、肝病病人及健康人群的混合血清(1:100稀释)作为一抗，HRP标记的驴抗人IgG(1:5000稀释)(Donkey anti human IgG HRP，ab102410，abcam)作为二抗用于Western blotting反应，实验操作同重组蛋白抗原性鉴定，使用过氧化物酶底物显色法显色，加ddH2O终止反应。
结果如图6所示，a为AE病人血清，b为CE病人血清，c为肝病病人血清，d为健康人血清。条带1为重组蛋白rEgSPNxj,条带2为重组蛋白rEmSPNxj。重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj均不与健康人血清发生反应，rEgSPNxj与AE病人、CE病人血清反应得到39.3KDa的目的条带，rEmSPNxj仅与AE病人血清反应得到37.9KDa的目的条带。
实施例7重组蛋白rEgSPNxj和rEmSPNxj与不同来源诊断抗原对两型包虫病的诊断比较
检测血样均经影像学诊断和手术确诊的AE(多房棘球绦虫感染所致泡性包虫病)患者血清54份，CE(细粒棘球绦虫感染所致囊型包虫病)患者血清47份，肝脏性疾病患者血清(非包虫病)31例，健康体检人群血清40份，由新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病资源样本库提供。所有患者均签署知情同意书。其中肝脏性疾病患者(简称为CK-L)和健康体检人群(简称为CK-H)作为阴性对照。
所用抗原包括实施例2的重组蛋白抗原rEgSPNxj和rEmSPNxj，以及目前诊断两型包虫病的常用抗原EM18(本实验室制备，孟存仁,张琼,张朝霞.Em18抗原ELISA法对泡球蚴病诊断价值的系统评价.中国循证医学杂志,2009.9(07):p.783-787.)及NAgB(本实验室制备李艳红,孟存仁,张朝霞.抗原B ELISA法对细粒棘球蚴病诊断价值的Meta分析.中国循证医学杂志,2013.13(03):p.332-338.)。
采用间接ELISA法进行检测上述4种抗原对两型包虫病的诊断效果。分别使用上述4种抗原进行包被，包被浓度为0.5μg/ml，待测血清(AE患者血清、CE患者血清、CK-L患者血清和CK-H血清)均按1:100稀释，其中AE患者血清和CE患者血清中含有抗包虫病的抗体，CK-L和CK-H中不含抗包虫病的抗体；二抗为羊抗人IgG4-HRP(Southern Biotech CAT NO9190-05)(1:4000稀释)，底物显色液为ABTS，若上述4种抗原能与AE患者血清、CE患者血清中的抗包虫病的抗体(一抗)结合，则二抗与一抗结合后底物会显色。用酶标仪测定每孔的OD405nm值。免疫诊断价值评价(以ROC曲线法确定CUT-OFF值为阴性对照平均值，OD405nm值为CUT-OFF值2.1倍及以上的患者被认为是诊断为包虫病的患者)，结果见表9所示。
表9、rEmSPNxj对两型包虫病的特异性抗体血清学诊断的结果
rEmSPNxj
EM18
NAgB
rEgSPNxj
表9结果显示本发明所制备的rEmSPNxj重组蛋白作为包虫病抗原对泡型包虫病AE患者的诊断的敏感性为92.5％,分别比常用诊断两型包虫病的抗原EM18和NAgB的敏感性高出4％和13.5％；对囊型包虫病CE的敏感性为12.8％；对肝脏性疾病对照(CK-L)和健康人群对照(CK-H)的检测阳性率均为0％，表明rEmSPNxj重组蛋白诊断的特异性为100％。因此，通过以上不同来源抗原对两型包虫病的诊断比较，结果显示本发明所制备的rEmSPNxj重组蛋白可特异性的作为泡型包虫病的诊断抗原，能够识别病人血清，敏感性为92.5％，特异性为100％，优于目前诊断泡型包虫病的常用抗原EM18和NAgB。
序列表
<110> 新疆医科大学第一附属医院
<120> 包虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在包虫病鉴别诊断中的应用
<130> GNCSQ201956
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1068
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 1
atgcatcacc atcatcatca cgaaacaagg gaggaattgg tatcagtgct tggacttgct 60
cctggcaaag acattgacac catagtcaaa tctcttggtg aggatttgca agctgttgct 120
gacggtgacg cgaagaagac gttggtggaa gcgaatggtg tgttcatcca agctggtagt 180
cgcattagag agacgtacac tagtgccgtc agtaagcact tgaaggctga catgaaacag 240
gtaacagcat tgtttcctgc tgacaacgtg gtgtttcagt tggatttcgg tggcgactgt 300
gagggatctc gcgtctcaat caataggtgg atagcggaga agacgaggga gaaaataaag 360
gacctcctcg ctcaggggtc gatcaccccc atgactcatg tggttctggc taatgctgtt 420
tacttcaagg gagtttggaa atgcaagttt gagaagagca agacagatag gaatggtgta 480
tttcacagcc tggaaagcgg agatgtgagg gtcagcatga tgactcaaaa ggcgagctat 540
ccaatggcag actttgtaga tctcgaggtt cgagctttga aggtgccctt tgaaacgcat 600
gaaatggtga ttgtgctgcc ggagaagaat gacggtttgc ccaatctgct gaagcaactg 660
agtgcaaatg ccaaacattt ggaggagatg ctgacgtcgg atcagtattt tgatacagaa 720
