CN112014383B - 一种用于均相化学发光的光敏剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于均相化学发光的光敏剂及其制备方法和应用,将四氨基酞菁铜、四氟邻苯二甲腈、第一催化剂、羟基乙酸乙酯、pH调节剂、第二催化剂加入到甲苯中,N2保护下加热回流反应4‑6小时;其中四氨基酞菁铜、四氟邻苯二甲腈、第一催化剂、羟基乙酸乙酯、pH调节剂、第二催化剂的质量比为50~100:2.12~3.15:0.02~0.10:30~90:50~120:0.01~1.5;四氨基酞菁铜与甲苯的质量体积比为50~100mg:15mL;冷却至室温,蒸除溶剂,用极性溶剂溶解并过滤;滤液经减压蒸干后,重结晶得到固体;用无水乙醇溶解,搅拌下加入含γ‑酰胺键和巯基的三肽制得所述光敏剂。采用所述光敏剂制备供体微球用于均相化学发光的检测方法,检测灵敏度高,检测线性范围宽,精密度和重复性良好。
Description
技术领域
本发明属于均相化学发光检测技术领域,尤其是涉及一种用于均相化学发光的光敏剂及其制备方法和应用。
背景技术
均相化学发光技术是一种基于微粒与微粒之间靠近的效应用于分析物的均相检测方法,包含有两个捕获微球,其中供体微球中含包裹有光敏剂分子,当激光激发供体微球中的光敏剂分子,每秒可产生6万个以上单线态氧分子,通过生物分子的近距离结合,能量从供体微球到受体微球发生转移,受体微球上具有发光化合物,发光化合物与供体微球产生的单线态氧分子反应并最终产生发光信号,为检测器探测到,其发光信号与分析物的浓度呈正相关,达到定量检测的目的,具有均相、免清洗分离、操作简单、试剂稳定性好的技术优势。
均相化学分析中供体微球和受体微球的发光效率决定了方法的检测灵敏度;供体微球中常用的典型光敏剂有卟啉、酞菁、亚甲基蓝、玫瑰红等,受体微球中常用的发光化合物为镧系元素配合物;但采用现有的光敏剂,将其应用于均相化学发光的检测方法中,依然存在检测方法的灵敏度不高、线性范围窄的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供一种用于均相化学发光的光敏剂及其制备方法和应用,将光敏剂应用于均相化学发光的检测方法中,检测方法的灵敏度高,检测线性范围宽。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:
一种用于均相化学发光的光敏剂,由下列的原料制成,各原料的重量份如下:四氨基酞菁铜50~100份、四氟邻苯二甲腈2.12~3.15份、第一催化剂0.02~0.10份、羟基乙酸乙酯30~90份、pH调节剂50~120份、第二催化剂0.01~1.5份,含γ-酰胺键和巯基的三肽10~100份。
所述的第一催化剂选自铜、氯化亚铜或氯化铜。
所述的pH调节剂选自Na2CO3或K2CO3。
所述的第二催化剂选自吡啶、联吡啶或吡唑。
所述的含γ-酰胺键和巯基的三肽选自谷胱甘肽、半胱氨酸或甘氨酸。
一种用于均相化学发光技术的光敏剂的制备方法,包括以下的步骤:
1)将四氨基酞菁铜、四氟邻苯二甲腈、第一催化剂、羟基乙酸乙酯、pH调节剂、第二催化剂加入到盛有甲苯的反应釜中,溶液的pH值为7.5~8.2,在N2保护下加热回流反应4-6小时;其中所述四氨基酞菁铜、所述四氟邻苯二甲腈、所述第一催化剂、所述羟基乙酸乙酯、所述pH调节剂、所述第二催化剂的质量比为50~100:2.12~3.15:0.02~0.10:30~90:50~120:0.01~1.5;所述四氨基酞菁铜与所述甲苯的质量体积比为50~100mg:15mL;
2)冷却至15-30℃,真空条件下蒸除溶剂后,用极性溶剂溶解并过滤,得到滤液;
3)滤液经减压蒸干后,在非极性溶剂中重结晶得到靛蓝色产物;
