CN112022773A - 一种抗衰老防晒霜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗衰老防晒霜及其制备方法，所述防晒霜包括以下重量份的原料：灵芝子实体孢子粉发酵液5‑8重量份、大麻叶提取物3‑5重量份、甲氧基肉桂酸乙基己酯5‑9重量份、C12‑18酸甘油三酯3‑5重量份、环五聚二甲基硅氧烷5‑8重量份、二氧化钛10‑15重量份、聚硅氧烷‑15 3‑5重量份、苯基苯并咪唑磺酸钠3‑6重量份、4‑甲基苄亚基樟脑2‑4重量份、蔗糖硬脂酸酯2‑3重量份、褐藻提取物0.3‑1重量份、小核菌胶0.5‑2重量份、丁二醇3‑6重量份、精氨酸0.1‑1重量份、水35‑43重量份。本发明所述防晒霜，防晒的同时能够抗自由基，提高皮肤弹性，而且具有舒缓功效，非常适合敏感肌人群使用。

Description

一种抗衰老防晒霜及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种抗衰老防晒霜及其制备方法。

背景技术

灵芝又称林中灵，外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。灵芝久负盛名，具有滋补强体、固本扶正、养颜安神的功效，现代研究表明灵芝子实体水提物中还含有水溶性多糖、蛋白质、氨基酸、多肽等物质，具有抗辐射、抗衰老、美白、保湿等功效。

灵芝孢子粉是灵芝成熟时所释放的孢子，是灵芝有性生殖细胞，又称担孢子。灵芝孢子粉在保健品中应用很广泛，其水提物也和灵芝子实体一样含有多糖、蛋白质、多肽，但其成分结构和含量有所区别，同样的，这些成分也具有抗衰老、美白、保湿等功效。有文献对灵芝子实体和孢子粉成分进行分析对比，结果表明，孢子粉的蛋白含量约是子实体的两倍，脂肪含量孢子粉是子实体的五倍，但多糖含量子实体更高。灵芝孢子壁具有双层细胞壁，结实坚硬，不破壁的孢子粉只有10％-20％有效成分被人体吸收。

现阶段，灵芝提取活性成分广泛应用在多种化妆品中，CN104510697A公开了一种祛痘美白防晒霜，包括D组分：土茯苓20-30份、葛根10-15份、黄芪10-25份、菊花10-20份、麦冬30-40份、灵芝5-10份。制备方法为：取所述土茯苓、葛根、黄芪、菊花、麦冬、灵芝进行粉碎至110-120目筛,用乙醇-水体系作为溶剂，制备提取液,水浴蒸发乙醇，制备提取液的水溶液作为D相。CN111494254A公开了一种利用灵芝材料制备的护肤霜及其制备方法，包括以下重量份的原料：灵芝发酵液40-50份、乳木果油10-20份、氢化椰油5-9份、改性硅藻泥4-8份、保湿剂1-2份、增稠剂1-5份、矿物元素1-4份、乳化剂3-6份、纯化水30-50份。所述灵芝发酵液的制备方法为：将灵芝先洗浸，然后用去离子水清理，然后粉碎过100-200目，置于密封罐中进行磁化处理，磁化强度为1-5BT，磁化时间为10-20min，随后进行发酵处理，发酵过程中与蜂蜜按照重量比7:1混合，然后接种乳酸菌，发酵时间为10-15d，发酵温度为32-38℃，发酵结束，得到灵芝发酵液。

从以上公开的内容可以看出，目前化妆品中添加的灵芝提取物，采用了有机溶剂提取或发酵的方法提取活性成分，相对有机溶剂提取得到的活性成分，发酵可以降解大分子得到分子量更小即更易被皮肤吸收的小分子，促进功效物质的吸收利用而具有一定优势，但是，目前的发酵方法均是对灵芝子实体或灵芝孢子粉单一发酵，因而难以真正提取灵芝有效活性成分，使得所述方法制得的灵芝提取物在使用效果上存在局限性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗衰老防晒霜，所述灵芝子实体孢子粉发酵液采用灵芝子实体及孢子粉混合发酵而成，含有包括多糖、多肽、多酚及总黄酮在内的多种有益成分，具有优异的抗氧化、抗炎作用，易于添加并稳定存在于防晒霜体系中，帮助减少敏感人群对防晒剂的不适感，同时延缓皮肤衰老，防晒的同时使肌肤年轻态。