gtggtgctga aattgccgag gttttcgctc ggtgggcata acatgaagtt gaaggagccg 780
ttgcatagga tgggattgaa gtctgccttt gacgctgaac gcgccgactt ctcaggtata 840
acgagtgaca gatcactcgc tgtgtctgat gtctaccacc aggcagtgat cgatgttgat 900
gaggaaggag cggaagctgc cgcggcaacg gccatgccaa tgatggtcca ctgcatgccg 960
gcaccacctg tcgactttat tgtcgatcat ccattcatct ttttcattgt taccaagacg 1020
ggcattcccg tgttcatggg tcatgttgtt catcccgaat ccaagtag 1068
<210> 2
<211> 1029
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 2
atgcatcacc atcatcatca cgaaacaagg gaggaattgg tatcagtgct tggacttgct 60
cctggcaaag acattgacac catagtcaaa tctctcggtg agaatttgca ggctgttgct 120
gacggtgatg cgaagaagac gttggtggaa gcgaatggtg tgttcatcca agctggtagt 180
cagattagag agacgtacac tagtgccgtc agtaagcact tgaaggctga catgaaacag 240
ttggatttcg gtggcgacag cgagggatct cgcatctcaa tcaataggtg gatagcggag 300
aagacgaggg agaaagtgaa ggacctcctc gctcaggggt cgatcacccc catgactcat 360
gtggttctgg ctaatgctgt ttacttcaag ggagtttgga aatgcaagtt tgagaagagc 420
aagacagata ggagtggtgt atttcacagc ctggacagcg gagatgtgag agtcagcatg 480
atgactcaaa aggcgagcta tccaatggca gactttgtag atctcgaggt tcgtgctttg 540
aaggtgccct ttgaaacgca tgaaatgttg attgtgctgc cggagaagaa tgacggtttg 600
cccaatctgc tgaagcagct gagtgcaaat gccaaacatt tggaggagat gctgacgtcg 660
gatcaatatt ttgatacaga agtggtgctg aaattgccga agttttcgct cggtgggcat 720
aacatgaagt tgaaggagcc gttgcataag atgggattga agtctgcctt tgacgctgaa 780
cgtgccgact tctcaggtat aacgaatgac agatcactcg ctgtgtctga tgtctaccac 840
caggcagtga tcgatgttga tgaggaagga gcggaagctg ccgcagcaac ggccatgcca 900
atgatggtcc gctgcatgcc ggcaccacct gtcgactttt ttgtcgatca tccattcatc 960
ttcttcattg ttaccaagac gggcattccc gtgttcatgg gtcatgttgt tcatcccgaa 1020
tccaagtag 1029
<210> 3
<211> 355
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 3
Met His His His His His His Glu Thr Arg Glu Glu Leu Val Ser Val
1 5 10 15
Leu Gly Leu Ala Pro Gly Lys Asp Ile Asp Thr Ile Val Lys Ser Leu
20 25 30
Gly Glu Asp Leu Gln Ala Val Ala Asp Gly Asp Ala Lys Lys Thr Leu
35 40 45
Val Glu Ala Asn Gly Val Phe Ile Gln Ala Gly Ser Arg Ile Arg Glu
50 55 60
Thr Tyr Thr Ser Ala Val Ser Lys His Leu Lys Ala Asp Met Lys Gln
65 70 75 80
Val Thr Ala Leu Phe Pro Ala Asp Asn Val Val Phe Gln Leu Asp Phe
85 90 95
Gly Gly Asp Cys Glu Gly Ser Arg Val Ser Ile Asn Arg Trp Ile Ala
100 105 110
Glu Lys Thr Arg Glu Lys Ile Lys Asp Leu Leu Ala Gln Gly Ser Ile
115 120 125
Thr Pro Met Thr His Val Val Leu Ala Asn Ala Val Tyr Phe Lys Gly
130 135 140
Val Trp Lys Cys Lys Phe Glu Lys Ser Lys Thr Asp Arg Asn Gly Val
145 150 155 160
Phe His Ser Leu Glu Ser Gly Asp Val Arg Val Ser Met Met Thr Gln
165 170 175
Lys Ala Ser Tyr Pro Met Ala Asp Phe Val Asp Leu Glu Val Arg Ala
180 185 190
Leu Lys Val Pro Phe Glu Thr His Glu Met Val Ile Val Leu Pro Glu