4)称取靛蓝色产物于烧瓶中,加入适量的无水乙醇将其溶解,不断搅拌,再加入含γ-酰胺键和巯基的三肽,所述靛蓝色产物与所述含γ-酰胺键和巯基的三肽的质量比为21:5~50,搅拌4-6小时后旋蒸干燥得到所述光敏剂。
所述的步骤1)中的所述的第一催化剂选自铜、氯化亚铜或氯化铜;所述的pH调节剂选自Na2CO3或K2CO3;所述的第二催化剂选自吡啶、联吡啶或吡唑;所述的步骤4)中的所述的含γ-酰胺键和巯基的三肽选自谷胱甘肽、半胱氨酸或甘氨酸。
所述的步骤2)中的所述的极性溶剂为氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙腈中的一种或者任意比例的混合物。
所述的步骤3)中的所述的非极性溶剂为正己烷、石油醚、环己烷中的一种或者任意比例的混合物。
一种用于均相化学发光技术的光敏剂在制备均相化学发光技术中供体微球的应用。
与现有技术相比,本发明的优点在于:
本发明提供了一种用于均相化学发光的光敏剂和制备方法及应用,采用酞菁类光敏剂与四氟邻苯二甲腈的结合,在酞菁平面结构引入吡啶、联吡啶、吡唑等杂环芳分子本取代基进行修饰,同时加入具有抗氧化剂的含γ-酰胺键和巯基的三肽,合成光敏剂;实验数据表明采用所述光敏剂制备供体微球用于均相化学发光的检测方法,相比于现有技术的检测方法,其最低检测限可达到0.0526APLU/ml(37℃),检测范围为0.0526APLU/ml-300APLU/ml,批间CV小于10%,批内CV小于1.5%,精密性良好,符合要求;且未出现明显的HOOK效应,无需对检测样本进行稀释处理,重复性好。
附图说明
图1为本发明中实施例10的方法测试抗心磷脂抗体IgA标准品的光量子RLU与相应的标准品浓度的关系曲线图;
图2为本发明中实施例10的方法检测抗心磷脂抗体IgA的检测浓度与INOVADiagnosis测值对比的关系曲线图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
主要试剂:
主要仪器设备:
实施例1
一种用于均相化学发光的光敏剂的制备方法,包括以下的步骤:
a、将50mg四氨基酞菁铜、2.12mg四氟邻苯二甲腈、0.02mg氯化铜、30mg羟基乙酸乙酯、50mg K2CO3和0.01mg吡啶加入到盛有15mL甲苯的反应釜中,溶液的pH值为7.5,在N2保护下加热回流反应4小时;
b、冷却至室温后,真空条件下蒸除溶剂,用60mL氯仿溶解并过滤,得到滤液;
c、滤液减压蒸干后,在正己烷中重结晶得到靛蓝色产物,产率约为61%;
d、称取42mg靛蓝色产物于烧瓶中,加入5mL无水乙醇将其溶解,不断搅拌下加入10mg L-还原型谷胱甘肽,6小时后旋蒸、干燥得到光敏剂。
实施例2
一种用于均相化学发光的光敏剂的制备方法,包括以下的步骤:
a、将80mg四氨基酞菁铜、2.80mg四氟邻苯二甲腈、0.05mg氯化亚铜、60mg羟基乙酸乙酯、90mg Na2CO3和1.5mg联吡啶加入到盛有15mL甲苯的反应釜中,溶液的pH值为8.0,在N2保护下加热回流反应6小时;
b、冷却至室温后,真空条件下蒸除溶剂,用60mL甲醇溶解并过滤,得到滤液;
c、滤液减压蒸干后,在环己烷中重结晶得到靛蓝色产物,产率约为68%;
d、称取靛蓝色产物42mg于烧瓶中,加入5mL无水乙醇将其溶解,不断搅拌下加入30mg L–半胱氨酸,4小时后旋蒸、干燥得到光敏剂。
实施例3
一种用于均相化学发光的光敏剂的制备方法,包括以下的步骤:
a、将100mg四氨基酞菁铜、3.15mg四氟邻苯二甲腈、0.10mg铜、90mg羟基乙酸乙酯、120mg K2CO3和0.15mg吡唑加入到盛有15mL甲苯的反应釜中,溶液的pH值为8.2,在N2保护下加热回流反应6小时;
b、冷却至室温后,真空条件下蒸除溶剂,用60mL丙酮溶解并过滤,得到滤液;
c、滤液减压蒸干后,在石油醚中重结晶得到靛蓝色产物,产率约为71%;
