CN111995644A - 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 - Google Patents
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111995644A CN111995644A CN202010783347.3A CN202010783347A CN111995644A CN 111995644 A CN111995644 A CN 111995644A CN 202010783347 A CN202010783347 A CN 202010783347A CN 111995644 A CN111995644 A CN 111995644A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- salidroside
- macroporous
- solution
- separating
- ethanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N Salidroside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 61
- ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N salidroside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N 0.000 title claims abstract description 61
- 239000011347 resin Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 229920005989 resin Polymers 0.000 title claims abstract description 47
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 11
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 2-(4-hydroxyphenyl)ethanol Chemical compound OCCC1=CC=C(O)C=C1 YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000042430 Rhodiola rosea Species 0.000 description 1
- 235000003713 Rhodiola rosea Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182487 phenolic glycoside Natural products 0.000 description 1
- -1 phenolic glycoside compound Chemical class 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液,离心,得到上清液。将上清液加入无水乙醇,沉淀,过滤,将上清液旋蒸除去乙醇,得到浓缩液;将浓缩液与水饱和正丁醇萃取,将水饱和正丁醇层混合蒸干,制得红景天苷粗品;将红景天苷粗品溶解后,使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色,脱色后的溶液作为上样液,备用;调节上样液的pH,将上样液流过大孔树脂柱;将乙醇水溶液作为洗脱液,通过大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液;将洗脱液浓缩,冻干,得到红景天苷。本发明方法具有收率较高、操作简单以及环境友好等优点,为红景天苷的大规模生产提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及发酵产物的分离纯化,特别涉及一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中的红景天苷的方法。
技术背景
红景天苷(Salidroside)是一种天然存在于植物中的酚苷类化合物,来源于红景天属植物的根茎中,是由对羟基苯乙醇在醇羟基位置糖基化所形成。红景天苷的结晶是无色透明的针状晶体,其极易溶于水,并且易溶于甲醇和乙醇,但是难溶于乙醚。在酸性条件下,红景天苷可分解为1分子葡萄糖和1分子对羟基苯乙醇。红景天苷具有抗氧化、抗辐射、抗疲劳、免疫调节等多种药理活性,在化妆品、食品、保健品、药品等工业生产中被广泛使用。
红景天苷主要是从植物红景天中提取,但存在含量较低,且生长周期较长的弊端。已报道了用微生物合成红景天苷,但从发酵液中分离红景天苷的方法尚未报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,解决现有技术中红景天苷产量低的问题。
本发明的技术方案概述如下:
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,包括以下步骤:
(1)将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液,离心,得到上清液。
(2)将上清液加入无水乙醇,在4℃的条件下沉淀12h后,过滤,将上清液旋蒸除去乙醇,得到浓缩液。
(3)将浓缩液与水饱和正丁醇按照1:1的比例萃取,萃取3-5次后,将水饱和正丁醇层混合蒸干,制得红景天苷粗品。
(4)将红景天苷粗品溶解后,使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色,脱色后的溶液作为上样液,备用。
(5)调节上样液的pH,以2BV/h的流速将上样液流过大孔树脂柱。
(6)将乙醇水溶液作为洗脱液,以2BV/h的流速通过大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液。
(7)将洗脱液浓缩,冻干,得到红景天苷。
步骤(2)中加入无水乙醇混匀后,乙醇浓度为75%-85%。
步骤(4)中红景天苷粗品溶解后,配置的溶液中红景天苷浓度为6.0g/L,大孔吸附树脂的型号优选为LX-12。
步骤(5)中上样液的pH为6-8,大孔吸附树脂的型号优选为LX-18、LX-68和SP825。
步骤(6)中洗脱液乙醇水溶液的浓度分别50%,70%和80%。
有益效果:
本发明的一种发酵液中分离红景天苷的方法,具有收率较高、操作简单以及环境友好等优点,为红景天苷的大规模生产提供技术支持。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1:
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,包括以下步骤:
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液,在8000rpm的条件下离心10min,得到上清液备用;
(2)将制得的上清液浓缩,加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80%,在4℃的条件下沉淀12h,过滤,旋蒸除去溶液中的乙醇,得到浓缩液备用;
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液,萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品;
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液,并使用LX-12树脂柱脱色,制备脱色液,调pH=6,备用;
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂LX-18装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中,高径比为8:1,以2BV/h的流速将7.5BV的脱色液流经树脂柱;
(6)向大孔吸附树脂柱中加入1.3BV体积浓度为80%的乙醇水溶液,以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱,收集洗脱液;
(7)将洗脱液浓缩,干燥,得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂LX-18制备的红景天苷纯度为88.63%,收率为75.87%。
实施例2:
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,包括以下步骤:
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液,在8000rpm的条件下离心10min,得到上清液备用;
(2)将制得的上清液浓缩,加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80%,在4℃的条件下沉淀12h,过滤,旋蒸除去溶液中的乙醇,得到浓缩液备用;
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液,萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品;
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液,并使用LX-12树脂柱脱色,制得脱色液,调pH=8;