195 200 205
Lys Asn Asp Gly Leu Pro Asn Leu Leu Lys Gln Leu Ser Ala Asn Ala
210 215 220
Lys His Leu Glu Glu Met Leu Thr Ser Asp Gln Tyr Phe Asp Thr Glu
225 230 235 240
Val Val Leu Lys Leu Pro Arg Phe Ser Leu Gly Gly His Asn Met Lys
245 250 255
Leu Lys Glu Pro Leu His Arg Met Gly Leu Lys Ser Ala Phe Asp Ala
260 265 270
Glu Arg Ala Asp Phe Ser Gly Ile Thr Ser Asp Arg Ser Leu Ala Val
275 280 285
Ser Asp Val Tyr His Gln Ala Val Ile Asp Val Asp Glu Glu Gly Ala
290 295 300
Glu Ala Ala Ala Ala Thr Ala Met Pro Met Met Val His Cys Met Pro
305 310 315 320
Ala Pro Pro Val Asp Phe Ile Val Asp His Pro Phe Ile Phe Phe Ile
325 330 335
Val Thr Lys Thr Gly Ile Pro Val Phe Met Gly His Val Val His Pro
340 345 350
Glu Ser Lys
355
<210> 4
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 4
Met His His His His His His Glu Thr Arg Glu Glu Leu Val Ser Val
1 5 10 15
Leu Gly Leu Ala Pro Gly Lys Asp Ile Asp Thr Ile Val Lys Ser Leu
20 25 30
Gly Glu Asn Leu Gln Ala Val Ala Asp Gly Asp Ala Lys Lys Thr Leu
35 40 45
Val Glu Ala Asn Gly Val Phe Ile Gln Ala Gly Ser Gln Ile Arg Glu
50 55 60
Thr Tyr Thr Ser Ala Val Ser Lys His Leu Lys Ala Asp Met Lys Gln
65 70 75 80
Leu Asp Phe Gly Gly Asp Ser Glu Gly Ser Arg Ile Ser Ile Asn Arg
85 90 95
Trp Ile Ala Glu Lys Thr Arg Glu Lys Val Lys Asp Leu Leu Ala Gln
100 105 110
Gly Ser Ile Thr Pro Met Thr His Val Val Leu Ala Asn Ala Val Tyr
115 120 125
Phe Lys Gly Val Trp Lys Cys Lys Phe Glu Lys Ser Lys Thr Asp Arg
130 135 140
Ser Gly Val Phe His Ser Leu Asp Ser Gly Asp Val Arg Val Ser Met
145 150 155 160
Met Thr Gln Lys Ala Ser Tyr Pro Met Ala Asp Phe Val Asp Leu Glu
165 170 175
Val Arg Ala Leu Lys Val Pro Phe Glu Thr His Glu Met Leu Ile Val
180 185 190
Leu Pro Glu Lys Asn Asp Gly Leu Pro Asn Leu Leu Lys Gln Leu Ser
195 200 205
Ala Asn Ala Lys His Leu Glu Glu Met Leu Thr Ser Asp Gln Tyr Phe
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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325 330 335
Val His Pro Glu Ser Lys
340
<210> 5
<211> 1104
<212> DNA
<213> 细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）
<400> 5
atgtctccgc tgagcgtgta ctcggcgttg tcccttgcgt tggcaggatc tgaaagtgaa 60
acaagggagg aattggtatc agtgcttgga cttgctcctg gcaaagacat tgacaccata 120
gtcaaatctc ttggtgagga tttgcaagct gttgctgacg gtgacgcgaa gaagacgttg 180
gtggaagcga atggtgtgtt catccaagct ggtagtcgca ttagagagac gtacactagt 240
gccgtcagta agcacttgaa ggctgacatg aaacaggtaa cagcattgtt tcctgctgac 300
aacgtggtgt ttcagttgga tttcggtggc gactgtgagg gatctcgcgt ctcaatcaat 360
aggtggatag cggagaagac gagggagaaa ataaaggacc tcctcgctca ggggtcgatc 420
acccccatga ctcatgtggt tctggctaat gctgtttact tcaagggagt ttggaaatgc 480
aagtttgaga agagcaagac agataggaat ggtgtatttc acagcctgga aagcggagat 540
