CN111995644A - 一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液，离心，得到上清液。将上清液加入无水乙醇，沉淀，过滤，将上清液旋蒸除去乙醇，得到浓缩液；将浓缩液与水饱和正丁醇萃取，将水饱和正丁醇层混合蒸干，制得红景天苷粗品；将红景天苷粗品溶解后，使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色，脱色后的溶液作为上样液，备用；调节上样液的pH，将上样液流过大孔树脂柱；将乙醇水溶液作为洗脱液，通过大孔树脂柱进行洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩，冻干，得到红景天苷。本发明方法具有收率较高、操作简单以及环境友好等优点，为红景天苷的大规模生产提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及发酵产物的分离纯化，特别涉及一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中的红景天苷的方法。
技术背景
红景天苷(Salidroside)是一种天然存在于植物中的酚苷类化合物，来源于红景天属植物的根茎中，是由对羟基苯乙醇在醇羟基位置糖基化所形成。红景天苷的结晶是无色透明的针状晶体，其极易溶于水，并且易溶于甲醇和乙醇，但是难溶于乙醚。在酸性条件下，红景天苷可分解为1分子葡萄糖和1分子对羟基苯乙醇。红景天苷具有抗氧化、抗辐射、抗疲劳、免疫调节等多种药理活性，在化妆品、食品、保健品、药品等工业生产中被广泛使用。
红景天苷主要是从植物红景天中提取，但存在含量较低，且生长周期较长的弊端。已报道了用微生物合成红景天苷，但从发酵液中分离红景天苷的方法尚未报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，解决现有技术中红景天苷产量低的问题。
本发明的技术方案概述如下：
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，包括以下步骤：
(1)将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液，离心，得到上清液。
(2)将上清液加入无水乙醇，在4℃的条件下沉淀12h后，过滤，将上清液旋蒸除去乙醇，得到浓缩液。
(3)将浓缩液与水饱和正丁醇按照1:1的比例萃取，萃取3-5次后，将水饱和正丁醇层混合蒸干，制得红景天苷粗品。
(4)将红景天苷粗品溶解后，使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色，脱色后的溶液作为上样液，备用。
(5)调节上样液的pH，以2BV/h的流速将上样液流过大孔树脂柱。
(6)将乙醇水溶液作为洗脱液，以2BV/h的流速通过大孔树脂柱进行洗脱，收集洗脱液。
(7)将洗脱液浓缩，冻干，得到红景天苷。
步骤(2)中加入无水乙醇混匀后，乙醇浓度为75％-85％。
步骤(4)中红景天苷粗品溶解后，配置的溶液中红景天苷浓度为6.0g/L，大孔吸附树脂的型号优选为LX-12。
步骤(5)中上样液的pH为6-8，大孔吸附树脂的型号优选为LX-18、LX-68和SP825。
步骤(6)中洗脱液乙醇水溶液的浓度分别50％，70％和80％。
有益效果：
本发明的一种发酵液中分离红景天苷的方法，具有收率较高、操作简单以及环境友好等优点，为红景天苷的大规模生产提供技术支持。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，包括以下步骤：
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液，在8000rpm的条件下离心10min，得到上清液备用；
(2)将制得的上清液浓缩，加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80％，在4℃的条件下沉淀12h，过滤，旋蒸除去溶液中的乙醇，得到浓缩液备用；
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液，萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品；
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液，并使用LX-12树脂柱脱色，制备脱色液，调pH＝6，备用；
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂LX-18装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中，高径比为8:1，以2BV/h的流速将7.5BV的脱色液流经树脂柱；
(6)向大孔吸附树脂柱中加入1.3BV体积浓度为80％的乙醇水溶液，以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液；
(7)将洗脱液浓缩，干燥，得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂LX-18制备的红景天苷纯度为88.63％，收率为75.87％。
实施例2：
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，包括以下步骤：
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液，在8000rpm的条件下离心10min，得到上清液备用；
(2)将制得的上清液浓缩，加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80％，在4℃的条件下沉淀12h，过滤，旋蒸除去溶液中的乙醇，得到浓缩液备用；
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液，萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品；
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液，并使用LX-12树脂柱脱色，制得脱色液，调pH＝8；
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂LX-68装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中，高径比为8:1，以2BV/h的流速将8.5BV的脱色液流经树脂柱；
(6)向大孔吸附树脂柱中加入2.0BV体积浓度为50％的乙醇水溶液，以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液；
(7)将洗脱液浓缩，干燥，得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂LX-68制备的红景天苷纯度为92.64％，收率为62.76％。
实施例3：
一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，包括以下步骤：
(1)将产红景天苷的工程大肠杆菌菌株发酵得到发酵液，在8000rpm的条件下离心10min，得到上清液备用；
(2)将制得的上清液浓缩，加入无水乙醇至溶液中乙醇浓度为80％，在4℃的条件下沉淀12h，过滤，旋蒸除去溶液中的乙醇，得到浓缩液备用；
(3)使用水饱和正丁醇按照1:1的体积比萃取浓缩液，萃取五次后浓缩制得红景天苷粗品；
(4)将制得的粗品配置成6.0g/L浓度的红景天苷溶液，并使用LX-12树脂柱脱色，制得脱色液，调pH＝7；
(5)使用湿法装柱将大孔吸附树脂SP825装入玻璃层析柱(1.6×40cm)中，高径比为8:1，以2BV/h的流速将6.0BV的脱色液流经树脂柱；
(6)向大孔吸附树脂柱中加入2.0BV体积浓度为70％的乙醇水溶液，以2BV/h的流速通过大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液；
(7)将洗脱液浓缩，干燥，得到红景天苷。
计算产品纯度和收率。
大孔吸附树脂SP825制备的红景天苷纯度为91.63％，收率为74.03％。
本发明中应用了具体的个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及核心思想，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (7)
1.一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将产红景天苷的大肠杆菌发酵制得发酵液，离心，得到上清液；
(2)将上清液加入无水乙醇，沉淀，过滤，将上清液旋蒸除去乙醇，得到浓缩液；
(3)将浓缩液与水饱和正丁醇萃取，将水饱和正丁醇层混合蒸干，制得红景天苷粗品；
(4)将红景天苷粗品溶解后，使用达到红景天苷吸附平衡的大孔树脂柱进行脱色，脱色后的溶液作为上样液，备用；
(5)调节上样液的pH，将上样液流过大孔树脂柱；
(6)将乙醇水溶液作为洗脱液，通过大孔树脂柱进行洗脱，收集洗脱液；
(7)将洗脱液浓缩，冻干，得到红景天苷。
2.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于步骤(2)所述沉淀是指在4℃的条件下沉淀12h。
3.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于所述步骤(2)中加入无水乙醇混匀后，乙醇浓度为75％-85％。
4.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于所述步骤(3)浓缩液与水饱和正丁醇按照1:1的比例萃取，萃取3-5次。
5.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于所述步骤(4)中红景天苷粗品溶解后，配置的溶液中红景天苷浓度为6.0g/L，大孔吸附树脂的型号为LX-12。
6.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于步骤(5)中上样液的pH为6-8，流速为2BV/h，大孔吸附树脂的型号为LX-18、LX-68和SP825。
7.根据权利要求1所述的一种使用大孔吸附树脂分离发酵液中红景天苷的方法，其特征在于步骤(6)中洗脱液乙醇水溶液的浓度分别50％，70％和80％，流速为2BV/h。
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| 戴传云 等: "红景天中高纯度红景天苷制备工艺" * |
| 施昕磊 等: "红景天苷纯化工艺研究进展" * |
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