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂LX-68装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中,高径比为8:1,以2BV/h的流速将8.5BV的脱色液流经树脂柱;
(6)向大孔吸附树脂柱中加入2.0BV体积浓度为50%的乙醇水溶液,以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱,收集洗脱液;
(7)将洗脱液浓缩,干燥,得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂LX-68制备的红景天苷纯度为92.64%,收率为62.76%。
实施例3:
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,包括以下步骤:
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液,在8000rpm的条件下离心10min,得到上清液备用;
(2)将制得的上清液浓缩,加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80%,在4℃的条件下沉淀12h,过滤,旋蒸除去溶液中的乙醇,得到浓缩液备用;
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液,萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品;
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液,并使用LX-12树脂柱脱色,制得脱色液,调pH=7;
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂SP825装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中,高径比为8:1,以2BV/h的流速将6.0BV的脱色液流经树脂柱;
(6)向大孔吸附树脂柱中加入2.0BV体积浓度为70%的乙醇水溶液,以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱,收集洗脱液;
(7)将洗脱液浓缩,干燥,得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂SP825制备的红景天苷纯度为91.63%,收率为74.03%。
本发明中应用了具体的个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及核心思想,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (7)
1.一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液,离心,得到上清液;
(2)将上清液加入无水乙醇,沉淀,过滤,将上清液旋蒸除去乙醇,得到浓缩液;
(3)将浓缩液与水饱和正丁醇萃取,将水饱和正丁醇层混合蒸干,制得红景天苷粗品;
(4)将红景天苷粗品溶解后,使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色,脱色后的溶液作为上样液,备用;
(5)调节上样液的pH,将上样液流过大孔树脂柱;
(6)将乙醇水溶液作为洗脱液,通过大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱液;
(7)将洗脱液浓缩,冻干,得到红景天苷。
2.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于步骤(2)所述沉淀是指在4℃的条件下沉淀12h。
3.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于所述步骤(2)中加入无水乙醇混匀后,乙醇浓度为75%-85%。
4.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于所述步骤(3)浓缩液与水饱和正丁醇按照1:1的比例萃取,萃取3-5次。
5.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于所述步骤(4)中红景天苷粗品溶解后,配置的溶液中红景天苷浓度为6.0g/L,大孔吸附树脂的型号为LX-12。
6.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于步骤(5)中上样液的pH为6-8,流速为2BV/h,大孔吸附树脂的型号为LX-18、LX-68和SP825。
7.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法,其特征在于步骤(6)中洗脱液乙醇水溶液的浓度分别50%,70%和80%,流速为2BV/h。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010783347.3A CN111995644A (zh) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010783347.3A CN111995644A (zh) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111995644A true CN111995644A (zh) | 2020-11-27 |
Family
ID=73462875
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010783347.3A Pending CN111995644A (zh) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111995644A (zh) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107686492A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种使用大孔吸附树脂提取纯化发酵液中红景天苷的方法 |
-
2020
- 2020-08-06 CN CN202010783347.3A patent/CN111995644A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107686492A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种使用大孔吸附树脂提取纯化发酵液中红景天苷的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
戴传云 等: "红景天中高纯度红景天苷制备工艺" * |
施昕磊 等: "红景天苷纯化工艺研究进展" * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109593034B (zh) | 一种从银杏叶提取废液中制备莽草酸的方法 | |
CN112979482B (zh) | 一种高纯度l-缬氨酸及其制备方法和其应用 | |
CN114671754B (zh) | 一种脱落酸粗品提纯方法 | |
CN102267906B (zh) | 一种绿原酸的提取方法 | |
CN101366829B (zh) | 一种从荷叶中同步提取黄酮和生物碱的方法 | |
CN108117571B (zh) | 一种龙胆苦苷单体的制备方法 | |
CN111187328B (zh) | 一种制备罗汉果醇的方法 | |
CN111875482B (zh) | 一种从蒿属植物中提取白坚木皮醇的方法 | |
CN110330537B (zh) | 一种从栀子果中提取高纯度藏红花素工艺的方法 | |
CN109485559B (zh) | 一种从八角中提取莽草酸的方法 | |
CN108997359B (zh) | 一种从甜菊糖生产废渣中提取叶绿素的方法 | |
CN111072468A (zh) | 提取莽草酸的方法和莽草酸提取物 | |
CN111995644A (zh) | 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 | |
CN107129456B (zh) | 一种从发酵液中提取l-色氨酸的生产工艺 | |
CN106631745B (zh) | 一种从湖北海棠叶中提纯根皮素的方法 | |
CN116836143A (zh) | 一种高含量黄芩素的生产方法 | |
CN113444103A (zh) | 一种从山茱萸中提纯脱水莫诺苷元的方法 | |
CN110903165A (zh) | 一种赤藓糖醇的高收率制备方法 | |
CN111909224B (zh) | 一种从含海藻糖和麦芽糖的混合物中分离纯化海藻糖的方法 | |
CN114426478B (zh) | 一种高含量没食子酸及其制备方法 | |
CN111747958B (zh) | 一种从非洲马铃果中分离多种活性成分的方法 | |
CN104926926B (zh) | 一种恩拉霉素的精制方法 | |
CN111067965B (zh) | 一种假马齿苋皂甙的制备方法 | |
CN113501746B (zh) | 一种大孔树脂在分离香叶醇中的应用及提取分离香叶醇的方法 | |
CN118307435B (zh) | 一种联合提取分离茶叶中茶氨酸、奎宁酸及茶多酚的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20201127 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |