CN112010849A - 抑制多重耐药金黄色葡萄球菌的黄酮苷与异喹啉生物碱络合物及其无载体纳米药物的制备 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一类新型黄酮苷与异喹啉类生物碱络合物结构、制备、抗菌应用以及三种具备自组装性能的络合物无载体纳米药物。所述络合物结构通式如下，具备优良的选择性抑菌能力，在杀灭致病菌金黄色葡萄球菌的同时，不影响肠道内生菌大肠杆菌和益生菌枯草芽孢杆菌、屎肠球菌的活力；同时对多重耐药金黄色葡萄球菌有良好的抑制效果，优于诺氟沙星、苯唑西林、四环素、环丙沙星。其中，三种络合物自组装而成的纳米药物形态均一，分散度和稳定性好，在无需辅料的情况下形成凝胶或纤维，为开发成无载体纯药物递送制剂提供支持。

Description

抑制多重耐药金黄色葡萄球菌的黄酮苷与异喹啉生物碱络合 物及其无载体纳米药物的制备
技术领域
本发明涉及24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物的制备方法及其抗菌应用，尤其是对临床上多重耐药金黄色葡萄球菌具有良好的抑制活性；其中三种络合物具备自组装性能，可以制备无载体纳米药物，属于药物化学领域。
背景技术
细菌感染是目前人类面临的巨大威胁之一。随着抗生素的滥用，出现了越来越多的耐药细菌，甚至是多重耐药的“超级细菌”。每年，耐药性感染在全球范围内造成约70万人死亡，大多数发生在发展中国家；到2050年，细菌耐药性每年会造成全球1000万人死亡。同时，长期大量使用广谱抗生素也会造成人体肠道菌群稳态的破坏，从而进一步影响人体健康。因此，开发选择性强，毒性低，副作用小的新型抗生素对抗耐药细菌，发展多层面的抗菌策略是迫在眉睫的。
中药是天然抗生素的来源之一，很多中药成分都具有明确的抗菌作用。以黄连为例，其中的异喹啉类生物碱具有优良的抗菌性能。其中的代表性成分小檗碱已经被开发成为对抗细菌性腹泻的一线用药。黄芩中以黄芩苷为代表的黄酮苷类成分也有明确的抗菌活性。在中医临床上，黄芩、黄连常以药对形式存在，组成了如黄连解毒汤、葛根芩连汤等多种经典名方可用于菌群调节。发明人前期从黄连解毒汤水煎自沉淀分离得到具有神经保护活性的黄芩苷-小檗碱络合物，并已申请国家发明专利(申请号：201610575630.0)。在此基础上，本发明受启发于黄芩苷-小檗碱络合物的结构特点，以黄连解毒汤中代表性天然活性成分黄酮苷类和异喹啉生物碱类为原料，新增24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物、制备方法及其抗菌应用。
同时，纳米药物的研发是近年来的研究热点。纳米级药物传输系统主要用于促进药物溶解、改善吸收、提高靶向性从而提高有效性。将药物开发成纳米制剂，利用包括口服、注射等途径给药以提高吸收或靶向性。因此特别适合于大剂量的难溶性药物的口服吸收和注射给药。但许多纳米佐剂表现出较低的载药能力且无治疗效果，甚至有些在降解和代谢的过程中引起毒性和炎症。基于此，本发明涉及三种络合物有序自组装形成的无载体纳米药物。此种无载体纳米药物具备了纳米级药物的优势，同时实现了无辅料纯药物自传递，生物相容性好，提高了递送效率。
发明内容
本发明受启发与中医临床常用于治疗腹泻的黄芩-黄连药对，采用简便的合成手段制备了24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物，并运用质谱和核磁方法对络合物分子量和结构进行确认；运用多种细菌模型表征其抑菌活性；对于三种具备自组装性能的络合物开发了无载体纳米药物。此发明对于从中药复方中发现和开发结构明确的有效药物具有重大的研究意义。
本发明的目的之一是提供24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物。
本发明的目的之二是提供24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物的结构信息。具体地，络合位点为黄酮苷葡萄糖醛酸羧基与异喹啉类生物碱季铵氮。
本发明的目的之三是提供24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物的制备方法。
本发明的目的之四是提供24种黄酮苷-异喹啉类生物碱络合物在抗菌领域的应用。
