CN112010934B - 乙酰rgd修饰的六环哌嗪二酮,其制备,抗转移活性及应用 - Google Patents

乙酰rgd修饰的六环哌嗪二酮,其制备,抗转移活性及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了下式的1‑(CH2CO‑Arg‑Gly‑Asp‑AA)‑四氢‑β‑咔啉[3:4]并哌嗪‑2,5‑二酮并哌啶[4:5]并咪唑(式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)。公开了它们的制备方法和它们在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
Figure DDA0002075324580000011

Description

乙酰RGD修饰的六环哌嗪二酮,其制备,抗转移活性及应用
技术领域
本发明涉及1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑。涉及它们的制备方法,涉及它们在制备抗肿瘤转移药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
背景技术
肿瘤已经成为严重威胁人类健康的常见病。例如2015年新增的肿瘤患者大约有392.9万,其中有233.8万肿瘤患者死亡。平均每天有超过1万人被确诊为肿瘤。肿瘤转移,尤其是肿瘤向肺转移使得肿瘤死亡率逐年升高。肿瘤患者预后差的两个主要原因是:1)化疗药物的毒副作用严重；2)肿瘤转移尤其是向肺转移。目前,仍然没有能有效治疗肿瘤转移的药物用于临床。发明抗肿瘤转移药物是药物研究的前沿之一。
四氢-β-咔啉-3-羧酸是具有多种生物活性的药效团,环组氨酸也是具有多种生物活性的药效团。在一项相关的发明中,发明人发现四氢-β-咔啉-3-羧酸与环组氨酸两个药效团融合形成的下式左的四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑是P-选择素抑制剂,具有抗肿瘤活性。进一步研究使发明人认识到,在四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑的1位引入CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA(式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)生成的下式右的1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑还具有抗肿瘤转移作用。根据这种认识,发明人提出了本发明。
Figure BDA0002075324560000011
发明内容
本发明的第一个内容是提供下式的1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)。
Figure BDA0002075324560000012
本发明的第二个内容是提供制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)的方法,该方法包括:
(1)L-Trp在硫酸催化条件下与甲醛进行Pictet-Spengler反应,制备3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)；
(2)在N,N-二甲基甲酰胺中1与(Boc)2O反应,制备3S-2-叔丁氧羰基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)；
(3)L-His在硫酸催化条件下与甲醛进行Pictet-Spengler反应,制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸(3)；
(4)在甲醇和氯化亚砜中由3制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸甲酯(4)；
(5)以3-二乙氧基磷酰基-1,2,3-苯唑4(H)-酮作缩合剂,在无水四氢呋喃中2与4偶联制备2-叔丁氧羰基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯(5)；
(6)脱除5的叔丁氧羰基保护基,溶于甲醇之后加N-甲基吗啉调pH为9制备四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(6)；
(7)在N,N-二甲基甲酰胺中6与溴乙酸苄酯反应,制备1-乙酸苄酯-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(7)；
(8)7脱苄基制备1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8)；
(9)在N,N-二甲基甲酰胺中8与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-AA-OBzl偶联,制备1-[(CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-AA-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9a-c,式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)；
(10)9a-c脱保护制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(10a-c,式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)。
本发明的第三个内容是评价1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑对肿瘤细胞迁移和侵袭的抑制作用。
本发明的第四个内容是评价1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑抑制瘤向肺转移的作用。
附图说明
图1.1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(式中AA为Ser残基,Phe残基及Val残基)的合成路线。i)甲醛(37％),浓硫酸(98％),水,氨水溶液(25％)；ii)N,N-二甲基甲酰胺,(Boc)2O,三乙胺；iii)甲醇,氯化亚砜；iv)四氢呋喃,3-二乙氧基磷酰基-1,2,3-苯唑4(3H)-酮,三乙胺；v)氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M),甲醇,N-甲基吗啉；vi)N,N-二甲基甲酰胺,碳酸铯,溴乙酸苄酯；vii)二氯甲烷-甲醇,钯碳,氢气；viii)四氢呋喃,1-羟基苯并三唑,二环己基碳二亚胺,N-甲基吗啉；ix)甲醇,氢氧化钠水溶液(2M)；x)氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)；xi)N,N-二甲基甲酰胺,2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐,N-甲基吗啉；xii)三氟醋酸,三氟甲磺酸。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
0℃及搅拌下将1.595g(5.0mmol)Boc-L-Arg(NO2)溶于20mL四氢呋喃,然后加0.675g(5.0mmol)1-羟基苯并三唑和1.236g(6.0mmol)二环己基碳二亚胺,反应0.5h。之后加1.854g(5.5mmol)Tos·Gly-OBzl,最后反应液用N-甲基吗啉调pH为8。得到的溶液室温搅拌6h至TLC显示Boc-L-Arg(NO2)完全消失。反应混合物过滤,滤液减压浓缩,得到的淡黄色油状物用60mL乙酸乙酯溶解,得到的溶液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗(20mL×3),饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3),5％硫酸氢钾水溶液洗(20mL×3),饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3),饱和碳酸氢钠水溶液洗(20mL×3),饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3),乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,得到2.120g(90％)标题化合物,为无色粉末,ESI-MS(m/e):467[M+H]+。
实施例2制备Boc-Arg(NO2)-Gly
0℃及搅拌下将2.120g(5.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl用15mL甲醇溶解,加氢氧化钠水溶液(2M)调pH为11,搅拌至TLC显示Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl完全消失。反应溶液先用饱和硫酸氢钾水溶液调pH为中性,减压浓缩,再用饱和硫酸氢钾水溶液调pH为2,用乙酸乙酯萃取(50mL×3),合并乙酸乙酯层并用饱和氯化钠水溶液洗(30mL×3)。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥12h,过滤,滤液减压浓缩得到1.542g(82％)标题化合物,为无色油状产物。ESI-MS(m/e):375[M-H]-。
实施例3制备Boc-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
用实施例1的方法从1.615g(5.0mmol)Boc-L-Asp(OBzl)和1.271g(5.5mmol)L-Ser-OBzl得到2.520g(92％)标题化合物,为无色油状产物。ESI-MS(m/e):501[M+H]+。
实施例4制备Asp(OBzl)-Ser-OBzl
0℃及搅拌下将2.520g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser-OBzl用30mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)溶解,搅拌4h,TLC显示Boc-Asp(OBzl)-Ser-OBzl完全消失。反应混合物减压浓缩,残留物用20mL无水乙酸乙酯溶液溶解。得到的溶液再减压浓缩。该操作重复3次。得到的固体用无水乙醚洗(10mL×3),得到1.930g(88％)标题化合物,为淡黄色油状物。ESI-MS(m/e):401[M+H]+。
实施例5制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
用实施例1的方法从1.542g(5.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.930g(5.0mmol)Asp(OBzl)-Ser-OBzl得到2.450g(69％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):757[M-H]-。
实施例6制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl
用实施例4的方法从2.450g(3.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl得到1.820g(85％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):659[M+H]+。
实施例7制备Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
用实施例1的方法从1.615g(5.0mmol)Boc-L-Asp(OBzl)和1.604g(5.5mmol)L-Phe-OBzl得到1.993g(69％)标题化合物,为无色油状产物。ESI-MS(m/e):561[M+H]+。
实施例8制备Asp(OBzl)-Phe-OBzl
用实施例4的方法从2.850g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得到2.230g(88％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):461[M+H]+。
实施例9制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
用实施例1的方法从1.542g(5.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和2.340g(5.0mmol)Asp(OBzl)-Phe-OBzl得到2.924g(74％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):819[M+H]+。
实施例10制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
用实施例4的方法从2.924g(3.6mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得到2.362g(92％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):719[M+H]+。
实施例11制备Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl
用实施例1的方法从1.615g(5.0mmol)Boc-L-Asp(OBzl)和1.342g(5.5mmol)L-Val-OBzl得到1.669g(65％)标题化合物,为无色油状产物。ESI-MS(m/e):513[M+H]+。
实施例12制备Asp(OBzl)-Val-OBzl
用实施例4的方法从2.560g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl得到1.978g(96％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):413[M+H]+。
实施例13制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl
用实施例1的方法从1.542g(5.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和2.060g(5.0mmol)Asp(OBzl)-Val-OBzl得到1.940g(62％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):771[M+H]+。
实施例14制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl
用实施例4的方法从1.940g(2.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得到1.589g(95％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):671[M+H]+。
实施例15制备3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)
0℃及搅拌下向200mL蒸馏水中加入0.1mL浓硫酸(98％),之后加入2.04g(10.0mmol)L-Trp并搅拌至固体溶解,最后加入5mL甲醛水溶液(37％)并室温搅拌6h。TLC显示L-Trp完全消失。0℃及搅拌下向反应混合物中加入氨水溶液(25％)调pH为7。反应混合物室温静置30min,过滤收集生成的沉淀,得到2.03g(93％)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):217[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.141(s,1H),10.944(s,1H),7.436(s,1H),7.321(s,1H),7.032(d,2H),4.207(m,3H),2.822(m,2H)。
实施例16制备3S-2-叔丁氧羰基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)
向0.972g(4.5mmol)3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)中加入10mL N,N-二甲基甲酰胺,搅拌使固体悬浮。0℃及搅拌下先往该悬浮液中加入1.275g(1.3mmol)(Boc)2O,再加入三乙胺调pH为10。得到的溶液室温搅拌至TLC显示化合物1完全消失。反应混合物减压浓缩,得到的淡黄色油状物用40mL乙酸乙酯溶解,得到的乙酸乙酯溶液先用5％硫酸氢钾水溶液洗(50mL×3)再用饱和氯化钠水溶液洗(50mL×3),乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥12h。过滤,滤液减压浓缩,得到的淡黄色固体在15mL二氯甲烷中超声，使固体均匀分散。过滤,得到1.106g(77％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):315[M-H]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.769(s,1H),10.868(d,1H),7.416(d,J＝7.5Hz,1H),7.283(m,1H),7.048(t,J＝7.2Hz,1H),6.966(t,J＝7.2Hz,1H),5.101(m,1H),4.716(t,J＝12.9Hz,1H),4.394(m,1H),3.297(d,J＝16.2Hz,1H),2.959(m,1H),1.461(d,J＝9.9Hz,9H)。
实施例17制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸(3)
0℃及搅拌下向2.50g(16.1mmol)L-His与10mL蒸馏水的溶液中加入0.4mL浓硫酸(98％)使L-His逐渐溶解。向得到的溶液中加3mL甲醛水溶液(37％)并于60℃及加热6h,TLC显示L-His完全消失。反应混合物于0℃搅拌,之后加25％氨水溶液调pH为7。室温静置30min,过滤。收集的固体用水及丙酮各洗三次,得到2.649g(98％)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):168[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.016(s,1H),7.548(s,1H),5.040(d,J＝13.8Hz,1H),4.789(d,J＝14.1Hz,1H),4.277(m,1H),3.761(m,2H)。
实施例18制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸甲酯(4)
0℃及搅拌下向120mL甲醇中滴加8mL氯化亚砜并搅拌40min。之后,加入5.01g(30mmol)6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸(3)。反应混合物室温搅拌至TLC显示化合物3完全消失。反应混合物减压浓缩,残留物用50mL甲醇溶解。溶液减压浓缩，残留物再用50mL甲醇溶解。该操作重复3次。固体用无水乙醚洗(30mL×3),得到7.129g(93％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):182[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.667(s,1H),9.051(s,1H),4.710(m,1H),4.333(m,2H),3.819(s,3H),3.302(m,1H),3.154(m,1H)。
实施例19制备2-叔丁氧羰基-四氢-β-咔啉-3-甲酰哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯(5)
将2.212g(7.0mmol)3S-2-叔丁氧羰基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2),2.134g(8.4mmol)6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸甲酯(4)以及2.512g(8.4mmol)3-二乙氧基磷酰基-1,2,3-苯唑4(3H)-酮用30mL四氢呋喃溶解。0℃与搅拌下向溶液中加3mL(21.0mmol)三乙胺,室温搅拌至TLC显示化合物4完全消失。滤去不溶物,滤液减压浓缩。得到的棕黄色糖浆状物用80mL二氯甲烷溶解,溶液用10％的碳酸钠水溶液洗(50mL×3)及饱和氯化钠水溶液洗(50mL×3)。二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥12h,过滤。滤液减压浓缩,得到3.126g棕黄色固体。该固体经柱层析纯化,得到1.633g(52％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):502[M+Na]；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.917(s,1H),10.823(s,1H),7.570(s,1H),7.436(m,1H),7.277(m,1H),7.068-6.911(m,2H),5.682-5.397(m,2H),4.896-4.435(m,4H),3.966(m,1H),3.633(d,J＝5.7Hz,1H),3.477(s,1H),3.396(s,1H),3.333(s,4H),3.186-2.813(m,5H),1.453-1.290(d,9H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝171.27,171.08,154.94,136.39,135.69,135.40,131.09,126.91,121.18,118.85,117.91,111.37,104.55,103.23,80.36,55.38,52.80,51.08,50.42,50.24,28.50,28.44,28.35,28.19,21.80。
实施例20制备四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(6)
0℃及搅拌下将1.633g(3.4mmol)2-叔丁氧羰基-四氢-β-咔啉-3-甲酰哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯(5)用25mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)溶解。得到的溶液在0℃搅拌4h,TLC显示化合物5完全消失。将反应混合物减压浓缩,残留物用20mL干燥的乙酸乙酯溶液溶解。得到的溶液再减压浓缩。该操作重复3次。得到的固体用无水乙醚洗(30mL×3),得到1.244g(95％)四氢-β-咔啉-3-甲酰哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯,为棕黄色粉末。ESI-MS(m/e):380[M+H]+。