d、称取42mg靛蓝色产物于烧瓶中,加入5mL无水乙醇将其溶解,不断搅拌下加入100mg L–甘氨酸,5小时后旋蒸、干燥得到光敏剂。
实施例4
供体微球的制备
(1)取4ml20%浓度的150nm、400mg的羧基化微球,分别用4ml水和4ml无水乙醇洗涤2次,转速为30000rpm/min下离心15min,以3ml氨基乙醇稀释在25ml圆烧瓶中反应,加热至105℃搅拌10min;
(2)在步骤(1)的溶液中加入40mg实施例1中的光敏剂,搅拌5min,然后在5min内缓慢加入1ml 0.1M NaOH,在此过程中,溶液的温度要一直保持在105℃,然后温度在2小时内慢慢降到室温,冷却后,混合物用乙醇稀释到20ml,离心弃去上清,其中,离心转速为30000rpm/min,离心时间为30min,在乙醇中超声重悬沉淀;
(3)重复离心3次,沉淀以水重悬,沉淀用5ml 10%乙醇水溶液中重悬至40ml体积,得到供体微球。
实施例5
供体微球标记链霉亲和素(A1)的制备
供体微球混悬液处理:吸取100mg的实施例4的受体微球于高速冷冻离心机中离心,弃去上清,加入4ml的MES缓冲液,用超声细胞破碎仪上重悬浮,加入MES缓冲液调节供体微球浓度200mg/ml;
链霉亲和素溶液配制:称量链霉亲和素,用MES缓冲液溶解至10mg/ml;
混合:将处理好的供体微球混悬液,10mg/ml的链霉亲和素以及MES缓冲液,以2:5:1的体积比进行混合,迅速混匀,得到反应液;
反应:用MES缓冲液配制25mg/mlNHS溶液,按照与反应液1:25的体积比加入,迅速混匀,37℃旋转反应24小时;
封闭:用MES缓冲液配制75mg/ml的Gly溶液和250mg/ml的BSA溶液,混合,得到混合液,混合液与反应液体积比为5:10迅速混匀,37℃反应12小时;
清洗:向反应好的溶液中加入MES缓冲液,高速冷冻离心机离心,弃上清,加入新鲜MES缓冲液超声法重新悬浮,再次离心,清洗三遍,最后用少量的25mmol/L TAPS缓冲液进行悬浮,测定固含量,再用25mmol/L TAPS缓冲液调节浓度至10mg/ml,得到供体微球标记链霉亲和素(A1)。
实施例6
受体微球能量剂前体的制备
(1)在500ml无水甲醇中加入10~23.0g醋酸铵、16.3g N-[2’-吡啶基)-2一氧代乙基]吡啶碘化合物,和10.76g 1-(3-吡啶基)-3-(二甲氨基)-2-丙烯-1-酮溶液在搅拌下回流24小时;反应液冷至室温后,在-15℃放置1小时,过滤收集沉淀,用冷甲醇(-15℃左右)充分洗涤后,用乙腈重结晶,得到化合物①共6.91克,收率为43.8%;
(2)将4.5克化合物①加入到盛有45ml硫酸、45ml醋酸和12ml水的溶液中,75~80℃下搅拌反应48小时后,反应液加入到300ml冰水中,过滤收集沉淀,用水充分洗涤后,再用无水乙醇洗涤,真空干燥后得到水解产物4.80g;取400ml无水甲醇,放置在加入8g氯化亚砜冰水中冷却,搅拌15分钟后,加入4.80g上述的水解产物,反应液搅拌回流8小时后,室温下继续搅拌16小时后,用无水硫酸钠干燥,蒸去溶剂后,生成物用硅胶柱层析分离,展开剂为体积比为99:1的二氯甲烷-甲醇,收集最先洗出的第一部分;蒸去溶剂后,用甲苯重结晶,真空干燥,得化合物②共2.5g,收率为48.1%;
(3)将1.94g、2.8mmol化合物②加入到120ml乙醇中,然后加入4g氢氧化钾和10ml水,反应液搅拌回流3小时;减压蒸去溶剂,得到沉淀物,将沉淀物溶于150ml水中,过滤除去微量不溶物;向搅拌下的溶液中慢慢滴入的三氟乙酸水溶液到三氟乙酸水溶液充分洗涤,真空干燥,得化合物③共0.89g,收率为54.1%;