本发明的第二目的在于提供上述抗衰老防晒霜的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗衰老防晒霜，包括以下重量份的原料：灵芝子实体孢子粉发酵液5-8重量份、大麻叶提取物3-5重量份、甲氧基肉桂酸乙基己酯5-9重量份、C12-18酸甘油三酯3-5重量份、环五聚二甲基硅氧烷5-8重量份、二氧化钛10-15重量份、聚硅氧烷-15 3-5重量份、苯基苯并咪唑磺酸钠3-6重量份、4-甲基苄亚基樟脑2-4重量份、蔗糖硬脂酸酯2-3重量份、褐藻提取物0.3-1重量份、小核菌胶0.5-2重量份、丁二醇3-6重量份、精氨酸0.1-1重量份、水35-43重量份。

优选的，包括以下重量份的原料：灵芝子实体孢子粉发酵液6重量份、大麻叶提取物3重量份、甲氧基肉桂酸乙基己酯8重量份、C12-18酸甘油三酯5重量份、环五聚二甲基硅氧烷6重量份、二氧化钛10重量份、聚硅氧烷-15 5重量份、苯基苯并咪唑磺酸钠5重量份、4-甲基苄亚基樟脑3重量份、蔗糖硬脂酸酯3重量份、褐藻提取物0.5重量份、小核菌胶1重量份、丁二醇5重量份、精氨酸0.5重量份、水39重量份。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，其中，甲氧基肉桂酸乙基己酯、苯基苯并咪唑磺酸钠、4-甲基苄亚基樟脑为化学防晒剂，防晒机理在于，吸收紫外线之后，分子中的电子从低能轨道跃迁到高能轨道，能量再通过热量等形式散发出来，从而达到吸收紫外线防止对皮肤伤害的作用。二氧化钛为物理防晒剂，能够反射紫外线，同时也具有一定吸收紫外线的作用。具体的，对长波区紫外线的阻隔以散射为主，对中波区紫外线的阻隔以吸收为主。本发明通过将上述化学防晒剂和物理防晒剂复合使用并进行合理配比，制备得到的防晒霜具有较高的防晒指数，能够有效的防止皮肤晒黑、晒伤。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，C12-18酸甘油三酯、环五聚二甲基硅氧烷、聚硅氧烷-15为润肤剂成分，具有清爽不油腻的特点，同时能够帮助防晒剂均匀分散铺展。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，丁二醇、精氨酸为保湿剂成分，精氨酸为碱性氨基酸，可保持皮肤水分，柔滑肌肤，并减少皮屑的剥落的作用。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，小核菌胶可以起到调节粘度以稳定体系的作用，同时具有舒缓和光滑皮肤的作用。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，为了提升保存性能和更好的使用体验，还可以加入本领域常规的防腐剂、香精等成分，所述防腐剂包括但不限于苯氧乙醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、辛酰羟肟酸。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，所述的灵芝子实体孢子粉发酵液优选按如下方法制备而成：

(1)灵芝发酵基质制备：将灵芝子实体干燥，粉碎过80-120目筛处理，加入孢子粉，再加入蒸馏水制备成质量分数为7-13％的溶液，灭菌处理，得到灭菌后的灵芝发酵基质；

优选的，灵芝子实体与孢子粉的质量比为(10-1):(1-10)，更优选的，质量比为1:1。本发明人经过大量的试验发现，灵芝子实体和孢子粉采用上述的质量比发酵得到的发酵液中各活性成分的含量较高，制备得到的防晒霜具有更好的抗炎以及抗氧化作用。优选的，灭菌处理为在121℃下灭菌15min或在600MPa，25℃下进行超高压灭菌；