本发明的目的之五是提供3种具备自组装性能的络合物无载体纳米药物。具体地，包括黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，野黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，汉黄芩苷-小檗碱纤维丝；黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，汉黄芩苷-小檗碱纳米纤维。所述纳米级自组装体具有良好的分散性。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明所选择原料为以黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷为代表的天然黄酮苷类化合物及其衍生化产物；以小檗碱、巴马汀、黄连碱、药根碱、表小檗碱、黄柏碱为代表的天然异喹啉类生物碱及其衍生化产物。
另一方面，本发明提供了24种络合物的制备方法。所述制备方法包括以下步骤：
(1)加热使异喹啉生物碱溶解于水中。
(2)黄酮苷混悬于水中，加热，调节pH得澄清透明溶液。
(3)将步骤(1)、(2)中所制备异喹啉生物碱、黄酮苷水溶液混和搅拌，离心得沉淀，水洗三次，冷冻干燥得棕黄色粉末即为络合物。
优选地，步骤(1)、(2)所述加热温度为25-100℃，例如25℃，30℃，50℃，80℃，100℃。
优选的，异喹啉生物碱和黄酮苷称取摩尔量比例为1∶0.1至1∶10，例如1∶0.1、1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10。
优选地，步骤(1)、(2)、(3)所述用水为去离子水。
优选地，步骤(2)所述pH调节剂为有机或无机碱。例如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水。
优选地，步骤(2)所述pH＝6-10，例如pH＝6、pH＝7、pH＝8、pH＝9、pH＝10。
优选地，步骤(3)所述离心纯化时的离心转速为5000-13000rpm，例如5000rpm、5500rpm、6000rpm、6500rpm、7000rpm、7500rpm、8000rpm、8500rpm、9000rpm、9500rpm或13000rpm。
在此基础上，本发明提供了络合物在抗菌领域的应用。
优选地，所用菌种为致病菌金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌，条件致病菌大肠杆菌，益生菌枯草芽孢杆菌和屎肠球菌等评价络合物的选择性抑菌能力。
本发明还提供了3种具备自组装性能的络合物无载体纳米药物。具体包括黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，野黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，汉黄芩苷-小檗碱纤维丝；黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，汉黄芩苷-小檗碱纳米纤维。所述制备方法包括以下步骤：
(1)加热使小檗碱溶解于水中。
(2)黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷分别混悬于水中，加热，调节pH得澄清透明溶液。
(3)将步骤(1)、(2)中所制备小檗碱水溶液分别与黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷水溶液混和，趁热混合后放凉。得到所述黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，野黄芩苷-小檗碱宏观凝胶，汉黄芩苷-小檗碱纤维丝。
(4)将步骤(3)所得宏观自组装体加热搅拌后离心去除大尺度络合物，上清液透析去除单体得纳米级自组装体。得到所述黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒，汉黄芩苷-小檗碱纳米纤维。
优选的，小檗碱和所述三种黄酮苷称取摩尔量比例为1∶0.1至1∶10，例如1∶0.1、1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10。
优选地，优选地，步骤(1)、(2)、(3)所述加热温度为25-100℃，例如25℃，30℃，50℃，80℃，100℃。
优选地，步骤(1)、(2)、(3)所述用水为去离子水。
优选地，步骤(2)所述pH调节剂为有机或无机碱。例如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水。
优选地，步骤(2)所述pH＝6-10，例如pH＝6、pH＝7、pH＝8、pH＝9、pH＝10。