(4)将TTTA.2H2O在盛有P2O5真空干燥器中充分干燥后,取181.7mg溶于5ml干燥N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌下加入34.5mg的N-羟基琥珀酰胺(NHS)和61.9mg的N,N’-二环已基碳二亚胺(DCC),室温下搅拌24小时后,过滤除去不溶物,得到滤液;滤液经减压浓缩除去溶剂后,用少量异丙醇洗涤,真空干燥,得化合物④共180mg,收率为85.6%;
(5)将5mg的链霉亲合素(SA)溶于10ml的pH值9.1的0.1mol/L碳酸氢钠缓冲溶液中,再加入10mgNHS-TTTA,室温下搅拌反应3小时后,溶液在4℃下用含有0.25g NaN3的0.1mol/L碳酸氢钠溶液进行三次透析,每次24小时,除去末反应的标记物再在溶液中加入EuCl3溶液其中加入的Eu3+与化合物④的物质的量之比为1.5:2,即得到标记链霉亲和素⑤溶液。
实施例7
受体微球的制备
(1)将4ml 20%浓度的80nm、400mg的羧基化微球,分别用4ml水和4ml无水乙醇洗涤2次,转速为30000rpm/min下离心15分钟,加入3ml氨基乙醇,置于25ml圆烧瓶中搅拌反应,加热至105℃条件下搅拌10min;
(2)在步骤(1)中加入40mg标记链霉亲和素⑤溶液搅拌5min,然后在5分钟内缓慢加入1ml 0.1M NaOH,在此过程中,溶液的温度要一直保持在105℃然后温度在2小时内慢慢降到室温,冷却后,混合物用乙醇稀释到20ml,转速为30000rpm/min,时间为30min的条件下离心,弃去上清,在乙醇中超声重悬沉淀;重复离心,沉淀以水重悬,沉淀用5ml 10%乙醇水溶液中重悬至40ml体积;在该溶液中加入20mg的BSA和25mg的NaN3后,-20℃下冷冻保存,得到受体微球。
实施例8
受体微球标记抗心磷脂抗原(B)的制备
受体微球混悬处理:吸取100mg的受体微球于高速冷冻离心机中离心,弃去上清液,加入2mL的MES缓冲液,超声破碎至微粒重新悬浮,加入MES缓冲液调节微粒浓度至100mg/ml;
抗原处理:抗心磷脂抗原用0.05M pH 6.0的MES缓冲液透析,透析完成后测定浓度,并调节浓度至8mg/ml;
反应:MES缓冲液配制成40mg/ml的EDAC溶液,受体微球与EDAC溶液按照质量体积比为100mg/ul加入,迅速反应混匀16小时,得到反应液;
封闭:用MES缓冲液配制200mg/mlBSA溶液,按照与反应液10:8的体积比迅速混匀,37℃旋转反应16小时;
清洗:用MES缓冲液离心清洗四次,最后用25mmol/L TAPS进行悬浮,调节浓度至10mg/ml,得到受体微球标记抗心磷脂抗原(B)。
实施例9
Bio-鼠抗人I心磷脂抗原(C)的制备
鼠抗人I心膦脂抗原的处理:吸取一定量的鼠抗人I心磷脂抗原,2~8℃透析于0.1M pH8.5 NaHCO3溶液;将透析好的鼠抗人I心磷脂抗原取样测定抗原浓度;
Biotin-DMSO溶液:用DMSO配制10mg/ml的Biotin溶液;
标记:按照每1mg鼠抗人I心磷脂抗原需要n/10*2ul(n为标记比例20)的Biotin-DMSO溶液,将其迅速混匀,2~8℃下旋转混合反应12小时;
透析:2~8℃下将标记好Biotin的鼠抗人I心磷脂抗原放置于生物素标记的0.1MpH8.5 NaHCO3中透析;
定容:将透析好的蛋白吸出转移至容器中,取样测定蛋白浓度,实验结果得出后即为蛋白浓度。
实施例10
将制备的两种微球包被蛋白的均相化学发光的方法应用于抗心磷脂抗体IgA(人血清)的测定
在反应孔中分别加入25μL抗心磷脂抗体IgA样品,再依次加入25μL受体微球标记抗心磷脂抗原(B)和25μL Bio-鼠抗人I心磷脂抗原(C);然后放入Perkin ElmerVictor1420型时间分辨荧光测定仪中,由仪器自动按以下步骤操作;振动37℃温育20分钟,再自动加入175μL供体微球标记链霉亲和素(A1)后37℃温育15分钟,仪器自动读数激光照射微孔得到光量子RLU。
对比例1
1)光敏剂的制备
实施例1中未加入2.12mg四氟邻苯二甲腈和10mg L-还原型谷胱甘肽,其余的与实施例1相同,得到光敏剂;
2)供体微球的制备
实施例4中的步骤(2)中加入40mg实施例1中的光敏剂改为加入40mg步骤1)中的光敏剂,其余的与实施例4相同,得到供体微球;
3)供体微球标记链霉亲和素(A2)的制备
将实施例5的“吸取100mg的实施例4的受体微球于高速冷冻离心机中离心”改为“吸取100mg的步骤2)中的受体微球于高速冷冻离心机中离心”,其余的与实施例5相同,得到供体微球标记链霉亲和素(A2);
4)重复实施例6、7、8、9的实验,分别得到受体微球标记抗心磷脂抗原(B)和Bio-鼠抗人I心磷脂抗原(C);
5)将制备的两种微球包被蛋白的均相化学发光的方法应用于抗心磷脂抗体IgA(人血清)的测定
将实施例10中“自动加入175μL供体微球标记链霉亲和素(A1)后37℃温育15分钟,仪器自动读数激光照射微孔得到光量子RLU”改为“自动加入175μL步骤3)中的供体微球标记链霉亲和素(A2)后37℃温育15分钟,仪器自动读数激光照射微孔得到光量子RLU”,其余的与实施例10相同。
标准曲线的绘制:
将含抗心磷脂抗体IgA标准品用Tris缓冲液稀释,配成一系列浓度为0APLU/ml,10APLU/ml,20APLU/ml,50APLU/ml,100APLU/ml,300APLU/ml的抗心磷脂抗体IgA标准品,分别取25μL标准品加入到实施例10中的测试管,将测试管置于配套的小型设备中,放置15min;每个标准品分别重复测定3次,取三次测定平均值,分别得到每个标准品的光量子RLU均值,根据每个标准品RLU均值和相应抗心磷脂抗体IgA浓度间的关系,绘制标准曲线,如附图1所示。
取待检样本25μL,置于实施例10中的测试管中,重复测定3次,得到样本的RLU值,取3次的平均值,根据绘制的标准曲线即可获得待检样品中抗心磷脂抗体的浓度值。
实验结论:采用实施例10的方法测定的抗心磷脂抗体IgA的最低检测限为0.0526APLU/ml(37℃),检测范围为0.0526APLU/ml-300APLU/ml,批间CV小于10%,批内CV小于1.5%,且未出现HOOK效应,无需对检测样本进行稀释处理;采用对比例1的方法测定的抗心磷脂抗体IgA的最低检测限为5.36APLU/ml(37℃),检测范围为5.36APLU/ml-230APLU/ml;说明将酞菁类光敏剂与四氟邻苯二甲腈、含γ-酰胺键和巯基的三肽相结合制备的光敏剂,用于均相化学发光的方法中,得到的结果最低检测限低,检测范围宽。
为了进一步验证上述的实验结果,通过最低检测限、批间精密度、线性实验、混合回收率、Hook实验、干扰试验、临床相关性和符合率对实验进行评估。
最低检测限:
检测20孔IgA校准品(0APLU/ml),分别得到对应的RLU,计算其RLU均值(AVE)和标准偏差(SD),以AVE+2SD反代入标准曲线,得到的浓度值即为测定的抗心磷脂抗体IgA的分析灵敏度,分别测试4℃和37℃条件下实施例10的方法测定的最低检测限,结果如表1所示。
表1 4℃和37℃条件下实施例10的方法测定的最低检测限表
试剂批号 | 4℃试剂 | 37℃试剂 |
最低检测限(0APLU/ml) | 0.0352 | 0.0526 |
实验结论:4℃和37℃条件下实施例10的方法测定的最低检测限均达到要求,其中4℃的最低检测限略低于37℃。
批内精密度:
采用4℃和37℃条件下的实施例10的方法对质控品QC L、QC H进行检测,各测10孔,得到的结果如表2和表3所示。
表2 4℃条件下实施例10的方法对质控品QC L、QC H检测的批内精密度表
表3 37℃条件下实施例10的方法对质控品QC L、QC H检测的批内精密度表
批间精密度
每天做2批次实验,每批次试验用4℃储存的实施例10的方法对QCL和QCH进行8孔检测,共做5天,计算实施例10的方法测得的浓度的批间精密度,得到结果如表4所示。
表4 4℃条件下实施例10的方法对质控品QC L、QC H检测的批间精密度表
实验结论:4℃条件下实施例10的方法对质控品QC L、QC H检测的批内精密度小于10%,批间精密度小于15%,精密性良好,符合要求。
线性实验
挑选出高值样本(浓度值在200APLU/ml-300APLU/ml之间),作为高浓度血清样本;挑选出低值样本(浓度值<10APLU/ml),作为低值样本;用高低浓度样本制备8个等间距浓度水平的样本,具体制备体积组成如表5所示;
表5制备高低浓度血清混合样本的体积组成表
样本号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
低浓度血清(ml) | 0.350 | 0.300 | 0.250 | 0.200 | 0.150 | 0.100 | 0.050 | 0.000 |
高浓度血清(ml) | 0.000 | 0.050 | 0.100 | 0.150 | 0.200 | 0.250 | 0.300 | 0.350 |
按照体积组成表的各样品号混合高低浓度血清,在4℃和37℃条件下实施例10的方法分别测定上述8个样本的RLU值,根据附图1的标准曲线得到相应的样本浓度,样本浓度的数据结果如表6和表7所示;
表6 4℃条件下实施例10的方法测试高低浓度血清混合样本的浓度数据表
表7 37℃条件下实施例10的方法测试高低浓度血清混合样本的浓度数据表
以RLU为Y轴,相应的高低浓度血清混合样本的浓度为X轴进行直线拟合,37℃条件下计算得到其相关系数r为:0.9989。
实验结论:4℃和37℃条件下实施例10的方法检测结果的相关系数r分别为0.9997、0.9989,大于0.99,说明试剂线性符合预期要求。
混合回收率
测试4℃条件下的混合回收实验,选取高值样本(250APLU/ml)和低值样本(5APLU/ml)作为待测样本,配置标准品(240APLU/ml和2.45APLU/ml)作为添加物,取190uL的待测样品和10uL标准品预混,测得相应的RLU值,再由附图1的标准曲线得到相应的浓度,即为测定浓度;预测浓度为:预期浓度=95%×待测样本浓度+5%×添加物浓度;回收率为:回收率=测定浓度/预期浓度×100%。
表8 4℃条件下实施例10的方法测试高低浓度血清混合样本的回收率数据表
实验结论:检测结果平均回收率在90%-110%之间,测值基本准确,符合要求。
Hook实验
选取高值浓度为300APLU/ml的抗心磷脂抗体IgA标准品(CAL6)和浓度为1000APLU/ml的抗心磷脂抗体IgA标准品各5份,用4℃和37℃条件下实施例10的方法对CAL1组进行检测,得到RLU值,计算均值(AVE1)和标准偏差(SD1);同样地,用4℃和37℃条件下实施例10的方法对浓度为1000APLU/ml的抗心磷脂抗体IgA标准品进行检测,得到RLU值,计算均值(AVE2)和标准偏差(SD2);结果如表9所示。
表9 4℃和37℃条件下实施例10的方法检测高值浓度标准品的数据表
实验结论:4℃和37℃条件下实施例10的方法检测高值浓度的IgA,AVE2+3SD2>AVE1+3SD1,在1000APLU/ml均未见明显的HOOK效应。
干扰试验
取12个样本,编号为1-6和1#-6#,分别向1-6号的样本中分别加入1500mg/dL甘油三酯,20mg/dL胆红素、1000mg/dL血红蛋白、2000IU/mlRF、600ng/mL HAMA、500U/mL ANA,编号为1#-6#的样本分别为1-6号无添加的空白对照组,用4℃条件下实施例10的方法对上述样本组进行检测,结果如表10所示;
表10 4℃条件下实施例10的方法检测各干扰物质的偏差率表