(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到培养基中，在30-37℃下培养44-52h，得到活化菌株；

优选的，所述的菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的一种或多种；更优选的，所述的菌种为菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种。本发明中所述的青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

本发明中各菌种的活化方法均采用现有方法进行，具体如下所示：

青春双歧杆菌活化培养基：MRS培养基，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，蒸馏水，pH值6.2±0.2；

青春双歧杆菌活化方法：在MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养48h，无氧条件下传3代。

纳豆芽孢杆菌活化培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15～20g/L，蒸馏水，pH值7.5±0.2；

纳豆芽孢杆菌活化方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上划线，35℃正常培养48h。

保加利亚乳杆菌活化培养基：MRS固体培养基，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，蒸馏水，pH值6.2±0.2；

保加利亚乳杆菌活化方法：在MRS培养基中划线，37℃恒温无氧培养48h。

酿酒酵母菌活化培养基：营养酵母葡萄糖液体培养基(NYDA固体培养基)，牛肉浸膏g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，正常PH。

酿酒酵母菌活化方法：在NYDA培养基上划线，30℃正常培养48h。

(3)混合发酵：将所述的活化菌株进行扩大培养后进行混合，得到混合种子液，将所述的混合种子液加入到所述的灭菌后的灵芝发酵基质中，进行发酵，得到初始灵芝子实体孢子粉发酵液；

优选的，混合种子液中青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的质量比为(1.5-2.5):1:(1.5:-2.5):(0.8-1.2)，更优选的，质量比为2:1:2:1。本发明人经过大量的试验发现，当菌种采用上述四种菌种混合时发酵时可以使孢子粉坚韧的双层细胞壁、子实体细胞壁打开，细胞膜破裂，胞内成分流出，活性物质利用率提高，可以提高制备的防晒霜的护肤功效。同时采用上述比例范围下的四种菌种发酵，灵芝子实体和孢子粉中的有益成分提取率高。

本发明中活化菌株进行扩大培养具体如下：

各培养基都是液体培养基：

酿酒酵母菌CICC 1252扩大培养培养基：NYDB液体培养基，牛肉浸膏g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，正常PH。

活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，30℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到酿酒酵母种子液。

纳豆芽孢杆菌CICC 10262扩大培养培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，PH 7。

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，35℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到纳豆芽孢杆菌种子液。

青春双歧杆菌CICC 6175培养基：MRS液体培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，pH值6.2±0.2。

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到青春双歧杆菌种子液；

保加利亚乳杆菌CICC 20271(耐氧训练)：

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到保加利亚乳杆菌种子液；

或液体培养基活化后，接种5％到装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到保加利亚乳杆菌种子液。

优选的，混合种子液以1.5-2.5％的质量分数加入到所述的灭菌后的灵芝发酵基质中。发酵温度为35-45℃，在转速为100-150rpm的摇床上进行发酵44-52h。

(4)发酵后处理：将所述的初始灵芝子实体孢子粉发酵液灭菌处理，菌体破碎，过滤，得到所述的灵芝子实体孢子粉发酵液。

优选的，灭菌处理为在121℃下灭菌15min或在600MPa，25℃下进行超高压灭菌；菌体破碎采用高压匀浆机或超声破碎，过滤采用离心、超滤膜、微滤膜或反渗透过滤。本发明人经过大量的试验发现，菌体破碎后部分灵芝细胞内物质溶出，让有益成分流出。使用HighPressure Homogenizer高压匀浆机，压力设定为100mpa，匀浆3次，出口温度为25℃。

根据本发明所述的抗衰老防晒霜，灵芝子实体孢子粉发酵液含有包括多糖、多肽、多酚及总黄酮在内的多种有益成分，具有优异的抗氧化、抗炎作用；大麻叶提取物含有没食子酸、儿茶酚、绿原酸、苯甲酸、香草酸、香豆酸、柚皮素以及酚类和黄酮等化合物，具有抗氧化性和抑制酪氨酸酶活性；褐藻提取物具有保湿、舒缓抗敏，促进皮肤新陈代谢及软化肌肤的效果。本发明通过将上述特定发酵方法制备得到的灵芝子实体孢子粉发酵液与大麻叶提取物、褐藻提取物进行复配，添加于防晒霜中，能够极大的提高防晒霜在舒缓刺激、增加皮肤弹性方面的作用，同时使防晒的同时具有一定的美白效果。

本发明还提供一种所述抗衰老防晒霜的制备方法，包括如下步骤：

(a)将水、丁二醇、小核菌胶混合后，加热至75-80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到A相；

(b)将甲氧基肉桂酸乙基己酯、C12-18酸甘油三酯、环五聚二甲基硅氧烷、二氧化钛、聚硅氧烷-15、苯基苯并咪唑磺酸钠、4-甲基苄亚基樟脑、蔗糖硬脂酸酯混合后，加热至75-80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到B相；

(c)将B相加入A相，均质，得到乳霜基质；

(d)将乳霜基质降温至45℃以下，然后加入灵芝子实体孢子粉发酵液、大麻叶提取物、褐藻提取物、精氨酸，搅拌均匀，即得所述抗衰老防晒霜。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明所述抗衰老防晒霜，防晒的同时提高皮肤弹性，抗炎舒缓，本发明防晒霜能够有效防止防晒剂可能导致的皮肤不适感，非常适合敏感肌人群使用。

(2)本发明所述抗衰老防晒霜，灵芝子实体孢子粉发酵液采用灵芝子实体和孢子粉进行混合发酵而成，本发明特定的发酵方法制得的灵芝子实体孢子粉发酵液有益成分含量显著增加。发酵菌水解灵芝孢子双层细胞壁、灵芝子实体细胞壁，使胞内物质流出，从而促进有效成分的提取率，同时发酵可以降低大分子得到分子量更小即更易被皮肤吸收的小分子，促进功效物质吸收利用。

(3)本发明所述抗衰老防晒霜，制备方法简单，工艺稳定可控，适宜规模化生产应用。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

灵芝子实体孢子粉发酵液的制备

制备例1

本制备例的灵芝子实体孢子粉发酵液的制备方法，包括如下步骤：

(1)灵芝发酵基质制备：将灵芝子实体干燥，粉碎过100目筛处理，加入孢子粉，灵芝子实体与孢子粉的质量比为1:1，再加入蒸馏水制备成质量分数为10％的溶液，在121℃下灭菌15min处理，得到灭菌后的灵芝发酵基质；

(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到培养基中进行培养，所述的菌种为菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种，得到活化菌株；具体的菌种活化如下：

青春双歧杆菌活化培养基：MRS培养基，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，蒸馏水，pH值6.2±0.2；

青春双歧杆菌活化方法：在MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养48h，无氧条件下传3代。

纳豆芽孢杆菌活化培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15～20g/L，蒸馏水，pH值7.5±0.2；

纳豆芽孢杆菌活化方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上划线，35℃正常培养48h。

保加利亚乳杆菌活化培养基：MRS固体培养基，牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，蒸馏水，pH值6.2±0.2；

保加利亚乳杆菌活化方法：在MRS培养基中划线，37℃恒温无氧培养48h。

酿酒酵母菌活化培养基：营养酵母葡萄糖液体培养基(NYDA固体培养基)，牛肉浸膏g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，正常PH。

酿酒酵母菌活化方法：在NYDA培养基上划线，30℃正常培养48h。

(3)混合发酵：将所述的活化菌株进行扩大培养后进行混合，得到混合种子液，混合种子液中青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252的质量比2:1:2:1，将所述的混合种子液以2％的质量分数加入到所述的灭菌后的灵芝发酵基质中，进行发酵，发酵温度为40℃，在转速为125rpm的摇床上进行发酵48h，得到初始灵芝子实体孢子粉发酵液；活化菌株扩大培养具体如下：