0℃及搅拌下将棕黄色四氢-β-咔啉-3-甲酰哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯粉末先用20mL甲醇溶解,再加N-甲基吗啉调pH为9,室温搅拌至TLC显示棕黄色粉末完全消失。反应混合物减压浓缩,得到的深棕色糖浆状物通过硅胶柱层析纯化,得到0.854g(72％)标题化合物,为淡黄色粉末。FT-ESI-MS(m/e):348.1447[M+H]+；Mp:210-211℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.003(s,1H),11.017(s,1H),7.565(s,1H),7.414(d,J＝7.8Hz,1H),7.345(d,J＝8.1Hz,1H),7.072(t,J＝7.5Hz,1H),6.978(t,J＝7.2Hz,1H),5.427(d,J＝16.5Hz,1H),5.200(d,J＝15.6Hz,1H),4.493-4.455(m,2H),4.268(d,J＝16.5Hz,1H),4.063(m,1H),3.251(m,1H),3.075(m,1H),2.816(t,J＝12.6Hz,2H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝164.88,164.52,136.42,135.25,130.18,126.76,121.61,119.24,118.15,111.61,106.10,56.41,56.20,28.98,28.01。
实施例21制备1-乙酸苄酯-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(7)
将0.500g(1.4mmol)四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(6)用6mL N,N-二甲基甲酰胺溶解。之后,加入0.939g(2.8mmol)碳酸铯并搅拌20min。之后,加226μL(1.4mmol)溴乙酸苄酯。反应混合物室温搅拌5h,TLC显示化合物6完全消失。加50mL冰水猝灭反应,水层用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并的乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3),用无水硫酸钠干燥12h。过滤,滤液减压浓缩,得到的棕黄色油状物经常压柱层析纯化,得到0.309g(43％)标题化合物。为无色粉末。ESI-MS(m/e):496[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.004(s,1H),7.595(s,1H),7.411-7.339(m,7H),7.078(t,J＝7.4Hz,1H),6.987(t,J＝7.4Hz,1H),5.507(d,J＝16.7Hz,1H),5.341(d,J＝15.9Hz,1H),5.230(s,2H),5.095(m,2H),4.477(m,1H),4.384(m,1H),4.264(d,J＝16.6Hz,1H),4.003(d,J＝16.0Hz,1H),3.260(m,1H),3.012(m,1H),2.890-2.685(m,2H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝168.79,164.92,164.48,138.33,136.43,135.96,132.94,130.16,128.97,128.91,128.87,128.76,128.62,128.49,128.37,126.76,122.60,121.62,119.25,118.15,111.63,106.09,67.11,56.50,56.40,46.17,38.20,30.89,28.06。
实施例22制备1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8)
将0.536g(1.1mmol)1-乙酸苄酯-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(7)用20mL甲醇溶解。之后,加入6mg Pd/C,用水泵抽气3min除瓶内空气,通氢气。该操作重复三次。反应混合物室温通氢气8h至TLC显示化合物7完全消失。反应混合物滤除Pd/C,滤液减压浓缩,得到0.424g(96％)标题化合物,为无色粉末。ESI-MS(m/e):404[M-H]-；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.020(s,1H),7.672(s,1H),7.409(d,J＝7.5Hz,1H),7.348(d,J＝8.1Hz,1H),7.073(t,J＝7.5Hz,1H),6.979(t,J＝7.2Hz,1H),5.431(d,J＝16.5Hz,1H),5.314(d,J＝15.6Hz,1H),4.851(m,2H),4.432(m,2H),4.256(d,J＝16.5Hz,1H),4.017(d,J＝15.6Hz,1H),3.255(d,J＝13.8Hz,1H),3.019(d,J＝15.0Hz,1H),2.782(m,2H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝170.11,164.94,164.44,138.10,136.42,132.21,130.13,126.74,122.78,121.62,119.25,118.16,111.63,106.08,56.39,46.49,38.13,30.59,28.04。
实施例23制备1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9a)
0℃及搅拌下将0.219g(0.4mmol)1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8)用5mL N,N-二甲基甲酰胺溶解。之后加0.247g(0.6mmol)2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐及0.376g(0.5mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl,最后反应液用N-甲基吗啉调pH为8。得到的溶液室温搅拌6h至TLC显示8完全消失。反应液减压浓缩,得到的淡黄色油状物经常压柱层析纯化，得到0.181g(32％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e):1068[M+Na]；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.027(s,1H),8.578(d,J＝7.5Hz,1H),8.417(t,J＝5.6Hz,1H),8.288(m,2H),7.933(s,2H),7.537(s,1H),7.342(m,13H),7.070(t,J＝7.3Hz,1H),6.976(t,J＝7.1Hz,1H),5.427(d,J＝16.5Hz,1H),5.335(d,J＝15.8Hz,1H),5.120(m,5H),4.787(m,3H),4.399(m,4H),4.250(d,J＝16.6Hz,1H),3.978(d,J＝15.8Hz,1H),3.751(m,4H),3.275(d,J＝3.2Hz,1H),3.224(d,J＝3.5Hz,1H),3.220(d,J＝4.7Hz,2H),2.997(d,J＝15.2Hz,1H),2.762(m,3H),2.579(m,1H),1.738(m,1H),1.566(m,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝171.94,171.01,170.62,170.30,169.10,167.09,164.90,164.49,136.49,136.42,136.37,130.16,128.85,128.84,128.42,128.41,128.34,128.09,126.74,122.60,121.61,119.23,118.14,111.63,106.07,66.42,66.16,61.53,56.43,56.39,55.52,52.92,49.51,47.48,42.31,38.24,36.85,30.83,29.84,28.03。
