CN111990639A - 一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 - Google Patents
一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111990639A CN111990639A CN202010797905.1A CN202010797905A CN111990639A CN 111990639 A CN111990639 A CN 111990639A CN 202010797905 A CN202010797905 A CN 202010797905A CN 111990639 A CN111990639 A CN 111990639A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sph
- egcg
- soybean protein
- peptide
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 25
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 title claims description 13
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title abstract description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title abstract description 8
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 claims abstract description 46
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 claims abstract description 39
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 57
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 17
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 claims description 7
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 claims description 6
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 abstract description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 3
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012356 Product development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 abstract 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 229940071440 soy protein isolate Drugs 0.000 description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002534 radiation-sensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000637 radiosensitizating effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/358—Inorganic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
- C07K1/32—Extraction; Separation; Purification by precipitation as complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH‑EGCG复合物的方法属于多酚沉淀水解肽产品开发领域，该方法包括以下步骤：(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备；(2)SPH‑EGCG复合物的制备。该方法应用了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)能够吸附沉淀水解液蛋白质的特性，从而制备功能性蛋白复合物，可以绿色、安全、高值化利用酶解大豆蛋白所产生的副产物。食物蛋白质与多酚的相互作用导致蛋白质的结构，功能和营养性质发生了巨大变化，这是提高食品质量的有效途径。这一发明可以为大豆水解蛋白和植物多酚在食品领域中的高值化利用和产品开发提供理论基础参考。
Description
技术领域
本发明属于多酚沉淀水解肽产品开发领域，主要涉及一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法
背景技术
大豆分离蛋白(soy protein isolate，SPI)是一种营养价值丰富的食用蛋白资源，由于其较高的蛋白含量及优良的功能特性，目前已被广泛地应用于食品加工。大豆分离蛋白(SPI)是大豆中的主要储存蛋白，在食品行业中被广泛应用，它的质量类似于对动物蛋白并具有出色的乳化和发泡性能。已有研究表明大豆蛋白在接触酚类化合物时能够与其结合并相互作用，彼此影响，这一机制能够改变二者的结构、功能特性以及蛋白质的营养性质。SPH是SPI经酶解后并特殊处理得到的蛋白质水解产物。SPH所含必需氨基酸的种类和大豆蛋白完全相同,且含量丰富、平衡。除此之外，多肽化合物比蛋白质更易被人体消化吸收,并且能够防病,治病,调节人体生理功能等。因此SPH是一种极具潜力的功能性食品基础材料,已逐渐成为21世纪的健康食品之一。
表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶中最丰富的生物活性化合物，在普通绿茶中以9％-14％ (干基)的含量存在。EGCG的抗氧化剂、抗炎药和抗癌特性等都对人体健康有益。此外，有实验表明EGCG 具有抗氧化和促氧化作用，在辐射防护和放射增敏中起作用。因此，EGCG可能用作癌症治疗的天然放射增敏剂，是一种极具潜力的植物多酚。在食品工业中，多酚通过疏水或亲水性相互作用与多肽结合，形成多酚蛋白复合物，改变蛋白质的结构和功能特性，产生生物功能较高的多肽复合物。
本发明通过一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，制备功能性蛋白复合物，可以绿色、安全、高值化利用酶解大豆蛋白所产生的副产物。食品是一个复杂的体系，食物蛋白质与多酚的相互作用导致蛋白质的结构，功能和营养性质发生了巨大变化，这是提高食品质量的有效途径。这一发明可以为大豆水解蛋白和植物多酚在食品领域中的高值化利用和产品开发提供理论基础参考。
发明内容
本发明提供利用一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，该方法操作过程简单，蛋白产品性价比高，实现了对多酚沉淀水解肽所产生的大豆水解蛋白-多酚复合物的绿色回收。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成4-10％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％， w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05-2％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌20min-3h，并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后，将所有样品在80-95℃下水浴灭酶6-12min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节 pH 7.0，然后在3000g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为 2-11。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.05-0.40的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在25-40℃温度下连续搅拌20-60min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。