优选地，步骤(3)所述宏观凝胶采用倒置法证明水凝胶的稳定性。
优选地，优选地，步骤(3)所述离心纯化时的离心转速为1000-5000rpm，例如1000rpm、1500rpm、2000rpm、2500rpm、3000rpm、3500rpm、4000rpm、4500rpm、5000rpm。
优选地，步骤(4)所述透析利用截留分子量为14000以下(例如3000、5000、7000、9000、12000、13000或14000)的透析袋进行。
优选地，步骤(4)所述透析的时间为1-3天(例如1天、1.5天、2天、2.5天或3天等)，每4-6小时(例如4小时、4.5小时、5小时、5.5小时或6小时)更换透析液。
优选的，黄芩苷-小檗碱纳米颗粒与野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒的水合粒径为30-300nm，例如40nm，50nm，55nm，60nm，100nm，300nm。
附图说明
图1为本发明实施例4制备所得黄芩苷-小檗碱自组装宏观凝胶。
图2为本发明实施例4制备所得野黄芩苷-小檗碱自组装宏观凝胶。
图3为本发明实施例4制备所得汉黄芩苷-小檗碱自组装宏观沉淀。
图4为本发明实施例4制备所得黄芩苷-小檗碱自组装纳米颗粒透射电镜图。
图5为本发明实施例4制备所得野黄芩苷-小檗碱自组装纳米颗粒透射电镜图。
图6为本发明实施例4制备所得汉黄芩苷-小檗碱自组装纳米纤维透射电镜图。
图7为本发明实施例4制备所得黄芩苷-小檗碱自组装纳米颗粒粒度分布图。
图8为本发明实施例4制备所得野黄芩苷-小檗碱自组装纳米颗粒粒度分布图。
具体实施方式
以下实施例旨在进一步说明本发明。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实例通过包括如下步骤的方法制备络合物。
选择原料为以黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷为代表的天然黄酮苷类化合物及其衍生化产物以及以小檗碱、巴马汀、黄连碱、药根碱、表小檗碱、黄柏碱为代表的天然异喹啉类生物碱及其衍生化产物。
以黄芩苷-小檗碱络合物为例，称取比例为10∶1至1∶10摩尔量的黄芩苷、小檗碱分别溶解于水中，加热，黄酮苷调节pH＝6-10得澄清透明溶液。混和搅拌，离心得沉淀，水洗三次，冷冻干燥得棕黄色粉末即为络合物。其他23种络合物的制备方法相同。
进一步对实施例1所制备络合物进行质谱分析(static spray-HRMS，Waters，USA)。质谱分析条件为，设置离子源为正离子检测模式，毛细管电压为3.5kV，锥孔电压为40V，离子源温度120℃，碰撞能为35eV，锥孔气流速50L/h，脱溶剂气流速800L/h，质谱采集范围：50～2000。质谱分析前无需经过色谱柱分离，直接进样分析。质谱分析得络合物分子离子峰及分子结构如表1所示。
表1 本发明制备的24种络合物结构信息
Figure BSA0000183823190000061
Figure BSA0000183823190000071
Figure BSA0000183823190000081
Figure BSA0000183823190000091
实施例2
在本实施例中对实施例1制备得到的部分络合物的采用核磁(Avance IIIHD400MHz spectrometer，Bruker，America)进行表征，结果如下：
黄芩苷-小檗碱络合物核磁归属：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)6.93(overlap，2H，H-3，8，BA)，8.03(d，J＝7.2Hz，1H，H-2′，6′，BA)，7.55-7.62(m，3H，H-3′，4′，5′，BA)，4.97(d，J＝5.1Hz，1H，H-1″，BA)，3.23-3.36(m，3H，H-2″，3″，4″，BA)，3.60(d，J＝9.6Hz，1H，H-5″，BA)，7.74(s，1H，H-1，BBR)，7.02(s，1H，H-4，BBR)，3.19(m，2H，5-CH2-，BBR)，4.93(m，2H，6-CH2-，BBR)，9.94(s，1H，H-8，BBR)，8.08(d，J＝9.0Hz，1H，H-11，BBR)，7.93(d，J＝9.0Hz，1H，H-12，BBR)，8.90(s，1H，H-13，BBR)，6.14(s，2H，15-CH2-，BBR)，4.07(s，3H，9-OCH3，BBR)，3.97(s，3H，10-OCH3，BBR).