各培养基都是液体培养基：

酿酒酵母菌CICC 1252扩大培养培养基：NYDB液体培养基，牛肉浸膏g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，正常PH。

活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，30℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到酿酒酵母种子液。

纳豆芽孢杆菌CICC 10262扩大培养培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，PH 7。

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，35℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到纳豆芽孢杆菌种子液。

青春双歧杆菌CICC 6175培养基：MRS液体培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，pH值6.2±0.2。

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到青春双歧杆菌种子液；

保加利亚乳杆菌CICC 20271(耐氧训练)：

固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^8cfu/mL时结束，得到保加利亚乳杆菌种子液。

(4)发酵后处理：将所述的初始灵芝子实体孢子粉发酵液在121℃下灭菌15min处理，采用高压匀浆机进行菌体破碎，压力设定为100mpa，匀浆3次，出口温度为25℃，离心过滤，得到所述的灵芝子实体孢子粉发酵液。

以下制备例中改变某一项或几项实验参数，其他操作均与制备例1相同，具体的参数设定参见表1，制备例中的青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

表1

对比例1

本对比例中的灵芝子实体孢子粉发酵液的制备方法为：将灵芝子实体粉碎过100目筛处理，加入孢子粉，灵芝子实体与孢子粉的质量比为1：1，加水配制成质量分数为10％的溶液，在121℃下灭菌15min处理，然后在40℃下保温48h，再在121℃下灭菌15min，离心分离取上清液，即得到清水提取液。

对比例2

本对比例中的灵芝子实体孢子粉发酵液的制备方法与制备例1相同，不同之处在于，将孢子粉和灵芝子实体替换为相同重量的灵芝子实体进行发酵。

对比例3

本对比例中的灵芝子实体孢子粉发酵液的制备方法与制备例1相同，不同之处在于，将孢子粉和灵芝子实体替换为相同重量的孢子粉进行发酵。

对比例4

本对比例中的灵芝子实体孢子粉发酵液的制备方法与制备例1相同，不同之处在于，步骤(4)中菌体不进行破碎处理。

抗衰老防晒霜的制备

以下实施例及对比例中，大麻叶提取物购自云南太瑞生物科技有限公司,褐藻提取物购自森馨科技(中国)有限公司。

表2抗衰老防晒霜配方

制备方法：

(1)将水、丁二醇、小核菌胶混合后，加热至80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到A相；

(2)将甲氧基肉桂酸乙基己酯、C12-18酸甘油三酯、环五聚二甲基硅氧烷、二氧化钛、聚硅氧烷-15、苯基苯并咪唑磺酸钠、4-甲基苄亚基樟脑、蔗糖硬脂酸酯混合后，加热至80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到B相；

(3)将B相加入A相，3000r/min均质5min，得到乳霜基质；

(4)将乳霜基质降温至45℃以下，然后加入灵芝子实体孢子粉发酵液、大麻叶提取物、褐藻提取物、精氨酸、苯甲酸钠，搅拌均匀，即得所述抗衰老防晒霜。

实验例

一、灵芝子实体孢子粉发酵液成分的测定

分别测定制备例1-14以及对比例1-4制备的灵芝子实体孢子粉发酵液，多糖测试方法参照SNT4260；采用BCA法测定蛋白多肽的含量；采用Folin-Ciocalteu法测定多酚含量；采用Al(NO₃)₃-NaNO₂-NaOH法测定总黄酮含量，结果见下表。

表3

组别	多糖(mg/mL)	多肽(mg/mL)	多酚(mg/mL)	总黄酮(mg/mL)
					制备例1	3.17	4.24	0.057	0.033
制备例2	3.12	4.18	0.053	0.031
					制备例3	3.08	4.15	0.051	0.029
制备例4	2.84	3.86	0.037	0.018
					制备例5	2.76	3.79	0.032	0.015
制备例6	3.01	4.02	0.045	0.026
					制备例7	2.98	4.06	0.047	0.025
制备例8	2.91	3.97	0.041	0.023
					制备例9	3.11	4.19	0.052	0.030
制备例10	3.08	4.11	0.051	0.028
					制备例11	2.85	3.79	0.032	0.017
制备例12	2.89	3.82	0.034	0.020
					制备例13	3.15	4.19	0.055	0.032
制备例14	3.14	4.21	0.053	0.030
					对比例1	1.04	2.03	0.033	0.019
对比例2	3.25	3.88	0.052	0.021
					对比例3	1.93	3.29	0.041	0.014
对比例4	2.81	3.75	0.038	0.021