根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：配置大豆分离蛋白溶液优选浓度为8％，碱性蛋白酶与大豆分离蛋白比例为1％，50℃下连续搅拌最优时间为3h 样品水浴灭酶优选时间为85℃，水浴优选时间为10min。
根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：使用 1M HCl和NaOH对SPH进行调节，最优pH值为4.5。将EGCG添加到SPH中的最优EGCG/肽比率为 0.40。
根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)添加到SPH溶液后连续搅拌的优选时间为30min，优选温度为30℃。
附图说明
图1为多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的工艺路线图
下面结合附图对本发明具体实施例进行详细描述：
实施例1：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成4％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％，w/v) 以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶 Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌20min，并用2MNaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后，将所有样品在80℃下水浴灭酶6min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节pH 7.0，然后在 3000g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH 中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为 2。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.05的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在25℃温度下连续搅拌20min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48 小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。该复合条件制备的复合物蛋白质回收率较低，溶解度较低，抗氧化活性较好，不易储存。
实施例2：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成8％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％，w/v) 以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶 Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(1％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌 3h，并用2MNaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH8.5。随后，将所有样品在85℃下水浴灭酶10min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节pH 7.0，然后在3000g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为 4.5。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.40的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在30℃温度下连续搅拌30min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。该复合条件制备的蛋白质回收率较好，溶解度较低，抗氧化活性较高，生物利用率较高易储存。
实施例3：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成10％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％， w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(1.5％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌3h，并用2MNaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后，将所有样品在90℃下水浴灭酶12min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节pH 7.0，然后在3000 g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为7。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.40的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在35℃温度下连续搅拌40min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。
该复合条件制备的蛋白质回收率较低，溶解度较高，抗氧化活性较高。
实施例4：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成10％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％， w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(2％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌2h，并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后，将所有样品在95℃下水浴灭酶12min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节pH 7.0，然后在3000 g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为 11。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.20的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在40℃温度下连续搅拌60min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。该复合条件制备的蛋白质回收率较低，溶解度较好，抗氧化活性较低，不易储存。
Claims (4)