实施例24制备1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9b)
用实施例23的方法从0.219g(0.4mmol)1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8)及0.414g(0.5mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得到0.259g(43％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e):1128[M+Na]；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.006(s,1H),8.552(d,J＝7.8Hz,1H),8.410(d,J＝7.5Hz,1H),8.357(t,J＝5.7Hz,1H),8.224(d,J＝8.1Hz,1H),7.887(s,2H),7.524(s,1H),7.415-7.178(m,19H),7.073(t,J＝7.2Hz,1H),6.976(t,J＝7.2Hz,1H),5.427(d,J＝16.5Hz,1H),5.335(d,J＝15.6Hz,1H),5.050(m,4H),4.710(m,3H),4.517-4.354(m,4H),4.249(d,J＝16.8Hz,1H),3.971(d,J＝15.6Hz,1H),3.745(m,2H),3.345(m,7H),3.193(m,3H),3.011(m,3H),2.747(m,3H),1.734(m,1H),1.565(m,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝171.88,171.46,170.87,170.23,169.03,167.10,164.89,164.49,159.79,138.13,137.34,136.47,136.43,136.11,132.51,130.17,129.59,129.15,128.86,128.82,128.77,128.48,128.44,128.36,128.33,127.07,126.74,122.59,121.60,119.22,118.13,111.63,106.05,66.53,66.18,65.38,63.44,61.00,56.44,56.40,54.38,52.96,49.47,47.49,42.28,38.25,36.96,36.75,30.85,29.85,28.04,15.63。
实施例25制备1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9c)
用实施例23的方法从0.385g(0.7mmol)1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8)及0.543g(0.9mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得到0.367g(36％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e):1080[M+Na]；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝10.999(s,1H),8.541(d,J＝7.5Hz,2H),8.375(t,J＝5.4Hz,1H),8.256(d,J＝7.8Hz,1H),8.174(d,J＝8.1Hz,1H),7.894(s,2H),7.515(s,1H),7.363(m,14H),7.072(t,J＝7.2Hz,1H),6.976(t,J＝7.2Hz,1H),5.425(d,J＝16.5Hz,1H),5.331(d,J＝15.6Hz,1H),5.161(s,1H),5.077(m,4H),4.771(m,3H),4.481-4.277(m,4H),4.189(m,2H),3.971(d,J＝15.4Hz,1H),3.753(m,2H),3.274(d,J＝3.5Hz,1H),3.220(d,J＝3.5Hz,1H),3.168(m,2H),2.988(dd,J1＝14.9Hz,J2＝3.5Hz,1H),2.834-2.643(m,3H),2.574(d,J＝8.8Hz,1H),2.061(m,1H),1.731(m,1H),1.560(m,3H),0.850(d,J＝6.3Hz,6H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝171.85,171.53,171.10,170.25,169.18,167.13,164.89,164.51,159.79,139.94,138.17,136.47,136.43,136.28,134.98,132.66,130.16,128.87,128.57,128.52,128.45,128.36,126.74,122.50,121.61,120.09,119.23,118.14,111.63,106.07,70.24,66.42,66.18,58.12,56.48,56.39,52.91,49.53,47.44,42.21,40.68,40.57,38.26,36.67,30.92,30.24,29.89,28.03,19.38,18.58。
实施例26制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(10a)
0℃及搅拌下将0.077g(0.07mmol)1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9a)与1mL三氟乙酸和0.3mL三氟甲磺酸混合,搅拌0.5h至TLC显示9a完全消失。反应混合物在0℃及搅拌下用水泵抽气5min,加25mL冰冷的乙醚,溶液3000rpm离心5min,弃上清,再加25mL冰冷的乙醚,溶液3000rpm离心5min,弃上清,得到的墨绿色固体经C18纯化,得到16mg(26％)标题化合物,为黄色粉末。FT-ESI-MS(m/e):819.3206[M-H]-；Mp:191-192℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.000(s,1H),10.179(s,1H),8.745(d,J＝8.0Hz,1H),8.679(m,2H),7.557(s,1H),7.408(d,J＝7.8Hz,1H),7.333(m,2H),7.025(m,4H),5.424(d,J＝16.5Hz,1H),5.329(d,J＝15.6Hz,1H),4.766(m,2H),4.472(m,1H),4.379(m,2H),4.322(m,1H),4.256(d,J＝17.0Hz,1H),3.995(d,J＝15.9Hz,1H),3.907(m,1H),3.828(d,J＝5.7Hz,1H),3.706(d,J＝5.6Hz,1H),3.629(m,1H),3.531(m,2H),3.282(m,9H),2.995(m,2H),2.772(m,2H),2.601(m,1H),2.362(m,1H),1.975(m,1H),1.653(m,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝175.52,173.47,172.69,170.98,169.01,167.17,164.90,164.54,157.82,138.19,136.42,132.61,130.16,126.75,122.58,121.60,119.23,118.16,111.62,106.08,62.79,56.51,56.39,55.71,52.99,50.35,47.45,43.03,41.03,38.30,38.15,30.93,30.65,28.05,25.05；IR(cm-1):3204.94,3047.59,1644.82,1535.91,1455.21,1393.78,1333.45,1266.16,1229.06,1190.30,1075.10,746.35,661.04。