gtgagggtca gcatgatgac tcaaaaggcg agctatccaa tggcagactt tgtagatctc 600
gaggttcgag ctttgaaggt gccctttgaa acgcatgaaa tggtgattgt gctgccggag 660
aagaatgacg gtttgcccaa tctgctgaag caactgagtg caaatgccaa acatttggag 720
gagatgctga cgtcggatca gtattttgat acagaagtgg tgctgaaatt gccgaggttt 780
tcgctcggtg ggcataacat gaagttgaag gagccgttgc ataggatggg attgaagtct 840
gcctttgacg ctgaacgcgc cgacttctca ggtataacga gtgacagatc actcgctgtg 900
tctgatgtct accaccaggc agtgatcgat gttgatgagg aaggagcgga agctgccgcg 960
gcaacggcca tgccaatgat ggtccactgc atgccggcac cacctgtcga ctttattgtc 1020
gatcatccat tcatcttttt cattgttacc aagacgggca ttcccgtgtt catgggtcat 1080
gttgttcacc ccgaatccaa gtag 1104
<210> 6
<211> 1065
<212> DNA
<213> 多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）
<400> 6
atgtctccgc tgagcgtgta ctcggcgttg tcccttgcgt tggcaggatc tgaaagtgaa 60
acaagggagg aattggtatc agtgcttgga cttgctcctg gcaaagacat tgacaccata 120
gtcaaatctc tcggtgagaa tttgcaggct gttgctgacg gtgatgcgaa gaagacgttg 180
gtggaagcga atggtgtgtt catccaagct ggtagtcaga ttagagagac gtacactagt 240
gccgtcagta agcacttgaa ggctgacatg aaacagttgg atttcggtgg cgacagcgag 300
ggatctcgca tctcaatcaa taggtggata gcggagaaga cgagggagaa agtgaaggac 360
ctcctcgctc aggggtcgat cacccccatg actcatgtgg ttctggctaa tgctgtttac 420
ttcaagggag tttggaaatg caagtttgag aagagcaaga cagataggag tggtgtattt 480
cacagcctgg acagcggaga tgtgagagtc agcatgatga ctcaaaaggc gagctatcca 540
atggcagact ttgtagatct cgaggttcgt gctttgaagg tgccctttga aacgcatgaa 600
atgttgattg tgctgccgga gaagaatgac ggtttgccca atctgctgaa gcagctgagt 660
gcaaatgcca aacatttgga ggagatgctg acgtcggatc aatattttga tacagaagtg 720
gtgctgaaat tgccgaagtt ttcgctcggt gggcataaca tgaagttgaa ggagccgttg 780
cataagatgg gattgaagtc tgcctttgac gctgaacgtg ccgacttctc aggtataacg 840
aatgacagat cactcgctgt gtctgatgtc taccaccagg cagtgatcga tgttgatgag 900
gaaggagcgg aagctgccgc agcaacggcc atgccaatga tggtccgctg catgccggca 960
ccacctgtcg acttttttgt cgatcatcca ttcatcttct tcattgttac caagacgggc 1020
attcccgtgt tcatgggtca tgttgttcac cccgaatcca agtag 1065
Claims (10)
1.重组蛋白的下述任一种应用：
P1、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断抗原中的应用；
P2、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂中的应用；
P3、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂盒中的应用；
P4、所述重组蛋白在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试剂盒中的应用；
P5、所述重组蛋白在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试纸中的应用；
P6、所述重组蛋白在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试纸中的应用；
P7、所述重组蛋白在制备抗泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体中的应用；
所述重组蛋白为重组蛋白rEmSPNxj或重组蛋白rEgSPNxj；
所述重组蛋白rEmSPNxj是如下B1)、B2)B3)或B4)的蛋白质：
B1)氨基酸序列是序列表中序列4的蛋白质，
B2)氨基酸序列是序列表中序列4的第8-342位的蛋白质，