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实验结论:1500mg/dL甘油三酯、20mg/dL胆红素、1000mg/dL血红蛋白、2000IU/mlRF、600ng/mL HAMA、500U/mL ANA对本方法的干拢均未超过10%,说明上述干扰物质在该浓度下对实施例10方法测定IgA的结果影响不明显。
临床相关性和符合率
收集经INOVA Diagnosis公司抗心磷脂抗体IgA试剂盒检测过的临床标本210份,以实施例10的方法测定RLU值,根据标准曲线得到上述临床标本的浓度,与INOVADiagnosis测值对比作图绘制相关曲线图,如附图2所示,并采用线性回归方法,得出线性回归方程,计算相关系数r;其回归方程为:y=1.010x-0.148,相关系数r为0.9975,slope为1.010,Yint为-0.148。
实验结论:通过实施例10的方法的检测结果与INOVA Diagnosis结果相关系数r为:0.9975,大于0.99;回归方程斜率为:1.010,在0.95-1.05的范围内;截距为:-0.148,在-3.0-3.0的范围内;说明采用本发明的方法检测抗心磷脂抗体IgA的结果与国外同类产品的检测结果相当,对临床样本的符合率良好。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明的保护范围内,本发明的权力范围以权利要求书为准。
Claims (7)
1.一种用于均相化学发光的光敏剂,其特征在于采用以下的方法制备而成:
1)将四氨基酞菁铜、四氟邻苯二甲腈、第一催化剂、羟基乙酸乙酯、pH调节剂、第二催化剂加入到盛有甲苯的反应釜中,溶液的pH值为7.5~8.2,在N2保护下加热回流反应4-6小时;其中所述四氨基酞菁铜、所述四氟邻苯二甲腈、所述第一催化剂、所述羟基乙酸乙酯、所述pH调节剂、所述第二催化剂的质量比为50~100:2.12~3.15:0.02~0.10:30~90:50~120:0.01~1.5;所述四氨基酞菁铜与所述甲苯的质量体积比为50~100mg:15mL;
2)冷却至15-30℃,真空条件下蒸除溶剂后,用极性溶剂溶解并过滤,得到滤液;
3)滤液经减压蒸干后,在非极性溶剂中重结晶得到靛蓝色产物;
4)称取靛蓝色产物于烧瓶中,加入适量的无水乙醇将其溶解,不断搅拌,再加入含γ-酰胺键和巯基的三肽,所述靛蓝色产物与所述含γ-酰胺键和巯基的三肽的质量比为21:5~50,搅拌4-6小时后旋蒸干燥得到所述光敏剂;
所述的第一催化剂选自铜、氯化亚铜或氯化铜;所述的第二催化剂选自吡啶、联吡啶或吡唑;所述的含γ-酰胺键和巯基的三肽选自谷胱甘肽、半胱氨酸或甘氨酸。
2.根据权利要求1中所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂,其特征在于,所述的pH调节剂选自Na2CO3或K2CO3。
3.根据如权利要求1~2中任一项所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂的制备方法,包括以下的步骤:
1)将四氨基酞菁铜、四氟邻苯二甲腈、第一催化剂、羟基乙酸乙酯、pH调节剂、第二催化剂加入到盛有甲苯的反应釜中,溶液的pH值为7.5~8.2,在N2保护下加热回流反应4-6小时;其中所述四氨基酞菁铜、所述四氟邻苯二甲腈、所述第一催化剂、所述羟基乙酸乙酯、所述pH调节剂、所述第二催化剂的质量比为50~100:2.12~3.15:0.02~0.10:30~90:50~120:0.01~1.5;所述四氨基酞菁铜与所述甲苯的质量体积比为50~100mg:15mL;
2)冷却至15-30℃,真空条件下蒸除溶剂后,用极性溶剂溶解并过滤,得到滤液;
3)滤液经减压蒸干后,在非极性溶剂中重结晶得到靛蓝色产物;
4)称取靛蓝色产物于烧瓶中,加入适量的无水乙醇将其溶解,不断搅拌,再加入含γ-酰胺键和巯基的三肽,所述靛蓝色产物与所述含γ-酰胺键和巯基的三肽的质量比为21:5~50,搅拌4-6小时后旋蒸干燥得到所述光敏剂;