实施例27制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(10b)
用实施例26的方法从0.089g(0.08mmol)1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9b)得到16mg(21％)标题化合物,为黄色粉末。FT-ESI-MS(m/e):879.3611[M-H]-；Mp:187-188℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝11.110(s,1H),8.862(s,3H),7.544(s,1H),7.397(d,J＝7.8Hz,2H),7.339(d,J＝8.1Hz,2H),7.183-7.038(m,8H),6.970(t,J＝7.5Hz,1H),5.422(d,J＝16.5Hz,1H),5.288(d,J＝15.9Hz,1H),4.760(m,2H),4.607(t,J＝5.4Hz,1H),4.467(dd,J1＝11.7Hz,J2＝3.8Hz,1H),4.374(m,3H),4.256(d,J＝16.8Hz,1H),4.125(m,1H),3.989(d,J＝15.6Hz,2H),3.465(m,2H),3.408(m,3H),3.250(m,2H),3.149(m,1H),2.990(m,3H),2.768(m,4H),2.251(m,1H),1.975(m,1H),1.693(m,1H),1.545(m,3H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝166.84,164.60,164.21,157.56,137.87,136.09,132.28,130.19,129.87,129.54,128.17,127.85,126.72,126.40,125.74,122.22,121.25,119.20,118.88,117.80,111.31,105.68,72.79,72.47,72.28,71.22,70.88,70.56,70.23,69.91,69.59,60.64,60.32,56.40,56.18,56.08,52.41,37.98,30.60,29.99,27.74,24.72；IR(cm-1):3261.14,3053.21,2359.19,2339.52,1646.39,1558.45,1436.49,1397.99,1333.62,1263.35,1232.45,1193.11,744.90,668.74。
实施例28制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(10c)
用实施例26的方法从0.100g(0.09mmol)1-[CH2CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9c)得到16mg(20％)标题化合物,为黄色粉末。FT-ESI-MS(m/e):831.3638[M-H]-；Mp:178-179℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝10.996(s,1H),10.474(s,1H),9.848(s,1H),9.180(d,J＝8.1Hz,1H),8.879(s,1H),7.530(s,1H),7.396(d,J＝7.5Hz,1H),7.331(d,J＝7.8Hz,1H),7.083-6.944(m,5H),5.416(d,J＝16.5Hz,1H),5.282(d,J＝15.6Hz,1H),4.759(m,2H),4.373(m,3H),4.226(m,2H),3.962(d,J＝15.9Hz,2H),3.818(m,1H),3.571(m,4H),3.299(m,7H),2.913(m,2H),2.824-2.591(m,3H),2.180(m,2H),1.858(m,2H),1.633(s,2H),0.792(t,J＝6.1Hz,6H)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝176.17,174.45,170.24,168.78,167.25,164.92,164.47,157.92,138.22,136.41,132.61,130.12,126.74,122.46,121.57,119.19,118.17,111.62,106.07,72.80,70.27,70.24,60.66,56.50,56.31,52.95,50.70,47.40,42.87,41.03,38.29,38.08,31.74,30.86,30.49,28.05,25.01,19.86,18.67；IR(cm-1):3275.19,3210.56,3058.83,2963.30,1644.87,1587.30,1464.19,1393.62,1333.44,1263.35,1228.19,1193.11,745.80,672.59。
实施例29评价化合物10a-c抗肿瘤细胞迁移的活性
1)化合物6及10a-c用含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液配成浓度为500μM的溶液,经稀释加入96孔板,终浓度为20μM。阳性对照为RGDS四肽,用含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液配成浓度为500μM的溶液,经过稀释加入96孔板,终浓度为20μM。空白对照为含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液。
2)青霉素,链霉素及8％多聚甲醛试液均购自Solarbio公司。胎牛血清(FetalBovine Serum Australia Source,FBS)购自美国Corning公司。二甲基亚砜及胰蛋白酶-EDTA消化液购自Hyclone公司。用三蒸水将8.00g氯化钠,0.20g氯化钾,0.20g磷酸二氢钾及1.56g十二水合磷酸氢二钠搅拌溶解,转移至1000mL容量瓶中加水定容,高压蒸汽灭菌锅灭菌即得磷酸缓冲盐溶液。用三蒸水将60mg青霉素,100mg链霉素与一袋未开封的
RPMI-1640培养基搅拌溶解,转移至1000mL容量瓶中加水定容即得RPMI-1640培养基,加入10％的胎牛血清并过0.22μm滤膜,瓶口处缠好密封膜,于4℃保存。结晶紫染液购自碧云天公司。
3)95D(高转移人非小细胞肺癌细胞)购自南京凯基公司。选取处于对数生长期的细胞,弃培养基加磷酸缓冲盐溶液洗(1mL×3)。之后,加入1mL胰蛋白酶-EDTA消化液,在含5％CO2的孵箱中37℃孵育5min,显微镜下观察到80％细胞脱落。脱落的细胞加2mL完全培养基吹打使细胞混匀悬浮。3000rpm离心3min,弃上清,用无血清培养洗3次,再混匀悬浮。取少量细胞悬液计数,配制密度为4～6×105个/mL的细胞悬液。Transwell上室加100μL细胞悬液,加25μL配制好的RGDS或化合物6或化合物10a-c,轻轻晃动使混合混匀,设置空白对照。Transwell下室加600μL完全培养基,置于孵箱中孵育8h。
吸去上室剩余液体,加30μL磷酸缓冲盐溶液,用棉签擦去上室细胞。该操作重复三次。吸去下室剩余液体,加600μL 4％多聚甲醛试液固定细胞,时间为30min。取出小室,用蒸馏水清洗,吸去下室固定液,加600μL结晶紫染液细胞染色,时间为30min。取出小室,用蒸馏水洗净多余的结晶紫,用棉签擦净上室残余液体,晾干待拍照。
将晾干后的小室置于荧光倒置显微镜下拍照,每个小室选取9个不同的视野,固定角度与放大倍数,视野内的细胞应均匀分布,避免选取小室边缘处细胞视野,进行计数。用Image J软件统计照片中的细胞数,以均值±SD个表示,经t检验,p<0.05即有统计学差异。结果列入表1。可见,在20μM的浓度下化合物10a-c可有效地抑制95D细胞迁移。
表1化合物10a-c对95D细胞迁移的影响
Figure BDA0002075324560000121
a)与空白对照及化合物6比p<0.01；b)与空白对照,RGDS及化合物6比p<0.01；n＝3.