B3)在B1)或B2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质，
B4)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由B1)或B2)衍生的或与B1)或B2)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质；
所述重组蛋白rEgSPNxj是如下A1)、A2)、A3)或A4)的蛋白质：
A1)氨基酸序列是序列表中序列3的蛋白质，
A2)氨基酸序列是序列表中序列3的第8-355位的蛋白质，
A3)在A1)或A2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白，
A4)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的由A1)或A2)衍生的或与A1)或A2)所示的蛋白质具有80％以上的同一性的蛋白质。
2.与权利要求1中所述的重组蛋白相关的生物材料的下述任一种应用：
Q1、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断抗原中的应用；
Q2、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂中的应用；
Q3、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试剂盒中的应用；
Q4、所述生物材料在制备检测泡型包虫病抗体或/和囊型包虫病抗体的试剂盒中的应用；
Q5、所述生物材料在制备泡型包虫病或/和囊型包虫病诊断试纸中的应用；
Q6、所述生物材料在制备检测泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体的试纸中的应用；
Q7、所述生物材料在制备抗泡型包虫病或/和囊型包虫病抗体中的应用；
所述生物材料为下述任一种：
H1)编码权利要求1中所述重组蛋白rEmSPNxj或重组蛋白rEgSPNxj的核酸分子；
H2)含有H1)所述核酸分子的表达盒；
H3)含有H1)所述核酸分子的重组载体或含有H2)所述表达盒的重组载体；
H4)含有H1)所述核酸分子的重组微生物、含有H2)所述表达盒的重组微生物、或含有H3)所述重组载体的重组微生物；
H5)含有H1)所述核酸分子的重组细胞系或含有H2)所述表达盒的重组细胞系；
H6)含有H1)所述核酸分子的转基因动物组织或含有H2)所述表达盒的转基因动物组织；
H7)含有H1)所述核酸分子的宿主细胞或含有H2)所述表达盒的宿主细胞。
3.权利要求1中所述的重组蛋白。
4.权利要求2中所述的生物材料。
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于：
H1)所述编码重组蛋白rEmSPNxj的核酸分子为如下H-b1)、H-b2)或H-b3)所示的所述蛋白质的编码基因：
H-b1)编码链的编码序列是序列表中序列2的第22-1029位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
H-b2)核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；
H-b3)与H-b2)限定的cDNA或DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白质的cDNA分子或DNA分子；
或，
H1)所述编码重组蛋白rEgSPNxj的核酸分子为如下H-a1)、H-a2)或H-a3)所示的所述蛋白质的编码基因：
H-a1)编码链的编码序列是序列表中序列1的第22-1068位核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
H-a2)核苷酸是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；
H-a3)与H-a2)限定的cDNA或DNA分子杂交且编码具有相同功能的蛋白质的cDNA分子或DNA分子。
6.制备权利要求1所述重组蛋白的方法，其特征在于：
所述重组蛋白rEmSPNxj按照包括如下步骤的方法制备：将所述重组蛋白rEmSPNxj的编码基因导入受体大肠杆菌，得到表达所述重组蛋白rEmSPNxj的重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌，表达得到所述重组蛋白rEmSPNxj；
所述重组蛋白rEgSPNxj按照包括如下步骤的方法制备：将所述重组蛋白rEgSPNxj的编码基因导入受体大肠杆菌，得到表达所述重组蛋白rEgSPNxj的重组大肠杆菌，培养所述重组大肠杆菌，表达得到所述重组蛋白rEgSPNxj。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述重组蛋白EmSPNxj的编码基因为如下b)、b2)或b3)所示的基因：
b1)编码链的编码序列是序列2所示的DNA分子；
b2)编码链的编码序列是序列2的第22-1029位所示的DNA分子；
b3)与b1)或b2)限定的DNA分子具有80％以上的同一性且编码所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEmSPNxj；
所述重组蛋白rEgSPNxj的编码基因为如下a1)、a2)或a3)所示的基因：
a1)编码链的编码序列是序列1所示的DNA分子；
a2)编码链的编码序列是序列1的第22-1068位所示的DNA分子；
a3)与a1)或a2)限定的DNA分子具有80％以上的同一性且编码所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEgSPNxj。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：表达所述重组蛋白rEmSPNxj的重组大肠杆菌为将pET-30a-EmSPNxj导入大肠杆菌BL21(DE3)得到的表达氨基酸序列是序列4的所述棘球绦虫Serpin重组蛋白EmSPNxj的重组微生物；所述pET-30a-EmSPNxj为将载体pET-30a(+)的NdeI和HindIII识别位点间的小片段替换为序列2第4-1029位所示的DNA片段得到的重组载体；
表达所述重组蛋白rEgSPNxj的重组大肠杆菌为将pET-30a-EgSPNxj导入大肠杆菌BL21(DE3)得到的表达氨基酸序列是序列3的所述棘球绦虫Serpin重组蛋白rEgSPNxj的重组微生物，所述pET-30a-EgSPNxj为将载体pET-30a(+)的NdeI和Hind III识别位点间的小片段替换为序列1第4-1068位所示的DNA片段得到的重组载体。
9.含有权利要求1中所述的重组蛋白和/或权利要求2中所述生物材料的下述任意一种产品：
D1、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断抗原产品；
D2、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试剂；
D3、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试剂盒；
D4、泡型包虫病或/和囊型包虫病的诊断试纸；
D5、泡型包虫病或/和囊型包虫病的抗体；
D6、预防和/或治疗泡型包虫病或/和囊型包虫病的疫苗或药品。
10.根据权利要求1或2所述的应用或权利要求9所述的产品，其特征在于：所述泡型包虫病或/和囊型包虫病为下述任一种：
E1)、哺乳动物泡型包虫病或/和囊型包虫病，
E2)、灵长目泡型包虫病或/和囊型包虫病，
E3)、人泡型包虫病或/和囊型包虫病。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114292321A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 重庆澳龙生物制品有限公司 | 可溶性表达eg95蛋白及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020160491A1 (en) * | 2000-01-28 | 2002-10-31 | Jian Ni | Human Serpin polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
| CN101948521A (zh) * | 2010-09-17 | 2011-01-19 | 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 | 诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途 |
| CN102863524A (zh) * | 2012-08-28 | 2013-01-09 | 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 | 诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途 |
| CN111518188A (zh) * | 2020-04-21 | 2020-08-11 | 沈阳农业大学 | 牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原及其应用 |
-
2020
- 2020-09-18 CN CN202010986287.5A patent/CN112034156B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020160491A1 (en) * | 2000-01-28 | 2002-10-31 | Jian Ni | Human Serpin polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
| CN101948521A (zh) * | 2010-09-17 | 2011-01-19 | 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 | 诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途 |
| CN102863524A (zh) * | 2012-08-28 | 2013-01-09 | 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 | 诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途 |
| CN111518188A (zh) * | 2020-04-21 | 2020-08-11 | 沈阳农业大学 | 牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GENPEPT: "serine protease inhibitor(echinococcus granulosus)", pages 024353300, Retrieved from the Internet <URL:NCBI> * |
| 闫宏斌: "四种绦虫蛋白酶及其抑制剂的系统挖掘与功能分析", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》, pages 57 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114292321A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 重庆澳龙生物制品有限公司 | 可溶性表达eg95蛋白及其制备方法和应用 |
| CN114292321B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-06-16 | 重庆澳龙生物制品有限公司 | 可溶性表达eg95蛋白及其制备方法和应用 |
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