从表1和表3中制备例1-5中可以看出，采用本发明的混合种子液青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC1252的质量比为(1.5-2.5):1:(1.5:-2.5)：(0.8-1.2)下制备的灵芝子实体孢子粉发酵液的多糖、多肽、多酚及总黄酮成分含量相对较高，当比例为2:1:2:1时即制备例1的方案时各成分的含量最高，说明采用本发明的四种菌种在上述比例范围内进行发酵，灵芝子实体和孢子粉中的有益成分提取率最高。

从制备例1-3和制备例6-8中的数据可以看出，采用四种菌种发酵比采用少于四种菌种发酵灵芝子实体和孢子粉中发酵液中的有益成分高。

从制备例1和制备例9-12的数据可以看出，采用本发明的孢子粉和子实体的质量比1：1下发酵得到的灵芝子实体和孢子粉中发酵液中的有益成分高。

从对比例1-4的数据中可以看出，采用水提制备灵芝子实体和孢子粉水提液、单独采用孢子粉或灵芝子实体发酵得到的发酵液中的有益成分较低，对于步骤(4)得到的菌体进行破碎处理，可以明显提高发酵液中的有益成分含量。

二、灵芝子实体孢子粉发酵液的抗炎作用实验

1、实验方法

将RAW264.7细胞接种至96孔板，用1μg/ml LPS进行诱导刺激，同时加入待测化合物(终浓度50μM)处理，设置不含药物组和L-NMMA阳性药物组做对照。细胞过夜培养后取培养基检测NO生成，在570nm处测定吸光值。在剩余培养基中加入MTS进行细胞存活率检测，排除化合物对细胞的毒性影响。

NO生成抑制率(％)＝(非药物处理组OD_570nm-样品组OD_570nm)/非药物处理组OD_570nm×100％

IC50(50％concentration of inhibition)按Reed&Muench法计算。

2、试剂

小鼠单核巨噬细胞RAW264.7购自中科院上海细胞库，DMEM培养基和胎牛血清购自BI公司。Griess Reagent、LPS及对照药物L-NMMA购自Sigma公司。

3、实验结果

表4

4、结果分析

一氧化氮(nitric oxide,NO)具有广泛而重要的生物学调控功能，在炎症、肿瘤及心血管系统等均有重要作用。当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等刺激时，会生成大量的诱导型一氧化氮合成酶(induced NO synthase，iNOS)，产生NO进行免疫应答，因此抑制NO生成是化合物抗炎活性的直接指标。将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7用LPS脂多糖诱导一氧化氮合成酶的生成，同时加入待测化合物处理，吸取培养基通过Griess法在570nm波长测吸光值来检测亚硝酸盐(NO₂ ^-)。

从上表可以看出，采用本发明的方法制备的灵芝子实体孢子粉发酵液能够抑制一氧化氮的生成并且不产生细胞毒性，实施例1-12的数据可以看出，当采用灵芝子实体与孢子粉的质量比不在(10-1):(1-10)范围内时，一氧化氮抑制率明显降低，实施例1与对比例1-4的数据可以看出，采用水提制备灵芝子实体和孢子粉水提液、单独采用孢子粉或灵芝子实体发酵得到的发酵液对一氧化氮的抑制率明显降低，进而证明本发明制备的灵芝发酵液具有较好的抗炎作用，且所述抗炎作用与本发明包括菌种选择、菌种之间的比例，灵芝子实体与孢子粉的质量比在内的多种参数在内的特定的发酵方法有明显关联。