实施例30评价化合物10a-c抑制肿瘤细胞侵袭的活性
1)化合物6及10a-c用含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液配成浓度为500μM的溶液,经稀释加入96孔板,终浓度为20μM。阳性对照为RGDS四肽,用含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液配成浓度为500μM的溶液,经过稀释加入96孔板,终浓度为20μM。空白对照为含0.5％二甲基亚砜的磷酸缓冲盐溶液。
2)青霉素,链霉素及8％多聚甲醛试液均购自Solarbio公司。胎牛血清(FetalBovine Serum Australia Source,FBS)购自美国Corning公司。二甲基亚砜及胰蛋白酶-EDTA消化液购自Hyclone公司。用三蒸水将8.00g氯化钠,0.20g氯化钾,0.20g磷酸二氢钾及1.56g十二水合磷酸氢二钠搅拌溶解,转移至1000mL容量瓶中加水定容,高压蒸汽灭菌锅灭菌即得磷酸缓冲盐溶液。用三蒸水将60mg青霉素,100mg链霉素与一袋未开封的RPMI-1640培养基搅拌溶解,转移至1000mL容量瓶中加水定容即得RPMI-1640培养基,加入10％的胎牛血清并过0.22μm滤膜,瓶口处缠好密封膜,于4℃保存。结晶紫染液购自碧云天公司。
3)将Matrigel基质胶从-20℃冰箱中取出,于4℃冰箱中过夜使变为液态。用无血清培养基将Matrigel基质胶稀释10倍,加入Transwell的上室,每室加100μL,于5％CO2的孵箱中37℃孵育5h。吸除上室中的残余液体,沿内壁加50μL无血清的培养基,置孵箱中孵育30min,吸去上室残余液体。
选取处于对数生长期的细胞,弃培养基,加磷酸缓冲盐溶液洗(1mL×3)。之后,加入1mL胰蛋白酶-EDTA消化液,置孵箱中孵育5min,显微镜下观察到80％细胞脱落。将脱落的细胞在2mL完全培养基中吹打混匀,3000rpm离心3min,弃上清,用无血清培养洗3次,再混匀悬浮。取少量细胞悬液计数,配制密度为4～6×105个/mL的细胞悬液。每个Transwell上室加100μL细胞悬液,加25μL配制好的RGDS或化合物6或化合物10a-c,轻轻晃动使混合混匀,设置空白对照。Transwell下室加600μL完全培养基,置孵箱中孵育12h。
吸去上室剩余液体,加30μL磷酸缓冲盐溶液,用棉签擦去上室细胞。该操作重复三次。吸去下室剩余液体,加600μL 4％多聚甲醛试液固定细胞,时间为30min。取出小室,用蒸馏水清洗,吸去下室固定液,加600μL结晶紫染液细胞染色,时间为30min。取出小室,用蒸馏水洗净多余的结晶紫,用棉签擦净上室残余液体,晾干待拍照。
将晾干后的小室置于荧光倒置显微镜下拍照,每个小室选取9个不同的视野,固定角度与放大倍数,视野内的细胞应均匀分布,避免选取小室边缘处细胞视野,进行计数。用Image J软件统计照片中的细胞数,以均值±SD个表示,经t检验,p<0.05即有统计学差异。结果列入表2。可见,在20μM的浓度下化合物10a-c可有效地抑制95D细胞侵袭。
表2化合物10a-c对95D细胞侵袭的影响
Figure BDA0002075324560000131
a)与空白对照比p<0.01,与RGDS比p<0.05,与化合物6比p>0.05；b)与空白对照比p<0.01,与RGDS及化合物6比p>0.05；c)与空白对照,RGDS及化合物6比p<0.01；n＝3.