野黄芩苷-小檗碱络合物核磁归属：SCU-BBR NPs 1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：6.81(s，1H，H-8，SCU)，6.99(s，1H，H-4，BBR)，7.75(d，J＝7.4Hz，2H，H-2′，6′，SCU)，6.86(d，J＝8.3Hz，2H，H-3′，5′，SCU)，4.97(d，J＝4.0Hz，1H，H-1″，SCU)，3.29-3.34(m，3H，H-2″，3″，4″，SCU)，3.70(d，J＝8.9Hz，1H，H-5″，SCU)，7.70(s，1H，H-1，BBR)，6.62(s，1H，H-3，SCU)，3.17(brs，2H，5-CH2-，BBR)，4.91(brs，2H，6-CH2-，BBR)，9.91(s，1H，H-8，BBR)，8.02(d，J＝6.2Hz，1H，H-11，BBR)，7.89(d，J＝6.2Hz，1H，H-12，BBR)，8.84(s，1H，H-13，BBR)，6.13(s，2H，15-CH2-，BBR)，4.05(s，3H，9-OCH3，BBR)，3.94(s，3H，10-OCH3，BBR).
汉黄芩苷-小檗碱络合物核磁归属：1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：6.65(s，1H，H-6，WOG)，7.05(s，1H，H-3，WOG)，8.09(d，J＝7.4Hz，2H，H-2′，6′，WOG)，7.64-7.62(m，3H，H-3′，4′，5′，WOG)，3.89(s，3H，8-OCH3，WOG)，12.48(s，1H，5-OH，WOG)，5.03(overlap，1H，H-1″，WOG)，3.15-3.29(m，3H，H-2″，3″，4″，WOG)，3.47(d，J＝9.7Hz，1H，H-5″，WOG)，7.78(s，1H，H-1，BBR)，7.08(s，1H，H-4，BBR)，3.20(brs，2H，5-CH2-，BBR)，4.93(m，2H，6-CH2-，BBR)，9.91(s，1H，H-8，BBR)，8.19(d，J＝9.1Hz，1H，H-11，BBR)，7.97(d，J＝9.1Hz，1H，H-12，BBR)，8.92(s，1H，H-13，BBR)，6.17(s，2H，15-CH2-，BBR)，4.09(s，3H，9-OCH3，BBR)，4.07(s，3H，10-OCH3，BBR).
实施例3
在本实施例中对实施例1制备得到的络合物的抑菌活性进行测定，方法如下：
采用比浊法分别观察络合物对致病菌金黄色葡萄球菌，条件致病菌大肠杆菌，益生菌枯草芽孢杆菌和屎肠球菌以及临床分离所得多重耐药金黄色葡萄球菌的抑制作用。金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，益生菌枯草芽孢杆菌和屎肠球菌均来自北京中医药大学生命科学学院。多重耐药金黄色葡萄球菌来自北京中医药大学东直门医院检验科(样本号：19PXTH0119)。实施例1制备得到的络合物粉末密封好保存于4℃。用时用LB培养基溶解为1×104μg/mL的储存液备用(DMSO含量1％)。
细菌复苏和细菌储备液配制：细菌分散在LB培养基中，37℃、200rpm旋转培养过夜。然后用LB培养基配制菌量为2×106CFU/mL的细菌储备液，计数采用平板计数法。
采用对倍稀释法测定络合物的MIC。在48孔板中，用LB培养基配制浓度分别为0.4，0.2，0.1，0.05，0.025μmol/mL的络合物溶液1mL。随后分别加入20μL细菌储备液，置37℃恒温、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养16h。用酶标仪在600nm处测定OD值。试验重复三次，计算细菌存活率大于80％的药物浓度计为该样品的最小抑菌浓度。不加药不加菌组设为空白对照组；加菌不加药组设为空白菌组。细菌存活率(％)＝(样品组吸光度值-空白组吸光度值)/(空白菌组吸光度值-空白组吸光度值)×100％。
具体结果见表2。
表2：本发明制备的24种络合物对不同细菌的抑菌效果
Figure BSA0000183823190000101
Figure BSA0000183823190000111
Figure BSA0000183823190000121