三、灵芝子实体孢子粉发酵液的抗氧化作用实验

DPPH自由基清除试验取3ml不同制备例的灵芝发酵液与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1)；取等体积的去离子水与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2)；取等体积的无水乙醇与待测液混匀(A3)；反应30min后，在517nm下测吸光度值。按式(1)计算DPPH自由基清除率。

E_DPPH·＝A₂+A₃-A₁/A₂×100％

E_DPPH·——APPH自由基清除率，％；

A₁——样品与DPPH混合液的吸光度

A₂——去离子水与DPPH混合液的吸光度

A₃——无水乙醇与DPPH混合液吸光度

表5

从上表可以看出，本发明制备得到的灵芝子实体孢子粉发酵液具有较好的清除自由基的效果，且制备例1明显最优，而在制备例1基础上改变发酵条件以后，最终制备得到的发酵液的清除自由基效果均有所降低，说明本发明特定的发酵条件的组合取得了较好的抗氧化效果。

四、本发明抗衰老防晒霜对皮肤弹性的影响试验

选取25名志愿者进行试验，随机分为5组，每组5名，各组分别使用本发明实施例3以及对比例5-8制备得到的防晒霜，每天早晚均匀涂抹相应样品1次，涂抹量为2.0mg±0.1mg样品/cm²，连续使用4周后，彻底清洁面部，使用皮肤弹性测试仪Cutometer dualMPA580进行皮肤弹性测量。皮肤弹性值用无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好。测量时，同一测试点取3次测量平均值，所有志愿者的测试由同一测量人员完成。结果见下表。

表6

结果可以看出，与对比例5-8制备得到的防晒霜相比，使用本发明实施例3制备得到的防晒霜以后R2值较使用前明显增加，说明本发明特定的原料及原料制备方法的组合具有较好的提高皮肤弹性的作用。

五、本发明抗衰老防晒霜人体皮肤斑贴试验

选取90名敏感肌志愿者进行试验,男女各半,年龄分布在25～38岁,敏感肌入选标准为符合以下至少一项者：1、看上去皮肤较薄，容易过敏，脸上的红血丝明显(扩张的毛细血管)；2、皮肤容易泛红，一般温度变化，过冷或过热，皮肤都容易泛红、发热；3、容易受环境因素(接触性敏感肌、发红性敏感肌、压力性敏感肌)、季节变化及面部保养品刺激。选用合格的斑试器,以封闭式斑贴试验方法,分别将实施例1-3制备得到的防晒霜受试物约0.03g涂于斑试器内,外用胶带贴敷于受试者背部,24h去除受试物,于斑贴试验0.5、24、48h观察皮肤反应,根据《化妆品卫生规范》中皮肤反应分级标准记录其结果。结果见下表。

表7斑贴试验皮肤不良反应分级标准

皮肤不良反应	分级
		无反应	0
淡红斑	1
		红斑、浸润、丘疹	2
红斑、水肿、丘疹、水疱	3
		红斑、水肿、大疱	4

表8人体斑贴试验结果

结果表明，本发明防晒霜不会导致皮肤刺激，因而适合敏感肌人群使用。

六、本发明抗衰老防晒霜的防晒效果测试

选取5名受试者，按照《化妆品安全技术规范(2015)》中防晒化妆品指数(SPF值)测定方法，测定了防晒霜SPF值。

表9 SPF值测试

选取5名受试者，按照《化妆品安全技术规范(2015)》中防晒化妆品长波紫外线防护指数(PFA值)测定方法，测定防晒霜PFA值。

表10 PFA值测试

结果表明，本发明抗衰老防晒霜防晒指数SPF值均大于50，PFA值均大于8，PA表现为+++，说明本发明防晒霜具有较好的防止皮肤晒黑、晒伤的效果。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种抗衰老防晒霜，其特征在于，包括以下重量份的原料：灵芝子实体孢子粉发酵液5-8重量份、大麻叶提取物3-5重量份、甲氧基肉桂酸乙基己酯5-9重量份、C12-18酸甘油三酯3-5重量份、环五聚二甲基硅氧烷5-8重量份、二氧化钛10-15重量份、聚硅氧烷-15 3-5重量份、苯基苯并咪唑磺酸钠3-6重量份、4-甲基苄亚基樟脑2-4重量份、蔗糖硬脂酸酯2-3重量份、褐藻提取物0.3-1重量份、小核菌胶0.5-2重量份、丁二醇3-6重量份、精氨酸0.1-1重量份、水35-43重量份。