所述的步骤1)中的所述的第一催化剂选自铜、氯化亚铜或氯化铜;所述的第二催化剂选自吡啶、联吡啶或吡唑;所述的步骤4)中的所述的含γ-酰胺键和巯基的三肽选自谷胱甘肽、半胱氨酸或甘氨酸。
4.根据权利要求3中所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂的制备方法,其特征在于,所述的pH调节剂选自Na2CO3或K2CO3。
5.根据权利要求3中所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂的制备方法,其特征在于,所述的步骤2)中的所述的极性溶剂为氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙腈中的一种或者任意比例的混合物。
6.根据权利要求3中所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂的制备方法,其特征在于,所述的步骤3)中的所述的非极性溶剂为正己烷、石油醚、环己烷中的一种或者任意比例的混合物。
7.根据权利要求1中所述的一种用于均相化学发光技术的光敏剂在制备均相化学发光技术中供体微球的应用。
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Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01160944A (ja) * | 1987-12-18 | 1989-06-23 | Nippon Carbide Ind Co Inc | 2,4,5−トリフルオロ安息香酸の製造方法 |
WO2001042368A1 (en) * | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Gentian As | Substituted phthalocyanines and their precursors |
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---|---|---|---|---|
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WO2001042368A1 (en) * | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Gentian As | Substituted phthalocyanines and their precursors |
CN102892896A (zh) * | 2010-05-14 | 2013-01-23 | 贝克曼考尔特公司 | 具有改进灵敏度的均相化学发光测试方法 |
CN109996801A (zh) * | 2016-11-17 | 2019-07-09 | 坦佩林大学注册基金会 | 光敏剂 |
CN107915740A (zh) * | 2017-11-09 | 2018-04-17 | 福州大学 | 取代酞菁铜及其在光热材料和光热治疗领域的应用 |
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Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
水溶性酞菁类光敏剂的合成及其光谱性质研究;鲁勖琳;江苗苗;孙丽娜;徐明生;张金源;刘记;张先付;;光谱学与光谱分析(12);第205-210页 * |
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