结果表明，基于黄酮苷和异喹啉类生物碱的络合物多数抗菌活性较前体原料显著增强，且具备优良的选择性抗金黄色葡萄球菌活性；同时，对于肠道中的条件致病菌大肠杆菌以及益生菌枯草芽孢杆菌、屎肠球菌抑制活性较弱，对临床分离的多重耐药金黄色葡萄球菌仍具有优良的敏感性。尤其化合物黄芩苷-小檗碱、野黄芩苷-小檗碱、黄芩苷-黄连碱、野黄芩苷-黄连碱、黄芩苷-巴马汀等针对临床分离的多重耐药金黄色葡萄球菌活性(MIC为0.05或0.1μmol/mL)明显优于目前诸多一线抗菌药物，例如诺氟沙星、苯唑西林、四环素、环丙沙星(MIC大于0.4μmol/mL)，具有深入研究和进一步临床开发的价值。
实施例4
本实例通过包括如下步骤的方法制备络合物无载体纳米药物。
本发明还提供了3种具备自组装性能的络合物无载体纳米药物。称取比例为1∶1摩尔量的小檗碱与黄芩苷/野黄芩苷/汉黄芩苷分别溶解于水中，加热，3种黄酮苷调节pH＝6-10得澄清透明溶液。冷却后，黄芩苷-小檗碱与野黄芩苷-小檗碱在宏观上呈现凝胶状，汉黄芩苷-小檗碱呈纤维丝状如图3所示。加热搅拌，离心去大尺度络合物，上清液透析得纳米级自组装体。电镜下黄芩苷-小檗碱与野黄芩苷-小檗碱自组装成纳米颗粒，粒度30-300nm(图4，5)。汉黄芩苷-小檗碱为纳米纤维(图6)。冷冻干燥分别得黄褐色粉末(黄芩苷-小檗碱与野黄芩苷-小檗碱络合物)和黄色丝状纤维(汉黄芩苷-小檗碱络合物)。
实施例5
无载体纳米药物稳定性考察。
本发明针对实施例4中制备的三种无载体纳米药物稳定性进行考察，包括两种方法：
方法1、黄芩苷-小檗碱纳米颗粒、野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒、汉黄芩苷-小檗碱纳米纤维样品冻干粉用生理盐水或等渗PBS溶液分散后，配置样品浓度为0.1mg/mL的外观均一溶液置室温密闭保存备用，应用动态光散射仪(Zetasizer Nano ZS 90，MalvernInstrument，UK)每隔三天测定一次，连续测定15天，记录样品粒度变化情况，测定结果见表3。
表3：本发明制备的3种无载体纳米药物溶液状态稳定性结果(纳米)
Figure BSA0000183823190000131
*备注：应用动态光散射仪测定纳米纤维(汉黄芩苷-小檗碱)准确度不如测定纳米颗粒(黄芩苷-小檗碱和野黄芩苷-小檗碱)样品准确，但能够在一定程度反映样品的稳定性和均一性。
方法2、黄芩苷-小檗碱纳米颗粒、野黄芩苷-小檗碱纳米颗粒、汉黄芩苷-小檗碱纳米纤维样品冻干粉室温密闭保存，每隔30天分别称取适量三种纳米制剂，用生理盐水或等渗PBS溶液分散后，配置样品浓度为0.1mg/mL的外观均一溶液，应用动态光散射仪(Zetasizer Nano ZS 90，Malvern Instrument，UK)测定，记录样品粒度变化情况。连续测定150天，测定结果见表4。
表4：本发明制备的3种无载体纳米药物冻干粉状态稳定性结果(纳米)
Figure BSA0000183823190000141
*备注：应用动态光散射仪测定纳米纤维(汉黄芩苷-小檗碱)准确度不如测定纳米颗粒(黄芩苷-小檗碱和野黄芩苷-小檗碱)样品准确，但能够在一定程度反映样品的稳定性和均一性。
从以上结果可以看出，本发明提供的络合物稳定，具备优良的选择性抑菌能力，在杀灭致病菌的同时，不影响益生菌的活力。同时对多重耐药菌有卓越的抑制效果。自组装而成的无载体纳米药物形态均一，分散度好。
实施例6
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入辅料按注射剂工艺制备成抗菌药注射剂(包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂)。
实施例7
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入适当辅料，按片剂工艺制备成抗菌药片剂(包括缓控释片、骨架片、包衣片、分散片等)。
实施例8
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入胶囊剂适当辅料，按胶囊剂工艺制备成抗菌药胶囊剂。
实施例9
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入乳剂适当辅料，按乳剂工艺制备成抗菌药乳剂(包括微乳、纳米乳等)。