实施例31评价化合物10a-c抑制肿瘤肺转移的活性
1)阳性对照为RGDS四肽,腹腔注射剂量为20μmol/kg/天,连续给药10天；空白对照为生理盐水,口服剂量为0.1mL/10g/天,连续给药10天；化合物6的口服剂量为0.1μmol/kg/天,连续给药10天；化合物10a-c的口服剂量为0.01μmol/kg/天,连续给药10天。
2)Lewis小鼠肺癌细胞(LLC)购自ATCC。用含10％胎牛血清的DMEM完全培养基对LLC传代培养,得到处于对数生长期的细胞。弃培养基,残余细胞先用磷酸缓冲盐溶液洗(1mL×3),再用1mL胰蛋白酶-EDTA消化液消化,置5％CO2的孵箱中37℃孵育1min,显微镜观察80％细胞脱落。脱落的细胞加2mL含血清的培养基吹打使悬浮均匀,3000rpm离心3min。弃上清,加生理盐水吹打，使细胞重悬浮均匀。取少量细胞悬液计数,配制细胞密度为2×107个/mL的细胞悬液,作接种瘤液。
体重20±2g的清洁级雄性C57BL/6小鼠,购自北京维通利华动物实验技术有限公司。将瘤液接种于小鼠右侧腋下,每只小鼠接种0.2mL。每日观察,～20天可明显见到小鼠右侧腋下长出直径约为～2.0cm的实体瘤,用作瘤源。取生长状况良好的瘤源鼠,经乙醚麻醉,颈椎脱臼处死,用75％乙醇溶液浸泡消毒,钝性分离瘤源鼠的实体瘤,置无菌表面皿中在4℃预冷的生理盐水中剔除坏死部分与浮血。剪碎剩余的状况良好的瘤组织,按体积比1/1加生理盐水,转移至玻璃组织匀浆器内研磨制备肿瘤匀浆,将肿瘤匀浆用200目的尼龙筛网过滤两次,得到单细胞悬液,取少部分悬液加生理盐水稀释计数,配制密度为2×107个/mL的细胞悬液,用台盼蓝染色法确保活细胞数大于95％。
将细胞悬液接种于雄性C57BL/6小鼠右侧腋下,每只小鼠接种0.2mL。每日观察,～15天可见到小鼠右侧腋下长出直径为4～5mm的实体瘤,按照肿瘤体积将小鼠随机分组,使各组小鼠的肿瘤体积均匀分布,每组12只小鼠。之后,各组小鼠连续给药10天,第十一天记录各组小鼠的体重,乙醚麻醉后颈椎脱臼处死,钝性分离小鼠肺部，为准确统计肺上转移的瘤结数,小鼠的肺要求完整无损。瘤结数以均值±SD个表示,经t检验p<0.05即有统计学差异。结果列入表3。肺上转移的瘤结数表明,在0.01μmol/kg/天的口服剂量下化合物10a-c有效地抑制肿瘤肺转移。其中化合物10c的疗效与腹腔注射剂量为20μmol/kg/天的RGDS及口服剂量为0.1μmol/kg/天的化合物6没有显著性差异。化合物10a及10b疗效显著强于腹腔注射剂量为20μmol/kg/天的RGDS及口服剂量为0.1μmol/kg/天的化合物6。可见,本发明有突出的技术效果。
表3化合物10a-c抑制肿瘤肺转移活性
Figure BDA0002075324560000141
Figure BDA0002075324560000151
a)与生理盐水比p<0.01,与RGDS及化合物6比p<0.05；b)与生理盐水比p<0.01,与RGDS及化合物6比p>0.05；n＝12。

Claims (2)

1.下式的1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑在制备抗肿瘤转移药物中的应用,
Figure DEST_PATH_IMAGE002
式中AA为Ser残基, Phe残基或Val残基。
2.权利要求1所述的1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑在制备抗肿瘤转移药物中的应用,其特征在于,所述1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑的制备方法包括以下步骤:
(1) L-Trp在硫酸催化条件下与甲醛进行Pictet-Spengler反应, 制备3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1);
(2)在N, N-二甲基甲酰胺中1与(Boc)2O反应, 制备3S-2-叔丁氧羰基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2);
(3) L-His在硫酸催化条件下与甲醛进行Pictet-Spengler反应, 制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸(3);
(4) 在甲醇和氯化亚砜中由3制备6S-4,5,6,7-四氢-咪唑[4:5]并哌啶-6-羧酸甲酯(4);
(5) 以3-二乙氧基磷酰基-1,2,3-苯唑4(H)-酮作缩合剂,在无水四氢呋喃中2与4偶联制备2-叔丁氧羰基-四氢-β-咔啉-3-甲酰-哌啶[4:5]并咪唑-6-羧酸甲酯(5);
(6) 脱除5的叔丁氧羰基保护基, 溶于甲醇之后加N-甲基吗啉调pH为9制备四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(6);
(7) 在N, N-二甲基甲酰胺中6与溴乙酸苄酯反应, 制备1-乙酸苄酯-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(7);
(8) 7脱苄基制备1-乙酸-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(8);
(9) 在N, N-二甲基甲酰胺中8与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-AA-OBzl偶联, 制备1-[(CH2CO- Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-AA-OBzl]-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑(9a-c);
(10) 9a-c脱保护制备1-(CH2CO-Arg-Gly-Asp-AA)-四氢-β-咔啉[3:4]并哌嗪-2,5-二酮并哌啶[4:5]并咪唑。
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