1.一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)大豆水解蛋白(SPH)的制备：称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成4-10％(w/v)大豆分离蛋白溶液，在50℃条件下机械搅拌2h，以使大豆蛋白结构更加松散，随后加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05-2％)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下连续搅拌20min-3h，并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后，将所有样品在80-95℃下水浴灭酶6-12min，然后立即在冰水浴中冷却至室温，用2M HCL将pH调节pH 7.0，然后在3000g下离心20min，以分离出含有大部分蛋白水解物(SPHs)的水性上清液。使用凯氏定氮法测量SPH中的肽含量。
(2)EGCG沉降大豆蛋白水解肽制备SPH-EGCG：分别使用1M HCl和NaOH将SPH的pH值调节为2-11。然后将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以0.05-0.40的EGCG/肽比率添加到SPH中，并在25-40℃温度下连续搅拌20-60min。接下来，加入叠氮化钠(0.02％，w/v)以抑制微生物生长，在4℃下用去离子水透析48小时(分子量在3500Da下截断)，以除去无机盐。然后将混合物以10000g下离心20min。离心后，收集沉淀物并冷冻干燥以进行进一步分析。
2.根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：配置大豆分离蛋白溶液优选浓度为8％，碱性蛋白酶与大豆分离蛋白比例为1％，50℃下连续搅拌最优时间为3h样品水浴灭酶优选时间为85℃，水浴优选时间为10min。
3.根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：使用1M HCl和NaOH对SPH进行调节，最优pH值为4.5。将EGCG添加到SPH中的最优EGCG/肽比率为0.40。
4.根据权利要求1所述的一种利用多酚沉淀水解肽制备SPH-EGCG复合物的方法，其特征在于：将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)添加到SPH溶液后连续搅拌的优选时间为30min，优选温度为30℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010797905.1A CN111990639A (zh) | 2020-08-10 | 2020-08-10 | 一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010797905.1A CN111990639A (zh) | 2020-08-10 | 2020-08-10 | 一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111990639A true CN111990639A (zh) | 2020-11-27 |
Family
ID=73462993
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010797905.1A Pending CN111990639A (zh) | 2020-08-10 | 2020-08-10 | 一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111990639A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113080451A (zh) * | 2021-04-19 | 2021-07-09 | 华南理工大学 | 一种热处理大豆分离蛋白基共价复合物及其在荷载姜黄素中的应用 |
| CN113519843A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-22 | 黑龙江八一农垦大学 | 一种α-淀粉酶抑制剂与植物多酚的复合方法 |
| CN115530383A (zh) * | 2022-09-26 | 2022-12-30 | 东莞理工学院 | 一种多元复合高抗性淀粉及其制备方法 |
-
2020
- 2020-08-10 CN CN202010797905.1A patent/CN111990639A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113080451A (zh) * | 2021-04-19 | 2021-07-09 | 华南理工大学 | 一种热处理大豆分离蛋白基共价复合物及其在荷载姜黄素中的应用 |
| CN113519843A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-22 | 黑龙江八一农垦大学 | 一种α-淀粉酶抑制剂与植物多酚的复合方法 |
| CN115530383A (zh) * | 2022-09-26 | 2022-12-30 | 东莞理工学院 | 一种多元复合高抗性淀粉及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111990639A (zh) | 一种利用多酚沉淀水解肽制备sph-egcg复合物的方法 | |
| CN101709319B (zh) | 一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法 | |
| US4452888A (en) | Process for producing a low-molecular weight peptide composition and nutrient agent containing the same | |
| CN108410938A (zh) | 一种制备低苦味乳清蛋白抗氧化肽粉的方法 | |
| WO2009140833A1 (zh) | 霞水母来源有免疫增强活性的胶原蛋白肽及制备和应用 | |
| CN102250998B (zh) | 一种花生活性肽的制备方法 | |
| JPH05505304A (ja) | 酵素加水分解物の製造方法 | |
| CN111184219A (zh) | 一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法 | |
| CN110699411B (zh) | 一种蛋壳膜多肽的制备方法 | |
| CN103343153A (zh) | 一种酶水解制备林蛙油肽的方法和林蛙油肽 | |
| CN107164447A (zh) | 一种利用鳕鱼加工副产物制备抗氧化肽的方法 | |
| CN111041059A (zh) | 一种具有抗氧化活性南极磷虾肽的制备方法 | |
| CN106858613B (zh) | 一种复合辣木糖聚多肽—氨基酸含片及其制备方法 | |
| CN111567672B (zh) | 一种利用内源性蛋白酶制备纤维化花生蛋白凝胶的方法 | |
| CN109293766A (zh) | 从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法 | |
| CN102876764A (zh) | 牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法 | |
| CN112795611A (zh) | 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法 | |
| CN108103132A (zh) | 一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法 | |
| CN104055119A (zh) | 一种由茶树花和玛咖粉制备的女性保健含片 | |
| JPH02265441A (ja) | 牛乳乳清蛋白質中のβ―ラクトログロブリンの選択的酵素分解方法 | |
| KR101647558B1 (ko) | 참치심장으로부터 분리한 항산화 펩타이드의 제조방법 | |
| CN114933648B (zh) | 一种以鱼鳞生产胶原二肽的方法 | |
| CN101130801A (zh) | 一种降血压活性肽产品的制备 | |
| CN116138442A (zh) | 一种罗勒多糖-多酚-蛋白质复合物的制备方法及其应用 | |
| AU2010307691B2 (en) | Fat accumulation suppressor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20201127 |