实施例10
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入颗粒剂适当辅料，按颗粒剂工艺制备成抗菌药颗粒剂。
实施例11
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入缓释控释剂适当辅料，按缓释控释剂工艺制成抗肿菌药缓释控释剂。
实施例12
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入口服液适当辅料，按口服液工艺制备成抗肿菌药口服液。
实施例13
取黄酮苷-异喹啉生物碱系列络合物或其无载体纳米药物10g，加入脂质体剂型适当辅料，按脂质体工艺制备成抗肿菌药脂质体剂型。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的纳米药物组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (12)

1.具有抗菌作用的异喹啉生物碱与黄酮苷络合物，其通式为：
Figure FSA0000183823180000011
其中，R1-R7各自独立地为氢、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基、羟基，其中，R1、R2可以相连形成五元或六元环，或者，R3、R4相连形成五元或六元环。
2.如权利要求1所述的具有抗菌作用的异喹啉生物碱与黄酮苷络合物，其特征在于：R1、R2各自独立地为C1-C6的烷基，或R1、R2相连形成五元或六元环；R3、R4各自独立地为C1-C6的烷基，或R3、R4相连形成五元或六元环；R5、R6、R7各自独立地为氢、C1-C6的烷基、C1-C6的烷氧基或羟基。
3.如权利要求1或2所述的具有抗菌作用的异喹啉生物碱与黄酮苷络合物，其特征在于：
Figure FSA0000183823180000012
Figure FSA0000183823180000021
Figure FSA0000183823180000031
Figure FSA0000183823180000041
Figure FSA0000183823180000051
4.如权利要求1、2、3所述的所述络合物，其特征在于，加入制剂领域常规辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、注射剂等常规剂型。
5.如权利要求1、2、3所述的络合物的制备方法，其特征在于，该方法为：
包括如下步骤：
取摩尔比为1∶0.1至1∶10的异喹啉生物碱与黄酮苷或其结构类似物分别混悬于水中，异喹啉生物碱加热溶解，黄酮苷加热调节pH至6-10得澄清透明溶液。混和搅拌，离心得沉淀，水洗三次，冷冻干燥得棕黄色粉末即为络合物。
6.一种如权利要求1所述络合物的无载体纳米药物。
7.如权利要求1所述的络合物无载体纳米药物制备方法，其特征在于，该方法为：
包括如下步骤：
称取比例为10∶1至1∶10摩尔量的小檗碱与黄芩苷/野黄芩苷/汉黄芩苷分别溶解于水中，加热，3种黄酮苷调节pH＝6-10得澄清透明溶液。混和搅拌，离心去大尺度络合物，上清液透析得纳米级自组装体。
8.如权利要求1、2、3、6任一所述络合物、无载体纳米药物或其药学上可接受的盐在制备抗菌药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗菌作用为外部细菌感染、体内细菌感染、细菌性腹泻，尤其用于多重耐药金黄色葡萄球菌造成上述感染。
10.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含以治疗有效量存在的权利要求1络合物或权利要求6所述无载体纳米药物与至少一种药学可接受的赋形剂的混合物。
11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含至少一种常规抗菌药。
12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述抗菌药选自环丙沙星、司帕沙星、苯唑西林、头孢他啶、头孢曲松、四环素、罗红霉素或阿奇霉素。
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