2.根据权利要求1所述抗衰老防晒霜，其特征在于，包括以下重量份的原料：灵芝子实体孢子粉发酵液6重量份、大麻叶提取物3重量份、甲氧基肉桂酸乙基己酯8重量份、C12-18酸甘油三酯5重量份、环五聚二甲基硅氧烷6重量份、二氧化钛10重量份、聚硅氧烷-15 5重量份、苯基苯并咪唑磺酸钠5重量份、4-甲基苄亚基樟脑3重量份、蔗糖硬脂酸酯3重量份、褐藻提取物0.5重量份、小核菌胶1重量份、丁二醇5重量份、精氨酸0.5重量份、水39重量份。

3.根据权利要求1或2所述抗衰老防晒霜，其特征在于，所述的灵芝子实体孢子粉发酵液通过如下方法制备而成，具体包括如下步骤：

(1)灵芝发酵基质制备：将灵芝子实体干燥，粉碎过80-120目筛处理，加入孢子粉，再加入蒸馏水制备成质量分数为7-13％的溶液，灭菌处理，得到灭菌后的灵芝发酵基质；

(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到培养基中，在30-37℃下培养44-52h，得到活化菌株；

(3)混合发酵：将所述的活化菌株进行扩大培养后进行混合，得到混合种子液，将所述的混合种子液加入到所述的灭菌后的灵芝发酵基质中，进行发酵，得到初始灵芝子实体孢子粉发酵液；

(4)发酵后处理：将所述的初始灵芝子实体孢子粉发酵液灭菌处理，菌体破碎，过滤，得到所述的灵芝子实体孢子粉发酵液。

4.根据权利要求3所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(1)中灵芝子实体与孢子粉的质量比为(10-1):(1-10)，优选的，质量比为1:1。

5.根据权利要求3所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(2)中所述的菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的一种或多种，优选的，所述的菌种为菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种。

6.根据权利要求5所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(3)中混合种子液中青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC1252的质量比为(1.5-2.5):1:(1.5:-2.5):(0.8-1.2)，优选的，质量比为2:1:2:1。

7.根据权利要求3所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(3)中混合种子液以1.5-2.5％的质量分数加入到所述的灭菌后的灵芝发酵基质中。

8.根据权利要求3所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(3)中发酵温度为35-45℃，在转速为100-150rpm的摇床上进行发酵44-52h。

9.根据权利要求3所述抗衰老防晒霜，其特征在于，步骤(2)和(4)中灭菌处理为在121℃下灭菌15min或在600MPa，25℃下进行超高压灭菌，优选的，步骤(4)中菌体破碎采用高压匀浆机或超声破碎，过滤采用离心、超滤膜、微滤膜或反渗透过滤。

10.一种权利要求1-9任意一项所述抗衰老防晒霜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将水、丁二醇、小核菌胶混合后，加热至75-80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到A相；

(b)将甲氧基肉桂酸乙基己酯、C12-18酸甘油三酯、环五聚二甲基硅氧烷、二氧化钛、聚硅氧烷-15、苯基苯并咪唑磺酸钠、4-甲基苄亚基樟脑、蔗糖硬脂酸酯混合后，加热至75-80℃，边加热边搅拌使分散均匀，得到B相；

(c)将B相加入A相，均质，得到乳霜基质；

(d)将乳霜基质降温至45℃以下，然后加入灵芝子实体孢子粉发酵液、大麻叶提取物、褐藻提取物、精氨酸，搅拌均匀，即得所述抗衰老防晒霜。